JPH07508342A - 脂質膜センサー - Google Patents

脂質膜センサー

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JPH07508342A
JPH07508342A JP5518003A JP51800393A JPH07508342A JP H07508342 A JPH07508342 A JP H07508342A JP 5518003 A JP5518003 A JP 5518003A JP 51800393 A JP51800393 A JP 51800393A JP H07508342 A JPH07508342 A JP H07508342A
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コーニク，ベルント
ボーゲル，ホルスト
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エコール ポリテクニーク フェデラル ドゥ ローザンヌ（エーペーエフエル）
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 脂質膜センサー 本発明は、自己集成性脂質分子の配列を含む新規膜センサーに、またこのような センサーをバイオセンサーとして使用することに関する。
２、関連技術の説明 バイオセンサーは、適当な電子装置、すなわち変換器と密接した生物学的感受性 物質を含む。変換器は、生物学的感受性物質とその周囲の流動媒体、すなわちア ナライトとの相互作用によって生じる生化学的シグナルを、定量化または処理可 能な電子的または光学的情報（二変換する。各種のバイオセンサーに用いられる 様々な種類の生物感受性物質が提案されている。酵素、抗体、抗原、レセプター タンパク質、哺乳類全細胞または組織はどれも潜在的に有用であることが示唆さ れている。しかしながら、これらの物質をセンサーに包含するためには、アナラ イトと相互作用して適当なシグナルを発生させるようにそれらを固定化する必要 がある。
バイオセンサーの種類の一つに脂質２分子層膜（ＢＬＭ）に基づ（ものがある。
一般的な検討として、Ｈ，Ｔ、Ｔｉｅｎらの「λ１ｏｌｅｃＵｌａｒＥｌｅｃｔ ｒｏｎｉｃｓ　：　Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｅｒｓ 　Ｊ　（Ｆ、Ｔ、　Ｈａｎｇ編、Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒ ｋ　（１９８９）　、第２５９〜２６８頁）を参照されたい。この中に記載され ているＢＬＭバイオセンサーのサブクラスは、２分子層の片面か支持体に固定さ れており、その反対面がアナライト溶液と接触しているようなセンサーである。
脂質２分子層は自己集成性、すなわち用いられる脂質分子は、支持体ニー脂質： 脂質− のように自身を配置する。ここで、記号”−”は負に荷電した基、例えばホスフ ェートまたはアセテートを表す。脂質２分子層は少数の生物感受性分子を含有す る。例示として、国際特許出願公開公報第ＷＯ８９１０，１１５９号（ＣＳ　Ｉ ＲＯ）　＋；！、イオンチャンネルヲ提供スる試薬、例えばペプチドグラミシジ ンを含有するＢＬＭについて記載している。ヒト絨毛膜ゴナドトロピン（ｈＣＧ ）に対する２価モノクローナル抗体のＦＡｂフラグメントは水溶液中に存在する 。この抗体はイオンチャンネルをブロックするが、ｈＣＧアナライトが水溶液に 導入されると、インピーダンスの変化によって示されるように、ブロックが部分 的に解放される。これらのＢＬＭにおいては、第１層かドデカンチオールの石で あり、第２層が酢酸脂質またはリン脂質の層であり、そして支持体がパラジウム 被覆ガラス電極である。チオール基がパラジウム表面への結合を提供する。国際 特許出願公開公ＭＩＥＷＯ９０１０２３２７号（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ　Ｍｅｍ ｂｒａｎｅ　ａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　［ｎ５ｔ ｉｔｕｔｅ）は、初期の研究の詳細な変型に関する。この明細書は、脂質をパラ ジウムのような金属表面に直接被覆する場合にはリン脂質頭基の代わりに第３の 残基を使用する必要があろうことを記載している。
欧州特許出願公開第４４１１２０号公報（Ｙｅｄａ）は、リン脂質を親水性スペ ーサーアームによって支持体に結合することによって、支持体とＢ　Ｌ　Ｍの間 に水層を提供することが望ましいと指摘している。例えば、スペーサーを有する リン脂質は下式（１）：％式％（） て示されるものであってもよい。上式中、ＰＥはホスファチジルエタノールアミ ン残基を表し、またオキシエチレン基の数（ｎ）は７〜２５である。チオール基 がリン脂質を支持体に結合する。この結合様式によって、脂質層の組成において 、少量成分が支持体への結合に使用されるスペーサーを有するリン脂質から成る と同時に、リン脂質の本体か２分子層構造を画定するような混合脂質を使用する ことが可能になる（第４頁第３４〜３６行、第２図）。換言すると、２分子層が 少数の橋架は結合分子によって記録電極に結合され、２分子層の下面とＮＦｍ上 面との間に水性媒体で満たされるキャップが残る。ＢＬＭには、通常は閉じてい るかエフェクター分子が存在すると開放される「イオンチャンネル」をドープす る。このように、ＢＬＭは、２分子層の上面を取り囲む媒体にアナライトとして アセチルコリンを添加した場合に導電率か上昇するとされているアセチルコリン レセプターを含有することかできる。
Ｈ，Ｌａｎｇらは、１９９１年８月２６〜３０日にパリで開イ在されたラングミ ュア−ブロンエツト膜に関する第５回国際会議において、ジスルフィド末端を有 するリン脂質分子によって第１層が金電極支持体に固定されているＢＬＭについ て記載したポスターを掲示した。それらは以下の一般式て表すことがてきる。
Ｒ’　−０−Ｐ＝Ｏ０＝Ｐ−０−Ｒ’ （０−ＣＨ２Ｃｌ、２）ｎ−Ｓ　−Ｓ　−（ＣＨ，、ＣＨ，、−０）。
上式中、Ｒ゛はリン脂質ＤＰＰＡ（１，２−シミリストイル−５ｎ−グリセロ− ３−ホスファチジン酸）のジアシルグリセロ残基を表し、そしてｎは１．２また は３である。ＢＬＭの第２層はＤ　ＩＶＩ　Ｐ　ＣまたはＰＯＰＣ（１−バルミ トイル−２−オレオイル−５ｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）の層である。こ のポスターによると、全表面に結合したチオ脂質膜が、優れた長期安定性を示し 且つ膜タンパク質を取り込む理想的なマトリックスを提供する。
本発明の概要 ここで、上記ポスターに提案された膜がセンサーとして適切には機能しないこと がわかった。その問題は、第１層における剛性が高すぎることに原因があり、そ の第１層に（支持体へ結合させるための基を何ら含まない）リン脂質を比較的少 量導入することによって解決された。それゆえ、本発明はＹｅｄａ特許明細書に 示唆されているものとはまったく反対の構造を提供する。本発明では、第１層が チオ脂質層であって、その中に少量の、例えば５〜２５モル％、特に５〜２０モ ル％のリン脂質分子が存在する。Ｙｅｄａの文献では、第１層が非常に少量のチ オ脂質分子によって固定されたリン脂質である。
また、上記ポスターにあるようにジスルフィド固定分子を使用すると望ましいこ とがわかったので、本発明はこの点においてもＹｅｄａの文献とは異なるもので ある。Ｙｅｄａが使用するようなチオールは、このように安定な固定を提供する ことがない。
本発明によると、（１）全記録表面、（２）各端部のジスルフィド（−３−Ｓ− ）基にそれぞれオキシエチレン（−０−ＣＨ２−ＣＨ２）鎖を介して結合してい る２個のリン脂質分子の残基を含むチオ脂質の不完全層である第１脂質層であっ て、前記オキシエチレン鎖が、前記チオ脂質を自己集成性によって全表面に固定 できるほど十分に短く、しかし前記全表面と前記チオ脂質層の底部との間に水層 を捕捉させるほど十分に長く、前記チオ脂質が前記全表面に結合され、そして前 記不完全層が、室温において結合されない流動相を付与するリン脂質によって完 成される前記第１脂質層、並びに（３）リン脂質の第２脂質層、を含んて成るＢ ＬＭセンサーが提供される。
好ましくは、チオ脂質は下式て示される。
ＯＨＯＨ １１ｏ＋ Ｒ’−０−Ｐ、ＯＯ，、Ｐ−０−Ｒ２ （０−ＣＨ２ＣＨ２）。−Ｓ　−Ｓ　−（ＣＨ２Ｃ）１２−０）。
上式中、ｍ及びｎは１〜５てあり、そしてＲ１及びＲ２はリン脂質分子の残基で ある。ｍ及びｎが同してあり且つＲ１及びＲ２か同しであることが望ましい。
第１層のリン脂質は、いわゆる定座流動脂質相転移温度（ｏｒｄｅｒｅｄｆｌｕ ｉｄ−１ｉｐｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒ ｅ）よりも高い単一成分または合成もしくは天然のリン脂質混合物のいずれかを 含むことにより、流動脂質層を提供することが好ましい。
センサーは、アナライトと結合することがてきるリガンド、特にアゴニストと結 合することができる天然レセプタータンパク質を含有するのが普通である。本発 明は、第２脂質層の上に水性媒体を含有するセルの形態にある上記のようなセン サーと、リガンドに結合するアナライト（検出または測定すべき物質）がセルに 添加されたときの脂′Ｒ２分子層の特性変化を検出するための手段とを含む装置 を包含する。好ましくは、水性媒体は電解質であり、そして変化が検出される特 性は電気抵抗またはキャパシタンス（それぞれ、ファラデーＴｉ、流または容量 性電流から計算できる）である。
図面の簡単な説明 図は、（イオンチャンネルを擬似斜視図て示すために中央部で擬似垂直断面を切 り取った）本発明のＢ　Ｌ　Ｍセンサーの模式図を示す。
図面を参照すると、ＢＬＭセンサーは、電極であることができる全表面ｌと、こ れに接触している第１脂質層２と、その上を覆う第２脂質層３を含んで成る。セ ンサーに導入されるレセプタータンパク質を４で示す。
チオ脂質分子５は、切断されたジスルフィド結合によって全表面に結合している ように示されているが、これは模式的且つ非絶対的と考えるへきである。すなわ ち、ジスルフィド結合は実際にはそのままであることもてきる。リン脂［６にお いて、酸素原子は中実（黒塗）の卵形で示され、一方、他の基は大きな円形で示 される。
Ｎ原子はコリン残基のものである。水分子は線装飾卵形７で示される。便宜上、 これら二つの層におけるリン脂質は同じものとする。
というのは、これらの層は、全表面との完成反応が起こる前にチオ脂質層形成成 分を単に洗い流した後にリン脂質を加えることによって、後で形成することがで きるためである。加えられたリン脂質が不完全な第１層を「完成させ」、そして その上に同じ工程中で第２層を形成する。全表面の５〜２５％が、第１工程で形 成される不完全チオ脂質単層では覆われずに残っているものと計算することがで きる。このことは、レセプタータンパク質（または酵素もしくは他のリガンド） に脂質２分子層を完全に貫通させ、よって全支持体の真上に親水性環境を到達さ せる必要があるので、有益である。この特徴について以下にさらに詳しく記載す る。
リン脂質は天然のものでも合成されたものでもよいが、便宜上、天然脂質やそれ らの混合物由来のホスファチジルコリン型のものから選ばれる。これらの化合物 は、左旋性（Ｌ）配置の通常ＤＰＰＣ１ＤＭＰＣ及びＰＯＰＣと略号化されてい る１、２−シパルミトール、１、　２−シミリストイル及びｌ−バルミトイル− ２−才レイル−５ｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。Ｄ’ＰＰＣは４ビＣ の、ＤＭＰＣは２５°Ｃの、そしてＰＯＰＣは０℃の脂質相転移温度を示す。（ これらの温度は、水中における脂質分散体に適用され、脂質が表面上の層として 存在する場合には若干高くなる）。通常の室温、すなわち１５〜２３°Ｃで使用 する場合には、第１層に所望の流動性を付与するため第１層にはＤＭＰＣ及びＰ ＯＰＣの約ｌ：１モル混合物が適当である。この比率は、特定の状況に適合させ るため、例えば０．５：１−１：１．５、好ましくは０．　８：１−１：１．　 ２の範囲内で調整することができる。転移温度が高いため、ＤＰＰＣはＰＯＰＣ を含む混合物中でしか、しかもその場合にも少量でしか使用することができない 。
式（３）で示されるリオ脂質は、全支持体から適正な距離のところにリン脂質の 長鎖炭化水素基を固定（ａｎｃｈｏｒ）　Ｌ／、層の剛性を過剰に損失すること なく、全支持体とこれらの基の間に捕捉された水の親水性層を形成できるように 設計されている。オキシエチレン基の数（ｎ）は適宜規定される。本発明者らは 、ｎ＝１２０長鎖ポリオキシエチレン基がチオ脂質層を生成しないことを示した 。チオ脂質分子が全表面に結合しそれに対して整列する自己集成が行われない。
式（３）において、Ｒ１基及びＲ２基は、好ましくはホスファチジン酸誘導体残 基、特に１分子のグリセロールと２分子の長鎖脂肪酸とのエステルの残基である 。長鎖脂肪酸は、パルミチン酸もしくはミリスチン酸のように飽和てあっても、 またはオレイン酸のように不飽和であってもよい。好ましくは、脂肪酸は１４〜 ２２個の炭素原子を有する。ジスルフィドが対称性を示すべきとする原理的理由 は無い。すなわち、Ｒ１基及びＲ２基並びにｍ及びｎの値はそれぞれ同じであっ ても異なってもよいが、それらを製造する実際上の問題としては同しであること が好ましい。
センサーの製作では、単に自己集成が起こるだけである。全支持体を、チオ脂質 の溶液または懸濁液、例えば洗剤溶液または水性小胞懸濁液と接触させる。完全 な層が形成される前にチオ脂質を除去してリン脂質を加える。先に説明したよう に、これは第１層を完成させ且つ２分子層を形成させる単一工程で適宜行われる が、非常に注意深く制御した量の第１のリン脂質を加えて第１層を完成させるこ とができず且つさほど慎重には制御しない量の第２のリン脂質を加えて第２層の 大部分（理論的には全部）を形成させる原理的理由は無い。
リガンドは、単独または第１のリン脂質と共に加えることが好ましい。
センサーは、第２層の上に水性媒体を保持するためセル（小さな区分室）の形態 て構築することが好ましい。検出すべきアナライトはその水性媒体に導入される 。
第１層におけるリン脂質に対するチオ脂質の比率は、リン脂質を加える時点を変 えることによって変更でき、輿望的には、（リン脂質の添加前に）第１層におけ る容量性電流を３００〜ｌ０００ｎＡとするか、及び／またはファラデー電流を １００〜４００ｎＡとする。
本発明のセンサーは、周囲の媒体から薬物、タンパク質、ウィルス、等を選択的 に結合することができる膜タンパク質レセプターを内在させるために用いた場合 に特別な用途がある。特定のリガンドがレセプターに結合するとレセプター内に 構造変化が誘発され、その変化を人工的もしくは生物学的なシグナル増幅反応と 結合させるか或いは直接に電気的または光学的手段によつ　出することができる 。適当な増幅反応には、ある種のレセプタータンパク質中にイオンチャンネルを 形成させ、そのレセプターにリガンドが選択的に結合することが引き金となる酵 素反応を誘発する方法がある。第１のタイプの増幅反応の例として、アセチルコ リン、ＧＡＢＡ、グリシン、５−ＨＴ３　（セロトニン）レセプター及びナトリ ウム、カリウムまたはカルシウムチャンネルタンパク質によって提供されるよう なリガンド開閉式（ｌｉｇａｎｄ−ｇａｔｅｄ）や電圧開閉式（ｖｏｌ　ｔａｇ ｅ−ｇａｔｅｄ）のイオンチャンネルがある。第２のタイプの反応例として、Ｇ タンパク質結合レセプター（アドレナリン産生、ドパミン産生、ムスカリン産生 、コレルギン産生（ｃｈｏｌｅｒｇｉｎｉｃ）及びセロトリネルギン産生（ｓｅ ｒｏｔｏｒｉｎｅｒｇｉｃ）レセプター）：非ペプチドリガンド、例えばサブス タンスＫ、サブスタンスＰ、ニューロメゾイン（ｎｅｕｒｏｍｅｄ　ｉ　ｎ）、 アンギオテンシン、エンドセリン（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ）レセプター及びペプ チドリガンドとしてロドプシン並びに嗅覚レセプターなどの感覚レセプター類が 挙げられる。これら及びその他のレセプターについては当該技術分野では周知で あり、Ａ、Ｄ、　ＳｔｒｏｓｂｅｒｇのＥｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。
１９６、１−１０　（１９９１）に検討されている。
本発明は、天然膜の脂質層を１回または数回横断することによって脂質２分子層 の外側まで張り出している膜タンパク質レセプターを内在させたバイオセンサー の形成に特定の用途がある。これらの膜タンパク質は、単一のポリペプチド鎖か ら、または数個のサブユニットのポリペプチド鎖から構成されることができる。
オリゴマー膜タンパク質複合体は、同じ（ホモオリゴマー）サブユニットから、 または異なる（ヘテロオリゴマー）サブユニットから構成される場合がある。本 発明のセンサーの膜は、第１層の脂質部分と固体表面の間に水の層を捕捉するよ うに表面に結合する限りでは有利である。
このような水層の厚さは数オングストローム、例えば１〜５０人であることがで きる。水層の正確な厚さは第１層の組成によって変化する。この層によって、膜 を越えて張り出すレセプタータンパク質が、自然界で見い出される形状により近 くなることに符合して自然界における様式でリガンドの結合に応答することがで きる形状配置を採ることができる。
特に好ましいセンサーは、５　ＨＴ３　（セロトニン）レセプタータンパク質を 内在するセンサーである。５　ＨＴｓレセプターはリガンド開閉式イオンチャン ネルを形成することが知られている。ある種のリガンド、具体的には５−ヒドロ キシトリプタミン（セロトニン）及びｌ−フェニル−ビグアニドが、このレセプ ターのアゴニストとして作用すること、すなわち、タンパク質内のチャンネルの 開口を誘導しイオンが膜を横断して流れるようにすることが知られている。この レセプターに対するアンタゴニストとして作用する、すなわち、タンパク質の構 造を変化させて閉じた状態にする特定の薬物も知られている。これらの５　ＨＴ ２　レセプターアンタゴニストは薬理学的に重要である。それゆえ、本発明のバ イオセンサーは、５−ＨＴ、なとの生物感受性レセプタータンパク質に対するア ゴニストまたはアンタゴニストとしての薬理学的試薬の活性を評価する上で作用 である。
本発明のセンサーは、各種検出装置、とりわけ、２分子層が搭載される電極の電 気抵抗やキャパシタンスの変化を監視できるようにセンサーが変換器に密接して いる検出装置に用途がある。第２脂質層の上に水性媒体を含存し、アナライトを セルに加えたときの２分子層の特性変化を検出する手段を含有するセルの形態に あるような生物検出装置は、本発明のさらなる態様を形成する。本発明に包含さ れる池の装置は、生物感受性分子のコンフォメーション変化を監視するための他 の検出技法、例えば圧電測定法や表面プラスセン共鳴法（ｓｕｒｆａｃｅ　ｐｌ ａｓｍｏｎ　ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）に依存し、その検出手段は対応本発明を以下 の例によって説明する。
例１ トリエチレングリコールモノクロロヒドリンと、硫化水素ナトリウム１水和物と 、塩酸とから調製した１−メルカプトトリエチレングリコール３ｇ（１８ミリモ ル）を１００ｍ　ｌのメタノールに溶解し、炭酸カリウム溶液（水５０ｍ１中に ９．５ミリモル、１．　３ｇ）と混合した。ｌｏｏｍｌのメタノールに２．３ｇ （９ミリモル）のヨウ素を含む溶液を室温で１７ｆ４ずつ加えて、ヨウ化カリウ ムを析出させた。黄色い色か残存する場合には脱色するまで少量の亜硫酸ナトリ ウムを添加した。蒸発乾固させた後、その残留物を３０ｍ１の塩化メチレンに懸 濁させ、そして冷却後に濾過法でヨウ化カリウムを分離した。得られた溶液を、 溶離液にＣＨ２Ｃｌ２／λ１ｅＯＨ（１００：５）を用いて長さ５ｃｍのシリカ ゲルカラムで精製した。その後、精製物を真空下で数時間乾燥すると、はとんど 無色の油状物２．２ｇ（７４％）が得られた。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）：　６．−２．８８　（ｔ、ｊ−６，６Ｈｚ、６Ｈ ，−ＯＨ，−ＣＨ２−５）；３．５５−３．５８（ｍ、４Ｈ，−Ｃ１２−Ｃ）１ ２−ＯＨ）　；３．６−３．７５　［ｍ、１６Ｈ；−０−ＣＨ２−Ｃ１１２−０ −（６−３，６３，）；Ｃ）＋２−ＣＨ２−５（６，，３，７２，ｔ、コ−６， ６Ｈｚ）；ＣＨ２−０）１１十分に乾燥した１、２−ンパルミｌ−イルー５ｎ− グリセロ−３−ホスファチシン酸二ナトリウム塩（Ｆｌｕｋａ）Ｉ　ＯＯｍｇ　 （１４４Ｐモル）と２．４．６−ドリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド ７８ｍｇ（２８８μモル）とを５ｍｌの無水ピリジン中で超音波をかけながら懸 濁させた。それを透明溶液になるまで短時間温めた後、１５分間攪拌した。１９ ｍｇ　（５７μモル）のビス（８−ヒドロキシ−３，６−シオキサオクチル）ジ スルフィドを１ｍｌの無水ピリジンに溶解し、先に調製した溶液に加えた。この 混合物を、湿分を排除しながら室温で一晩攪拌した。次いで、１ｍｌの無水塩化 メチレンを加えた。この混合物を短時間温め、そしてさらに１時間の攪拌を継続 した。１ｍｌの水を加え、そして１５分後に、それを再度短時間温めて、最後に 減圧下で蒸発乾固させた。得られた黄色い残留物を２０ｍ１の無水ジエチルエー テルに懸濁（超音波）し、そして濾過した。
その濾液を蒸発させ、シリカゲルカラム（３０ｃｍｘ　１　ｃｍ）で精製した。
そのカラムをまず１００ｍ１のクロロホルムて洗浄し、次いてＣＨＣ１ａ／Ｍｅ ＯＨのグラジェント（１００：３から１００：４）を使用して生成物を溶離した 。痕跡量のシリカゲルを除くために、生成物をもう一度２０ｍ１のジエチルエー テルに溶解してから濾過した。
１ｍｌのクロロホルムに溶解し、続いて１０ｍ１のアセトンを加えることによっ て再結晶化した。−１５°Ｃで５時間経過後、白色析出物を濾過して単離し、そ して真空下で乾燥すると、無色の固体が６３ｍｇ（ジスルフィドに対して６９％ ）得られた。
ＣｓＪ＋ｓｏＯ□ｏＳｚＰｚＸＨ２０の元素分析値：理論値　Ｃ６１，１６Ｈ１ ０，＋４　Ｓ　３．９８　Ｐ　３．８５分析値　６］、１２　１０．０３　３． ８８　３．７５３．６７、　（ｂ、１２Ｈ，Ｃ−０−ＣＨ２−ＣＨ２−０−Ｃ） ：　３．７６（ｔ、ｊ−６，３Ｈｚ、４Ｈ，５−ＣＨ２−ＣＪｌ１２−）；　３ ．９９−４．０３（ｍ、８Ｈ、ＰＯ−ＣＨ２−）　；４　、　＋４−４　、４４ （ｍ、４Ｈ、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃｏ−）　；５．２３（ｂ、２Ｈ，：＋ＣＨ） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）：　６．．２．９７（ｂ、８１（，５−ＣＨ２，ρ −ＯＨ，）１２０）シリカゲルによる薄層クロマトグラフィーＲ，０，６３（Ｃ ＨＣ１３：ＭｅＯＨ：Ｈ２０／６５．２５：４）例２及び３ 例１と同様に、ビス（８−ヒドロキシ−３，６−シオキサオクチル）ジスルフィ ドの代わりにヒス（２−ヒドロキシエチル）ジスルフィド及びビス（５−ヒドロ キシ−３−オキサペンチル）ジスルフィド・を使用し、ＲがＤＰＰＣの残基であ り且つｎ＝１まｔこは２である式（２）の対応する化合物を調製した。
再結晶後、５７％の収率てビス（２−（１，２−シックルミドイル−物（Ｒ＝Ｄ ＰＰＡ残基、ｎ＝１）か得られた。
Ｃ．、Ｈｌ．、Ｏ，、Ｓ２Ｐ．χＨ２０の元素分析値理論値　Ｃ　６１．９８　 Ｈ　１０．２６　Ｓ　４．４７　Ｐ　４．３２分析値　６０，６５　９．５０　 ４．０７　４．２３ＣＤＣＩ３：ＣＤ．ＯＤ／２：ｌにおけるＮＭＲデータは、 ｎ＝３の化合物のデータと同してあったか、但し、２，９４及び３．７６におけ るノくンドかそれそ第１３．０２及び４００にソフトし、そして３．６７及び３ ．９９〜４．０３ｉこおける分離ハンドは認められず、４．１７〜４．４５にお けるバンドは１２Ｈ多重線ＰＯーＣＨ２ーＣＨ＜及び−ＣＨ．−０−ＣＯ−に帰 属する。
再結晶後、７２％の収率でビス（５−（１．２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセ ロ−３−ホスホリル）−３−オキサペンチル〕ジスルフィド１水和物（Ｒ＝ＤＰ ＰＡ残基、ｎ＝２）が得られた。
Ｃ７Ｊ＋ｓ２０ａｓＳ２Ｐ２ＸＨｚＯの元素分析値：理論値　Ｃ　６１．５５　 Ｈ　１０．２Ｏ　Ｓ　４．２１　Ｐ　４．０７分析値　６０．１８　９．４４　 ４．０７　４．０５ＣＤＣ１．　：ＣＤ．ＯＤ／２＋　１におけるＮＭＲデータ は、ｎ＝３の化合物のデータと同してあったが、但し、３．６７のバンドが４Ｈ 　ＰＯ−ＣＨｔ−ＣＨｚに帰属する３．６８のハンドに置き換わった。
２時間以内に新たに解剖した子ウシの脳から子ウシのエントルヒナル（ｅｎｔｏ ｒｈｉｎａｌ）皮質及び海馬を単離した。すべての手順は特に断らない限り４° Ｃで実施した。まず、これらの脳（約５０ｇ）の組織を切断して小さな断片とし 、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ，１３０ｍＭのＫＣＩ、０．５ｍＭのＭ　ｇ　Ｃ　Ｉ　 ２、１ｍＭのＣａＣ　Ｌ　、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ＩｍＭのＤＴＴ、０．１ｍ ＭのＰＭＳＦを含有するｐＨ７．４の複合緩衝液Ａ（４００ｍｌ）において１分 間細かくし、そしてガラス−ＰＴＦＥ−ホモジナイザーで磨砕均質化した。
次いて、そのホモジネートを５００００ｇで１０分間遠心分離して、細胞の可溶 性化合物と膜画分を分離した。その上清を捨て、ベレットを１０倍体積の緩衝液 に再度溶解した。それをもう一度磨砕均質化し、上記のように遠心分離した。得 られたペレットを、８％スクロースを含有する少量の複合緩衝液Ａに溶解して、 その後の使用時まで一５０°Ｃて保存しておいた。
解凍した膜を２０分間遠心分離（５００００ｇ）して、スクロースを含有する溶 液から分離した。残存している無傷の細胞を溶解するため、体積５倍の５０ｍＭ 　ＨＥＰＥＳ　（ｐＨ７，４）にペレットを懸濁させ、超音波処理を施し、そし て３０分間攪拌した。その懸濁液を遠心分離（５０００（Ｉｇ、４°Ｃｌ２Ｏ分 間）した後、得られたペレットを約５０ｍ１の４０ｍＭ溶液に攪拌しながら可溶 化させた。約１時間後、はぼ透明な溶液を１０００００ｇで２時間遠心分離して 、なおも存在する膜フラグメントをペレット化した。次いて、その溶液を、ＯＰ Ｇ／複合緩衝液で平衡化しておいた５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ）ア ガロースカラム（Ｓｉｇｍａ　Ｈ−７１３６、カラム寸法２．５Ｘ０．９　ｃｍ ）に１０ｍ１／時の流速で充填した。そのカラムをカラム体積の５倍量の同し溶 液で（４ｍｌ／時の流速で）洗浄し、脂質と未結合タンパク質を除いた。最後に 、ＯＰＧ／複合緩衝液中に１００ｍＭの５−ＨＴを含む溶液約１５ｍ１を用いて 、結合した５−ＨＴ、レセプターを溶離した。過剰の５−ＨＴを除去し且つ試料 体積を減少させるため、溶液を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ　ｃｅｌｌ　３゜Ｙλ１ １０膜）で最終タンパク質濃度が約１ｍｇ／ｍｌになるまで濃縮し、そして−５ ０°Ｃで保存した。
５−ＨＴ、レセプターのトリチウム標識ＩＣ３２０５−９３０に対する結合活性 を以下のように測定した。ｌμｇのレセプタータンパク質を含むレセプター溶液 試料１μｍに、放射線標識ＩＣ３２０５−９３０（６，１２μＣｉ／ｍ１ＳＳａ ｎｄｏｚ　ＡＧ、Ｂａ　ｓ　ｅ　Ｉ）の４４．５ｎＭ水溶液を各種量で混合し、 複合緩衝液で全体を５００μｍとした。１．５時間インキュベートした後、レセ プターを析出させるために１００μｍのポリエチレングリコール４００を加えた 。遠心分離（７０００ｇ、１０分）後、上清とペレットを分離した。これらの試 料を４ｍｌの液体シンチレーションカクテル（Ｓ［ＧＮＡ−ＦＬＵＯＲ：商品名 ）と混合し、そして液体シンチレーションカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｉｎｓ ｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて放射能を測定した。
単離されたタンパク質は、５−ＨＴ、レセプターのアゴニスト及びアンタゴニス トに対する結合活性を示す。
例５ 本発明にはよらない比較用の脂質２分子層膜センサーの製作（ｉ）チオ脂質だけ の第１層を表面に形成オクチルグルコピラノシドなどの洗剤水溶液に溶解させた チオ脂質は、自発的に裸の全表面に吸着して、全表面への共有結合によって支持 された単一の脂質２分子層を集成する。この脂質２分子層の形成は、標準的なロ ックイン（Ｌｏｃｋ−ｉｎ）増幅技法を用いて電気化学セルにおける電極の電気 インピーダンス及びキャパシタンスの付随変化を測定することによって観測され た。
電気化学セルの作用電極は、シリコンウェハー（導電率３〜５Ωｃｍ）の厚さ８ ００ｎｍの二酸化珪素表面層内に写真平版で製作した円形トラフの裸のシリコン 表面に順次蒸着させた厚さ１０ｎｍのクロム層の上に１ｍｍ２の円形領域をもつ 厚さ２００ｎｍの金層からなるものとした。シリコンウェハーの裏側には厚さ１ ０ｎｍのＣｒ層及び厚さ２００ｎｍのＡｕ層を順次蒸着してシリコン電極に電気 接点を設けた。
裸の全表面は、１００ｍ１の９８％硫酸（ＤＡＢ、　Ｍｅ　ｒ　ｃ　ｋ）にＩｇ の重クロム酸カリウム（ｐｕｒ　ｉｓｓ、、Ｆｌｕｋａ）を含む混合物中に試料 全体を１分間浸漬することによって調製した。次いて、その試料を脱イオン水で 十分に洗浄した。この手順を２回実施してから電極を電気化学セルの中に配置し た。
最初に、裸の金電極の電気特性を測定するため５０μＩの０．　１ＭＫＣｌ水溶 液をセルに加えた。標準的なロックイン増幅法で測定した電流値（独立した１２ 個の実験値の平均）は、容量性電流　Ｔｅ、、＝３４００±７０ｎＡ（±２％） ファラデー電流　１．、、、、〜４５２０±１８０ｎＡ（±４％）である。
次イテ、セル中の０．１Ｍ　ＫＣＩ水溶液５０μＮｍ０．５ｍｌのチオ脂質／オ クチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＧＰ）（０，ＩＭ　ＫＣＩ中、チオ脂質 ０．７ｍＭ及びＯＧＰ４８ｍＭ）を添加した。この例では、例Ｉ〜３のチオ脂質 をそれぞれ使用した。
金電極へのチオ脂質の吸着は、作用電極とＡｇ／ＡｇＣ］参照電極の間に±１７ ．５ｍＶの交流を印加し、ロックイン増幅器でファラデー電流及び容量性電流を 連続的に測定することによって調べた。
１０分間の吸着時間後に形成したチオ脂質層のキャパシタンスは、１〜１．５μ Ｆ／ｃｍ’であった。洗剤を除去するために７２時間後に純０．１Ｍ　ＫＣＩで 脂質層を洗浄すると、対応するキャパシタンスは０．５．０．６及び０．７μＦ ／ｃｍ”てあり、それらの電気抵抗は５〜ＩＯＭΩである。
（１１）チオ脂質の第１層の上にリン脂質の第２層を形成上記（ｉ）で調製した 膜をリン脂質のＤＰＰＣ，ＤＭＰＣまたはＰＯＰＣで処理すると２分子層膜が得 られる。
表１に記載した（金電極に結合した第１の完全なチオ脂質層と上部の第２リン脂 質層を含む）金で支持された混合脂質２分子層の得られたキャパシタンス値は、 ０．７〜０．８μＦ／ｃｍｃ）ｖ！、囲にあることがわかっている従来の未支持 脂質２分子層の値と全体的に一致している。例えば、Ｒ，Ｂｅｎｚ　＆　Ｂ、Ｆ 、　Ｇ１５ｉｎのＪ、Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ４０２９３−３１４　 （１，９７８）を参照されたい。これらの知見は、従来の未支持リン脂質膜の場 合と同等の電気特性を有する単一の支持された脂質２分子層の存在を示している 。
上記（例５）のように、金電極を清浄し、電気化学セルに挿入し、そしてチオ脂 質／オクチルグルコピラノシド（０，ＩＭ　ＫＣＩ中０　、　７　ｍＭ／　４８ 　ｍＭ）を用いてインキュベートした。電極のキャパシタンスとインピーダンス をロックイン増幅器で連続的に観測した。約２〜３分の吸着時間後、容量性電流 か約２００ｎＡの値に到達し、その時点てチオ脂質溶液を完全に除去し、試料を セルに接続したまま洗剤溶液Ｅ（０，ＩＭ　ＫＣＩ中５５ｍＭ　０ＧＰ）によっ て安定な値か得られるまで数回洗浄した。これらの値は容量性電流て３００〜１ ０００ｎＡ、ファラデー電流で１００〜４００ｎＡの範囲にあった。洗浄工程終 了後、約５０μｍの溶液を残して他を除去した。これにより連続測定を可能にし た。
次いて、１ｍｌのリン脂質／オクチルグルコピラノシド溶液（０，ＩＭ　ＫＣＩ 中、ＤＰＰＣ４，０ｍＭ、ＤＭＰＣ４，３ｍＭまたはＰＯＰＣ３，９ｍＭをＯＰ Ｇ４１ｍＭと共に含む）をセルに入れ、０．１Ｍ　ＫＣＩで段階的に希釈した。
最初に５０μｍの体積を加え、次いて１００μｍ、そして最後に５００μＩの部 分を加えた。希釈による電流応答のさらなる低下が観測できなくなった後に、そ の溶液を完全に０．１Ｍ　ＫＣＩに交換した。２分子層全体の形成には（異なる 試料について何回も実施）、１０〜３０分かかった。最終電流測定値は、それぞ れ １　、、、、、　＝２６．２±８．６．２１．５±８．１及び２２．７±４．２ Ｉｃ、、＝１３１．９±２．６．１０８．７±１１．１及び１０２．３±１０． ３てあった。
金電極上の最終安定混合２分子層は、ＰＯＰＣ及びＤＭＰＣのどちらのリン脂質 についても０．８（±１０％）μＦ／ｃｍ”のキャパシタンス値を示す。抵抗値 は電極１ｍｍ”当たり０．５〜ＬＭΩの範囲にある。
金電極上のチオ脂質及びリン脂質の混合単層と第２リン脂質単層とから成る混合 脂質２分子層は、表１に記載の混合２分子層に非常に近いキャパシタンス及び抵 抗値を示す。しかしながら、混合第１層を含む後者の混合２分子層は、膜透過タ ンパク質を包含させる必要かある。例えば、５−ＨＴ２レセプターの場合、例５ 及び表１の種類の膜にはレセプターを包含することができない。
例５のように、Ｉｍｒｎ２の金電極を清浄し、電気化学セルに挿入した。まず、 １００μｌのチオ脂質１０ＰＧ（０，ＩＭ　ＫＣＩ中０．７ｍＭ／４８ｍＭ）溶 液を加え、例６と同様に吸着工程を実施した。約２分後、溶液を完全に交換した 。試料を０．ＩＭ　ＫＣＩ中５５ｍＭ　ＯＣＰを含む溶液で数回洗浄した。
レセプター含有溶液を以下のように調製した。２ｍｇ　（２，９μモル）のＤＭ ＰＣと、２ｍｇ　（２，６μモル）のＰＯＰＣ（すなわち、ＤＭＰＣ：　ＰＯＰ Ｃのモル比は約Ｉ：１）と、２ｍｇ（４１μモル）のＯＰＧとを１ｍｌの０．Ｉ Ｍ　ＫＣＩ中で溶液が透明になるまで超音波処理した。この溶液に１５μｇの５ −ＨＴ３レセプター（例４て使用した複合緩衝液Ａと４０ｍＭのＯＰＧ中、１ｍ ｇ／ｍｌ）を混合し、１００μＩのレセプター含有溶液をセルに入れた。
約２分後、セル溶液を少量のＯ，ＬＭ　ＫＣＩの添加により段階的に希釈した。
最後に、その溶液を０．１Ｍ　ＫＣＩによって完全に交換した。得られた層は遅 くとも５時間以内に実験に供し、その後０、ＩＭ　ＫＣＩ中５５ｒｎＭのＯＧＰ を含む溶液で洗浄することによって除去し、そして氷冷したレセプター溶液を用 いて再度形成した。こうして形成した脂質２分子層膜が示すレセプター二脂質モ ル比は約１：２５．ｏｏｏであった。その電気特性は例６のＢＬＭと同等であり 、キャパシタンスが約０．７５μＦ／ｃｍ”、そして抵抗値が試料１ｍｍ”当た り０．５〜ＩＭΩであった。
比較のため、対応する純リン脂質／洗剤溶液を用いて金電極上の不完全チオ脂質 単層を完成することによって、レセプタータンパク質を含まない対応する脂質２ 分子層を形成した。
５０μｍずつの５−ＨＴ溶液Ｂ（０，ＬＭ　ＫＣＩ中２０μＭの５−ＩＴを含む ）を（５００μｍのＯ，ＬＭ　ＫＣＩを含有するセルに接続されている）内蔵レ セプターを含む層に連続的に加えた。
添加には約５０秒の間隔を置いた（容量性及びファラデー電流が一定値に到達） 。独立した二つの実験で得られたデータを、添加した５−ＨＴ溶液の体積及び５ −ＨＴ濃度と共に表２に記載した。周囲の水性環境中の５−ＨＴ（レセプターの アゴニスト）濃度を増加させると、典型的な飽和型挙動が観測される。すなわち 、最初はアゴニスト濃度の増加と共に電気特性が変化するが、あるアゴニスト濃 度において膜のキャパシタンス及び抵抗が一定となる。
レセプターを含まない脂質層を用いて同じ実験を実施した。先と同し濃度範囲で ５−ＨＴを適用しても、純脂質層の電気特性の変化はまったく観測されなかった 。
（ｉｉｉＮ−フェニルビグアニドによる５−ＨＴ、レセプターの刺激上記と同様 にレセプター含有系を構築した。同様に測定セルには５００μｌの０．１Ｍ　Ｋ ＣＩを入れたが、刺激用には、別のアゴニストの１−フェニルビグアニドを２０ μＭで０．ＬＭ　ＫＣＩ中に含む溶液Ｃを使用した。連続添加体積及び得られた ｌ−フェニルビグアニド濃度並びに二つの実験で得られた電流応答を表３に記載 する。これらの結果は表２の結果と同等である。
表２及び表３の実験結果は、５−ＨＴ、レセプターが全支持脂質２仔子層中に包 含され、レセプターがそのアゴニストに結合する能力を保持していることを示し ている。その結合活性は、天然の生物細胞で観測される同じアゴニスト濃度範囲 において起こる。例えば、Ａ、Ｖ、　Ｍａｒｉｃｑらの５ｃｉｅｎｃｅ　２５４ ．４３２−４３７　（１９９１）を参照されたい。
レセプターを含まない脂質２分子層を用いて同じ実験を行った。
種々の１−フェニルビグアニド濃度で得られた値を表４に記載する。
これらの結果は、レセプターを含まないセンサーの応答が、センサーにレセプタ ーか固定化されている場合よりもはるかに低いことを（１１）に記載のように、 ５−ＨＴ、レセプターを含有する支持された脂質２分子層を形成した。まず、セ ルに５００μＩのＯ，ＩＭＫＣＩを入れ、そして５−ヒドロキシトリプタミン溶 液Ｂを用いて（１１）に記載のように刺激を行った。次に、系をＯ，ＩＭ　ＫＣ Ｉで洗浄し、そして測定セルを０．１Ｍ　ＫＣＩに１０ｎＭのＩＣ３２０５−９ ３０（Ｓａｎｄｏｚ　ＡＧより提供された）を含・む溶液５００μＩて再充填し た。この化合物は式（４）で示される。
最後に、０、ＩＭ　ＫＣＩｌｌＯｎＭのＩＣ３２０５−９３０と７００μＭの５ −ヒドロキシトリプタミンを含む混合物りを少しずつ添加して、ＴＣＳ　２０５ −９３０の濃度を１０ｎＭで一定に保った。各添加後、容量性電流とファラデー 電流の値を安定化させた。
両方の実験データと異なる溶液の連続添加体積を表５に示す。ここでは、アンタ ゴニストＩＣ３２０５−９３０が存在する場合としない場合との、レセプターに 対する５−ＨＴの結合の濃度依存性を試験した。使用したアンタゴニストのレセ プターに対する解離定数はＫｄ＝０．７μＭである。使用したアゴニストの解離 定数はＫｄ＝０．５〜ｌμＭの範囲にある。アンタゴニストとアゴニストの結合 特性の違いは、表５に記載した実験結果を説明するものである。
１０ｎＭのＩＣ３２０５−９３０の存在下でレセプターに結合するために必要な ５−ＨＴ濃度は、このアンタゴニストが存在しない場合の約４０倍高い濃度であ る。このことは、金電極上のレセプターがアゴニストのみならずアンタゴニスト にも結合できることを示している。このように、このレセプターは、支持された 脂質２分子層中で生物学的に活性のある形態て再構築されている。
ＩＣ３２０５−９３０を適用しても、レセプターを含まない脂質２分子層の電気 特性の変化はまったく観測されなかった。
作用電極をゴム製Ｏ−リングによってセルの底部の小さな孔にシールした。この ０−リングを絶縁用の８００ｎｍのＳｉＯ２層と接触させ、そして環状電極に触 れないよう中央に位置させた。
大きなく幾何学的面積約１　ｃｍ”　）ＡｇＣ１被覆Ａｇ線材を対向／参照電極 として使用し、作用電極から一定の距離をおいて固定した。インピーダンス測定 を、２チャンネルロックイン増幅器（ＥＧ＆Ｇ５２０６型）をｖ＝１２０Ｈｚて 使用し、電気化学セルにＵ０＝Ｉ７．５ｍＶ　ＲＭＳを印加して行った。インピ ーダンスの実数部及び虚数部は、印加電圧によるそれぞれ同相にある電流（ファ ラデー成分１１ａ＋ｍｄ）及び９０°ずれた電流（容量性成分１ｃ、、）から得 られた。これらの電流は、電極と直列に配置した１にΩの抵抗器で測定した。
金電極上の膜層のインピーダンスとキャパシタンスは、２個の電流成分１１ａｒ ａ＋１及びＩｌｌ、から、膜キャパシタンスＣ＝１．．．／（２πｖＵｏ　）に 近い膜抵抗Ｒ＝Ｕｏ　／　Ｉ　ｔ−、−による膜の電気的挙動の簡単なモデルを 用いて測定した。
表１・純チオ脂質／リン脂質系の２分子層膜のキャパシタンスＤＰＰＣ０，７２ ±０．０５　０．７２±０．ＯＩＤＭＰＣ０，８０±０．０２　０．８０±０． ０ＩＰＯＰＣ０，７７±０．０２　０．７８±０．０３表２−５−ヒドロキシト リプタミンによるレセプター刺激の際の電Ｂ部　５−ＨＴ濃度　実験１　［ｎＡ ］　実験２　［ｎＡ］μｌ　８Ｍ　ｌｌｍｒａｄ　Ｉｅａ＋＋　ｌ１ａｒａｄ　 Ｉｃｅｓ−０２３，３９８，４２０，９９６，４５０１，８２２５１０１，５２ ３，２１００５０３，３３２６，２＋０３．４　２４．５　１０２．１５０　４ ．６２　２６．９　１０４．８　２５．２　１０３．３５０　５．７＋　２７． ３　１０５．６　２５．６　１０４．３５０　６．６６　２７．５　１０６．５ 　２６．０　１０５．１５０　７．５０　２７．７　１０６．８　２６．２　１ ０５．６５０　８．２４　２７．７　＋０７．２　２６．３　１０６．１５０　 ８．８９　２７．７　１０７．５　２６．３　１０６．３５０　９．４７　２７ ．７　１０７．８　２６．３　１０６．５５０　＋０．０　２７．７　１０８． １　２６．３　１０６．５５０　１０．５　２７．７　１０８．１　２６．３　 １０６．５表３＝１−フェニルビグアニドによるレセプター刺激の際の電流応答 ０部　フェニルビグアニド　実験　１　［ｎＡ］　実験２　［ｎＡ］μｍ　ｕ　 Ｍ　（Ｉ　ａ　ｒ　ａ　ｄ　Ｉ　ｅ　＊　ａ　［ｌ　ａ　ｒ　ａ　ｄ　Ｉ　ｅ　 ａ　ｓ−０１９，７９４，９２０，３９６，７５０１，８２２３，６９６，３２ ２，７９７，３５０３，３３２６，１９７，１２５，０９８，０５０４，６２２ ７，７９７，６２６，６９８，５５０５，７＋　２８．９　９８　２８．３　９ ９．２５０　６．６７　２９．７　９８．３　２９．０　９９．４５０　７．５ ０　３０．１　９８．４　２９．５　９９．５＋００　８．８９　３０．６　９ ８．５　２９．８　９９．６１００　１０　３０．８　９８．６　３０．０　９ ９．６２００　＋１．６７　３１．１　９８．６　３０．３　９９．６２００、 　１２．８６　３１．２　９８．６　３０．４　９９．６５００　１４．７４　 ３１．２　９８．６　３０．４　９９．６答 １−フェニルビグアニド　濃度　［μＭｌ　ｆｌａｒｅｄ　［ｎＡ］　Ｉｃａｐ 　［口Ａ］０　２１、３　９９．５ ７、５　２０．９　９６．５ １４．７４　２０．７　’　９６．４ 表５　：　ｌｏｎＭのＩｃｓ　２０５−９３０が存在する場合としない場合にお ける５−ヒドロキシトリプタミンによるレセプター刺激の際の電流応答 ８部　５−）（Ｔ　ＩＣ３不在［ｎＡ］　Ｄ部　５−ＨＴ　ＩＣ３存在［ｎＡ］ μｍ　μλｌ　ｆｌａｒｅｄ　Ｉｃｅｓ　μｌ　μλｌ　＋、・・・４１・・・ ３　０．１　Ｂ９．０　１６．６　１０　１４　８９．１　１６．１５０　１． ８　９０．３　１７．８　９０　１１７　８９．８　１８．１５０　３．３　９ １．０　１８．９　１００　２００　９０．２　＋９．１５０　４．６　９１． ５　１９．４　１００　２６３　９０．４　１９．７５０　５．７　９１．８　 １９．８　１００　３１１　９０．６　２０．２５０　６．７　９２．０　２０ ．１　１００　３５０　９０．７　２０．５５０　７．５　９２．１　２０．３ 　１００　３８２　９０．７　２０．７＋００　８．９　９２．３　２０．７　 １００　４０８　９０．７　２０．８１００　１０．０　９２．５　２１．０　 １００　４３１　９０．７　２０．９２００　＋１．７　９２．６　２１．２　 ５００　４５０　９０．７　２０．９純粋　２０．０　９２．６　２１．２　純 粋　７００　９０．７　２０．９国際調査報告　。ｒＴｚｌ−１１Ｑ’１１０Ｏ ９７６ＰＣＴ／ＥＰ　９３１００９７６ フロントページの続き （７２）発明者　ボーゲル、ホルスト スイス国、ツェーハー−１０２８プレベレンジュ、リュ　ドウ　ローザンヌ　１ ５

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. １．（１）金記録表面、（２）各端部のジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）基にそれぞ れオキシエチレン（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）鎖を介して結合している２個のリン 脂質分子の残基を含むチオ脂質の不完全層である第１脂質層であって、前記オキ シエチレン鎖が、前記チオ脂質を自己集成性によって金表面に固定できるほど十 分に短く、しかし前記金表面と前記チオ脂質層の底部との間に水層を捕捉させる ほど十分に長く、前記チオ脂質が前記金表面に結合され、そして前記不完全層が 、室温において結合されない流動相を付与するリン脂質によって完成される前記 第１脂質層、並びに（３）リン脂質の第２脂質層、を含んで成る脂質２分子層膜 センサー。
  2. ２．前記チオ脂質が下式（３）： ▲数式、化学式、表等があります▼（３）（上式中、ｍ及びｎは１〜５であり、 そしてＲ１及びＲ２はリン脂質分子の残基である）で示される、請求の範囲１記 載のセンサー。
  3. ３．前記不完全層を完成させるために用いられるリン脂質が、ＤＭＰＣとＰＯＰ Ｃとの混合物である、請求の範囲１または２に記載のセンサー。
  4. ４．前記混合物が０．５：１〜１：１．５のモル比である、請求の範囲３記載の センサー。
  5. ５．同じリン脂質によって第１層が完成され且つ第２層が形成された、請求の範 囲１、２、３または４に記載のセンサー。
  6. ６．前記金表面と前記第１層の脂質との間に薄い水層が捕捉されている請求の範 囲１〜６のいずれか一つに記載のセンサー。
JP5518003A 1992-04-22 1993-04-21 脂質膜センサー Pending JPH07508342A (ja)

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EP92303592 1992-04-22
EP92303592.7 1992-04-22
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US (1) US5756355A (ja)
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AT (1) ATE143730T1 (ja)
DE (1) DE69305160T2 (ja)
WO (1) WO1993021528A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009229344A (ja) * 2008-03-25 2009-10-08 Tokyo Institute Of Technology 匂いセンサ用感応膜および匂いセンサ素子
JP2016125946A (ja) * 2015-01-06 2016-07-11 国立大学法人神戸大学 ナノギャップ構造型基板

Families Citing this family (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
SE9403245D0 (sv) * 1994-09-26 1994-09-26 Pharmacia Biosensor Ab Improvements relating to bilayer lipid membranes
AUPM950094A0 (en) * 1994-11-16 1994-12-08 Australian Membrane And Biotechnology Research Institute Detection device and method
DE4444893A1 (de) * 1994-12-16 1996-06-20 Merck Patent Gmbh Peptide und synthetische Zellmembranen
WO1996038726A1 (en) * 1995-05-30 1996-12-05 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Covalently immobilized phospholipid bilayers on solid surfaces
AUPN366995A0 (en) * 1995-06-20 1995-07-13 Australian Membrane And Biotechnology Research Institute Self-assembly of bilayer membrane sensors
AU692107B2 (en) * 1995-06-20 1998-05-28 Ambri Limited Detection of small analytes
AUPN366895A0 (en) * 1995-06-20 1995-07-13 Australian Membrane And Biotechnology Research Institute Detection of small analytes
US5879878A (en) * 1995-06-20 1999-03-09 Australian Membrane And Biotechnology Research Institute Method of producing a first layer electrode membrane for a biosensor
EP0842418A4 (en) * 1995-08-01 2004-08-18 Ambri Ltd Composite membrane sensor
DE19607279A1 (de) 1996-02-27 1997-08-28 Bayer Ag Durch Festkörper unterstützte Membran-Biosensoren
US6107080A (en) * 1996-04-25 2000-08-22 Mcgill University Biosensor device and method
US6165335A (en) 1996-04-25 2000-12-26 Pence And Mcgill University Biosensor device and method
DE19622628A1 (de) * 1996-06-05 1997-12-11 Boehringer Mannheim Gmbh Stabilisierung von Metallkonjugaten
SE9602545L (sv) 1996-06-25 1997-12-26 Michael Mecklenburg Metod för att diskriminera komplexa biologiska prover
DE69735601T2 (de) * 1996-11-29 2007-10-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University, Stanford Anordnungen von unabhängig voneinander ansteuerbaren, gestützten flüssigbilayer-membranen und ihre anwendungsverfahren
US6699719B2 (en) * 1996-11-29 2004-03-02 Proteomic Systems, Inc. Biosensor arrays and methods
US6503452B1 (en) 1996-11-29 2003-01-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Biosensor arrays and methods
US7169272B2 (en) * 1997-04-30 2007-01-30 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Microfabricated recessed disk microelectrodes: characterization in static and convective solutions
AUPO717197A0 (en) * 1997-06-04 1997-07-03 Australian Membrane And Biotechnology Research Institute Improved biosensor
GB9712386D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Univ Coventry Biosensor
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
ATE393912T1 (de) 1998-02-04 2008-05-15 Invitrogen Corp Microarrays und ihre verwendungen
US6692696B1 (en) * 1998-06-18 2004-02-17 ARETé ASSOCIATES Biosensor
WO1999067640A1 (en) * 1998-06-22 1999-12-29 The Regents Of The University Of California Triggered optical biosensor
JP3297861B2 (ja) * 1998-06-29 2002-07-02 日本航空電子工業株式会社 めっき材
US6406921B1 (en) 1998-07-14 2002-06-18 Zyomyx, Incorporated Protein arrays for high-throughput screening
US20030138973A1 (en) * 1998-07-14 2003-07-24 Peter Wagner Microdevices for screening biomolecules
US6897073B2 (en) 1998-07-14 2005-05-24 Zyomyx, Inc. Non-specific binding resistant protein arrays and methods for making the same
US6682942B1 (en) 1998-07-14 2004-01-27 Zyomyx, Inc. Microdevices for screening biomolecules
US6576478B1 (en) * 1998-07-14 2003-06-10 Zyomyx, Inc. Microdevices for high-throughput screening of biomolecules
US6500571B2 (en) 1998-08-19 2002-12-31 Powerzyme, Inc. Enzymatic fuel cell
CN1075442C (zh) * 1998-08-28 2001-11-28 清华大学 聚苯乙烯作为基底的生物敏感膜及其制备方法
AU2898500A (en) 1999-03-02 2000-09-21 Helix Biopharma Corporation Biosensor device and method
US6977155B2 (en) * 2000-08-10 2005-12-20 Corning Incorporated Arrays of biological membranes and methods and use thereof
US7678539B2 (en) 2000-08-10 2010-03-16 Corning Incorporated Arrays of biological membranes and methods and use thereof
US7138238B2 (en) 2001-02-06 2006-11-21 Auburn University Ligand sensor devices and uses thereof
AU2002243129B2 (en) * 2001-03-14 2007-07-19 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Method of preparing supported lipid film membranes and use thereof
SE0100875D0 (sv) * 2001-03-14 2001-03-14 Biacore Ab Method of preparing supported lipid film membranes and use thereof
DE10112505C1 (de) * 2001-03-15 2003-01-30 Iongate Biosciences Gmbh Sensoranordnung und Vorrichtung zur amperometrischen und/oder potentiometrischen, pharmakologischen Wirkort- und/oder Wirkstofftestung sowie Verfahren zur amperometrischen und/oder potentiometrischen, pharmakologischen Wirkort- und/oder Wirkstofftestung
US20030113606A1 (en) * 2001-04-13 2003-06-19 Rosalyn Ritts Biocompatible membranes of block copolymers and fuel cells produced therewith
US20030049511A1 (en) * 2001-04-13 2003-03-13 Rosalyn Ritts Stabilized biocompatible membranes of block copolymers and fuel cells produced therewith
US20030129469A1 (en) * 2001-04-13 2003-07-10 Sun Hoi-Cheong Steve Fuel cell with fuel concentrate metering
US20030031911A1 (en) * 2001-04-13 2003-02-13 Rosalyn Ritts Biocompatible membranes and fuel cells produced therewith
WO2003016040A1 (en) * 2001-04-16 2003-02-27 The Regents Of The University Of California Membrane mimetic architectures on nanoporous materials
FR2828491B1 (fr) * 2001-08-07 2003-10-10 Warner Lambert Co Nouvelle membrane supportee, preparation et utilisations
AU2002324944A1 (en) * 2001-09-07 2003-03-24 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Distinguishing agonists, antagonists, and inverse agonists using pwr
DE10222588B4 (de) * 2002-05-22 2008-09-25 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Biomimetische Systeme aus Lipidmembranen gebunden an ein Substrat
DE10224567B4 (de) * 2002-06-03 2014-10-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Sensor-Anordnung und Verfahren zum Betreiben einer Sensor-Anordnung
EP1369692A3 (en) * 2002-06-04 2003-12-17 Interuniversitaire Microelectronica Centrum vzw ( IMEC) Sensor surface
US7547381B2 (en) * 2003-09-26 2009-06-16 Agency For Science, Technology And Research And National University Of Singapore Sensor array integrated electrochemical chip, method of forming same, and electrode coating
JP2008504216A (ja) 2003-12-02 2008-02-14 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド モノクローナル抗体の生成のための方法および組成物
US20060094053A1 (en) * 2004-11-04 2006-05-04 Dimitrios Stamou Self-assembled arrays of lipid-bilayer vesicles
WO2007061981A2 (en) * 2005-11-21 2007-05-31 Lumera Corporation Surface plasmon resonance spectrometer with an actuator-driven angle scanning mechanism
US7463358B2 (en) * 2005-12-06 2008-12-09 Lumera Corporation Highly stable surface plasmon resonance plates, microarrays, and methods
US9217749B2 (en) 2006-05-31 2015-12-22 Lpath, Inc. Immune-derived moieties reactive against lysophosphatidic acid
US9274129B2 (en) 2006-05-31 2016-03-01 Lpath, Inc. Methods and reagents for detecting bioactive lipids
US8796429B2 (en) 2006-05-31 2014-08-05 Lpath, Inc. Bioactive lipid derivatives, and methods of making and using same
US9274130B2 (en) 2006-05-31 2016-03-01 Lpath, Inc. Prevention and treatment of pain using antibodies to lysophosphatidic acid
CN101495656B (zh) * 2006-06-07 2017-02-08 纽约哥伦比亚大学理事会 采用带修饰的核苷酸通过纳米通道进行dna序列测定
US20090060786A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Gibum Kim Microfluidic apparatus for wide area microarrays
WO2009062151A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
US8004669B1 (en) 2007-12-18 2011-08-23 Plexera Llc SPR apparatus with a high performance fluid delivery system
JP5539962B2 (ja) 2008-04-25 2014-07-02 ノースウェスタン、ユニバーシティ コレステロールを隔離するのに適したナノ構造体
US20100233270A1 (en) 2009-01-08 2010-09-16 Northwestern University Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles
EP2525780B1 (en) 2010-01-19 2022-09-07 Northwestern University Synthetic nanostructures including nucleic acids and/or other entities
US8324914B2 (en) * 2010-02-08 2012-12-04 Genia Technologies, Inc. Systems and methods for characterizing a molecule
US9605307B2 (en) * 2010-02-08 2017-03-28 Genia Technologies, Inc. Systems and methods for forming a nanopore in a lipid bilayer
US20110192723A1 (en) * 2010-02-08 2011-08-11 Genia Technologies, Inc. Systems and methods for manipulating a molecule in a nanopore
US9678055B2 (en) 2010-02-08 2017-06-13 Genia Technologies, Inc. Methods for forming a nanopore in a lipid bilayer
US20120052188A1 (en) * 2010-02-08 2012-03-01 Genia Technologies, Inc. Systems and methods for assembling a lipid bilayer on a substantially planar solid surface
CN103282518B (zh) 2010-12-17 2016-11-16 纽约哥伦比亚大学理事会 使用经修饰的核苷酸和纳米孔检测的dna边合成边测序
US9121059B2 (en) 2010-12-22 2015-09-01 Genia Technologies, Inc. Nanopore-based single molecule characterization
US8962242B2 (en) 2011-01-24 2015-02-24 Genia Technologies, Inc. System for detecting electrical properties of a molecular complex
US9110478B2 (en) 2011-01-27 2015-08-18 Genia Technologies, Inc. Temperature regulation of measurement arrays
US9850534B2 (en) 2012-02-16 2017-12-26 Genia Technologies, Inc. Methods for creating bilayers for use with nanopore sensors
US8986629B2 (en) 2012-02-27 2015-03-24 Genia Technologies, Inc. Sensor circuit for controlling, detecting, and measuring a molecular complex
WO2013154999A2 (en) 2012-04-09 2013-10-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method of preparation of nanopore and uses thereof
JP2015525077A (ja) 2012-06-15 2015-09-03 ジェニア・テクノロジーズ・インコーポレイテッド チップの構成および高精度な核酸配列決定
ES2779699T3 (es) 2012-06-20 2020-08-18 Univ Columbia Secuenciación de ácidos nucleicos mediante detección en nanoporos de moléculas de etiqueta
US9605309B2 (en) 2012-11-09 2017-03-28 Genia Technologies, Inc. Nucleic acid sequencing using tags
US9759711B2 (en) 2013-02-05 2017-09-12 Genia Technologies, Inc. Nanopore arrays
US10732183B2 (en) 2013-03-15 2020-08-04 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for detecting multiple predetermined compounds in a sample
CA2919268C (en) 2013-07-25 2023-09-05 Exicure, Inc. Spherical nucleic acid-based constructs as immunostimulatory agents for prophylactic and therapeutic use
US9551697B2 (en) 2013-10-17 2017-01-24 Genia Technologies, Inc. Non-faradaic, capacitively coupled measurement in a nanopore cell array
EP3060918B1 (en) 2013-10-23 2019-09-18 Genia Technologies, Inc. High speed molecular sensing with nanopores
US9567630B2 (en) 2013-10-23 2017-02-14 Genia Technologies, Inc. Methods for forming lipid bilayers on biochips
US10240195B2 (en) 2014-03-24 2019-03-26 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Chemical methods for producing tagged nucleotides
AU2015269412B2 (en) 2014-06-04 2020-03-12 Exicure Operating Company Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications
BR112017007012A2 (pt) 2014-10-06 2018-03-06 Exicure Inc compostos anti-tnf
WO2016081911A2 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Northwestern University The sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates
US10078092B2 (en) 2015-03-18 2018-09-18 Northwestern University Assays for measuring binding kinetics and binding capacity of acceptors for lipophilic or amphiphilic molecules
CA3023451A1 (en) 2016-05-06 2017-11-09 Exicure, Inc. Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs presenting antisense oligonucleotides (aso) for specific knockdown of interleukin 17 receptor mrna
WO2018039629A2 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Northwestern University Micellar spherical nucleic acids from thermoresponsive, traceless templates
WO2018132685A1 (en) * 2017-01-12 2018-07-19 Nanotech Biomachines, Inc. Quantitative measurement of membrane protein function on a biosensor
WO2018201090A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Exicure, Inc. Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties
CN111100789B (zh) * 2018-12-24 2023-08-11 天津大学 一种基于特超声声孔效应的磷脂膜开孔系统及方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5192507A (en) * 1987-06-05 1993-03-09 Arthur D. Little, Inc. Receptor-based biosensors
JP2682859B2 (ja) * 1987-07-27 1997-11-26 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼーション レセプター膜
DE68926118T2 (de) * 1988-08-18 1996-08-22 Australian Membrane And Biotechnology Research Institute Ltd. Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization, North Ryde, Neusuedwales Verbesserungen an der empfindlichkeit und der selektivität von ionenkanalmembranbiosensoren
IL93020A (en) * 1990-01-09 1995-06-29 Yeda Res & Dev Biosensors comprising a lipid bilayer doped with ion channels anchored to a recording electrode by bridging molecules
DE69232641T2 (de) * 1991-03-27 2003-02-20 Ambri Ltd., Chatswood Ionisches reservoir an der oberfläche einer elektrode

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009229344A (ja) * 2008-03-25 2009-10-08 Tokyo Institute Of Technology 匂いセンサ用感応膜および匂いセンサ素子
JP2016125946A (ja) * 2015-01-06 2016-07-11 国立大学法人神戸大学 ナノギャップ構造型基板

Also Published As

Publication number Publication date
DE69305160D1 (de) 1996-11-07
EP0637384A1 (en) 1995-02-08
EP0637384B1 (en) 1996-10-02
WO1993021528A1 (en) 1993-10-28
US5756355A (en) 1998-05-26
DE69305160T2 (de) 1997-04-30
ATE143730T1 (de) 1996-10-15

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