JPH07507272A - 部位特異性デリバリー機能を有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 刊■ 部位特異性デリバリ−機能を有する医薬組成物技」じＬ団 本発明は部位特異性、特に組織特異性デＩＪ　ノ＜　ＩＪ　−（ｄｅｌｉｖｅｒ ｙ）機能を有する医薬組成物と、その製法をこ関する。

互ｎ街 部位特異性デリノくり一機能を有する医薬組成物（よ、治療または診断における 活性物質の不活性変異体（医薬前駆体）を出発物質とし、体内の特定２；官また （よ組織などの所定部位に到達してから活性物質（こ転換させることがある。こ れとは別に、人体また；ま動物の体内の特定部位に指向性を有する、例え１ｉＩ Ｊポ゛ノーム類などの粒体状の医薬担体、あるいは例え（ｆポリペプチド類など の溶解性巨大分子担体に活性物質を結び付３すてお（為て、この特定部位におい て活性物質を放出する方法もある。

ポリペプチドその他の溶解性巨大分子物質を活１生物質の担体として用いる場合 には、担体と活性物質とを共有結合によって結合すること力（好まし０゜体内の 所望位置に到達すると同時に、この共有結合力（分解して活性物質が放出される 。ところ力（ここ番二問題力（ある。

巨大分子担体の多くは生分解することができるのだが、時として活性物質が正し い形あるいは所望の率で放出されないことがある。スペーサー（ｓｐａｃｅｒ） として働（化合物の分子で活性物質と担体の間を結ぶことによって問題を改善す ることができるが、今度はスペーサーの選択次第で新しい問題が起こってくる。

能率良く、および／またはコントロールしながら活性物質と担体の結合を解くた めには、活性物質の性質、活性物質とスペーサーの共有結合のタイプ、およびス ペーサーの長さや分岐度にも格別の注意を払わなければならない。

また、スペーサーそれ自体、さらにはその分解産物には毒性があってはならない 。

研究が進むにつれて、α−ヒドロキシ酸類とポリ−α−ヒドロキシ酸類とが活性 物質と溶解性巨大分子担体との間のスペーサーとして好適であることが分かって きた。但し、この場合、活性物質は末端カルボキシル基−個を持っていなくては ならない。すなわち、α−ヒドロキシ酸類はエステル化（α−ヒドロキシ酸のα −ヒドロキシ基と活性物質のカルボキシル基との間の）によって活性物質に結合 し、さらに共有結合（α−ヒドロキシ酸のカルボキシル基と巨大分子担体の反応 基との間の）によって溶解性巨大分子担体と結合することができる。

通常、これら両タイプの結合は人体または動物の体内の血流条件に抵抗を示すが 、巨大分子担体が特定目標とする組織に到達すると、活性物質とスペーサーの間 のエステル結合が酵素（エステラーゼ類）によって容易に分解されて、活性物質 が原形（活性）のまま放出される。α−ヒドロキシ酸類とポリ−α−ヒドロキシ 酸類は、毒性がなく、また比較的容易に結合したり結合を解いたりするので、上 述のタイプの医薬組成物のスペーサーを選択するに際しての魅力的な候補化合物 である。

さらに、医薬組成物のスペーサーとして使用するに当たって、α−ヒドロキシ酸 のタイプを変えたり、ポリ−α−ヒドロキシ酸の長さおよび／または分岐度を変 えたりして、所望の組織に対する活性物質のデリバリ−率をコントロールするこ とができることも分かってきた。

免肚立１１ 従って、本発明は部位特異性デリバリ−機能を有する医薬組成物であって、末端 カルボキシル基−個を持つ、少なくとも一つの治療および／または診断用活性化 合物と、溶解性巨大分子医薬担体と、エステル結合を介して活性物質に結合し、 且つ共有結合を介して担体に結合する、活性物質と担体との間のスペーサーとし て機能するα−ヒドロキシ酸またはポリ−α−ヒドロキシ酸とを含有することよ りなる医薬組成物を提供する。

本発明により組成物に使用するスペーサーは、α−ヒドロキシ酸またはポリ−α −ヒドロキシ酸である。

好適例としては、グリコール酸・や乳酸などの一塩基α−ヒドロキシ酸類、およ びリンゴ酸、シトラマル酸、酒石酸、クエン酸などの二基基や三基基α−ヒドロ キシ酸類を挙げることができる。ポリ−α−ヒドロキシ酸類は、二個以上のα− ヒドロキシ酸分子が一緒に結合（相互エステル化）して形成される化合物であり 、好適な例としては、乳酸日単位が一緒に結合してなるテトラ−し−乳酸を挙げ ることができる。

末端カルボキシル基−個を持っていさえすれば、どのような治療および／または 診断用活性化合物でも、α−ヒドロキシ酸類またはポリ−α−ヒドロキシ酸類に よって巨大分子医薬担体に結合することができる。活性化合物として使用するの には、例えば「非ステロイド消炎剤Ｊ　（ＮＳＡＩＤ）が好適であり、その好適 な例としてはアセチルサリチル酸、（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナ フタレン酢酸などを挙げることができる。

溶解性巨大分子医薬担体は、α−ヒドロキシ酸類またはポリ−・α−ヒドロキシ 酸類によって、治療および／または診断用活性化合物に結合することができる。

通常、これらの担体としては、おのおの特定の組織のタイプあるいは特定タイプ の組繊細胞に選択的に目標指向性を示すプロティン類、グリコプロティン類、ポ リペプチド、およびポリクローナルまたはモノクローナル抗体類を挙げることが できる。モノクローナル抗体類は特に、例えば特定タイプの抗原を持つ組織゛に 目標指向性を示す一方、末端糖残基を有するグリコプロティンは、特定タイプの 肝臓細胞に特に目標指向１性を持っている。低分子タンパク質類（ＬＭＷＰ）と して知、られている一群のペプチド類を用いて好成績を得ることができる。

これらの低分子タンパク質類（ＬＭＷＰ）の好適な例としては、リゾチーム、シ トクロムＣおよびアブロチインを挙げることができる。これらのＬＭＷＰは、特 に腎臓に目標指向性を示す。ＬＭＷＰは、糸球体により濾過されて速やかに血流 から取り除かれた後、近位の尿細管細胞（ｐｒ。

ｘｉｍａｌ　ｔｕｂｕｌａｒ　ｃｅｌｌｓ）に定量的（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖ ｅｌｙ）に再吸収され、リソソームによりアミノ酸類に分解する。

治療用活性物質である（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸 をα−ヒドロキシ酸によってリゾチームに結合して医薬組成物を造り、これによ って動物実験を行い好成績を得ることができた。実験結果では、この組成物は実 験動物の血流中では安定であったが、腎臓で切断され、治療用活性物質は活性形 で放出された。さらに、エステル結合はグリコール酸との結合よりも、Ｌ−乳酸 との結合の方がより速やかに切断されること、およびスペーサーの鎖を長くする と酵素による切断が一層速やかになることが立証された。このことは、すべての α−ヒドロキシ酸類とポリ−α−ヒドロキシ酸類がスペーサーとして使用できる こと、およびα−ヒドロキシ酸のタイプを変えたり、α−ヒドロキシ酸とポリ− α−ヒドロキシ酸の長さや分岐度を変えることによりコントロールしながら活性 物質を組織にデリバリ−できる可能性があることを示唆している。

本発明の組成物は、一般的にはα−ヒドロキシ酸またはポリ−α−ヒドロキシ酸 を、一方の側において、α−ヒドロキシ基のエステル化により、末端カルボキシ ル基を有する治療または診断用活性化合物に結合させ、他方の側において、遊離 カルボキシル基との共有結合により溶解性巨大分子担体に結合させることにより 製造する。両反応は、この目的に用いられる常法により実施することができる。

エステル化は例えば、活性化合物の酸塩化物その他の反応性誘導体をα−ヒドロ キシ酸や、ポリ−α−ヒドロキシ酸に直接反応させれば達成することができる。

エステル化の他の方法として、ジシクロへキシルカルボジイミド（ｄｉｃｙｃｌ ｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）の存在下でエステル化を行なうなど、 ペプチド化学の常法を用いても良い。この場合、反応初期では保護基を設けて、 α−ヒドロキシ酸や、ポリ−α−ヒドロキシ酸のカルボキシル基を保護し、エス テル化が終わワてから、常法、例えばトリフルオロ酢酸やアニソールでこの保護 基を取り除くことが望ましい。

巨大分子担体がポリペプチドよりなる場合には、α−ヒドロキシ酸や、ポリ−α −ヒドロキシ酸のカルボキシル基をこのポリペプチド中の末端アミノ酸のアミノ 基に結合しても良い。この結合は、ペプチド化学の常法、例えばカルボジイミド 法や、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミ ド法によって実施することができる。担体がプロティン、グリコプロティン、ま たは抗体からなる場合であっても、同様の手順で実施し得る。

上述のようにして得た結合産物は、常法により精製することができる。これらの 結合産物を医薬として適用する場合、通常の賦形剤、希釈剤、および添加剤を配 合しても良い。

得られた組成物の通常の剤形は、注射組成であるが、他の剤形も本発明の範囲内 とする。用量は組成物に配合されている活性物質によって決定される。

以下本発明を製造例と生物試験により説明する。文中の「ナプロキセン（ｎａｐ ｒｏｘｅｎ）Ｊの語句は、（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン 酢酸を指す。

火」１忽−」− ナプロキセン−し一乳　−リゾチーム １）　Ｌ−乳酸−ＰＭＢ、、Ｌ−乳酸（１，５ｇ、ＩＯｍｍｏｌ）をジメチルホ ルムアミド中に懸濁し、この懸濁液をトリエチルアミン（２０ｍｍｏｌ）とペン タメチルベンジルクロライド（ＰＭＢＣＩ）（ＩＯｍｍｏｌ）で処理した。混合 物を慎重に加熱して溶液とし、−晩室温で保持した。その後、過剰のＩＮ　Ｎａ Ｈｃｏ　ｓを加えたところ、数分以内にエステルが結晶状に析出した。生成物を 採取して、水で洗い真空乾燥した。

収率９５％。融点１１５−１１６℃。

’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１，）：　δ５．２７　（ｍ、２．ＣＩＬ）、　４．２３　 （ｑ、１．ＣＨＣＨｓ）、　２．２７　（ｓ、１５．ＣＨｓ−ＣＱ）、１．４７ 　（ｄ、３．ＣＨ＝Ｃ１１）。

２）ナプロキセン−Ｌ−乳酸−ＰＭ８０　ジクロロメタン１５０ｍ１中にナプロ キセン（２，３ｇ、　ＩＯｍｍｏｌ）、Ｌ−乳酸−ＰＭＢ（２，５ｇ、ＩＯｍｍ ｏｌ）および４−ジメチルアミノ−ピリジン（１゜２２ｇ、ＩＯｍｍｏｌ）を溶 解した。この溶液に、ジクロロメタン５０ｍ１中にジシクロへキシルカルボジイ ミド（２，２７ｇ。

１１ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を加えた。反応混合液を２５℃で攪拌し、反応の 進行状況を薄層クロマトグラフィで追跡した。その後、Ｎ、Ｎ−ジシクロヘキシ ル尿素を濾取した。濾液をＩＭ　ＫＨＳＯ４（２Ｘ　２０ｍ１）、水（２Ｘ　２ ０ｍ１）、および５％ＮａＨＣＯ＝（２ｘ　２０ｍ１）で洗った。有機層を湿気 のない硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空乾燥により蒸発させた。残滓を石油エー テルで洗い、高度の真空下で何時間も保持して分析上純粋な生成物を得た。収率 ７０％。

’ＩＩ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｇ）：　δ７．６９−７．１２（＋ａ、　６．芳香族 ）、　５．２７（ｍ、　２゜ＣＨ２）、５．１０（Ｑ、１．ＣＨＣＨｓ）　（乳 酸））、３゜９４（ｑ、　１．　ＣＨＣＨ，（ナプロキセン））、　３．９３（ ｓ、　３．　ＣＨ３０）、　２．２７（ｓ、　１５．　ＣＨｓ−Ｃｑ）。

１、６１（ｄ、　３．　ＣＨ３ＣＨ（ナプロキセン））、　１．４７（ｄ、　３ ．　ＣＨ，−ＣＨ（乳酸））。

３）ナプロキセン−し−乳酸。　ナプロキセン−し−乳酸−ＰＭＢ（２，３ｇ、 　５ｍｍｏｌ）、アニソール（１２ｍｌ）、およびトリフロオロ酢酸（１０ｍｌ ）の混合物を室温で２分間保持した。

真空下３０℃以下で余剰の試薬を取り除いた。残滓をジクロロメタン（１００ｍ ｌ）中に溶解し、氷（４Ｘ　２０ｍ１）で洗った。有機層をジエチルエーテル（ ２Ｘ　５０ｍ１）で抽出した。

６Ｎ　ｌｌＣｌで酸性にした後、ジクロロメタン（４Ｘ　２５ｍ１）で生成物を 抽出した。洗って乾燥した生成物（ＮａｉＳＯ４）をさらに蒸発乾燥した後、残 滓を５０℃で真空乾燥した。生成物をジクロロメタン／シクロヘキサン中で結晶 化させた。収率７５％。１ＮＮＭＲ（ＣＤＣＩＪ）；　６１０５５−１０５０（ ｂｒｓ、　１゜０■）。

７、５４−６．９３（ｍ、　６．芳香族）、　４．９７（ｑ、　１．　ＣＨＣｌ ｌ５（乳酸））。

３、７６（ｑ、　１．　ＣＨＣＨｓ（ナプロキセン））、　３．６９（ｓ、　ｌ 、　ＣＨｓＯ）。

、、　４０（ｄ、　５．　ＣＩｌ、０ＩＩ（ナプロキセン））、　１．３１（ｄ 、　３．　ｃｎｓｃｔｔ（乳酸乃４）ナプロキセン−し−乳酸−Ｎｌｌ５．　ナ プロキセン−し−乳酸（３０２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１０ ｍ１に溶解し、ジシクロへキシルカルボジイミド（２７７ｍｇ。

１、１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１５分間攪攪絆た後、予め５０℃で２４時間 真空乾燥させておいたＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１１５ｍｇ、　１ｍｍｏ ｌ）を加え、混合物を２４時間攪攪絆た。沈澱物を濾過した後、濾液を真空中で 蒸発乾燥させ、残滓を乾燥へブタンで洗った。この残滓をエチルアセテートに溶 解し、濾過し、真空中で蒸発乾燥させた後、ジクロロメタン／ヘキサン中で結晶 化した。

収率９１％。’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１ｘ）：δ７．５−６．９（ｍ、　６．芳香族 ）、　５．０（ｑ、　ｌ、　ＣＨＣＨｓ（乳酸））、　３．８（ｑ、　１．　Ｃ ＨＣｆｌａ　）、　３．７（ｓ、　３．　ＣＨｓＯ）、　２゜８（ｓ、　４．　 ＣＬＣＬ（ＮＨＳ））、＋、　５（ｄ、　３．　ＣＨａＣＢ（ナプロキセン）） 。

１、３（ｄ、　３．　ＣＨｓＣＩＩ（乳酸））。

５）ナプロキセン−Ｌ−乳酸−リゾチーム。　ナプロキセン−し−乳酸−ＮＨ３ （１４，１ｍｇ、　３４．７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１０ｍ１に溶解 し、ジメチルホルムアミド／ホウ酸塩（０，０２５Ｍ；　ｐＢ８．５）（２０／ 　８０）混合液中でリゾチーム（１００ｍｇ、　６．９５μｍｏｌ）と２時間反 応させた。沈澱物を濾過した後、ゲル濾過により濾液を精製した。さらに、限外 濾過（アミコン；　Ａｍ１ｃｏｎ）と凍結乾燥を行なった後、生成物を一２０℃ で保持した。収率７４％。ナプロキセンの蛍光分析（励起波長３３０ｎｍ、発光 波長（ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）３６０ｎｍ）、およびブラッ ドホード法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）（プロティン試験（Ｂｒａｄｆｏｒｄ、　Ａｎ ａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　７２．２４８　（１９７６））と比較のこと）によ るタンパク質テストによって、モル置換度（ｍｏｌａｒ　５ｕｂｓｔｉｔｕｔｉ ｏｎ　ｄｅｇｒｅｅ）は０．６と決定された。

Ｋ１丘−１ ナプロキセン−エステル誘導体 小規模試験を行い、乾燥ジクロロメタン中に、ナプロキセンの酸塩化物（１０， ８ｍｇ、　０．０４ｍｍｏｌ）、グリコール酸（４ｍｇ、　０．０４ｍｍｏｌ） と、Ｌ−乳酸（５ｍｇ、　０．０４ｍｍｏｌ）またはテトラ−し−乳酸（１２， ６ｍｇ、　０．０４ｍｍｏｌ）を溶解した。これにトリエチルアミン（１１マイ クロリツトル、　０．０８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１８時間攪攪絆た。薄層 クロマトグラフによって反応の進展を追跡し、生成したエステル誘導体を逆相Ｈ ＰＬＣによって精製した。

以上により得た生成物について、い（つかの生物試験を行った。

試ＪｆＬｕ 試験管内試験を行゛い、実施例■で得たナプロキセンエステル類と、ラットの腎 臓ホモジネートから採取したリゾソームライゲート類（ｌｙｓｏｓｏｍｅｌｙｚ ａｔｅｓ）とを各種ｐＨ値によりインキュベートした。実験結果では、エステル をグリコール酸と結合させたものは、ｐＨ５で２４時間以内に８１％のナプロキ センを放出したことを示している。これと対照的に、エステルをＬ−乳酸と結合 させたものは、３０分以内に既に１００％のナプロキセンを放出していた。さら に、ナプロキセンとテトラ−Ｌ−乳酸のエステルの場合、エステル結合は、試験 管内酵素切断に対してさらに鋭敏に反応した。

試」Ｌ−」よ 生体内試験を行い、代謝ケージ（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｃａｇｅｓ）中で雄ウィ スター（Ｗｉｓｔａｒ）ラットを飼養した。ケージ内では餌と水は自由に摂取さ せた。ヘパリン５００ＩＵを添加した後、新たに血漿に溶解した１０ｍｇまたは ｌＩｎｇのナプロキセン−Ｌ−乳酸−リゾチームをラットに静脈注射によって投 与した。一定の時間を置いて血漿サンプルと尿サンプルを採取し、分析した。試 験結果では、注射した生成物は、血漿中で充分安定であり、完全な形で腎臓に到 達したことを示している。さらに、投与量全量が腎臓に再吸収され、局部的に代 謝されてナプロキセンになったことを示している。

国際調査報告　ｏｒＴｚｖ＋　ｒｓ’ａｔｎ、、ｎｒ、＋フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＰＴ、　Ｓ Ｅ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　Ｍ Ｌ、　ＭＲ，ＳＮ、　ＴＤ。

ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＺ、　ＦＩ。

ＨＵ、Ｊ　Ｐ、　ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　Ｎｏ、　Ｎ Ｚ、　ＰＬ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＫ、　ＵＡ、　ＵＳ（７２）発明者　 モーレナール、フリッツオランダ国、エヌエル−９９９９イックスヘー　スティ ッツヴエルト、ハーフェンヴエーク　１ （７２）発明者　マイヤー、ディルク・クラース・フォッケオランダ国、エヌエ ル−９７２４７−エヌフローニンゲン、バルクラーン　１７ （７２）発明者　デ・ゼーウ、ディックオランダ国、エヌエル−９７２２ベーヘ ーフローニンゲン、ヘルペルゾーム　７１

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．部位特異性デリバリー機能を有する医薬組成物であって、 一つの末端カルボキシル基を持つ、少なくとも一つの治療および／または診断用 活性化合物、溶解性巨大分子医薬担体、および エステル結合によって該活性化合物に結合し、共有結合によって該担体に結合し て、該活性化合物と該担体との間のスペーサーとして機能するα−ヒドロキシ酸 またはポリ−α−ヒドロキシ酸 を含有してなる医薬組成物。
2. ２．上記スペーサーが、一塩基または多塩基のα−ヒドロキシ酸またはポリ−α −ヒドロキシ酸よりなることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
3. ３．上記スペーサーが、グリコール酸、Ｌ−乳酸、またはテトラ−Ｌ−乳酸より なることを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
4. ４．上記治療および／または診断用活性化合物が、非ステロイド消炎物質よりな ることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
5. ５．上記治療および／または診断用活性化合物が、（Ｓ）−６−メトキシ−α− メチル−２−ナフタレン酢酸よりなることを特徴とする請求項４に記載の組成物 。
6. ６．上記溶解性巨大分子担体が、プロテイン類、グリコプロテイン類、ポリペプ チド類、またはポリクローナルまたはモノクローナル抗体類よりなることを特徴 とする請求項１に記載の組成物。
7. ７．上記溶解性巨大分子担体が、低分子プロテイン類（ＬＭＷＰ）よりなること を特徴とする請求項６に記載の組成物。
8. ８．上記担体が、リゾチームよりなることを特徴とする請求項７に記載の組成物 。
9. ９．α−ヒドロキシ酸またはポリ−α−ヒドロキシ酸を、一方の側においてα− ヒドロキシ基のエステル化により一つの末端カルボキシル基をもつ治療または診 断用活性化合物に結合させ、他方の側において遊離カルボキシル基との共有結合 により溶解性巨大分子担体と結合させることを特徴とする、請求項１に記載の医 薬組成物の製造方法。