JPH07505893A

JPH07505893A - 免疫学的機能不全を伴う疾患の治療のための方法および組成物

Info

Publication number: JPH07505893A
Application number: JP5518692A
Authority: JP
Inventors: クライン，エリス・エル
Original assignee: モレキユラー・アールエツクス・インコーポレーテツド
Priority date: 1992-04-22
Filing date: 1993-04-21
Publication date: 1995-06-29
Anticipated expiration: 2018-11-17
Also published as: US5846532A; WO1993020803A1; JP3468519B2; EP0642333A4; IL105498A; EP0642333B1; DE69319341T2; IL105498A0; US5804188A; AU676161B2; CN1091316A; EP0642333A1; ATE167628T1; AU4110493A; DE69319341D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】免疫学的機能不全を伴う疾患の治療のための方法および組成物発明の分野本発明は、免疫学的機能不全を伴う様々な疾患の治療のための方法および組成物に関する。より具体的には、本発明は、免疫学的機能不全を患うヒトもしくは動物に対して非常に低濃度のりポヌクレオチドポリメラーゼもしくはりボヌクレオチドポリメラーゼに関連する化合物を投与する段階を含んでなる、特定の免疫学的疾患の治療に関する。特定の状況においては、グリセリン、グルタミンのような相乗剤もしくは他の相乗剤をリボヌクレオチドポリメラーゼと共に投与して治療活性を増強させることができる。

発明の背景動物もしくはヒトにおける細胞介在性および／または体液性免疫反応の異常機能は、アナフィラキシーではないが特定の疾病組織の異常な標的化をもたらす疾患の発現をもたらすことがある。免疫学的機能不全を伴う疾患は広範囲にわたる症状を引き起こす。免疫不全疾患の例は、様々な悪性疾患、ヘルペス関連性疾患、後天性免疫不全症候群（ＨＩＶ感染）のような免疫標的化を遮蔽する疾患、ならびに、限定されるものでないが、全身性紅斑性狼瘉、関節炎、糖尿病、甲状腺炎、溶血性貧血、萎縮精巣、グツトパスチャー氏疾患、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少症、交感性眼炎、重症筋無力症、グレープ氏疾患、原発性胆汁性肝硬変、慢性攻撃的肝炎、潰瘍性大腸炎、膜糸球体症、皮膚炎、蹄葉炎、慢性糸球体腎炎、ショーグレン氏症候群、レイク−氏症候群、筋炎、全身性硬化症、多発性関節炎、および多発性硬化症を含む、宿主自体が自己破壊性物質を産生ずる疾患である。

これまでは、抗自己反応は有害なものであり、そして、このような反応は通常では起こらないということが信じられていた。近年では、通常の免疫反応は自己− 自己認識を伴うことが明らかにされている。その上、多くの個体は自己抗原と反応する非病原性抗体を産生ずる。その結果、抗自己反応が過剰であるか、あるいは特に有害な免疫反応を生じるかのいずれかの場合にのみ疾患が生じるというのが我々の現行での理解の仕方である。

免疫原（外因性あるいは内因性のいずれかのもの）に対する体液性もしくは細胞介在性反応の内の異常な標的化に起因する疾患状態は過敏症反応により発現される。このような反応は通常では４つのタイプの内の一つとして分類される。

タイプ■：アナフィラキシー反応。これらの反応は肥満細胞上のレセプターに対して結合するＩｇＥ抗体により介在される。抗原との架橋結合が生じる際にＩｇＥ抗体が肥満細胞を刺激して、アナフィラキシ−に特有な症状を引き起こすことがある多大な数の薬剤学的活性物質を放出させる。抗原による誘発に対するこれらの反応は即時的なものであり、そして生命を危険にさらす可能性がある。タイプＩ反応の例には、アレルギー性鼻炎、胃腸アレルギー、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、ならびにウマの慢性肺気腫および蹄葉炎があるが、これらに限定はされない。

アナフィラキシ−反応を伴う自己免疫性疾患は乳牛での「牛乳アレルギ−」である。

タイプＩＩ　細胞毒性（細胞溶解性）反応。これらの細胞表面反応は、補体カスケードを活性化して細胞の破壊を誘導する、抗原とＩｇＭおよび／またはＩｇＧとの相互作用に起因する。タイプＩＩ反応の例には白血球減少症、新生児の溶血性疾病、疾患、およびグンドバスチャー氏疾患があるが、これらには限定されない。細胞毒性／細胞溶解性反応を伴う自己免疫疾患は溶血性貧血、血小板減少症、および甲状腺炎である。

タイプロ：免疫複合体反応。タイプ■反応は、抗原とＩｇＧもしくはＩｇＭの巨大な複合体が循環内もしくは組織内に蓄積して補体を凝固させる際に生じる。顆粒球は補体凝固部位に引き寄せられ、そしてそれらの顆粒から障害性溶菌酵素を放出する。このタイプの反応の例は血清の病気である。タイプ■反応を伴う自己免疫疾患には、全身性紅斑性狼癒、慢性糸球体腎炎、およびリューマチ性関節炎がある。

タイプ■、細胞介在性免疫性（ＣＭＩ　）反応、すなわち遅延型過敏症（ＤＴ）Ｉ）。最初の三つのタイプの免疫反応とは対照的に、この過敏症反応は抗体よりはむしろＴ細胞により介在される。活性化されたＴ細胞は、局所的な組織損傷を引き起こすマクロファージ、Ｋ細胞、およびＮＫ細胞の蓄積および活性化をもたらすことがあるリンフ才力インを放出する。

この反応は、抗原による誘発の（＆１−２日で生じることがある。タイプ■の反応には、接触性皮膚炎、結核症、アレルギー性脳炎、甲状腺炎、および原発性同種移植片拒絶があるがこれらには限定されない。自己免疫性疾患である若年型慢性糖尿病はこのタイプの反応を伴うことがある。

正常な環境下においては、先のタイプの反応すべては疾患からの保護を個体に提供する。同じ基盤の細胞性および分子性機構を通して操作されるにもかかわらず、過敏症反応は宿主に損害を与える病的に拡大された、すなわち不適切な反応を意味する。したがって、先に概要を記載した疾患発現の多くは、抗自己疾患または「自己免疫性」疾患と称されている。

最近では正常な免疫反応が自己−自己認識を伴うことが明らかにされている。これらの認識は、免疫細胞が非病原的方式において自己抗原と反応する結果生じるものである。疾患状態は、抗自己反応が過剰であるか、あるいは特に有害な免疫反応を引き起こすかのいずれかの場合に生じる。例えば、ＴおよびＢ細胞の多くの自己反応性クローンは正常状態において存在するものの、これらは恒常性機構により調節されているというのが最近の考え方である。自己反応性クローンの活性化および自己免疫疾患が誘導されるのはこれらの調節機構の故障のためである。

Ｂリンパ球およびそれらの子孫は抗体産生の責務を担ってはいるが、はとんどの状況下においてそれらは抗体分泌性細胞への活性化および分化のためにヘルパー下リンパ球の機能を必要とする。その上、ヘルパーＴ細胞およびそれらの誘導体産物は免疫反応を抑制方向に調節することができるようでもある。Ｔ細胞集団が自己耐性である場合、これが原因で、自己抗体産生性細胞へと分化することができるＢ細胞が、増殖および分化から妨げられることがある。自己耐性機構における欠損は、免疫経路における数々の段階の任意の場所で生じることがある。

病原性自己抗体はこれまでにはＴ細胞によりくい止められていたのであるが、これをを産生することができるようになっているＢ細胞を有する個体は、このような状況下においては大量の有害抗体を産生ずるに至ることがある。疾也を引き起こすが否かを決定するのは自己抗体の量であるため、免疫調節および免疫刺激の量的側面は、程度の軽い免疫異常を有する比較的健康な状態とそれに相対する疾患発症との間の平衡にとっては重大なことである場合がある。

そのうえ、強力な免疫刺激が正常な調節機構を制圧し、そしてＴ細胞が通常は必要としないか、またはＴ細胞によって調節されているのではない抗体および自己抗体の産生ををＢ細胞に行わせることがある。このような刺激の例には、移植片に対する宿主の疾患（同種異型の骨髄移植後のもの）、あるいは多様な強力なポリクローナル性免疫活性化因子（内毒素）もしくはＢ細胞を刺激化するつ・イルス（エプスタイン−バールウィルス）のいずれかによる刺激がある。奇妙なことに、これらの同じ抗原は治療に役立つことも証明されることがある。エンテロトキシン（ｅｎｔｃｒｏｔｏｘｉｎ）はマウスにおける重篤な自己免疫性ループス腎炎を低減することが示され、かつ実験的アレルギー性脳を髄炎から動物を保護していた。例えば毒素のようなある物質のだがだが数百の分子が免疫細胞間の連絡およびその複製の引き金となることがある。

先に記載したような抗自己反応が過剰である場合の自己免疫状態の一例は全身性紅斑性狼１（ＳＬＥ）である。病因が未だに知られていないこの疾患は、核、細胞質、および細胞膜の抗原決定因子を始めとする多様な自己抗原により特徴付けられる。この疾患に関する特有症候である臨床的もしくは検査上の異常性は一つだに存在しない。抗ＤＮＡ抗体はＳＬＥを患う患者の約７０％において生じているが、個々の也者はそれぞれの臨床症状および検査所見において著しい可変性を示す。この結果、基準が開発され、そしてこの基準に対して試しに改変を加えて、全身性紅斑性狼癒を患う患者を包含し、限定されるものでないが、リューマチ性関節炎、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、およびショーグレン氏症候群を始めとする他の疾患を患う患者を除外するようになっている。

各種患者により発現される臨床兆候および症状においてはおびただしい程の可変性が存在する。ある場合には、疾患活性が高くなっている期間が疾患活性の下がっている数カ月もしくは数年に及ぶ期間と入れ替わる。このような可変性のため、予後および治療法に対する個別化された対処法が要求される。全身性紅斑性狼癒を患う役人かの患者は大量の抗ＤＮＡを有し、かつＬＥ細胞テストも陽性を示す一方で、他のものはそうはならない。臨床的スペクトラムの一端には、めまい、関節痛、日光に対する感受性、皮疹、および抗核抗体により恐らく特徴づけられる緩和な疾病を患う患者が存在する。このスペクトラムの別の一方端には、迅速に進行する腎臓の炎症性疾患もしくは重篤なＣＮＳ機能不全を発現する個体が存在する。大半のものは、はとんどもしくは全く治療を必要としない最も緩和な形態と、集中治療を必要とする主要器官の重篤な併発症状を伴う患者との間の節部に含まれる。自発性突発性全身性紅斑性狼癒に加え、この疾患は特定の薬物によってヒトにおいて誘導されることがある。多くの他の動物、つまり、イヌ、ネコ、ミン乞ウマ、およびマウスは全身性紅斑性狼癒様の症状を発症する。

関節炎、特にリューマチ性関節炎はもう一つの炎症性自己免疫疾患である。遺伝的および環境的因子がこの疾患の進行を決定するというのが一般的な仮定事項である。これは典型的には四肢における一つもしくは複数の関節の疼痛、圧痛、および腫脹として始まる。古典的には併発箇所は対称的であるとされているが、一般的には優性側部においてより重篤になる。手および足の小関節、特に近位指節間、中足指節、および中手指節関節に併発が生じるが、手首、足首、膝関節、ひじ、および股関節の併発もやはり一般的である。疾患開始時点においてリューマチ性因子および抗核抗体が陽性を示す患者も、悪影響を及ぼす疾患が内在しているというより大きな可能性を抱えている。皮膚潰瘍は最も一般的な細網性発現である。リューマチ性因子についての高力価陽性を示すテスト結果、循環性免疫複合体の存在、および緩和に抑制されている補体力価が全身性発現を示す患者の特徴である。ウマの後脚膝部における飛節腫は類似する病因によるものである。

今日までには、免疫機能不全により引き起こされるほとんどの疾患の満足の行く治療法は存在していない。必要とされるのは、他の副作用を引き起こすことなしにこれらの疾患の症状を軽減するのに効果的な方法および組成物である。この方法は安全であり、かつ広範囲にわたるこれらの疾患に関連する症状の治療において効果的であるべきである。

発明の要約本発明は、免疫不全ならびに異常な体液性および細胞関連性免疫疾患に関連する疾患状態の症状を軽減するための方法およびに組成物を提供する。本発明は、免疫学的機能不全を患うヒトもしくは動物に対して、有効な用量のりボヌクレオチドポリメラーゼあるいはその断片もしくは誘導体を投与することを含んでなる。

好ましいりボヌクレオチドポリメラーゼはＲＮＡポリメラーゼである。有効な用量は極端に低く、そしてリボヌクレオチドポリメラーゼに対するアナフィラキシ −反応のような副作用を引き起こすことがない。そのうえ、ヒトもしくは動物に対して投与されるＲ　Ｎ　Ａポリメラーゼの用量は一般的には抗体反応を誘発しないであろう。

免疫機能不全を患うヒトもしくは動物に対する極端に低い量のりボヌクレオチドポリメラーゼの投与が免疫機能不全の症状の鎮静もしくは除去を生じることを発見した。リボヌクレオチドポリメラーゼは相乗剤と組み合わせて投与してその治療効果を増強することができる。これらの相乗剤の例にはグリセリン、グルタミン、ヒスタミン、およびノイラミニダーゼがあるが、これらには限定されない。

したがって、免疫学的機能不全を併発する疾患を治療するための方法および組成物を提供することが本発明の一つの目的である。

全身性紅斑性狼瘉の治療のための方法および組成物を提供することも本発明のもう一つの目的である。

蹄葉炎の治療のための方法および組成物を提供することも本発明のまた別の目的である。

皮膚炎の治療のための方法および組成物を提供することも本発明のまた別の目的である。

関節炎の治療のための方法および組成物を提供することも本発明のまた別の目的である。

ボイトーアオヤナギーハラダ症候群のような自己免疫性網膜症疾患の治療のための方法および組成物を提供することも本発明のまた別の目的である。

悪性疾患の治療のための方法および組成物を提供することも本発明のまた別の目的である。

ＡＩＤＳのような特定の感染性病、中を治療することも本発明のまた別の目的である。

これらの目的および他の目的、特徴、および利点は、開示される態様および添付される請求の範囲の以下に示す詳細な記述の精査後に明らかになるであろう。

図面の簡単な説明図１は、コラーゲンＩＩでの免疫化に対するＤＢＡ／ＩＪマウスの反応のグラフ表示である。

図２は、コラーゲンＩＩでの免疫化に対するＤＢＡ／ＩＪマウスの抗体反応のグラフ表示である。

図３は、コラーゲンＩＩの投与に対する反応における、固着した関節を有するＤＢＡ／■Ｊマウスの様々な治療法に対する反応のグラフ表示である。

詳細な記述本明細書内において用いられる場合、用語「リボヌクレオチドポリメラーゼ」は、リボヌクレオチドポリメラーゼ活性を有するか、もしくはリボヌクレオチドポリメラーゼ活性を有する蛋白質に実質的に類似するアミノ酸配列を有する任意の蛋白質を意味する。リボヌクレオチドポリメラーゼにはリボ核酸（ＲＮＡポリメラーゼ）ポリメラーゼおよびリノく一ストランスクリブターゼが含まれるが、これらには限定されない。本発明の実施において使用することができるリボヌクレオチドポリメラーゼは、不活性化された酵素もしくはその酵素の一部分であることもできる。

用語「免疫学的機能不全」は、免疫反応を開始させる免疫系およびそれに関連する系の不全、および／または外因性もしくは内因性免疫原性物質の結果としての体液性および細胞介在性損傷により特徴付けられる任！の免疫不全性疾患を含むが、これらには限定されない。この用語はまた、自己免疫性疾患において観察されるもののような常軌を逸した免疫反応をも含む。

本明細書内において使用されている用語「リボヌクレオチドポリメラーゼの治療的に有効な量」は、免疫学的機能不全性疾患の症状を鎮静もしくは除去するに十分なりポヌクレオチドポリメラーゼの量を意味する。

代表的な好ましい用量および濃度は本明細書中において開示されている。

本明細書内において使用される用語「相乗剤」はＲＡＮポリメラーゼの治療効果を増強させるであろう任意の化合物もしくは組成物を意味する。

本発明は、免疫機能不全に関連する疾患状態の症状を軽減するための方法および組成物を提供する。本発明は、リボヌクレオチドポリメラーゼあるいはその断片もしくは誘導体の効果的な用量を、免疫機能不全を患うヒトもしくは動物に対して投与することを含んでなる。効果的な用量は極端に低く、かつ、リボヌクレオチドポリメラーゼタイプの蛋白質に対するアナフィラキソー反応を引き起こすことがない。

実際には、本発明は、免疫機能不全を患うヒトもしくは動物に対して、用量単位当たり約１０−２ｍｇを下回るリボヌクレオチドポリメラーゼの投与を含んでなる。リボヌクレオチドポリメラーゼもしくはその活性誘導体の好ましい用量は、約１０−２ｍｇから１０−１１ｍｇまでの間である。

リボヌクレオチドポリメラーゼのより好ましい用量は、約ｔｏ−３ｍとＩＱ　− ７ｍ　ｇとの間である。リボヌクレオチドポリメラーゼの最も好ましい用量は、約１０−’ｍｇである。周期的日用量の総量は被検者当たり約ＩＱ　−２ｍ　ｇを越えないことが好ましく、そして約５Ｘ１０−”から１．０−’ｍｇまでを越えないことがより一層好ましい。したがって、本発明は、溶液中に約１０−３から１０”ｍｇ／ｍｌまでの間の濃度で存在するりポヌクレオチドポリメラーゼもしくはその活性誘導体の溶液を含んでなる組成物を含む。

酵素の源、精製の方法のような因子およびに他の因子に依存してロット毎および製造業者毎にＲＮＡポリメラーゼの特異活性における有意な変化が生じることがあるため、ＲＮＡポリメラーゼの用量は「活性の単位」として表現することが好ましい。ＲＮＡポリメラーゼについての活性の単位の定義はＲＮＡポリメラーゼの源に依存して変化する。用語「単位」は個々の製造業者により特定される。幾つかの製造業者により引用されている定義、およびリバーストランスクリプターゼを含んで引用されている定義を以下に提供する。

Ａ、　大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌ　１）Ｋ−１２（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ社）からのＲＡＮポリメラーゼ：「一単位は、ウシの胸腺ＤＮＡを鋳型として使用して、ｐＨ７，９，３７℃下１０分間で、１，０ナノモル（１０−’モル）のＰＰを放出するであろう。」Ｂ、　Ｔ、　ＲＮＡポリメラーゼ（バクテリオファージＴ３がらのＲＮＡポリメラーゼ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｉｎｃ、社）＝「一単位は、Ｔ、プロモーターを含むプラスミドを使用して、３７℃下６０分間で、５０μｌのアッセイ緩衝液中において、１ナノモルのＡＭＰの酸不溶性産物内への取り込みの触媒反応をもたらす。」Ｃ，ＡＭＶリバーストランスクリプターゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃ。

ｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）・「一単位は、０．０５ＭのＴｒｉｓ−ＨＣＬｐＨ８，３，４０ｍＭのＫＣＩ、７ｍＭのＭｇＣ＋、、１０ｍＭのＤＴＴ、Ｏ，１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、０．５ｍＭの３８−ｄＴＴＰ、および１３０μｇ／ｍｌのｒ　Ａ４００　：　ｄ　Ｔｓｏ、１ｏ：１、中において、３７℃下１０分間で、酸不溶性形態内への１ナノモルのｄＴＴＰの取り込みの触媒反応をもたらすのに必要な酵素の量として定義される。」Ｄ、　Ｍ−ＭＬＶリバーストランスクリブターゼ、ＲＮエース　Ｈマイナス（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）＝［一単位は、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣＩ、　ｐＨ８，３，４０ｍＭのＫＣＬ、１０ｍＭ（ＤＤＴＴ、７ｍＭ（７）ＭｇＣ＋２、Ｏ，１ｍｇ／ｍｌのＢｓＡＳｏ、５ｍＭの３８−ｄＴＴＰ、および１３０μｇ／ｍｌのｒ　Ａ４ｏｏ　：　ｄ　Ｔｓｏ、１０：１、中において、３７℃下１ｏ分間で、酸不溶性形態内への１ナノモルのｄＴＴＰを取り込む酵素の量である。」　（注・これはＣについてのものと同一の定義であるが、カタログにおいては違う言葉で表現されている。）リバーストランスクリブターゼを提供するＰｒｏｍｅｇａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社は、与えられるロフトのリバーストランスクリブターゼ内の蛋白質の量についての情報を提供していないため、比活性を正確に算出することができない。

Ｐｒｏｍｅｇａ社は単位／ｍｌを提供しており、これは典型的にはＡＭＶのリバーストランスクリプターゼにもいては１ｍｌ当たり２０．０００−２５，０００単位であり、そしてＭ−ＭＬＶのリバーストランスクリブターゼについては１ｍｌ当たり１００゜０００−２００．０００単位である。我々の計算の目的のために我々は蛋白質濃度を１ｍｇ／ｍｌと仮定している。したがって、リバーストランスクリブターゼの比活性はＲＮＡポリメラーゼンの比活性とは非常に異なっている。

また、二つの源のＲＮＡポリメラーゼはそれらの比活性をか′なり異にしている。大腸菌に−１２からのＲＮＡポリメラーゼは１０００−５０００単位／ｍｇの範囲にわたる比活性を有する一方、Ｔ、ＲＮＡポリメラーゼは２００．０００− ４００，０００単位／ｍｇの範囲にわたる比活性を有する。本発明の蛋白質の範囲を計算する際にはこれらの違いを考慮に入れである。

したがって、本発明を実施するに当たり、ＲＮＡポリメラーゼの比活性を測定し、そしてその後、約ｌＸｌ０−’から４．０ｍｇまでの間の蛋白質の範囲に相当する０、０００４単位と４０００単位との間の総活性を有する量の酵素を使用することができる。好ましい範囲のＲＮＡポリメラーゼ活性は、０４から１００単位の間であり、最も好ましい範囲は０．１と１０単位の開の活性の範囲である。

本発明の第二の態様においては、約１０−”ｍｇまでの量のりボヌクレオチドポリメラーゼあるいはその断片もしくは誘導体、ならびに薬剤学的に不活性な成分を含んでなる、リボヌクレオチドポリメラーゼあるいはその断片もしくは誘導体の投与のための賦形剤を含んでなる薬剤学的組成物が提供される。ある好ましい態様においては、その薬剤学的組成物は、約１０−２から約１０−’ｍｇまでの間の量のりボヌクレオチドポリメラーゼあるいはその断片もしくは誘導体を有する。ＲＮＡポリメラーゼが存在する好ましい容積は約０．０５ｍ１と０．５ｍｌとの間である。

しかしながら、他の用量容積は本発明の実施にあたって容認される。

本発明は、２４時間の期間当たり約１０−２ｍｇを越えない量のりポヌクレオチドポリメラーゼの投与を含むが、特定の事例においては、任意の一日において投与されるリボヌクレオチドポリメラーゼの量が好ましい限界を超えることがある。リボヌクレオチドポリメラーゼは液体として投与することができるか、あるいはそれを、リボヌクレオチドポリメラーゼが生分解性もしくは生侵食性マトリックス内に包埋もしくは混合されている固体として投与することができる。このマトリックスは時間放出性マトリックスであることがある。これらのマトリックスは通常の当業者にはよく知られており、そして本発明においては重要ではない。

リボヌクレオチドポリメラーゼは皮下注射により、あるいは舌下経路により投与することができる。ＲＮＡポリメラーゼも、筋肉的注射、腹膜内注射、もしくは静脈内注射により投与することができる。ＲＮＡポリメラーゼはまた、経皮的にもしくは粘膜を通して投与することもできる。

ＲＮＡポリメラーゼの好ましい投与経路は、皮下注射もしくは舌下経路によるものである。

他の態様においては、リボヌクレオチドポリメラーゼを、その治療効果を増強させるための他の化合物と一緒に投与することができる。免疫系に影響を及ぼす他の分子（共同役）と組み合わせて用いられるリボヌクレオチドポリメラーゼの例には、用量当たり約５Ｘ１０−’ｍｇがら２Ｘ　１０−”ｆｆ１ｇまでの間の用量のグリセリン、用量当たり約２．２Ｘ１０−”ｍｇから２ｘｌＯ−”ｍｇまでの間の用量のグルタミン、約１０−２ｍｇから１０−’ｍｇまでの間の用量のノイラミニダーゼ、あるいは、約１０−２ｍｇから１０−”ｍｇまでの間の用量のヒスタミンがあるがこれらには限定されない。

ある態様においては、賦形剤は不活性容器内に含まれる水溶液である。

他の変法においては、この組成物は座薬の形態を取っている。この組成物の液体形態は皮下的に注射することが好ましいが、注射の他の経路は本発明の一部としてみなされる。そのうえ、この組成物は鼻粘膜のような粘膜を通して投与することができる。液体の担体には食塩水（０，９％のＮａＣ１）中の０．１％フェノールがあるが、これには限定されない。他の薬剤学的に容認される担体を使用してリボヌクレオチドポリメラーゼを投与することができる。

本発明を実施するに当たり使用することができるリボヌクレオチドポリメラーゼには、ＲＮＡポリメラーゼ（ヌクレオチド三リン酸：　ＲＮＡヌクレオチジルトランスフエラーゼ［ＤＮＡ特異的］　、ＥＣ２，７，７゜６）、およびにリバーストランスクリプターゼ（ＲＮＥ特異的ＤＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡヌクレオチジルトランスフェラーゼ［ＲＮ　Ａ特異的］、リバーターゼ、ＥＣ２，７，７，４９）があるが、これらには限定されない。リボヌクレオチドポリメラーゼは酵素として活性であるか、あるいは酵素としては不活性であるかのいずれかであることができることを明記しておくべきである。そのうえ、天然の酵素と実質的に類似するアミノ酸配列を有する蛋白質を本発明の実施に当たり使用することができる。リボヌクレオチドポリメラーゼを異なるリボヌクレオチドポリメラーゼの混合物として投与することができるということも本発明の一部分としてみなされる。リボ核酸ポリメラーゼの源は本発明にとっては重要でないことは了解事項とする。例えば、大腸菌からのＲＮＡポリメラーゼとバクテリオファージＴ３からのものとは両方とも本発明を実行する際に有効である。

リボヌクレオチドポリメラーゼは、限定されるものでないが、筋肉内および皮下経路を初めとする標準的な方法により投与することができる。

リボヌクレオチドポリメラーゼは舌下もしくは鼻内経路により投与することもできる。用量中のりボヌクレオチドポリメラーゼの有効量が低いため、本発明に従う組成物はまた、経皮的、経肛門的、もしくは経口的に投与することもできる。

この用量単位は液体もしくは固体のいずれかであることができる。典型的には、この用量単位を、−日当たり最高約４回まで投与することができるが、特定の事例においては用量をもっと多い回数で投与することができる。

本発明は、以下に示す実施例によりより詳しく説明されるが、これらの実施例は本発明の範囲における制限を課すものとしてはいかなる見方によっても解釈すべきではない。それとは対照的に、本明細書中の解説を読んだ後に、本明細書の精神および／または添付される特許請求の範囲の範鴫から逸脱することなく当業者がひらめく、本発明の様々他の態様、改変、および等個物が頼みにされることがあるということが自明なこととして理解される。

実施例■ コラーゲンタイプＩＩで誘導したＤＢＡ／■Ｊマウスにおける関節炎モデルコラーゲンタイプＩＩ　（ＣＩＩ）をフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）と共に使用して纂歯類動物において炎症性関節炎を誘発させる、関節炎における自己免疫を調査するためのモデルは、最初にＴｒｅｎｔｈａｍ、ｅｔａｌ、、により報告された（Ｔｒｅｎｔｈａｍ、Ｄ、Ｅ、　ｅｔａｌ、、−Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｔｏ　ｔｙｐｅ　ＩＩ　ｃ。

１１μｇｅｎ：ａｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆａｒｔｈｒｉｔｉｓ−１Ｊ、　Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、Ｖｏｌ、１４６、ｐｐ、８５７−８６８．１９７７、を参照せよ）。他のタイプのコラーゲンの注射ならびに完全もしくは不完全なフロインドアジュバントを加えてのコラーゲンの注射では多発性関節炎は誘発されなかった。動物を毎日臨床的に検査することにより、ＣＩＩ−ＣＦＡでの注射後の関節炎の開始の時期は１４から６０日日量あることが確証された。同様にＣＩＩ−ＣＦＡを使用しての純系マウスであるＤＢＡ／１．Ｊ株を使用する後続の調査においては、これらのマウスは４から５週目において炎症性多発性関節炎を発症した。これらの研究もまた、ＣＦＡの非存在下もしくは任意の他のタイプのコラーゲンを使用する場合には動物は関節炎を発症しないことを示した。関節炎の状況が進展すると、最終的には一本もしくは複数本の四肢の固着に至る。コラーゲンタイプＩｌに対する体液性および細胞性免疫反応の両方が関節炎の誘発に関与しているらしい。免疫系は疾病の進展において重要な役割を演じていることが示されている。コラーゲンタイプＩＩのように通常は関節において見いだされる蛋白質に対する自己免疫が、この関節炎の動物モデルにおいても観察された。

ＤＢＡ／ＩＪ７ウスはＪａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社、Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ、から取得した。これらのマウスは７週令から１００週令あった。これらのマウスを２つもしくは３つの群にしてポリカーボネート類の檻の中に入れて保持した。これらのマウスには櫻準的な研究月食を与え、そして水を随意に与えた。これらの研究に使用したコラーゲンタイプＩＩは、Ｔｒｅｎｔｈａｍ、ｅｔ　ａｌ、、において既に記載されているように調製した。対照をとる実験においてＣＩＩを使用する以前に予備実験を行ってＣＩＩが関節炎を誘発することを示した。これらのマウスに、等１のＣＦＡ中に乳化させた１００μｇのＣ１■を含む０１ｍ１を用いた尾部の根元における経皮的注入を施した。

相同のブースターを１５０後に投与した。先に記載したような四肢の腫脹の兆候についてマウスを毎日調査した。動物の四肢の内の一本が固着した（関節を曲げることが不可能な状態）際に関節炎が完全に発現されたものとみなした。これは通常、最初のＣＩＩ注射後３０日から３５日までの間に生じた。

最初のコラーゲン注射の５日前に、各８匹のマウスからなる４つの治療群を引立した。

生理食塩水対照群ジメチルグリジン（ＤＭＧ）で治療したマウスペルナ（Ｐｅｒｎａ）＊で治療したマウスＲＮＡポリメラーゼ［＊：ペルナはニューシーラントのカサガイ（ｌｉｍｐｅｔ）から作られた有望な抗炎症性作用物質である。］研究期間中毎日、各マウスに０．１ｍｌの各テスト用試薬の皮下注射を施した。四肢が固着している１４匹のマウスにはその後にも治療を行い、そして症状の逆転が観察されたが、この１４匹のマウスを除き、生理食塩水対照用マウスが関節炎を発症した時点でこの研究を停止した。

逆転研究のために、各７匹のマウスからなる二つの治療群に、生理食塩水対照もしくはＲＮＡポリメラーゼのいずれかの０１ｍｌの皮下投与を毎日施した。この研究のためのＲＮＡポリメラーゼは、用量当たり０４単位（０１５μｇ）の酵素濃度を使用して調製した。酵素ＩＦＪ液を最初に０．４九のフェノール食塩水中で４時間不活性化させ、その後注射用の滅菌生理食塩水で希釈した。対照用生理食塩水は同様に処理した。

血清サンプルはマウスの後部眼窩側から一週間毎の間隔で採取した。血清を回収し、そしてｉ＆に行われる抗体アッセイのために一２０℃に冷凍保存した。ＤＭＧの用量は１００μｇ／ｋｇ体重であり、そしてペルナの用量は１．３ｇ／ｋｇ体重であった。

最初の炎症性反応の後にリューマチ性関節炎様の状況（関節の固着）が生じるが、この最初の炎症性反応は生理食塩水対照群、ＤＭＧ群、およびベルナ群において観察された。ＲＮＡポリメラーゼでの治療を施した群は炎症性反応ならびに関節炎の状況の誘発が見られながった（図１）。

コラーゲンタイプＩＩに対する抗体は各テスト群に存在していた。関節炎が発現している時期においては、食塩水、ＤＭＧ、およびベルナ群におけるコラーゲンタイプＩＩに対する抗体の力価が急激に高（なっており、関節炎が発症する１、ＩＥＬＩＳＡ単位を上回っていた（図２）。ＲＮＡポリメラーゼでの治療を施した非関節炎群はコラーゲンタイプＥｌ抗体力価の急激な増加を生じなかった。ＲＮＡポリメラーゼ群の抗体力価は関節炎を示すと考えられる１、ＩＥＬＩＳＡ単位を越える程には上がらなかったが、徐々に上昇し、その後、１．ＩＥＬＩＳΔ 単位レベル以下の力価に下降した。

ＣＩＩての注射の結果として関節炎を発症したＤＢＡ／ＩＪマウスに対して低レベルのＲＮＡポリメラーゼを毎日投与したところ、３日以内に関節の腫脹および硬直が低減した。これらの動物は５日以内に無症状になり、そして研究を持続させた１０日の間管症状のままであった。関節炎発症後に生理食塩水での治療を施したマウスは１０日ローもその症状が逆転しておらず、そのｔ＆これらのマウスを屠殺した。

コラーゲン誘発から関節炎（関節の固着）を発症した７匹の生理食塩水対照用マウスを幾つかの実験から回収し、そして症状が低下するまで（５日間）毎日０４単位のＲＮＡポリメラーゼで治療した。血液サンプルをＲＡＮポリメラーゼ治療の開始時およびに５日月に採取した。リューマチ様因子はＥＬＩ　ＳＡアッセイにより決定した。この実験の結果を表Ｉに示す。

表１関節炎マウスにおけるリューマチ様因子（ＲＦ）の力価におけるＲＮＡポリメラーゼの効果実施例ＩＩ過去１０年間慢性蹄葉炎を患っている２０歳の混合交配去勢馬を６日間、−日当たり０．　４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。この研究のためのＲＮＡポリメラーゼは、用量光たり０．　４単位（０，１５μｇ）の酵素濃度を使用して調製した。この酵素濃厚液を最初に０．４％のフェノール生理食塩水中において４時間不活性化させ、その後注射用の滅菌生理食塩水で希釈した。実施例■からＸＶＩまでにおけるすべてのＲ，ＮＡポリメラーゼ調製物は同様に調製した。

買い主はこの馬に過剰に食料を与え続けた。この動物は治療３日の後に有意な好転を示し、そして６日以内には無症状となった。この馬は現在まで、つまり４力月の期間までは無症状のままでいる。

実施例■ １２歳のモルガン雌馬はＸ−腺により後脚に飛節腫（関節炎）があると診断された。この馬を６日間、０４単位のＲＮＡポリメラーゼの皮下投与で毎日治療した。この馬は６日以内に劇的な好転を示し、そしてそれ以降の５力月間関節炎の症状を示していない。

実施例■ １８歳の雌馬は視野がひどく制限されており、目の周囲の毛がなく、そして目の周囲の領域は色素脱失がひどがった。この馬は自己免疫性網膜症（ボイトーアオヤナギーハラダ症候群）と診断され、そして−日当たり０．　４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。

治療６日後には、この馬の視野が好転し、目の周囲の色素が再現し始め、そして目の周囲の毛も回１夏した。この馬の状況は治療後２力月半正常のままである。

実施例■ 重度の蹄葉炎、ならびに目の周囲の毛髪欠失および目の周囲の色素欠失により特徴ｆ号けられる自己免疫性網膜症（ボイトーアオヤナギーハラダ症候群）を患う１０歳の雌馬を、０．４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部における皮下役！ｊで毎日治療した。この馬の蹄葉炎および網膜炎の傾向は６日以内に逆転した。

実施例■ 広転囲にわたる液体分泌および炎症ならびに皮膚搬痕の原因となっている脚膝部に重度の穿刺創傷がある９歳の去勢クォーターホースを、連続する６日間、−日当たり０．４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。この馬は６日間の治療に非常によく反応し、その後この馬は機能不全から回復した。

実施例■ 全身性紅斑性狼癒（腫脹閉鎖している目および四本の四肢すべての蹄葉炎であり、これらはベナミン（ｂｅｎａｍｉｎｅ）およびブタジアゾール（ｂｕｔａｄｉａｚｏｌ）のような治療に対して反応を示さなかった）を患う２６歳のアバルーサ去勢馬を、連続する６日間、−日当たり０．４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。この馬の腫脹した目および蹄の炎症は治療３日以内に劇減し、そして治療の６日後にはこの馬はほぼ正常状態になっていた。この馬は好転し続け、そして１週間半以内には無症状となった。５力月後にもこの馬はなお無症状であった。

実施例■ スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）誘発性の膿皮症（スタフィロコッカス感染後に残る腫脹はリンコマイシン（ｌｉｎｃｏｍｙ　ｃ　ｉ　ｎ）およびセファ０スポリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ）で治療した）を患う８週令の子犬二頭を、連続する６日間、−日当たり０４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。腫脹は３日以内にひき、そしていずれの子犬にも腫脹の戻りは見られなかった。

実施例■ ステロイド療法に反応しない重度の股関節異形成を患う１２週令のジャ−マンンエバードを、連続する６日間、−日当たり０．　４単位のＲＮ　Ａポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。治療６日後に異形成はなくなり、そしてこの大は股関節異形成の兆候を示さないままでいる。

実施例Ｘ重度の蹄葉炎を患う３歳のクォーターホースを、８日間の間、−日当たり０．　４単位のＲＡＮポリメラーゼの頚部単回皮下的投与で治療した。

この馬の蹄の炎症は治療６日以内に開城した。残り２日間の治療後、この馬の炎症１ま完全に治癒した。この馬は現在再び競技に参加している。

実施例ＸＩ重度の変性骨瘤疾患を患う７歳のサラブレッドを、６日間の間、−日当たり０．４単位のＲＮＡポリメラーゼの頚部単回皮下投与で治療した。

この馬は完全に回（ｌし、そして現在競技に復帰している。

実施例ＸＩＩ紅斑性狼瘉を患う２５歳の女性を、連続する６日間の間、−日当たり０４単位のＲＮＡポリメラーゼの単回皮下投与により治療した。この女性は治療３日後に関節痛の軽減、狼瘉に随伴する極端なめまいの軽減、および目の周囲の膜および組織の腫脹の減少を顕著に示した。治療６日後にはこの患者は疾患症状を示していななかった。この、ψ者は数カ月間無症状のままであった。

実施例ｘｍ全身性紅斑性狼瘉を、中う３２歳の女性を、連続した７０間の間、０４単位のＲＮＡポリメラーゼの毎日二回の皮下投与で治療した。この女性は治療７日後に疾轡症状を示さなくなり、そして疾患症状の早期の兆候が現れる時点て必要に応じて投与を行うという条件で０４単位のＲＮＡポリメラーゼの舌下投与を行いながら一年以上無症状のままでいる。

実施例ＸＴＶ他の治療に対しで抗治療性を示す、恐らく永続性の後膝関節の炎症を患っているとして診断された１１歳の去勢クォーターホースを、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）から購入したＴ３バクテリオファージからの０．４単位のＲＮＡポリメラーゼからなる０　５ｍｌの皮下注射で一カ月間毎日治療した。この時期にこの馬に投与されていた唯一の薬剤はＴ３ＲＮＡポリメラーゼであった。装蹄師が１９９２年の３月に装蹄した際、この馬は２年間で初めて後ろ足の体重が増加していた。１９９２年の１２月にもこの馬は依然として非常に健康状態が良く、そして以前の後膝関節炎症の症状はいずれも示していなかった。

実施例Ｘｖ股関節異形成を患う８歳のジャーマンシェパードを、０．４単位のＴ３ＲＮΔポリメラーゼ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）からなるＱ、５ｍｌの用量で治療した。連続する６日間の毎日の治療後、この動物の状況は非常に好転した。この動物は無症状のままでいる。

実施例ＸＶＩステロイドもしくは他の療法に反応しないを椎の重度の関節炎を患う２５歳の去勢馬を、０４単位の７３　ＲＮ　Ａポリメラーゼ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）からなるＱ、５ｍｌの用量で治療した。この薬剤の６日間毎日の皮下注射後、この馬の動作の協調および動きの能力はかなり好転し光体のことながら、前述の事柄は本発明の好ましい態様にのみ関連し、本発明における多大な数の改変もしくは変更を、添ｆ」される特許請求の範囲において示される本発明の精神および範囲から逸脱することなく行うことができるということを了解事項とすべきである。

日数ＲＮＡポリメラーゼ−→−一食塩水対照最初の注射後の退散関節炎は１．１を上回る値を示す際に誘発される。

０　１　２３４５　６　７　８　９　ｔｏ　ＩＩフロントページの続き（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。

ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ。

ＣＨ，ＣＺ、　ＤＥ、　ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＬＵ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、　ＮＺ、　ＰＬ、　ＰＴ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＥ。

ＳＫ、ＵＡ

Claims

【特許請求の範囲】

１．ヒトもしくは動物に対して治療的に有効な量のリボヌクレオチドポリメラーゼを投与する段階を含んでなる、ヒトもしくは動物における免疫機能不全性疾患の治療のための方法。
２．リボヌクレオチドポリメラーゼが、ＲＮＡポリメラーゼ、およびリバーストランスクリプターゼ、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、請求の範囲１の方法。
３．リボヌクレオチドポリメラーゼがＲＮＡポリメラーゼである、請求の範囲１の方法。
４．リボヌクレオチドポリメラーゼを周期的に投与する、請求の範囲１の方法。
５．リボヌクレオチドポリメラーゼを皮下注射により投与する、請求の範囲１の方法。
６．リボヌクレオチドポリメラーゼを舌下投与する、請求の範囲１の方法。
７．リボヌクレオチドポリメラーゼを不活性化させてある、請求の範囲１の方法。
８．治療的に有効な量のリボヌクレオチドポリメラーゼを相乗剤と共にヒトもしくは動物に対して投与する、請求の範囲１の方法。
９．相乗剤が、グリセリン、ヒスタミン、グルタミン、およびノイラミニダーゼからなる群から選択される、請求の範囲８の方法。
１０．薬剤学的に容認される担体中に治療的に有効な量のリボヌクレオチドポリメラーゼを含んでなる、免疫機能不全の治療のための組成物。
１１．リボヌクレオチドポリメラーゼが、ＲＮＡポリメラーゼ、およびリバーストランスクリプターゼ、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、請求の範囲１０の組成物。
１２．リボヌクレオチドポリメラーゼがＲＮＡポリメラーゼである、請求の範囲１１の組成物。
１３．薬剤学的に容認される担体が固体である、請求の範囲１０の組成物。
１４．薬剤学的に容認される担体が時間放出性マトリックスである、請求の範囲１０の組成物。
１５．薬剤学的に容認される担体が食塩水である、請求の範囲１０の組成物。
１６．約０．１％の濃度のフェノールをさらに含んでなる、請求の範囲１５の薬剤学的に容認される担体。
１７．リボヌクレオチドポリメラーゼが不活性化されている、請求の範囲１０の組成物。
１８．相乗剤をさらに含んでなる、請求の範囲１０の組成物。
１９．相乗剤が、グルタミン、ヒスタミン、グリセリン、およびノイラミニダーゼからなる群から選択される、請求の範囲１８の組成物。