JPH07504745A - 抗原検出装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗原検出装置 技術分野 本発明は、抗原の採取及び検出のための装置に、並びに特に、所定の環境、例え ば、家庭環境における空気を含む運動性流体中に分散した抗原を採取し、検出し 又は測定するための装置に関する。

本発明は、疾患、特にアレルギー疾患の原因である微生物を含む様々な物質を含 んで成るか又はそれから得られる抗原の上記環境における直接的検出において特 定の用途をもつ。

背景技術 近年、一般アレルギー疾患、すなわち、気管支喘息（ｂｒｏｎｃｈｉａｌａｓｔ ｈｍａ）、鼻炎（ｒｈｉｎｉｔｉｓ）及びアトピー性皮膚炎（ａｔｏｐｉｃ　ｄ ｅｒｍａｔｉｔｉｓ）が炎症性失調であることが明らかになった。特に多数の近 年の研究は、ダスト−ダニ−（ｄｕｓｔ−ｍｉ　ｔｅ）及びネコの毛（（ａｔ− ｄａｎｄｅｒ）の両方の対する免疫学的感受性が喘息の進行に関連した非常に重 要な独立した危険因子であるという証拠を確信させてきた。多くの異なる国から の報告は、喘息をもつ患者の中のダスト−ダニに対するアレルギーの高い有病率 を示し、これは４５−８５％のレンジにある（Ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆＩｎｔｅｒｎ ａｔｉｏｎａｌ　Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ ｌ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆＡｌｌｅｒｇｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎ ｉｃａｌ　Ｉａｕｎｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｂａｄ　Ｋｒｅｎｚｎａｃｈ、　ＦＲＧ 。

Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　１９８７．　ｐａｇｅ　２、Ｂｕｌｌｌｅｔｉｎ　ｏｆ　 Ｗｏｒｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　ＯｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎＡｕｇｕｓｔ　１９８８ ；及びＰｌａｔｔｓ−Ｍｉｌｌｓ、　Ｔ、Ａ、Ｅ、ａｎｄ　Ｃｈａｐｍａｎ、　 Ｍ、Ｄ、　（１９８７）Ｊ、　Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　１ｍ＋ｎｕｎｏ１ ．．８０．６；　７５５−７７５）。

様々な種であるが優勢にはデルマトファゴイデス（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉ ｄｅｓ）の種を代表するダニは、局所環境条件、例えば、適当なベッド、カーペ ット、柔らかい家具、湿気及び暖かさがそれらの増殖に好ましいところにいる。

多数の主要なアレルゲン基がデルマトファゴイデス種の中で定められており、そ してダニ・アレルギー患者の８０％以上がそれに関係した様々なアレルゲンに対 するＩｇｌｌクラス抗体をもっている。しかしながら、用語”ハウス・ダストー ダ＝（ｈｏｕｓｅ　ｄｕｓｔ−ｕｎｉｔｅ）”が、ビログリフィダエ（Ｐｙｒｏ ｇｌｙｐｈｉｄａｅ）科のダニに使用され、その中のｌＯの種が、時折程度では なくしばしばハウス・ダストにおいて生じることが報告されているけれども、４ グリフアス・マイネイ（Ｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ　ｉ＋ａｙｎｅｌｌ）がハウス ・ダストにおいて優勢である。家の中で見られる他のダニもアレルギー疾患の原 因として重要であることができ、そしてこれらは、貯蔵ダニ（ｓｔｒａｇｅ　＋ ｎ１ｔｅｓ）として認められるダニを含む。

ダスト−ダニからのもの以外の分散された環境のアレルゲンも、幾つかの患者に おけるアレルゲン疾患に関連する。特に重要なアレルゲンは、家庭のペット、例 えば、ネコ（猫の毛、Ｆｅｌ　ｄｌ）　、イヌ及びトリ、ゴキブリ及び他の昆虫 、菌の胞子及び花粉（Ｐｌａｔｔｓ−Ｍｉｌｌｓ。

Ｔ、Ａ、Ｅ、　ａｎｄ　Ｃｈａｐｍａｎ　Ｍ、Ｄ、　（１９８７）　（前記）） からのものを含む。微生物は、空気によって運ばれる滴中に分散されるようにな り、そして疾患を伝染することができる。よい例は、在郷軍人病（Ｉｅｇｉｏｎ ｎａｉｒｅｓ’ｄｉｓｅａｓｅ）、重度且つときどき致死の呼吸性感染症であっ て換気系がしばしばそれらの伝染に、特に指示ケースに巻き込まれるものである 。さらに、多くの疾患、例えば、Ａ型肝炎及びコレラが水溶性微生物により伝染 される。

多くの変動因子は、広範なレベルの上記アレルゲンが異なる時間において異なる 家庭内において存在するということをもたらす。アレルギー疾患は、軽いものか ら重症なものまで、特定のアレルゲンがある限界レベルを超えて存在する時及び 場所で、上記アレルゲンのいずれかに感受性の患者を、もたらすことができる。

世帯主それ自身が彼（彼女）らの家の内のこれらのアレルゲンのいずれかのレベ ルを特に測定することができるようなテストは、未だ存在しない。

したがって、世帯主が、例えば、彼（彼女）らがダスト−ダニ又は他の特定のア レルゲンを減少させるために使用しているクリーニング方法が有効であるかどう かを決定することは、未だ可能でない。

”グアニン（ｇｕａｎｉｎｅ）”テストとして知られている商業的な半定量的で あるが非特異的なテスト（Ｗｅｒｎｅｒ　ａｎｄ　Ｍｅｒｔｚ、　Ｍａｉｎｚ、 　Ｇｅｒｍａｎｙ）が製造されているが、このテストは、ダスト−ダニの数のみ と相関をもつ。グアニンはダニ及びほとんどの他の昆虫並びに多くの動物により 排泄され、そしてそれ故、アレルギー原因性ダニに特異的ではない。このグアニ ン・テストは、以下に述べるようなりｅｒ　ｐｉ抗原それ自体（Ｐｌａｔｔｓ− Ｍｉｌｌｓ、　Ｔ、Ａ、Ｅ、ａｎｄ　Ｃｈａｐｍａｎ　Ｍ、Ｄ、　（１９８７） （前記））を検出していない。

世界中の環境関連アレルギー疾患問題の大きさは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｌｌｅｒｇｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉ ｃａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ及びｔｈｅＷｏｒｌｄ　）Ｉｅａｌｔｈ　Ｏｒｇ ａｎｉｓａｔｉｏｎの後援の下で１９８７及び１９９０年に開かれた国際的な研 究集会の開催を導いた。これらの研究集会において、ダスト・サンプルを採取し 、そして加工するための、そして実験室の測定検定のための手順に関するガイド ラインが規定された。これらの手順は、全く実験室に向けられ、そしてやっかい であるが、それらは、臨床的実験室において広く受け入れられている。以下の手 順が目下使用されている： 所定時間にわたる所定領域を吸引することによりダスト・サンプルを回収するた めに、真空掃除機を使用する。このダストをきれいな紙バッグ内に又はワイヤー ・メツシュ紙ティシュ−から作られたフィルター又は４″ｘ　１０″ガラス・フ ァイバー・フィルターを含むアタッチメント内に採取する。このような採取装置 は、ＡＬＫ　Ｌａｂｏ−ｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、、　Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕ ｔ、　Ｕ、Ｓ、Ａにより供給されるタイプの装置を含む。あるいは、毛布をプラ スチック・バッグ内でシェーキングし又は表面をブラッシングするような技術を 使用することもできるが効果が少ないと考えられる。次に大きな粒子を２００− ３００μｍメツシュ篩いを通して篩うことにより除去し、対象物を正確に計量さ れることができる細かいダストのサンプルを得る。次に免疫化学的分析は、ダス トの所定重量を所定容量のバッファー生理食塩水中に４時間にわたり抽出し、以 下に記すダニの素粒子からアレルゲンを開放させることを必要とする。

ダスト−ダニの場合における主なアレルゲンは、デルマトファゴイデス・ブチロ ニジナスの場合にはＤｅｒ　ｐｉ、そしてデルマトファゴイデス・ファリナエの 場合にはＤｅｒｆｌとして表される分子量約２５．０００　Ｍのシスティン・プ ロテアーゼとして同定されている。これらは、いわゆる、グループ！抗原であり 、そしてそれらは、ダニの体の中で生じるだけでなく、より優勢にはそのダニに より排泄される素粒子中に生じる。他の主要なアレルゲンは、グループ１１とし て呼ばれるもの、例えば、Ｄｅｒ　ｐＨ及びＤｅｒ　ｆｉｌであってこれもまた 診断的に有用なものであるものを含む。他のアレルゲンは、グループＩｌ＋及び グループＩＶと呼ばれる。可溶化ダスト抽出物を、グループＩ抗原の存在につい て酵素免疫検定（ＥＩＡ、　ＥＬＩＳＡ）においてモノ又はポリクロナール抗体 による慣用のサンドイッチ免疫検定を使用して検定する。結果を、国際標準のＤ ｅｒ　ｐｌサンプル（ＷＨＯからの）により作った標準曲線を参照することによ りダストの１グラム当たりのアレルゲンのマイクロダラム（又は国際単位）とし て表す。このような測定手順は、世帯主による使用については全〈実施不可能で ある。なぜなら：ａ）ダスト・サンプルがバッグからより小さな容器に移され、 篩分けされ、そして計量されなければならず；ｂ）真空掃除機の袋から採取容器 への移し及び篩いが汚く且つ不快であり、そしてマスク及びフユームのフードの 使用を必要とじ；Ｃ）ダストを篩うことは骨が折れ、そして時間がかかり、そし てそれ故、労働において高価であり；ｄ）そのバッグに付着した全てのダストを 取り出すことが不可能であり；そしてｅ）ダスト及びダストを捕らえたふわふわ したものが真空掃除機及び付属品の渦巻きの中に留まるようなときに先のサンプ ルにより後のサンプルの汚染の真の危険が存在する、からである。

幾つかの研究がハウス−ダスト・アレルゲンのための計量空気サンプリングの記 事に向けられている（Ｓｗａｎｓｏｎ、　Ｍ、Ｌ、　ｅｔ　ａｌ、（１９８５） 。

Ｊ、　Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉ＋ｏａ＋ｕｎｏ１．７６；　７４−７９ ．　Ｐｌａｔｔｓ−Ｍｉｌｌｓ、　Ｔ、Ａ、Ｅ、　ｅｔａｌ、（１９８６）　、 Ｊ、　ＡＩｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　７７；　８５０−８５ ７及びＰｒ１ｃｅ。

Ｊ、Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、　ｔ、ａｎｃｅｔ　３３６．８９５− ８９７）ｅこれらの研究においては、空気により運ばれる粒子を捕獲するために 膜を使用し、そして必ず、そのダストがそのフィルターから除去され、そして抗 原が検定に先立って抽出されなければならない。ヒトを感作するのに必要な空気 により運ばれるアレルゲンの量が目下議論されている（Ｐｒｔｃｅ。

Ｊ、Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）前記）。そのうえ、空気により運ばれ るアレルゲンのレベルは、普通には、部屋の動乱（ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）の 非存在においては非常に低い。これは、ダスト−ダニ・アレルゲンを担持する粒 子が床の速く落ちるからである。このため、ヒトが身につけている空気サンプラ ーに伴う問題が存在し、そしてこれらは嵩張りそして不便でもある。空気サンプ リングにより得られた結果と、同一の部屋内のカーペットの表面サンプリングか ら得られた既知重量のダスト中のアレルゲン含量の表示との間に違いが在る。こ れは、保持における差に、そしてそれ故、それぞれウール及びナイロン・カーペ ットによる小さなアレルゲン担持粒子の放出に、起因する（Ｐｒｉｃｅ、　Ｊ、 Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）前記）。この違いは、そのサンプリング技 術が平方メーター当たりに回収されるアレルゲンの量、すなわち、異なる材料か らの小さな粒子の放出特性を考慮するために期待されることができるであろう測 定係数を計測する場合には、克服されることができよう。より良好な測定値は、 平方メーター当たりに存在する全アレルゲンの測定値であって、現在のところ、 単位面積当たりに採取されたアレルゲン及びダストの全量の評価における困難性 により限定されているものを、含むであろうことが認識されている（Ｆａｌｌ、 　Ｐ、、　ＭｉｔＣｈｅｌｌ、　Ｂ、、　Ｂｒ０８ｔＯｆｆ、　Ｊ、、　（１９ ９２）　Ｌａｎｃｅｔ３４０、７８８−７８９）。

多くのバクテリア及びウィルスが環境の流体を汚染し、そしてそれ故、例えば、 水により感染を伝播することができる。この方法における伝染される疾患の例は 、在郷軍人病、サルモネラ湯熱、Ａ型肝炎及びＢ型肝炎、ポリオ、ウィルス性胃 腸炎及びコレラを含む。

主に、空気又は水により運ばれる微生物により引き起こされる（非アレルギー性 ）疾患の例は、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ（在郷軍人病）である。

本発明の目的は、所定の環境において空気を含む運動性流体中に分散した抗原の 採取及び付随的な検出又は測定のための装置であって、抗原が環境の抗原として 定められることができ、そして装置が抗原採取の部位において容易に使用される ことができるものを、提供することである。

本発明のさらなる目的は、その抗原の環境を取り除くため、又はあるいは、必要 なときにその部位においてその抗原の存在を最小化するために必要な措置をとる ために、環境中の所定の部位において分散抗原の存在及び程度を監視するために 使用されることができる装置を提供することである。

本発明の開示 本発明は、所定の環境中の運動性流体中に分散した抗原を採取するための装置で あって、その抗原がそれに接するときにその抗原を担持する流体をその装置に衝 突させ又は通過させることによりその抗原を保持するための手段を含んで成り、 その抗原担持手段がその抗原の存在を確認し又は定量するためのテスト系におい て直接使用することができるものであるような装置を、提供する。

この抗原保持手段は、その抗原がそれに接するときにその抗原を捕獲することが でき、そしてその抗原と結合することができる表面を含んで成り、そしてその手 段は、さらにその抗原の存在を確認し又は定量するための免疫検定において直接 使用することができる。

本発明の１つの態様に従えば、抗原を捕獲し且つ保持する手段は、その抗原に対 する抗体によりコートされた表面である。

本発明の第一態様に従えば、その表面は、その抗原の捕獲を容易にする媒質によ り浸される。

この媒質は、好ましくは、空気により運ばれる粒子を捕獲するために、そしてそ の場におけるその表面の乾燥を防ぐために有効な粘度を有する。

本発明のこの態様においては、その装置は、空気の乱流、重力又は現存する気流 によりそれに接するようになった抗原を捕獲し且つ保持するように改良されてい る。現存する気流は換気パイプ内のものであることができる。

本発明の第一態様に従う装置であってその抗原が流体の乱流、重力又は現存する 流体流によりその装置に接するようになった装置は、受動的装置として記載する ことができ、以下、タイプ１装置として表す。

抗原を捕獲し且つ保持する手段がその抗原に対する抗体によりコートされた表面 であるとき、そのコートされた表面は免疫検定のための固相を提示する。したが って、後者の検定は、その抗原が環境内で生じるところの部位において行われる ことができる。

本発明の第二態様に従えば、抗原を捕獲し且つ保持するための手段は、その抗原 がそれを通して吸引され又はそれに衝突する流体の流れから取り出されるように 、流体吸入手段に接続可能な装置の中に収納可能であり又はそれに組み込まれる 。

第二態様における抗原を捕獲し且つ保持するための手段は、流体細孔性であり且 つその抗原を結合するために改良された表面を含む。

本発明の第二態様に従う装置は、一般的に、場合により関連の免疫検定の要素を 含んで成る定量性ダスト採取装置であって、特に、液体を吸引することができる ものを含む家庭の又は商業的な真空掃除機、例えば、”３　ｉｎ　１”真空掃除 機（湿式及び乾式吸引）として取引において知られた真空掃除機による使用に、 並びに先に定めた受動的装置により遭遇するものよりも高い流体の流速による使 用に、好適なものである。このような装置を、以下、タイプ２装置という。

したがって、本発明の第二態様に従えば、流体吸引手段は、家庭の又は他の真空 掃除機又は他の好適なポンプの空気吸引手段であることができる。

あるいは、流体吸引手段は、’３　ｉｎ　ｌ”家庭の又は他の真空掃除機又は他 の好適なポンプの液体吸引手段であることができる。

流体細孔表面は、上記家庭真空掃除機の空気吸引手段とその掃き付属品との間に ある挿入のためのチューブ内に適合されることができる。

本発明の第二態様の抗原結合表面は、抗原を直接又は間接に結合することができ る。

好ましくは、液体細孔表面は、細孔性プラスチック材料から成る。

１つのこのように好適な細孔性プラスチック材料は、細孔性の焼結スチレンであ る。

流体細孔性表面は、細孔性タンパク質結合プラスチック材料から成ることもでき る。

第二態様の１つの態様においては、流体細孔性表面は、形状要素から成る。好ま しくは、形状要素は、少なくとも部分的に、好適な材料、例えば、ナイロンのガ ーゼから成る。

細孔性材料は、好ましくは５−３００μｍ１より特に１５−６０μｍのレンジ内 の平均直径をもつ細孔をもつ。

抗原の間接的結合は、その表面に結合した抗体の手段により達成されることがで きる。例えば、抗体は、その抗体によりコートされた粒子によりその表面に結合 されることができる。したがって、例えば、抗体は、常法によりラテックス粒子 （直径０．０５−２０μｍ１より特に０．５μｍ）上に直接的又は間接的に吸収 されることができ、次に、コートされた粒子が抗原結合表面上に吸収されること ができる。

あるいは、抗原の結合は、エントラップメント（ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）又は静 電結合により達成されることができる。

本発明の第二態様に従う装置は、場合により、その表面の上流のその流体の流れ の中の大きな死骸、例えば、ふわふわしたもの及び石のエントラップメントのた めの流体細孔性ディスクを含む。

抗原結合表面は、抗原の検出にために取り出されることができる。

あるいは、抗原の検出は、その流体吸引手段からその装置を脱着した後その場に おいて抗原結合表面により行われることができる。

装置は、抗原検出手段を受け入れるために改造されることができる。

本発明の第二態様に従う装置は、それを通過し又はそれに衝突する流体の流れの 中で大部分のダストを採取するための手段をも含む。

抗原は、好ましくは、本発明に従って酵素免疫検定により検出される。好ましい 酵素免疫検定は、サンドイッチ検定である。

抗原結合表面は、免疫検定の固相を提示することができる。

本装置は、その装置を通しての流体の流れを示す手段、例えば、圧力羽根（ｔｅ ｎｓｉｏｎｅｄ　ｖａｎｅ）をも含む。

本発明の第三態様の従えば、装置は、その装置を通して流体を動かす手段を含む 。好ましいこのうな手段は、ファン又はポンプである。

このような装置は、それが存在するとき、流体が空気であり、そしてファン又は 他の機械が免疫検定要素の上の又は周囲の抗原採取装置を通して空気を動かすと きに最も適当に使用される。このような装置は、特に内蔵ユニットに好適である 。本発明の第三態様に従う装置は、′能動的（ａｃｔｉｖｅ）”装置として記載 することができ、以下、タイプ３装置という。

タイプ２装置に加えてタイプ３装置は、その装置を通しての流体の流速を示すた めの圧力羽根又は他の好適な装置を含むことができる。これは、テストされるべ き材料をサンプリングするために必要な時間を確認することを助は又はこれを示 すために使用されることができる。

本発明に従う抗原の検出は、定量的、半定量的又は非定量的であることができる 。

抗原の検出は、抗原結合表面又はその部分の色における変化を含むことができる 。

本発明に従う表面の抗体コーティングは、常法により、例えば、直接的吸収によ り又はそれに最適濃度の抗体を共有結合させることにより、行われる。

本発明に係る装置を使用することができる環境は、家庭の環境であることができ る。

抗原は、空気により運ばれ及び／又は水により運ばれることができる。

抗原は、好適には、いずれかの微生物、菌又はアレルゲンである。

本発明に係る装置は、特に、アレルゲンの検出に好適である。このようなアレル ゲンの代表は、ダスト−ダニ・アレルゲン、ネコの毛、イヌの毛、昆虫アレルゲ ン、例えば、ゴキブリ・アレルゲン、花粉及び菌の胞子である。

本発明に係る装置は、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種のメンバーである 微生物又はそれらの断片からの抗原の検出にも好適である。

本発明は、先に定めたような装置内での使用のために抗原を採取し又は捕獲し若 しくは保持するための手段をも提供する。

本発明は、さらに、１以上の成分として先に定めたような装置を含んで成るキッ トを提供する。このキットは、好ましくは、抗原を検出するための手段を含む。

本発明は、ダスト−ダニ・アレルゲンを検出するために先に定めたような装置に 伴う使用のための抽出媒質であってダスト−ダニ・アレルゲン抽出量のキチナー ゼを含むバッファーを含んで成るものをも提供する。

タイプｌ装置は、特に、自然の撹乱により又は低速度空気流中の動きにより空気 により運ばれるようになったアレルゲン又は抗原であってその装置上に普通には 重力によって置かれたものについてのテストに好適である。

好ましくは、タイプｌ装置は、ストリップ、トレー又はウェルを含んで成る。こ のようなストリップ、トレー又はウェルは、平ら又は水平であり又は抗原の効果 的なエントラップメントのために流体の流れに対してかなりの角度にある実質的 な領域を提供されたいずれかの好適な形状を有することができる。

このストリップ、トレー又はウェルは、好ましくは、免疫検定を行うための改良 されたいずれかの材料から成る。特に好適な材料は、プラスチック材料、例えば 、ポリスチレン、より特に照射タイプのポリビニル・クロライド又はナイロンで あって検出されるべき抗原に対する好適なモノ又はポリクロナール抗体の有効量 によりコートされているものである。

例えば、本装置がハウス・ダスト−ダニの検出のために使用される場合には、ウ ェルを、乾燥を防ぎ、そしてダストがそのウェルのプラスチック材料に′付着（ ｓｔｉｃｋ）’することを許容するために、°粘着性（ｓｔｉｃｋｙ）’のバッ ファー、例えば、５ｏ容量Ｘのグリセロールを含むリン酸塩バッファー生理食塩 水（ＰＢＳ）中でＤｅｒ　ｐｉに対するモノクロナール抗体により、好適にコー トする。このバッファーは、以下に述べる抽出成分をも含む。この装置は、好適 には、テスト・ストリップとしての使用のためにトレー内に多数のウェルを含ん で成るであろう。ダスト−ダニ・テストのために、１つのウェルを、好適には、 ”陰性（ｎｅｇａｔｉｖｅ）”対照材料（すなわち、固相抗体コーティング）に より後でコートする。ダストダニの場合においては、このような対照は、ダスト ・ダニの実験室の繁殖のための培地として使用されるウシ肝臓粉末から成ること ができる。少なくとも２の（そして好ましくは３の）ウェルを、異なるが既知量 の”陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）”対照ダストダニ・アレルゲンにより後でコート する。

例えば、１つのウェルは、高レベル（約２０μｇ／ｇ当量）により、１つは、低 レベル又はカット−オフ・レベル（約０．８μｇ／ｇ当量）により、そして好ま しくは第三のウェルを中間レベル（約５μｇ／ｇ当量）によりコートされること ができるであろう。これらのウェルを、次に接着テープによりシールする。テス トを行うときに、テスト・ストリップを安全な場所、好ましくはテストされるべ き部位における床レベルの近くに置き、モしてそ接着テープをそのテスト・ウェ ル（単数又は複数）からのみ剥がし、陰性及び陽性対照ウェルをそのサンプル採 取時間じゅうシールしたままにする。テスト・ストリップをその場に放置し、好 適な時間、場合によりダスト−ダニの場合においては８時間から多数臼までにわ たり、サンプルを採取する。

テスト・ウェルを、異なる抗原（例えば、ダスト−ダニ及び猫の毛）を同時に検 出するための異なる抗体によりコートすることができる。

タイプ２装置は、中程度の又は高い空気流速中のサンプルを採取するために最も 好適である。このような装置は、一般的に、標準的な真空掃除機のホース・パイ プ内に又は間に適合するための、好適な材料、好ましくはプラスチックから成る 付属品であろう。例えば、この装置をそのホース・パイプの作用端内に置き、又 は後者とこのような器具により正常に提供されたカーペットを掃くための普通の タイプの補足的付属品との間に挿入することができる。

本装置は、空気により運ばれ又はダストにより運ばれる抗原を結合することがで きる表面を含む要素を受け入れるように改良されたチューブを含んで成ることが できる。後者の要素は、抗原を検出するために使用される免疫検定の”固相（ｓ ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ）″としても役立つことができる。この要素は、空気細孔 性材料、例えば、ＰｏｒｅｘＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、　Ｇｅｏｒｇｉａ、　 Ｕ、Ｓ、Ａ、により製造されたタイプの５−３００μ■のレンジ内の細孔サイズ をもつ細孔性焼結スチレンのディスクを含んで成ることができる。

免疫検定を、本装置により採取された抗原の量を定量的に測定するために使用す ることができる。カーペット、柔らかい家具等を掃除するその普通の目的におい てその場において本装置をもつ真空掃除機を使用することにより、抗原を含むダ スト及び他の材料を、細孔性ディスクを通して吸引され又は通過した空気により その空気細孔性材料の上及び内にトラップされるであろう。ユーザーは、特定の カーペットの領域、例えば、約１Ｉ１１″当たり、例えば、１分間の時間にわた り、評価される部屋内での、真空掃除に向けられるであろう。先に示したように 、細孔性ディスクは、検出される抗原を結合するのに直接的又は間接的に好適な 材料から作られることができる。

特定のやり方でテスト部位を真空掃除した後、次に、ユーザーは、タッピング、 物理的除去又は本目的のために設定された付随的細孔性プレーフィルターの除去 のいずれかにより、それを細孔性ディスクから打って出すことにより、ふわふわ したもの、髪の毛、石等を除去するであろう。細孔性プレーフィルターは、好適 には、粗いプラスチック・メツシュを含んで成る。

細孔性検定ディスクは取り出されることができ、そして検定を別々の検定ユニッ ト内で行うことができる。しかしながら、好ましい技術は、その装置内にそのデ ィスクを保持し、そしてそのディスクの下流（すなわち、真空掃除機に近い末端 ）に吸収プラグを挿入し、それによりそのプラグが免疫検定を行うために使用さ れるテスト試薬を吸収することである。

あるいは、その場に細孔性ディスクをもつ装置を、そのディスクと反応し且つそ れを通過するテスト試薬がその中に採取されるように、流体を採取することがで きるトレー又はユニット内に直立させることかできる。吸収プラグを使用すると き、テスト試薬を重力、吸引又は公知のやり方でその吸収プラグの毛細管作用に よりその中に集めることができる。

タイプ２の装置内での使用のための他のタイプの要素は、場合により検出テスト のための捕獲抗体によりコートされたプラスチック材料のストリップである。こ のようなストリップは、とりわけ平らな、曲がった又は螺旋状のものであること ができる。ストリップは孔を提供されることができる。さらに、ストリップは、 その表面積を増加するために突起又は渦巻きを備えることができる。実際には、 はとんどいずれの形状も、それが所定の時間内に十分なダストを採取するのに十 分な表面積をもつ限り、その要素のために十分なものであるが、その要素は、明 らかに、それが適合されるパイプを遮蔽し、そして真空掃除機がもはや十分なダ ストを吸引しないような程度までその空気の流れを妨害するであろうサイズを有 してはならない。ストリップは、ディツプスティック（ｄｉｐｓｔｉｃｋ）とし て知られた装置、例えば、Ｍｉｃｒｏｎｉｃ　ＢＹ、　Ｌｅｌｙｓｔａｄ、　ｔ ｈｅ　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓにより製造されたタイプのディツプスティック（ Ｃａｔ、Ｎｏ：　８１３−０５）であることができる。このようなディツプステ ィックは、その空気の流れが衝突し、そしてそれにより偏向されるような方法で そのパイプ内の空気の流れ中の付属品内にいずれかの便利な手段により単に抱え られることができる。殆どの最新の家庭用真空掃除機に標準として普通に合う、 空気流れ制御ベント内で手動により使用されるディツプスティック又は他のスト リップを抱えることさえ可能である。

ストリップが”付着性”剤、例えば、グリセロール、寒天又はゼラチンによりコ ートされる場合には、衝突したダストは、それによく付着し、そしてその接着は 静電荷により支持されるであろう。ストリップ又はディツプスティックが抗体に よりコートされない事象においては、そのとき、必要な抗体は、一般的には、そ の検出検定が行われる検定容器の壁の上にコートされるであろう。

特に好ましいタイプ２の装置は、ユーザーが単位免疫当たりに存在する抗原の量 を定量できるようにするものである。このタイプの装置は、アレルゲン、例えば 、ダスト−ダニ又はネコの毛の検出のために特に好適である。単位面積当たりの アレルゲンの定量は、臨床的に意味のある量のアレルゲンを評価するために特に 重要である（Ｐｒｉｃｅ、　Ｊ、Ａ、、　ｅｔ　ａｔ、　（１９９０）前記）。

装置内の使用のためのダストを採取するための要素は、いずれかの好適なチュー ブ状、円筒状又は他の好適な形状の要素から成ることができる。好ましくは、形 状要素は、いずれかの好適な材料、最も特にプラスチック材料から作られたガー ゼであって、そして空気流れの全部又は一部がそれを通過することを許容し、そ れによりそれを通過する空気の一部の中のダストの大部分、より特に７５％以上 をそのガーゼ要素により捕獲し、そして保持するようなガーゼを含んで成る。

形状要素内の使用のために好適なガーゼは、チューブ状フィルターの形態で、Ｇ ＶＳ　Ｓｒｌ、　Ｂｏｌｏｇｎａ、　Ｉｔａｌｙにより市場に出されている。

特に好適なこのようなチューブ状ガーゼ・フィルターは、４０μｍのナイロン・ メツシュをもつもの、より特にタイプＦＩ６４−４である。しかしながら、メツ シュ・サイズは、決定的に重要ではない。なぜなら、ダスト−ダニ粒子（一般的 には１０−４０μｍ）は、しばしば、より大きなダスト粒子等に付着し、そして そのガーゼ内の孔がかなり大きな場合でさえそのフィルターにより保持されるで あろうからである。したがって、先に記載したように、５−３００μｍのメツシ ュ・サイズをもつガーゼを使用することができる。

ガーゼは、好ましくはモノクロナール又はポリクロナール抗体によりコートされ ることができる。しかしながら、あるいは、ガーゼは抗体によりコートされる必 要はなく、この状況においては、装置は場合により、脱着可能なディツプスティ ックを含む、後者のディツプスティックは、ガーゼ・フィルター装置の内に配置 され、又はそれに付着されるが、脱着可能であることができる。このような配置 は、免疫検定により継続される前に、ダスト／抽出バッファー混合物をそのガー ゼから除去しなければならないという必要性を回避する。ディツプスティックが 含まれる場合には、それは、好ましくは、免疫検定の第一抗体によりコートされ る。ディツプスティックが採取の間にダスト採取装置の一部として含まれること が本質的でないということが理解されよう。なぜなら、それは、以下に記載する ようにダスト採取の後にテスト系内に取り込まれることができるからである。

実際、上記のようなガーゼ装置は、以下に記載するように、他の最近入手可能な 採取系のいずれかよりも優れた採取装置として役立つことができる。

先に示したように、タイプ３装置は、それらが一般的にはファン駆動されている ので、能動的装置として記載されることができる。

タイプ２の装置に一般的に対応するような装置は、抗原を含むダストサンプルを 回収するためにその装置の中に又はそれを通して空気を吸引又は吐出するために 、普通には電気駆動の小さなファンに取り込まれ、又はこれを取り込んでいる。

カーペット又は柔らかい家具をサンプリングする代わりに、空気により運ばれた アレルゲンを検出する場合には、空気により運ばれるアレルギー媒介物（ｆｏｒ ＋ｏｉ　ｔｅｓ）、例えば、ダスト−ダニ糞粒子、花粉等のために部屋内の空気 をサンプル取りすることは、より適切であることができる。３つの装置のすべて を、この目的のために使用することができる。但し、タイプｌ及びタイプ３の装 置が、この目的のためにはより実際的である。

ハウス・ダスト−ダニのための検出検定は、普通には、第一段階として抗原抽出 手順を含むであろう。

ダスト・ダニ・アレルゲンは、ダニの体及びその糞粒子の両方内にある。その糞 粒子は、長時間持続し、そしてそれらの織物及び家具内での蓄積は、ダニ糞粒子 関連のグループＩ抗原の約９５３１をもたらす。目下、グループ！抗原が臨床的 暴露の係数として使用されている。この糞粒子は、キチンを含む周囲栄養性（ｐ ｅｒｉｔｒｏｐｈｉｃ）膜（Ｐｌａｔｔｓ−Ｍｉｌｌｓ、　Ｔ、Ａ、Ｅ、　ａｎ ｄ　Ｃｈａｐ＋ｎａｎ　Ｍ、Ｄ、　（１９８７）前記）内でコートされた食物ボ ールから成る。アレルゲンは、以下の実施例３中で例示するように、単純バッフ ァー中に短時間で溶解するようである。

したがって、ダストは好適には免疫検定を行う前に０．５％の濃度における界面 活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ　２０（ＴＷＥＥＮは商標）を含むＰＢＳ（ＰＢＳ Ｔ）により３０分間〜４時間にわたり好適に抽出されるべきであることが見つか った。そのうえ、ＰＢＳＴによりダストの同一サンプルを繰り返し抽出し、そし てそれぞれの抽出によりより多くのアレルゲンを得ることができることが見つか った。したがって、先に記載した公知の抽出方法がダスト−ダニ・アレルゲンを 効果的に抽出しないことは明らかであろう。

本発明に係るダスト−ダニ・アレルゲンの検出にための免疫検定における使用の ために特に好適な抽出媒質は、０．０３Ｘキチナーゼ及び０．５％ＴＷＥＥＮ　 ２０から成る抽出バッファーであるがこれらの濃度は決定的ではない。この抽出 バッファーにより、得られた吸光度（ＯＤｓ）は、２０−５０％程高められる。

ダスト−ダニ抗原を抽出するために特に有効な手段は、超音波処理であることが 見つかっている。後者の技術は、ＴＷＥＥＮ　２０それ自体を含む使用された洗 剤系のいずれよりも有効であることが見つかっている。しかしながら、超音波処 理は、しろうとにより行われるテストには明らかに好適ではない。

先に示したように、好ましい免疫検出技術は、酵素免疫検定である。しかしなが ら、多くの公知の免疫検定技術を使用することは不可能である。

例えば、ラジオイムノアッセイを使用することができる。しかしながら、これは 、安全性の理由により明らかに推奨されないであろう。なざなら、本検定が、し ろうとによる使用のために主に意図されているからである。

最も好適な検定は、′サンドイッチ（ｓｎｄｗｉｃｈ）”又は”捕獲（ｃａｐｔ ｕｒｅ）″検定として知られたものであり、ここで、反応性の抗原抗体組み合わ せ物の抗体成分が固相上の不溶化されており、そして抗原と反応又はこれを”捕 獲”し、抗原／抗体複合体を形成し、これが、当業者によく知られた方法を使用 して、好適な酵素、例えば、ホースラディツシュ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ ）又はアルカリ性ホスファターゼ（ＡＰ）に結合されたその複合体と反応性の第 二抗体により又は酵素増幅試薬、例えば、ストレプトアビジン／ビオチンにより 、検出されることができる。洗浄後、結合した結合体を好適なトレーサーにより 検出する。この酵素免疫手順においては、このようなトレーサーは、酵素のため の、基質／その検定装置の内又は上に存在する抗原の量に強度においてだいたい 比例する色を作り出すクロモゲン（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ）であろう。慣用のクロ モゲンは、その酵素がＨＲＰＯの場合には、Ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ） 又は３．３’　、　５．５’−テトラメチルベンジジン・ジヒドロクロライド（ ＴＭＢ）又は２．２′−アジノーｂｉｓ（３−エチルベンズチアゾリン−６−ス ルホン酸）（ＡＢＴＳ）であって眼により容易に読まれるもの、そしてその酵素 がＡＰの場合には、ｐ−ニトロフェニルホスフェート（ＰＮＰＰ）である。テス ト結果を、適当なときに、ディスク、膜又はディツプスティック上に長時間にわ たり保持（保存）することが望ましい場合には、酵素反応の生成物は、不溶性で なければならない。不溶性の生成物をもつこのような基質は、Ｉ（ＲＰＯのため のジ−アミノベンジジン（ＤＡＢ）又は４−クロロナフトール及びアルカリ性ホ スファターゼのための５ブロモ−４−クロロ−３−インドールイル・ボスフェー ト（ＢＣＩＰ）を含む。

２抗体のサンドイッチ検定においては、抗体は、モノクロナール抗体又はポリク ロナール抗体のいずれかであることができる。好ましい方法は、特異性を得るた めに”サンドイッチ”の１方の側に対し単一のモノクロナール抗体又はモノクロ ナール抗体の混合物を、そして公知のやり方で他の側に対してポリクロナール抗 体を、使用することである。

抗原が抗体に結合された固相により”捕獲”される場合により一般的に使用され る免疫検定方法に対する別法は、自然の手段、例えば、静電結合により抗原を直 接的に結合する材料を使用することである。このような材料の例は、Ｐｏｒｅｘ 　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　（前記）により市場に出されているポリエチレン 細孔性膜（例えば、Ｃａｔ、　Ｎｏｓ　Ｘ−４９１６、Ｘ−４８９７及びＸ−４ ８９９）　テある。結合されたアレルゲンは、次に、検出目的のために結合され ることができる特異的な、好ましくはモノクロナールの抗体により検出され、又 はその反応は、当業者によく知られた”間接的な”技術においていずれかの便利 な抗一種抗体により検出されることができる。

ダスト−ノミの場合にタイプｌの装置により免疫検定の検出部分を行うために、 以下のものが典型的には使用される手順であろう：コーティング・バッファー中 にもはや含まれていない場合には、先に述べた抽出バッファーの一部をテスト・ ストリップのそれぞれのウェルに添加し、そしてアレルゲンを抽出するために短 時間インキュベートする。好適な酵素（ＨＲＰＯ、ＡＰ等）に結合したＤｅｒ　 ｐ！（又はＤｅｒｆｌ又は両方）に対する抗体を好適な希釈における対照を含む それぞれのウェルに添加し、そして室温においてインキュベートし、その後、Ｐ ＢＳＴ中で４回洗浄する。好適なりロモゲン基質をそれぞれのウェルに添加し、 そしてインキュベートする。テスト・ウェル中に得られた色素は、テスト時間の 間にそのウェルにより採取された抗原の量に比例する。それを、陽性対照と比較 し、それから、良好な推定を検出された抗原の量から作ることができる。

タイプ２又はタイプ３の装置内で使用されることができる抗体コート・ディツプ スティックを、慣用の免疫検定技術、例えば、ＥＬＩＳＡにより。それらを常法 により順番に抽出／洗浄溶液、結合第二抗体、洗浄溶液及び基質に浸すことによ り、分析することもできる。テスト結果を、基質溶液中に作られた色を陽性対照 又は色チャートと比較することにより決定する。

ディツプスティックが抗体によりコートされず又は粘着性層によってのみコート される場合には、記載したようなサンプル採取の後に、そのディツプスティクを 第一抗体によりコートされた免疫検定ウェル中の挿入する。次に抽出バッファー を添加し、そのディツプスティックに付着した抗原又はアレルゲンを可溶化する 。次に開放された抗原／アレルゲンはそのウェル上に結合した第一抗体に結合す るであろうし、そしてそのウェルを次に洗浄し、結合体を添加し、再び洗浄し、 そして常法により基質／クロモゲンを添加することができる。

典型的なタイプ２装置の場合には、所定の領域を真空掃除した後、ユーザーは、 その掃除機のホース又はチューブからガーゼ・フィルターを取り出す。次に、こ のフィルターを好適な容器内に挿入し、そして抽出／洗浄溶液を添加する。抗体 コート・ディツプスティックを、使用する場合には、次に脱着し又はガーゼ・フ ィルター内に置き（別々に提供される場合）、そしてダスト／抽出バッファー混 合物を穏やかに攪拌するために使用し、そして次にこれを、その固相抗体がダス トから抽出されたアレルゲンと結合することができるように短時間インキュベー トに供する。このディツプスティックを次に取り出し、水道水又はバッファー中 で濯ぎ、目に見えるゴミを取り除き、そして次に常法により順番に、洗浄液、結 合液、洗浄液及び基質液中に浸す。結果を、そのディツプスティック上で顕色し た色と標準チャート上の色バーとを比較することにより°読む（ｒｅａｄ）’。

特に好ましいタイプ２の装置においては、チューブ状ガーゼ・フィルターを、記 載したような必要なアレルゲンに対する抗体によりコートする。指示領域を真空 掃除の後、ユーザーは、ホルダーからダスト・サンプルを含むガーゼ・フィルタ ーを取り出し、そしてそれを、１セツトのチューブ（カセット）の第一チューブ 内に含まれるアレルゲン抽出バッファー中に置く。ダスト・サンプル中のアレル ゲンは抽出され、そしてガーゼ・フィルターそれ自体に対する抗体に結合する。

短時間の後、そのフィルターを取り出し、そしてそのダストを蛇口からの流水下 で洗い出し；その装置を次に、アレルゲンに結合するであろう抗−アレルゲン酵 素結合物を含む上記カセットの第二チューブ内に置く。さらに短時間の後、その 装置をさらに水道水の流れの下で濯ぎ、そして次にその酵素に好適な基質及びク ロモゲンを含むカセットの第三チューブ内に置く。上記の時間の後にその基質中 で顕色する色を、上記チューブの底の周りに固定された印刷された色スケールと 比較する。その色は、１１を当たりのアレルゲンの止置に対応する。

図面の簡単な説明 図１は、本発明に係る第一態様に従う装置の略図であり；図２は、慣用の家庭用 真空掃除機のパイプ内にその場にある本発明の第二態様に従う装置の略図であり ；図３は、さらに、図２の装置の略図であり：図４は、慣用の家庭用真空掃除機 のパイプ内にその場にある本発明の第二態様に従う他の装置の略図であり；図５ は、さらに、図４の装置の略図であり；図６は、本発明の第二態様に従うさらな る装置の略図であり；図７は、本発明の第二態様に従うさらなる装置の断面の略 図であり； 図８は、分解図における家庭用真空掃除機の掃き付属品の部分に関する図７中に 示した装置の略図であり；そして図９は、本発明の第三態様に従う装置の略図で ある。

添付図面中、参照番号を伴わない矢印は、空気の流れの方向を示している。

本発明を行うための最良の方法 図１を参照して、その場においてハウス・ダスト−ダニ・アレルゲンを検出する ための装置であってその中に載せられた多数のウェル（１２）をもつプラスチッ ク材料のトレー（１１）を含んで成る装置を一般的に（１０）に示す。ウェル（ １２）の中の１つは、ハウス・ダスト−ダニ・アレルゲン（図示せず）に対する 抗体によりコートされており、そしてテスト・ウェルとして役立つ。使用におい ては、後者のウェルは、乾燥を防止し、そして先に記載したようなダストのエン トラップメントにおいて援助するための所定量のバッファーを含む。残りのウェ ルは、以下に記載するように陽性及び陰性の対照として役立つ。このウェルは、 接着テープ（図示せず）によりシールされている。サンプル採取の期間にわたり 、テープは、抗体コート・テスト・ウェルから剥離されるが、その他からは剥離 されない。サンプル採取の後、採取された抗原を本明細書中に記載するように酵 素免疫検定により測定する。図１中に示すような装置（１０）は、タイプｌの装 置に関して本明細書中で言及する装置である。

図面の図２及び３を参照して、タイプ２装置として本明細書中で言及され、そし て標準的な真空掃除機のホースのパイプ（２１）の１つのセクション内に挿入さ れるように改良された装置のタイプを、一般的に（２０）に示す。装置（２０） は、底（２３）及び一対の対向リブ（図示せず）により接続された口部分（２４ ）をもつ一般的にチューブ状のレセプタクル（ｒｅｃｅｐｔａｃｌｅＸ２２）か ら成る。この口部分（２４）は、レセプタクル（２２）の残りよりも広い直径を 有し、そしてぴったりフィツト（ｓｎｕｇ　ｆｉｔ）によるパイプ（２１）内へ の装置（２０）の挿入を容易にする。

レセプタクル（２２）の本体（２５）は、そのリブを除き、典型的には１５−６ ０μｍのレンジ内の、より特に４０μｍの細孔サイズをもつナイロン・メツシュ 材料から成る。レセプタクル（２２）の残りの部分は、硬質プラスチック材料か ら成る。使用においては、パイプ（２１）内に吸い込まれたダストは、その後の 分析のためにレセプタクル（２２）内に採取される。取り外し可能なリッドの形 態のプレーフィルター（図示せず）を、髪の毛及び比較的大きな粒子のエントラ ップメントのための粗いメツシュによりその装置（２０）上に提供することがで きる。したがって、装置（２０）内に採取されたダストは、比較的細かいダスト である。サンプルの採取の後、装置（２０）を抗原の検出のための免疫検定にお ける使用のために取り出す。

図４及び５を参照して、図２及び３中に示したタイプ２の装置の変更を示し、そ して図中、類似の部分に類似の参照番号を与える。

装置（２０）は、真空掃除機のパイプ（２１）内に装置を配置するのを助ける一 般的に（２６）に示す取り外し可能なホルダーを提供されている。

このホルダー（２６）は、装置（２０）の口部分（２４）及びパイプ（２１）の 重複部分の間に受入れられることができるスカート（２８）がそれから垂れ下が るところの一対の肩（２７）を定め、そのスカート（２８）は、使用において装 置（２０）の挿入又は取り外しを助けるグリッピング（ｇｒ４ｐｐｉｎｇ）手段 （２９）をその自由端において提供されている。

図６を参照して、タイプ２装置として本明細中で言及するさらなるタイプの装置 を、一般的に（３０）に示す。

装［（３０）は、空気により運ばれるアレルゲンのエントラップメントのための 取り外し可能な空気細孔性ディスク（３２）をもつホルダー（３１）から成る。

この細孔性ディスク（３２）は、５−３００μｍの、最適には１５−６０μｍの レンジ内の直径をもつ細孔をもつ。この装置は、また、使用において装置（３０ ）の上流に置かれるプレーフィルター（３３）を含み、そしてそれは、これと類 似の構造をもつ。但し、このプレーフィルター（３３）は、ディスク（３２）よ りも大きな細孔をもつディスク（３４）をもち、そして図２に関して記載したプ レーフィルターと同様の機能を提供する。サンプル採取の後、装置（３０）を免 疫検定における使用のために取り出す。

図面の図７及び８を参照して、タイプ２装置として本明細中で言及するさらなる タイプの装置を、一般的に（４０）に示す。

装置（４０）は、抗原の捕獲のための組み込み空気細孔性ディスク（４２）をも つダスト採取レセプタクル堕４１）及び髪の毛及び比較的大きな粒子のダストの 採取のためのディスク（４３）を含んで成る。このディスク（４３）は、使用に おいてディスク（４２）の上流に置かれ、そして使用後に取り外し可能である。

装置（４０）は、また、掃き付属品（４５）とホース・パイプ（４６）のセクシ ョンとの間に在る家庭用真空掃除機のバイブ内へのぴったりフィツトとしての挿 入のために、レセプタクル（４１）の延長である要素（４４）を提供されている 。サンプルの採取の後、装置（４０）を免疫検定における使用のために取り出す 。

図面の図９を参照して、タイプ３装置として本明細中で言及するタイプの装置を 、一般的に（５０）に示す。

装置（５０）は、その中に抗原の採取のための細孔性固相ディスク（５２）を配 置されたホルダー（５１）から成り、その装置（５０）は、スタンド（５３）内 に受け入れられる。先に記載したタイプの小さな電気駆動ファン（図示せず）を ディスク（５２）のどちらかの側に置くことができる。サンプル採取の後、装置 （５０）を免疫検定において使用することができる。

ファンの非存在における装置は、タイプ１の装置として役立つこ″とができる。

ネ１１ タイプｌの装置のための本発明に従う空気により運ばれる抗原検出キットは、好 適には、そのテストを行うための指示書に加えて、以下の： ■、　部屋又はゆっくり動く空気の流れ、換気系、等の中での空気により運ばれ る抗原の受動的採取のための抗体コート装置；及び２、　採取された抗原の免疫 学的分析を行うための試薬を含む。

零本本 タイプ２の装置のための本発明に従う空気により運ばれる抗原検出キットの例は 、好適には、そのテストを行うための指示書に加えて、以下のキットを含む： Ａ、　真空掃除機キットのためのもの（ディスク・タイプ）：１、　使い捨て又 は再使用可能である真空掃除機バイブ内への挿入のためのディスク・ホルダー； ２、　付随的であり、そしてまた数回再使用可能であるが、使い捨てが望ましい プレーフィルター； ３、　先に記載したような１以上の細孔性ディスクであって場合により、検出さ れるべき抗原に対する抗体により部分的に又は全体的にコートされているディス ク。

このように調製されたディスクは、好ましくは個々の使用のためにシールされて おり、そしてそのキット装置のだめの詰め替え物（ｒｅｆｉｌｌｓ）として別々 の包装において供給されることができる。あるいは、ホルダー及び検定ディスク は、結合された使い捨てユニットとして一緒に供給されることができる。

４、　場合により、検定ディスクを通過した後にテスト試薬を吸収する（ｔａｋ ｉｎｇ　ｕｐ）ための吸収プラグ；及び５、　結合体及び基質及び他の成分、例 えば、洗浄液並びにテストのために必要な指示書。

Ｂ、　真空掃除機キット（平らなディツプスティック・タイプ）＝１、　コート されたディツプスティック装置及び簡単なホルダー；及び ２、　採取された抗原の免疫学的検出を行うための試薬、典型的には、抽出バッ ファー、結合体及び基質。

Ｃ１真空掃除機キット（ガーゼ・フィルター＋　ディツプスティック・タイプ） ： １、　標準的な真空掃除機ホースにフィツトさせるための、図２及び３又は図４ 及び５中に示す並びに実施例６中に記載するような装置内において使用されるよ うなガーゼ・フィルター；２．１内に取り付けられた抗体コートされたディツプ スティック；及び ３、　採取された抗原の免疫学的検出を行うための試薬、典型的には、そのガー ゼ・フィルターに適合するように設計された容器内のの抽出バッファー、加えて 結合体、基質等を含むもの。

Ｄ、　真空掃除機キット（抗体によりコートされたガーゼ・フィルター）： １、　図２及び３又は図４及び５中に示す並びに実施例５中に記載するような装 置内において使用されるようなガーゼ・フィルター；２、　採取された抗原の免 疫学的検出を行うための試薬、典型的には、そのガーゼ・フィルターに適合する ように設計された容器内のの抽出バッファー、加えて結合体、基質等を含むもの 。

を孝零 タイプ３の装置のための本発明に従う空気により運ばれる抗原検出キットの例は 、好適には、そのテストを行うｌ；めの指示書に加えて、以下の： １、　空気がその免疫検定装置を超えて動くことを生じさせるための、典型的に は小さな電気駆動ファンを含む装置；２、　先に記載するような並びに図２及び ３中に示すようなダスト採取装置；及び ３、　検出検定を行うために試薬 を含む。

本＄本 本発明を、以下の実施例によりさらに説明する。

以下の実施例中、標準的な検定についての言及は、Ｌｕｃｚｙｎｓｋ、　Ｃ。

Ｎ、、ｅｔ　ａｌ、（１９８９）　Ｊ、Ｉ＋ａｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔ ｈｏｄｓ、１１８．２２７−２３５の方法に従うＤｅｒ　ｐｉ抗原のための標準 検定法にたよる（試薬は、Ｄｒ、　Ｍ。

Ｃｈａｐｍａｎ、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｖｉｒｇｉｎｉａ、　Ｃｈａ ｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、　Ｖ、Ａ、、　Ｕ、Ｓ、Ａ。

からの贈り物である。）。

ダスト・ダニ・アレルゲンのレベル及びそれらの有意性を、最新の許容閾値に従 って以下のように表す：〈２．５μｇ／ｇダスト　：　低い、感作を引き起こさ ない２．５−５μｇ／ｇ　＝　低い、感作を引き起こすかもしれない５−１０　 μｇ／ｇ　＝　中程度、感作を引き起こすことができる ＞　１０μｇ／ｇ　＝　高い、感作を及び感作患者における悪化を引き起こす傾 向にある 〉２５μｇ／ｇ　＝　非常に高い。

そのうえ、以下の実施例中、以下の材料及び方法は、共通である。

使用する陽性対照材料は、”消費培地（ｓｐｅｎｔ　ａ＋ｅｄｉｕｍ）″、すな わち、ウシ肝臓粉末上でハウス・ダスト−ダニを培養した後に残った粉末残渣で あって。これを陽性対照として使用した場合には、正常のウシ肝臓粉末を陰性対 照として使用した。

陰性対照は、正常ウシ肝臓粉末又はほとんどの実験において、〈２．５μｇ／ｇ 　Ｄｅｒ　ｐｌ抗原を含むダストから成っていた。

すべての実験において、０．５Ｍ炭酸ナトリウム・バッファーｐＨ９，６−炭酸 コーティング・バッファー（ＣＣＢ）を、固相上に抗体をコーティングするため に使用した。非結合部位の”クエンチングを、ＣＣＢ中の１％ウシ血清アルブミ ン（ＢＳＡ）により行った。

２つの抽出バッファーを使用した。第一バッファーを本明細書中でＥｌｌｌｌと いい、リン酸塩バッファー生理食塩水、ｐＨ６，８及び０．５ｘＴＷＥＥＮ　２ ０を含み、そして第二バッファーを本明細書中でＥＢ２といい、リン酸塩バッフ ァー生理食塩水、ｐｏｅ、ｏ中０．０３％キチナーゼ（Ｓｉｇｍａ。

Ｃａｔ、　Ｎｏ、　Ｃ１５２５）を含む。

洗浄を、ｐＨ７，２におけるＴｒｉｓＨＣｌバッファー又は示したように水道水 により行った。

実験室プレート検定のために、使用する基質／クロモゲン溶液は、１０ｍ１基質 中の３０％分析グレードの過酸化水素の３μｌを含む０．２Ｍクエン酸−リン酸 塩バッファー中の０．１２５ｍｇ／＋ｏｌの最終濃度の、３．３．５゜５−テト ラメチルベンジジン・ジヒドロクロライド（Ｓｉｇｍａ　Ｔａ２０５）であった 。

モノクロナール抗−Ｄｅｒ　ｐｉ抗体（ＭＡＲ）を、ＣＣＢ中の１／１０００の 希釈において全ての実験におけるコーティングのために使用して。抗体を、Ｂａ １ｂ／Ｃマウスのための接種物として０．５％　ＴＷＥＥＮ　２０を含むＰＢＳ による抽出により消費培地から調製したＤｅｒ　ｐｌ抗原を使用して、標準的な 技術により単離した。クローンを、消費培地ＰＢＳ抽出物によりスクリーンした 。反応性のＩｇＧクローンを正常なウシ肝臓粉末との非反応性についてチェック した。ＭＡＲを腹水及び組織培養液として生産した。

結合体を、先のような消費培地から抽出したＤｅｒ　ｐｉ抗原による標準的なプ ロトコールを使用してウサギを接種することにより調製したＤｅｒ　ｐ＋抗原に 対するウサギ抗血清を使用して作った。抽出された抗原は、ポリエクリルアミド ・ゲル電気泳動（ＰＡＧＩＩりにより高程度の同質性をもつことが示された。抗 血清のＩｇＧ画分は、イオン交換クロマトグラフィー（Ｗｈａｔｍａｎ　ＤＥ５ ２）により調製され、そして先に記載したようなホース・ラディッシュ・ペルオ キシダーゼ（Ｓｉｇ＋ｎａ、　Ｃａｔ、Ｎｏ、　Ｐ８３７５）に結合された（Ｓ ｈａｔｔｔｏｃｋ、　Ａ、Ｇ、　ａｎｄ　Ｍｏｒｇａｎ　Ｂ、Ｍ、、　Ｊ。

Ｍｅｄ、　Ｖｉｒｏｌ、　１９８４．１３．７３−８２）。結合体を、１％ＢＳ Ａ及び５０ｍｇ／ｍｌのチトクロームＣ（Ｓｉｇｍａ、　Ｃａｔ、　Ｎｏ、　Ｃ ７７５２）を含むＰＢＳ中で１／２００希釈した。

標準的な検定の変更バージョン（Ｌｕｃｚｙｎｓｋ、　Ｃ，Ｎ、、　ｅｔ　ａｌ 、（１９８９）前記）を、以下Ｕ、　Ｃ，Ｄ、修飾検定という、開発し、そして 一般的に以下のように行った： １、　８−ウェル・ポリスチレン・マイクロタイター・フラット・ウェル・スト リップ（Ｎｕｎｃ、　ＭＡＸＩＳＯＲＢグレード（ＭＡＸ　ｌ５ＯＲＢは商標） ）を、ＣＣＢ中で１／１０００希釈した１００μｌのモノクロナール抗体（ＭＡ Ｒ）により、４℃において１８時間コートし、そして１時間クエンチし；２、　 テストされるべき１００１１１のサンプル抽出物をそれぞれのウェル内に置いた 、１００μｌの適当な陽性及び陰性対照（以下を参照のこと）はそれぞれのラン において含まれた。テスト・ウェルを２０℃において１時間インキュベートし、 そして次に自動Ｏｒｇａｎｏｎ　ＥＬＩＳＡプレート洗浄装置内で４回洗浄し、 洗浄の間に１分間の”浸漬（ｓｏａｋ）″間隔をおき： ３、　１００μｌの結合体（以下を参照のこと）をそれぞれのウェルに添加し、 そして室温において１時間インキュベートし、（約２０℃）、そして次に上記の ように５回洗浄し； ４、１００μｍの基質／クロモゲンを添加し、そして室温において１０分間イン キュベートし；そして ５、　そのウェルの吸光度をＳＬＴ分光光度計内で４５０止において読んだ。

零零零 家の中の様々な場所から抽出した抗原のサンプルを標準的な検定により検定し、 モしてＵＣＤ変更検定を表１中に示した。

これらの結果は、標準的な検定とＵ、　Ｃ，Ｄ、変更検定との間に良好な一致が 在ることを示している。しかしながら、Ｕ、　Ｃ，Ｏ，変更検定は、より簡単に 行え、そしてより感受性であり（実施例２を参照のこと）、そしてそれ故、すべ てのさらなる評価について保持される。

実施例２ 人工的ダストとして記載されることができるダスト−ダニ”消費培地″（すなわ ち、ウシ肝臓粉末上の生きたダスト−ダニを培養するために使用された培地の残 渣）の希釈物を作り、表２中に列記したタンパク質濃度を得た。”消費培地”の ほんの小さな割合がＤｅｒｐ１タンパク質である。これらの希釈物を標準的な検 定及びＵ、　Ｃ，Ｄ、変更検定の両方においてテストし、表２中に示す結果を得 た。Ｕ、　Ｃ，Ｄ。

変更検定が標準検定よりもより感度があることが分かる。精製Ｄｅｒｐｉ　ＷＨ ＯＩ準を２つの検定においてテストしたとき、Ｕ、　Ｃ，Ｄ、検定は、＜　３ｎ ｇのアレルゲンを検出ことができたが、一方、標準検定は、１２”消費培地”に ついての検定の読み １　ｍｇ／ａｌ　１．９３６　２．３１５０、５＋ｎｇ／ｎｌ　１．９３７　２ ．２５８５０μｇ１０１　１．７９５　２．２５３５μｇ／ｎｌ　１．１２１　 １．５７４陰性対照　０．１９１　０．０９６ 陰性対照　０．１７８　０．０７８ ０、Ｄ、は、すべての場合において２連ウエルの平均である。

陽性カット−オフ＝２ｘ　陰性対照 点線の上のサンプルは、陽性である。

Ｕ、　Ｃ，Ｄ、変更検定が標準検定よりも”消費培地”中のアレルゲンの検出に ついて実質的により感度があることが分かる。

実施例３ ダスト−ダニ・アレルゲンの抽出物中の、キチナーゼＰＢＳＴ対ＰＢＳＴ実験を 、キチナーゼを含むバッファーと慣用のＰＢＳＴ抽出バッファーとを比較するた めに行った。使用した検定法は、実施例１のυ、ｃ。

Ｄ、変更検定であった。使用した抽出時間は、標準ＰＢＳＴ抽出液ＥＢｌ及びキ チナーゼ抽出液ＥＢ２のそれぞれについて１時間であった。結果を表３中に示す 。

高いレベルの抗原をもつサンプルは、それらが両方の装置におい、てオフ−スケ ールなるときは含まれていない。

ＰＢＳＴのみを含む抽出液ＦＢＩに比較してキチナーゼ抽出バッファーＥＢ２に よる０、ｐ、において有意な改善が在ることが観察されよう。

実施例４ 家庭用真空掃除機パイプ内に抱えられたディツプスティックによるハウス・ダス ト−ダニ・アレルゲンの検出方法１、　ポリスチレン・ディツプスティックを、 ４℃において１８−２０時間７５０μｌの１／１０００モノクロナール抗−Ｄｅ ｒ　ｐｉ抗体（ＭＡＲ）によりコートした。次に、ディツプスティックを生のグ リセロール中でコードンた。

２、　テストのために、ディツプスティックを、ＷＡＸ（ＶＡＸは商標である） 真空掃除機のパイプの上端において空気制御ベント内に挿入し、そしてこの実験 の目的のために５ＲＬＬＯＴＡＰＲ（ＳＥＬＬＯＴＡＰＲは商標である）により その場に固定した。テストされる領域を次に先にように真空掃除した。

３、　ダスト・サンプル並びに標準方法により測定された既知量の抗原を含む陰 性及び陽性対照を、トレー内又はきれいなカーペットの柱上に置き、そしてサン プル毎に約１分間真空掃除した。新たなディツプスティックをそれぞれのサンプ ルのために使用した。

４、　ディップ・スティックを次に７５０μｌの抽出バッファーＥＢＩを含むチ ューブ内に入れ、そして１時間のインキュベーション時間にわたりときどき混合 した。次にディツプスティックを洗浄ボトルから１分間洗浄し、そして約２０℃ において１時間７５０μｌの結合体中に入れた。このディツプスティックを再び １分間洗浄し、そして次に７５０μｌの基質／クロモゲン中に１０分間、その後 ７５０μｌの４Ｎ硫酸中に入れ、その反応を終了させた。２００μ！の基質を、 次に４５゜ｎｌ１１におけるＳＬＴ分光光度計内での読みのためにマイクロタイ ター・ウヱルに移した。

対照及びテスト・ダスト・サンプルのための０．Ｄ、の読みを、表４中に与える 。

０標準検定に従う。

１、　４０Ｂｔｒｒナイロン・メツシュｃＧｓＶ　Ｓｒｌ　ＴＹｐｅ　Ｆｌ／６ ４−４）をもつチューブ状フィルターを、十分なサイズのビーカー内に開口端を 上にして置き、そして１／１０００コ一テイングＭＡＲを添加し、図３中の領域 Ｘをコートするのに十分な深さを与えた。コーティングを、４℃において１８− ２０時間行い、その後、５％分析グレードのシュクロース（ＢＤＨ）を含むＰＨ ３中の２ｍｌの１％ＢＳＡにより３７℃において１時間クエンチングし、非結合 部位をブロックし、そして抗体を非加湿インキュベーター内で３７℃において３ 時間行う乾燥に対してその抗体を安定化した。

２、　フィルターがそれに対してそれらが本発明に従って置かれるところの目的 のためにフィルターが設計されていないので、真空掃除機パイプ内へフィルター を載せることは、３５１μｍｍフィルム・カセットを含むために一般的に使用さ れる使い捨てプラスチック容器の手段により；　ドリル及びヤスリによりこのプ ラスチック容器の底に孔を開けた。この”ホルダー（ｈｏｌｄｅｒ）″を、その 掃除機を通して吸引された空気のすべてが図４及び５中に示した装置のホルダー に類似するフィルターを通過することを確保するようなやり方で、使用した。

３、　高い、中程度の、低い又はアレルゲンの全くないレベルを含む選ばれた部 位、を、次に、領域当たり約３０秒間にわたりそれぞれｌと１／４メーター平方 の領域上を真空掃除した。

４、　それぞれの装置を取り出し、そして５ｍｌの抽出バッファー、Ｅｅｌを含 む１５ｍ１の”ユニバーサル”プラスチック試料チューブ内に入れた。次に装置 を、約３０秒間攪拌し、そして次に１０分間放置し、抽出したアレルゲンを、次 にナイロン・ガーゼ上の固相抗体により結合させた。

５、　装置を次に取り出し、そして目に見えるすべてのダストが洗い流されるま で（約１分間）、冷たい流れる水道水の下、開口端を下にして洗浄した。

６、　次に装置を１ｍｌ結合体を含むチューブ内に置き、そして室温（約２０℃ ）において１０分間インキュベートした。

７、　次に装置を流れる水道水下で１分間洗浄し、そしてｌＯ分間１ｍｌの基質 中に置き、その後、２００μｌのサンプルを２００μｌの４Ｎ硫酸と混合し、そ して４５０ｎｍにおけるＳＬＴ分光光度計内で読んだ。

家での使用のために、酸又は分光光度計の読みのいずれをも必要とされないであ ろうし、そしてその結果は、基質のチューブ内で得られた色とストリップ上に印 刷され、そしてそのチューブの下方の周囲に固定されたた色スケールとを比較す ることにより読まれるであろう。

結果を表５中に与える。

高い感度に注意すべきである。

１、　ディツプスティックを先に実施例４中と同じＭＡＲによりコートした。

２、　ダストを、実施例５、ステップ２及び３中に記載したようにフィルター中 に採取したが、フィルターを非コートで使用した。

３、　次にフィルターを、”ユニバーサル”試料容器内に入れ、そして５＋ｎｌ のＥＢＩを添加した。

４、　次にコートされたディツプスティックをフィルター内に挿入し、そしてダ ストをＥＢＩ混合し且つ捕獲された空気を取り除くために、ゆっくりと回転させ た。次にディツプスティックを、その混合物中に放置し、１５分間抽出された抗 原を”捕獲（ｃａｐｔｕｒｅ）″させた。

５、　次にディツプスティックを１分間水道水の流れにより濯いだ。

６、　次にディツプスティックを７５０μｍの結合体中に入れ、そして室温にお いて１時間インキュベートした。

７、　次にディツプスティックを水道水の流れにより濯ぎ、そして１０分間７５ ０μｍのＴＭＢ基質中に入れた。次に２００μｌの基質を２００μｌの４Ｎ硫酸 により標準的なマイクロターター・ウェルに移し、そしてその吸光度をＳＬＴマ イクロタイター分光光度計内で４５０ｎｍにおいて測定した。家庭の使用のため に、硫酸は、必要とされないであろうし、そしてその結果は、基質の色を提供さ れたチャートと比較することにより読まれるであろう。

結果を表６中に示す。

零本零本 実施例７ ハウス・ダスト−ダニ・アレルゲンの受動的検出方法１、　ポリスチレン・ウェ ル（１２−ウェルＴ１５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃ１ｕｓｔｅｒｓ。

Ｃｏａｓｔａｒ、　ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　Ｍａｓｓ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）を、４ ℃において１８−２０時間５００μＩのＭＡＲによりコートした。所定のテスト のために、３つのウェルをそれぞれ、高い、中程度の及び低いレベルにおいてＤ ｅｒ　ｐｉ抗原の抽出物によりコートし、そしてテープでシールした。単一のテ スト・ウェルを、床の上に開放し、そして少量のアレルゲン含有ダストをそのプ レート上約２メーターの空気中で散布した。さらなるテスト・プレートを、陽性 サンプルが扱われ、その対照ウェルがシールされている場合、実験室中で７２時 間の間、ベンチ上で露出させた。

２、　ウェル上のシーリング・テープを剥離し、モしてＥＩＡ検出テストを実施 例１中に記載したように行った。但し、添加された試薬容量を、５００μＩまで 増加させ、そして洗浄をプラスチック洗浄ボトルからのバッファーのジェットに より行った。

実施例８ 水中での微生物の検出のためのチューブ状ガーゼ・フィルターの使用 チューブ状ガーゼ・フィルター（ＧＶＳ　Ｆｌ／６４−４）を、４℃において一 夜、ＣＣＢ中のｌ／１００の希釈において（ホランティア・ドナーから得られた ）Ａ型肝炎ウィルス（ＨＡＹ）に対する高い力価のヒト抗体により底において１ ｃｍコートした。漏斗からの出口がチューブ状装置の上（開口）端の内側にある ように、これもまたスタンド内でクランプされたチューブ状フィルターをもつス タンド内に組み込み蛇口付きの漏斗を配置することにより、その漏斗からの流体 がその装置を通してかなりゆっくりと滴下する（１時間内で約１リツター）こと を可能にした。１００μｌの不活性化Ａ型肝炎抗原（Ｃａ＋ｎｂｒｉｄｇｅ　Ｂ ｉｏｔｅｃｈＬｔｄ、　Ｇａｌｗａｙ、Ｉｒｅｌａｎｄからの贈りもの）を入れ たｌリッターの水を、その装置に通過させた。次にこの装置をＨＲＰＯ（上記） に結合した異なるヒト抗−）ＩＡＶを含むチューブ内に入れ、そして室温におい て１時間インキュベートした。次にこの装置を、ＰＢＳＴの数チャージ中で３０ 秒間濯ぎ、そして次にチューブ内のＴＭＢ基質中に入れた。１５分後、５０μｍ をマイクロウェル・ストリップに取り出し、そして５０μＩの４Ｎ　Ｈｔ　ＳＯ ４を添加した。その色を４５０ｎｍにおいて読んだ。

実施例９ 本発明に従った装置によるダストの保持の信頼性チューブ上ガーゼ装置を計量し た。３つの家内で得られた０、５ｇの３００ミクロン・メツシュの篩ったダスト ・サンプルを、ビニル床材料の約１／１０ｍ　”の掃除領域上に散布し、そして カーペットを掃除するために使用したものと類似のやり方で、３０秒間にわたり 真空掃除した。この装置に保持ダストを加えたものを次に計量した。これを２日 間にわたり行われた２つの実験のそれぞれにおいて全部でｌＯサンプルについて 繰り返した。また、元の（篩った）ダスト及び保持されたダスト中に存在するア レルゲンの量を、ＵＣＤ検定を使用して測定した。この目的は、どれだけの割合 のダストが３０秒間の正常サンプリング時間内で本発明に従った装置により確か に保持されているかを測定することである。

結果を表８中に示す。

本発明に従った装置によるダスト及びアレルゲンの保持第１実験： １　０．４１２　８２％　４．０　６．４２　０．４７１　９４％　２８．８　 ２８．８３　０．４６７　９３％　３．２　１．６４　０．４６６　９３％　２ ．４　４．０５　０．４５５　９１％　３６．０　２７．２６　０．４６３　９ ２％　１４．０　１４．４７　０．４３０　８６％　Ｂ、０　２３．２８　０． ４３０　８８％　１０．０　４．８９　０．４７５　９５％　２３．２　２４． ０１０　０．４５６　９１％　５．６　６．４平均：　１３．５２　１４．０２ 第２実験； １　０．４９６　９９．２％　１６．０　１？、　６２　０．４８９　９７．８ ％　１８．０　１６．０３　０．４６１　９２．２％　ｉｏ、ｏ　１２．８４　 ０．４１０　８２．０％　１．６　１．６５　０．４０９　８１．８％　１．６ 　１．６６　０．４４８　８９．６％　２５．０　２２．４７　０．４６０　９ ２．０％　４．０　４．０８　０．４８３　９６．６％　１５．０　１６．０９ 　０．４６２　９２．４％　２５．０　２２．４１０　０．４１５　８３．０％ 　５．６　６．４両方の実験についてのダストの平均保持は、９０．４８％であ り、そして保持されたダスト中の平均アレルゲン濃度は、元のダスト・サンプル のものと事実上同一である。低いパーセンテージの保持においてさえ、アレルゲ ン濃度が同様に残っていることが注目されよう。

実施例ｌ０ １８インチＸ１２インチの領域を家の中のリビング・ルームのカーペット上にマ スキング・テープによりマークした。この領域を、先に述べた時間にわたり正常 の真空掃除のやり方で連続した装置により逐次サンプル採取した。回収したダス ト・サンプルをそれぞれ計量し、そしてアレルゲン含量をＵ、　Ｃ，Ｄ、変更検 定により測定した。

２　１５秒　０．３１１　８．０　２．４９３　１５秒　０．２９７　９．６　 ２．８５第１分間　１．２５７　７．９　９．４４の合計 ５　３０秒　０．５９２　４．８　２．８４第２分間　０．８６３　６．０　４ ．７９の合計 ７　１分　０．３２１　４．８　１．５４８　１分　０．１９２　６．８　１． ３１９　１分　０．２１６　８．８　１．４７１０　１分　０．１９９　６．４ 　１．２７１１　１分　０．１３２　８．４　０．８４上記データは、多数のサ ンプリング・エピソードにわったてさえ、カーペツトからダスト及びアレルゲン のすべてを取り除くことが非常に困難であることを示している。それぞれのサン プルから回収されたアレルゲンの濃度は、本発明に係る装置を使用して、９分間 の実験時間にわたる同一のサンプリング時間のそれぞれの間、事実上同一である 。しかしながら、１分間当たりに回収されたアレルゲンの全量は、１分目から２ 分目まで５０％程、そして９分目のサンプリング時間にわたり１０倍程、減少し ている。それ故、本装置は、抗原の濃度（すなわち、μｇ／ｇダスト）を示すこ とにおいて著しく有効である。しかしながら、それは、所定の領域内に存在する アレルゲンの真のレベルを測定するための本装置に係る装置の能力を、明らかに 示している。これは、本発明に係る装置によってのみ行われることができるこの 効果の最初に報告された証明である。

実施例１１ 本発明に係るバッグ及び装置の両方を使用しての同一の部屋の異なる領域内に存 在するアレルゲンの量における大きな変動を示すデータ 実施例１０中でバッグ内に回収したダスト・サンプルの重量を、その後直ちに本 発明に係る装置を使用して同一領域から採取したものと比較した。表１０中の第 ２列中に示すダストの重量における変動係数（ＣＶ）及び表１１（装置）中の１ 平方メーターの領域当たりに使用した４つの装置のそれぞれのにおいて回収され た重量の合計を、計算した。バッグについてのＣＶは８７％であり、そして装置 についてはそれは４３％であった。装置のいずれも、能カ一杯まで充填されてい なかった。本発明に係る装置が全回収ダストの９０％を超えて確実に保持するこ とが本明細書中で証明されたので、そして本装置のいずれも能カ一杯まで充填さ れていなかったので、バッグ及び装置の両方について得られた高いＣＶ値は個々 の領域内で検出されたダスト（及びアレルゲン）レベル内の真の変動を原因とす るということになる。

バッグの場合において得られた非常に高いＣｖは、本発明に係る装置と比較して サンプルを採取ためのバッグの非信頼性の証拠である。

本例は、また、多部位サンプリングの必要性について証明している。

実施例１２ 濃度（μｇ／ｇダスト）として又は単位面積当たり（μｇ／ｓ　”　）として表 された本発明に係るバッグ及び装置により採取されたアレルゲンのレベルの比較 典型的なリビング・ルームをマスキング・テープにより印を付けた１３　Ｋ　１ 平方メーター領域に分割した。それぞれの領域を、それぞれの領域内のサンプル を回収するために別々の標準的な真空掃除機の紙バッグを使用して平方メーター 当たりの２分間の全時間にわたりその領域を２回上下に掃除機のヘッドを通過さ せることにより標準的なやり方で、別々に真空掃除した。その後直ちに、それぞ れの平方メーターを、全体として５２の１／４メーター平方にさらに４つに分割 し、そしてこれらの中のそれぞれを、本発明に係る装置により３０秒間サンプル 採取した。すべてのサンプルを計量した。バッグからのすべてのサンプルを、加 工し、そして標準的な（篩い分け）方法によりテストした。装置サンプルを、Ｕ 、　Ｃ，Ｄ、変更検定において、実施例２中に記載したように、テストした。ア レルゲンのレベルを濃度（μｇ／ｇダスト）として及び単位面積当たりの量（μ ｇ１０　”　）として表し、そしてＲ値を計算した。結果を、表１Ｏ及び１１中 に示す。

表１０ １　１、０７１　Ｂ、　８　９．４１ ２　１、９８　１２．０　２３．７６ ３　０．２７３　１１．６　３．１３ ４　１、０３４　１２．０　１２．４０５　０．８９０　１３．２　１１．７４ ６　０．７００　１１．６　８．１２ Ｔ　３．６３０　１０．０　３Ｂ、　３０８　０．０７０　１．６　０．１１２ ９　０．８４９　１０．８　９．１６９１０　１、６４４　１６．８　２７．６ １９１１　０．１０１　９．６　０．９６９１２　０、２１０　１２．８　２． ６８０μｇ／ｇとμｇ／ｍ　！とじて表される結果の間の相関係数Ｒ・０．４５ ゜ｐ・０．１５８、有意でない（すなわち、相関なし）。

表１１ ４　０．４８６　６．４　３．１１０ ８　０．５３６　７．６　４．０？ １２　０．５５３　５．２　２．８７ １６　０．４２４　１３．２　５．５９０２０　０．５９３　１２．０　？、１ １６５　２１　０．５７１　７．６　３，８８３２２　０．３３３　９．２　３ ．０６２２３　０．５７６　８．８　５．０６８２４　０．３４６　１０．４　 ３．５９８２７　０．９４５　４．０　３．７８ ２８　０．６８６　３．２　２．１９５表ｔｔＣ続き） μｇ／ｇとμｇ／ｍ　’として表される結果の間の相関係数Ｒ＝　０．７４５； ｐ・＜０．０００１、かなり有意である（すなわち、非常に良好な相関あり）。

このＲは、本発明に係る装置がμｇ／ｇとして又はμｇ／＋＋＋　’として表さ れるアレルゲン・レベル間の非常に有意な相関（ｐ・＜０．０００１）を示すこ とをはっきりと証明している。これは、予想された結果である。しかしながら、 バッグは。アレルゲン・レベルの２つの表現方法の間に有意な相関（ｐ＝０．１ ５８）を示さない。我々は、これは回収されたサンプル重重における大きな標準 偏差を与える（詳細に叙述したような）紙バッグの乏しい回収効率を原因とする と信じている。

実施例１３ ８つの異なる家の中からの９つの部屋内の２平方メーター領域からサンプルを回 収するために使用された本発明に係るバッグ及び装置の比較 それぞれの部屋のほぼ中央にある２平方メーター領域を４つのｌ／２平方メータ ー領域に分割した。サンプルを、２つの別々のバッグのために２つの対角に対す るｌ／２平方メーターのそれぞれについてサンプル採取し、そして残りの２つの 対角に対する領域について本発明に係る２つの別々の装置を使用した。ダスト・ サンプルを先のように計量し、そしてバッグの場合に（標準的な方法に従って） 篩い分けし、そして先にようにアレルゲンについてテストした。アレルゲンのレ ベルをμｇ／ｇ及びμｇ／ｍ　ｌとして表し、そしてＲ値を計算した。

結果を、表１２中に示す。

表１２ このデータは、本発明に係る装置が、μｇ／ｇとして表されたアレルゲンがμｇ ／ｍ　ｔとして表されたアレルゲンと相関をもっという予想された結果を与える ということを示しているが、バッグは、本実験においては僅かな相関しか与えて いない。

実施例ｌ０５１１．１２及び１３の結果を一緒に考慮すると、それらは、バッグ がダスト・サンプルを回収ために確実なものではなく、そして本発明に係る装置 がかなり良好に信頼できるものであり、そして所定の領域内の真のアレルゲン・ レベルを測定することができるという圧倒的な証拠を提供する。さらに、本発明 に係る装置は、以下に概説する多くの利点及び利便性をもつ。

慣用の装置に比較しての本発明に係る抗原採取装置の用途及び利点は、実施例９ −１３から明らかであろう。

本発明に係る採取装置に比較して紙の真空掃除機バッグの乏しい採取性能は、実 施例１１−１３からかなり明確なものであろう。

実施例中に記載したように本発明に関連して行った実験は、真空掃除機バッグを 使用したダスト−サンプリングが特に小さな領域に適用されるとき重大な誤差を 供せられるということを証明した。

ａ）少量のダスト及びアレルゲンは、紙バッグから回収することが困難である。

なぜなら、その粒子が部分的にその紙の中に埋め込まれるようになるからである 。

ｂ）ダスト及びふわふわしたものが、真空掃除機ホースの柔軟性のプラスチック 肋材（ｒｉｂｂｉｎｇｓ）並びに金属及びプラスチック成分内に留まり、そして 容易に移動することができ、それ故、以降のダスト−サンプルを汚染する。

Ｃ）部屋の隣接する小さな領域（例えば、１／４平方メーター又は１７２平方メ ーター）内のダスト及びアレルゲンのレベルにおける非常に大きなバラツキが在 る。本発明に係る装置は、最初に、このような統計的に有効なバラツキの存在を 証明した。

ｄ）アレルゲンの濃度は、しばしば使用される部屋の領域内、例えば、中心、規 則的に使用される椅子の前及びベッドの脇で最大となる傾向にある。さらに、そ れは、ダスト及びアレルゲンがより撹乱され、そして吸入されるようになる領域 である。

ｅ）本発明に係る採取装置の全ダスト及びアレルゲン採取効率が９２．５％の平 均を超える（すなわち、＜７．５％の変動係数）ことが本明細書中で証明され； それ故、小さな隣接領域内で採取されたダストにおける大きなバラツギは、装置 採取のバラツキ又は損失を原因としない。

ｆ）本発明に係る採取装置の場合においては、ある者がダスト中のアレルゲンの 濃度（μｇ／ｇ）と（所定サンプリング時間の間）単位面積当たりに存在するア レルゲンの量とを比較するとき、その相関係数が０．７４５（ｐ＝０．０００１ 、高く有意）に等しいということを証明した。

しかしながら、標準的な紙バッグ方法が２つのユニットの測定を比較するために 使用する場合には、そのｒ値はたった０、　４５（ｐ＝０．１５８、有意でない ）である。

それ故、部屋内のアレルゲン暴露（これは明らかに患者に対して最も関わりのあ るパラメーターである。）の能力を性格に測定するために、ある者は、以下のこ とをなすべきであるということを、実施例中に記載した実験から結論することが できる：１）部屋内の】以上の部位においてサンプル採取する；２）有意なアレ ルゲン・レベルを最も含むであろう場所の内でサンプル採取する；そして ３）単位面積当たりの全アレルゲン、例えば、μｇ／ｍ　’として１つの結果を 表す。他の材料の全量は殆ど意味がない。

本発明に係るサンプル採取装置が今日まで使用されてきたサンプリング装置より もかなりよく効果的であり且つ正確であり、そして以下の利点をもっていること は明らかであろう：ａ）それが、小さく、便利で、そして容易に壊れない。

ｂ）それが、取り扱いが簡単且つきれいであり、サンプル材料又はダストとの世 帯主による直接的接触を最小化する。これは、最も悪いアレルギー患者において 最も喜ばしくなく、そして危険である。

Ｃ）真空掃除機成分内に先に留まった材料によるサンプルの交差汚染の危険が最 小である。なぜなら、本装置は、正常にはそのホースの上流に配置されることが できるからである。

ｄ）小さなサンプルによっても、そのサンプルの００％以上が、採取装置内に確 実に且つ再現可能な状態で回収可能である。これは、真空掃除機バッグの場合で はない。

ｅ）ユーザーは、アレルゲン・テストを行うために、真空掃除機を分解し又はバ ッグを変更する必要がなく、又は新たなバッグを使用する費用も必要ない。

ｒ）本装置は、素早く及び簡単に使用することができる。

ｇ）本装置により回収されたサンプルは、テストに先立っていずれの方法におい ても加工され、篩い分けられ又は取り扱われる必要がなく、そのため、本装置は 、テスト工程の一部となる。

ｈ）本装置は、検定試薬、例えば、抗体により直接的にコートされることができ 、それ故、検定において１以上の段階を省く。

ｉ）本装置は、（最初に）、存在するダストの量に依存しないで所定領域内の全 アレルゲン含量を正確に測定することを、可能する。

ＦＩｇ　Ｉ ＦＩｇ、９ １ｇ３ Ｆｉｇ、４ Ｆｉｇ５ Ｆｉｇ６ 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成６年２月２日

Claims (41)

【特許請求の範囲】
1. １．所定の環境中で移動性流体中に分散した抗原の採取のための装置であって、 その装置に衝突し又はそれを通過する抗原を担持する流体によりその抗原がそれ に接するときにその抗原を保持するための手段を含んで成り、その抗原保持手段 がその抗原の存在を確認し又は定量するためのテスト装置内で直接使用されるこ とができるような装置。
2. ２．抗原保持手段が、その抗原がそれに接するときにその抗原を捕獲し、そして その抗原を結合することができる表面を含んで成り、さらに、その抗原の存在を 確認し又は定量するための免疫検定において直接使用されることができるような 、請求項１に記載の装置。
3. ３．抗原を捕獲し且つ保持するための手段がその抗原に対する抗体により被覆さ れた表面である、請求項２に記載の装置。
4. ４．表面が抗原を捕まえることを容易にする媒質により漬けられる、請求項２又 は３に記載の装置。
5. ５．媒質が空気により運ばれる粒子を捕まえるために、且つその場でその表面の 乾燥を防ぐために有効な粘度を有している、請求項４に記載の装置。
6. ６．空気の乱流により、重力により又は現存の空気の流れによりそれに接するよ うにされた抗原を捕獲し且つ保持するように改良された、請求項３又は４に記載 の装置。
7. ７．コートされた表面が免疫検定のための固相を提示する、請求項３に従ったと き請求項２〜６のいずれか１項に記載の装置。
8. ８．抗原を捕獲し且つ保持するための手段が、それを通して吸引され又はそれに 衝突する流体の流れからその抗原が取り出されるような流体吸引手段に接続可能 な装置の内に収納され又は組み込まれているような、請求項２に記載の装置。
9. ９．抗原を捕獲し且つ保持するための手段が、流体細孔性であり且つその抗原を 結合するために改良されている表面である、請求項８に記載の装置。
10. １０．流体吸引手段が家庭用の真空掃除機の空気吸引手段である、請求項８又は ９に記載の装置。
11. １１．流体細孔性表面が家庭用の真空掃除機の空気吸引手段とその掃き（Ｓｗｅ ｅｐｉｎｇ）付属品との間に在る挿入のためのチューブ内に適合されている、請 求項９に従ったとき請求項１０に記載の装置。
12. １２．抗原結合表面が直接的又は間接的に抗原を結合することができる、請求項 ８〜１１のいずれか１項に記載の装置。
13. １３．流体細孔性表面が細孔性プラスチック材料から成る、請求項９〜１２のい ずれか１項に記載の装置。
14. １４．細孔性プラスチック材料が細孔性の焼結スチレンである、請求項１３に記 載の装置。
15. １５．流体細孔性表面が細孔性のタンパク質結合プラスチック材料から成る、請 求項９〜１３のいずれか１項に記載の装置。
16. １６．流体細孔性表面が形状化要素から成る、請求項９〜１５のいずれか１項に 記載の装置。
17. １７．形状化要素がナイロン・ガーゼの少なくとも一部から成る、請求項１６に 記載の装置。
18. １８．細孔性材料が５−３００μｍのレンジ内の平均直径をもつ細孔をもつ、請 求項９〜１７のいずれか１項に記載の装置。
19. １９．抗原の間接的結合がその表面に結合した抗体により達成される、請求項１ ２に従ったとき請求項８〜１８のいずれか１項に記載の装置。
20. ２０．抗体がその抗体によりコートされた粒子によりその表面に結合されている 、請求項１９に記載の装置。
21. ２１．抗原の結合がエントラップメント（ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）又は静電結合 により達成される、請求項８〜１８のいずれか１項に記載の装置。
22. ２２．装置がその表面の上流の流体の流れの中の死骸のエントラップメンントの ための流体細孔性ディスクを含む、請求項８〜２１のいずれか１項に記載の装置 。
23. ２３．抗原結合表面がその抗原の検出のために取り出すことができる、請求項８ 〜２２のいずれか１項に記載の装置。
24. ２４．抗原の検出が、その流体吸引手段からのその装置の脱着の後にその場でそ の抗原結合表面により行われる、請求項８〜２２のいずれか１項に記載の装置。
25. ２５．装置が抗原検出手段を受け入れるように改良されている、請求項２４に記 載の装置。
26. ２６．それを通過し又はそれに衝突する流体の流れの中のダストの大部分を採取 するための手段を含む、請求項１６又は１７に従ったとき先の請求項のいずれか に記載の装置。
27. ２７．抗原が酵素免疫検定により検出される、先の請求項のいずれかに記載の装 置。
28. ２８．使用される検定がサンドイッチ検定である、請求項２７に記載の装置。
29. ２９．抗原結合表面が免疫検定の固相を提示する、請求項１９に従ったとき請求 項２７又は２８に記載の装置。
30. ３０．装置がその装置を通して流体を動かすための手段を含む、請求項１〜７の いずれか１項又は請求項９に従ったとき請求項１〜７のいずれか１項又は請求項 ９あるいは請求項１１〜２９のいずれか１項に記載の装置。
31. ３１．その装置を通して流体を動かすための手段がファン又はポンプである、請 求項３０に記載の装置。
32. ３２．抗原の検出が半定量的である、先の請求項のいずれかに記載の装置。
33. ３３．抗原の検出が抗原結合表面又はその一部の色における変化を含む、請求項 ８〜３２のいずれか１項に記載の装置。
34. ３４．環境が家庭の環境である、先の請求項のいずれかに記載の装置。
35. ３５．抗原が微生物又は菌である、先の請求項のいずれかに記載の装置。
36. ３６．抗原がアレルゲンである、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の装置。
37. ３７．アレルゲンがダスーダニ・アレルゲン、ネコの毛アレルゲン、イヌの毛ア レルゲン、昆虫アレルゲン、花粉及び菌の胞子から選ばれている、請求項３６に 記載の装置。
38. ３８．請求項１〜３７のいずれか１項に記載の装置内での使用のための抗原を採 取し又は捕獲し且つ保持するための手段。
39. ３９．１以上の成分として先の請求項のいずれかに記載の装置を含んで成るキッ ト。
40. ４０．抗原の検出のための手段を含んで成る、請求項３９に記載のキット。
41. ４１．ダストーダニ・アレルゲンを検出するための請求項３７に記載の装置と共 に使用するための抽出培地であって、ダストーダニ・アレルゲンを抽出する量の キチナーゼ（ｃｈｉｔｉｎａｓｅ）を含むバッファーを含んで成る培地。