JPH07500843A - 再狭窄を抑制する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 再狭窄を抑制する方法 発明の分野 本発明は、創傷を負った活組織を治癒するための化合物、組成物及び方法に関し 、特に、創傷部位に長期間止まり続けるサツカライドを基本構造とする化合物及 び組成物に関する。

発明の背景 組織が傷害を匂うと、組織の修復及び創傷の治癒に帰着する一連の事象が開始さ れる。傷害を負った後の最初の数日間は、創傷部位に好中球、マクロファージ及 び線維芽細胞が移動する。創傷部位に移動するマクロファージ及び線維芽細胞は 活性化され、それによって内因性成長因子産生、暫定的細胞外マトリックスの合 成、線維芽細胞の増殖及びコラーゲン合成をもたらす。最終的に、創傷を負った 後約２週間から１年後に活性コラーゲンて創傷が折り返し再編されて架橋される （ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ）ら、　１９９１．　Ｊ。

Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　４５：３１９−３２６　）　。この修復過程が 調節される態様は殆ど知られていないが、細胞増殖、移動及びタンパク質合成が 、そのレセプターを有する細胞」二に作用する成長因子により刺激され得ること は知られている。

ｉｎ　ｖｉｖｏでの研究により、動物に実験的に創傷を負わせた後に外因性の単 −成長因子又は複数成長因子を組み合わせて局所適用すると治癒過程が促進され ることが示された（アンドニアデス（Ａｎｔｏｎｉａｄｅｓ）ら、１９９］、Ｐ ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＩＪＳＡ、８Ｂ：５６５−５６９）。こ れら成長因子が創傷治癒を促進する能力を有することか呟精製した形でこれら因 子を得ようとする努力がなされている。ヘパリン結合性成長因子（ＨＢＧＦ）と して知られるこれら成長因子の幾つかがヘパリンに対して強い親和性を有するこ とが知られている（ロブ（ＬＯｂｂ）ら、　１９８８．　Ｆｕｒ、　Ｊ、　Ｃｌ １ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ。

１８：３２１−３２８　及びフォルクマン（Ｆｏｌｋｍａｎ）及びクラゲスプラ ン（Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ、１９８７．５ｃｉｅｎｃｅ　２３５：４４２−４４７ 　）　ｏ従って、これら成長因子を精製した形で得るために、ヘパリンアフィニ ティクロマトグラフィーが用いられている。加えて、これら成長因子の幾つかを コードするＤＮＡが単離され、組換えＤＮＡ法により該タンパク質が作られてい る。これらＨＢＧＦは、　ｉｎ　ｖｉｔｒｏで殆ど全ての中胚葉及び神経外胚葉 山来細胞への分裂促進及び非分裂促進作用を有することが示されている。ＨＢＧ Ｆは、ｉｎ　ｖｉｖｏでこれら細胞の移動、増殖及び分化を促進することも知ら れている。従って、ＨＢＧＦが軟質組織の修復をもたらすことがロブによって示 唆された（１９８８．　ｈｒ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　１８：３ ２１−３２８）　ｏ更に、ＨＢＧＦを骨及び軟骨の如き硬質組織を修復するのに 用いることができることも示唆された。それらの有益な作用とは対照的に、成長 因子が創傷治癒反応を過剰刺激して、過剰な平滑筋細胞増殖及び移動をもたらし 、これらが例えば血管形成術後の再狭窄を起こすことも知られている。

ヘパリンに対する成長因子の親和性及び純粋で均質な形でヘパリンを得ることが 困難であるという知見により、成長因子に対してヘパリンの親和性を有するが、 容易かつ再現性よく製造することのできる化合物を得ようとする試みがなされて いる。上で参照した親出願に記載したように、これら要件を満たす化合物の１つ のグループは、少なくとも６個のグルコビラノース単位からなるシクロデキスト リン、つまり環状オリゴサツカライドである。

本願に先立つ該系列内にあるフォルクマンらへの米国特許第５゜０１９．５６２ 号（フォルクマンらの特許）は、好ましくない細胞又は組織の成長を治療するた めに高度に溶解性のシクロデキストリン誘導体を用いることに向けられている。

この特許に開示されたシクロデキストリン誘導体は、成長抑制性ステロイドと組 み合わせて又は単独で投与され、血流中に存在する成長因子を吸収する。フォル クマンらの特許に開示されたシクロデキストリン誘導体は、高度に親水性である ので高度に溶解性である。これら誘導体の高い溶解性は、外因性ステロイドに対 するシクロデキストリン構造の生来の複合化能力と協調的に相互作用する重要な 要因であるといわれている。加えて、これら化合物の高い溶解性は、体内に該化 合物を導入するのを容易にしかつ血流を介する分散を助けるといわれている。

発明の要旨 フォルクマンらの特許に開示された化合物の高い溶解性は、これら組成物を体に 全身投与するのに望ましい。しかしながら、一方、これら化合物の高い溶解性が 投与後に創傷域に存在し続けるそれらの能力を制限していることを本出願人らは 見出した。投与した成長因子又は複数の成長因子が創傷部位に最大限到達するよ うにするには、成長因子に対する高い親和性と非常に低い溶解性を有するサツカ ライドを基本構造とする化合物を得るのが望ましいということを本出願人らは発 見した。本出願人らの発見の一つの側面によれば、かかる低溶解性化合物を体に 投与する前に成長因子と混合して創傷部位に局所適用する。少なくとも部分的に それらの低溶解性により、かかる化合物は適用部位に維持されてゆっくりと成長 因子を放出し、創傷部位における成長因子の投与量を最適化する。また、本出願 人らは、成長因子に対する高い親和性と低い溶解性の両方を有する化合物は、放 出成長因子の少なくとも一部を傷害部位に維持しかつ傷害を受けた組織に吸収さ せるのに用いることができ、それによって血管形成術後の再狭窄に見られるよう な創傷治癒過程の過剰刺激の可能性を低下させ得ることを見出した。

創傷修復に関係する成長因子の有益な及び異常な両特性からみて、本出願人らは 、創傷治癒過程を最適化するために、創傷域において成長因子の濃度及び／又は 拡散を調節する組成物の必要性を確認した。従って、本発明は、哺乳動物の活組 織の成長に影響を与えるための高い負電荷密度を有する低溶解性ポリアニオン性 サツカライド誘導体を提供する。また、低溶解性ポリアニオン性サツカライド誘 導体及び該サツカライド誘導体のための生理的に許容できるキャリヤーを含む活 性物質を含む組成物も提供する。

該サツカライド誘導体は、好ましくは水１００ｍ１当たり約１５ｇ未満の体温溶 解性を有する。一定の好ましい態様によれば、該サツカライド誘導体は、体温に おいて水への溶解性を実質的に有さない。ここで用いる“体温”という用語は、 生きている哺乳動物に予想される体温範囲をいい、種々の外科手術法で用いられ る低下させた体温及び感染に対する生理的反応において遭遇する高まった体温を 含む。他に断らない限り、溶解性とは蒸留水中における溶解性をいう。

本発明の組成物は、少なくとも部分的に体組織及び体液における活性成分の低溶 解性により、先行技術の組成物よりも多くの利点を与える。本サツカライド誘導 体の低溶解性は、創傷部位に直接投与する創傷治癒方法において有益である。該 組成物は、投与した部位に長期間実質的に滞まる。成長因子と混合すると、本発 明のサツカライド誘導体は創傷部位において制御された成長因子の放出を助長し 、それによって創傷治癒過程を調節しかつ大きく促進する。成長因子なしでは、 本組成物は、成長因子に対するそれらの親和性によって、創傷部位の細胞によっ て産生される成長因子並びに血流中に存在する成長因子の局所濃度及び／又は拡 散を低下させることができる。成長因子の拡散を低下させることによって、該組 成物は創傷治癒反応の過剰刺激を阻止又は実質的に低下させることができ、それ によって血管形成術後の再狭窄、静脈移植片血管内膜過形成及び自生血管アテロ ーム硬化症のような症状をもたらす細胞の異常成長を回避することができる。

本発明は、有益な創傷治癒組成物の製造方法も提供する。これら組成物は、比較 的不溶性で固体形態の高度にアニオン性のポリサッカライドを含む。該方法側面 は、サツカライドをアニオン誘導体化剤と反応させて、該サツカライドのポリア ニオン性誘導体を生成させた後、きわめて不溶性の生成物である塩を形成するこ とを含む。別に、サツカライドを適当なカップリング剤と反応させて溶解性の乏 しい該サツカライドのポリマー又はコポリマーを生成させた後、アニオン誘導体 化剤と反応させる。一定の態様によれば、次いて、これら誘導したサツカライド を１又は２以上の成長因子と混合する。これら製造方法によって提供される組成 物は、非常に低溶解性で高い成長因子親和性という有利な特性を有する。

本発明は創傷治癒方法も提供する。これら方法によれば、本低溶解性ポリアニオ ン性サツカライドを治療すべき領域に適用する。

かかる方法は、再狭窄の防止、血管形成の促進、移植された組織又は臓器の治療 、及び損傷又は移植された骨若しくは軟骨の治療に用いるのに適応できる。

本化合物及び組成物の創傷治癒過程を調節する能力は、経皮内腔貫通血管形成術 （ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｌｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ　ａｎｇｉｏｐｌａｓ ｔｙ）　（以下“ＰＣＴＡ”という）の如き処置を受けた患者を可能な限り救命 する。ＰＣＴＡを受けた患者の４０％までが再狭窄及びそれを起こす再発性動脈 閉塞（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｂｌｏｃｋａｇｅ）に苦しめら れていることが認められている。かくして、血管形成術の如き動脈硬化の治療の 長期的効果が再狭窄の再発により実質的に制限されている。本組成物は再狭窄を 実質的に低減又は排除し、それによって血管形成術、静脈移植バイパス手術及び 類似の処置を受けた患者の罹患率及び死亡率に大きな影響を与えると考えられる 。加えて、心臓、大脳又末梢虚血性疾患の患者は、本発明の組成物を使用するこ とから大きな恩恵を受けると考えられる。特に、心筋組織が梗塞している患者は 、新たな側副毛細血管及び梗塞した組織に血液を供給する新たな血管の樹立を必 要としている。

本組成物は、梗塞した組織の部位における血管形成を促進する成に過ぎない。

図面の簡単な説明 図１　（Ａ及びＢ）は、（Ａ）α−１β−及びγ−シクロデキストリンモノマー の化学構造；及び（Ｂ）これらシクロデキストリンモノマーの二次元形状を図式 的に描写したものである。

図２は、示したアニオン性置換基の部位を有するスクロースの化学構造を図式的 に描写したものである。

図３は、塩基性線維芽細胞成長因子に対するテトラデカ硫酸β−シクロデキスト リンポリマーの親和性を示す。

図４は、シクロデキストリン銅ビアフィニティ　（ｂｉａｆｆｉｎｉｔｙ）クロ マトグラフィーにより精製した塩基性線維芽細胞成長因子及び軟骨肉腫由来成長 因子のポリアクリルアミドゲル電気泳動を示す。レーンｌは、タンパク質マーカ ー（ホスホリラーゼｂ１ウシ血清アルブミン、オバルブミン、炭酸脱水酵素、大 豆トリプシンインヒビター、β−ラクトグロブリン、及びライソザイム）のタン パク質プロフィールを示す。レーン２及び３は、それぞれ塩基性線維芽細胞成長 因子及び軟骨肉腫由来成長因子の１８．０００分子量ポリペプチドバンドを示す 。

図５は、軟骨肉腫由来成長因子に対するヘパリンとテトラデカ硫酸β−シクロデ キストリンポリマーの親和性を比較するもので本発明は、哺乳動物の活組織の成 長に影響を与える化合物、組成物及び方法に向けられている。本発明の新規な化 合物は、体温で蒸留水に低い溶解性しか有さずかつ高い負電荷密度を有する誘導 シクロデキストリンポリマーである。本組成物は、比較的高密度のアニオン性置 換基を有する低溶解性のポリアニオン性サツカライド誘導体及びかかる誘導体の ためのキャリヤーを含む。

本化合物及び組成物の１つの重要な側面は、タンパク質成長因子に対するかかる 物質の強い親和性である。本出願人らは、必ずしも特定の理論に拘束又は制限さ れることを意図しないが、本発明のサツカライド化合物上のアニオン性基の密度 が、組織及び成長因子に対するこれら化合物の高い親和性を与えるのに重要であ ると考えられる。本出願人らは、本サツカライド誘導体の低溶解性と組み合わさ った成長因子に対する本化合物及び組成物の親和性が、創傷域において成長因子 の濃度を調節及び制御する能力を与えていることを発見した。加えて、本化合物 及び組成物は、活組織に付着する傾向がある本誘導サツカライドの形態にある活 性物質を提供する。その結果として、かかる組成物及び化合物は、傷害部位にお いて長期間、活性な創傷治癒剤を提供する非常に望ましい能力を有している。

本発明は、これら組成物の製造方法及び事故又は外科的処置を原因とする種々の 創傷を治療する方法にも向けられている。ここで用いる場合、“創傷治癒”とい う用語は細胞組織の修復又は再構築をいう。創傷は怪我又は火傷の如き事故の結 果起こり得る。

本組成物及び方法によって治療可能な創傷には、あらゆるタイプの外科的処置、 つまり血管若しくは臓器表面の創傷をもたらすカテーテル法又は血管形成術の如 き数少ない侵入性処置から、バイパス又は臓器移植手術の如き数多い外科的処置 までの外科的処置も含まれる。創傷治癒のこの概念には、傷害を受けた又は砕け た骨若しくは軟骨の修復及び骨移植片又は移植組織の定着の促進が含まれる。

■６組成物 本出願人らは、活性物質として高い負電荷密度と低い溶解性を有するポリアニオ ン性サツカライド誘導体を含む組成物が、創傷治癒物質として有用であり得るこ とを見出した。特に好ましいのはポリアニオン性シクロデキストリンポリマーで ある。

ここで用いる場合、“ポリアニオン性サツカライド誘導体”という用語は、広く 、糖単位当たり１．３又はそれを越えるアニオン性置換基を有するサツカライド を基本構造とする化合物をいう。

ここで用いる糖単位という用語は、例えば、ヘキソース又はペントースであって もよい基本的モノサッカライド構成単位をいう。

例として役立つ基本的モノサッカライドは、グルコース、フルクトース、アミロ ース等である。基本的す・ンカライド構造を含む全化合物、並びにかかる化合物 の同族体、類縁体及び異性体は、ここで用いる“サツカライド”の範囲内のもの であると考える。ここでいうサツカライド化合物には、例えば、ジサッカライド 、トリサツカライド、テトラサツカライド、オリゴサツカライド、ポリサッカラ イド及びかかるサツカライドのポリマーが含まれる。

“オリゴサツカライド”という用語は、置換されていない場合は約６５０〜約１ ３００の分子量を有する約５〜約ＩＯの糖単位のサツカライドをいう。“ポリサ ッカライド”という用語は、分子量たり約ＩＯよりも多い糖単位を含むサツカラ イドをいう。ポリサッカライドは、種々の構造及び種々の置換基を有する多くの 糖単位を有するサツカライドであると理解される。ここで用０るポリマーという 用語は、共に連結されてポリマーを形成するモノマーに基づく繰り返し構造又は それに類似するサツカライド化合物をいう。

本出願人らは、誘導サツカライドの構造と負電荷密度のレベルの間の関係が、本 化合物、組成物及び方法の有効性に影響を与え得ることを見出した。例えば、ア ニオン性置換基は、分子内に好ましくは糖単位当たり平均で約１．０〜約４置換 基の範囲で存在する。特に好ましい化合物は、糖単位当たり平均で少なくとも約 １゜４アニオン性置換基を有するサツカライドを基本構造とする化合物である。

ｎ個の糖単位とＲ置換基から構成されるサツカライド化合物については、誘導サ ツカライド上のアニオン性置換基は凡そ次の数値に実質的に対応する。

ｎ＝２〜３の場合：ｎ単位当たり平均アニオン性Ｒ≧３．５、ｎ＝４〜５の場合 ；ｎ単位当たり平均アニオン性Ｒ≧２．０、ｎ≧６の場合；ｎ単位当たり平均ア ニオン性Ｒ≧１．４゜本発明のアニオン性置換基は既知の及び導入可能なアニオ ン性置換基の大きな群から選ぶことができるが、該アニオン性置換基が硫酸、カ ルボキシル、リン酸、スルホン酸基及びこれらの２又は３以上の組み合わせから 成る群より選ばれるのが一般に好ましい。好ましい組成物は、６又はそれ以上の 糖単位を有しかつ糖単位当たり約２〜約３の置換基を有するサツカライドであっ て、該置換基が硫酸、スルホン酸及び／又はリン酸置換基を含むサツカライドを 基本構造とする。

本発明のサツカライド誘導体は、体温において蒸留水中で低い溶解性しか有さな い。ここで用いる場合、“低溶解性”という用語は水１００ｍ１当たり約１５ｇ よりも大いに低い溶解性をいう。

それは、生理水又は蒸留水の如き水性媒質中で相当長期間固体状態で滞まり続け る本サツカライド化合物の能力に関連している。

一定の好ましい態様によれば、該サツカライド誘導体は、体温において蒸留水中 に実質的に溶解性を有さない。即ち、該サツカライド誘導体の溶解性は、蒸留水 １００ｍ１当たり約１ｇよりも大いに低く、より好ましくは１００ｍ１当たり約 １ｍｇ未満でさえあり得る。かかる不溶性は、例えば、ポリマー凝集塊又は実質 的に固体であるポリマー粒子の分散物を含むサツカライド組成物を用いることに よって得られる。種々の粒子サイズ及び形状を用いてもよいと考えられるが、粒 子が直径約ｉミリミクロン〜約１０００ミクロンの平均粒子サイズを有するのが 好ましい。分子量によって表現すれば、該ポリマーを含む複数のポリマーは平均 で約ｌＯ億又はそれ以上の分子量を有する。好ましいポリマーのこの高分子量は 、個々の未溶解存在物的の数百刃の糖単位の存在によるものである。また、本発 明の他の態様においては、望ましい不溶性を有する粒子は、多価カチオン性成分 を組み合わせた又はそれと会合したアニオン性サツカライドを含む塩を形成する ことによって製造される。

本発明の組成物は出発原料として溶解性サツカライドから製造してもよいが、上 で示したように、出発原料としてセルロース又は澱粉の如き溶解性の乏しい殆ど 固体か又は固体のサツカライドを用いることも可能である。これらサツカライド 供給源を用いる場合、好ましくは化学的又は酵素的に該固体サツカライドを分解 した後に、本発明に従う置換基を導入することを含む。

Ａ、シクロデキストリン誘導体 本発明による特に好ましい組成物は、シクロデキストリン誘導体を含有する組成 物である。シクロデキストリンは、環状又はトロイド状分子を形成する少なくと も６個のグルコビラノース単位を含有するサツカライド化合物であり、従って末 端基を有さない。

１２個までのグルコビラノース単位を有するシクロデキストリンが知られている が、初めの３種の同族体が広範囲に研究されただけである。これら化合物は、簡 単な、図１　（Ａ）に示した明確に定義された化学構造を有している。低分子型 α−１β−及びγ−シクロデキストリンという共通の名称はこの明細書全体にわ たって用いられ、それぞれｎ＝６．７又は８のグルコビラノース単位である図１ 　（Ａ）に示した化学構造に相当する。澱粉の分解生成物としてのシクロデキス トリンの最初の発見は凡そ今世紀初頭になされ、シャルディンガーが、これら化 合物が澱粉へのＢａｃｉｌｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓアミラーゼの作用によって調 製され得ることを示した。

古い文献では、該化合物はシャルディンガーデキストリンといわれることが多い 。それらは、時々シクロアミロースとも呼ばれる。

地勢学的には、シクロデキストリンは、図１　（Ｂ）に示すように、その上縁部 に第一−ＣＨ２０Ｈ基が並びその下縁部に第二水酸基が並ぶトーラスとして表わ すことができる。該トーラスと同軸に並列しているのは、α−１β−及びγ−シ クロデキストリンそれぞれについて約５．６又は７．５Ａ、Ｕ、直径の溝様キャ ビティである。これらキャビティは、シクロデキストリンが適当な直径の疎水性 ゲスト分子と包接化合物を形成できるようにしている。

本発明の組成物は、好ましくはポリアニオン性シクロデキストリン誘導体を含む 。一般に“誘導ＣＤ”、“ＣＤ誘導体”及びそれに類した用語は、α（ｌ→４） へミアセタール結合を壊すことなく、ＣＤ分子の２．３又は６位炭素に結合した 第−又は第二水酸基の反応によって形成される化学的に修飾されたＣＤをいう。

かかる調製法の委細は、参照により本発明の背景中に組み入れられる“Ｔｅｔｒ ａｈｅｄｒｏｎ　Ｒｅｐｏｒｔ　Ｎｕｍｂｅｒ　１４７．５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　 ｏｆ　ＣｈｅｍｉｃａｌｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄ　Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ” 、クロット（Ａ、Ｐ、　Ｃｒａｆｔ）及びバーチュ（Ｂａｒｔｓｃｈ）、Ｔｅｔ ｒａｈｅｄｒｏｎ　３９（９）：１４１７−１４７４　（１９８３）　（以下“ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｒｅｐｏｒｔ　Ｎｏ、　１４７″という）に示されて いる。

該ＣＤ誘導体は、好ましくは誘導シクロデキストリンモノマー、ダイマー、トリ マー、ポリマー又はこれらの混合物である。一般に、本発明のシクロデキストリ ン誘導体は、α（１→４）へミアセクール結合を有する少なくとも６個のグルコ ビラノース単位からなる誘導シクロデキストリンモノマー単位から構成又は形成 される。本発明の好ましい誘導シクロデキストリンモノマーは一般式中、モノマ ー単位当たり少なくとも２つの前記Ｒ基はアニオン性置換基であり、残りの前記 Ｒ基が存在する場合には、それ（よ周知かつ導入可能な置換基から選ばれる非ア ニオン性基である。

該残りの非アニオン性Ｒ基は、例えば、■］、アルキル、アリール、エステル、 エーテル、チオエステル、チオエーテル及び−ＣＯＯＨであってもよい。例とし て適するアルキル基には、メチル、エチル、プロピル及びブチルが含まれる。該 残りの非アニオン性Ｒ基は、目的の組成物の個々の必要性に依り、親水性、疎水 性又はそれらの組み合わせであってもよい。しかしながら、その化合物の溶解性 を最小限にするために、該残りの非アニオン性Ｒ置換基は疎水性であるのが一般 に好ましい。

ｎが約６〜約８である弐■の構造を有するＣＤモノマーについては、該化合物が モノマー単位当たり平均で少なくとも約９のアニオン性Ｒ置換基、より好ましく はモノマー当たり少なくとも約１２のアニオン性Ｒ置換基、更により好ましくは モノマー当たり少なくとも約１４のアニオン性Ｒ置換基を有するのが好ましい。

一般に、アニオン性置換基がモノマー分子上に比較的一様に分布し、従ってｎが 約６〜約８である式Ｉの構造を有する化合物が、好ましくはｎ単位当たり約１〜 約３のアニオン性Ｒ置換基、より好ましくはｎ単位当たり約１．３〜約２．５の アニオン性Ｒ置換基、更により好ましくはｎ単位当たり約１．４〜約２．２のア ニオン性Ｒ置換基を有するのが好ましい。かかる構造は、治療的に有益であるこ とが見出された高い負電荷密度を提供すると共に優れた結果を提供する最高電荷 密度の分子を提供すると考えられる。

上記のタイプのポリアニオン性シクロデキストリンモノマーは本発明の好ましい 組成物の重要な成分である。該モノマー単位は、例えば、不溶性ポリマー又はコ ポリマー構造の形態で、又は誘導シクロデキストリンモノマー、ダイマー又はト リマーの不溶性析出塩として該組成物中に存在してもよい。かかる塩は、アニオ ン性置換基を有するＣＤを誘導してから、該誘導ＣＤを適当な多価カチオンと複 合化又は会合させて不溶性誘導ＣＤ塩を形成させることを含む方法によって形成 することができる。別の又は好ましい態様においては、上で特定した基本的モノ マー構造には、以下でより詳細に説明するような新規な不溶性ポリマー性シクロ デキストリンの繰返し単位が含まれる。

１、シクロデキストリンポリマー 重要か−）好ましい態様によれば、本組成物は誘導シクロデキストリンポリマー を含む。本ポリ”７−は、−ヒに示し７たタイプの誘導ンクロデキスｉ・す：／ モノマーから形成されるポリマーに対応する構造を有する。本開示内容からみて 、かかる構造を有するポリマー物質は多様な方法によって生成できることが理解 できるであろう。例えば、誘導シクロデキストリンポリマーは、■又はそれ以上 の誘導シクロデキストリンモノマー、ダイマー、トリマー等を、重合剤、例えば 、エピクロルヒドリン、ジイソシアネート類、ジエボギシド類及びシラン類で、 当該技術分野で既知の操作を用いて重合及び／′又は架橋して、シクロデキスト リンポリマーを形成することによって製造することができる。（不溶性シクロデ キストリンポリマービーズ（Ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ　Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ　 Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｂｅａｄｓ）。

Ｃｈｅｍ、　Ａｂｓｔｒ、　Ｎｏ、　２２２４４４＋ｒ＋、　１０２：９４　； ザドン（Ｚｓａｄｏｎ）及びフェ二ベシ（Ｆｅｎｙｖｅｓｉ）、　１ｓｔ、　！ ｎｔ。Ｓｙｍｐ、　ｏｎ　Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ、　Ｊ。

５ｚｅｊｔｌｉ、　ｅｄ、、　Ｄ、　Ｒｅ１ｄｅｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃ ｏ、、　Ｂｏｓｌｏｎ、　ｐｐ、３２７−３３６、フェニベシら、　１９７９． 　Ａｎｎ、　Ｕｎｉｖ、　Ｂｕｄａｐｅｓｔ、　５ｅｃｔｉｏｎ　Ｃｈｉｍ。

１５　：１３２２．　及びビーデンホッフ（Ｗｉｅｄｅｎｈｏｆ）ら、　１９６ ９．　Ｄｉｅ　５ｔａｒｋｅ２１：１１９−１２３）。これら重合剤は、６．２ 及び３位炭素上の第−及び第二水酸基で反応を行わせることができる。択一的に 及び好ましくは、まず、■又はそれ以上の未誘導シクロデキストリンモノマー、 ダイマー、トリマー等（例えば、図１の構造を有するシクロデキストリン）を重 合及び／又は架橋し、次いで得られるポリマーにアニオン性置換基を誘導するこ とによって該誘導シクロデキストリンポリマーを製造してもよい。未誘導シクロ デキストリンポリマーは、β−シクロデキストリンのエピクロルヒドリン連結ポ リマーの形でインディアナ州ハモンドのアメリカン・マイズ・プロダクツ社（Ａ ｍｅｒｉｃａｎ　Ｍａｉｚｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｃｏ、）から入手することが できる。市販の未誘導ポリマーを誘導して目的の型の誘導シクロデキストリンポ リマーを製造してもよい。該誘導シクロデキストリンポリマーは、誘導モノマー 及び未誘導モノマーの混合物を反応させることにより、又は誘導シクロデキスト リンポリマー及び未誘導シクロデキストリンポリマーを共重合及び／又は架橋す ることによっても形成することができる。全製造操作について、用いる重合方法 により、外部溶媒と内部アニオン性モノマー部位の相当部分との間を分子が拡散 透過できるのに充分な気孔度の固体ポリマー生成物がもたらされるのが好ましい 。

本ＣＤポリマーの溶解性は、中でも分子量及びポリマーのサイズに依存するであ ろう。本誘導ＣＤポリマーは、実質的に固体状態を維持するために大きな分子量 のポリマーである。それらは、一般に約１〜３００ミクロンのサイズの固体粒子 である。

本発明の誘導シクロデキストリンポリマーは種々の物理的形態で入手することが でき、そのような形態全ては本発明の範囲内にある。適する形態には、ビーズ、 繊維、樹脂又はフィルムが含まれる。かかるポリマーの多くは水中で膨潤する能 力を有する。該ポリマー生成物の性質、一つまり化学組成、膨潤度及び粒子サイ ズ分布は、その製造条件を変化させることによって少なくとも部分的に制御され る。

該シクロデキストリンポリマー誘導体は、好ましくはα、β又はγ−シクロデキ ストリンポリマーのポリアニオン性誘導体を含む。好ま（７い態様においては、 アニオン性置換基は、硫酸、スルホン酸、リン酸基及びこれらの２又はそれ以上 の組み合わせから選ばれる。硝酸基の如き他のアニオン性基が多少の治療的能力 を有するかも知れないが、硫酸、スルホン酸及びリン酸誘導体が最高の治療的可 能性を有すると考えられる。好ましい態様においては、アニオン性置換基の少な くとも約１０モル％、より好ましくは少なくとも約５０モル％が硫酸基である。

非常に好ましいのはシクロデキストリンモノマー当たり約１０〜１６の硫酸基を 含有するα−１β−及びγ−シクロデキストリンポリマーであり、特に好ましい のはテトラデカ硫酸β−シクロデキストリンポリマーである。

Ｂ、不溶性塩析出物 本組成物は誘導不溶性サツカライド塩析出物、好ましくは誘導不溶性オリゴサツ カライド塩析出物を含んでもよい。ここで用いる場合、“塩析出物”という用語 は、適当な無毒性の生理的に許容できるカチオンと会合又は複合化して体温にお いて実質的に不溶性の塩を生成するポリアニオン性サツカライド誘導体を意味す る。本発明の不溶性塩析出物を製造するのに用いることのできる好適な多価カチ オンには、Ｍｇ、ＡＩ、Ｃａ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｂ及びＢａが含まれる。ここに挙 げたカチオンは一般に溶解性を低下させる順序で示されているが、異なるタイプ 及び異なる程度のアニオン性置換基のサツカライドについてはこの順序は異なっ てもよい。かかる誘導不溶性サツカライド塩析出物は、本発明の範囲内で扱うこ とができると考えられるが、誘導オリゴサツカライドが好ましい。かかるオリゴ サツカライドは、典型的には、約６５０〜約１３００の未置換分子量を有する。

オリゴサツカライドは、通常、広範囲なサイズのオリゴサツカライド断片をもた らす澱粉又はセルロースの分解処理によって得られる。シクロデキストリンは、 一般に、環状サツカライド構造を形成するのに有利な特異的酵素の存在下で澱粉 から得られる。一定の態様によれば、所望のシクロデキストリンモノマー又は複 数のシクロデキストリンモノマーを、所望のアニオン置換生成物を生成するであ ろう物質と反応させ、続いて所望の多価タイプのカチオンのための合成法によっ て導入されるカチオンに交換することによって得られる。

この後者の工程により不溶性サツカライド塩析出物が析出するであろう。

α−１β−及びγ−ＣＤ硫酸化物のＡ１、Ｃａ及びＢａ塩は、本発明の組成物に 用いるのに好ましく、一定の態様においてはＡ２Ｂ−ＣＤ硫酸化物塩が好ましい 。サツカライド誘導体で概してそうであるように、グルコース単位当たり種々の 度合いで硫酸化を行うことができる。しかしながら、該誘導シクロデキストリン 塩が糖単位当たり少なくとも約１．３硫酸基の平均値を有するのが一般に好まし く、糖単位当たり少なくとも約２硫酸基がより好ましい。特に好ましいのは、グ ルコース単位当たり約２硫酸基の平均値を有するβ−ＣＤ−ＴＤＳである。

Ｃ，ポリアニオン性ジサッカライド誘導体スクラルフェート　（Ｓｕｃｒａｔｆ ａｔｅ）　（カラフェート　（Ｃａｒａｆａｔｅｅ　）。

Ｍａｒｉａｎ　Ｍｅｒｒｔｌｌ　Ｄｏｗ、　Ｋａｎｓａｓ　Ｃ１ｔｙ、　ＭＯ） は、硫酸スクロースと水酸化アルミニウムの錯塩である。その構造を図２に示す 。スクラルフェートは、α−ｄ−グルコピラノシド、β−ｄ−フルクトフラノシ ルー、オクタキス（硫酸水素）アルミニウム錯体である。

スクラルフェートは潰瘍を治療するのに用いられ、ペプシンに結合するが抗潰瘍 力を欠く硫酸化ポリサッカライドの研究中に開発された。スクロースの硫酸化及 び塩基性アルミニウム塩とのその複合化により、潰瘍の治療に適するペプシン阻 害性分子がもたらされた。デニスＭ、７ツカシー（Ｄｅｎｉｓ　Ｍ、　ＭｃＣａ ｒｔｈｙ）、　５ｕｃｒａｌｆａｔｅ、　３２５：１４　Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ 、　Ｍｅｄ、、　１０１７−１０２５　（１９９１）。

本出願人らは、スクラルフェート及びスクロースの他のポリイオン性誘導体が、 本発明の誘導シクロデキストリンと同様の幾つかの特性を有し、類似の溶解性と 成長因子に対する親和性を提供し得ることを見出した。Ｍｇ、ＡＩ、Ｃａ、Ｌａ 、Ｃｅ、Ｐｂ又はＢａの如き多価カチオンと組み合わされたスクロースのスルホ ン酸又はリン酸誘導体により、成長因子と結合してこれら成長因子の創傷部位へ の治療的送達を助長することができる低溶解性の組成物がもたらされ得ると考え られる。スクラルフェートを経口投与すると、胃潰瘍の治療に治療的有効性を有 すると記載されている。本発明のよれば、スクラルフェート及びオクタ硫酸スク ロースの他の塩は、前もって成長因子と複合化させて該複合体を修復部位に物理 的に送り込むことによって、修復を必要とする組織又は骨に成長因子タンパクを 送達するのに用いることができる。

アルミニウム塩を頻繁に及び／又は高投与量で用いると、一定の健康上の危険が 伴うことは周知である。アルミニウムの取り込みが幾つかの疾患に関係すること は既知であるか又は推測可能である。例えば、ＡＬＬＩＭＩＮＵＭ　ＡＮＤ　Ｈ ＥＡＩ、ＴＨ、Ａ　ＣＲｒＴＩＣＡＬ　ＲＥＶＩＥＷ　（ヒレル（旧１１ｅｌ） 及びギテル−？　：／　（Ｇ　ｉ　ｔｅ　Ｉｍａｎ）編）１発行者マーク・デツ カ−（Ｍａｒｋ　Ｄｅｃｋｅｒ）、１９８９及びＡ１、ＩＪＭＩＮＬＩＭ　ＩＮ 　ＲＲＮＡＬ　ＦＡＩＬＩＩＲｆ！。

マークＢ、デ・ブロイ（Ｍａｒｋ　Ｅ、　ｄｅ　Ｂｒｏｉ）及びジャックＷ、コ バーン（Ｊａｃｋ　Ｗ、　Ｃｏｂｕｒｎ）、発行者クレワー（Ｋｌｅｗｅｒ）、 　１９９０における広範な考察を参照のこと。

アルミニウムは、骨形成異常症、骨軟化症、無機質化障害（ｉｍｐａｉｒｅｄ　 ｍ１ｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）等の如き骨代謝の異常をもたらすことが知られ ている。透析において起こり得るような血流中へのアルミニウムの取り込みは特 に有害であり得る。以下は僅かな例に過ぎないがアルミニウムの有害作用に関す る報告である。ビエリデス（ＡｌＭ、　Ｐｉｅｒｉｄｅｓ）ら、　Ｋｉｄｎｅｙ 　Ｉｎｔ、、　Ｖｏｌ、１８．　１１５−１２４．１９８４；エリス　（Ｈ，Ａ 、Ｅｌｌｉｓ）　ら、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｐａｔｈ、３２．　８３２．　１９７９． 血流中に取り込まれたときのアルミニウムの中毒作用に加えて、アルミニウム塩 の経口投与も、骨軟化症及び骨炎を含む種々の有害作用をもたらす。例えば、ア ンドレジ（Ｓ、Ｐ、　Ａｎｄｒｅｄｉ）　、ベルグノユタイン（Ｊ、Ｌ　Ｂｅｒ ｇｓｔｅｉｎ）ら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　Ｖｏｌ、３１０゜ １０７９、１９８４　、カルミカエル（Ｋ、Ａ、　Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ）、フ ッ０ン（Ｆａｌｌｏｎ）ら、　Ａｍ、　Ｊ、　ｏｆ　Ｍｅｄ、、　Ｖｏｌ、７６ 、１１３７．１．９８４を参照のこと。

アルミニウムの中毒作用の中で特に際立っているのは、メカニズムまではまだ分 かっていないとはいえアルミニウムが重要な役割を果たすと推測される神経異常 、特にアルツハイマー疾患である。例えば、クラッパ−・マクラフラン（Ｄ、Ｒ ，Ｃｒａｐｐｅｒ　ＭｃＬａｃｈｌａｎ）、ファーネル（Ｂ、Ｊ、　Ｆａｒｎｅ ｌｌ　）　、　Ａｌｕｍｉｎｕｍ　ｉｎ　ＮｅｕｒｏｎａｌＤｅｇｅｎｅｒａｔ ｉｏｎ、ｉｎ　Ｍｅｔａｌ　Ｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｐ ｓｙｃｈｉａｔｒｙ。

ｐｐ、　６９−８７．１９８５．　Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ　Ｉｎｃ、　；バー ル（Ｄ、Ｐ、Ｐｅｒｔ）、グツド（Ｐ、Ｆ、　Ｇｏｏｄ）、　Ｕｐｔａｋｅ　ｏ ｆ　Ａｌｕｍｉｎｕｍ　１ｎｔｏ　Ｃｅｎｔｒａｌ　ＮｅｒｖｏｕｓＳｙｓｔｅ ｍ　Ａｌｏｎｇ　Ｎａ５ａｌ−０１ｅｆａｃｔｏｒｙ　Ｐａｔｈｗａｙｓ、　Ｔ ｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、　Ｍａｙ　２゜Ｐ、　１０２８．１９８７．バーチャル（ ，１、Ｄ、　Ｂｉｒｃｈａｌｌ）、チャペル（Ｊ、　Ｓ、Ｃｈａｐｐｅｌｌ）、 　Ａｌｕｍｉｎｕｍ、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、　ａｎｄ　 Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’５Ｄｉｓｅａｓｅ、　Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、　０ｃｔｏ ｂｅｒ、　Ｐ、１００８．　１９８８を参照のこと。

アルミニウムには毒性があり得るので、幾つかの及びおそらくは全ての治療的適 用において、高度に硫酸化されたポリサッカライドの非アルミニウム塩形態がア ルミニウム塩形態よりも好ましい。特に、塩析出物形成を必要としないポリマー 態様が特に好ま　”しい。

本発明の組成物の幾つかの具体的態様は、胃潰瘍の治療における経口投与に特に 有用である。特に、オクタ硫酸スクロースの非アルミニウム塩含有形態及び最も 好ましくは高度に硫酸化されたシクロデキストリンのポリマー性固体形態は、ア ルミニウム及びその副作用がないので特に有利である。

（本頁以下余白） Ｄ、組成物の形態 ここに含まれる開示内容からみて、当業者は本創傷治癒組成物が種々の適用にお いて有益な作用を有し得ることを理解するであろう。従って、それぞれの適用の 特定の情況に依り、本発明の組成物が多数の及び多様な形態をとり得ることを意 図している。例えば、該誘導サツカライドを固体火剤にしてもよく、又分散液又 は懸濁液の形態であってもよい。従って、一般に、本発明の組成物は、好ましく は誘導サツカライド及び該サツカライドに適する無毒性で生理的に許容できるキ ャリヤーを含む。ここで用いる場合、キャリヤーという用語は広く、創傷治癒の ための本組成物の投与又は使用を容易にする物質をいう。これら組成物を形成す るに当たって、種々の無毒性で生理的に許容できるキャリヤーを用いることがで き、これら組成物が生理的塩度にあるのが一般に好ましい。

最も広い意味において創傷治癒を包含する幾つかの適用には、物理的に適用可能 であるか又は移植可能である予め決められた固体形態であって、本発明の治療的 に活性な物質を含有する物質の固体形態を有することが望ましい。従って、本発 明の組成物を棒状、針状又はシート状の如き固体形態にしてもよいことを意図し ている。かくして、それらは、組織損傷部位もしくは移植部位、又はその近傍に 導入されても、創傷包帯剤等として外用されてもよい。かかる態様において、本 発明の組成物及び化合物をそれ自体生体許容性である固体キャリヤーと好ましく は混合するか、さもなければ該組成物は本サツカライド誘導体の適当に成形され たポリマー又はコポリマーを含む。多くの適用ができるように、本発明の組成物 を創傷部位に直接適用できる水性分散液、懸濁液又はペーストの形態に調製する のが好ましい。これら組成物を調製するには、ポリアニオン性シクロデキストリ ンポリマーの如き固体形態において合成したポリアニオン性サツカライド誘導体 を、適当に精製し、希釈し、そして所望により、食塩水の如き流体キャリヤーを 含む他の成分を添加した後に用いることができる。これは、粒子形態の析出物、 分散物質又は懸濁物質を製造できるように、生成物、つまりサツカライド塩、サ ツカライドポリマー又はサツカライドコポリマーを合成した場合であろう。合成 後、該固体誘導体を乾燥、粉砕、又は望ましい粒子サイズ若しくは固体形態に変 えてもよい。粒子サイズは、該組成物の意図する治療用途に最適化することがで きる。幾つかの好ましい態様においては、固体粒子のサイズは約１〜約６００ミ クロンであり、約２００〜６００ミクロンがより好ましい。約１〜約３０ミクロ ンの粒子により、成長因子の最良の分散と速やかな反応性が得られる。生体環境 に送達される粒子の所与の重量については、より小さい粒子サイズはより大きな 粒子表面積の露出を保証するので、投与された固体への又は該固体からのタンパ ク質活性成分のより大きな拡散を可能にする。約３０〜約ｉｏｏミクロンの粒子 により、成長因子の充分な分散、中程度の反応性及びより長期間の成長因子の送 達が得られる。１００ミクロンを越えるサイズを有する粒子は、反応性は低いが 最長の成長因子送達期間を提供するであろう。一定の好ましい態様においては、 これら大きな粒子（＞１００ミクロン）は、成長因子を送達するというよりもむ しろ吸収するためにｉｎ　ｖｉｖｏで用いられるであろう。

好ましい態様においては、キャリヤーは水性媒質であり、組成物は固体粒子状サ ツカライド誘導体の水性懸濁液の形態に調製される。誘導サツカライドの量は、 好ましくは組成物の約１〜３０重量％であり、より好ましくは約５〜約１５重量 ％である。

Ｅ、生物学的に活性なタンパク質 一定の態様においては、該組成物及び化合物は生物学的に活性なタンパク質を含 み、及び／又は生物学的に活性なタンパク質と混合される。好ましい態様によれ ば、該生物学的に活性なタンパク質はヘパリンに対して特異的親和性を示し、よ り具体的にはヘパリン結合性成長因子、即ちその多くが内皮細胞について分裂促 進性である部類の成長因子である。かかる成長因子の例は、塩基性線維芽細胞成 長因子である。一般に、それは、普通ＨＢＧＦといわれる、本発明のサツカライ ド誘導体と混合する（ｃｏｍｆ　１ｎｅ）ことのできるヘパリン結合性成長因子 タンパク質であろう。これらの幾つかを表Ｉに掲げる。

タンパク質が本発明の治療用組成物に適しているか否かを決定するために、それ がヘパリンに対して特異的親和性を有するか否かを決定することができる。ＨＢ ＧＦタンパク質は、ＮａＣ１の約０．６モル強度よりも実質的に大きい塩濃度を 有する水性媒質の存在下でさえ（例えば、誘導カラム（ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ 　ｃｏｌｕｍｕ）を用いて）ヘパリンと実質的に結合したままでいるタンパク質 である。

一般に、実質的に結合したという用語は、かかる結合タンパク質の少なくとも約 ８０％がかかる条件下で結合したままでいることをいう。

表　Ｉ ＩＬ−１（インター　Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ　＆　Ｐｅｔｔｉｐｈｅｒ、　１９８ ８゜ロイキン−１）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３７：４１７ １；Ｅｎｄｏ　ら、１９８８．　Ｂ［１ＲＣ１３６：１００７．　Ｈｏｐｋｉｎ ｓ　ら、１９８８゜Ｃｌ１ｎ、　Ｒｘｐ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　７２：４２２Ｉ Ｌ−２（インター　Ｗｅ　ｉ　ＩＨｉ　ｌ　Ｉｍａｎら、１９８８．　Ｊ。

ロイキン−２）　Ｂｉｏｌ、　ＲｅｓｐｏｎｓｅＭｅｄ、　７：４２４；Ｇｅｍ １ｏ　ら＋　１９８８．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

４８：５８６４ ＩＦＮα　（インター　Ｐｉｔｈａら、１９８８．　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

フエロンα）　１４１：３６１１；　Ｍａｎｇｉｎｉ　ら、　１９８８゜Ｂｌｏ ｏｄ　７２：１５５３ ＩＦＮ７　（インター　Ｂｌａｎｃｈａｒｄ　＆　Ｄｊｅｕ、　１９８８．　Ｊ 。

フェロン７）　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１：４０６７；　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄら 。

１９８８、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１：３８２３ＴＮＦα　（腫瘍壊死 因子（Ｚ）　Ｐｌａｔｅら、　１９８８．　Ａｎｎ、　ＮＹ　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　５３２：１４９；　Ｈｏｐｋｉｎｓ　＆Ｍｅａｇｅｒ、　１９８８． 　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｘｐ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、７３：８８；　Ｇｒａｎｇｅｒ　ら。

１９８８、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　Ｍｅｄ。

７：４８Ｂ ＥＧＦ　（表皮成長因子）　Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ　＆　Ｃｏｈｅｎ、　１９７９ ．　Ａ。

Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　４８：１９３−２１６ＦＧＦ　（線維芽細胞成長 　Ｆｏｌｋｍａｎ　＆　Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ、　１９８７゜因子、酸性及び　５ ｃｉｅｎｃｅ　２３５：４４２−４４７塩基性） ＩＧＦ−１（インシュリン様　Ｂｌｕｎｄｅｌｌ　＆　Ｈｕｍｂｅｌ、　１９８ ０゜成長因子−１）　Ｎａｔｕｒｅ　２８７：７８１−７８７；　５ｃｈｏｅｎ ｌｅら。

１９８２、　Ｎａｔｕｒｅ　２９６：２５２−２５５ＩＧＦ−２（インシュリン 様　Ｂｌｕｎｄｅｌｌ　＆　Ｈｕｍｂｅｌ成長因子−２） ＰＤＧＦ　（血小板誘導　Ｒｏｓｓら、　１９８６．　Ｃｅ１ｌ　４６：１５５ −１６９；成長因子）　ＲｉＣｈａｒｄＳＯｎら、　１９８８．　Ｃｅ１ｌ　５ ３：ＴＧＦ−ａ（形質転換　Ｄｅｒｙｎｃｋ、　１９８８．　Ｃｅ１ｌ　５４： ５９３−５９５成長因子−α） ＴＧＦ−β（形質転換　Ｃｈｅ　ｉ　ｆ　ｅ　ｔ　ｚら、　１９８７．　Ｃｅ１ ｌ　４８：成長因子−β）　４０９−４１６ 成長因子タンパク質に向かうヘパリンの複合化能力が、アズレーＡ、メチレンブ ルー及び他の染料の如き一定のカチオン染料構造体に対するその複合化能力と対 応することは知られている。他のグリコサミノグリカンサツカライドは同じよう には機能しないことが知られている。かくして、かかる染料は、ヘパリン様ポリ サッカライドの存在に特異的な着色剤として組織学において長年用いられ、そし て異染色性、即ち該染料上へのヘパリン結合の結果として生じるスペクトルのシ フトが、血管形成を和らげる能力を有する活性ヘパリン様化合物を同定するのに 用いられてきた。

該活性タンパク質のかかる染料複合化も、ヘパリンへの複合化と同じように塩濃 度に抵抗性である。

本発明に対する関係では、タンパク質成長因子複合化のモデルとして役立つかか る染料複合化は、本発明の組成物の望ましい活性の指標として有効に役立ち得る ことが見出された。かくして、染料複合化分析法を用いて、本発明の組成物の析 出物、ポリマー又はコポリマーのタンパク質成長因子複合化能力を測定すること ができる。

タンパク質因子の分離のためのヘパリン結合性分離又はクロマトグラフィーの途 中において、複合化した成長因子の脱離には追加の段階が必要で、非常に強い塩 溶液と接触させることが必要であることが通例でありかつ受け入れられている。

本発明は、ここで特定したサツカライドに複合化したタンパク質の放出には高濃 度の電解質と接触させる追加の段階は必要ではない、という重要な発見及び知見 を利用したものである。かかる操作は、分離技術のために望まれ得るような直接 大規模脱離法には必要とされるであろうが、固体上の複合比相及び生理的周辺液 体内の低生物学的要求溶質相（ｌｏｗ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ｒｅｑｕｉ ｒｅｄ　５ｏｌｕｔｅ　ｐｈａｓｅ）を包含する平衡過程によって相対的に非常 に低い脱離した因子の外部濃度が維持される。これは、生体医用目的の送達剤　 （ｄｅｌｉｖｅｒｙａｇｅｎｔ）として本出願人らの組成物を用いるのを可能に する基本的な発見及び知見である。

一般に、成長因子含有組成物を調製するには、成長因子又は複数の成長因子の組 み合わせを含有する溶液に誘導サツカライドを接触させる。その後、該シクロデ キストリン誘導体を接触液から分離すると、該シクロデキストリン誘導体上で成 長因子が豊富化し、それに対応して該液から成長因子が除かれる。該接触溶液は 、組織又は体液から精製した予め分離されかつ予め濃縮された成長因子又は組換 えＤＮＡ法により得られた成長因子を１つ含有してもよい。また、該接触溶液は 、種々の成長因子を含有する成育可能な組織又は臓器原料（以下、生体供給源と いう）を含んでもよい。成長因子を含有する組織又は臓器原料と混合する場合は 、本発明のサツカライド誘導体は、これら成長因子の抽出剤として作用すること ができる。生体供給源が成長因子の供給源として用いられる場合は、接触溶液に 用いる生体供給源は、混合した誘導体と成長因子により治療されるべき組織の体 積の約ｔｏ−ｉｏｏ倍の体積よりも大きい体積を有する。

接触後、部分的に又は全体的に複合化したサツカライド誘導体、つまり固体相は 、複合化されるべきタンパク質の供給源である液体相から容易に分離することが できる。成長因子の供給源が、複合化されるべきサツカライド以外の固体の不存 在下で、溶解成分としてタンパク質を含有するのが好ましい。しかしながら、成 長因子供給源溶液中のある種の固体は、必ずしも望ましくない又は障害になる汚 染物質であるとは限らない。組織又は臓器の断片の如き固体の該サツカライドか らの分離は、沈降法、適当な濾過、遠心分離又は他の機械的若しくは他の方法に よって行うことができる。

■７創傷治癒の治療的調節方法 本発明の１つの側面は、創傷治癒の治療的調節方法、好ましくはｉｎ　ｖｉｖｏ 調節方法に関し、特にタンパク質因子の濃度及び拡散のｉｎ　ｖｉｖｏ調節に関 する。かかる方法は、一般に、創傷部位への本組成物及び化合物の治療的生体送 達を含む。本物質の低溶解性、即ち固体固定化状態は、該組成物及び化合物を創 傷部位に直接に投与するのを可能にしかつ活性成分が適用部位に長期間残留する のを可能にする。

血管細胞増殖及び血管壁における細胞外マトリックスの異常蓄積は、動脈硬化、 高血圧及び糖尿病に認められる共通の病的特徴である。かかる状態は、血管形成 術の如き血管傷害後にも認められる。血管内膜過形成は、血小板由来成長因子（ ＰＤＧＦ）の如き種々の成長因子により部分的に媒介されると考えられる。この 成長因子は、レセプターを介して作用して血管平滑筋細胞増殖及び該媒介物から 血管内膜への移動を刺激する。かくして、本出願人らは、平滑筋細胞の移動及び 増殖を調節し、それによって血管傷害後に認められる血管内膜肥厚の程度に影響 を与える方法を発見した。本出願人らは、強い成長因子活性を含有するウシ胎児 血清で刺激されたときに、テトラデカ硫酸β−ンクロデキストリンがヒト血管平 滑筋細胞増殖及び移動をｉｎ　ｖｉｔｒｏで阻害できることを見出した。

従って、創傷部位又はその近傍における成長因子の存在又は不存在は該治癒過程 に影響を与えることが分かる。本出願人らは、本組成物及び化合物を用いて、創 傷部位において成長因子の如き生物学的に活性なタンパク質を有利に調節及び制 御できることを見出した。例えば、ここに記載しているように生体送達する前に 本化合物及び組成物を成長因子と混合すると、該組成物及び化合物はこの成長因 子をゆっくりと創傷のすぐ近傍の中に放出し、それによって創傷治癒過程を加速 する。創傷治癒を加速又は助長することが知られている全ての成長因子が本組成 物及び方法において使用可能であると考える。この創傷治癒の加速化に適する成 長因子には、表■に掲げたもの、並びに脳内皮細胞成長因子及び網膜由来成長因 子が含まれる。上記のように、ヘパリン結合性成長因子は軟質及び硬質組織両方 の修復をもたらすのに用いることができる。インターフェロン、インターロイキ ン及び組織成長因子の潜在的用途は当該技術分野で周知である。

本発明は、ポリアニオン性サツカライド誘導体又は成長因子とのその複合体を治 療的に投与する方法であって、該サツカライド誘導体が、生体適合性多孔質固体 の一部分と結合するか又はそれを含む方法にも関する。ここで使用する“生体適 合性多孔質固体”という語句は、実質的な炎症反応又は他の実質的な副作用を誘 発することなしに哺乳動物に適用又は投与することができる固体を意味する。か かる生体適合性多孔質固体には、コラーゲンを主成分とするポリマー膜、羊膜、 及び網膜の如き膜が含まれる（委細はコブ（Ｃｏｂｂ）、１９８８．　Ｅｕｒ、 　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、ｌｎｖｅｓｔｉｇ、　１８：３２１−３２６）。

該ポリアニオン性サツカライド誘導体は、誘導サツカライドを該膜上の静電結合 性パートナ−に接触することによって、好ましい態様でかかる膜上に固定化する ことができる。生体適合性多孔質固体は、エチレン酢酸ビニルのポリマー、メチ ルセルロース、シリコンゴム、ポリウレタンゴム、ポリ塩化ビニル、ポリアクリ ル酸メチル、ポリアクリル酸ヒドロキシエチル、ポリエチレンテレフタレート、 ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリフルオロエ チレン、プロピレン、酢酸セルロース、セルロース及びポリビニルアルコールも 含む（委細はホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎ）、　５ｙｎｔ、ｈｅｔｉｃ　Ｐｏｌｙ ｍｅｒｉｃ　Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｉｎ　ＰｏｌｙｍｅｒｉｃＭａ、ｔｅ ｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｏｒｇａｎｓ、　ＡＣ３Ｓｙｍｐ ｏｓｉｕｍ　５ｅｒｉｅｓ　＃２５６゜（ゲベレイン（Ｇ、　Ｇｅｂｅｌｅｉｎ ）編）　１９８８）　、好ましい態様においては、シクロデキストリン出発原料 を、最終生成組成物の生体適合性ポリマー物質のモノマーと共重合させて多孔質 コポリマーを作る。続いてこのコポリマーを化学的に反応させて、本発明により 必要とされるアニオン置換基を有するサツカライド部分を持たせる。生体適合性 ポリマー中に含有されるアミン、アミド、カルボキシレート末端基等の如き反応 性基とシクロデキストリンをカップリングさせ、続いてイオン性置換基で誘導す る。より好ましくは、シクロデキストリンの如きポリサッカライドを、固体ポリ マー又はコポリマーに重合されるモノマー配合物中の共試薬として導入し、続い てサツカライド成分を誘導するのに適した試薬にこの生成物を接触させて、本発 明により教示された程度までアニオン性置換基を付加させる。かかる方法及び生 成物に特に有利なのは、３Ｍ社により製造され、創傷への生体適合性パッチ剤又 は包帯剤として用いられているポリアミドポリマーのフラットポリマー生成物の ポリマー又はコポリマー例を生成する方法である。

この生体適合性パッチ剤又は包帯剤は、病原菌の侵入から創傷を物理的に保護す るよう、及び水分、空気等が通過できる充分な気孔を有するよう作られている。

本出願人の発明は、活性ポリアニオン性ポリサッカライドを、かかるポリマーを 含むキャリヤーとカップリングさせること、又は該活性アニオン性サツカライド 及びタンパク質因子を一緒にポリマー性キャリヤーとカップリングさせることを 意図している。かかる組み合わせは、細胞成長過程を故意に促進又は阻害する適 用を明白に企図している。ＨＢＧＦは、生体膜内に組み込まれるか又は既に存在 するかのいずいれかである、固定化された誘導サツカライドを基本構造とする分 子に結合する。網膜又は羊膜の如き生体膜は、創傷包帯剤として当該技術分野で 周知である。コラーゲンを主成分とする合成生体膜は火傷の治療に用いられてい る。羊膜の如き中性膜中における本発明の誘導サツカライドの存在及び合成膜の 支持体として用いられるコラーゲンに結合するこれら誘導体の能力は、本発明の 組成物と結合した場合に、かかる生体膜をＨＢＧＦの新規な送達賦形剤として用 いられるようにするであろう。

Ａ、再狭窄 動脈硬化は、哺乳動物の大血管の壁部分の肥厚化及び硬化を含む障害であり、冠 状動脈疾患、大動脈瘤及び下肢動脈疾患の大きな原因である。動脈硬化は、大脳 血管疾患においても重要な役割を果たしている。

これまで、血管形成術は動脈硬化を治療するために広く用いられてきた方法であ る。例えば、経皮内腔貫通冠状血管形成術（以下“ＰＴＣＡ″という）は、１９ ８８年中だけでも合衆国で２０ｏ、　ｏ　ｏ　ｏ回以上行われた。ＰＴＣＡ法は 、空気を抜いたバルーン付カテーテルを皮膚から狭窄を有する血管又は動脈の中 に挿入することを含む。次いで、狭窄領域に達するまで該カテーテルを血管の内 腔に通ず。この狭窄領域は、血管の狭小化と血流制限をもたらす脂肪線条、線維 性プラーク及び血管壁上の併発病変物の集積によって特徴付けられる。動脈硬化 状態により生じるこの有害な動脈の狭小化を克服するために、バルーンを膨らま せて該プラークを動脈壁にばったりと倒してから、他の方法で動脈内腔を拡張す るのである。

ＰＴＣＡは優れた結果をもたらしかつ合併症率が低いが、この方法を用いるには 困難が伴う。特に、大きくされた動脈壁は、動脈壁に対してバルーンが膨張する 間に損傷と傷害を頻繁に受ける。

この損傷自体は、患者の健康又は生命に特に有害であるとは思われないが、この 損傷によって引き起こされる治癒反応が動脈硬化状態を再発し得る。特に、動脈 の狭窄領域に関係する平滑筋細胞が動脈の直接の又は炎症性の傷害に応えて細胞 分裂を開始するということが認められている。平滑筋細胞は増殖して動脈の内部 層へと移動するので、それらは動脈壁の肥厚を起こす。最初、この肥厚は増加し た平滑筋細胞によるものである。しかしながら、その後は動脈壁の更なる肥厚及 び内腔の狭小化は、増加した平滑筋細胞の体積と細胞外マトリックス及び結合織 の蓄積によるものである。動脈硬化治療後のこの細胞壁の肥厚及び内腔の狭小化 を、ここでは再狭窄という。

本出願人らは、再狭窄の基本原理について如何なる理論又は複数の理論にも拘束 されることを望まないが、再狭窄は、内皮傷害に曝された平滑筋細胞の過剰増殖 を活性化する、傷害を負った内皮により産生される成長因子の存在に部分的によ ると考えられる。

従って、本出願人らは、本サツカライド誘導体は、生体送達する前に成長因子を 実質的に含まない場合は、バルーン血管形成術後の血管内膜肥厚を阻止又は少な くとも実質的に低下させるのにきわめて有効であることを見出した。成長因子に 対するそれらの親和性によって、かかる組成物は、かかる成長因子のｉｎ　ｖｉ ｖｏ吸収又は局所濃度の低下及び／又は拡散をもたらすことができる。即ち、か かる創傷部位成長因子は、それらが創傷部位において細胞により産生されようと 血流中に存在しようと、本サツカライド誘導体により取り除かれ得、それによっ て創傷を負った組織上のかかる物質の再狭窄作用を低減するのである。

本方法によれば、動脈硬化を患った動脈領域を有するヒトを含む哺乳動物が、該 哺乳動物に本発明のポリアニオン性サツカライド誘導体を、動脈平滑筋細胞増殖 を阻害するのに有効な量投与することによって治療される。再狭窄阻害の程度は 、治療されるべき患者及び血管形成術の間の動脈傷害の範囲の如き要因に依存し て、本明細書の範囲内で変動しもよいと考える。しかしながら、該サツカライド 誘導体が、再狭窄の実質的な低減をもたらすのに有効な量で投与されることが一 般に好ましい。ここで用いる場合、再狭窄の実質的な低減という用語は、治療後 再狭窄値が約５０％より大きくないことを意味する。好ましい態様によれば、治 療後再狭窄値は約２５％より大きくない。ここで用いる場合、治療後再狭窄値と いう用語は、血管形成術後約１か月時に測定した再狭窄値をいう。再狭窄値とい う用語は、血管形成術により得られた最小内腔直径の初期増加量の５０％より大 きいか又は等しい損失量として計算される再狭窄率をいう。

かくして、本発明は、患者における再狭窄を阻害する方法であって、血管形成術 を受けた患者の再狭窄の形成を阻害するのに有効な量のサツカライドを基本構造 とする誘導体を、該患者に投与することを含む方法を意図する。該サツカライド 誘導体を、狭窄した動脈の血管形成治療の前、治療中及び／又は治療後のいずれ に投与してもよいと考える。該化合物を創傷部位に局所的に投与することを含む 投与方法が一般に好ましい。好ましい態様においては、局所投与は、該サツカラ イド誘導体を傷害組織の中に直接注入することを含む。再狭窄の場合には、かか る段階は、好ましくは血管形成術部位における動脈壁の中に該化合物を直接注入 することを含む。

本出願人らは、驚いたことに、特に有益な抗再狭窄結果は、該サツカライド誘導 体を投与する段階が、血管形成術を施すために血管内腔を拡張する段階を含む態 様について得られることを見出（７た。例えば、本出願人らは、好ま（７い投与 段階は、サラカラ１ド誘導体の水性懸濁液又は分散液をバルーン血管形成術部位 における動脈壁の中に注入することを含むことを見出した１、これは、好ましく は、カテーテルのバルーン部分の壁に複数の孔を有する部分的に改造した注入用 バルーン付カテーテルを用いて行われる。

これら孔は、バルーンが膨らまされて膨張溶液が該バルーンの壁から滲み出せる よ・うに配置されかつそのようなサイズに作られる。

好ましい態様によれば、バルーンを２〜３気圧の如き比較的低い圧力条件で膨ら ます。本発明の組成物を適用するために用いることのできる多孔質バルーン付カ テーテルの例示は、ｕ、　ｓ、　ｃ、　＋、　−〕＜−ド（Ｂａｒｄ）及びシュ ナイダ−（Ｓｅｈｎｅｉｄｅｒ）によりなさねている。このタイプのバルーンは 、ウオリンスキー（Ｗｏｌｉｎｓｋｙ）　／＜ルーノ又は“発汗バルーン”とい われる。本発明の組成物の適用については種々の注入式血管形成術用バルーン付 カテーテルを用いることができ、当業者はどのタイプの注入用バルーン付カテー テルが適当であるか容易に決定できることが分かる。本発明のサツカライド誘導 体の局所投与に関連するもう１つの方法は、生体吸収性血管内ステントを用いる ものである。本発明のサツカライド、特にシクロデキストリンポリマー・誘導体 を生体吸収性ステントの中に組み込み、そのステントを組織損傷部位又はその近 傍に位置させてもよい。

該サツカライド誘導体を含有する懸濁液の個々の特徴及び特性が、必ずしも本発 明に関係（７ない数多くの要因に依存（２て幅広く変動し得るということが当業 者により理解されるであろう。しかしながら、投与段階は、好ましくは、ポリア ニオン性サツカライド誘導体粒子の水性懸濁液又は分散液、好ましくは約１〜６ ００ミクロンのサイズの硫酸化β−シクロデキストリンポリマー粒子の懸濁液を 、動脈内のバルーン血管形成術部位に直接注入することを含む。本出願人らは、 動脈壁に滴注したかかる粒子は、再狭窄の阻害をもたらすのに充分な量で、適用 部位に数日間存在（７続けると考、えている。

該水性懸濁液は、生理的塩度の水性キャリヤーと活性す・ソカラ、１′ド誘導体 を含む。該活性サツカライド誘導体は、好ましくは該組成物の約１へ・約３０重 量％、より好ましくは約５〜約１５重量％の量で存在する。好ましい態様におい ては、誘導す・ツカライド、好ましくは硫酸シフロブキス１−リンポリマー粒子 を大体血管形成術時に適用する。

幾つかの例においては、再狭窄を阻止するが血管形成は可能であるのが望ましい といえる。これら要件に適合させるためには、ポリアニオン性サツカライド誘導 体のＡ１又はＢａ塩、より好ましくはポリ硫酸化β−シクロデキストリンのＡＩ 又はＢａ塩の分散液を用いるのが好ましい。再狭窄を阻害すると同時に血管傷害 部位において血管形成を正常に進行させることが望ましい場合には、スクラルフ ェート、′］まりミズーリ州カンサスシティのマリアン・メリル・ダウ社から人 手できるオクタ硫酸スクロースのアルミニウム塩を用いるのが好ましい。

Ｂ、静脈移植片の血管内膜肥厚の阻害 静脈区域は外科手術の際に頻繁に採取され、血管閉塞性障害を治療するためにバ イパス移植片として用いられる。具体的には、それらは、例えば、冠状、腎、大 腿及び腋窩動脈循環系にお（為で用いられる。この形態の治療法の１つの主要な 限界は、内腔横断面を弱体化して流れを減少させる血管内膜肥厚が起こることで ある。これは、吻合術で専ら起こるという訳ではないが頻繁に起こる。本出願人 らは、外科手術の際に血管周囲の空間にテトラデカ硫酸β−シクロデキストリン ポリマー粒子を配置すれば、血管内膜への平滑筋細胞の内植を実質的に制限しこ れら移植片の長期間成功率を向上させるであろうことを提案する。

Ｃ１血管形成 血管形成は新たな血管の形成である。血管形成性刺激が内皮細胞の伸長と増殖及 び新たな血管の生成を起こす。幾つかのＨＢ　ＧＦは血管形成を促進することが 知られている。血管形成により生じる新たな血管は、組織の血管新生をもたらす 。

組織及び臓器への血液供給不足を伴う種々の疾患がある。虚血として知られるこ の種の欠乏症は、血管の機能的収縮又は現実の障害物を原因とし得る。これら疾 患は、心臓、大脳及び末梢虚血性疾患にグループ分けされる。心臓性虚血は慢性 アンギーナ又は急性心筋梗塞をもたらし得る。大脳性虚血は卒中をもたらし得る 。

末梢性虚血は、動脈塞栓症及び凍傷を含む多くの疾患をもたらし７得る。末梢性 虚血が重い場合には、閉塞した血管により組織が壊死して切断が必要になる。虚 血を克服するためには、害された組織への別の血液供給が樹立されなければなら ない。

好ましい態様によれば、血管形成は、まず、本発明のす・ツカライド誘導体を成 長因子と接触させ、次いで、例えば皮下注射によって該組成物を虚血性組織の位 置に局所投与して血管形成及び側副血管の形成を進めることによって促進される 。ここで用いる場合、側副血管という用語は、正常な生理的条件下では存在しな （＼が、ＨＢＧＦの存在の如き適当な刺激に応えて現れる血管のことである。サ ツカライド誘導体及び成長因子を含む組成物の投与が、側副血管の形成及び虚血 性組織の血管再生をもたらすと考えられる。

好ましい態様においては、血管形成は、す・ツカライド誘導体が高いアニオン性 のシクロデキストリン誘導体又はその塩、より好ま（バはシクロデキストリンの ポリ硫酸化ポリマー若しくはコポリマーを含む方法によって促進される。該シク ロデキストリン誘導体と塩基性線維芽細胞成長因子とを、約１０：ｌ−１００： １となるシクロデキストリン：塩基性線維芽細胞成長因子の重量比で混合するの が好ましい。

Ｄ０組織及び臓器移植 上記のように、ＨＢＧＦは血管新生及び内皮細胞成長を刺激することが知られて いる。移植では、移植手術が再び創傷をもたらすので、移植処置が成功するかは 、移植し、た組織への適度な血液供給の樹立の速さに決定的に依存している。か くして、本出願人らは、成長因子と混合した本発明の組成物を移植部位に適用し て、移植した組織への適度な血液供給の樹立を促進することを企図する。成長因 子含有組成物を接合される表面上にコーティングしても、該表面上にスプレーし ても、又はグリセロールの如き増粘剤を含むか又は含まない水性懸濁液の形態で 適用してもよい。加えて、移植される臓器又は組織を、本発明の組成物を含有す る処理溶液の中に移植する前に予備浸漬してもよい。本発明の組成物を接合され る両方の移植部位又は表面に注射してもよい。

移植された組織及び臓器を処理するのに用いられる組成物を調製する好ましい方 法においては、本発明のサツカライド組成物を、成長因子含有生体供給源（例え ば、組織又は臓器破片、基本物（ｇｒｏｕｎｄ　ｍａｔｔｅｒ）　、又は液体抽 出物）と予備接触させて、これら供給源内に存在する成長因子を抽出する。非常 に好ましい方法においては、接触に用いる生体供給源は、該組成物で処理される 移植組織よりも体積が約１０〜約１００倍大きい。より直接的でより経済的であ ることの多い方法は、本発明のサツカライド誘導体を、組換え生化学的及びバイ オテクノロジー操作により作った成長因子物質と接触させることを含むであろう 。このようにすれば、意図している治療的適用のための特異的成長因子タンパク 質がより簡単に選べる。

Ｅ、骨移植 骨折、感染及び血液供給の中断の如き障害に対する骨の反応は比較的限られてい る。損傷した骨組織が治癒するためには、死んだ骨が分解吸収されて新たな骨が 形成されなければならず、ある過程が、関係する領域内での新たな血管の成長を 伴う過程が行われなければならない。ＨＢ　Ｇ　Ｆは、血管新生と骨形成細胞の 増殖を誘発することができる。従って、骨折の治癒、移植した骨と宿主骨との接 合、及び骨の無機質化（そのようなことが意図されている場合）を助長するため に、本化合物を成長因子と混合して用いることを意図している。

好ましい態様においては、本サツカライド誘導体を成長因子及び粉末化した骨物 質及び／又は微細に分散した無機質除去骨分と混合し、ペーストを形成する。か かるペーストを調製するのに適する方法は、Ｒｅｐａｉｒ　ｏｆ　Ｍａｊｏｒ　 Ｃｒａｎｉｏ−Ｏｒｂｉｔａｌ　Ｄｅｆｅｃｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎＥｌａｓｔｏ ｍｅｒ　Ｃｏａｔｅｄ　Ｍｅｓｈ　ａｎｄ　Ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ　Ｂｏｎｅ　 Ｐａ５ｔｅ、　ムタツＢ。

ハーバル（Ｍｕｔａｚ　Ｂ、　Ｈａｂａｌ）ら、　６１：３．　Ｐｌａｓｔｉｃ 　ａｎｄ　ＲｅＣＯＲｅＣ０ｎ５ｔｒＬＩＣｔｉＶｅＳｕｒ、　３９４．．３９ ６　（１９７８）に示されている。ペーストを製造するために用いる骨組織は腸 骨稜又は頭蓋冠から得ることができる。

移植目的には自家骨を用いるのが好ましく、完全に無機質除去した骨粉よりも部 分的に無機質除去した骨を用いるのが好ましい。

該骨粉を調製するのに、同種異系及び異種供給源から得られた無機質除去骨粉を 用いてもよい。軟質ペースト吸収性セルロースを作るには、綿又は類似の材料を 用いてもよい。本出願人らは如何なる理論又は複数の理論にも拘束されることを 望まないが、これら方法により製造される骨ペーストは、網状の血管が入り込ん できた後そこから新たな骨が生成する誘導マトリックスとして機能すると考えら れる。該ペーストは、移植処置において接合されるべき骨の表面に適用するか又 は修復されるべき骨折の輪郭骨に充填するのに用いられる。

Ｆ、皮膚潰瘍治療 老化、対麻痺、外傷被害者及び糖尿病患者を含むがこれらに限定されない数百万 の人々を冒している１つの衰弱性障害は、皮膚非治癒性皮膚潰瘍又は床ずれであ る。多くの場合、損傷組織への不十分な血液供給が、治癒のための適度な栄養分 の送達を阻止している。表皮成長因子及び塩基性線維芽細胞成長因子の如き化合 物と混合して予備吸収されたンクロデキストリン誘導体のポリマービーズを潰瘍 に直接適用することにより、血管形成が増加し、血液供給が改善され、ケラチノ サイト内植が増加し、そして潰瘍の閉鎖及び治癒がより速くなると考えられる。

Ｇ、皮膚科学的適用 血管成長の制御は、皮膚科学において遭遇する正常及び病的状態の重要な側面で ある。特に、細胞物質及び血管の異常成長は幾つかの病的状態を伴う。乾癖は１ つの主要な例である。多くの場合、過剰の成長刺激性タンパク質因子が関与する 。このタイプの異常は、タンパク質成長因子の不均衡を伴うことが多い。

例えば、皮膚肥満細胞症に罹っている患者の場合には、関係のある皮膚からの抽 出物は、関係のない皮膚又はかかる欠乏症のない患者のコントロールサンプルか らの抽出物よりも１５倍高いレベルのキモトリブチン活性（Ｃｈｙｍｏｔｒｙｐ ｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ）を有した（　Ｈｕｍａｎ　５ｋｉｎ　Ｃｈｙｍｏｔ ｒｙｐｔｉｃ　Ｐｒｏｔｅａｓｅ、シェフター（Ｎ、Ｍ。

５ｃｈｅｃｈｔｅｒ）、　フラキ（Ｊ、Ｅ、　Ｆｒａｋｉ）　、ギーシン（Ｊ、 Ｃ，Ｇｅｅｓｉｎ）。

ラザラス（Ｇ、Ｓ、　Ｌａｚａｒｕｓ）、　、１．８ｉｏ１．　Ｃｈｅｍ、、　 ２５８．２９７３−２９７８゜１９８３を参照のこと）。関係するキマーゼは、 ヘパリン結合性因子である（サヤマ（Ｓ、Ｓａｙａｍａ）、イオン（Ｒ，Ｖ、　 Ｉｏｚｚｏ）　、ラザラス（Ｇ、Ｓ、　Ｌａｚａｒｕｓ）、シェフター（Ｎ、Ｍ 、　５ｃｈｅｃｈｔｅｒ）、　ｌ（ｔ＋ｍａｎ　ＳｋｉｎＣｈｙｍｏｔｒｙｐｓ ｉｎ−１ｉｋｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｃｈｙｍａｓｅ、　Ｊ、　［１ｉｏ１ ．　Ｃｈｅｍ、、　２６２゜６８０８−６８１５．　１９８７を参照のこと）。

キモト・リプシン様プロテアーゼは表皮接合部を分解して、表皮−皮膚分離をも たらし得るようである（上のサヤマらを参照のこと）。

皮膚異常に関係する成長促進因子のもう１つの例は、表皮プラスミノーゲン活性 化体である。これは、種々の皮膚異常において高くなる（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　 Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　Ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｉｓ　Ａｂｎｏｒｍａｌ　１ｎ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ　Ｌｅｓｉｏｎｓ’、ジエンセン（Ｐ、Ｊ、　Ｊｅｎｓｅｎ ）ら、　Ｊ、　Ｉｎｖｅｓｔ。

Ｄｅｒｍａｔ、　９０−７７７−７８２．１９８８を参照のこと）。

本発明の一定の態様、即ち、高度に硫酸化された固体分散体又は高度に硫酸化さ れたポリザラカライドの他の物理的変形物、好ましくはシクロデキストリン構造 体を含むものが、細胞成分の過剰成長が関係する場合の皮膚治療に特に適用でき る。かかる場合において、本発明の物質を関係する組織又はその近傍に導入する 。

これは、該物質の微細粒子分散体の皮膚又は皮下注射、又は効果的な接触に適す るように成形された固体ポリマー成形体の移植によって行うことができ、又は、 バッチ剤の如き剤又は本発明の物質を含有する適当な形態の他の外用剤の中に該 物質を含めてもよい。

病的及び疾患状態に依存して、本発明の物質とタンパク質成長因子とを予備接触 しないで適用することが意図されていることが理解されるであろう。これは、あ らゆる成長促進因子又は複数の因子を低減しようとする、上に例示した状態の場 合であろう。

皮膚損傷又は皮膚疾患の他の場合、及び一定の治療段階にある場合、タンパク質 因子を混合して用いるのが望ましいかも知れない。これは、血管形成、即ち、新 たな及び追加の血液供給の樹立が望まれる治癒過程に関連する場合であろう。

（来貢以下余白） 実施例 次の実施例は、本発明を説明するために示すものである。しかしながら、それら は、本発明の範囲を必ずしも限定するものとして解釈されるべきではく、本発明 の範囲は添付の請求の範囲によって決められる。示した全ての量及び割合は、特 に断らない限り重量基準である。

実施例１ 硫酸化β−シクロデキストリンポリマーの調製２０〜６０メツシュ粒子サイズの β−シクロデキストリンポリマービーズ（アメリカン・マイズ・プロダクツ）を 誘導して、本発明による新規な固定化硫酸ＣＩ）ポリマー誘導体を形成した。該 組成物は、該ＣＤポリマーのグルコース埋置たり殆ど２硫酸の硫酸化度に近い。

注意して乾燥した約０．４ｇのポリマーを約１．７　ｇの６トリメチルアンモニ ウム三酸化硫黄錯体（アルドリッチ）と約１００ｍ１の乾燥ジメチルホルムアミ ド（ＤＭＦ）中で緩やかに攪拌しながら約６２〜７２℃で３〜４日間反応させた 。該固体をＤＭＦ中で洗浄し、３０％酢酸ナトリウム水溶液と２４時間反応させ 、洗浄して蒸留水中に貯蔵した。該生成物の硫黄含有量は約１４，７重量％であ った。もしも、該ポリマー塊が架橋成分なしに１００％のテ１〜ラデカ硫酸β− シクロデキストリンから構成され、かつ全てのグルコースヒドロキシル単位が立 体的に利用可能であるならば（これは該ポリマーには期待てきない）、これは問 題なく　１．７．５％の値に匹敵する。

実施例２ （Ａ）　β−ＣＤ−ＴＤＳ　（Ｎａ）　：β−シクロデキストリン（９９％純度 ２水和物）をニューシャーシー州すウスプレインフィールドのケマログ（Ｃｈｅ ｍａｌｏｇ）　（ゼネラル・ダイナミックス社の支部）から購入した。

約５．０　ｇのβ−シクロデキストリン（約４．４ミリモル、即ち約９２ミリ当 量−０Ｈ）を約２５０ｍ１のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解した。こ の溶液に約１５ｇの（ＣＨ３）３Ｎ−３ｏ３（約１０８ミリモル）を一度に添加 して、反応混合液を約７０℃に加熱した。約７０℃で２時間経過したのち、ゴム 状物質が析出し始めた。該反応混合液を激しく攪拌しながら７０℃に維持し、次 いて室温に冷却した。次いで、ＤＭＦ層をデカンテーションして捨て、固体残渣 を約２５０ｍ１の水に溶解してから約７５ｍ１の３０％酢酸すトリウムを添加し た。該混合液を４時間激しく攪拌し、次いで約４０００ｍｌのエタノール中に注 ぎ込んだ。

−晩装置した後、該混合液を濾過して結晶化した固体を回収した。

濾紙ケーキをエタノール（無水）で洗浄し、続いてジエチルエーテルで洗浄した 。次いて、該生成物をＰ２Ｏ，で真空下に乾燥した。

約１０．３　ｇの白色粉末を回収した。生成物は吸湿性であった。

水の収着が最小になる条件で該生成物を分析した。元素分析から次の結果が得ら れた：Ｃ＝１８．８４、Ｈ＝２．６５、Ｓ　＝　１７．３３　（ＣｇＨｅＯｚＳ ｚＮａ２についての理論値；Ｃ＝１９．６７、Ｈ−２，１９，５＝１７．４９） 。〔α：１Ｄ２２＝７５°　（ｃ＝２．６３．０゜５ＭＮａＣｌ中）。該分析値 は、各グルコビラノース単位について２ヒドロキシル基、即ちＣＤ分子当たり１ ４ヒドロキシル基の平均置換度と推定されるものに対応する。かかるβ−ＣＤ− ＴＤＳ塩の理論収量はｌＯ，９６ｇで、実測値の１０．３ｇより約６％高い。

（Ｂ）ａ−及び７−ＣＤ−３（Ｎａ塩）：α−ＣＤで約８６ミリモルの（ＣＨ３ ）３Ｎ−３ｏ、を用い、γ−ＣＤで約１１７ミリモルを用いた以外は、上記の操 作をこれらの調製に用いた。

硫酸化α−ＣＤ塩は、Ｃ＝１８．７６　；Ｈ＝２．６０．３＝１６．２２と分析 された。これは、α−ＣＤ分子当たり平均で約１１．７ヒドロキシル単位の置換 度に対応する。

硫酸化γ−ＣＤ塩は、Ｃ＝１８．９２　、Ｈ＝２．６９　、３＝１４．８４と分 析された。これは、γ−ＣＤ分子当分子平均で約１４ヒドロキシル単位の置換度 に対応する。

（Ｃ）β−ＣＤ−３０，（Ｎａ塩）（７，１重量％Ｓ）：約１．０ｇのβ−シク ロデキストリンを約５０ｍ１のＤＭＦ中に溶解した。この溶液に約８８３ｍｇの ＣＨ，Ｎ　８０３　（７，２当量）を添加した。該溶液を約７５℃に約１２時間 保持したが、この時間では析出物は生成しなかった。該反応混合液を室温に冷却 した。該溶液に約２００ｍ１のエタノールを添加した。次０で、生成したコロイ ド溶液を約６００ｍ１のジエチルエーテル中↓こ注ぎ込んだ。白色固体が２時間 のうちに生成した。該固体を濾過により集め、次いて約３０　ｍ　ｌ　Ｈ２Ｏ中 に溶解させた。この溶液を２時間攪拌した。攪拌後、溶液を約９００ｍ１の２： ＩＥｔＯＨ−ＥｔｚＯ溶液に注ぎ込んだ。８時間かけて結晶が生成した。該結晶 を集めてＥｔｚＯで洗浄した。生成物をＰ２Ｏ５で真空丁に乾燥した。約１．１ ８　ｇの粉末を回収した（７２．４％収率）。

該生成物の元素分析は、Ｃ＝３２．４９．８＝４．９９　、及びＳ−７，０６を 示した。これは、β−ＣＤ分子当分子平均で約３．５ヒドロキシル基の置換度に 対応する。

（Ｄ）β−ＣＤ−プロポキシレート−ｘ４ｓＯ＋β−ＣＤ−（ヒドロキシ−ｎ− プロピルエーテル）をアメリカン・マイズ・プロダクツ社（Ｈａｍｍｏｎｄ、　 ＩＮ）から入手し、上記の操作を用いて硫酸塩、つまりβ−ＣＤ−（〜４プロピ ル〜１４Ｓ０４）を調製した。

実施例３ 成長因子の調製 ヒト組換え塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）を武田薬品工業から譲り受け た。それを以前に記載されたようにして大腸菌から精製した（クロカワ（Ｋｕｒ ｏｋａｗａ）ら、　１９８７．　ＦＢＢＳ、　Ｌｅｔｔｅｒｓ２１３：１８９− １９４及びイワネ（Ｉｗａｎｅ）ら、　１９８７．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、口１ｏｐ ｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１４６：４７０−４７７）。

以前に記載されたようにして（シンク（Ｓｈｉｎｇ）　ら、　１９８４゜５ｃｉ ｅｎｃｅ　２２３：１２９６−１２９８）　、ラット軟骨肉腫由来成長因子（Ｃ ｈＤＧＦ）を移植可能な腫瘍から単離した。該腫瘍のコラゲナーゼ消化により調 製した粗抽出成約１００ｍ１をｐＨ７の約１０ｍＭトリス中の約０．６ＭＮａＣ ｌで希釈しく１．：１）、同じ緩衝液で予備平衡化したヘパリン−セファロース カラム（１，５Ｘ９ｃｍ）上に充填した。ｐ　Ｈ７の約１０ｍＭｈリス中の約０ ．６ＭＮａｃｌ約１００ｍ１で該カラムを洗浄した。続いて、ｐＨ７の約１０ｍ Ｍトリス中の約２ＭＮａＣ１約１８ｍ１でＣｈＤＧＦを溶出させた。

実施例４ ＦＧＦのβ−シクロデキストリンアフィニティクロマトグラフィ不不溶性硫酸化 −シクロデキストリンポリマー（約０．５　ｍｌ容量）を、約り、　ｏ　ｏ　ｏ ユニットのヒト組換えｂＦＧＦを含有するｐＨ約７の約１０ｍＭ）リス中の約０ ．１ＭＮａＣ１約０．５　ｍ　ｌと共に、約４℃で約１時間混合しながらインキ ュベートした。続いて、ｐＨ７の約１０ｍＭ）リス中の約０．１　、０．６、及 び２ＭＮａｃ１各約２ｍｌで該ポリマーを段階的に洗浄した。該ポリマーから溶 出した全ての画分を成長因子活性について分析した。

実施例５ 成長因子分析 ９６ウエルブレー１・中のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス３Ｔ３細胞の静止状態 の集密体重層のＤＮＡの中への［”　Ｈ）チミジンの取り込み量を測定すること によって、成長因子活性を評価した。■ユニットの活性は、３Ｔ３細胞内（約ｉ ｏ、ｏｏｏ細胞１０．２５ｍ１成育培地／ウェル）での５０％最大ＤＮＡ合成を 刺激するのに要求される成長因子の量として定義した。特異的活性を測定するた めに、粗抽出液及びヘパリン−セファロースカラムから溶出した活性画分のタン パク質濃度を、ローリイ（Ｌｏｗｒｙ）らの方法（１９５２，Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　１９３：２６５−２７５）によって測定した。純粋な 成長因子のタンパク質濃度は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの銀染色ポリペ プチドバンドの強度を分子量マーカーのものと比較することによって評価した。

実施例６ テトラデカ硫酸β−シクロデキストリンポリマーに対する線維芽細胞成長因子の 親和性 ヒト組換えｂＦＧＦ　（、約１０００ユニツト）を硫酸β−シクロデキストリン ポリマーと一緒にインキュベートした。続いて、該ポリマーを約０．１Ｍ、０． ６Ｍ、及び２ＭＮａＣ１で段階的に溶出した。結果を図３に示す。

殆どの成長因子活性体は約０．６ＭＮａＣｌで該ポリマーに結合したままであっ たが、約２ＭＮａＣ］で溶出すると約２３０ユニツトの活性体が回収された。こ れら結果は、塩基性線維芽細胞成長因子はテトラデカ硫酸β−シクロデキストリ ンに対して非常に強い親和性を有し、ヘパリンに対するＦＧＦの親和性に少なく とも匹敵することを示している。活性ピークは、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲ ル電気泳動をした後に銀染色することによって分析した。図４のレーン２は、塩 基性線維芽細胞成長因子のポリペプチドバンドを示す。

軟骨肉腫由来成長因子に対するヘパリン及びテトラデカ硫酸β−シクロデキスト リンの親和性も試験した。約５００ユニツトの成長因子活性体を含有する軟骨肉 腫抽出液をヘパリン−セファロース■及びテトラデカ硫酸β−シクロデキストリ ンポリマーと一緒に別個にインキュベートした。続いて、該ビーズを約０．１． 　Ｍ、０．６Ｍ、及び約２ＭＮａＣｌで段階的に溶出した。結果を図５に示す。

約３２％及び６８％の全活性が、２ＭＮａＣｌで、それぞれヘパリン−セファロ ース■及びテトラデカ硫酸β−シクロデキストリンポリマーで回収された。

匡 分子量 ３０．０００　１．、ｌ□ ／４，３００　■ １ノーン　１２３ ＦＩＧ、４

Claims (46)

【特許請求の範囲】
1. １．蒸留水１００ｍｌ当たり約１５ｇ未満の体温溶解性を有するポリアニオン性 サッカライド誘導体と該サッカライド誘導体のための生理的に許容できるキャリ ヤーとを含む、哺乳動物の活組織の成長に影響を与えるための組成物。
2. ２．ヘパリン結合性成長因子を更に含む、請求項１の組成物。
3. ３．前記サッカライド誘導体が、糖単位当たり平均で少なくとも約１．４のアニ オン性置換基を有する、請求項１の組成物。
4. ４．前記サッカライド誘導体が、糖単位当たり平均で約１．４〜約４のアニオン 性置換基を有する、請求項３の組成物。
5. ５．前記サッカライド誘導体が、ｎ個の糖単位とＲアニオン性置換基からなる化 合物であって、 ｎ＝２〜３の場合；ｎ単位当たりの平均アニオン性Ｒ≧３．５、ｎ＝４〜５の場 合；ｎ単位当たりの平均アニオン性Ｒ≧２．０、ｎ≧６の場合；ｎ単位当たりの 平均アニオン性Ｒ≧１．４である、請求項３の組成物。
6. ６．前記サッカライド誘導体が、ポリアニオン性シクロデキストリン誘導体を含 む、請求項１の組成物。
7. ７．前記シクロデキストリン誘導体が下式の化合物を含む、請求項６の組成物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、モノマー単位当たり少なくとも２つの前記Ｒ基は、硫酸、リン酸、スル ホン酸及び硝酸からなる群から選ばれ、残りの前記Ｒ基が存在する場合には、そ れはＨ、アルキル、アリール、エステル、エーテル、チオエステル、チオエーテ ル及び−Ｃ００Ｈからなる群から選ばれる非アニオン性基であり、ｎは約６〜約 １２の整数である。）
8. ８．前記シクロデキストリン誘導体が、モノマー当たり平均で約１０のアニオン 性置換基を有する１又は２以上のシクロデキストリンモノマーから構成される、 請求項６の組成物。
9. ９．前記モノマーが、モノマー当たり平均で約１０〜約２４のアニオン性置換基 を有する、請求項８の組成物。
10. １０．前記シクロデキストリン誘導体がシクロデキストリンポリマーを含む、請 求項７の組成物。
11. １１．前記ポリマーが前記キャリヤー中に分散又は懸濁された固体粒子である、 請求項１０の組成物。
12. １２．前記シクロデキストリン誘導体が、ポリアニオン性α−、β−又はγ−シ クロデキストリンの塩を含む、請求項６の組成物。
13. １３．前記塩のカチオン成分が、Ｍｇ、Ａｌ、Ｃａ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｂ、Ｂａ及 びこれらの２又は３以上の組み合わせから本質的になる群から選ばれる、請求項 １２の組成物。
14. １４．前記誘導体が体温で水に実質的に不溶性である、請求項１の組成物。
15. １５．前記サッカライド誘導体の少なくとも一部分が、前記キャリヤー中に分散 又は懸濁された固体粒子である、請求項１の組成物。
16. １６．哺乳動物の組織内の平滑筋細胞の異常成長を抑制する方法であって、前記 組織に、ポリアニオン性サッカライド誘導体を、前記異常成長を抑制するのに有 効な量で局所投与することを含み、前記誘導体が体温で水１００ｍｌ当たり約１ ５ｇ未満の溶解性を有する方法。
17. １７．前記誘導体がシクロデキストリン誘導体である、請求項１６の方法。
18. １８．前記シクロデキストリン誘導体のアニオン性置換基が、硫酸基、スルホン 酸基、リン酸基、硝酸基及びこれらの２又は３以上の組み合わせから本質的にな る群から選ばれる、請求項１７の方法。
19. １９．前記シクロデキストリン誘導体が、前記ポリアニオン性シクロデキストリ ンの塩を含む、請求項１８の方法。
20. ２０．前記誘導体を無毒性で薬学的に許容できる生理的塩度のキャリヤーと混合 する、請求項１９の方法。
21. ２１．前記誘導体がβ−シクロデキストリンポリマーの硫酸誘導体を含む、請求 項１６の方法。
22. ２２．前記誘導体が生理的に許容できるキャリヤー中に分散又は懸濁された固体 粒子を含み、前記懸濁液又は分散液が約１〜約３０重量％の前記誘導体を含む、 請求項１６の方法。
23. ２３．前記懸濁液又は分散液が約５〜約１５重量％の前記誘導体を含む、請求項 ２２の方法。
24. ２４．前記誘導体を成長因子と混合する、請求項１６の方法。
25. ２５．前記局所投与が、該サッカライド誘導体を組織に直接注入することを含む 、請求項１６の方法。
26. ２６．前記局所投与が、前記サッカライド誘導体の水性懸濁液又は分散液を、そ のバルーン部分の壁に複数の孔を有する注入用バルーン付カテーテルを用いて、 組織に直接注入することを含む、請求項１６の方法。
27. ２７．成長因子と混合したシクロデキストリンのポリアニオン性サッカライド誘 導体を治療すべき組織に局所投与することを含む哺乳動物の血管形成を促進する 方法であって、前記誘導体が蒸留水１００ｍｌ当たり約１５ｇ未満の体温におけ る溶解性によって特徴付けられる方法。
28. ２８．前記誘導体がシクロデキストリン誘導体である、請求項２７の方法。
29. ２９．前記シクロデキストリン誘導体のアニオン性置換基が、硫酸基、スルホン 酸基、リン酸基、硝酸基及びこれらの２又は３以上の組み合わせから本質的にな る群から選ばれる、請求項２８の方法。
30. ３０．前記シクロデキストリン誘導体が、前記ポリアニオン性シクロデキストリ ンの塩を含む、請求項２９の方法。
31. ３１．前記誘導体を無毒性で薬学的に許容できる生理的塩度のキャリヤーと混合 する、請求項３０の方法。
32. ３２．前記誘導体がβ−シクロデキストリンポリマーの硫酸誘導体を含む、請求 項２７の方法。
33. ３３．前記誘導体が生理的に許容できるキャリヤー中に分散又は懸濁された固体 粒子を含み、前記懸濁液又は分散液が約１〜約３０重量％の前記誘導体を含む、 請求項２７の方法。
34. ３４．前記懸濁液又は分散液が約５〜約１５重量％の前記誘導体を含む、請求項 ３３の方法。
35. ３５．前記局所投与が、該サッカライド誘導体を組織に直接注入することを含む 、請求項２９の方法。
36. ３６．前記局所投与が、該サッカライド誘導体の水性懸濁液又は分散液を、その バルーン部分の壁に複数の孔を有する注入用バルーン付カテーテルを用いて、組 織に直接注入することを含む、請求項２７の方法。
37. ３７．シクロデキストリンのポリアニオン性誘導体及び成長因子を含む組成物に 移植されるべき臓器又は組織を接触させることを含む哺乳動物における移植組織 又は移植臓器を処理する方法であって、前記組成物が該移植片の該体内における 受容を促進するのに有効な量で投与され、前記誘導体が体温で水１００ｍｌ当た り約１５ｇ未満の溶解性を有する方法。
38. ３８．前記接触段階が、前記誘導体を該組織又は臓器に局所投与することを含む 、請求項３７の方法。
39. ３９．損傷又は移植した骨を治療する方法であって、骨組織を、成長因子と混合 したシクロデキストリンのポリアニオン性誘導体を含む組成物に、損傷又は移植 した骨の治癒を促進するのに有効な量で接触させることを含み、前記誘導体が体 温で水１００ｍｌ当たり約１５ｇ未満の溶解性を有する方法。
40. ４０．前記組成物が更に骨組織を含む、請求項３９の方法。
41. ４１．前記骨組織が粉末化された骨を含む、請求項４０の方法。
42. ４２．前記骨組織が微細に分散された無機質除去骨を含む、請求項４０の方法。
43. ４３．前記組成物がペーストである、請求項４０の方法。
44. ４４．前記骨組織が自家骨を含む、請求項４０の方法。
45. ４５．前記骨組織が異種骨を含む、請求項４０の方法。
46. ４６．哺乳動物の活組織の成長に影響を与えるのに適する化合物を製造する方法 であって、シクロデキストリンポリマーを準備し、前記シクロデキストリンポリ マーをジメチルホルムアミドの存在下でアニオン誘導体化剤と約６２〜約７２℃ の温度で約３〜約４日間反応させて、水１００ｍｌ当たり約１５ｇ未満の体温で の溶解性によって特徴付けられる前記シクロデキストリンポリマーのポリアニオ ン性誘導体を得ることを含む方法。