JPH07505776A - ガストデューシン物質および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「ガストデューシン物質および方法」 本願出願は、１９９２年４月９日に出願された、米国特許出願第０７／８６８． ３５３号の一部継続出願である。 発明の分野 本発明は、一般に、味覚形質導入に関連する物質及び方法に関する。　具体的に は、本発明は、株細胞に特異的なグアニンヌクレオチドか結合した新規のタンパ ク質、ガストデューシンならびに、ガストデューシンのαサブユニットをコード するポリヌクレオチド配列に関する。　本発明はまた、ガス上デユーシンα−サ ブユニットを、阻害あるいは活性化をする物質を含んだ味覚を修正する方法、及 びこのような味覚修正剤及び味覚修正剤を同定するための方法に関する。 宣−１ を推動物の味覚形質導入は、味覚受容体と呼ばれる特定の神経感覚上皮細胞によ り媒介され、味蕾を形成する４０から１００の細胞のグループに分別されている 。　味蕾は卵形をしており、そのはとんとか舌の上皮に包埋されている。　味覚 形質導入は、味覚受容体の微絨毛か外界と接触する、味覚気門の味蕾の先端部分 において伝達される。　様々な味覚刺激物（味覚刺激因子）は、味覚細胞の減極 化（例えば、細胞膜電位の減少）もしくは過分種化（例えば、細胞膜電位の増加 ）を引き起こし請求心性神経繊維をもつ化学性シナプスでの細胞からの神経伝達 物質の放出を調整する。　化学的な刺激を感受する一次味覚感知繊維がそれぞれ の味蕾に入り込む。　同じ味蕾における味覚細胞間での後者の関係は請求心性神 経細胞に伝達された信号の調整もまた可能にする。 味覚刺激を大別すると４つの特徴的な属性を持つ味覚に類別できる。　すなわち 、塩味、酸味、甘味、および苦味である。 異なる機構による異なる味覚様相がみられる。　例えば、塩味は、先端のナトリ ウムチャネルを通って、ナトリウムイオン溶解によって媒介され［Ｈｅｃｋ等、 　５ｃｉｅｎｃｅ、　２２３．４０３−４０５　（１９８４）および３ｃ１１ｉ ｆｆｍａｎ等、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　 ８０．６１３６−６１４０　（１９８３）コ、また、酸味は、カリウムもしくは ナトリウムチャネルの水素イオンによるブロックにより媒介されるものと思われ ている［Ｋｉｎｎａｍｏｎ等、　Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、、　９１． ３５１−３７１（１９８８）およびＫｉｎｎａｍｏｎ等、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８５゜７０２３−７０２７　（１９８ ８）コ　。 本発明の背景としては、甘味及び苦味の味覚形質導入に特に関与しており、塩味 及び酸味の味覚形質導入におけるイオンチャネルの調整に関与しつるグアニンヌ クレオチド結合タンパク質（Ｇタンパク質）が特に挙げられる。　例として、最 近のＧタンパク質に関する論文を挙げるならば、Ｂｉｒｎｂａｕｍｅｒ、　Ａｎ ｎ。 ティンは、嗅覚、視覚、ホルモン及び神経伝達物質システムにおいて、信号形質 導入の媒介となる異種斜方晶系タンパク質（それぞれ、α、β、γサブユニット を有する）である。　Ｇプロティンは、細胞表面受容体と細胞質奏効体酵素（例 えば、ホスホジエステラーゼとアデニル酸シクラーゼ）を結合し、それにより、 細胞外信号を細胞内第二メツセンジャー（例えば、ｃＡＭＰ、　ＣＧＭＰ、　１ Ｐ３）に形質導入する。　βおよびγサブユニットは異なるＧプロティン間に分 配されることが明らかになっているが、Ｇプロティンのαサブユニットは、信号 の形質導入プロセスにおいて、その受容体と奏効体との間の相互作用における特 異性の大半を授与する。　遍在して発現するＧプロティン（例えば、Ｇ、Ｇｉ） もあれば、一方、感覚形質導入に関与するものとして知られる、感覚細胞のみに 限定して発現するＧプロティンもある。　例えば、トランスデユーシン（Ｇ、） は、レチナール桿状体および円錐細胞の光刺激を形質導入しンもまた、感覚形質 導入に関与している。 味覚特異性Ｇプロティンの存在を直接立証する証拠かないため、Ｇプロティンが 、味覚形質導入経由に関与していることを（１９８９）なとに記載されている。 ミクロ注入が、を椎動物味覚細胞におけるカリウムチャネルを不活性化し、これ らの細胞の減極化を招くことが報告している。 高い基準のアデニル酸シクラーゼおよびｃＡＭＰホスホジェステラーゼか記載さ れている。 ５ｔｒｉｅｎ等、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　２６０．１２１−１２６　（１ ９８９）によれば、甘味化合物か、ラット舌膜組織中のｃＡＭＰのＧＴＰ−依存 生成を誘発する。　これらの結果は、甘味受容体の相互作用がｃＡＭＰ中のＧプ ロティンの媒介された出現によって、味覚細胞減極にいたる味覚刺激物形質導入 経路を示している。　Ａｃａｂａｓ等の５ｃｉｅｎｃｅ。 ２４２、１０４７−１０５０　（１９８８）では、ヂナトニウム（ｄｅｎａｔｏ ｎｉｕｍ）なとの苦味化合物か内部貯蔵からのＣａ”＋の放出を導くことが報告 されている。　放出はイノシトール三燐酸塩エステル（ｌＰ３）のＧプロティン 媒介生成に由来する。　このように、苦味はＧプロティン経由でも形質導入され る。 １０年以上におよぶ様々な努力により、天然の味覚刺激を模倣もしくは阻害する 味覚受容体と相互作用をする様々な物質が開トン、フロリダ州（１９８９）参照 。　甘味の味覚模倣のために開発された物質の例としては、サッカリン（０−ス ルフィミド安息香酸の無水物）、モネリン（タンパク質）、タウマチン（タンパ ク質）かある。　タウマチンは、食品、タバコのフィルター、薬、練り歯磨き剤 の添加物として用いられている［Ｔｈｅ　Ｑｕａｌｉｔｙｏｆ　Ｆｏｏｄｓ　ａ ｎｄ　Ｂｅｖｅｒａｇｅｓ、アカデミツクプレス（１９８１）のＨｉｇｇｉｎｂ ｏＬｈａｍ等、　ｐｐ、９１−１１１］。　しかしながら、今日開発されている 多くの味覚模倣、味覚阻害物質は、経済的でないか、あるいは、カロリーか高い か、または、発ガン性があるなどの理由で食品添加物としては適切ではない。　 四人基本味覚を模倣、阻害する新しい物質の開発は、味覚修正の形質導入に関与 する味覚細胞タンパク質の研究不足から足止めの状態にある。　従って、当該技 術分野における、味覚形質導入に関与、もしくは影響する物質及び方法が待望さ れているのである。 発明の要旨 本願発明は、味覚の形質導入に影響を与える、あるいは該形質導入に関連する物 質および方法を提供する。　本願発明の一態様において、本願発明は、味覚受容 細胞に特異的な新規のＧタンパク質、ガストデューシンのαサブユニット、ある いは、リガンド／抗リガンド結合活性あるいはガストデューシンに特異的な免疫 学的特性の少なくとも一つを有するαサブユニットをコードする精製および単離 されたポリヌクレオチド配列（例えば、ＤＮＡ配列あるいはそのＲＮＡ転写体） を提供する。 本願発明の好ましいポリヌクレオチド配列には、ゲノミックおよびｃＤＮＡ配列 、および全部または部分的に合成したＤＮＡ配列、そして、それらの生物学的複 製物か含まれる。　このポリヌクレオチド配列を含む生物学的に活性なベクター も、本願発明に包含される。 本願発明のＤＮＡおよびアミノ酸配列の開示を通して得られる科学的価値は明白 である。　例えば、ガス上デユーシンαサブユニットをコードするｃＤＮＡの配 列の知見は、その配列をコートし、そして、プロモーターやオペレーターなどの αサブユニットに特異的な発現調節配列を特定するゲノミツクＤＮＡを、ＤＮＡ ／ＤＮＡハイブリダイゼーションによる単離を可能にする。　本願発明のＤＮＡ 配列を用いたＤＮＡ／ＤＮＡハイブリダイゼーション法は、ヒトに特異的なガス 上デユーシンαサブユニットタンパク質のような、本明細書にて特に言及したラ ットガス］・デユーシンαサブユニットと相同の異種タンパク質をコードするＤ ＮＡの単離も許容する。 本願発明の他の態様によれば、宿主細胞、特に、単細胞の真核細胞あるいは原核 細胞か、その細胞にてガストデューシンαサブユニットポリペプチトの発現を許 容する方法にて、本願発明のポリヌクレオチド配列で安定裏に形質転換または形 質変換される。　適切な培地にて成長させた、ガストデューシンαサブユニット ポリペプチド生成物を発現する宿主細胞は、ガストデューシンαサブユニットポ リペプチド、断片、および変異体の大規模生産に特に有用であり、これにより、 細胞あるいはその細胞を成長指せた培地から、所望のポリペプチド生成物を単離 する事かできる。 本願発明の新規のガス上デユーシンαサブユニット、断片および変異体は、天然 の株細胞から単離物としても得ることができるか、好ましくは、本願発明の宿主 細胞が関与する組み換え法により製造される。　選択した宿主細胞、あるいは、 組み換え製造および／または単離後の処理によって、生成物は、全体的あるいは 部分的な糖タンパク質化、部分的あるいは全体的な脱糖タンパク質化、または糖 タンパク質化されていない形態にて得ることができる。　選択した宿主細胞、あ るいは、組み換え製造および／または単離後の処理によって、生成物は、全体的 あるいは部分的なミリストイル化、部分的あるいは全体的な脱ミリストイル化、 またはミリストイル化されていない形態にて得ることかできる。 本願発明のガス上デユーシンαサブユニット変異体には、一つ以上の特定のアミ ノ酸が削除あるいは置換され、あるいは一つ以上の特定されないアミノ酸か追加 され、（１）一つ以上の生物学的活性あるいはガストデューシンに特異的な免疫 学的特性を欠失せずに、好ましくは、これら特性の向上を伴った、あるいは（２ ）特定のリガンド／抗リガンド結合機能の特異的な不能を伴った、ポリペプチド 類似体を含む。 さらに本願発明には、ガス上デユーシンαサブユニットに特異的な抗体基質（例 えば、モノクローナルおよびボリクローナル抗体、キメラおよびヒト型化抗体、 Ｆａｂ　、　Ｆａｂ’、Ｐ　（ａｂ“）２ならびに一本鎖領域、そしてＦｖある いは一本鎖可変領域を含む抗体領域）か包含される。　単離した天然あるいは組 み換えガストデューシンαサブユニットポリペプチド生成物あるいは表面にかよ うな生成物を発現する宿主細胞を用いることで、抗体基質を調製することができ る。　この抗体基質は、本発明のポリペプチドの精製ならびにガストデューシン のリガンド／抗リガンドをブロックあるいは阻害するために用いることができる 。 また、本願発明の他の態様は、ガストデューシンαサブユニットポリペプチド（ およびガストデューシンへの配列相同性、錐状体あるいは桿状体トランスデユー シンαサブユニットポリペプチド）も意図している。　本発明による味覚修正剤 の同定方法は、ガス上デユーシンαサブユニットと味覚受容体との相互作用を模 倣あるいは阻害する薬剤の能力、あるいはガス上デユーシンαサブユニットとエ フェクター酵素との相互作用を模倣あるいは阻害する薬剤の能力を試験すること を含む。 味覚修正剤を同定するための第一の好適な方法は、ガス上デユーシンα−サブユ ニットあるいはトランスデユーシンα−サブユニット、および、生物学的活性体 にて、薬剤と放射性標識付したＧＴＰγＳに関連するＧプロティンβならびにγ 、を有する燐脂質小胞をインキュベートし、そして、標準結合率との比較におい て、当該α−サブユニットによるＧＴＰγＳ結合率を決定する工程を含む。　結 合率の増加は、該修正剤が味覚刺激物質であることを、また、結合率の減少は、 該修正剤が味覚阻害物質であることを示す。 味覚修正剤を同定するための第二の好適な方法は、ガス上デユーシンα−サブユ ニットあるいはトランスデユーシンα−サブユニット、および、生物学的活性体 にて、特定の薬剤に関連するＧプロティンβならびにγ、および放射性標識付し たＧＴＰを有する燐脂質小胞をインキュベートし、そして、標準転換率との比較 において、当該α−サブユニットによるＧＴＰからＧＤＰへの転換率を決定する 工程を含む。　転換率の増加は、該修正剤か味覚刺激物質であることを、また、 転換率の減少は、該修正剤が味覚阻害物質であることを示す。 味覚修正剤を同定するための第三の好適な方法は、活性ガストデューシンα−サ ブユニットあるいは活性トランスデユーシンα−サブユニットを、薬剤とホスホ ジェステラーゼと共にインキュベートし、そして、標準活性との比較において、 当該α−サブユニットによるホスホジェステラーゼ活性を測定する工程を含む。 　ホスホジェステラーゼ活性の増加は、該修正剤が味覚刺激物質であることを、 また、ホスホジェステラーゼ活性の減少は、該修正剤が味覚阻害物質であること を示す。 味覚修正剤を同定するための第四の好適な方法は、ガス上デユーシンα−サブユ ニット、あるいは、特定の薬剤と共に、生物学的活性体にて、Ｇプロティンβな らびにγサブユニットと関連するトランスデユーシンα−サブユニットで洗浄し た（例えば、ウシ網膜からの）ディスク膜をインキュベートし、この膜を、光分 解条件（すなわち、５３２ｎｍの光線）下に置き、そして、標準との比較におい て、３８０ｎｍでの光分解反応生成物の吸着を決定する工程を含む。　３８０ｎ ｍでの吸光度の増加は、該修正剤が味覚刺激物質であることを、また、３８０ｎ ｍでの吸光度の減少は、該修正剤が味覚阻害物質であることを示す。 味覚修正剤は、例えば、ガストデューシンのα−サブユニットに特異的な、少な くとも一つのリガンド／抗リガンド結合活性を有するペプチドを含む。　本明細 書にて言及した好適な味覚修正剤のアミノ酸配列を、配列番号＋１−ｔｏに示し 、具体的には；配列番号：ｌ〜３は、ラットのガス上デユーシンα−サブユニッ トのカルボキシ末端領域に対応し；配列番号、４は、ウシのトランスデユーシン α−サブユニットのアミン末端部分に対応し、配列番号、５〜７は、ウシのトラ ンスデユーシンのカルボキシ末端部分に対応し；配列番号：８〜１０は、ウシの ロドプシンのループペプチドに対応し；配列番号＝１１は、ラットのガストデュ ーシンの２９７〜３１８位のアミノ酸に対応し、配列番号、１２は、ラットのガ ストデューシンの３０４〜３１８位のアミノ酸に対応し：配列番号、１３は、ラ ットのガストデューシンの５７〜６９位のアミノ酸に対応し；配列番号：１４は 、ウシの桿状体トランスデユーシンの２９３〜３１４位のアミノ酸に対応し；配 列番号、１５は、ウシの桿状体トランスデユーシンの３００〜３１４位のアミノ 酸に対応し、配列番号：１６は、ウシの桿状体トランスデユーシンの５３〜６５ 位のアミノ酸に対応し；配列番号＝１７は、ランの錐状体トランスデユーシンの ２９７〜３１８位のアミノ酸に対応し；配列番号＝１８は、ウシの錐状体トラン スデユーシンの３０４〜３１８位のアミノ酸に対応し：そして、配列番号＝１９ は、ウシのトランスデユーシンの５７〜６９位のアミノ酸に対応する。 味覚修正用ペプチドは、アミノ末端のアセチル化、あるいはカルボキシ末端のア ミド化をすることができる。 ガストデューンンα−サブユニットの他のペプチドリガンド／抗リガンドは、ガ ス上デユーシンα−サブユニットをペプチドと接触し、そして、サブユニットと 結合したペプチドを単離することで同定することによって同定できる。　上述し たような方法に利用できる適切なペプチドのライブラリーあるいはファージエピ トープライブラリーは、５ｃｏｔｔ　ｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ。 ２４９、３８６−３９０　（１９９０）；　Ｌａｍ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕ ｒｅ、　３５４．８２−８４（１９９１）　；およびｔ（ｏｕｇｈｔｏｎ　ｅｔ 　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ、　３５４．８４−８６（１９９１）に記載されている 。 本願発明の他の態様によると、ガス上デユーシンα−サブユニットのリガンド／ 抗リガンド結合活性を有するペプチド、あるいはガス上デユーシンα−サブユニ ットに特異的な抗体基質のような味覚修正剤は、味覚を修正する（例えば、甘味 および／または苦味を模倣あるいは阻害する）ために、味覚受容細胞に誘導され る。 本願発明の様々な態様と利点は、添付した図面を参照しつつ、以下の実施例、お よび詳細な説明を考慮すれば明らかになるであろう。　すなわち、図ＩＡとＩＢ には、ラントガストデューシンのα−サブユニットのアミノ酸配列（配列番号： ２１）、ウシ錐状体トランスデユーシン（錐状体）（配列番号＋２２）、ウシ桿 状体トランスデユーシン（桿状体）（配列番号：２３）、およびこれら三つのα −サブユニットの対比から導いた共通配列（配列番号＝２４）が記されており、 図において、共通配列中の大文字表記したアミノ酸は、そのアミノ酸位置にて、 三つのサブユニットすべてが同じアミノ酸であること、また、下付表記したアミ ノ酸は、そのアミノ酸位置にて、三つの内、二つのサブユニットにて同しアミノ 酸であること、そして、付点表記は、そのアミノ酸位置にて、三つのサブユニッ トにて相互に異なるアミノ酸であること、を示している。 詳細な説明 本願発明を、以下の実施例に従って説明する。　すなわち、実施例１は、ラント ガストデューシンのα−サブユニットをコードするｃＤＮＡ配列のクローニング ；実施例２は、ガストデューシンα−サブユニットｃＤＮＡ配列の特徴付け；実 施例３は、大腸菌でのガストデューシンのα−サブユニットの発現に関する実験 ：実施例４は、様々な組織でのガストデューシンのα−サブユニットｍＲＮＡの 発現のためのノーザンプロット、プライマー伸長、およびＲＮａｓｅ保護分析の 結果；実施例５は、ガストデューンンのα−サブユニットと味覚受容体あるいは エフェクターとの相互作用に影響を与える能力を有する味覚修正剤を同定する方 法、ならびに、甘味、苦味、塩味あるいは酸味を模倣あるいは阻害することで味 覚を修正するために、かような味覚修正剤を利用する方法；および、実施例６は 、ポリクローナル抗体に特異的なガス上デユーシンα−サブユニットの生成を記 載している。 実施例１ 未知の株細胞特異性Ｇタンパク質をコードするｃＤＮＡを、株細胞ｃＤＮＡライ ブラリーからＰＣＲ法により単離した。　味蕾は、ライブラリーを作成するため に回収した味覚組織全量の１０〜３０％を占めると考えられた。　これとは対照 的に、味蕾は全舌上皮の１％以下しか存在しない。　対照ｃＤＮＡライブラリー は、味蕾を含まない舌上皮より調製した。 より、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット９０匹から輸状有郭乳頭および葉状 乳頭を回収し、直ちに一７０℃の１００％エタノール中で凍結した。 同量の非味覚舌上皮（味蕾を含まない）を、同様に回収した。 Ｑｕｉｃｋ　Ｐｒｅｐキット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、アップサラ、スウェーデン ）を用いて、味覚組織および非味覚舌組織よりポリＡ＋ｍＲＮＡを単離した。　 味覚組織より７．９μｇのｍＲＮＡを、非味覚組織より２．４μｇのｍＲＮＡを 回収した。　ｐｓＦＯＲＴベクターを有する５ｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔキツト（Ｂ ＲＬ、ベセスダ、メリーランド州）を用いて、味覚舌由来ｍＲＮＡ　１８ｇと非 味覚舌山来ｍＲＮＡ　１μｇより二種のｃＤＮＡライブラたクローン（平均挿入 サイズ１．１ｋｂ）を含み、非味覚ライブラリーは４．８Ｘ　１０’個の独立し たクローン（平均挿入サイズ１．０ｋｂ）を含んでいた。 ＰＣＲプライマーのデザイン及び合成 α５、α。１１、αｌ−１，３、αｌ−２、α２、α９、α１−ｒｏｄ及びα、 −０゜。、サブユニットを含む前述のＧタンパク質αサブユニット間にて保存性 の高いアミノ酸領域に対応する６セツトの変性オリゴヌクレオチドプライマーを 作成した。　保存領域のアミノ酸配列と、それに対応する変性プライマーでＡｐ ｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ　ＤＮＡ合成機を用いて合成したＤＮＡ配列（Ｉ ＵＰＡＣ命名法で命名）を以下に示す。　各オリゴヌクレオチド末端で下線を付 した配列は、制限酵素切断部位（５°側プライマーとして使用するオリゴヌクレ オチドに対してＢａｍ旧、３°側プライマーとして使用するオリゴヌクレオチド に対してＥｃｏＲＩ）を含み、クローニングが可能である。　括弧内のヌクレオ チド番号（Ｎｕｃ、　＃）は、プライマーの１番目のアミノ酸に対して現在骨か っているガス上デユーシンαサブユニットのヌクレオチドの位置を示す。 セット１ ＫＷＩＨＣＦ　（Ｎｕｃ、　７４１）（配列番号、２５）ＦＬＮＫＫＤ　（Ｎｕ ｃ、　９１２）（配列番号；２７）５’　ＧＧＡＡＴＴＣＲＴＣＹＴＴＹＴＴＲ ＴＴＮＡＧＲＡＡ　３“　（配列番号：２８）及び５’　ＧＧＡＡＴＴＣＲＴＣ ＹＴＴＹＴＴＲＴＴＹＡＡＲＡＡ　３’　（配列番号：２９）セット３ ＤＶＧＧＱＲ（Ｎｕｃ、　７１１）（配列番号：３０）ＶＦＤＡＶＴＤ　（Ｎｕ ｃ、　１１１６）（配列番号、３２）ＴＩＶＫＱＭ　（Ｎｕｃ、　２５５）（配 列番号＝３４）ＦＬＮＫＱＤ　（Ｎｕｃ、　９１２）（配列番号：３６）５°Ｃ ＣＧＡＡＴＴＣＲＴＣＹＴＧＹＴＴＲＴＴＮＡＲＲＡＡ　３’　（配列番号：３ ７）プライマーのセット１．２及び３については、ＳｔｒａｔｈｍａｎｎらＰｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８６．７４０７−７４ ０９　（１９９０）に記述されている。　セット２の変性オリゴヌクレオチドは 、常に２個同時に等モル量ずつ使用した。 ＰＣＲ法によるガス上デユーシンαサブユニットをコードするｃＤＮＡのクロー ニング 前述の変性プライマーのセットの対方向の組み合せ：１及び２．２及び３．５及 び６を用いたＰＣＲの基質として、株細胞ライブラリー由来のＤＮＡを使用した 。　ＰＣＲ試料は、反応液５０μｌ中に各プライマー２５０ｐｍｏｌ　、株細胞 ライブラリーｃＤＮＡの２０ｎｇおよびビロスターゼ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｇ ｅｎｅｔｉｃ　Ｒｅ５ｏｕｒｃｅ社、タンパ、フロリダ州）■ユニットを含む。 　ＰＣＨのプログラムでは１９４℃を１分間、４秒当り１℃の割合で３７〜７２ °Ｃに温度上昇し、次いで、７２°Ｃて３分間のサイクルを３回行った後、９４ ℃を１分間、次いで４２℃を２分間、最後に７２°Ｃを３分間の反応サイクルを さらに３５回行った。　ＰＣＲ生成物はＢａｍ旧及びＥｃｏＲＩで分解し、１％ アガロースケル上て電気泳動した。　予想されたサイズのバントを切り出し、生 成してｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターにクローニングして大腸菌に形質転換し た。　個々のコロニーを取り出し、ここで単離したＤＮＡの配列を決定した。 推定アミノ酸配列に基づいたαサブタイプの特異性に従って、一部のコロニーを 分類した。　αサブユニットのクローンの８つの異なるタイプを単離した。　α サブユニットタイプの内、７つ（α５か１つ、α１か２つ、αつか２つ、α、が ２つ）はすでに同定されており、舌上皮以外の組織で発現されている。 ８番目のタイプのクローン（プライマーのセット１と２、及び５と６を用いたＰ ＣＲ反応で生成）は新規のＧタンパク質αサブユニットクローンであった。　こ の味覚クローンは、最も出現頻度の高い単離体の一つであり、味覚組織ｃＤＮＡ ライブラリーが比較的豊富であることが示唆された。 味覚αサブユニットクローンの全配列を決定するために、さらにＰＣＲ反応を行 い、ＰＣＲ生成物を用いて株細胞ｃＤＮＡライブラリーに対するコロニーハイブ リダイゼーションを行った。 ＰＣＲ反応は、下記のαサブユニット特異性プライマーのセット（アンチセンス 方向に合成し、５°末端にＢａｍｔ（１部位を有する）と変性プライマーのセッ ト４を用いて上述の通り行った。 ＨＬＦＮＳＩＣ（Ｎｕｃ、　８５５）（配列番号、３８）生成したＰＣＲ断片を 上述の通りクローニングして配列を決定した。 以下に示したαサブユニット特異性プライマーを用いた重複ＰＣＲ反応を行い、 味覚αサブユニット５°配列を決定した。 ＫＹＦＡＴＴＳ　（Ｎｕｃ、　８８２）（配列番号：４０）５°ＣＣＧＧＡＴＣ ＣＧＡＧＧＴＧＧＴＴＧＣＡＡＡＡＴＡＣＴＴ　３°　（配列番号＝４１）ＬＡ ＥＩＩＫＲ（Ｎｕｃ、　４８０）（配列番号、４２）５’　ＣＧＧＡＴＣＣＧＡ ＣＧＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＣＡＧＣＣＡＡ　３°　（配列番号：４３）最初の ＰＣＲ反応では、配列番号：４１に記載のプライマーと、味細胞ライブラリーを 含有するｐｓＦＯＲＴベクターのＴ７プロモーター領域に対応するＴ７シーケン スプライマー（ＢＲＬ）をプライマーとして使用した。　次に、配列番号：４３ に記載のプライマーとＴ７シーケンスブライマー（ＢＲＬ）を用いて、生成した ＰＣＲ断片を再増幅した。　再増幅した断片を、上述の通りクローニングして配 列を決定した。 プライマーのセット５と配列番号：４１に記載のプライマーを用いて増幅したＰ ＣＲ断片をプライマーとして使用し、ラット株細胞ｃＤＮＡライブラリーに対し てコロニーハイブリダイゼーションを行って味覚αサブユニットの配列決定と確 認を行った。 複合型味覚αサブユニットクローンをプラスミドベクターｐｓＰＯＲＴ（ＢＲＬ ）内に構築し、得られたプラスミドをｐｓＰＯＲＴ−ガストデューシンとした。 　クローンＴ９５（ｐＳＰＯＲＴベクターと味覚αサブユニット配列を含有する ）をＮ５ｉｌ　（ｐｓＰＯＲＴベクターの内部は切断せず、αサブユニットＤＮ Ａをヌクレオチド３５４と８６６の三箇所で切断する）で分解し、二つの断片を 得た。　大きい方の断片（ｐｓＰＯＲＴヘクター配列と味覚αサブユニット配列 の大部分を含む約５２５０ｂｐの断片）を小さい方の断片（約４００ｂｐ）から 分離後回収した。　残りの味覚αサブユニット配列を含む断片は、プライマーの セット５と配列番号＝４１に記載の味覚αサブユニット特異性プライマーによる 株細胞ｃＤＮＡライブラリーのＰＣＲ反応から決定した。　生成したＰＣＲ反応 物をＮ５ｉｌで分解して５３２ｂｐの断片を得た。　５３２ｂｐの断片をクロー ンＴ９５から単離した大きい方の断片に連結して、ベクターｐｓＰＯＲＴ内に複 合型αサブユニットクローンを作成した。　味覚αサブユニットｃＤＮＡの５゜ 末端を、ベクターｐｓＰＯＲＴ内にオリジナルのｃＤＮＡの作成（ベクター、、 、５°ＴＣＧＡＣＣＣＡＣＧＣＧＴＣＣＧ　３’１５’ガストデユーシン）〔す なわち、ベクター１０．（配列番号：　４４）１５’ガストデユ一シン〕時に使 用した５ａｌｌ　／　Ｍｌｕｌアダプター由来の配列に結合した。　ガストデュ ーシンの３゛末端は、オリジナルのｐｓＰＯＲＴ構築（ガストデューシン３”１ ５’　ＧＧＧＣＧＧＣＣＧＣ３’、、、ベクター）〔すなわち、ガストデューシ ン３゛／（配列番号＋４５）、、、ベクター３時に使用したＴ−末Ｎｏｔｌプラ イマーアダプターに結合した。 複合型味覚αサブユニットクローンのＤＮＡ及び推定アミノ酸配列をそれぞれ、 配列番号＝２０及び２１に記載している。　この配列は、ＭｃＬａｕｇｈ　ｌ　 ｉｎら、匝旦ｒｅ、　３５７．５６３−５６９　（１９９２）が報告している。 　ガストデューシンαサブユニット配列は、１７０３ｂｐのＤＮＡからなり、３ ５４個のアミノ酸からなるタンパク質をコードするのに十分な長さの一末鎖読み 取り枠である。　これは百日咳毒素（Ｃｓｓ＋）及びコレラ毒素（Ｒ１？Ｉｌ） 介在リボース化に対する実質部位を含んでいる。 味細胞内のガストデューシン 興味あることに、ガストデューシンαサブユニットｃＤＮＡ　（桿状体及び錐状 体の両方）が味細胞ライブラリーのＰＣＲ反応により単離された。　さらに、ガ ストデューシンαサブユニットのｍＲＮＡは、リボヌクレアーゼ保護分析及びｉ ｎ　５ｉｔｕハイブリダイゼーシヨンにより味蕾にあることか明らかにされた。 　これにより、網膜の光受容体細胞以外の組織に、ガストデューシンか存在する ことか初めて示された。　従って、ガストデューシンは視覚伝達と同様に味覚伝 達にも関与すると思われる。 実施例２ 味覚αサブユニットクローンと公知のＧタンパク質が報告したウィスコンシンＧ ＣＧソフトウェアパッケージのＴｆａｓｔａおよびＦａＳｔａプログラムを用い て、ラット味覚タンパク質のαサブユニットに関連したＤＮＡ及びアミノ酸配列 を対象としてＧｅｎＢａｎｋを調査した。　調査の結果から、αサブユニツトは 、α１超科の一つでウシ桿状体及びウシ錐状体にかなり密接に関係していること が示された。　このガストデューシンと味覚伝達において推測される役割との密 接な関係から、味覚Ｇタンパク質はガストデューシンと命名された。　アミノ酸 レベルで、ラントガストデューシンのαサブユニットは、ウシ桿状体トランスデ ユーシンのαサブユニットと８０％一致し、９０％の類似性か認められ、ウシ錐 状体トランスデユーシンのαサブユニットとは７９％一致し、９０％の類似性が 認められた。　これに対して、ウシ桿状体αトランスデユーシンは、ウシ錐状体 αトランスデユーシンと８１％一致し、９０％の類似性が認められた。 ラットトランスデユーシンαＤＮＡ配列は決定されていなことから、ラットトラ ンスデユーシンαサブユニットに対するクツトガストデユーシンαサブユニット との比較は行われなかった。 しかし、哺乳動物間では、アミノ酸同一性の１〜３％の差は、αアイソタイプ間 では典型的であり、ガストデューシンとトランスデユーシンのαサブユニットは かなり関連したタンパク質の超科を構成していることか示唆される。　これとは 対照的に、ガストデューシンαサブユニットは、α、サブユニットと６７％しか 一致せず、またα５サブユニツトとは４６％しか一致しない（トランスデユーシ ンとα１またはα間でも同様の相同性が認められる）。　ウィスコンシンＧＣＧ ソフトウェアパッケージ（前出のＤｅｖｅｒａｕｘらの文献）のＢｅ５ｔＦｉｔ ルーチンにより、ガストデューシンαサブユニットとウシ桿状体及び錐状体トラ ンスデユーシンと、反復的に配列比較を行ったところ、三つのαサブユニットは すべて全体構造が高く保存されていた（図ＩＡ−ＩＢ参照）。　三つのタンパク 質とも全てアミン末端６０個のアミノ酸とカルボキシル末端６０個のアミノ酸は 保存性が高いが、カルボキシル末端の３８個のアミノ酸は一致している。　そこ は、Ｇタンパク質／受容体相互作用に関与した部位を含有していることから、こ のカルボキシル末端の同一性は特に重要である。 さらに、Ｑ１３７からＦ３５４の領域は三つの全サブユニットできわめて類似し ており、各αサブユニットはこの領域の保存領域とは１４または１５個の差しか 認められない。　この領域は、グアニンヌクレオチド結合に関与した部位のほと んどを含んでいる。 アミノ酸Ｇ４２、Ｒ０９７およびＱ　２０４はＧＴＰａｓｅ活性を制御し、三つ のタンパク質金てに存在する。　これらの比較から、これら３つのαサブユニッ トのグアニンヌクレオチド結合性およびＧＴＰａｓｅ活性はきわめて類似するこ とが示唆される。　三つのαサブユニット全てに、その末端に実質的なＮ−ミリ ストリレーション部位を含み、活用時にこれらのαサブユニットが細胞膜の内側 に結合すると思われる。　三つのタンパク質問の差の大半は、ガストデューシン のＶＯＳからＳ　ｔｏｏの領域に集中しており、Ｇタンパク質αサブユニットの 高度の可変領域である。 ガス上デユーシンαサブユニットは単一コピー遺伝子であるガストデューシンの αサブユニットはトランスデユーシンαサブユニットと密接に関連しており、ア ミノ酸レベルにて、全配列を通して数カ所に差が散見される。　このことは、α ガストデューシンがトランスデユージョンとは別の遺伝子から転写されることを 示唆している。　ガス上デユーシンαサブユニットプローブとトランスデユーシ ンによる、αサブユニットサザンプロット分析により、ガストデューシンは制限 エンドヌクレアーゼ分解パターンの異なる単一コピー遺伝子であることが確認さ れた。 ガス上デユーシンαサブユニットのスプライシング変異体味覚ｃＤＮＡライブラ リーのスクリーニングで、ガストデューシンのαサブユニットの二種のスプライ シング変異体か認められた。　クローン（Ｔ９５）の１タイプは、ガス上デユー シンαサブユニットの全コード領域を含むが、１３５ｂｐのフレーム欠失を有し ていた。　このｃＤＮＡ配列をマウストランスデユーシンのαサブユニットと比 較すると、欠失部位は６番目のエキソン領域に完全に一致している。　Ｇタンパ ク質αサブユニット全体のエキソンーイントロン機構は高度に保存されており、 従って、クローンＴ９５の「欠失」はガストデューシンのエキソン６のスプライ シングによる切り出しに対応していると思われる。 ｃＤＮＡライブラリーから得られたクローンのもう１つのタイプ（Ｔ９３、Ｔａ ２及びＴ７７）は、１９３ｂｐの挿入部位を含んでいる。　マウストランスデユ ーシンαサブユニットのゲノムクローンのエキ“ラン／イントロン境界の配列の 比較から、この挿入部位はエキソン６と７間のイントロンが、スプライシングを 受けずに存在してるためであることかわかる。 エキソン６と７まで拡張したプライマーを用いてＰＣＲ反応を行ったところ、正 確なスプライシングを受けているαガストデューシンｃＤＮＡに対して１０分の １のレベルでの明らかなスプライス（欠失）変異体と、スプライシングを受けて いないものが存在することが示された。　エキラン６内に存在するアミノ酸（Ｒ １９７からＮ２４１）は、α、サブユニット及びトランスデユーシンαサブユニ ットに対して高い保存性を示し、グアニンヌクレオチド結合に関与している。　 仮にガストデューシンの欠失体か実際に産生された場合、そのタンパク質のグア ニンヌクレオチド結合性とＧＴＰａｓｅ活性は、他のαタンパク質とかなり異な ると思われる。　スプライシングを受けていないガストデューシンでは末端の１ １４個のアミノ酸を欠失したタンパク質が産生され、この場合、グアニンヌクレ オチド結合性及び受容体との相互作用能も変化する。 実施例３ ｐｓＰＯＲＴ−ガストデューシン由来のガストデューシンをコードするｃＤＮＡ 　（実施例１参照）をタンパク質融合ベクター［ｐＭａｌ−Ｃ２、Ｎｅｗ　Ｅｎ ｇｌａｎｄ　Ｂｉｏａｂｓ　（ＮＥＢ）、ビバリー、マサチューセッツ州〕にサ ブクローニングした。　この構築を完成するため、ｐＭａｌ−Ｃ２の監屡Ｉ１１ 部位を」射１部位に変換し、クローンＴ９５（実施例２参照）を基質として用い て行ったＰＣＲを用いて５′末端にＮａｅ１部位、３°末端にＨｉｎｄｌ１１部 位を有する約６５ｂｐの長さのガストデューシンｃＤＮＡの５′断片を作成した 。　これらのＤＮＡ配列を連結するために、ＦＩｉｎ＋Ｈｒｆ及び」射Ｉでｐｓ ＰＯＲＴ−ガストデューシンを分解して作成した約１５３０ｂｐのｐｓＰＯＲＴ −ガストデューシン断片に三断片を連結した。　得られた構築物をｐＭａｌ−Ｃ ２−ガストデューシンと命名し、これは、マルトース結合タンパク質とガストデ ューシンの融合タンパク質をコードする。　融合生成物を分解すると、アミノ末 端のメチオニンのみを欠失したアミノ酸３５３個のガストデューシン生成物が得 られる。　予備試験では、マルトース結合タンパク質融合物を用いて大腸菌中に ｐＭａｌ−Ｃ２−ガストデューシンを発現させ、精製システム（ＮＥＢ）にて、 得られた生成物をマルトース結合タンパク質から切断したところ、ガス上デユー シン特異性抗体と反応したが、予想されたＧＴＰ−結合性及びＧＴＰａｓｅ活性 は認められなかった。 実施例４ 様々なラット組織において、ガス上デユーシンαサブユニットｍＲＮＡの発現を ノーザンプロット、プライマー伸張及びリボヌクレアーゼ保護により分析した。 ガス上デユーシンαサブユニットの発現生成物（ｍＲＮＡ）プローブとしての標 識付けしたガス上デユーシンαサブユニットＤＮＡを用いて、味覚組織から得ら れたポリＡ＋ｍＲＮＡをノーザンプロット分析したところ、三つの転写物、すな わち、きわめて類似した約１７００〜１８００ｎｔの一対と、弱い約１５００ｎ ｔのバンドが認められた。　鋳型としてｃＲＮＡ　（すなわち、ＲＮＡが味細胞 ｃＤＮＡライブラリーからの流出転写物としてｉｎ　ＶｉｔｒＯで産生ずるＲＮ Ａ）およびガストデューシンを用いてプライマーの伸張を行ったところ、その生 成物は図１と同一の５゛末端を有することが認められた。　この結果から、全長 のαガストデューシンクローンは、図１に示す通り約１７００ｎ　ｔの長さであ ることが示された。 ガス上デユーシンαサブユニットの組織での発現ガストデューシンαサブユニッ ト転写物の組織特異性発現をリボヌクレアーゼ保護により分析した。　リボヌク レアーゼ保護に用いた鋳型ＲＮＡは、全ＲＮＡであるか、または充分量のＲＮＡ が得られない症例の場合では、ポリＡ＋ｍＲＮＡからｃＤＮＡを作成してから、 そのライブラリーよりｃＲＮＡを作成した。　同時に、ガス上デユーシンαサブ ユニットプローブ、および、発現時に正常化するためにアクチンプローブを用い てリボヌクレアーゼ保護を行った。　リボヌクレアーゼ保護分析は、すべてリボ ヌクレアーゼ保護キット（Ａｍｂｉｏｎ社、オースチン、テキサス州）を用い、 Ｋｒｉｅｇ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂｎｚ、、　１５５．３９７− ４１５　（１９８７））の方法に従って行った。 リボヌクレアーゼ保護分析の結果、味覚組織調整物のみにガス上デユーシンαサ ブユニットＲＮＡが存在することが示された。 非味覚舌組織、臭覚上皮、網膜、脳、肝臓、心臓または腎臓では、αサブユニッ トＲＮＡは全く検出されなかった。 標識されたガストデューシンαサブユニットＲＮＡプローブを用いてｉｎ　５ｉ ｔｕハイブリダイゼーシヨンを行ったところ、輪状盲部乳頭、葉状乳頭、翼状乳 頭及び味覚伝達に直接関連した組織の味蕾中に、αガストデューシンｍＲＮＡの 存在が認められた。 非感受性舌上皮、筋肉、結合組織及びニブネル腺等の味覚伝達と関係していない 舌組織では、ガストデューシンｍＲＮＡは全く存在しなかった。 ガストデューシンαサブユニット発現には心性神経分布を必要とする ガストデューシンαサブユニッｌ−ｍＲＮＡの発現か味蕾の存在に依存するかど うかを調べるために、舌の神経を切断したラットから得られた凍結切片上でガス トデューシンαサブユニツアンチセンスＲＮＡをプローブとして用い、ｉｎ　５ ｉｔｕハイブリダイゼーシヨンを行った。　もし、ガス上デユーシンαサブユニ ットｍＲＮＡか味蕾のみに存在すれば、味蕾を変性した後、ガストデュ−シンα サブユニットはそれ以上発現されないはずである。 ラットでは、味蕾は舌咽神経、顔面神経及び迷走脳神経の枝によって神経支配を 受けている。　舌咽神経は、輪状脊部乳頭、及び葉状乳頭の味蕾を神経支配して いる。　鉄索神経は、舌後部の葺上乳頭ならびに葉状乳頭を神経支配している。 （ａ）両舌咽神経の双方切片及び（ｂ）左側舌咽神経と左側鉄索神経の片側切片 、の二種類の神経切断を行った。　輪状脊部乳頭は、舌咽神経のみから神経支配 を受けており、また神経の両方切片により、この乳頭の味蕾が変性する。　片方 切片は同側性の葉状乳頭の味蕾を変性するが、対側性葉状乳頭の味蕾は生存する 。　（味蕾の変性が充分に行われる）術後１４日後に、葉状乳頭及び輪状脊部乳 頭を含んだ組織切片を、αガストデュー両側性舌咽神経切断後に、輪状脊部乳頭 は味蕾を全て失い、そして、同時に輪状脊部乳頭でのガス上デユーシンαサブユ ニットｍＲＮＡの発現か失われた。　予想された通りに、αガストデューシンｍ ＲＮＡを発現する味蕾は、（鉄索神経からの入力は保たれているので）これらの ラットの葉状乳頭に存在する。　しかしながら、これら乳頭における味蕾の数は 、減少したようであった。　左側鉄索神経及び左側舌咽神経の片方切片後では、 同側性葉状乳頭は味蕾を失い、ガス上デユーシンαサブユニットｍＲＮＡの発現 が全く認められなかったが、対側性葉状乳頭は味蕾を保持しており、ガス上デユ ーシンαサブユニットｍＲＮＡを発現していた。　これらの結果は、神経支配を 受けた味蕾の存在とガス上デユーシンαサブユニットｍＲＮＡの発現との相互関 係を直接的に示している。 実施例５ ガス上デユーシンαサブユニットとトランスデユーシンαサブユニット間のアミ ノ酸配列の相同性、ならびに、ガス上デユーシンαサブユニットとトランスデユ ーシンαサブユニット両者の味蕾細胞特異性発現パターンに基づいた考察から、 味覚伝達におけるガストデューシンとトランスデユーシンの役割は、視覚系の伝 達の役割に類似していると思われる。　ガストデューシンおよび／またはトラン スデユーシンは、味覚受容体を活性化することにより、ｃＡＭＰやｃＧＭＰホス ホジェステラーゼのような株細胞エフェクターを活性化または阻害すると思われ る。 従って、ガス上デユーシンαサブユニットおよびトランスデユーシンαサブユニ ットは、特定の味を模倣、ブロックまたは阻害する味覚変化剤を同定する方法に 利用できる。　以下に述べるように、公知のＧタンパク質の活性化またはエフェ クター機能の特徴を調べるのと同様の方法による同定方法が考案されている。 第一の方法では、ガストデューシンおよびトランスデユーシンαサブユニットに 対する活性型味覚受容体の効果を、模倣またはブロックする味覚変化剤を同定す る。　例えば、本発明で考案されたある方法では、Ｃｈｅｕｎｇ　ｅｔ　ａｌ、 、　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　２７９（２）、　２７７−２８０　（１９９ １）が報告した分析法に類似しているか、この方法では、様々なＧタンパク質の ペプチド活性が存在すると、Ｇタンパク質αサブユニットによるＧＴＰ７Ｓの結 合割合が上昇する。　（ＧＴＰγＳはＧＴＰの非加水分解性型である。）　従っ て、本方法は、味覚修正剤と放射性標識ＧＴＰγＳとが、生物学的活性型で関与 しているガス上デユーシンαサブユニット（ＧＤＰと結合）またはトランスデユ ーシンαサブユニット（ＧＤＰと結合）、およびＧタンパク質β及びγサブユニ ット（すなわち、精製されたあらゆるβ及びγサブユニットが使用される）を有 する燐脂質小胞をインキュベーションする工程、およびαサブユニットによるＧ ＴＰγＳの結合割合を標準の割合（すなわち、薬剤が無い状態での結合割合）と 比較してめる工程を含む。　結合割合の上昇は、薬剤が味覚刺激を有することを 示し、結合割合の減少は、薬剤が味覚阻害を有することを示す。 第一方法の他の方法は、Ｃｈｅｕｎｇ　ａｔ　ａｌ、、　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅ ｒｓ、　２７９（２）、　２７７−２８０　（１９９１）が報告した他の分析法 に類似しているが、この方法では、様々なＧタンパク質のペプチド活性が存在す るとＧタンパク質αサブユニットのＧＴＰａｓｅ活性の割合が上昇する。 従ってこの方法は、味覚修正剤と放射性標識ＧＴＰとか、生物学的活性型で関与 しているガス上デユーシンαサブユニット（ＧＤＰと結合）またはトランスデユ ーシンαサブユニット（ＧＤＰと結合）およびＧタンパク質β及びγサブユニッ トを有する燐脂質小胞をインキュベーションする工程、ならびにαサブユニット によるＧＴＰからＧＤＰへの変換速度を、薬剤が無い状態での変換速度と比較し てめる工程を含む。　変換速度の上昇は、薬剤が味覚刺激を有することを示し、 変換速度の減少は、薬剤が味覚阻害を有することを示す。 法に類似しているが、この方法では、トランスデユーシンαサブユニットが、活 性型受容体（ロドプシン）と相互作用すれば、３８０ｎｍにおける吸光度が上昇 する。　（トランスデユージンカルボキシル末端の３８個のアミノ酸〔この配列 にトランスデユーシンがロドプシンと相互作用する部位が含まれていることが明 らかにされている；　Ｎ１５ｈｉｚｕｋａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｄｓ、、　ｐｐ 、　７６−８２゜”Ｔｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｏｆ 　Ｓｌｉｇｎａｌ　Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ”、　ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、　 Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１９９０））は、ガストデューシンカルボキシル末端の３ ８個のアミノ酸と一致することから、ガストデューシンはロドプシンと相互作用 すると思われる。）　本性は、味覚修正剤か、生物学的活性型で関与しているガ ス上デユーシンαサブユニット（ＧＤＰと結合）またはトランスデユーシンαサ ブユニット（ＧＤＰと結合）、およびＧタンパク質β及びγサブユニットを有す る洗浄したディスク膜をインキュベーションする工程、インキュベーション混合 物を光分解条件（すなわち、５３２ｎｍの光線）下に置く工程、ならびに３８０ ｎｍにおける吸光度（対４１７ｎｍ）を薬剤が無い状態で吸光度と比較してめる 工程を含む。 ３８０ｎｍでの吸光度の上昇は、薬剤が味覚刺激を有することを示し、３８０ｎ ｍでの吸光度の減少は、薬剤が味覚阻害を有することを示す。 第二の方法は、エフェクターに対する活性型ガストデューシンおよびトランスデ ユーシンαサブユニット（すなわち、サブユニットはＧＴＰまたはＧＴＰγＳと 結合する）の効果を模倣またはブロックする味覚修正剤を同定する。　この種の 考案された方法は、Ｂｅａｖｏ　ｅｔ　ａｌ、　Ｅｄｓ、、　Ｃｈｐｔ、　７　 ｉｎ　Ｃｙｃｌｉｃ　ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＰｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓ ｅｓ：　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ、　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ似し ているが、この方法では、ホスホジェステラーゼ（ＰＤＥ）の活性化によりトラ ンスデユーシンと、エフェクターであるｃＧＭＰＰＤＥとの相互作用が認められ る。　従って本方法は、活性型トランスデユーシンαサブユニットまたは活性型 ガストデューシンαサブユニットと、味覚修正剤及びｃＡＭＰ　（またはｃＧＭ Ｐ）　ＰＤＥとをインキュベーションする工程、およびαサブユニットによるホ スホリラーゼの活性化を、薬剤が無い状態でのホスホリラーゼ活性レベルと比較 して測定する工程を含む。　活性値の上昇は、薬剤が味覚刺激を有することを示 し、活性値の減少は、薬剤か味覚阻害を有することを示す。 ガストデューシンまたはトランスデユーシンαサブユニットの結合活性を模倣す るまたは拮抗するペプチド（例えば、ガストデューシンまたはトランスデユーシ ンに対する抗体の断片、およびガストデューシンまたはトランスデユーシンに対 応するペプチド）は味覚修正剤になり得る。　これらのペプチドは、ガス上デユ ーシン／トランスデユーシンαサブユニットと、感受性レセプター、細胞エフェ クター、および／または、これらに関連したβ及びγサブユニットとの結合に影 響すると思われる。　トランスデユーシンによるホスホリラーゼの活性化を模倣 する能力を有するαサブユニットペプチドについては、前出のＲａｒｉｃｋ　ｅ ｔ　ａｌ、、の報告を参照のこと。　このような味覚修正用ペプチドのアミノ酸 配列の例は、ラントガストデューシンのカルボキシル末端領域に対応する配列番 号＝１〜３；ウシトランスデユーシンのアミノ末端部分に対応する配列番号＝４ ；ウシト９ランスデユーシンのカルボキシル末端部分に対応する配列番号＝５〜 ７；ウシロドプシンのループペプチドに対応する配列番号＝８〜１０；ラットガ ストデューシンの２９７〜３１８位のアミノ酸に対応する配列番号：１１；ラン トガストデューシンの３０４〜３１８位のアミノに対応する配列番号：１２；ラ ントガストデューシンのアミノ酸５７〜６９位のアミノに対応する配列番号。 １３；ウシ桿状体トランスデユーシンの２９３〜３１４位のアミノ酸に対応する 配列番号；１４．ウシ桿状体トランスデユーシンの３００〜３１４位のアミノ酸 に対応する配列番号：１５．ウシ桿状体トランスデユーシンの５３〜６５位のア ミノ酸に対応する配列番号：１６；ウシ錐状体トランスデユーシンの２９７〜３ １８位のアミノ酸に対応する配列番号・１７；ウシ錐状体トランスデユーシンの ３０４〜３１８位のアミノ酸に対応する配列番号＝１８；およびウシトランスデ ユーシンの５７〜６９位のアミノ酸に対応する配列番号＝１９として記載してい る。 実施例６ ガストデユーシンαサブユニットに特異的な（モノクローナル及びポリクローナ ル抗体、キメラ及びヒト用抗体及びＦａｂ　。 Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及び−重鎖領域を含む抗体領域、およびＦｖまたは一 本鎖可変領域を含む）抗体は、単離された天然または組換え型ガストデューシン αサブユニットポリペプチド生成物、または細胞表面にこのような生成物を発現 する宿主細胞を用いて調製できる。　この抗体は、前節および本発明のガストデ ューシン精製の項目で記載したように、ガストデューシンノリガンド／抗リガン ド結合活性を、ブロックまたは阻害するために利用される。 ガストデューシンの９５〜１０９位のアミノ酸に対応するガストデューシン特異 性ペプチドＹＶＮＰＲ３ＲＥＤＱＱＬＬＬＳ　（配列番号：４６）をへ分割した 鎖上りジンコアにて、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（ハンツビル、アラ バマ州）により合成した［Ｔａｍ、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。 Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８５：　５４０９−５４１３　（１９８８）に記載のマル チ抗原ペプチド、ＭＡＰ　）。　ＭＡＰ−ペプチド（Ｇｕｓｔ−１で示す）を用 いてウサギに接種し、このガストデューシンに対して特異的なポリクローナル抗 ペプチド抗血清を生じさせた。　０日月に、前免疫血清を回収し、次に腋窩リン パ節を完全フロインドアジュバント中に溶解させたＧＵＳＴ−Ｉ　ＭＡＰ（５０ ０μ）と共に注入した。　初回は完全フロインドアジュバント（ｆＦＡ）中に５ ００μｇのＧＩＪＳＴ−１を、２回目はＩＦＡ中２５０μｇを、それぞれ１４日 目と４２日目に皮内に注入して、２回の追加免疫を行った。　２８日目と５６日 目に、５ｍｌの免疫血清を回収した。　以後、追加免疫として１００μｇのＧＵ ＳＴ−１を月１回皮下注射した。　免疫抗体を、各追加免疫の２週間後に回収し た。 このガストデューシンを用いてウェスタンプロット及び免疫組織化学試験を行っ た結果、ラット及びウシの輪状脊部乳頭及び葉状乳頭の抽出物中に、ガストデュ ーシンか存在することか認められた。　ガストデューシン特異抗体は実施例３の 大腸菌マルトース融合タンパク質−ガストデユーシン生成物にも反応を示した。 本発明を好適な実施例に基づいて説明してきたが、変更及び修正を加えることは 、当業者であれば容易に想到できることは明らかである。　従って、添付の特許 請求の範囲は、その範囲内に、これらすべての変更をも包含することを意図する ものである。 配　列　表 （１）一般情報 （１）出願人：　マーゴルスキー、ロハート、エフ（ｉ　ｉ）発明の名称：ガス トデューンン物質および方法（ｉｉｉ）配列の数、４６ （１ｖ）連絡先住所： （Ａ）名宛人：　マーシャル、オドウール、ジエースティン、マレ−アンドボー ラン （Ｂ）番地：　６３００シアーズ　タワー、２３３サウス　ワラカー　ドライブ （Ｃ）都市名：　シカゴ （Ｄ）州名・　イリノイ （Ｅ）国名　米国 （Ｆ）郵便番号　６０６０６−６４０２（ｖ）コンピューター読取形式。 （Ａ）媒体・　フロンピー　ディスク （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭＰＣ互換機（Ｃ）操作システム：　ＰＣ−ＤＯ３ ／ＭＳ−ＤＯ３（Ｄ）ソフトウェア、　パテント　イン　リリース１１１．０、 バージョン＃１．２５（ｖｉ）現出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （７口）先行出願データ： （Ａ）出願番号：　ＵＳ　０７／８６３．３５３（Ｂ）出願日：　０９−４月− １９９２（ｖｉ目）弁護士／弁理士情報： （Ａ）氏名二ノーランド、グレタ　イーＣＢ）登録番号　３５．３０２ （Ｃ）参照／事件番号：　３１３４２ （１ｘ）通信情報・ （Ａ）電話：　（３１２）　４７４−６３００（Ｂ）ファックス：　（３１２） 　４７４−０４４８（Ｃ）テレックス＋　２５−３８５６ （２）配列番号、ｌの情報 （ｉ）配列特徴。 （＾）配列の長さ　１８アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （ｘｉ）配列：配列番号　１ Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌ。 （２）配列番号・２の情報 （１）配列特徴 （Ａ）配列の長さ　１９アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロン−直鎖状 （目）配列の種類　ペプチド （ｘｌ）配列　配列番号・２ Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ｌｌｅ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌ。 （２）配列番号、３の情報 （夏）配列特徴： （Ａ）配列の長さ＋４０アミノ酸 （Ｂ）配列の型・アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類・ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号、３ Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ｌｉｅ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇ１ｎ＾ｓｎ　Ｖａｌ　Ｌ ｙｓ　Ｐｈｅ　Ｖａｔ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｔ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｉ ｌｅ　ｌｌｅ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ＾ｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｃｙ ｓ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ（２）配列番号、４の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ＋２１アミノ酸 ＣＢ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｘｌ）配列・配列番号・４ Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｉ（ｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ 　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａ！■ Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ａｒｇ（２）配列番号・５の情報 （１）配列特徴： （Ａ）配列の長さ　１８アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロン−直鎖状 （１１）配列の種類　ペプチド （ｘｉ）配列　配列番号、５ Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ（２）配列番号二６ の情報 （１）配列特徴・ （Ａ）配列の長さ、１９アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ＩＩ）配列の種類　ペプチド （ｘｉ）配列、配列番号　６ Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ｌｌｅ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ（２）配列番号　７ の情報 （１）配列特徴 （Ａ）配列の長さ、ｌｌアミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：ペプチド （ｘｉ）配列・配列番号・７ １１ｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　 Ｌｅｕ　Ｐｈｅｌ　５　１０ （２）配列番号：８の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ＋１３アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トボロンー：直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （×１）配列　配列番号二８ Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｌａ（２）配列番号・９の情報 （ｉ）配列特徴。 （Ａ）配列の長さ＋２３アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ペプチド （ｘｉ）配列：配列番号　９ Ｖａｔ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　 Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓｌ　５　１０　１５ Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｖａｔ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ（２）配列番号：１ ０の情報 （ｉ）配列特徴： （＾）配列の長さ：１２アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー、直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号、１Ｏ Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　 Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕｌ５１０ （２）配列番号・１１の情報 （１）配列特徴： （Ａ）配列の長さ：２２アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎮状 （１１）配列の種類、ペプチド （ｘｌ）配列　配列番号　１１ Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　 Ｇｌｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕｌ　５　１．０　１ ５ Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ（２）配列番号　１２の情報 （ｉ）配列特徴 （Ａ）配列の長さ、１５アミノ酸 （Ｂ）配列の型・アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （目）配列の種類、ペプチド （ｘｌ）配列・配列番号・１２ Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　 Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕｌ　５　１０　１５ （２）配列番号　１３の情報 （ｉ）配列特徴 （Ａ）配列の長さ・１３アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号、１３ Ｈｉｓ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　 Ｃｙｓ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅｌ　５　１０ （２）配列番号：１４の情報 （ｉ）配列特徴・ （＾）配列の長さ　２２アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号：１４ Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ　Ｖａｔ　 Ｇｌｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍｅｔｌ　５　１０　１５ Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ（２）配列番号　１５の情報 （ｉ）配列特徴 （Ａ）配列の長さ　１５アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （１１）配列の種類　ペプチド （ｘｌ）配列　配列番号・１５ Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　ＡＳｎ　Ｍｅｔ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕｌ　５　１０　１５ （２）配列番号用６の情報 （ｉ）配列特徴： （＾）配列の長さ　１３アミノ酸 （８）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トボロノー：直鎖状 （１１）配列の種類、ペプチド （ｘｉ）配列　配列番号・１６ Ｈｉｓ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　 Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅｌ　５　１０ （２）配列番号＝１７の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ・２２アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類　ペプチド （ｘｉ）配列・配列番号＝１７ Ｇｌｕ　Ａｓｐ＾ｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇ ｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍｅｔｌ　５　１０　１５ Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ（２）配列番号・１８の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ、１５アミノ酸 （Ｂ）配列の型；アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎮状 （１１）配列の種類・ペプチド （ｘｉ）配列：配列番号：１８ しｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ　 Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕｌ　５　１０　１５ （２）配列番号：１９の情報 （ｉ）配列特徴 （Ａ）配列の長さ＝１３アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （１１）配列の種類：ペプチド （ｘｉ）配列・配列番号：１９ Ｈｉｓ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　 Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ（２）配列番号、２０の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ：　１７０３塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数、一本鎖 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （■）配列の種類：　ｃＤＮ＾ （１ｘ）配列の特徴： （Ａ）特徴を表す記号：　ＣＤ５ （Ｂ）存在位置・　１１４．．１１７５（Ｘｌ）配列：配列番号　２０ ＧＡＣＴＧＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＧＧＧ　ＡＧＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＡＣＧ ＡＴＣＴＡ　ＴＣＴＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣ６O ＴＣＴＧＴＧＴＴＴＧ　ＡＡＡＡＣＴＴＴＧＡ　ＧＣＡＡＡＴＣＡＡＣＴＧＣＣ ＣＧＴＣＣＴ　ＣＴＡＡＣＡＧＣＡＡ　ＡＡＧ　ＡＴＧ　１P６ ｅｔ ■ ＧＧＡ　ＡＧＴ　ＧＧＡ　ＡＴＴ　ＡＧＴ　ＴＣＡ　ＧＡＧ　ＡＧＣＡＡＧ　Ｇ ＡＧ　ＴＣＡ　ＧＣＣＡＡＡ　ＡＧＧ　ＴＣＣＡＡＡ　１６S Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　 Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　ＬｙｓＧＡＡ　ＣＴＧ　Ｇ ＡＧ　ＡＡＧ　ＡＡＧ　ＣＴＴ　ＣＡＧ　ＧＡＡ　ＧＡＴ　ＧＣＴ　ＧＡＡ　Ｃ ＧＡ　ＧＡＴ　ＧＣＡ　ＡＧＡ　ＡＣＴ@２１２ Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　 Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ａｒｇ　ＴｈｒＧＴＧ　ＡＡＧ　Ｔ ＴＧ　ＣＴＧ　ＣＴＡ　ＴＴＡ　ＧＧＡ　ＧＣＡ　ＧＧＴ　ＧＡＡ　ＴＣＴ　Ｇ ＧＡ　ＡＡＡ　ＡＧＴ　ＡＣＴ　ＡＴＴ@２６０ Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　１ｌｅＧＴＴ　ＡＡＡ　Ｃ ＡＡ　ＡＴＧ　ＡＡＧ　ＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧ　ＡＡＴ　ＧＧＴ　ＴＡＣＡ ＧＴ　ＡＡＡ　ＣＡＡ　ＧＡＡ　３０８Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｌｙ ｓ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　ｔｌｉｓ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌ ｙｓ　Ｇｌｎ　Ｇｌ■ ＴＧＣＡＴＧ　ＧＡＧ　ＴＴＴ　ＡＡＡ　ＧＣＡ　ＧＴＧ　ＧＴＴ　ＴＡＣＡＧ Ｔ　ＡＡＣＡＣＧ　ＴＴＧ　ＣＡＧ　ＴＣＣＡＴＣ３５６Ｃｙｓ　Ｍｅｔ　Ｇｌ ｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｖａｔ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｔｈ ｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　１ｌｅＣＴＧ　ＧＣＣＡＴＴ　ＧＴＧ　ＡＡＡ　 ＧＣＣＡＴＧ　ＡＣＴ　ＡＣＡ　ＣＴＡ　ＧＧＧ　ＡＴＴ　ＧＡＴ　ＴＡＴ　Ｇ ＴＣＡＡＴ　４０S Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　 Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　ＡｓｎＡＧＡ　ＡＴＧ　Ｃ ＡＴ　ＧＡＡ　ＡＧＴ　ＣＴＴ　ＣＡＣＣＴＣＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴ 　ＡＡＴ　ＣＡＣＡＡＧ　８８４ＣＣＧ　ＡＧＡ　ＡＧＴ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　Ｇ ＡＣＣＡＡ　ＣＡＡ　ＣＴＧ　ＣＴＴ　ＣＴＣＴＣＣＡＴＧ　ＧＣＡ　ＡＡＣＡ ＣＡ　４５２Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｇｌ ｎ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｍｅｔ＾Ｉａ　Ａｓｎ　Ｔｈｒｌｏｏ　 １０５　１１０ ＣＴＡ　ＧＡＡ　ＧＡＴ　ＧＧＴ　ＧＡＣＡＴＧ　ＡＣＧ　ＣＣＴ　ＣＡＧ　Ｔ ＴＧ　ＧＣＴ　ＧＡＡ　ＡＴＡ　ＡＴＴ　ＡＡＡＣＧＴ　５O０ Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　 Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　ｌｉｅ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ＾「ｇＣＴＧ　ＴＧＧ　ＧＧ ＣＧＡＴ　ＣＣＡ　ＧＧＡ　ＡＴＴ　ＣＡＡ　ＧＣＣＴＧＣＴＴＣＧＡＡＡＧＧ 　ＧＣＡ　ＴＣＴ　ＣＡＡ　５４８Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　 Ｇｌｙ　ｌｌｅ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　 Ｓｅｒ　ＧｌｕＴＡＣＣＡＧ　ＣＴＣＡＡＴ　ＧＡＣＴＣＴ　ＧＣＡ　ＧＣＴ　 ＴＡＣＴＡ、ＣＣＴＴ　ＡＡＴ　ＧＡＣＴＴＡ　ＧＡＴ　ＡＧＡ　５９６Ｔｙｒ 　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ 　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　ＡｒｇＣＴＣＡＣＡ　ＧＣＣＣＣ Ｔ　ＧＧＧ　ＴＡＴ　ＧＴＧ　ＣＣＡ　ＡＡＴ　ＧＡＡ　ＣＡＡ　ＧＡＣＧＴＴ 　ＣＴＡ　ＣＡＴ　ＴＣＣ６４４Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｔ ｙｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｈ ｉｓ　５ｅｒＣＧＧ　ＧＴＧ　ＡＡＡ　ＡＣＣＡＣＴ　ＧＧＴ　ＡＴＣＡＴＴ　 ＧＡＡ　ＡＣＴ　ＣＡＡ　ＴＴＣＴＣＣＴＴＴ　ＡＡＡ　ＧＡＣ６９２Ａｒｇ　 Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　ｌｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　 Ｇｌｎ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ１０　、　１８５　１９０ ＴＴＧ　ＡＡＣＴＴＣＡＧＡ　ＡＴＧ　ＴＴＴ　ＧＡＴ　ＧＴＡ　ＧＧＴ　ＧＧ ＣＣＡＧ　ＡＧＡ　ＴＣＡ　ＧＡＡ　ＡＧＡ　ＡＡＧ　７４O Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　ＬｙｓＡＡＡ　ＴＧＧ　Ａ ＴＣＣＡＣＴＧＣＴＴＴ　ＧＡＡ　ＧＧＡ　ＧＴＧ　ＡＣＧ　ＴＧＣＡＴＴ　Ａ ＴＡ　ＴＴＴ　ＴＧＴ　ＧＣＡ　７８８Ｌｙｓ　Ｔｒｐ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　Ｃｙ ｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　ｌｉｅ　ｌｉｅ　Ｐｈ ｅ　Ｃｙｓ　ＡｌａＧＣＣＣＴＡ　ＡＧＴ　ＧＣＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧ　ＧＴＡ 　ＣＴＴ　ＧＴＡ　ＧＡＡ　ＧＡＴ　ＧＡＡ　ＧＡＧ　ＧＴＧ　ＡＡＣ８３６Ａ ｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｍｅｉ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖ ａｔ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　ＡｓｎＴＴＧＡＡＡＧＣＡＴ 　ＴＣＡＡＡＧＴＣＡＴ　ＧＴＣＴＧＴＡＣＴＡ　ＣＡＧＡＡＡＣＴＧＴ　ＡＣ 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ＴＴＡＴＡＡＡＡＣＡ　ＡＡＡＡＡＡＴＴＣＡ　ＣＡＣＡＡＡＡＡＴＡ　ＴＴＡ ＣＴＧＴＧＡＴ　ＡＴＣＡＣＧＴＡＴＡ　ＴＣＴＧＧＧＴＡbＧ　１３４５ ＧＴＴＴＴＣＴＴＧＧ　ＧＧＡＡＴＧＧＡＧＧ　ＧＴＡＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＴ ＧＴＴＣＴＡ　ＡＡＴＣＴＧＡＡＡＴ　ＣＴＧＡＴＧＴＡＴb１４０５ ＴＧＧＴＡＡＣＴＧＴ　ＣＡＣＡＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＡＴＧＣＴＡ　ＣＴＡＡ ＡＧＴＴＴＴ　ＴＴＧＧＡＡＧＴＧＡ　ＧＣＴＧＴＡＡＧＴf　１４６５ ＡＣＣＡＡＴＴＴＴＴ　ＡＡＴＣＡＴＡＧＡＧ　ＴＡＡＡＣＣＴＣＡＧ　ＡＡＴ ＧＴＧＣＴＡＴ　ＡＡＣＡＴＴＧＣＣＣＣＡＧＣＴＡＧＡＴs　１５２５ ＴＴＴＴＧＧＴＣＡＴ　ＣＡＧＣＣＴＴＴＣＡ　ＡＴＴＡＧＧＣＴＧＣＣＡＣＡ ＡＧＣＡＣＡ　ＣＡＣＡＧＴＡＣＡＴ　ＧＣＴＴＴＴＡＴＴf　１６４５ ＡＴＧＧＧＡＡＡＴＴ　ＧＴＡＴＧＴＧＴＡＡ　ＡＡＴＡＡＡＴＡＴＡ　ＴＡＴ ＡＴＡＡＴＡＡ　ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ　ＡＡＡＡＡＡＡＡ@１７０３ （２）配列番号：２１の情報 （ｉ）配列特徴。 （Ａ）配列の長さ：３５４アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー、直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：タンパク質 （ｘｉ）配列：配列番号：２１ Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　 Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　５ｅｒＬｙｓ　Ｇｌｕ　Ｌ ｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇ ｌｕ　Ａｒｇ　Ａｓｐ＾ｌａ　ＡｒｇＴｈｒ　Ｖａｔ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ 　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ 　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ１１ｅ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　 ｌｌｅ　Ｈｉｓ　Ｌｙｓ　Ａｓｏ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｇ１ｎＧ ｌｕ　Ｃｙｓ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｔ ｙｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　５ｅｒ１ｉｅ　Ｌｅｕ　Ａｌ ａ　ｌｌｅ　Ｖａｉ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｍｅ［Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ 　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　ＶａｔＡｓｎ　Ｐｒｏ　ＡｒｇＳｅｒ　Ａｒｇ　Ｇ ｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｍｅｔ　Ａ ｌａ　ＡｓｎＴｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｔｈ ｒ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　ｌｌｅ　Ｉｌｅ　ＬｙｓＡｒｇ 　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ａｌａ 　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｓｅｒ＋３０　１３５　１４０ Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｌａ　 Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　ＡｓｐＡｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔ ｈｒ＾ｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌ ｎ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ＨｉｓＳｅｒ＾ｒｇ　Ｖａｔ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ｉｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　 Ｐｈｅ　ＬｙｓｌＢｏ　１８５　１９０ ＾ｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　 Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　ＡｒｇＬｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔ ｒｐ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃ ｙｓ　ｌｌｅ　ｌｌｅ　Ｐｈｅ　ＣｙｓＡｌａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌ ａ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌ ｕ　Ｇｌｕ　Ｖａ１Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ｈｉｓ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ 　Ｉ（ｉｓ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｈｉ ■ Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　 Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　ＡｓｐＬｅｕ　Ｐｈｅ　Ｇ ｉｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｓ ｅｒ　ｌｌｅ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｒ。 Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　ＬｙｓＡｓｎ　Ｇｉｎ　Ｐ ｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａ ｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　ＴｙｒＳｅｒ　）Ｉｉｓ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｃ ｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａ’ｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　 Ｐｈｅ　Ｖａｔ　Ｐ■■ Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｔ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　 Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　ＧｌｙＬｅｕ　Ｐｈｅ （２）配列番号＝２２の情報 （ｉ）配列特徴・ （Ａ）配列の長さ、３５４アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （１１）配列の種類：タンパク質 （ｘｌ）配列：配列番号　２２ Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　 Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　５ｅｒＬｙｓ　Ｇｌｕ　Ｌ ｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ＾ｌａ　Ａｓ ｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　ＬｙｓＴｈｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ 　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ 　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ１１ｅ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　ｌｌｅ　 ｌｌｅ　Ｈｉｓ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　ＧｌｕＧ ｌｕ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　ｌｉｅ　Ｔ ｙｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　５ｅｒＩｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌ ａ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｙ　ｌｉｅ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　ＡｌａＧｌｕ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ 　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ 　Ａｌａ　Ａｓｐｌｏｏ　１０５　１１０ Ｓｅｒ　ｌｉｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＭｅＬ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　 Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　ＡｒｇＬｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔ ｒｐ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｐ ｈｅ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｌａ＋４５　１５０　１５５　１６０ ＾ｒｇ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　 Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ＡｒｇＳｅｒ　Ａｒｇ　Ｖ ａｌ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　ｌｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌ ｙｓ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｔ　ＬｙｓＡｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｒ ｇ　ＭｅＬＰｈｅ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ 　Ｇｌｕ　Ａｒｇ！９５　２００　２０５ Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　 Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　ｌｌｅ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ＾１ａ　Ａｌａ　Ｌ ｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｇ ｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａ１＾ｓｎ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ｈｉｓ　Ｇｌ ｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　）Ｉｉｓ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｃ ｙｓ　Ａｓｎ　）Ｉ奄■ Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　 Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｓ１P Ｌｅｕ　ＰｈｅＧｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｖａｔ　Ｈ ｉｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　ｌｌｅ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｒ。 Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　ＬｙｓＳｅｒ　Ｇｌｎ　Ｐ ｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｖ ａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　ｌｌｅ　ＴｙｒＳｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｃｙ ｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｐｈ ｅ　Ｖａｌ　ＰｈｅＡｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ 　ｌｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ Ｌｅｕ　Ｐｈｅ （ｉ）配列特徴・ （Ａ）配列の長さ：３５０アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：タンパク質 （ｘｉ）配列：配列番号：２３ Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　 Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕｌ　５　１０　１５ Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　ＬｅｕＬｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌ ｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｔ ｈｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇ１ｎＭｅｔ　Ｌｙｓ　ｌｌｅ　ｌｉｅ　Ｈｉ ｓ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｃｙ ｓ　Ｌｅｕ　ＧｌｕＰｈｅ　ｌｌｅ　Ａｌａ　ｌｌｅ　ｌｉｅ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ 　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　ｌ１ｅ Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　 Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ＾ｌａ　ＡｒｇＧｌｎ　Ａｓｐ　Ａｓ ｐ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ａｓ ｐ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕｌｏｏ　１０５　１１０ Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　 ｌｌｅ　Ｉｌｅ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　ＬｙｓＡｓｐ　Ｓｅｒ　Ｇ ｌｙ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｓ ｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｇｌｎ　ＬｅｕＡｓｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌ ｙ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｌｅ ｕ　Ｖａｌ　ＴｈｒＰｒｏ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ 　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ｉｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　 Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　ＰｈｅＡｒｇ　Ｍｅｔ　Ｐ ｈｅ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ａ ｒｇ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｒｐ　ｌ１ｅＨｉｓ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌ ｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　ｌｌｅ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　ｌｉｅ　Ａｌａ　Ａｌ ａ　Ｌｅｕ　５ｅｒ＾Ｉａ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｔ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ 　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ｈｉｓ Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　ｌｉｅ　 Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　ＡｌａＴｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓ ｅｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｔ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ａ ｓｐ　Ｖａｔ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　ＧｌｕＬｙｓ　ｌｌｅ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｌ ａ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｔｙ ｒ　Ａｓｎ　ＧｌｙＰｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ 　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔ’！ｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｅ ■ Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ　ＡｒｇＡｒｇ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇ ｌｕ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　ＴｈｒＣｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈ ｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ｐｈ ｅ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　ＴｈｒＡｓｐ　ｌｌｅ　ｌｌｅ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ 　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ （２）配列番号　２４の情報 （１）配列特徴 （Ａ）配列の長さ　３５４アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （ロ）トボロノー、直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：タンパク質 （ｉｘ）配列の特徴： （Ｄ）他の情報：　Ｘａａで表示した位置は、非保存性アミノ酸を意味する。 （ｘｌ）配列：配列番号：２４ Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇａｙ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｘａａ　 Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｘａａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　５ｅｒ１　５　ｔｏ　１５ Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　ＡｒｇＴｈｒ　Ｖａｌ　Ｌ ｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　ＧＩｒＧＩｕ　Ｓｅ ｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ１１ｅ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ 　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ 　Ｘａａ　ＧｌｕＧｌｕ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　 ｌｉｅ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　５ｅｒ１ １ｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｔ ｈｒ　・ｈｅｕ　Ｇｌｙ　ｌｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｘａ■ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｘａａ　Ａｒｇ　 Ｘａａ　、Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ａｓ■ ｌｏｏ　１０５　１１０ Ｔｈｒ　ｌｌｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　 Ｇｌｕ　：Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｇｌｕ　ｌｌｅ　Ｉｌｅ　Ｘａ■ Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　ｌｌｅ　Ｇｉｎ　 Ａｌａ　、Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｌａ　５ｅ■ Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｘａａ　 Ｔｙｒ　”ｒｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓ■ ＡｒｇＬｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａ ｓｎＧｌｕ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ＡｒｇＳｅｒ　Ａｒｇ　Ｖａｌ 　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　ｌｌｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ 　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　ＬｙｓＡｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　 Ｍｅｔ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　 Ｇｌｕ　ＡｒｇＬｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｒｐ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇ ｌｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　ｌｌｅ　ｌｌｅ　Ｐｈｅ　ＣｙｓＡｌ ａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｌｅ ｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａ１Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ 　ｔｌｉｓ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　Ｌｅａ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓｅ ｒ　ｌｉｅ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｈｉ■ ２４５　２５０　、　２５５ Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　 Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ１、ｅｕ　Ｐｈｅ　 Ｘａａ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　 Ｓｅｒ　ｌｉｅ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　ＰｒB ２７５　２Ｂ０　２８５ Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　ＬｙｓＸａａ　Ｇｌｎ　Ｐ ｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｖ ａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ３０５　３］０　３１５　３２０ Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　 Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　ＰｈｅＡｓｐ　Ａｌａ　Ｖ ａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　ｌｉｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌ ｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ１、ｅｕ　Ｐｈｅ （２）配列番号　２５の情報 （１）配列特徴・ （Ａ）配列の長さ　６アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類・ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号：２５ ＬｙｓＴｒｐＩｌｅＨｉｓＣｙｓＰｈｅ（２）配列番号：２６の情報 （ｉ）配列特徴・ （Ａ）配列の長さ　２４塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列、配列番号：２６ ＣＧＧＡＴＣＣＡＡＲＴＧＧＡＴＨＣＡＹＴ　ＧＹＴＴ　２４（２）配列番号： ２７の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ、６アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー、直鎖状 （１１）配列の種類、ペプチド （ｘｉ）配列　配列番号：２７ Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ（２）配列番号・２８の情報 （ｉ）配列特徴 （Ａ）配列の長さ、２５塩基対 （Ｂ）配列の型　核酸 （Ｃ）鎖の数、−重鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （目）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｌ）配列：配列番号、２８ ＧＧＡＡＴＴＣＲＴＣＹＴＴＹＴＴＲＴＴＮ　ＡＧＲ＾＾　２５（２）配列番号 ・２９の情報 （ｉ）配列特徴： （＾）配列の長さ：２５塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数　−重鎖 （Ｄ）トポロジー、直鎖状 （ｉｉ）配列の種Ｑ＋ＤＮＡ （Ｘ］）配列、配列番号　２９ ＧＧＡＡＴＴＣＲＴＣＹＴＴＹＴＴＲＴＴＹ　ＡＡＲＡＡ　２５（２）配列番号 　３０の情報 （１）配列特徴： （Ａ）配列の長さ、６アミノ酸 （Ｂン配列の型、アミノ酸 （Ｄ）トポロジー、直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：ペプチド （ｘｉ）配列　配列番号：３０ Ａｓｐ　Ｖａｌ　’Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ（２）配列番号：３１の情 報 （ｉ）配列特徴＝ （Ａ）配列の長さ：２４塩基対 （Ｂ）配列の型・核酸 （Ｃ）鎖の数ニー末鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列：配列番号：３１ ＧＴＣＴＡＧＡＧＡＹ　ＧＴＮＧＧＮＧＧＮＣＡＲＭＧ　２４（２）配列番号・ ３２の情報 （ｉ）配列特徴： （＾）配列の長さニアアミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 （ｉ　ｉ）配列の種類：ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号：３２ Ｖａｔ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ（２）配列番号：３ ３の情報 （ｉ）配列特徴： （Ａ）配列の長さ：２８塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー末鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （１１）配列の種類：　ＤＮＡ （ｘｉ）配列：配列番号：３３ （Ｃ）鎖の数・−重鎖 （Ａ）配列の長さ　７アミノ酸 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ｃｌ２Ｐ　２１１０２　 Ｃ９２８２−４８ＣＩ２Ｑ　１／４４　６８０７−４８ ＧＯＩＮ　２１／７８　Ｃ８３１０−２Ｊ３３１５３　Ｄ　７０５５−２Ｊ ／／（Ｃ１２Ｎ　１／２１ Ｃ１２Ｒ１：１９） （Ｃ１２Ｐ　２１１０２ Ｃ１２Ｒ１：Ｌ９） Ｉ

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．コードしたガストデューシン生成物が、リガンド／抗リガンド結合活性ある いはガストデューシンへの免疫学特異性の少なくとも一つを有する、ガストデュ ーシンのα−サブユニット、あるいはその断片もしくは変異体をコードする精製 および単離したポリヌクレオチド配列。
2. ２．前記ポリヌクレオチド配列が、ｃＤＮＡ配列あるいはその生物学的複製物で ある請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列。
3. ３．前記配列が、配列番号：２０に記載の配列である請求の範囲第２項に記載の ポリヌクレオチド配列。
4. ４．前記ポリヌクレオチド配列が、ゲノミックＤＮＡ配列あるいはその生物学的 複製物である請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列。
5. ５．前記ポリヌクレオチド配列が、化学的に合成したＤＮＡ配列あるいはその生 物学的複製物である請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列。
6. ６．前記ポリヌクレオチド配列が、ヒトガストデューシンのα−サブユニットを コードする請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列。
7. ７．請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列を含む、生物学的に機能的 なＤＮＡベクター。
8. ８．ガストデューシン発現生成物が、リガンド／抗リかンド結合活性あるいはガ ストデューシンへの免疫学特異性の少なくとも一つを有する、ガストデューシン のα−サブユニット、あるいはその断片もしくは変異体を宿主細胞にて発現を許 容する方法により、請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列によって、 安定裏に形質転換または形質変換した宿主細胞。
9. ９．請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド配列によって、安定裏に形質転 換または形質変換した宿主細胞を、適切な栄養培地で成長させ、および前記細胞 あるいはその成長のための培地からガストデューシン生成物を単離する工程を含 む、リガンド／抗リガンド結合活性あるいはガストデューシンヘの免疫学特異性 の少なくとも一つを有したガストデューシン生成物を生成する、ガストデューシ ンのα−サブユニットポリペプチド、あるいはその断片もしくは変異体を製造す る方法。
10. １０．リガンド／抗リガンド結合活性あるいはガストデューシンへの免疫学特異 性の少なくとも一つを有する、精製および単離したガストデューシンα−サブユ ニットポリペプチド、断片もしくは変異体。
11. １１．ガストデューシンのα−サブユニットに特異的な抗体基質。
12. １２．ガストデューシンα−サブユニットあるいはトランスデューシンα−サブ ユニット、および、生物学的活性体にて、味覚修正剤と関連するＧプロテインβ ならびにγ、およびＧＴＰγＳを有する燐脂質小胞をインキュベートし、そして 、結合率の増加が、該修正剤が味覚刺激物質であることを、また、結合率の減少 が、該修正剤が味覚阻害物質であることを示す、標準結合率との比較において、 前記α−サブユニットによるＧＴＰγＳ結合率を決定する工程を含む、味覚修正 剤を同定する方法。
13. １３．ガストデューシンα−サブユニットあるいはトランスデューシンα−サブ ユニット、および、生物学的活性体にて、味覚修正剤と関連するＧプロテインβ ならびにγ、およびＧＴＰを有する燐脂質小胞をインキュベートし、そして、転 換率の増加が、該修正剤が味覚刺激物質であることを、また、転換率の減少が、 該修正剤が味覚阻害物質であることを示す、標準転換率との比較において、前記 α−サブユニットによるＧＴＰからＧＤＰへの転換率を決定する工程を含む、味 覚修正剤を同定する方法。
14. １４．活性ガストデューシンα−サブユニットあるいはトランスデューシンα− サブユニットを、味覚修正剤とホスホジエステラーゼと共にインキュベートし、 そして、ホスホジエステラーゼ活性の増加が、該修正剤が味覚刺激物質であるこ とを、また、ホスホジエステラーゼ活性の減少が、該修正剤が味覚阻害物質であ ることを示す、標準活性との比較において、前記α−サブユニットによるホスホ ジエステラーゼ活性を測定する工程を含む、味覚修正剤を同定する方法。
15. １５．以下の工程、すなわち、 （ａ）ガストデューシンα−サブユニット、あるいは生物学的活性体にてＧプロ テインβならびにγサブユニットと関連するトランスデューシンα−サブユニッ トを有する洗浄したディスク膜を、味覚修正剤と共にインキュベートし；（ｂ） 前記膜を、光分解条件下に置き；および（ｃ）３８０ｎｍでの吸光度の増加が、 該修正剤が味覚刺激物質であることを、また、３８０ｎｍでの吸光度の減少が、 該修正剤が味覚阻害物質であることを示す、標準との比較において、３８０ｎｍ での吸光度を測定する、 工程を含む、味覚修正剤を同定する方法。
16. １６．ガストデューシンα−サブユニットのリガンド／抗リガンド結合活性の少 なくとも一つを有するペプチドを含む、味覚修正剤。
17. １７．以下の配列、すなわち、 （ａ）配列番号：１、 （ｂ）配列番号：２、 （ｃ）配列番号：３、 （ｄ）配列番号：１１、 （ｅ）配列番号：１２、および （ｆ）配列番号：１３、 からなるグループから選択されたアミノ酸配列を有する、味覚修正用ペプチド。
18. １８．ガストデューシンα−サブユニットとペプチドを接触させ、および、前記 サブユニットに結合したペプチドを単離する、工程を含む、ガストデューシンの ペプチドリガンド／抗リガンドを同定する方法。
19. １９．以下の味覚修正剤、すなわち、 （ａ）請求の範囲第１６項に記載の味覚修正剤、（ｂ）配列番号：１の味覚修正 用ペプチド、（ｃ）配列番号：２の味覚修正用ペプチド、（ｄ）配列番号：３の 味覚修正用ペプチド、（ｅ）配列番号：４の味覚修正用ペプチド、（ｆ）配列番 号：５の味覚修正用ペプチド、（ｇ）配列番号：６の味覚修正用ペプチド、（ｈ ）配列番号：７の味覚修正用ペプチド、（ｉ）配列番号：８の味覚修正用ペプチ ド、（ｊ）配列番号：９の味覚修正用ペプチド、（ｋ）配列番号：１０の味覚修 正用ペプチド、（ｌ）配列番号：１１の味覚修正用ペプチド、（ｍ）配列番号： １２の味覚修正用ペプチド、（ｎ）配列番号：１３の味覚修正用ペプチド、（ｏ ）配列番号：１４の味覚修正用ペプチド、（ｐ）配列番号：１５の味覚修正用ペ プチド、（ｑ）配列番号：１６の味覚修正用ペプチド、（ｒ）配列番号：１７の 味覚修正用ペプチド、（ｓ）配列番号：１８の味覚修正用ペプチド、および（ｔ ）配列番号：１９の味覚修正用ペプチド、からなるグループから選択された味覚 修正剤を、味覚受容細胞に誘導する工程を含む、味覚を修正する方法。
20. ２０．請求の範囲第１１項に記載の抗体基質を、味覚受容細胞に誘導する工程を 含む、味覚を修正する方法。