JPH07507330A - ポリペプチドのボンベシン拮抗物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ポリペプチドのボンベシン拮抗物質 本発明は、Ｎ、Ｃ，１，（ＮＩＨ）によって認められた、政府の支持の元で作成 されたものである。アメリカ合衆国政府は、本出願に特定の権利を有している。

本発明の分野 本発明は、ヒトにおける癌性の腫瘍の生育に影響を及ぼす新規なペプチドに関す るものである。さらに詳しくは、本発明は、Ｃ末端の位置にＴａｃＳＭＴａｃ、 またはＤＭＴａｃ残基を有するψ８−９プソイドペプチドであるボンベシン拮抗 物質、その塩、および薬剤組成物、これらのペプチドの合成方法および上記ペプ チドに関する使用方法に関するものである。これらのペプチドは、ボンベシンま たはボンベシン様ペプチドに対する拮抗特性を有する。

本発明の背景 本発明は、ボンベシン若しくはボンベシン様ペプチド（ガストリン放出ペプチド （ＧＲＰ）　、ニューロメジンＣ等の）に対する拮抗特性（以降、ボンベシン拮 抗特性と称する）を有するポリペプチド化合物に関するものであり、これらは、 例えば、ヒト等の温血動物における悪性の病気の治療において有用である。本発 明は、新規なポリペプチド化合物およびそれらの製造方法；上記ポリペプチド化 合物を含む新規な薬剤組成物およびヒト等の温血動物においてボンベシン拮抗効 果を得るのに使用するための上記化合物を含む薬剤の製造方法を含むものである 。

ボンベシンは、カエル、ボンビナ　ボンビナ（Ｂｏｍｂｉｎａ　ｂｏｍｂｉｎａ ）の皮膚から初めて単離されたテトラデカペプチドアミドである（アナスタシ（ Ａｎａｓｔａｓｉ）、エルスパマ−（Ｅｒｓｐａｍｅｒ）およびプツチ（Ｂｕｃ ｃｉ）　、エックスペリエンティア（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ）　、１９７１年 、２７巻、ページ１６６）。ボンベシンはマウスのスイス　３　Ｔ　３　（ｍｏ ｕｓｅ　５ｗ１ｓｓ　３Ｔ３）繊維芽細胞の強力なミトゲンであり（ローゼンガ ルト（Ｒｏｚｅｎｇｕｒｔ）およびシンネット−スミス（Ｓｉｎｎｅｔｔ−３ｍ ｉｔｈ）　、プロシ　ナショル　アカデ　サイ　アメリカ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）、１９８３年、８０巻、ページ２９３６ ）、モルモットの膵臓の豚房からのアミラーゼの分泌を刺激する（ジエンセン０ ｅｎｓｅｎ）、ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）、フォルヵーズ（Ｆｏｌｋｅｒｓ）お よびガードナー（Ｇａｒｄｎｅｒ）　、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、１９８４ 年、３０９巻、ページ６１）ことが知られている。また、ボンベシン様ペプチド はヒトの肺小細胞癌（Ｓ　ＣＬ　Ｃ）細胞によって製造および分泌され（ムーデ ィ（Ｍｏｏｄｙ）、パート（Ｐｅｒｔ）、ガズダー（Ｇａｚｄａｒ）、カーネイ （Ｃａｒｎｅｙ）およびミンチ（Ｍｉｎｎａ）　、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ ）、１９８１年、２１４巻、ページ１２４６）、外因的に加えられたボンベシン 様ペプチドはイン　ビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）でヒトの５ＣＬＣ細胞の生育を 刺激でき（カーネイ（Ｃａｒｎｅｙ）、カッチイタ（Ｃｕｔｔｉｔａ）　、ムー ディ（Ｍｏｏｄｙ）およびミンチ（Ｍｉｎｎａ）　、カンサー　リサーチ（Ｃａ ｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　、１９８７年、４７巻、ページ８２１）、さら にボンベシンおよびＧＲＰのＣ末端領域に特異的なモノクローナル抗体は受容体 へのＧＲＰの結合を遮断し、イン　ビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）およびイン　ビ ボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）の両方でヒトの５ＣＬＣ細胞の生育を阻害できる（カッチ イタ（Ｃｕｔｔｉｔａ）　、カーネイ（Ｃａｒｎｅｙ）、マルシャイン（Ｍｕ　 １ｓｈｉｎｅ）、ムーディ（Ｍｏｏｄｙ）、フエドルＤ　（Ｆｅｄｏｒｋｏ）　 、コイシュラー（Ｆｉｓｃｈｌｅｒ）およびミンチ（Ｍｉｎｎａ）　、ネイチャ ー　（Ｎａｔｕｒｅ）、１９８５年、３１６巻、ページ８２３）ことも知られて いる。

ボンベシン様特性を有するＧＲＰは、ブタの腸から単離された２７アミノ酸を有 する広く市販されているペプチドアミドであり（マクドナルド（ＭｃＤｏｎａｌ ｄ）、ジョーンヴアル（Ｊｏｒｎｖａ　ｌ　１）、ニルノン（Ｎｉｌｓｓｏｎ） 　、ヴアーン（Ｖａｇｎｅ）　、ガテイ（Ｇｈａｔｅｉ）、ブル−ム（Ｂｌｏｏ ｍ）およびマット（輩ｕｔｔ）、バイオケム　バイオフィズ　レス　コミユニ（ Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、）、１９７９年 、９０巻、ページ２２７）、上記ペプチドアミドにおけるＣ末端のアミノ酸配列 はボンベシンのものとほぼ一致している。二二一ロメジンＣは、デカペプチドア ミドであり、その構造はＧＲＰのＣ末端領域における最後の１０アミノ酸が一致 しており、イヌの小腸から単離された（リーブ（Ｒｅｅｖｅ）　、ワルシュ（Ｗ ａｌｓｈ）、チュ（Ｃｈｅｗ）、クラーク（Ｃ１ａｒｋ）　、ホウク（ｔｌａｗ ｋｅ）およびシヴ工り−（Ｓｈｉｖｅｌｙ）　、ジエー　パイオル　ケム（Ｊ、 　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、）、１９８３年、２５８巻、ページ５５８２）。ＧＲＰは、体循環に おけるガストリンの放出等の、様々な生物学的反応を刺激する。また、ＧＲＰは 、３Ｔ３マウスの繊維芽細胞および肺小細胞癌（Ｓ　ＣＬ　Ｃ）細胞の生長因子 としても機能する。このため、ＧＲＰは、オートクラインの生長メカニズムを経 由した５ＣＬＣの発達において直接的な病態生理学的な役割を果たしていると考 えられてきた。

ボンベシン、二二一ロメジンＣおよびＧＲＰのＣ末端ノナペプチドの構造は以下 に示す通りである：ボンベシン　ｐＧＩｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｌｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ −ＮＨ２ニューロメジンＣＨ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａ ｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｍｕ２ ＧＲＰのＣ末端ノナペプチド　Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌ ｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｎｔ１２ 他の両生類のボンベシン様ペプチドに関する調査によって、リドリン（Ｌｉｔｏ ｒｉｎ）　、即ちパプア、ニューギニアのカエルの皮膚内のノナペプチド（ｐＧ ｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｍ ｕ２）が単離され、このペプチドは非常に強ツＪなボンベシン類似体であること が分かっている（ヤスカラ（Ｙａｓｕｋａｒａ）ら、ケム　ファーム　パル（Ｃ ｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｂｕ比）、１９７９年、２７巻、ページ４９２）。ボ ンベシン類似体に関する研究によって、ボンベシンの６から１４番目の位置の９ アミノ酸残基の最小断片がボンベシン活性の全スペクトルを有することが分かっ た。

様々な種類のボンベシン拮抗物質が現在知られている。

ボンベシンとわずかなアミノ酸配列の相同性を有する物質Ｐ　（Ａｒｇ−Ｐｒｏ −Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ −Ｍｕ２）はボンベシンおよびボンベシン様ペプチドの結合を阻害１　２　７． ９　１１ しないが、（Ｄ−Ａｒｇ　、Ｄ−Ｐｒｏ　、Ｄ−Ｔｒｐ　、Ｌｅｕ　）物］、　 ５　７，９　１１ 質Ｐおよび（Ｄ−Ａｒｇ　、Ｄ−Ｐｈｅ　、Ｄ−Ｔｒｐ　、Ｌｅｕ　）物質Ｐ等 のいくつかのし一アミノ酸をＤ−アミノ酸で置換することによって修飾された物 質Ｐの類似体（ムーディ（Ｍｏ。

ｄｙ）ら、フェト　プロシーディンゲス（Ｆｅｄ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ）、 １９８７年、４６巻、ページ２２０１）は、膵臓の豚房細胞内のボンベシンの分 泌を遮断し、スイス　３　Ｔ　３　（Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３）細胞におけるボンベシ ンの成長促進効果に拮抗するが分かった。例えば、（Ｄ−Ｐｈｅ　、Ｄ−Ｐｈｅ １２）のボンベシン、由来の２タイプのボンベシン拮抗物質（コイ（Ｃｏｙ）ら 、ジ工−　パイオル　ケム（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）、１９８８年、２ ６３巻、ページ５０５６およびペプチズ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、１９８９年、１ ０巻、ページ５８７）は、イン　ビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）およびイン　ビボ（ ｉｎ　ｖｉｖｏ）においてボンベシン反応の強力な阻害剤であることが知られて いる。

ハイムブルック（Ｈｅｉｍｂｒｏｏｋ）ら（バイオ　ケム（Ｂｉｏ、　Ｃｈｅｍ 、　）、１９８９年、２６４巻、ページ１１２５８）によって明らかにされた他 のタイプのボンベシン拮抗物質は、Ｃ末端のメチオニン残基がＧＲＰ　（２０− ２７）類似体から欠損した、Ｎ−アセチル−ＧＲＰ　（２０−２６）およびその 類似体である。コイ（Ｃｏｙ）　［ジェー　パイオル　ケム０゜Ｂｉｏｌ、　Ｃ ｈｅｍ、）　、２６４巻、１９８９年、２５、ページ１ンー（６−１４）等のリ ドリン（Ｌｉｔｏｒｉｎ）配列を基礎とした短鎖のボンベシン拮抗物質によって は上記に相当する親ペプチド（ｐａｒｅｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅ）［Ｌｅｕ１３− ｐｓｉ−Ｌｅｕ１４］　ボンベシンよりかなり強い力を示すことを報告した。

ＧＲＰの直鎖の（環状でない）ボンベシン類似体および必要であればＣＨ２−Ｎ Ｈの非ペプチド結合を有する両生類のボンベシンは、ＰＣＴ特許出願Ｗｏ　９０ １０３９８０号に（および関連した類似体がＷＯ９１１０２７４６号）に記載さ れている。これらの類似体は、天然のボンベシンペプチドの阻害剤としての作用 に関していえば、以下の式を有する： ｌａであり；Ａ５はＶａｌであり；Ａ６はＧｌｙであり；Ａ７は旧Ｓであり；お よびＷは以下の式で表わされる：であり；Ｚ２はＣｙｓ若しくはＮｅｔと同一の 側鎖、っまり−はＣｌ−２０アルキルである）である］である。

また、ボンベシンの直鎖のペプチド類似体は、ＥＰ　。

３０９　２９７号にも記載されている。これらのペプチドはＣ末端のＭｅｔ残基 およびＣ末端とその付近の残基との間にｃ　ＣＨ２Ｎ　Ｈ］プソイドペプチド結 合を有する。

本発明の要約 本発明は、強力なボンベシン拮抗物質である新規なポリペプチド；これらのポリ ペプチドの合成方法；および上記ポリペプチドからなる薬剤組成物による及び上 記ポリペプチドの或いは薬剤活性物質としての組成物の医療への適用を提供する ものである。

Ａ１合成ペプチド さらに詳しくは、第一の実施態様は、以下の式Ｉの強力なボンベシン拮抗物質で あるプソイドペプチド（ｐｓｅｕｄｏｐｅｐｔｉｄｅ）を提供するものである： ただし、Ｘは、水素、 Ａ　がＧｌｕである際にはＡ２の３−プロピオニル部分上のγ−カルボキシル部 分にＡ１のα−アミノ基が結合した単結合、または 式Ｒ’　Ｃｏ−の基であり、 但し、Ｒ１は、以下よりなる郡から選ばれたものであり；ａ）水素、Ｃ１−１０ アルキル、フェニル、フェニル−Ｃ１−１０−アルキル、ｐ−Ｈｌ−ツーニル、 ｐ−Ｈｌ−フーニノトＣ１−１０−アルキル・ナフチル・ナフチル−Ｃ１−１０ −アルキル、インドリル、インドリル−０１−１０−アルキル、ピリジル、ピリ ジル−ＣＩ−１０−アルキル、チェニル、チェニル−Ｃ１，−１０−アルキル、 シクロヘキシルまたはシクロヘキシル−０１−１０−アルキル等であり（但し、 旧はＦ、ＣＩ。

但し、Ｒは、水素”　１−１０アルキル、フェニルまた但し、Ｒ４は、Ｃアルキ ル、フェニルまたは換されないＴｒｐ若しくはベンゼン環内でＦ、ＣＩ、Ｂ　ｒ ％ＮＨ２及びＣ１−３アルキルからなる群より選ばれた１つまたはそれ以上の基 で置換されたＴｒｐからなる群から選ばれたＤ−１Ｌ−若しくはＤＬ−アミノ酸 残基；またはＡ２のα−アミノ部分にＲＩＣ〇−のアシル部分が結合したペプチ ド結合であり； Ａ２は、　Ｇｉｎ、　Ｇｌｕ［−コ、Ｇｌｕ（Ｙ）またはＨｉｓであり、但し、 ［−］は、Ｘが単結合でありＡ２がＧｌｕである際にはＡ２の３〜プロピオニル 部分上のγ−カルボキシル部分とＡ１のα−アミノ部分とが結合した単結合であ り、Ｙは、以下のいずれかであり、 ａ）−ＯＲ（但し、Ｒ５は、水素、Ｃ 一 キルであり； Ｒ７は、水素、Ｃアルキル若しくは の−ＣＨ２一部分の結合がプソイドペプチド結合であるようにＬｅｕのｃ＝ｏ部 分が−ＣＨ２−に置換されたＬｅｕの還元型であり； Ａ９は、Ｔａｃ、ＭＴａｃ、若しくはＤＭＴａ　ｃであり；さらに、 Ｑは、ＮＨ若しくは一０Ｑ１　（但し、Ｑｌは、水素、Ｃアルキル、フェニル若 しくはフェニル−０１−１０−アルキシであり）である； および製薬上使用できるこれらの酸または塩。

Ａ１が単結合である際には、式Ｉのプソイドペプチドはオクタペプチドであるが 、Ａ１がアミノ酸若しくはこの類似体である際には、このプソイドペプチドはノ ナペプチドである。

Ａ９は、Ｔａｃ、　ＭＴａｃ、若しくはＤＭＴａｃであるので、Ａ９には５員の 複素環が存在する。この環は、通常、式Ｉのノナペプチドの合成において所定の 位置のＡ９残基の側鎖を、好ましくはホルムアルデヒドまたはアセトアルデヒド で酸化し、側鎖をＡ９のα−アミノ基で環化することによ−て形成される。この ようにして得られた環化されたＡ９残基の性質は、元の酸化されていないＡ　お よび使用される酸化剤の性質によって変化する。

したがって、Ｃｙｓ　の−ＣＨ２−８Ｈ基がホルムアルデヒドとの反応における Ｌｅｕ−川−プソイドペプチド結合付近のＣｙｓ９のα−アミノ基で環化する際 には、得られた環は以下の式■ＩＡの構造を有する（式Ｉのノナペプチドの−Ｌ ある非環状の実施態様より大きな生物学的活性及びより長期間の安定性を有する 。しかしながら、Ａ９が環状でない際の式Ｉのペプチドの好ましい実施態様とし ては、Ｘ、　Ａ２、及びＱが上記と同様であり、Ａ９がＣｙｓまたはＰｅｎであ り、さらにＡ１がＬ−若しくはＤ−Ｐａｌ、　Ｌ−若しくはＤ−ＴｐｉまたはＨ ｃａからなる群より選ばれた非天然に生成するアミノ酸である。

好ましい実施態様としては、ＸはＲ’　ＣＯ（但し、Ｒｌｐｉ、またはＤ−Ｔｒ ｐであり；Ａ　はＧｉｎであり；Ａ９はＴａｃのα−アミノ基にＲ’　ＣＯ−の アシル部分が結合したペプチド結合であり；Ａ２はＧｉｎまたはＨｉｓであり； Ａ９はＴａ（、Ｍ−Ｔａｃ若しくはＤＭ−Ｔａｃであり；およびＱはＮＨ２であ る。これらのペプチドの好ましい形態としては、ＸはＨｃａ。

Ｈｎａ、Ｐａａ、Ｍｐｐｓ　Ｈｐｐ若しくはＮａａであり；Ａ２はＧｉｎであり 、Ａ９はＴａｃである。

Ｂ９合成方法 式Ｉのボンベシン拮抗物質は固相合成（ｓｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　５ｙｎｔｈｅ ｓｉｓ）によって合成される。第一のプロトコルとしては、すべてのアミノ酸を 、Ｃ末端残基を樹脂の支持相に連結した後、順次それぞれ結合していく。全アミ ノアシル残基を樹脂に連結した直後、プソイドペプチドの５員の複素環を、Ｃ末 端残基の側鎖を酸化剤と反応させることによって形成する。次に、プソイドペプ チドをＨＦ処理し、樹脂の支持相からペプチド部分を外す。この反応によって、 側鎖の保護基も除去される。

第二のプロトコルとしては、式Ｉのプソイドペプチドを固相および液相によって 構築される２断片として合成する。

Ｃ末端を含むトリペプチドをオリゴペプチドと連結し、式Ｉの全ボンベシン拮抗 物質を形成する。

５員の複素環を、Ａ９の側鎖を酸化剤と反応させることによって形成する。次に 、このペプチドをＨＦ処理することによって、すべてのアミノアシル残基の側鎖 の保護基を除去し、樹脂からペプチドを切断する。

Ｃ１医療への使用 式■のプソイドペプチドは薬剤組成物中に使用し、製薬用の担体に含まれる有効 量のプソイドペプチド若しくはこの治療学的に使用できる酸或いは塩を投与する ことによって、ある種の哺乳動物の癌および他の症状を治療することができる。

これらの化合物は、１日に１ｋｇの体重当たり約１〜１，０００μｇの投与量で 治療学的に使用できる担体と共に投与される。このような組成物は、非経口的に 、静脈内に、皮下に、筋肉内に、鼻腔内に、肺用のエアロゾルによって若しくは 貯蔵形態（ｄｅｐｏｔ　ｆｏｒｍ）で投与すること図１は、表２、実施例７のデ ータに基づいた、特定のボンベシン拮抗物質を投与することによるＭＸＴマウス 乳癌に関する効果を示すグラフである。

図２は、表４、実施例８のデータに基づいた、特定のボンベシン拮抗物質を投与 することによるヌードマウスにおける５ＣＬＣ腫瘍の容積に関する効果を示すグ ラフである。

図３は、表５、実施例９のデータに基づいた、特定のボンベシン拮抗物質を投与 することによるヌードマウスにおけるＭＩＡ　ＰＡＣＡ−２の膵臓の腫瘍の容積 に関する効果を示すグラフである。

図４は、表６、実施例１０のデータに基づいた、特定のボンベシン拮抗物質を投 与することによるヌードマウスにおけるＣＡＰＡＮ−２の膵臓の腫瘍の容積に関 する効果を示すグラフである。

好ましい実施態様の説明 Ａ８合成ペプチド １、命名法 本発明を説明する上で便宜上、アミノ酸、ペプチドおよびこれらの誘導体の従来 の略称を、ペプチド分野において通常用いられているようにおよびアイユーピー エーシ一アイーユービー　コミッション　オン　バイオケミカルノーメンクラチ ャー　（ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉ ｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）　［ヨーロッピアン　ジエー　バイオケム （Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、１９８４年、１３８巻、ペー ジ９〜３７］によって推奨されているように用いる。

個々のアミノ酸残基の略称は、アミノ酸の普通名称をもとにしており、例えば、 Ａｌａはアラニン、Ｃｙｓはシスティン、Ｇｌｎはグルタミン、Ｇｌｕはグルタ ミン酸、ｐＧｌｕはピログルタミン酸、Ｇｌｙはグリシン、Ｈｌｓはヒスチジン 、Ｌｅｕはロイシン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｔｒｐはトリプトファン、及 びＶａｌはバリンである。Ｇｌｕはγ−カルボキシル側鎖に連結する官能基を有 する；［−］またはＹは上記したのと同様である。Ｄｐａは、２．３−ジアミノ プロピオン酸（２，３−ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）である 。アミノ酸残基が異性体を有する際には、アミノ酸の記号の前にＤ−若しくはＤ Ｌ−による記載のない限りＬ一体のアミノ酸を表している。

本発明において用いられる通常使用されないアミノ酸の略称は以下の通りである ： Ｃｐａは、パラ−クロロフェニルアラニンである。

Ｄｐａは、２．３−ジアミノプロピオン酸（２，３−ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉ ｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）である。

ｐＧｌｕは、ピログルタミン酸である。

Ｎａｌは、３−（２−ナフチル）−アラニン（３−（２−ｎａｐｈｔｈｙｌ）− ａｌａｎｉｎｅ）である。

Ｐａｌは、３−（３−ピリジル）−アラニン（３−（３−ｐｙｒｉｄｙｌ）−ａ ｌａｎｉｎｅ）である。

Ｐｅｎは、ペニシラミンである。

Ｔｐｉは、２，３．４．９−テトラヒドロ−ＩＨ−ピリド−［３，４−ｂコイン ドール−３−カルボン酸（２，３，４，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１１１−ｐ ｙｒｉｄｏ−［３，４−ｂ］１ｎｄｏｌｅ−３−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉ ｄ）である。

Ｔａｃは、チアゾリジン−４−カルボン酸（ｔｈｉａｚｏｌ　１ｄｉｎｅ−４− ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ）である。

ＭＴａｃは、２−メチル−チアゾリジン−４−カルボン酸（２−Ｍｅｔｈｙｌ− ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−４−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ）でである。

ＤＭＴａｃは、５，５−ジメチル−チアゾリジン−４−カルボン酸（５，５−Ｄ ｉｍｅｔｈｙｌ−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−４−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃ ｉｄ）である。

アミノ酸類似体としては以下のものが挙げられる：Ｈｃａは、ヒドロ桂皮酸（ｈ ｙｄｒｏｃｉｎｎａｍｉｃ　ａｃｉｄ）またはデス−アミノ−フェニルアラニン （ｄｅｓ−ａｍｉｎｏ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）である。

Ｈｎａは、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（３−ｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｎａｐ ｈｔｈｏｉｃ　ａｃｉｄ）である。

Ｈｐｐは、３−　（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸（３−（４−ｈｙｄ ｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）である。

Ｍｐｐは、３−　（４−メトキシフェニル）プロピオン酸（３−（４−ｍｅｔｈ ｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）である。

Ｎａａは、ナフチル酢酸である。

Ｐａａは、フェニル酢酸である。

使用する他の省略事項は、以下の通りである：ＡｃＯＨ酢酸 ＢＨＡ　ベンズヒドリルアミン ＢｏＣｔ−ブトキシカルボニル （ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｂｏｃ）２０　ジーｔ−プチル ジカルボネート（ｄｉ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）Ｂｏｍ 　ベンジルオキシメチル ＢＳＡ　ウシ血清アルブミン ＤＩＣ１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（１，３−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙ ｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）ＤＭＥＭ　ダルベツコの改変イーグル培地（Ｄｕ ｌｂｅｃｃｏ’　ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’　ｓ　ｍｅｄｉｕｍ）Ｄ ＭＦ　ジメチルホルムアミド Ｅｔ　エチル ＥＤＴＡ　エチレンジアミン四酢酸 ＦＣＢＳ　ウシ胎児血清 （ｆｅｔａｌ　ｃａｌｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ）Ｆｍｏｃ　９−フルオル エニルメチルオキシカルボニル（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｏｘｙｃ ａｒｂｏｎｙｌ）Ｆｏｒ　ホルミル（ｆｏｒｍｙｌ） ＨＩＴＥＳ　ＲＰＭＩ　１６　４Ｄ培地に１０−８Ｍヒドロコルチゾン、５μｍ ／ｍｌ　ウシインスリン、１０μｇ　／　ｍ　１　ヒトトラＨＯＢｔ　１−ヒド ロキシベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ） ＨＰＬＣ高速液体クロマトグラフィー Ｌｅｕ−凪−は、Ａ９のアミノ部分との−ＣＨ−の結合がプソイドペプチド結合 であるようにＬされた、Ｌｅｕの還元型である Ｍｅ　メチル Ｍ　ｅ　ＣＮ　アセトニトリル ＭｅＯＨメタノール ＰＢＳ　リン酸緩衝溶液 ＴＥＡ　）リエチルアミン ＴＦＡ　）リフルオロ酢酸 ペプチド配列は従来法に従って記載され、Ｎ末端のアミノ酸が左側でＣ末端のア ミノ酸が右側にくる。しかしながら、完全なボンベシン拮抗物質のテトラデカペ プチドにおける相当する位置による断片的なペプチドのアミノ酸残基の番号付け は特記されない限り従来法に基づかないことに注意する。従来法に従うと、本明 細書に記載された式■のノナペプチドの残基は６〜１４番目であり、ボンベシン 拮抗物質のＴｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕの核はＡ８−Ａ９ −Ａ１０−Ａ１１−Ａ１２−Ａ１３と番号付けられる。混乱を防ぐために、ボン ベシン拮抗物質は以下のように番号付けられる二Ｎ末端アミノ酸（またはアミノ 酸類似体）残基はＡ１である；Ｃ末端アミノ酸（またはアミノ酸類似体）残基は Ａ９である；および間の残基はＡ２　（Ｎ末端残基Ａ１の付近）から順次Ａ８　 （Ｃ末端残基Ａ９の付近）に番号が増加するように番号が付けられる。

２、好ましい実施態様 好ましい実施態様は、以下の式Ｉのボンベシン拮抗物質ペプチドである。

Ｘ−Ａ　−Ａ　−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇ１ｙ４ｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｇ−Ａ９ −Ｑ　Ｉと同様である。

これらのボンベシン拮抗物質プソイドペプチドは、アミノ酸配列、特にＡ１、Ａ ２及びＡ９の残基に特徴を有する；さらにＡ８とＡ９との間のプソイドペプチド 結合の存在にも特徴を有する；さらに必要であれば、Ａ９における５員の複素環 をも特徴とするものである。この環状構造は、Ａ９残基の特性およびこれを酸化 するのに使用する化合物によって決定される。したがって、ホルムアルデヒドを 用い、Ａ９がＣｙｓである場合には、得られる環は、以下の式ＩＩＡのＴａｃ構 造［式Ｉのペプチドの−Ｌｅｕ８−Ｐｎ−Ｔａｃ９−Ｑ断片（但し、ＱはＮＦ２ である）として示されるコを有する：Ｃｙｓがアセトアルデヒドで酸化される場 合には、得られた５員の複素環は、以下の式ＩＩＢのＭＴａｃ構造［式ＩＡ　が Ｐｅｎでありホルムアルデヒドで酸化される場合にこれらの好ましい実施態様に おいて、ＸはＨまたはＡｃであり、Ａ　はＤ−Ｐｈｅであり、Ａ　はＧｉｎであ り、ＱはＮＦ２であることが望ましい。

本発明において特に最も好ましいプソイドペプチドのボンベシン拮抗物質を以下 に示す。

ペプチド　構　造 Ｎｏ。

１、　Ｄ−ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅ ｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２ ２、　Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　１ｙ−Ｈｉｓ −Ｌｅｕ−匣−Ｔａｃ−ＮＦ２３、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａ ｌ−Ｇｌｙ−■ｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−ＭＴａｃ−ＮＦ２ ４、　Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｆｉｓ −Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２ ５、　Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ １２旦−Ｔａｃ−ＮＦ２６、　Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ− Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｑ−ＭＴａｃ−Ｈ２ ７、Ｄ−Ｎａｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ− ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２８、Ｐａ１−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ −Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２ ９、　Ｄ−Ｐａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇ１ｙ４ｉｓ−Ｌｅｕ− ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２ １０、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｌｉｓ−Ｌｅ ｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−Ｎｌｉ２１１、Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌ ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２ １２、Ｔｐｉ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐ ｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２１３、Ｄ−Ｔｐｉ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇ ｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２１４、Ｈｃａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ −Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＦ２１５、Ｄ −Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ −Ｔａｃ−ＮＨ２１６、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａ ｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−ＮＨ２ １８、Ｄ−Ｐｈｃ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｊｓ−Ｌｅｕ −ｐｓｉ−ＤＭＴａｃ−Ｈ２ Ｈ２ ２１、Ｔｉｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐ ｑ−ＤＭＴａｃ−Ｈ２ 本発明において特に好ま１．い実施態様とし、では以下が挙げられる： ２、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−）ｉｉｓ−Ｌｅｕ −ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＵ２１３、Ｄ−Ｔｐｉ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ −Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｅ−ＮＨ２Ｂ１合成方法 １、概説 式Ｉのプソイドペプチドは、ペプチド分野における当業者に公知の技術によって 調製できる。よく利用される技術の要旨は、エム　ボダンスキー（Ｍ、Ｂｏｄａ ｎｓｚｋｙ）　、プリンシプルズ　オブ　ペプチド　シンテシス（Ｐｒｉｎｃｉ ｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　、スプリンガーーフ ェルラグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−■ｅｒｌａｇ）、ハイデルベルグ（Ｈｅ　ｉｄｅ 　ｌｂｅｒｇ）、１９８４年に記載されている。

すべての式■のプソイドペプチドは固相合成法によって合成できる。特に好まし いこれらのペプチド及びこれらの中間ペプチドの調製方法は固相合成である。固 相合成の技術は、はとんど、ジエー　エム　スチュワード（Ｊ」、Ｓｔｅｗａｒ ｔ）およびジエー　ディー　ヤング０．Ｄ、Ｙｏｕｎｇ）　、ソリッド　フェイ ズ　ペプチド　シンテシス（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎ ｔｈｅｓｉｓ）　、ピアス　ケム　コーポレーション（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍ 　Ｃｏ、）　、Ｏツクフォード、アイエル（ＩＬ）、１９８４年（２版）の本お よびジー　バラニー　（Ｇ、　Ｂａｒａｎｙ）ら、インド　ジェー　ペプチド　 プロティン　レス（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅｒ’ｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ 、）、第３０巻、ページ７０５〜７３９．１９８７年の雑誌に掲載されている。

（Ｃ末端のＡ９残基を酸化し、残基の特徴的な側鎖をそのα−アミノ基で環化す るさらなる段階は式Ｉのペプチドの合成の様々な段階で行われる。） 少なくとも２つの合成プロトコルによって、式Ｉのプソイドペプチドのボンベシ ン拮抗物質が製造できる。第一のプロトコルでは、すべてのアミノ酸を、Ｃ末端 残基、Ａ９を樹脂の支持相に連結した後、順次ぞれぞれ結合していく。

第二のプロトコルでは、トリペプチドを樹脂上に構築する。

さらに、このトリペプチドを残りのアミノ酸を有するオリゴペプチドに連結する ことによって、ボンベシン拮抗物質を形成する。これらプロトコルは２つとも、 合成がＣ末端のＡ９残基で始まり、アミノ酸残基を順次付加することによってＮ 末端残基に向かって成長させる。

１、（ａ）第一のプロトコル プソイドペプチドの固相合成で用いられる樹脂支持相は、ベンズヒドリルアミン （ｂｅｎｚｈｙｄｒｙｌａｍｉｎｅ）　（Ｂ　ＨＡ　）樹脂またはジビニルベン ゼンで１％架橋されたクロロメチル化ポリスチレン樹脂であり、これらは両方と も市販されている。Ｃ末端のＡ９残基をカルボキシル基を介して上記樹脂に結合 させる。これら２つの残基間の反応は、樹脂に連結する前に各Ａ９残基のα−ア ミノ基に化学保護基（ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ） を結合させることによって阻害される。Ａ９残基、および順次連結されるアミノ 酸残基のα−アミノ基に対する保護基は、９−フルオロエニルメチルオキシカル ボニル（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）　（Ｆ 　ｍ　。

Ｃ）またはｔ−ブトキシカルボニル（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ ）（Ｂｏｃ）基のいずれかである。Ｆｍｏ　ｃは、Ｂｏｃを除去する反応によっ てＣ末端のＡ９残基から側鎖の保護基をも除去するため、Ｃ末端のＡ　からＡ２ の残基に連結する（ｃｏｕｐｌ　ｉｎｇ）際に、好ましい。これらの連結反応の 間、アミノ酸残基によっては特徴的な側鎖の官能基を、連結反応の前に化学保護 基（Ａ　に対しては好ましくはＢｕｔ）を結合させることによって、望ましくな い化学反応が起こらないように保護してもよい。

Ｃ末端のＦｍｏｃ−Ａ　（Ｂｕｔ）残基を支持相に結合させた後、そのα−アミ ノ基を脱保護し、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯを連結し、プソイドペプチド結合を 形成する。

残りの残基、Ａ　、Ａ　ＳＡ　及びＡ２はＦｍｏｃによって保護されるのが好ま しく、Ａ　はＢｏｃによって保護されるのが好ましいが、これらを逆の番号順（ Ａ７、Ａ６等）で順番に付加し、目的とするプソイドペプチドを構築する。

ＨｉｓまたはＧｌｕがプソイドペプチド中に存在する際には、これらの側鎖は、 これらの連結反応中または他の残基の連結反応中に望ましくない化学反応を受け やすい。したかって、連結反応でこれらのアミノ酸を連結する前に、化学保護基 をこのような側鎖に結合させてもよい。

すべてのアミノ酸残基をＢＨＡ樹脂に連結させた後、Ｎ末端のプソイドペプチド のＢｏｃを除去する。Ｔａｃ、ＭＴａｃ若しくはＤＭＴａｃの５員の複素環を、 Ｃｙｓの暴露した一ＣＨ２−８Ｈ部分（またはＰｅｎの−ｃ（ｃＨ３）２　Ｓ　 Ｈ）およびＡ　及びＡ　残基（即ち、Ａ９のα−アミノ）を結合させる還元され た結合の第２級アミンとホルムアルデヒドやアセトアルデヒド等の酸化剤との反 応によって形成する。中間プソイドペプチドは、側鎖の保護基を有したままだが 、ＨＦ処理を行うことによって、樹脂の支持相から切断し、さらに側鎖の保護基 をも除去する。

２、（ｂ）第二のプロトコル 第二のプロトコルにおいては、固相合成経路を経た後、トリペプチドをＢＨＡ樹 脂上に構築し、保護されたトリペプチド樹脂を形成する： 樹脂を得る。ＨＦ処理後、遊離したトリペプチドＨｉｓ７−Ｌｅ８　、　９　１ ２ ｕ　１旦−Ｔａｃ　−ＮＨ３を得る。Ｂｏｃ−Ａ　−Ａ　−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖ ａｌ−Ｇｌｙ−ｏｃｕ２−樹脂を、固相合成の標準方法にしたがってｃｔｙ−ｏ ｃＨ２−樹脂上に順次構築し、さらに、１％　ＫＣＮを含有する９５％メタノー ル中で１２時間処理し、Ｂｏｃ−オリゴペプチドを切断する。２断片を構築した 後、Ｂｏｃ−オリゴペプチドを、ＢＯＰ試薬を用いて遊離したＨｉｓ７−Ｌｅｕ ８−３２ｐ−Ｔａｃ　−Ｎｌ２のトリペプチドに連結する。次に、Ｂｏｃ基を除 去し、目的とするペプチドを得る。

式Ｉのボンベシン拮抗物質の合成を詳細に記載する前に、上記プロトコルの１つ 若しくは両方に共通する様々な合成操作を以下に記載する。

２、ポリペプチド合成に関する一般的な操作操作１：特定の合成残基または反応 体の形成ａ）Ｌ−およびＤ−Ｔｐｊ： ２．０４ｇ　（１０ｍＭ）のＬ−Ｔｐｉを２．１ｇのクエン酸を含む２５ｍ１の 沸騰した水に溶解する。０．５ｍｌの４０％ホルムアルデヒド水溶液を加えると 、固体が即座に形成し始める。この混合物を水浴中で冷却し、沈殿物を収集し、 冷却水及び空気で洗浄し、さらに室温で乾燥させると、２．１４ｇ若しくは９９ ％の固体［融点（分解）［ｍ。

ｐ、　（ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）］は約３１０℃］が得られる。Ｄ一体は Ｄ−Ｔｒｐから同様にして形成され、約３１０℃の融点（分解）を有する。

ｂ）Ｌ−およびＤ−Ｂｏｃ−Ｔｐ　ｉ　：１０．８ｇ　（５０ｍＭ）のＤ−Ｔｐ ｉを懸濁した２５０ｍ１の０，２Ｎ　ＮａＯＨ及び７．５ｍ１）リエチルアミン の攪拌された懸濁液に、１０ｇのジーｔ−プチルジカルボネート（Ｄｉ−ｔｅｒ ｔ−ｂｕｔｙｌ　ｄｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）を添加し、この混合物を４時間攪拌 した後、１０ｇのジカルボネート（ｄｉｅａｒｂｏｎａｔｅ）をさらに加え、さ らに３時間攪拌した後１０ｇをさらにまた加えた。この混合物を一晩攪拌し、エ ーテルで抽出（２Ｘ１００ｍｌ）Ｌ、エーテルは捨てる。クエン酸を水層にｐＨ が３〜５になるまで添加した。固体を収集し、水で洗浄し、−晩風乾した。

固体を１００ｍ１のテトラヒドロフラン中に懸濁する。

はとんどすべての固体が溶解する。不溶物を濾過によって除き、ＴＨＦを真空下 で除去する。残渣をエーテルで粉砕することによって９．２０ｇ若しくは５８％ の物質が得られる。この物質は出発材料と同じ融点を有するが、溶解度及び８５ ：１５：０．５のＣＨＣｌ　ａ　：　Ｍ　ｅ　ＯＨ：　ＨＯＡＣを用いたシリカ によるＴＬＣが異なる。

２．５５ｇのＬ−Ｔｐｉを使用する以外同様の方法を用いるによって、２．２２ ｇ若しくは５９％のＢｏｃ−Ｔｐｉが得られる。

ｃ）Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ： 窒素雰囲気下で乾燥トルエン（２５０ｍｌ）中に溶解したＦｍｏｃ−ｏイシン　 メチルエステル（Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕｃｉｎｅ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ）　（ ３５ｇ、　１３４ミリモル）を、乾燥氷／アセトンで冷却し、１５０ｍ１の２５ ％　水酸化ジイソブチルアルミニウム（ｃ！ｉ−ｉｓｏｂｌ−１ｓｏｂｕｔｙｌ −ａｌｕ　ｈｙｄｒｉｄｅ）のトルエン溶液を３０分かけて加える。水酸化ジイ ソブチルアルミニウムを添加し終わった後、この混合物を乾燥氷／アセトン浴中 で２０分間攪拌し、さらに、メタノール（１５ｍＩ）を注意深く加える。この混 合物を１０１００Ｏの水冷水中に注ぎ、振盪、濾過する。トルエンを分離し、水 相をエーテルで再抽出する（３Ｘ３００ｍｌ）。トルエン及びエーテル抽出物を 合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。このようにして得られた油状物を、１５００ ｍｌ　１５％ＥｔＯＡｃ／ガソリン中で素早くシリカゲルカラム（３Ｘ５０ｃｍ ）に通す。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯが固体として得られる（２７．　６　ｇ） 。

ｄ）合成アミノ酸またはアミノ酸類似体：ボンベシン拮抗物質プソイドペプチド 中に導入される合成アミノ酸またはアミノ酸類似体は、通常市販されているもの である。したがって、Ｈｃａは、ダブルアイ　５３２３３、ミルウォーキー、セ ント　ボール　アヴエニュー１００１　（１００１Ｓｔ、　Ｐａｕｌ　Ａｖｅｎ ｕｅ、　Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、　ＩＩ　５３２３３）のアルドリッヒ　コーポレ ーション（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ、）より市販されているものである。Ｂｏｃ− 若しくはＦｍｏ　ｃ−保護アミノ酸は、ケーワイ　４０２２８．　ルイスヴイレ 、ファーン　ヴアレー　ロード　５６０９　（５６０９Ｆｅｒｎ　Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ、　Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ、　ＫＹ　４０２２８）のアドバンスト　ケ ムテック（Ａｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈ）　；またはシーニー　９０５ ０５゜トーランス、カシワ　ストリート　３１３２　（３１３２Ｋａｓｈｉｗａ 　５ｔｒｅｅｔ、　Ｔｏｒｒａｎｃｅ、　ＣＡ、　９０５０５）のバケム　カル フォルニア（Ｂａｃｈｅｍ　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）より市販されているもので ある。

操作２：樹脂の調製およびＡ９残基の付加ＢＨＡ樹脂を、１０％　ＴＥＡのＣＨ ２Ｃｌ２溶液で各々３分間ずつ２回処理（中和）することによって調製し、シー ベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ）　（Ｈ ０Ｂｔ）のＤＭＦ溶液を加え、３分間混合することによって、Ｆｍｏ　ｃ−Ａ９ 　（Ｂｕ　ｔ）残基を樹脂に結合させる。２０％　１，３−ジイソプロピル−カ ルボジイミド（１，３−ｄｉｉｓ。

ｐｒｏｐｙｌ−ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）　（Ｄ　Ｉ　Ｃ）のＣＨ２Ｃｌ２溶 液（１゜３ミリモル）を加える。この混合物を室温で６０分間振盪する。このよ うにして得られたＦｍｏｃ−Ａ９　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂を、ＣＨ２Ｃｌ２及 びメタノールでそれぞれ２回、さらにＣＨ２Ｃｌ２で３回洗浄した後、カイザー テスト（Ｋａｉｓｅｒ　ｔｅｓｔ）　（アナル　バイオケム（Ａｎａｌ、Ｂｉｏ ｃｈｅｍ。

）、３４巻、ページ５９５　（１９７０年））を行った。不完全な連結が行われ た場合には、この工程を繰り返す。

操作３：プソイドペプチド結合の形成 ５０％　ピペリジンのＤＭＦ溶液を添加し、３０分間混合し：ＤＭＦで洗浄（６ ×１分）シ；次に、ｉ）１％　ＡｃＯＨを含むＤＭＦに溶解し、たＦｍｏｃ−Ｌ ｅｕ−ＣＨＯ（３当量）を加え；さらに、ｉｉ）ＤＭＦに溶解したＮａ８０％　 ＭｅＯＨ（３Ｘ］−分）；１００％　ＭｅＯＨ（３Ｘ１分）；およびＤＭＦ　（ ａｘ１分）で洗浄する。

操作４二アミノ酸の連結およびペプチド結合の形成Ａ９残基のα−アミノ基、お よび各々順次連結されるアミノ酸残基に対する保護基は、９−フルオルエニルメ チルオキシカルボニル（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏ ｎｙｌ）　（Ｆ　ｍｏｃ）またはｔ−ブトキシカルボニル（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏ ｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｂｏｃ）基のいずれかである。Ｆｍｏｃは、Ｂｏｃを 除去する反応によってＡ９の側鎖の保護基をも除去するため、Ａ９からＮ末端の アミノ酸残基付近のアミノ酸残基に向かって連結する（ｃｏｕｐｌ　ｉｎｇ）際 に、好ましい。

Ａ）Ｆｍｏｃ−アミノ酸を用いる Ｆｍｏ　ｃアミノ酸をＦｍｏ　ｃ−中間ペプチドに導入するために、以下の工程 を行う。

（１）Ｆｍｏｃ−中間ペプチドを脱保護および中和した後、ＣＨ２Ｃｌ２　（３ ×１分）及びＤＭＦ　（３Ｘ１分）で洗浄する。

（２）Ｆｍｏｃ−アミノ酸を脱保護された中間ペプチドに以下のようにして連結 する： ｉ）ＤＭＦに溶解したＦｍｏｃアミノ酸（３当量）及びＨＯＢｔ　（３，３当量 ）を中間ペプチドに添加（３分）する；１ｉ）３当量のＤＩＣ（２０％のＣＨ２ Ｃｌ２溶液になるように）を添加し、混合物を９０分間振盪する。

（３）次に、混合物をエタノール（３×１分）およびＤＭＦ（３Ｘ１分）で洗浄 する。

さらに残基を連結するために、新たに連結されたＦｍ。

Ｃ−アミノ酸を、５０％　ピペリジンのＤＭＦ溶液によって３０分間脱保護し、 ＤＭＦで洗浄する（６Ｘ１分）。ステップ（２）に記載したのと同様にしてさら に連結を行う。

新たなアミノ酸を樹脂またはペプチドに連結するたびに、カイザーテストを行う ：連結が不完全である場合には、反応を繰り返す。

Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ及びＦｍｏｃ−Ｇｉｎを連結するために、上記操作のステップ （２）を以下のように修飾する：３当量のＤＩＣ（２０％のＣＨ２Ｃｌ２溶液に なるように）を、Ｆｍｏ　ｃアミノ酸（３，０当量）及びＨＯＢｔ　（３゜３当 量）の混合ＤＭＦ溶液に０℃で１５分間及び室温で１５分間かけて添加する。反 応混合物をペプチド樹脂に添加し、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙの場合には１時間振盪し、 Ｆｍｏ　ｃ−Ｇｉｌｌの場合には２時間振盪する。

Ｂ）Ｂｏｃ−アミノ酸を用いる Ｂｏｃ−アミノ酸をＦｍｏ　ｃ−中間ペプチドに導入するために、以下の工程を 行う。

（１）ＢＯＣ基を、５０％　ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液を添加することによって 除去する； （２）５％　メルカプトエタノール及び５％　アニソールを＠　ム５０　％Ｔ　 Ｆ　Ａ　ノＣＨ２Ｃｌ　２溶液を２５分間かけて加える。および （３）ＣＨ２Ｃ１２（２回、１−分）　、ＭｅＯＨ（２回、１分）、およびＤＭ Ｆ　（３回、１分）で洗浄する。

（４）ＤＭＦに溶解した３当里のＢＯＣ−アミノ酸及び３゜３当量のＩ−（ＯＢ 　ｔを添加し、３分間混合することによって、Ｂｏｃ−アミノ酸残基の連結を行 う。次に、３当量の２０％　ジイソプロピル−カルボジイミドのＣＨ２Ｃｌ２溶 液を加え、９０分間振盪する。この反応混合物を、ＭｅＯＨで洗浄（３回、１分 ）した後、さらにＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する（３回、１分）。

（５）５％　メルカプトエタノール（５分）及び５％　ア溶液でステップ（５） の生成物を洗浄することによって、ＢＯＣ基を除去（脱保護）する。さらに、Ｃ Ｈ２Ｃｌ２（２回、１分）、ＭｅＯＨ（２回、１分）、およびＤＭＦ（３回、１ 分）で洗浄する。

ＢＯＣ基が除去されることによってＡ９の側鎖に連結されたＢｕｔ保護基も除去 されることに留意しなければならない。したがって、ＢＯＣ基の除去は、Ａ９残 基の環化直前まで、一般的に行われない。

操作５：５員の複素環の形成 式ＩＩＡの環構造は、脱保護されたｃｙｓ９を有する中間ペプチドを５０％　Ａ ｃＯＨ，３，７％　ＨＣＨＯ及びＤＭＦの混合物（１：　１　：　８）中で室温 で３分間振盪することによって形成され、これを濾過する。この生成物を、ＤＭ ＦＳＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２でそれぞれ３回ずつ洗浄する。

式１１Ｂの環構造は、脱保護されたＣｙｓ９を有する中間ペプチドを５０％　Ａ ｃＯＨ，１０％　ＣＨ３ｃＨｏ及ヒＤｙｘＦノ混合物（１，５：　０．　５　： 　８）中で室温テ１゜分間振盪することによって形成され、これを濾過する。こ の生成物を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃ１２でそれぞれ３回ずつ洗浄する。

式ＩＩＣの環構造は、脱保護されたＰｅｎ９を有する中間ペプチドを５０％　Ａ ｃＯＨ，３，７％　ＨＣＨＯ及びＤＭＦの混合物（１：　１　：　８）中で室温 で１０分間振盪することによって形成され、これを濾過する。この生成物を、Ｄ ＭＦ、ＭｅＯＨ及びＣＨ２Ｃｌ２でそれぞれ３回ずつ洗すべての目的とするアミ ノ酸残基を付加した後、中間ペプチド樹脂を、アニソールの存在下で液状ＨＦで 処理し、ポリペプチドを支持桁から切断する。この反応によって、側鎖の保護基 も同様に除去される。ＢＨＡ樹脂を用いる際には、得られた中間ペプチドはＱが ＮＨ２である。

ＸがＨ以外のときには、Ｘ基は、すでにＸ基を有するアミノ酸（例えば、Ａｃ− Ｄ−Ｐｈｅ）を導入することによって；または中間プソイドペプチドのＮ末端の Ａ１における脱保護されたα−アミノ基を適当な試薬と反応させることによって 、Ｎ末端に位置させる。このようにして、樹脂支持桁から除去された完全なペプ チドは、ＫＯＣＮと反応させて、ＸをＮＨ２ＣＯ−とすることが好ましい。

操作７：ペプチドの精製 式Ｉのプソイドペプチドは、通常、アップル　マツキントラシュ　プラス　コン ピューター（Ａｐｐｌｅ　Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ　Ｐｌｕｓ　ｃｏｍｐｕｔｅｒ） によって制御されている３機のライニン　ラッビット　エッチピー　ＨＰＬＣポ ンプ（Ｒａｉｎｉｎ　Ｒａｂｂｉｔ　ＨＰ　ＨＰＬＣｐｕｍｐ）、レオダイン　 インジェクター（Ｒｈｅｏｄｙｎｅ　１ｎｊｅｃｔｏｒ）及びナウアー　モデル 　８７　可変波長ｔＪＶモニター（Ｋｎａｕｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　８７　ｖａｒｉ ａｂｌｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ＵＶ　ｍｏｎｉｔｏｒ）から構成されるライ ニン　ＨＰＬＣシステム（Ｒａｉｎｉｎ　ＨＰＬＣＳｙｓｔｅｍ）　（ライニン 　インク　コーポレーション（Ｒａｉｎｉｎ　Ｉｎｃ、　Ｃｏ、）製、ウォバー ン（Ｗｏｂｕｒｎ）、エムニー　（ＭＡ））で行われる逆相カラムによる高速液 体クロマトグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）によって精製される。未精製のペプチド （１０〜４０ｍｇ）を、球状の０１８シリカゲル（ポアサイズ：３００オングス トローム；粒子サイズ＝１２μｍ）（ライニン　インク　コーポレーション（Ｒ ａｉｎｉｎ　Ｉｎｃ、　Ｃｏ、）製）が充填されたダイナマックス　マクロ（Ｄ ｙｎａｍａｘＭａｃｒｏ）カラム（２１，２ｘ　２５０’ｍｍ）にのせ、２゜０ ｍｌ／分の流速で（Ａ）　０．　１％　ＴＦＡおよび（Ｂ）０゜１％　ＴＦＡを 含む７０％　アセトニトリル水溶液からなる溶媒システムを用いて直線的な濃度 勾配をつけて溶出する。すべての分画について、以下に記載の分析用ＨＰＬＣ（ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ＨＰＬＣ）によって精製度および保持時間（ｒｅｔｅｎ ｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）を調べた。

未精製および精製ペプチドの品質および溶出特性は、２２０及び２８０ｎｍにセ ットされたダイオード捕獲検出器（ｄｉｏｄｅ　ａｒｒａｙ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ ）および逆相４．６Ｘ２５０ｍｍダブルーポレックス（Ｗ−ｐｏｒｅｘ）　Ｃ１ ８カラム（ポアサイズ＝３００オングストローム、粒子サイズ＝５μｍ）を備え たヒユーレット−パラカード（■ｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）　モデル　１ ０９０液体クロマトグラフィーによる分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃ（Ａｎａｌｙｔｉｃａ ｌ　ＨＰＬＣ）によって行った。上記の溶媒システム（Ａ）及び（Ｂ）の流速を １．２ｍｌ／分に維持し、室温で分離を行った。

はとんどの場合、濃度勾配の条件をわずかに変えたのみで同様のカラムによる再 クロマトグラフィーによって、プソイドペプチドのボンベシン拮抗物質をさらに 精製した。

精製されたペプチドの等質性は、分析用ＨＰＬＣにおいて９７％以上精製されて いることが分かった。

必要であれば、式Ｉのプソイドペプチドのアミノ酸分析を、０．２％　３−（２ −アミノエチル）−インドール（３−（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）−ｉｎｄｏ ｌｅ）を含む４Ｍメタン−硫酸（ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ） を用いて真空密閉されたチューブ中で１１０℃、２０時間、加水分解されたサン プルについて、ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）　６３００アミノ酸分析器で行っ てもよい。

Ｃ０合成中間体 １、側鎖の保護基 固相合成において、様々なアミノ酸部分またはペプチド断片の反応性を有する側 鎖の官能基を保護することは共通する事柄である。これらの側鎖の官能基は、望 ましくない化学反応が側鎖で起こることを防止するために保護される。

したがって、適当な残基に連結される側鎖の保護基を有するペプチド鎖において 目的とする配列中に位置するそれぞれのアミノアシル残基を含む中間ペプチドを 生産することは共通する。

ペプチドの合成に使用される特定の側鎖の保護基を選択する際には、以下のよう な規則に通常従う：（ａ）保護基は連結条件下で自身の保護特性を維持すること が好ましい、（ｂ）保護基は、連結試薬に対して安定でなければならず、各合成 段階におけるα−アミノ保護基を除去するために選択された連結反応条件下で安 定であることが好ましい、および（ｃ）側鎖の保護基は、ペプチド鎖が望ましく ないように変化しないような反応条件下で、目的とするアミノ酸配列の合成が終 了した時点で除去可能でなければならない。

側鎖の保護基は、既知の方法によってアミノ酸残基に結合する。Ｈｉｓに対する 側鎖の保護基としてはＢｏｍが好ましく挙げられ；Ｇｌｕ及びＣｙｓに対する側 鎖の保護基としてはＢｕｔか好ましく挙げられる。

２、合成中間体 以下の合成段階における中間ペプチドも本発明の概念に含まれると解する。３段 階におけるペプチド番号２のペプチド（以降、ペプチド２と称する）の中間ペプ チドを以下に詳細に説明する： 段階Ａ：すべてのアミノ酸及び樹脂の連結後：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｎ− Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓ 　ｉ　−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂（”１１０２／Ａ”）　。

段階Ｂ：Ｎ末端のＢｏｃ−基の除去後：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　１　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　 １ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙ ｓ−ＢＨＡ樹脂（“１１０２／Ｂ″）；段階Ｃ：Ａ９の環化後： Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　 （Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　ｉ　−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂（“１１０２／Ｃ”） 。

以下の実施例２におけるペプチド番号１７の合成においてはさらに一段階、つま り段階りが付加される。段階りの中間体は、樹脂から除去されるが、Ａ２にＡ１ を連結する単結合Ｘは持たない。

医療への使用 ボンベシン拮抗物質は、悪性貧血、慢性の萎縮性胃炎、ゾーリンガーーエリソン 症候群（Ｚｏｌｌｉｎｇｅｒ−Ｅｌｌｉｓｏｎ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、及び白斑 等の、胃腸のクロマフィン様細胞（ｇａｓｔｒｉｃｅｎｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｆ ｆｉｎ−１ｉｋｅ　ｃｅｌｌ）の広範な過形成に関連した、ハイパーガストリノ ー７　（ｈｙｐｅｒｇａｓｔｒｉｎｅｍｉａ）、および発達の危険性の高いもの では、多病巣性の胃のカルチノイドの症状を治療するのに有用である。さらに、 腸のクロマフィン様細胞（ｅｎｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｆｆｉｎ−１ｉｋｅ　ｃｅ ｌｌ）の過形成は、ハイパーガストリノーｖ　（ｈｙｐｅｒｇａｓｔｒｉｎｅｍ ｉａ）を患う動物において容易に生じる。

パーガストリノーマを引き起こし、ヒトのカルチノイドを生じさせることがある ため、現状の薬剤に比べて好ましいものである。さらに、Ｈ２−拮抗薬による治 療を中止すると、ハイパーガストリノーマが存在するために、潰瘍が即座に再発 する。

本発明の上記した化合物はボンベシン／ＧＲＰレセプターの拮抗物質であるため 、肺癌、結腸癌及び胃癌の治療に使用できる。

本発明の式Ｉのボンベシン拮抗物質は、酸付加塩（ａｃｉｄａｄｄｉｔｉｏｎ　 ５ａｌｔ）等の、製薬上使用できる毒性のない酸または塩の形態で投与される。

このような酸付加塩としては、具体的には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リ ン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、タンニン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、ク エン酸塩、安息香酸塩、琥珀酸塩、アルギン酸塩、パモエート、マレイン酸塩、 アスコルビン酸塩、酒石酸塩等が挙げられる。

これらの薬剤組成物は、式Ｉのプソイドペプチドを既知の製薬上使用できる担体 と組み合わせて含むが、この際、生理食塩水が例えば担体として使用できるが、 他の既知の担体も使用できる。

これらの薬剤組成物による被験者の治療は、Ｌ　ＨＲＨの他の作用薬および拮抗 薬、またはソマトスタチン類似体を用いた臨床治療と同様にして行われる。した がって、式Ｉのボンベシン拮抗物質は、静脈内に、皮下に、筋肉内に、鼻孔内に または肺用のエアロゾルによって若しくは生分解性の適当なポリマー（ＤＬ−ラ クチド−コグリコリド（ＤＬ−Ｉａｃｔｉｄｅ−ｃｏｇｌｙｃｏｌｉｄｃ）等） から配合された貯蔵された形態（ｉｎ　ａ　ｄｅｐｏｔ　ｆｏｒｍ）　（例えば 、マイクロカプセル、マイクロ顆粒（ｍｉｃｒｏｇｒａｎｕｌｅ）若しくはシリ ンダー状の棒様の移植片）で投与されされる。連続点滴、注入ポンプ及びマイク ロカプセル等の所定の時間で放出される形態（ｔｉｍｅ−ｒｅｌｅａｓｅ　ｍｏ ｄｅ）などの、他の同様な投与形態もまた本発明の概念に含まれる。

式Ｉのペプチドの有効投与量は、投与形態および処置される浦乳動物の種類によ って変化する。投与量は、非経口投与の場合、１日当たり患者の１ｋｇの体重当 たり約１〜１．０００μｇのペプチドである。上記投与量の範囲（よ単に好まし いというだけでより高い投与量も場合によっては選択される。注入量が約１５〜 約３０日またはそれ以上継続するように計算された貯蔵された形態（ｄｅｐｏｔ 　ｆｏｒｍ）である以外は、ペプチドを含有する生理食塩水を１日当たり約０． ０１〜０．２０ｍｇ／体重１　ｋ　ｇの範囲の投与量（こなるように投与し、で もよい。

以下の実施例では、３種類のチャラフターコード（ｃｈａｒａｃｔｅｒ　ｃｏｄ ｅ）を用いて、特定の合成段階における中間ペプチドを特定する。“Ｉｌｏ　１ ／Ａ”と名付けられたペプチドは、合成の段階Ａか終了した実施例“１”で作製 されｔコペプチド“０１”に対する中間ペプチドを表わす。同様にして、“２１ ０８／Ｂ”及び“４／１９／Ｃ”は、それぞれ合成段階Ｂ及びＣが終了した実施 例“２”及び“４”で作製されたペプチド”０８”及び“１９”の中間ペプチド を表わす。

実施例（１） ペプチド＃ １、　Ｄ−ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅ ｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−Ｈ２ ４、Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌ ｅｕ−匝−Ｔａｃ−５、Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ −Ｈｉｓ−Ｌｅｕ」射−Ｔａｃ−ＮＨ２８、Ｐａ１−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ− Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−２巨−Ｔａｃ−Ｈ２ ９、Ｄ−Ｐａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｌｉｓ−Ｌｅｕ −ｐｓｉ−Ｔａｃ−Ｈ２ １０、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ −３２ｑ−Ｔａｃ−ＮＨ２１１、Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ− Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ト４−Ｔａｃ−Ｎ■２ １２、　Ｔｐｉ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ− ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＨ２１３、Ｄ−Ｔｐｉ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ− Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−匣−Ｔａｃ−ＮＨ２１４、Ｈｃａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ− Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＮＵ２これらのペ プチドは、共通の中間体Ｉ−１、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ− ｔｌｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＯＡ樹脂から適宜 合成され、以下のようにして合成される。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂を以下のようにして 得る：２．０ｇ　ＢＨＡ樹脂（０，５５ミリモルＮ　Ｈ２／　ｇ　）を、２０ｍ １　１０％　ＴＥＡのＣＨ２Ｃ１２溶液でそれぞれ３分間２回処理（中和）し、 ２０ｍ１　ＣＨ２Ｃｌ２で６回洗浄し；次に、ＤＭＦに溶解された３、３ミリモ ルのＦｍｏｃ−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）及び３．６ミリモルのＨＯＢｔと３分間混合 する。３当量のＤＩＣ（ＣＨ２Ｃ１２において２０％溶液となるように）を添加 する。この混合物を室温で９０分間振盪する。このようにして得られたＦｍｏｃ −Ｃｙ　ｓ　（Ｂｕ　ｔ）−ＢＨＡ樹脂を、ＣＨ２Ｃｌ　２、メタノールで各２ 回、さらにＣＨ２Ｃｌ２で３回洗浄した後、カイザーテスト（Ｋａｉｓｅｒ　ｔ ｅｓｔ）を行った。

プソイドペプチド結合を形成するためのＦｍｏｃ−Ｌｅ・−−９ ｕ−ＣＨＯの連結を以下のようにして灯つ。Ａ　からのＦｍｏｃ基の脱保護を、 １５ｍ１　５０％　ピペリジンのＤＭＦ溶液を加え、３０分間混合し、１５ｍ１ 　ＤＭＦで洗浄する（６×１分）ことによって、Ｆｍ０Ｃ基のＡ９からの脱保護 を行う。さらに、１％　ＡｃＯＨを含む３．３ミリモルのＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｃ ＨＯ（３当量）のＤＭＦ溶液を添加し、ＤＭＦに溶解したＮ　ａ　Ｂ　Ｈａ　Ｃ Ｎ　（３、５当量）を添加し、さらに、１時間振盪する。この後、１５ｍ１　５ ０％　ＭｅＯＨ（３Ｘ１分）；１５ｍ１　１００％ＭｅＯＨ（３Ｘ１分）；およ び１５ｍ１　ＤＭＦ　（３ｘ１分）で洗浄する。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂からのＦｍｏｃ基の 除去（脱保護）を操作４Ａと同様にして行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−２旦−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂からＦｍｏｃ基を除去 し中和した後、Ｆｍｏ　ｃ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）の連結を操作４Ａに記載した ようにして行う。

Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙの連結を操作４と同様にして行う。２０％　１，３−ジイソプ ロピルカルボジイミド（１，３−ｄｉｉｓ。

ｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）のＣＨ２Ｃｌ　２溶液（３，３ミリモ ル）を、０℃で、３．３ミリモルのＦｍｏｃ−Ｇｌｙ及び３．６ミリモルのＨＯ ＢｔのＤＭＦ溶液に加え、冷却しながら１５分間攪拌し、さらに室温で１５分間 攪拌し、沈殿物を濾過し、樹脂に加え、６０分間振盪した。次に、アミノ酸残基 、Ｆｍｏ　ｃ−Ｖａ　ｌ、　Ｆｍｏ　ｃ　−Ａ　１　ａ及びＦｍｏｃ−Ｔｒｐを 順次同様にして導入し、３．８０ｇの中間１−１、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ −Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ　１旦−Ｃｙｓ　（Ｂ ｕｔ）−ＢＨＡ樹脂の構造を有する保護されたペプチド樹脂を得た。

Ｆｍｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｎ及びＢｏ　ｃ−Ｄ−ｐＧ　ｌ　ｕを中間ペプチドＩ−１ にさらに連結することによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−ｐＧ　１　ｕ−Ｇ 　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ＩＧ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌ ｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙ　５（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１１０１／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ及びＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅを中間ペプチドＩ−１にさらに連結す ることによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　 １ａ−Ｖａ　１−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃ ｙｓ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１１０２／Ａ”）。

Ｆｍｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｎ及びＡｃ−Ｄ−Ｐｈｅを中間ペプチドＩ−１にさらに連 結することによって以下が得られる：Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ 　１　ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｙ−ｔｌｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−２旦−Ｃ ｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１１０４／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ及びＢｏｃ−Ｄ−Ｃｐａを中間ペプチドＩ−１にさらに連結す ることによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｃｐａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　 １ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−２旦−Ｃｙｓ 　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１１０５／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＢｏｃ−Ｄ−Ｎａｌを中間ペプチドＩ−１にさらに連結す ることによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｎａ　１−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ 　１ａ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃ ｙｓ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１１０７／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＢｏｃ−Ｐａｌを中間ペプチドＩ＝１にさらに連結するこ とによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｐａ　Ｉ　−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　］ 　ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　ｉ　−Ｃｙ ｓ　（Ｂ浮煤j −ＢＨＡ樹脂　（“１１０８／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＢｏａ−Ｄ−Ｐａｌを中間ペプチドＩ−１にさらに連結す ることによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐａ　１−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ 　Ｉａ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃ ｙｓ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１１０９／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＢｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐを中間ペプチドＩ−１にさらに連結す ることによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔ　ｒｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ 　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−凪−Ｃｙｓ　 （Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１／１０／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＡｃ−Ｄ−Ｔｒｐを中間ペプチド１−１にさらに連結する ことによって以下が得られる：Ａｃ−Ｄ−Ｔ　ｒｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｇ−Ｃｙｓ　 （Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１／１１／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ及びＢｏｃ−Ｔｐｉを中間ペプチドＩ−１にさらに連結するこ とによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｔｐ　ｉ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ −Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｏ）−Ｌｅｕ１旦−Ｃｙｓ　（Ｂｕ ｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１／１２／Ａ”）。

Ｆｍｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｎ及びＢｏｃ−Ｄ−Ｔｐｉを中間ペプチドＩ−１にさらに 連結することによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｐｉ　−Ｇ　１　ｎ−Ｔ ｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ− ｐｓ　１−Ｃｙｓ　iＢ Ｉｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“１／１３／Ａ”）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＨｃａを中間ペプチドＩ−１にさらに連結することによっ て以下が得られる：Ｈｃａ−Ｇ　１　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　１−Ｇ　 １ｙ−Ｈｉ　ｓ　（ＢＯＯＩ）　−Ｌｅｕ−凪−Ｃｙ　ｓ　（Ｂｕ　ｔ）　−Ｂ g Ａ樹脂　（“１／１４／Ａ”）。

さらに、中間ペプチド１１０１／ＡのＮ末端のＢｏａ基を、５％メルカプトエタ ノール及び５％アニソールを含む５０％　ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液を用いて１ 回目は５分間及び２回目は２５分間の計２回処理することによって除去する。次 に、中間ペプチドを、ＣＨ２Ｃｌ２　（２回、１分）　、ＭｅＯＨ（２回、１分 ）及びＤＭＦ　（３回、１分）で洗浄する。これによって、ＣｙｓからＢｕｔ保 護基をも除去され、これによって中間ペプチド、Ｄ−ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ −Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｌｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ−Ｂ ＨＡ樹脂（“１１０１／Ｂ”）が得られ、さらにこれをＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＯＨ 及びＤＭＦで３回ずつ１分間洗浄する。

この時点で、中間ペプチドｌ１０１／ＢのＣｙｓの側鎖は、酸化によって環化し 、操作５のように式ＩＩＡ中に示される５員の複素環を形成する。ＡｃＯＨ，３ ，７％　ＨＣＨＯ及びＤＭＦの１−　Ｏｍ　ｌの混合物（１：　１　：　８）を 添加する。この反応混合物を室温で３分間振盪し、水、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２ でそれぞれ３回ずつ洗浄することによって、中間ペプチド１　／　０１　／　Ｃ 、Ｄ−ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｂｏｍ） −Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂が得られる。

次に、中間ペプチドｌ１０１／Ｃを操作６と同様にしてＨＦ及びアニソールで処 理し、ＨｉｓからＢｏｍ保護基を除去し、同時に樹脂支持相からノナペプチドを 切断することによって、Ｃ末端にＮｌ２であるＱ基を形成する。このペプチドを 操作７と同様にしてＨＰＬＣで精製する。このようにして、ボンベシン拮抗物質 ペプチド番号１が得られる。

Ｂｏｃ基及びＢｕｔ基の除去および還元された結合の第２級アミンによるＣｙｓ の−ＣＨ２−８Ｈ基の環化の段階を同様にして中間ペプチド１１０２／Ａ、１１ ０５／Ａ。

１１０７／Ａ、１１０８／Ａ、１１０９／Ａ、１／１０／Ａ及び１／１２／Ａに ついて行い、以下の中間ペプチドを−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １１０４／Ｂ　Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ− ■ｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １１０７／Ｂ　Ｄ−Ｎａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐ旦−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １１０８／Ｂ　Ｐａｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−１１ｉｓ（ Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｇ−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １１０９／Ｂ　Ｄ−Ｐａｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １／１０／Ｂ　Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｌｉ ｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １／１１／Ｂ　Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ− Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ＢＨＡ樹脂 １／１３／Ｂ　Ｄ−Ｔｐｉ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ （Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−２旦−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 １／１４／Ｂ　Ｈｃａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｂ ｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 未精製のペプチドをＢＨＡ樹脂から切断した後、操作６及び７によって精製、精 製ペプチド２．４．５、及び７〜分析ＨＰＬＣデータ または、５員の複素環を以下の方法によって溶液中に形成してもよい。

０．８ｍｌの氷酢酸中に固相合成から得られた２　５ｍｇのＬｅｕ−ｐｓ　１− Ｃｙｓ−Ｎｌ２の構造を有する中間ペプチドを１００μｌの１％ホルムアルデヒ ド（水における重量％溶液）と室温で３０秒間混合した後、２０μｌの５０％酢 酸アンモニウム溶液を添加する。この反応混合物を精製し、−Ｌｅｕ−ｐｓ　１ −Ｔａｃ−Ｎｌ２の構造を有する目的とするペプチドを得る。

１５、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ −ｐｓｉ−Ｔａｃ−Ｎｕ２１６、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｔｒｐ−Ａｌ ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−ＴａｃＮＨ２ １７、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ［−］−］Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＧｌｙＨｉｓ− Ｌｅｕ−ｐｇ−ＴａｃＨ２ 本実施例におけるペプチドは、０．５ｇ　ＢＨＡ樹脂（０，５５ミリモルＮ　Ｈ ２／　ｇ　）上に構築された、共通の中間体Ｉ−２、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ａ１ａ ４ａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨ Ａ樹脂から適宜合成される。中間ペプチドＩ−２を実施例（１）に記載された操 作および方法にしたがって調製される。次に、１５０ｍｇの中間ペプチドＩ−２ の一部を３つのアリコートに分け、操作４に記載された方法によってさらに２連 結行い、最終のノナペプチド樹脂を得る。

Ｆｍｏｃ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）及びＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅを中間ペプチドＩ−２ にさらに連結することによって以下が得られる： Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｔ　ｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　 １−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−店４−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ） −ＢｔｌＡ樹脂　（“２／１５／Ａ”）Ｆｍｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｕ　（ＯＭｅ）及 びＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅを中間ペプチドＩ−２にさらに連結することによって以下 が得られる： Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕ　（ＯＭｅ　）　−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１ −Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｗ）　−Ｌｅｕ−ｐｑ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−Ｂ ＨＡ樹脂　（“２／１６／Ａ”）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ　（Ｂｕｔ）及びＢｏｃ−Ｄ −Ｐｈｅを中間ペプチドＩ−２にさらに連結することによって以下が得られる： Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　１　ｕ　（Ｂｕｔ）−Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　１ −Ｇ　１　ｙ−ｔｌｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−匡−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）− ＢＨＡ樹脂　じ２／１７／Ａ”）操作４と同様にして５％メルカプトエタノール 及び５％アニソールを含む５０％　ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液を用いて、中間ペ プチド２／１５／ＡからＢｏＣ基を除去する。

この反応によって、残基Ａ９からＢｕｔ基も除去され、これによって以下の中間 ペプチド２／１５／Ｂが得られる：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｔｒ ｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｑ −Ｃｙｓ−ＢｆｉＡ樹脂 この時点で、中間ペプチド２／１５／ＢのＣｙｓの側鎖は、酸化によって環化さ れ、操作５と同様にして式ＩＩＡ中に示される５員の複素環を形成する。Ａｃ０ Ｈ１３，７％　ＨＣＨＯ及びＤＭＦの１０ｍ１の混合物（１：　１　：　８）を 添加する。この反応混合物を室温で３分間振盪し、水、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２ でそれぞれ３回ずつ洗浄することによって以下の中間ペプチド２／１５／Ｃが得 られる：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１− Ｇ　１ｙ−１１ｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−正組−Ｔａｃ−ＢＨＡ樹脂 次に、中間ペプチド２／１５／Ｃを、新たに蒸留されたＨＦ　（５ｍｌ）及びア ニソール（０’、２５ｍ１）で０℃で１時間処理することによって、Ｈｉｓから Ｂｏｍ保護基をも除去する。溶媒を真空下で蒸発させ、酢酸エチルで洗浄し、７ ０〜８０％の酢酸水溶液で抽出し、凍結乾燥する。

精製後、ボンベシン拮抗物質ペプチド番号１５が得られる。

Ｎ末端のＢｏａを除去し、Ｃｙｓ９を環化し、ＢＨＡ樹脂から中間ペプチドを除 去し、さらにＨＰＬＣで精製する段階を中間ペプチド２／１６／Ａ及び２／１７ ／Ａについて同様にして行うことによって、ペプチド番号１６及び以下の中間ペ プチド２／１７／Ｄが得られる：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　１　ｕ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌ　ａ −Ｖａ　１−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｈｉ　ｓ−Ｌｅｕ−ｐｇ−Ｔａｃ−ＮＨ２１５ｍｇの ２／１７／Ｄ、および０℃の１５ｍｇ　ＨＯＢｔを含む０．８ｍｌのＤＭＦの混 合物を、５０μｍ　２５％　ジイソプロピルカルボジイミド（１，３−ｄｉｉｓ ｏｐｒｏｐｙｌｃａロピオニル部分のγ−カルボキシル部分に連結したペプチド １７の単結合を形成させる： Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ　［−コーＴｒｐ−Ａ１ａ−Ｖａｌ−Ｇ　１ｙ−Ｈｉｓ−Ｌ ｅｕ−匡−Ｔａｃ−ＮＨ２反応混合物を操作７にしたがってＨＰＬＣによる精製 を行う。

保持時間は以下の通りである。

分析ＨＰＬＣデータ ３、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ− ｐｓｉ−ＭＴａｃ−ＮＨ２ ６、Ｄ−Ｃｐａ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｇ−Ｍ Ｔａｃ−ＮＨ２ これらのボンベシン拮抗物質は、共通の中間体Ｉ−３、即ち、Ｆｍｏｃ−Ｇ　Ｉ ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（ＢＯ［０）　−Ｌ ｅｕ−囚４−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂から適宜合成される。この中間体は 、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）で始まり、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ（Ｎ　ａ 　Ｂ　Ｈａ　ＣＮによる）；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ　（Ｂ。

ｍ）等［さらには実施例（１）に従う］が続〈実施例（１）に記載された固相合 成操作によって順次連結することによって１．ＯｇＢＨＡ樹脂（０，５５ミリモ ル　Ｎ８２７ｇ）上に構築される。Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎを操作４にしたがってＮ末 端に連結し、中間体Ｉ−３を形成する。中間体■−３へのＢｏＣ−Ｄ−Ｐｈｅま たはＢｏｃ−Ｄ−Ｃｐａの最終的な連結は、操作４における方法にしたがって行 われ、これによって中間ペプチド“３／３／Ａ”または“３７６／Ａ”がそれぞ れ形成される。

ＢｏＣ基の除去を、操作４と同様にして５％メルカプトエタノール及び５％アニ ソールを含む５０％　ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液を用いて行う。

この時点で、中間ペプチド３／３／ＢのＣｙｓの側鎖は、酸化によって環化され 、操作５と同様にして式ＩＩＢ中に示される５員の複素環を形成する。５０％　 ＡｃＯＨ，１０％　ＣＨ３ＣＨＯ及びＤＭＦの１０ｍ１の混合物（１゜５：０． ５：８）を添加する。この反応混合物を室温で１０分間振盪し、水、ＤＭＦ及び ＣＨ２Ｃｌ２でそれぞれ３回ずつ洗浄することによって、以下の中間ペプチド３ ／３／Ｃが得られる： Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　１　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ−ｔｌｉ 　５−Ｌｅｕ−庄Ｉ、−ＭＴａｃ−ＢＨＡ樹脂中間ペプチド３／３／Ｃ及び３／ ６／Ｃを、ＨＦ　（５ｍｌ）及びアニソール（０，２５ｍ１）で０℃で１時間処 理することによって、操作６と同様にして樹脂から除去する。

この工程によって、ＨｉｓからＢｏｍ保護基をも除去され、これによってノナペ プチド３及び６が得られる。

これらのペプチドを操作７と同様にしてＨＰＬＣを用いて精製する；保持時間は 以下の通りである。

分析ＨＰＬＣデータ または、２５ｍｇのＬｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ−ＮＯ３の構造を有する中間ペプ チドに０．８ｍｌの氷酢酸を添加し、さらに１００μｌの１％アセトアルデヒド 室温で混合することによって、５員の複素環を溶液中に形成してもよい。

なお、この混合は５分間行われる；その後、１００μｍの酢酸アンモニウムを添 加する。この反応混合物を精製し、Ｌｅｕ−ｐｓ　ｉ−ＭＴａｃ−ＮＯ３の構造 を有する目的とするペプチドを得る。

ＤＭＴａｃ−ＮＯ３ １９、Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｔｌｉｓ −Ｌｅｕ−匣−２１、Ｔｐｉ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉ ｓ−Ｌｅｕ−ｐｑ−Ｄ訂ａｃ−ＮＨ２２２、Ｄ−Ｔｐｉ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌ ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｂ旦−ＤＭＴａＣ−ＮＯ３ これらのポリペプチドは、共通の中間体Ｉ−４、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌ　ａ −Ｖａ　ｌ−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｑ−Ｐｅｎ　（Ｂ ｕｔ）−ＢｔｌＡ樹脂から適宜合成される。この中間体は、実施例（１）及び（ ２）に記載されたのと同様にして固相合成の標準方法にしたがってベンズヒドリ ルアミン（ＢＨＡ）樹脂上に順次構築される。

したがって、１．０ｇＢＨＡ樹脂（０，５５ミＩＪ　モ／ＩｚＮ　Ｈ２／　ｇ　 ）を、操作２にしたがって調製し、１０ｍ１１０％　ＴＥＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液 でそれぞれ３分間２回処理（中和）し、１０ｍ１　ＣＨ２Ｃｌ２で６回洗浄する ；次に、ＤＭＦに溶解した１、６ミリモルのＦｍｏｃ−Ｐｅｎ（Ｂｕｔ）及び１ ．８ミリモルの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎ ｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ）　（ＨＯＢ　ｔ　）と３分簡混合する。１．６ミリモル 濃度である２０％　１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（１，３−ｄｉｉｓ ｏｐｒｏｐｙ　Ｉｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）　（Ｄ　Ｉ　Ｃ）のＣＨ２Ｃｌ２ 溶液を添加する。この混合物を室温で９０分間振盪する。このようにして得られ たＦｍｏｃ−Ｐｅｎ　（Ｂｕ　ｔ）−ＢＨＡ樹脂を、ＣＨ２Ｃｌ　１メタノール で各２回、さらにＣＨ２Ｃｌ２で３回洗浄した後、カイザーテスト（Ｋａｉｓｅ ｒ　ｔｅｓｔ）を行うＯＦｍｏｃ−Ｐｅｎ　（Ｂｕ　ｔ）−ＢＨＡ樹脂からのＦ ｍ。

Ｃ−基の除去（脱保護）を操作４Ａと同様にして行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯの連結を操作３にしたがって行う。Ａ９　（Ｂｕｔ） −ＢＨＡ樹脂をＤＭＦで２回洗浄する。次に、１％　ＡｃＯＨを含む１．６ミリ モルのＦｍ。

ｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯのＤＭＦ溶液を加えた後、１．８ミリモルのＮａＢＨＣＮの ＤＭＦ溶液を添加する。この反応混合物を６０分間振盪した後、５０％メタノー ル水溶液で２回、１００％メタノールで２回、及びＣＨ２Ｃｌ２で３回、それぞ れ１分間ずつ洗浄する。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｐｅｎ　（Ｂｕｔ）　−ＢＨＡ樹脂からＦｍｏｃ 基を除去し中和した後、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ　（Ｂｏｍ）の連結を操作４と同様に して行う。

Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙの連結を操作４と同様にして行う。２０％　１．３−ジイソプ ロピルカルボジイミド（１，５ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を、１．５ミリモ ルのＦｍ。

ｃ−Ｇｌｙ及び１．６５ミリモルのＨＯＢｔを含むＤＭＦ溶液に０℃で添加し、 冷却しながら１５分間および室温で１５分間攪拌し、沈殿物を濾過し、樹脂に加 え、６０分間振盪する。次に、アミノ酸残基Ｆｍｏｃ−Ｖａ　１．Ｆｍ。

ｃ−Ａｌａ及びＦｍｏｃ−Ｔｒｐを同様にして順次連結することによって導入し 、１．９ｇのＦｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　ｌｙ−Ｈｉｓ（ Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｐｅｎ（Ｂｕｔ）−Ｂ■Ａ樹脂の構造を有する保護 されたペプチドである中間体Ｉ−４が得られる。

０．９１ｇの中間ペプチドＩ−４を５つのアリコート（各約２００ｍｇ）に分け 、これを用いて操作４に記載された方法にしたがって保護されたポリペプチド樹 脂を合成する： Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＢｏａ−Ｄ−Ｐｈｅを中間ペプチドＩ−４にさらに連結す ることによって以下が得られる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｎ−Ｔ　ｒｐ−Ａ 　１　ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐ旦− Ｐｅｎ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“４／１８／Ａ”）中間ペプチドＩ−４に Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎを連結した後Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅをさらに連結することによって 以下が得らｔ）−ＢＨＡ樹脂　じ４／１９／Ａ”）Ｆ’ｍｏｃ−Ｇｉｎ及びＢｏ ｃ−Ｄ−Ｃｐａを中間ペプチドＩ−４にさらに連結することによって以下が得ら れる：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｃｐａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｉＧ　１ｙ− Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−Ｈ旦−Ｐｅｎ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（ ”４／２０／Ａ”）中間ペプチドＩ−４にＦｍｏｃ−Ｇｉｎを連結した後Ｂｏｃ −Ｔｐｉをさらに連結することによって以下が得られる： Ｂｏｃ−Ｔｐ　ｉ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉｓ 　（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｓ　ｉ　−Ｐｅｎ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“４ ／２１／Ａ”） 中間ペプチドＩ−４にＦｍｏｃ−Ｇｉｎを連結した後Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｐｉをさら に連結することによって以下が得られる： Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｐ　ｉ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ −Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−匣−Ｐｅｎ　（Ｂｕｔ）−ＢＯＡ樹脂　（ “４／２２／Ａ”）さらに、Ｂｏｃ−基を５％メルカプトエタノール及び５て、 以下の中間ペプチド４／１８／Ｂが得られる：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ− Ａ　１ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　 １−Ｐｅｎ−ＢＨＡ樹脂 この時点で、中間ペプチド４／１８／ＢのＰｅｎの側鎖は、酸化によって環化さ れ、操作５と同様にして式１１Ｃ中に示される５員の複素環を形成する。Ａｃ０ Ｈ１３，７％　ＨＣＨＯ及びＤＭＦの１０ｍ１の混合物（１：　１　：　８）を 添加し、反応混合物を形成し、この反応混合物を室温で３分間振盪し、水、ＤＭ Ｆ及びｃＨ２ｃ１２でそれぞれ３回ず・つ洗浄することによって以下の中間ペプ チド４／１８／′Ｃが得られる： Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌａ　−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ 　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　ｉ　−ＤＭＴａｃ−ＢＨＡ樹脂 ２、メタノール及びｃＨ２ｃ１２で各３回ずつ洗浄し、新たに蒸留されたＨＦ　 （５ｍｌ）及びアニソール（０，２５ｍ　ｌ　）で０℃で１時間処理する。溶媒 を真空下で蒸発させ、エーテル若しくは酢酸エチルで洗浄し、７０〜８０％の酢 酸水溶液で抽出し、凍結乾燥することによって未精製のノナペプチド樹脂が得ら れる。この反応混合物を精製し、ボンベシン拮抗物質ペプチド番号１８を得る。

中間ペプチド４／１９／Ａ、４／２０／Ａ、４／２１／Ａ及び４／２２／Ａにつ いて、同様にして保護基を除去し、脱保護されたＡ９を環化し、さらに中間ペプ チドをＢＨＡ樹脂から外すことによって、それぞれペプチド番号１９．２０．２ １及び２２が得られる。

操作７にしたがって（Ａ）　０．　１％　ＴＦＡおよび（Ｂ）１％　ＴＦＡを含 む７０％　アセトニトリル水溶液からなる溶媒システムを用いてＨＰＬＣによっ て精製を行った。これらのペプチドの保持時間は以下の通りである。

分析ＨＰＬＣデータ または、２５　ｍ　ｇの−Ｌ　ｅ　ｕ−ｐ　ｓ　ｉ　−Ｐ　ｅ　ｎ−ＮＨ２の構 造を有する遊離ペプチドを１００μｌの１０％ホルムアルデヒドと混合された２ ５ｍｇ　ＨＯＢ、ｔを含む０．　８ｍｌの氷酢酸に添加し、０℃で３０分間攪拌 することにょ−て、Ａ９残基を溶液中で環化し、５員の環構造Ｌｅｕ−ｐ　ｓ　 ｉ　−ＤＭＴ　ａ　ｃ−ＮＨ２を有するペプチドを得てもよい。

実施例（５） Ｐａ１−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓ ｉ−Ｃｙｓ−ＮＨ２Ｄ−Ｐａ　ｌ　−Ｇ　１　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１ −Ｇ　１ｙ−１１ｉ　５−Ｌｅｕ−ｐｑ−Ｃｙｓ−ＮＨ２Ｔｐ　ｉ　−Ｇ　Ｉｎ −Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ−２牲−Ｃｙｓ− Ｎｔ１２Ｄ−Ｔｐｉ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ− Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ−Ｎｕ２Ｈｃａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ− Ｇ１　ｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ−ＮＨ２これらのペプチドは、共通 の中間体１−５、Ｆｍｏｃ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｉＧ　１ｙ− Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　ｉ　−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹 脂から合成される。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂は以下のようにして 得られる：操作２及び３に示された方法によって１．　０ｇＢＨＡ樹脂（０，５ ５ミリモルＮ　Ｈ２／　ｇ　）にＦｍｏ　ｃ　−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）及びＦｍｏ ｃ−Ｌｅｕ−ＣＨＯを順次連結する。

Ｆｍｏｅ−Ｈｉｓ　（Ｂｏｍ）　、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍ ｏ　ｃ−Ａ　１　ａ、　Ｆｍｏ　ｃ−Ｔ　ｒ　ｐ及びＦｍｏ　ｃ−Ｇ　Ｉ　ｎを 順次連結することによって、中間ペプチドＩ−５、Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ− Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−２ｉ−Ｃｙｓ（Ｂｕｔ） −ＢＨＡ樹脂が得られる。

本実施例のすべてのペプチドに共通な上記中間体１−５の１５０ｍｇのアリコー トを操作４に記載された方法によってさらにもう１回連結を行うことによって、 最終的なペプチド樹脂を得る。

Ｂｏｃ−Ｐａｌを中間ペプチドＩ−５にさらに連結することによって以下が得ら れる： Ｂｏｃ−Ｐａ　ｌ　−Ｇ　１　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ− Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ　（Ｂ浮煤j −ＢＨＡ樹脂　（“５１０８／Ａ”） Ｂｏａ−Ｄ−Ｐａｌを中間ペプチドＩ−５にさらに連結することによって以下が 得られる： Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐａ　ｌ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ− Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂 　（“５１０９／Ａ”）Ｂｏｃ−Ｔｐｉを中間ペプチドＩ−５にさらに連結する ことによって以下が得られる： Ｂｏｃ−Ｔｐｉ　−Ｇ　１　ｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ ｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“５ ／１２／Ａ”） Ｂｏａ−Ｄ−Ｔｐｉを中間ペプチドＩ−５にさらに連結することによって以下が 得られる： Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｐｉ　−Ｇ　］　］ｎ−Ｔｒｐ−ＡＩａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ −Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ）　−４ｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ　（a ｕｔ）−ＢＨＡ樹脂　（“５．／１３／Ａ”）Ｈｃａを中間ペプチドＩ−５にさ らに連結することにょって以下が得られる： Ｈｃａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｉＧ　１　ｙ−ｔｌ　ｉ　ｓ　（ Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ　（Ｂｕｔ）　−Ｂg Ａ樹脂　（“５／１４／Ａ”） Ｎ末端のＢｏｃ基を、５％メルカプトエタノール及び５％アニソールを含む５０ ％　ＴＦＡのＣＩ］２Ｃ１２溶液で第一回目は５分間及び次に２５分間の計２回 処理することによって、中間ペプチド５１０１／Ａから除去する。この処理によ って、Ｃｙｓから保護基をも除去する。さらに、このペプチドを、操作４と同様 にして、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＯＨ及びＤＭＦで洗浄することによって、以下の中 間ペプチド５１０８／Ｂが得られる： Ｐａ　１−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　 （Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ−ＢＨＡ樹脂さらに、この中間ペプチ ド５１０８／Ｂを、新たに蒸留されたＨＦ　（５ｍｌ）及びアニソール（０，２ ５ｍ１）で０℃で１時間処理することによって、ＨｉｓからＢｏｍ保護基をも除 去する。溶媒を真空下で蒸発させ、酢酸エチルで洗浄し、７０〜８０％の酢酸水 溶液で抽出し、凍結乾燥することによって以下のペプチドが得られる：Ｐａ　ｌ −Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｖａ　１−Ｇ　１ｙ−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ−ｐｓ 　１−Ｃｙｓ−ＮＨ２保護基及びＢＨＡ樹脂を中間ペプチド５１０８／Ａ、５１ ０９／Ａ、５／１１／Ａ、５／１２／Ａ、５／１３／Ａ及び５／１４／Ａから除 去し、本実施例の冒頭に列挙されたペプチドを得る。これらのペプチドを操作７ にしたがって精製試験にかける。

分析ＨＰＬＣデータ または、固相法の標準的な方法にしたがって、Ｃｙｓ９の−ＳＨ基を保護するＢ ｚを用いてＢｏｃで保護されたアミノ酸を有するＢＨＡ樹脂上に、これらのペプ チドを適宜順次構築してもよく、これによって以下の中間ペプチドが−Ｃｙｓ’ （Ｂｚ）−ＢＨＡ樹脂　（“５１０８／Ａ”）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐａ　１−Ｇ　Ｉｎ −Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　ｉＧ　１　ｙ−Ｈｉｓ　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ− ２旦−Ｃｙｓ　（Ｂｚ）−ＢＨＡ樹脂　（“５１０９／Ａ”）Ｂｏｃ−Ｔｐｉ− Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｅｕ−ｐｇ− Ｃｙｓ　（Ｂｚ）−ＢＨＡ樹脂　（“５／１２／Ａ”）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｐｉ　− Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　］　−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｂｏｍ ）　−Ｌｅｕ−ｐｓ　１−Ｃｙｓ　（Ｂｚ）−ＢＨＡ樹脂　（“５／１３／Ａ” ）Ｈｃａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　１　ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１　ｙ−Ｈｉ　ｓ 　（Ｂｏｍ）　−Ｌｅｕ−凪−Ｃｙｓ　（Ｂｚ）−ＢｔｌＡ樹脂　（“５／１４ ／Ａ”）５％メルカプトエタノール及び５％アニソールを含む５０％　ＴＦＡの ＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理することによってＢｏｃ基を除去し、さらにＨＦ及びア ニソールで処理することによって、ペプチドを樹脂から切断し、Ｈｉｓから保護 基Ｂｏｍを、Ｃｙｓから保護基Ｂｚを除去し、本実施例の冒頭に列挙されたペプ チドを得る。

実施例（６）：アッセイ法 （Ａ）レセプター結合アッセイ １２５Ｉ−Ｔｙｒ４−ボンベシンの結合およびボンベシン拮抗物質プソイドペプ チドによる置換を、スイス　３Ｔ３（Ｓｗｉｓｓ　３Ｔ３）細胞を用いて２４− 穴の組織培養プレート（ギブコ（ＧＩＢＣＯ）製）において試験した。マウスの スイス３　Ｔ　３　（Ｓｗｉｓｓ　３Ｔ３）繊維芽細胞を、１０％　ＦＣＢＳ及 び抗真菌剤を含んだＤＭＥＭで１週間毎に継代することにで播き、集密及び休止 まで生育させた。結合段階は、播種後７日目に行った。細胞を、０．５ｍｌの結 合バッファー（２０％Ｍ　ＨＥＰＥＳ−水酸化ナトリウム（ｐＨ７，４）、０． ２％　ＢＳＡ及び１００μｇ／ｍｌバシトラシンを含むダルベツコの改変イーグ ル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’　ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’　ｓ　ｍｅｄ ｉｕｍ））で２回洗浄した。さらに、細胞を、様々な濃度の拮抗物質の存在下で （６Ｘ１０−１１〜６×１０−６Ｍ、全量０．４ｍ１）若しくは拮抗物質を存在 させないで、０．２ｎＭ　Ｉ−Ｔｙ　ｒ４−ボンベシンと共に培養した。

ザチャリ−（Ｚａｃｈａｒｙ）及びローゼンガルト（Ｒｏｚｅｎｇｕｒｔ）（１ ９８５年）およびレイトン（Ｌａｙｔｏｎ）ら（１９８８年）によると、３７℃ での１２５１−ＧＲＰの結合は３０分で最高値に達し、以降は減少することから 、細胞を３７℃で３０分間培養する。その後、細胞を水冷（４℃）した結合バッ ファーで２回洗浄し、さらに氷冷したリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ、ｍＭ）：ＮａＣ １１３８、ＫＣｌ２．８、ＮａＨＰＯ３、ＫＨ２ＰＯ４１，４５、ＣａＣ１２０ ，９１、ＭｇＣ１０，４９で２回洗浄した。洗浄された培養物を０．５ｍｌの０ ．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で抽出し、放射能値測定用のチューブに移した。

穴を、０．５ｍｌの蒸留水（滅菌済）で１回洗浄し、さらに、洗浄液を適当なチ ューブに入れた。次に、上記サンプルの放射能値を、自動ガンマカウンター（マ イクロメゾイックシステム　インク（Ｍｉｓｒｏｍｅｄｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｉ ｎｃ、）製、ハンツヴイ゛ル（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ）、アラ（Ａｌａ、））で 測定した。

マンソン（Ｍｕｎｓｏｎ）およびロッドバード（Ｒｏｄｂａｒｄ）のプロダラム に適したりガント−ＰＣ算定カーブを用いて、レセプター結合のタイプ、解離定 数（Ｋｄ）、会合定数（Ｋａ）、およびレセプターの最高結合能力（Ｂｍａｘ） を測定した。

本発明におけるポリペプチドの結合データを以下の表１に示す。様々な投与量の 標識されないペプチドを用いて、置換された特異的な　Ｉ−Ｔｙｒ４−ボンベシ ン結合能を測定した。各ペプチド（それぞれ３連で行った）について２〜３の個 々の試験の平均値を示す。

表１ 実施例（７） エストロゲン非依存性ＭＸＴマウスの乳癌の腫瘍容積に関するボンベシン拮抗物 質による治療効果を以下のようにして試験する： ４０匹の雌の８６Ｄ２Ｆ１マウスは、ナショナル　カンサー　インティチュー　 ）　（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）、フレデリック 　カンサー　リサーチ　ファシリティ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒ ｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆａｃｉｌｉｔｙ）　（フレデリック、マリ−ランド（Ｆｒｅ ｄｅｒｉｃｋ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ））より得、２１±１℃及び５５±５％湿度 で飼育する。この動物を１２時間照射／１２時間暗室に自動的に切り替わる部屋 に置き、誓歯動物用の実験飼料５０００１　（ｒｏｄｅｎｔ　１ａｂｏｒａｔｏ ｒｙ　ｃｈｏｗ　５０００１）と水道水を無制限に与える。ドクター　ニーイー 　ボーデン（Ｄｒ、　Ａ、Ｅ、　Ｂｏｇｄｅｎ）　（バイオメジャー　インク（ ＢｉｏｍｅａｓｕｒｅＩｎｃ、）　、ホラキントン、エムニー（Ｈｏｐｋｉｎｔ ｏｎ、　ＭＡ）　）より得られた、エストロゲン非依存性ＭＸＴ　（３，２）／ オベックス乳癌の凍結保存された組織（ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅ ｎｔＭＸＴ　（３，２）１０ｖｅｘ　ｍａｍｍａｒｙ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃ ｒｙｏ−ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｔｉｓｓｌ】ｅ）を、１ｍｍ３のＭＸＴ　（３， ２）／オベツクス腫瘍（ＭＸＴ　（３，２）１０ｖｅｘ　ｔｕｍｏｒ）の容積で 成熟した雌のマウスの皮下に接種する。

腫瘍を移植してから２日後、マウスを無作為に４つのグループに分け、ペプチド が一様に放出するシステム（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｓｙｓｔ ｅｍ）　（フィクロカプセル）による治療を開始する。以下の４群を用いる： １）　コントロール：賦形剤のみを注入；３　）　［Ｄ−Ｐｈｅ６．　Ｌｅｕ１ ３−ｐｓｉ、−Ｔａｃ１４］Ｂｎ（５−１４）　；４）　左右の卵巣を外科的に Ｖ摘出。

ボンベシン拮抗物質に関するこれらの略称は、以下の既知のペプチド断片の残基 の番号付けを用いる：各残基を完全な断片における位置によって番号付けする。

しかしながら、ボンベシン拮抗物質は、Ｎ末端を「１」として始めて番号付けを した方が本明細書においては他のペプチドと比、６ ベて容易である。したがって、ｒ　［Ｄ−Ｔｐｔ　、Ｌｅｕｕ　−ｐｓ　１−Ｔ ａｃ’］　Ｂｎ　（６−１４）Ｊは上記ペプチド番号２と同じである。

これら２つのボンベシン拮抗物質を固相合成によって合成する。第２群のマウス は「Ｂ１」が一様に放出するような製剤（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ　ｒｅｌｅａｓｅ 　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を投与され、第３群のマウスは上記ペプチド番号２ を含む一様に放出するような製剤を投与される。上記一様に放出するような製剤 （ｓｕｓｔａｉｎｅｄ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）は、１５日 間、２５μｇ／日の量でＢ１またはペプチド番号２を連続し７て放出し続けた。

一様に放出（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ）させるために、アルゼッ ト浸透ポンプ（Ａｌｚｅｔ　ｏｓｍｏｔｉｃ　ｐｕｍｐ）　（アルダ　コーポレ ーション（Ａｌｚｏ　Ｃｏ、）製、パロ　アルド、シー−ｒ−−（Ｐａｌｏ　Ａ ｔｔｏ、　Ｃ＾））を用いた。０．４８μｇ／時間で放出するアルゼットポンプ モデル２００２　（Ａｌｚｅｔ　Ｐｕｍｐ　Ｍｏｄｅｌ　２００２）を背中の下 側面領域に皮下移植した。ペプチドを、浸透ミニポンプに満たすために、５０％ （Ｖ／Ｖ）のポリプロピレングリコール水溶液に溶解した。

腫瘍が目視てき触知できるようになった後、腫瘍容積を測定し、チェンデ　ビー （Ｓｚｅｎｄｅ　Ｂ、）ら、「グロース　インヒビジョン　オブ　エムエックス ティ　マンマリ−カルシツマ　バイ　エンハンシング　プログラムド　セルデプ ス（Ｇｒｏｗｔｈ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＸＴ　Ｍａｍｍａｒｙ　Ｃ ａｒｃｉｎｏｍａ　ｂｙＥｎｈａｎｃｉｎｇ　Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　Ｃｅ１ｌ 　Ｄｅｐｔｈ）　ｊ　（Ｌ　Ｈ−ＲＨ及びソマトスタチンの類似体によるアポブ トシス）、ブレストカンサー　レス　トリート（Ｂｒｅａｓｔ　Ｃａｎｃｅｒ　 Ｒｅｓ、Ｔｒｅａｔ、）、１４巻、ページ３０７〜３１４（１９８９年）に記載 されたようにして計算する。

腫瘍の成長が指数的成長相になったところで実験を終了した。第一回目の腫瘍容 積測定は１０日目であった。コントロールといずれかのボンベシン拮抗物質で処 理したものとの腫瘍の容積の差および２つのボンベシン拮抗物質で処理したもの の間の腫瘍の容積の差は統計上顕著である。腫瘍容積の測定の結果を表２に示し 、図１に詳細に記載する。

表２ エストロゲン非依存性ＭＸＴマウス乳癌の腫瘍容積に関するボンベシン拮抗物質 の効果 実験終了後、マウスをメトフェイン（Ｍｅｔｏｆａｎｅ）による麻酔下で放血し 、腫瘍の重量を測定し、ダンカンテスト（Ｄｕｎｃａｎ’　ｓ　ｔｅｓｔ）およ びスチューデントテスト（Ｓｔｕｄｅｎｔ’　ｓ　ｔｅｓｔ）による統計学的分 析を行った。結果を表３に示す。

表３ 値は、平均値±ｓ、ｅ、　斡ｐ　ｏ、ｏｉ実施例（８） ヌードマウスにおけるヒトの肺小細胞癌への１つのソマトスタチン類似体および ３つのボンベシン拮抗物質の効果を以下のようにして試験する：到着時におおよ そ６週令の無胸腺の雄のヌードマウスをナショナル　カンサー　インティテユー ト（Ｎａｔｊ、ｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）　（ベテスダ、 エムディ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ、　ＭＤ））より得、病原体が制限された条件下で 維持する。

ヒトの肺小細胞癌（ＳＣＬＣＳＨ６９系統）を、湿度のある５％　ＣＯ２濃度の 雰囲気下で３７℃で１０％ウシ血清アルブミン、抗生物質及び抗真菌剤を添加し たＲＰＭ１１６４０　（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）製、グランド　アイランド、エヌ ワイ（Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、　ＮＹ））中に単層として生育させる。

細胞組織培養した指数的に成長した細胞のうち１×１０７個の細胞を５匹のヌー ドマウスの右側腹部中に皮下注射することによって、異種移植を開始する。３週 間たった後の腫瘍を無菌的に切開し、物理的に細かく切り刻む。次に、３ｍｍ３ の腫瘍組織片を６０匹の動物に套管針によって皮下移植する。移植してから２週 間たった後、腫瘍を約１０ｍｍ３の容積になるまで成長させ、動物を無作為に選 び、５種類の異なる化合物による処理を行うために５つの実験群に分け、移植後 ２週間口の日に開始する。５週間に渡り、毎週腫瘍の容積を測定する。腫瘍の容 積は、（長さＸ幅×高さ×π）／６として計算される。各群において８匹の動物 を腫瘍の重量を測定するために剖検した。

ヌードマウスに投与された第一の治療用薬剤化合物は、ソマトスタチン類似体、 Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａ　１−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ −Ｎｕ２であり、本明細書においては「Ｓｌ」と称する。

３つのボンベシン拮抗物質のうち第一の拮抗物質は、Ｄ、１　２　３　４　５　 ６　７　８　。

−Ｔｐｘ　−Ｇｉｎ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｇｌｙ　−■ｉｓ　− Ｌｅｕ　１旦ｐｉ’−Ｇｉｎ２−Ｔｒｐ３−Ａｌａ４−Ｖａｌ５−Ｇｌｙ６−Ｈ ｉｓ７−Ｌｅｕ”　−ｐｓｉ−Ｔｐｉ９−Ｎｕ　であり、本明細書においては「 Ｂ２」と称し、さらに、第三の拮抗物質はペプチド番号２のペプチド（以下、ペ プチド２と称する）である。

ポリ　（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）　［ｐｏｌｙ（ＤＬ−１ａｃｔｉｄｅ −ｃｏｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）］に含まれるＳｌのパモエートのマイクロ顆粒（ｍ ｉｃｒｏｇｒａｎｕｌｅ）を、サイトチック　ニスニー（Ｃｙｔｏｔｅｃｈ　Ｓ Ａ）で調製し、１６ｍｇのアリコートから２週間にわたり約１００μｇ／日の量 が放出されるように設計する。これらのマイクロ顆粒を腫瘍に対して反対側に毎 日１５日間にわたり皮下注射する。各ボンベシン拮抗物質は、０．１％ジメチル スルホキシドの生理食塩水に溶解し、２０μｇ／日の投与量で毎日２回皮下注射 する。

腫瘍の容積に関する上記薬剤の治療効果を表４に示し、図２に詳細に記載する。

表　４ ＳＣＬＣ！ｌ瘍の腫瘍容積に関するボンベシン拮抗物質の効果ボンベシン拮抗物 質によるＭＩＡ　ＰＡＣＡ−２膵臓癌腫瘍（ＭＩＡ　ＰＡＣＡ−２ｐａｎｃｒｅ ａｔｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｕｍｏｒ）に対する効果を以下のようにして測定す る： 実施例８と同様のヌードマウスに、実施例８における５ＣＬＣと同様に生育され た細胞組織培養物由来の、ＭＩＡＰＡＣＡ−２ヒト膵臓癌細胞注射液（ＭＩＡ　 ＰＡＣＡ−２ｈｕｍａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　１ｎ ｊｅｃｔｉｏｎ）を皮下注射する。腫瘍の容積を実施例８と同様にして両方の実 験群について測定する。

以下の２実験群を使用する：ボンベシン拮抗物質ペプチド２を投与したマウスの 群および注射用賦形剤溶液のみを投与したコントロール群。５０μｇの注射用賦 形剤溶液またはペプチド２を、皮下注射によって毎日２回各マウスに投与する。

腫瘍の容積の測定結果を表５に示し、図３に詳細に記載する。

表５ ＭＬＡＰＡＣＡ−２膵臓腫瘍の腫瘍容積（ｍｍ３）に関するボンベシン拮抗物質 の効果ＣＡＰＡＮ−２ヒト膵臓癌（ＣＡＰＡＮ−２ｈｕｍａｎ　ｐａｎｃｒｅａ ｔｉｃｃａｎｃｅｒ）を有するヌードマウスに対するボンベシン拮抗物質による 治療効果を以下のようにして測定する。

実施例７と同様のヌードマウスに、実施例７と同様にして生育された細胞組織培 養物由来のヒトＣＡＰＡＮ−２膵臓腫瘍（ｈｕｍａｎ　ＣＡＰＡＮ−２ｐａｎｃ ｒｅａｔｉｃ　ｔｕｍｏｒ）の異種移植を行う。マウスの群を、注射用賦形剤溶 液のみを投与したコントロール群およびボンベシン拮抗物質ペプチド番号２を投 与した群の、２つに分け、それぞれの物質を５０ｍ、ｇ、皮下注射によって毎日 ２回マウスに投与する。

実施例８と同様にして腫瘍の容積を測定し、腫瘍の容積の測定結果を表６に示し 、図４に詳細に記載する。

表６ ＣＡＰＡＮ膵臓腫瘍の肝瘍容＋Ｒ（ｍｍ３）に関するボンベンン拮を元物質の効 果本発明は上記好ましい実施態様に関して記載してきたが、当業者に明らかな変 化（ｃｈａｎｇｅｓ）および修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉ。

ｎｓ）が、添付した請求の範囲に記載された、本発明の概念を外れない限り可能 であることは理解されるべきである。

有効性を損なわない程度の既知の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）も本発明 において使用できる。

配列リスト （１）一般的な情報： （ｉ）出願人：　シャリ−、アンドリュー、ブイカイ、レン、チー （ｉｉ）発明の名称：　ポリペプチドのボンベシン拮抗物質（ｉｉｉ）配列の散 ：３７ （ｉｖ）相当する住所； （Ｃ）市（ＣｆｆＹ）：　エディノン （Ｄ）州（ＳＴＡＴＩｉ；）二＝　５．−　シャー　シー（Ｂ）国：　アメリカ 合衆国 （Ｆ）郵便番号：　０８８３７ （ＤＪソフト：　パテントイン　リリース　＃１．０．　ヴアージョン１．２５ 　（ＰａｔｅｎｔＩｎ　Ｒｅ１ｅａｓｅ　＋！’１．０．　Ｖｅｒｓｉｏｎ　１ ．２５）（ｖｉ）現在の出願に関する資料： （Ａ）出願番号：　Ｕ３０Ｂ１０３１，３２５（Ｂ）　出願日：　１９９３年３ 月１５日（Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願に関する資料： （Ａ）出願番号：　ＵＳ　０７／６１９，７４７（Ｂ）　出願日：　１９９０年 １１月２９日（ｖｉｉｉ）弁理士１代理人に関する情報：（Ａ）氏名：　ベアー 、オムリ　エム （Ｂ）登録番号：　２２，９４０ （Ｃ）参考ｌ整理番号：　８ＨＡＬ３．０−０１４（ｉｘ）遠距離通信に関する 情報： ｆＡ）電話＋　（９０８）　４９４−５２４０（Ｂ）　＋　し７７　ｙ　りＸ　 ：　（９０８）　４９４−０４２８（Ｃ）テレックス：　５１１６４２　ＢＥＰ ＡＴＥＤＩＮ（２）配列番号＝１に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特ｙｋ： （ｉり特徴： （ｉｚ）特徴； （！ｉ）配列の記載：配列番号：１： Ｘａａ　Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ａｈａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号＝２に関する情報； （ｉ）配列の特性： （ｉｉＪ分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｉり特徴： （ｉｘ）特＠： ｒ＝）配列の記載：配列番号＝２： Ｘｎａ　Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｔ　Ｇｌｙ　Ｂｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２ ）配列番号：３に関する情報： （ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：　９アミノ酸 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉり特徴： （ｉり特徴： （ｉｘ）特徴： （−）配列の記載：配列番号、３工 Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　ＨｉｓＸａａ　Ｘａａ（２ ）配列番号：４に関する情報： （＋）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｉｘ）特徴： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基８　＝　Ｌｅｕの還元アイソスター」（ｉｘ） 特＠： （Ｄ）他の情報：　注）＝「残基９　＝　Ｔａｃ−ＮＨ２Ｊ（＝）配列の記載： 配列番号＝４： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｊｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号＝５に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｉｘ）特徴： （ｉり特徴： （Ｄ）他の情報：　注）＝「残基９　＝　Ｔａｃ−ＮＨ２Ｊ（ｉ）配列の記ｖｌ ：配列番号：５： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号：６に関する情報： （＋）配列の特性： （Ｄ）トポロジー：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ＤＪ他の情報：　注）＝［残基１　＝　Ｄ−ＣｐａＪ（ｉｘ）特徴： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基８　＝Ｌｅｕの還元アイソスター」（ｉり特＠ ： （Ｄ）他の情ＩＩ：　注）＝「残基９　＝　ＭＴａｃ−ＮＨ２ｊ（ｍ）配列の記 載：配列番号＝６： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖ耐　Ｇｌｙ　５１１ｍ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号＝７に関する情報： （１＋配列の特性： （ｉｉ１分Ｆのタイプ：　ベブチド （ｙｊ）配列の記載：配列番号ニア： Ｘａａ　Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号二８に関する情報： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｍｌ）配列の記載：配列番号＝８： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号＝９に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｚ）特徴： （／ｎｏｔｅ＝″Ｒｅｓ　１　＝　Ｄ−Ｐａ１つ（ｉｘ）特徴： （ｉ）配列の記載：配列番号：９： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号、１０に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ＩＸ）特＠： （２）配列番号：１１に関する情報： （２）配列番号：１２に関する情報： （ｉ）配列の特性： （Ｄ）トポロジｍ：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｚ）特徴二 （ｉｘ）特＠： （ｉ）配列の記載：配列番号：１２： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号：１３に関する情報： （ｉ＋配列の特性： （Ｄ）トポロジｍ：　直線状 （ｊｉ）分Ｆのタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｉｘ）特ｙｆ１．： （Ｄ）他の情報：　注）＝「残基８　＝　Ｌｅｕの還元アイソスター」（ｉｘ） 　０＠： （ｍｌ配列の記載；配列番号；１３： （２）配列番号＝１４に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特＠： （ｉｘ）特＠： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基７　＝　Ｌｅｕの還元アイソスター」（ｉｘ） 特徴： （ｎ）配列の記１ｉ！：配列番号＝１４；Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇ ｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号＝１５に関する情報： （ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ：　９アミノ酸 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特＠： （ｉｚ）特徴： （ｉｚ）特＠： （−）配列の記載：配列番号：１５： （２）配列番号：１６に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｚ）特徴： （ｉｘ）特＠： （ｉｘ）特徴： （Ａ）名ｌキー：　読み違い一特徴 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：１６：Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｙ　Ｅ［ｆｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号：１７に関する情報： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｍ）配列の記ｉ：配列番号：１７： Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号：１８に関する情報： （ｉ）配列の特性： （Ｄ）トポロジー：　直線状 （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特＠： （ｉｘ）特＠： （ｍｌ）配列の記載：配列番号＝１８＝Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号：１９に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｚ）特徴； （ｉり特徴； （Ａ）　名／キー：　読み違い−特徴 （ｉｘ）特＠： （Ｄ）他の情報：　注）＝「残基９　＝　ＤＭＴａｃ−ＮＨ２Ｊ（耐）配列の記 載：配列番号＝１９； （２）配列番号：２０に関する情ｍ： （ｉ）配列の特性二 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特＠： ｆＤｌ他の情報＝　注）＝［残基１　＝　Ｄ−ＣｐａＪ（ｉｘｌ特＠： （Ｄ）他の情報・　γ土）＝「残基８　＝　Ｌｅｕの還元アイソスター」（ｉｘ ｌ　特徴： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基９　＝　ＤＭＴａｃ−ＮＨ２Ｊ（ｙｊ）配列の 記載：配列番号：２０：Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈ ｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａｌ５ （２）配列番号：２１に関する情報： （ｉ）配列の特性： （Ｄ）トポロジｍ：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｘｉ）配列の記載：配列番号；２１：Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　ＸａａＸａｉ（２）配列番号：２２に関する情報： （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （幻）配列の記載、配列番号：２２゜ Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｈａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａｌ ５ （２）配列番号：２３に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分丑のタイプ、　ペプチド （ｉｘ）特徴・ （ｉｘ）特＠： （／ｎｏｔｅ　＝　Ｒｅ５１４　＝　Ｍｅｔ−ＮＨ２”）（ｍ）配列の記載：配 列番号：２３： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　 Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｘａａｌ５１０ （２）配列香川２４に関する情報： ｆｉ）配列の特性： （ｉｉ１分子−のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴。

（ｉｘ）特徴： （ｘｉ）配列の記載：配列番号：２４：Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ｔｒｐ　Ａｌ ａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｘｓ、ａ（２）配列番号：２５に関する 情報： （ｉ）配列の特性： （Ｄ）トポロジー：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｘ４　）配列の記載：配列番号＝２５：Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖ ａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｘａａｌ５ （２）配列番号：２６に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （＝＋配列の記載：配列番号＝２６： Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｎ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　 Ｌｅｕ　Ｘａａｌ　５　１０ （２）配列番号：２７に関する情報： （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （−）配列の記載：配列番号：２７： Ｘａａ　Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ（２）配列 番号：２８に関する情報： （ｉｉ１分子のタイプ：　ペプチド Ｃ９１Ｍ＋’１ｉｌｌＩＰｐ井・９０じ間ナス手＆紹。

（１り特＠： （ｉｘ）特徴： （ｉり特徴： （ｍ）配列の記ｒｉ、：配列番号：２８：Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖ ａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　ＸａｉｒｎＴ　４１Ｉ＋の情報、　汁’Ｈ＝ｒ ｎＪＧｉ　Ｒ＝　Ｔｚｕの還兄アイソスター１（ＡＩＩＩＣ’ｊ１」Ｗ’ｆ：Ｚ ｋＨ−ｆｌｉｔ−９ｅＩｆ（〒１（：（ｉ）配列の特性： （Ｄ）トポロジー：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ；　ペプチド （ｉｘ）特＠： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基１　＝　Ｄ−ＰｈｅＪ（ｉｘ）特徴： （ｉｘ）特徴： （＝）配列の記載：配列番号：２９： Ｘａａ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（ ２）配列番号＝３０に関する情報： ＋ｉ＋配列の特性： （Ａｌ　長さ＝　９アミノ酸 ＣＢ＋タイプ：　アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：　１本鎖 （Ｄ）トボロノー二　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基１　＝　Ｄ−ＴｐｉＪ（ｉｔ）特＠： （ｉ）配列の記載：配列番号二３０： Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２ ）配列番号−３１に関する情報： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｘｉ）配列の記載：配列番号：３１：Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｘａａ　Ｌｙ ｓ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｘａａ（２）配列番号：３２に関する情報： りＤ）トポロジｍ：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド （ｉり特＠： （Ｄ）他の情報：　注）＝［残基１　＝Ｄ−ＴｐｉＪ（ｉｘ）特徴： （ＤＪ他の情報：　注）＝「残基８　＝　Ｌａｕの還元アイソスター」（ｉｚ） 特徴： （ｘｉ）配列の記載：配列番号＝３２：Ｘａａ　Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｙ　圧ｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号８３３に関する情報； （ｉ）配列の特性： （Ａ）長さ＝　９アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：　直線状 （ｉｉ）分子のタイプ；　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｉｘ）特徴： （ｉｘ）特徴： （ｉ）配列の記１１！：配列番号田３：（２）配列番号：３４に関する情報： （ｉ）配列の特性： （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （ｗｚ）特＠： （ｉｘ）特ｙｉ＝ （ｉｘ）特徴： （ｙｊ）配列の記載：配列番号：３４：（２）配列番号；３５に関する情報二 （ｉ）配列の特性： （ｉｆ）分子のタイプ：　ペプチド （ｓｘ）特徴： （ｉｘ）特＠： （ＤＪ他の情報：　注）＝［残基２　＝　Ｇｌｎ、　Ｇｌｕ［−］、Ｇｌｕ（Ｙ ）またはＨｉｓ　Ｊ（ｉｘ）特徴＝ （ｉｘ）特徴・ （ｘｌ）配列の記載：配列番号＝３５＝Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａ ｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号、３６に関する情報： ｆｉ）配列の特性： （Ｄ）トポロジー：　直線状 Ｃ１１ｌ　分Ｆのタイプ・　ペプチド （ｉｘ）特徴： （ｍｌ）配列の記載：配列番号二３６：Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌ ｙ　Ｈｉｓ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）配列番号；３７に関する情報： （ｉｉ）分子のタイプ：　ペプチド Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｘａａ８ ｗ　＠註ω短１「 （ε直■）■廿ω荀更「

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．以下の式を有するボンベシン拮抗物質ペプチド：【配列があります】 ただし、Ｘは、水素、 Ａ２がＧｌｕである際にはＡ２の３−プロピオニル部分上のγ−カルボキシル部 分にＡ１のα−アミノ基が結合した単結合、または 式Ｒ１ＣＯ−の基であり、 但し、Ｒ１は、以下よりなる郡かり選ばれたものであり、 ａ）水素、Ｃ１−１０アルキル、フェニル、フェニル−Ｃ１−１０−アルキル、 Ｐ−ＨＩ−フェニル、Ｐ−ＨＩ−フェニル−Ｃ１−１０−アルキル、ナフチル、 ナフチル−Ｃ１−１０−アルキル、インドリル、インドリル−Ｃ１−１０−アル キル、ピリジル、ピリジル−Ｃ１−１０−アルキル、チェニル、チェニル−Ｃ１ −１０−アルキル、シクロヘキシルまたはシクロヘキシル−Ｃ１−１０−アルキ ルであり（但し、ＨＩはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＣＨ３若しくはＯＣＨ３である ）；ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼（但し、Ｒ２は、水素、Ｃ１−１０ アルキル、フェニルまたはフェニ ル−Ｃ１−１０−アルキルであり、 Ｒ３は、水素若しくはＣ１−１０ア ルキルである）；及び ｃ）Ｒ４−Ｏ （但し、Ｒ４は、Ｃ１−１０アルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１−１０− アルキルである）；Ａ１は、Ｐｈｅ、ｐ−ＨＩ−Ｐｈｅ、ｐＧｌｕ、Ｎａｌ、Ｐ ａｌ、Ｔｐｉ、置換されないＴｒｐ若しくはベンゼン環内でＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ Ｈ２及びＣ１−３アルキルからなる群より選ばれた１つまたはそれ以上の基で置 換されたＴｒｐからなる群から選ばれたＤ−またはＬ−アミノ酸残基；またはＡ ２のα−アミノ部分にＲ１ＣＯ−のアシル部分が結合したペプチド結合であり； Ａ２は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ［−］、Ｇｌｕ（Ｙ）またはＨｉｓであり、但し、［− ］は、Ｘが単結合でありＡ２がＧｌｕである際にはＧｌｕ２の３−プロピオニル 部分上のγ−カルボキシル部分とＡ１のα−アミノ部分とが結合した単結合であ り、Ｙは、ａ）−ＯＲ５（但し、Ｒ５は、水素、Ｃ１−３アルキル若しくはフェ ニルであり）；または、▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、Ｒ６は、水素若しくはＣ１−３アルキルであり、Ｒ７は、水素、Ｃ１− ３アルキル若しくは−ＮＨＣＯＮＨ２である）であり； Ｌｅｕ−ｐｓｉ−は、Ａ９付近のα−アミノ基との−ＣＨ２−部分の結合がプソ イドペプチド結合であるようにＣ＝Ｏ部分が−ＣＨ２−に置換されたＬｅｕの還 元型であり；Ａ９は、Ｔａｃ、ＭＴａｃ若しくはＤＭＴａｃであり；さらに、 Ｑは、ＮＨ２若しくはＯＱ（但し、Ｑ１は、水素、Ｃ１−１０アルキル、フェニ ル若しくはフェニル−Ｃ１−１０−アルキルである）である； および製薬上使用できるこれらの酸または塩。
2. ２．Ｘは水素、またはＲ１ＣＯ（但し、Ｒ１は水素若しくは１−１０アルキルで ある）であり； Ａ１はＤ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｌ−或いはＤ−Ｐａｌ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｌ−或い は−Ｔｐｉ、またはＤ−Ｔｒｐであり；Ａ２はＧｌｎまたはＨｉｓであり；およ びＱはＮＨ２である、請求の範囲第１項に記載のペプチド。
3. ３．Ａ９がＴａｃである、請求の範囲第２項に記載のペプチド。
4. ４．Ａ９がＤＭＴａｃである、請求の範囲第２項に記載のペプチド。
5. ５．Ｘは水素またはＡｃであり； Ａ１はＤ−Ｐｈｅ、Ｌ−またはＤ−Ｔｐｉであり；およびＡ２はＧｌｎである、 請求の範囲第３項に記載のペプチド。
6. ６．Ｘは水素またはＡｃであり； Ａ１はＤ−Ｐｈｅ、Ｌ−またはＤ−Ｔｐｉであり；およびＡ２はＧｌｎである、 請求の範囲第４項に記載のペプチド。
7. ７．【配列があります】 を有する請求の範囲第３項に記載のポリペプチド。
8. ８．式【配列があります】 を有する請求の範囲第３項に記載のポリペプチド。
9. ９．式【配列があります】 を有する請求の範囲第４項に記載のポリペプチド。
10. １０．以下の式を有するボンベシン拮抗物質ペプチド：【配列があります】 ただし、Ｘは、水素、 Ａ２がＧｌｕである際にはＡ２のγ−カルボキシル基にＡ１のα−アミノ基が結 合した単結合；または 式Ｒ１ＣＯ−の基であり、 但し、Ｒ１は、以下よりなる郡から選ばれたものであり： ａ）水素、Ｃ１−１０アルキル、フェニル若しくはフェニル−Ｃ１−１０−アル キルであり； ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼（但し、Ｒ２は、水素、Ｃ１−１０アル キル、フェニルまたはフェニ ル−Ｃ１−１０−アルキルであり、 Ｒ３は、水素若しくはＣ１−１０ア ルキルである）であり；及び ｃ）Ｒ−Ｏ （但し、Ｒ４は、Ｃ１−１０アルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１−１０− アルキルである）；Ａ１は、Ｌ−若しくはＤ−Ｐａｌ、またはＬ−若しくはＤ− Ｔｐｉからなる群より選ばれた天然では生じないアミノ酸であり；Ａ２は、Ｇｌ ｎ、Ｇｌｕ［−］、Ｇｌｕ（Ｙ）またはＨｉｓであり、但し、［−］は、Ｘが単 結合でありＡ２がＧｌｕである際にはＡ２の３−プロピオニル部分上のγ−カル ボキシル部分とＡ１のα−アミノ基とが結合した単結合であり、Ｙは、ａ）−Ｏ Ｒ５（但し、Ｒ５は、水素、Ｃ１−３アルキル若しくはフェニルであり）；また は、ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼（但し、Ｒ６は、水素若しくはＣ１ −３アルキルであり；Ｒ７は、水素、Ｃ１−３アルキル若しくは−ＮＨＣＯＮＨ ２である）； Ｌｅｕ−ｐｓｉ−は、Ａ９残基付近のα−アミノ基との−ＣＨ２−の結合がプソ イドペプチド結合であるようにＣ＝Ｏ部分が−ＣＨ２−に置換されたＬｅｕの還 元型であり；Ａ９は、Ｃｙｓ若しくはＰｅｎであり；Ｑは、ＮＨ２若しくはＯＱ １（但し、Ｑ１は、水素、Ｃ１−１０アルキル、フェニル若しくはフェニル−Ｃ １−１０−アルキルである）である； および製薬上使用できるこれらの酸または塩。
11. １１．ＸはＲ１ＣＯ−であり； Ａ１はＡ２のα−アミノ部分にＲ１ＣＯ−のアシル部分が結合したペプチド結合 であり； Ａ２はＧｌｎまたはＨｉｓであり；およびＱはＮＨ２である、請求の範囲第１０ 項に記載のボンベシン拮抗物質ペプチド。
12. １２．ＸはＨｃａ、Ｈｎａ、Ｐａａ、Ｍｐｐ、Ｈｐｐ若しくはＮａａであり； Ａ２はＧｌｎであり；および Ａ９はＴａｃである、請求の範囲第１１項に記載のペプチド。
13. １３．式【配列があります】 を有する請求の範囲１２に記載のペプチド。
14. １４．請求の範囲第１項に記載のポリペプチド、またはこの治療学的に使用でき る付加塩の形態若しくは複合体および製薬上使用できる液状若しくは固体の担体 からなる薬剤組成物。
15. １５．有効量の請求の範囲第１項に記載のポリペプチド、またはこの治療学的に 使用できる酸若しくは塩を哺乳動物に投与することからなる哺乳動物における癌 の治療方法。