JPH07509012A - 合成メラニン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本出願は、１９９１年３月２５日に出願され現在ベンディングとなっている特許 出願第６７４．４８９号の部分継続出願である。この第６７４．４８９号は、１ ９９０年１０月２５日に出願され現在ベンディングとなっている特許出願第６０ ３，１１１号の継続出願である。こ（７）第６０３，１１１号は、１９９０年５ 月１０日に出願され現在ベンディングとなっている特許出願第５２５．９４４号 の継続出願である。

発明の分野 本出願は、可溶性形態のメラニンおよびその組成物の合成、ならびに哺乳動物の 皮膚および髪に自然の日焼は色を与えてサンスクリーンを提供するため、低色素 沈着（ｈｙｐｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を治療するため、ガラスやプラスチ ックを着色するため、食物や飲料を着色するため、および工業材料を紫外線によ る損傷がら守るために該組成物を用いる方法に関する。

背景情報 動物・植物相中では、メラニンはＬ−ドーパとその酵素的誘導体からなるヘテロ ポリマーである。これらヘテロポリマーは生体中の至る所にあり、動物および植 物分類上のあらゆる門で産生されている。哺乳動物の皮膚では、メラニンは「メ ラノサイトＪとして知られている特別な細胞中で酵素的過程をへて産生される。

メラニンは哺乳動物の皮膚と髪の色素である。

哺乳動物のメラニンは高度に不溶性で、強いアルカリ中で煮るなどの非生理学的 処理によるか、または過酸化水素等の強力な酸化剤の使用によってのみ、溶解（ 可溶化）が可能である。メラニン生合成経路の鍵酵素であるチロシナーゼは、Ｌ −チロシン、Ｌ−ドーパまたは５．６−ジヒドロキシインドールを基質として用 いる試験管内でのメラニン形成を触媒できる。しかし、ここでの生成物は上記の 不溶性沈殿物である。

Ｉｔｏ、　”ＲｅｅｘａｍｉｎａＬｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ 　ｏｆ　Ｅｕｍｅｌａｎｉｎ″、　Ｂｉｏｃｈｉｉｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙ ｓｉｃａ　Ａｃｔａ　、　８８３　、１５５−１６１．１９８６は、天然のメラ ニンは５．６−ジヒドロキシインドールと５．６−シヒドロキシインドールー２ −カルボン酸のポリマーであるかもしれないと述べている。しかし、ｌｔｏはこ れらの化学物質を結合してメラニンを形成することは教示または示唆していない 。

ＩｔｏおよびＮｊｃｏｌ、　”ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｌｉｇｉｍｅｒｓ 　ｏｆ　５，６−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｉｎｄｏｌｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｊｃ 　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｅｙｅ　ｏｆ　Ｃａｔｆｉｓｈ″、　Ｂｉｏｃ ｈｅｍｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　、　１４３　、２０７−２１７．１９７４． は５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸のオリシマー（ｏｌｉｇｉ ｍｅｒ）が天然に、例えば海ナマズ（Ａｒｉｕｓ　ｆｅｌｉｓ）のタベータム（ ｔａｐｅｔｕｍ　１ｕｃｉｄｕＩＤ）に存在すると述べている。しかし、Ｉｔｏ およびＮ１ｃｏｌは、これらの構造物が可溶性メラニンの一形態として使用し得 るであろうことは教示または示唆していない。

Ｐａｌｕｍｂｏ、　ｄ’１ｓｃｈｉａ、　ＭｉｓｕｒａｃａおよびＰｒｏｔａ、 　”Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｍｅｔａｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ　、　９２５ ．２０３−２０９．１９８７は、ドーパクロムの生理的ｐＨ値における非脱炭酸 転位が、もっばら５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸の形成に帰 着すると述べている。

色素で着色された組織における公知の金属蓄積を考えると、彼らの得た結果は、 メラニンの生合成に関与する調節メカニズムへの新しい入口を提供する、と彼ら は示唆している。しかし、ＰａｌｕｍｂＯらは、そのような金属イオンを可溶性 メラニンの色または形成に影響を及ぼすように使用し得るであろうことは教示ま たは示唆していない。同じ様に、Ｌｅｏｎａｒｄ、　ＴｏｗｎｓｅｎｄおよびＫ ｉｎｇ、　”Ｐｕｎｃｔｔｏｎ　ｏｆ　Ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ　０ｘｉｄｏｒｅ ｄｕｃｔａｓｅ　ａｎｄ　Ｍｅｔａｌ　Ｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ 　Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｅｕｍｅｌａｎｉｎ　Ｐａｔｈｗａｙ″、　Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２７．６１５６−６１５９．１９８８も、金属イオ ン、およびドーパクロムからの５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン 酸の形成に関し、Ｐａｌｕｍｂｏらと同様の結果を示している。Ｐａｌｕｍｂｏ らと同様Ｌｅｏｎａｒｄらも、このような金属イオンが、可溶性メラニン形成に おいて色に影響を与えるように使用し得るであろうことを教示または示唆してい ない。

ＫｏｒｎｅｒおよびＰａｗｅｌｅｋ、Ｊ、Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｄｅｒｍａｔｏｌ　 、　７５．１９２−１９５．１９８０は、メラノサイト中にドーパクロムの５． ６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸への転化を触媒する酵素活性であ る「ドーパクロム転化因子」が存在すると報告している。Ｐａｗｅｌｅｋ、Ｂｉ ｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、、　１６６、１３２８ −１３３３．１９９０は、この転化反応が異性化であり、またドーパクロム転化 因子が異性化酵素であることを示した。Ａｒｏｃａ、　Ｇａｒｃｉａ−Ｂｏｒｒ ｏｎ、　５ｏｌａｎｏおよびＬｏｚａｎｏ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙ ｓ、　Ｒｅｓ、　Ａｃｔａ　、　１０３５．２６６−２７５．１９９０は、その メカニズムは実際互変異性的変換を含む異性化であることを示唆し、またその酵 素を正式な酵素委員会の番号であるＥ。

Ｃ，５，３，２，３，とともに［ドーパクロムタウトメラーゼ」と名付けること を提案した。Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ、　Ｊａｃｋｓｏｎ、　Ｕｒａｂｅ、　Ｍｏｔ ａｇｕｅおよびＨｅａｒｉｎｇ、ＥＭＢＯＪ、、　（現在印刷中）　１９９２は 、ドーパクロムタウトメラーゼの遺伝子の同定について報告した。上記の情報は 、ＰａｗｅＩｅｋ、Ｐｉｇｍｅｎｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　、　４　、 ５３−６２．１９９１によって検討されている。

Ｗｏ　ｌ　ｆ　ｒａｍら（米国特許第４．９６８．４９７号）は、メラニン前駆 体またはメラニン前駆体様物質を含有する組成物を皮膚に塗布することによる日 焼けを開示している。彼らは、天然のものであれ合成のものであれ、メラニンを 皮膚に塗布すると皮膚が日焼けに似た状態になることを教示または特許請求して いない。むしろ、彼らはこのようなメラニンは「水で洗うかタオルで擦るとすぐ に落ちる、ただみかけだけの外面の日焼け」を達成すると教示している。

）１ｅｒｌｉｈｙ　（米国特許第４．５１５．７７３号）は、化粧基材にメラニ ン前駆体とチロシナーゼ酵素を含有する皮膚を日焼けさせる組成物を開示してい る。しかし、彼は天然のものであれ合成のものであれ、メラニンを皮膚に塗布す ることを教示または特許請求していない。

Ｇａ５ｋｉｎ　（米国特許第４．８０６．３４４号）は、成分の１つとして「メ ラニン」を含有する日焼は保護組成物を開示している。Ｇａ５ｋｉｎはさらにこ のメラニンは「チロシナーゼとＤＯＰＡより合成される」と開示している。彼女 は、このようなメラニンが非酵素的に合成されること、またはそのメラニンが、 ポリマーに負または正の負荷を付与してそれを水溶液中で可溶性にする前駆体か らなっていること、を教示または示唆していない。

メラニンにおける赤または黄色の色を決定するにあたってのスルフヒドリル化合 物（例えばシスティンまたはグルタチオン）の役割を調べた多くのレポートが存 在する（Ｐｒｏｔａ、　ｄ’１ｓｃｈ、ＩａおよびＮａｐｏｌｉｔａｎｏによる 検討”Ｔｈｅ　Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｒｏｌｅ　ｏｆ　５ｕｌｆｈｙｄｒｙｌ 　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　Ｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ”、　Ｐｉｇｍｅｎ ｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　１　、４８−５３ ．１９８８参照）。しかし、これらのレポートは、該スルフヒドリル化合物を、 合成可溶性メラニンの色に影響を及ぼすように使用し得るだろうとは教示または 示唆していない。

異なる溶解度、分子サイズ、および色特性を備えた種々の合成メラニンをもつこ とは商業的に価値があるであろう。つまり、予測可能な色と物理化学的特性を備 えた種々のメラニンを、合成反応条件の特定の変更によって生産できることは有 用であろう。例えば、中性ｐＨでは水性溶媒（例えば、スキンクリームやローシ ョンに使われているものなど）に可溶性で、酸性ｐＨでは有機溶媒（例えば、油 を主成分とする塗料に使われているものなど）に可溶性のメラニンを生産するこ とは価値があるであろう。

このようなメラニンは、哺乳動物の皮膚と髪に、自然の日焼は色を与えることが できよう。このようなメラニンはまたサンスクリーンとしても効果的であろう。

なぜならメラニンは紫外線を吸収して、その悪影響（例えば早すぎる皮膚の老化 や皮膚ガンの発生）からの保護を提供する皮膚中の化学物質だからである。

このようなメラニンは、湿疹、にきび、外傷、火傷および乾癖による炎症後の低 色素沈着を治療するのに効果的であろう。また、白斑や他の低色素沈着による障 害を隠すにも、可溶性メラニンは非常に効果的であろう。

メラニンは紫外から可視スペクトルに至まで光線を吸収するので、眼鏡、コンタ クトレンズ、車の窓、家の窓、オフィスビル等のガラスやプラスチックの着色剤 としても効果的であろう。メラニンは褐色、赤褐色、および全褐色を示すので、 ビール、茶、コーヒー、ポテトチップ、等の食品または飲料用着色剤としても効 果的であろう。

同様に、紫外線領域を吸収することによって、このようなメラニンは紫外線によ る損傷から工業材料を守る効果的な作用物質である。「工業材料」または「工業 製品」という用語は、例えばトラックや乗用車のタイヤ、塗料、積層材料、プラ スチック、合成樹脂、繊維（特にナイロンを含有する繊維）、および類似の材料 または製品を意味する。塗料、木材、プラスチックおよびゴムの劣化速度が、紫 外線にさらすことによって劇的に増大することは周知である。

１９９１年３月２５日に出願され現在ベンディングとなっている特許出願第６７ ４．４８９号、ならびにその親出願である１９９０年１０月２５日に出願され現 在ベンディングとなっている特許出願第６０３，１１１号および１９９０年５月 １８日に出願され現在ベンディングとなっている特許出願第５２５．９４４号に おいて、新規な可溶性メラニンとその生産方法が開示されている。

そのような生産方法の１つは、ドーパクロムと、現在ドーパクロムタウトメラー ゼとして知られている、色素系を有する生物細胞または組織から誘導した、少な くとも１つの酵素との反応を含む。５．６−ジヒドロキシインドール、インドー ル−５，６−キノンおよび／またはメラノクロムも存在していると好都合である 。

もし５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸が反応系に含まれている ならば、ドーパクロムとドーパクロムタウトメラーゼは存在しなくてもよい。そ れでも可溶性メラニンは生産される。

得られる可溶性メラニンは性能面で非常に満足すべきものであるが１．広いｐＨ 範囲にわたるとその可溶性にはある限界がある。

さらに、可溶性メラニンの色はその範囲が幾分制限されている。

発明の要旨 したがって、本発明の目的はさらなる合成形態の、生理的ｐＨおよび温度におい て可溶性のメラニンを提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンのスペクトル特性を変更するための組 成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンの可溶性特性を変更し、有機溶媒また は水性溶媒のどちらにもすぐに解けるようにするための組成物と方法を提供する ことである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンの哺乳動物の皮膚および髪への付着性 を高めるための組成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンを哺乳動物の皮膚および髪に塗布して 自然の日焼は色を与えるための組成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンを哺乳動物の皮膚および髪に塗布して サンスクリーンを与えるための組成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンを皮膚に塗布して低色素沈着を治療す る組成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンをガラスおよびプラスチックに適用し て色をつけるための組成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、このようなメラニンを工業製品に塗布して紫外線に対する 保護を与えるための組成物と方法を提供することである。

本発明の別の目的は、コーヒー、茶、清涼飲料、ビール、ウィスキー、酒類、ポ テトチップ等の食品用の、可溶性メラニンに基づく着色剤を提供することである 。

本発明のさらに別の目的は、広いｐＨ範囲にわたって可溶性を保持する可溶性メ ラニンを提供することである。

本発明のさらに別の目的は、多数の可能な色を有する可溶性メラニンを提供する ことである。

上記および他の目的、意図、ならびに有利な点は、本発明によって満足させられ る。本発明は、ｐＨが最低５から９、好ましくは６．５から７．５で、温度が０ ℃から１００℃において、水性溶液（例えば水または水性緩衝液）に可溶性のメ ラニンに関する。

本発明はまた有機溶液（例えばブタノールまたはブトキシェタノール）に可溶性 のメラニンに関する。この可溶性メラニンは、最低０．４５ミクロンサイズのフ ィルターによって濾過され得ることにより、さらに特徴付けられる。このメラニ ンの中性ｐＨ近辺の水性溶液中での可溶性は、大部分豊富なカルボキシル基およ び／またはアミノ基によるものである。他方、有機溶液中におけるこのメラニン の可溶性は大部分酸性ｐＨでの該カルボキシル基のプロトン付加および／または 塩基性ｐＨでのアミノ基の脱プロトン化によるものである。

本発明はまた、反応混合物中でドーパクロム、ドーパクロムタウトメラーゼおよ び下記の式で表されるフェネチルアミンを混ぜ合わせることからなる合成メラニ ンの生産方法に関する；ここで ＸおよびＹはそれぞれ独立にＯＨまたはＮＨ２であり、ＲはＨまたはＣ０ＯＨで あり、 Ｒ，、Ｒ２およびＲ１はそれぞれ独立にＨ，ＮＣＬ　、ＣＨＯ，ＣＮ、ＯＲＩ　 、ハロゲン、ＮＲ５Ｒａ　、ｃｏｏＲ＋、ＳＲ，、ＯＰＯ，Ｈ，Ｏ２０，Ｈまた は０ＯＣＣＨ，であり、 そして Ｒ，、Ｒ，、Ｒ６、Ｒ，およびＲ８はそれぞれ独立にＨまたはアルキル、好まし くは炭素数が１から４の低級アルキルである。

好ましいフェネチルアミンは、生成するメラニンに赤みががった金色の色合いを 与える３−アミノ−チロシンである。

５．６−ジヒドロキシインドールおよび／または３−アミノーチロシンをドーパ クロムおよび酵素ドーパクロムタウトメラーゼに加えてもよいし、または該酵素 を加える前にドーパクロムに自然に５．６−ジヒドロキシインドールを形成させ てもよい。または、反応混合物が５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボ ン酸を単独で、あるいは５．６−ジヒドロキシインドールおよび／または３−ア ミノ−チロシンとの混合物として含有してもよく、または反応混合物が５．６− ジヒドロキシインドールを３−アミノ−チロシンと組み合わせて含有してもよい 。これらの場合、酵素は不要で、酸素の存在下で反応が起こる。反応速度は、過 酸化水素および／または金属イオンの塩（例えば、Ｃｕ”またはＦｅ２′″の塩 ）を加えることによって大幅に加速される。

適切な５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸は下記の式のもので、 特に５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸、すなわちここてＸおよ びＹがＯＨで、Ｒ１およびＲ２が水素である化合物である。

可溶性メラニンの色は、反応混合物の内容を変えることにより黒、褐色、赤、お よび黄の間で変えることが可能である。例えば、スルフヒドリル含有化合物また は種々の金属（例えばｃＵ　！　＋、Ｎｉ２＋およびＣｏ”を含むがこれらだけ に限定されない）を加えるか、または反応混合物のｐＨを変えることにより可能 である。

水性溶液中におけるこのメラニンの可溶性の基礎は、分子中に多量に存在するカ ルボキシル基に起因し、該カルボキシル基は５．６−シヒドロキシインドールー ２−カルボン酸前駆体の一部として組込まれている。３−アミノ−チロシンまた は類似化合物がメラニンに組込まれると、このメラニンの可溶性の基礎は分子中 に多量に存在するアミノ基にも起因することになり、該アミノ基は３−アミノ− チロシン前駆体の一部として組込まれている。５．６−シヒドロキシインドール ー２−カルボン酸または３−アミノ−チロシンに類似の化合物であれば、それら に代って該カルボキシル基またはアミノ基を提供することができ、そしてそれ故 可溶性メラニンの前駆体の働きをすることができるであろう。

発明の詳細な説明 本発明のメラニンは、中性ｐＨにおいて（例えばｐＨ５〜９、好ましくは６，５ 〜７．５）長期間、例えば無期限に、温度０’Ｃから１００℃で（例えば室温で ）水溶液中にとどまる。本発明によるメラニンは、凍結／融解しても可溶性のま まであることによってさらに特徴付けられる。この本発明のメラニンは、最低０ ゜４５ミクロンサイズのフィルターによって濾過することができるという特徴を 有する。本発明のメラニンは、ｐＨ４より下で沈殿させることができる。

合成後、メラニンは分子量が約１Ｏ１０００未満の分子の通過を許す半透膜によ っては透析できない。したがって、本発明のメラニンは分子量が１０．０００よ り大きい。しかし、これはメラニンの有用性にとって不可欠な特徴ではない。こ のメラニンは凍結乾燥して乾燥粉末形態にし、次に蒸留水または適切な水性溶媒 （例えばリン酸ナトリウム０．１Ｍまたは塩化ナトリウム０．　１Ｍ）を用いて 可溶性形態に戻すことが可能である。酸性ｐＨでの沈殿の後でも、メラニンはブ タノールまたは２−ブトキシェタノールなどの有機溶媒中で可溶性形態に戻すこ とができる。

本発明のメラニンは非酵素的（合成的）にも、または酵素的にも調製することが できる。

本発明による酵素的調製は、反応混合物中で基質すなわちドーパクロムと、ドー パクロムの５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸（ＤＨＩ　ＣＡ） への互変異性化を触媒するドーパクロムトートメラーゼ（Ｅ、　（、５，３，２ ，３）を混ぜ合わせることからなる。

本発明による非酵素的調製においては、反応混合物は基質としてのＤＨＩＣＡを 単独で、またはＤＨＩＣＡ、５．６−ジヒドロキシインドールおよび／または３ −アミノ−チロシンの混合物として含有する。ＤＨＩＣＡの適切な類似体、すな わちカルボキシル基またはアミノ基を有する類似の構造物、を反応中に代わりに 使用することができる。同様に、他の電気的に負荷された部分（例えば、リン酸 基）を有する類似の構造物を反応中に代わりに使用することができる。このよう な構造物の例は、３′−および／または４−−フォスフォリルフェニルアラニン （ドーパフォスフェート）である。酵素的または非酵素的反応混合物は、さらに 基質としてインドール−５，６−キノンおよび／またはメラノクロムを含有する ことができる。金属イオンおよびスルフヒドリル含有化合物を含有することもで きる。

基質の個々の成分は、酵素的調製におけるようにそれが１つの成分、すなわちド ーパクロムであろうと、または非酵素的調製におけるように１つ以上の成分であ ろうと、０．Ｏｌから５．　０ミリモルの量であることが好ましいが、必ずしも この濃度範囲に制限されない。

反応混合物中における基質と酵素、または酵素なしの前駆体の混合は、好ましく は１５℃から９０℃の間で行われる。

酵素的調製および非酵素的調製の両方において、酸素（例えば空気または純粋な 酸素）が存在することが望ましい。これは非酵素的調製について特にそう言える 。

（本貫以下余白） 上記の幾つかの化合物群の構造式およびそれらの関係を以下に表す。

ロイコドーパクロム　ドーパクロム 式図１１ 成因Ｉより、ドーパキノン、ロイコドーパクロム、ドーパクロム、ＤＨＩＣＡ　 、５．６−シヒドロキシインドール、インドール−５，６−キノン、およびメラ ノクロムはすべてドーパの誘導体であることがわかる。ドーパ自体はチロシンの 誘導体であるので、上記の化合物群もまたチロシンの誘導体である。

成因ＩＩはドーパクロムが自然に起こる非酵素的反応において、５．６−シヒド ロキシインドールを生じうるか、または酵素的触媒反応においてＤＨＩＣＡを生 じうろことを示している。ドーパクロムはまた金属触媒反応においてＤＩＩＩＣ Ａを生じうる（図示せず）。ドーパクロムをＤＨｒＣＡに触媒する酵素はドーパ クロムタウトメラーゼと命名されている。この酵素はまたチロシナーゼ、ドーパ クロムタウトメラーゼ、グリコプロティン７５、ＭＳＨレセプター、リソシーム −関連膜蛋白−１、および他の公知でない蛋白を含む複合体の一部でもある。

上記の酵素は以下の文献に記載されている。

チロシナーゼ：　Ａｎｎ　Ｋｏｒｎｅｒ　ａｎｄ　Ｊｏｈｎ　Ｐａｗｅｌｅｋ、 “Ｍａｍｍａｌｉａｎ　Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ　Ｃａｔａｌｙｚｅｓ　Ｔｈｒｅ ｅ　Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆドー パクロムタウトメラーゼ：　Ｊｏｈｎ　Ｐａｗｅｌｅｋ、Ａｆｔｅｒ　Ｄｏｐａ ｃｈｒｏｍｅ７”、Ｐｉｇｍｅｎｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　４　：５ ３−６２．１９９１；グリコプロティン７５　：　Ｔｈｉｍｏｔｈｙ　Ｍ、　Ｔ ｈｏｍｓｏｎ、　Ｍ、　Ｊｕｌｅｓ　Ｍａｔｔｅｓ、　Ｌｉｎｄａ　Ｒｏｕｘ、 　Ｌｌｏｙｄ　Ｏｌｄ　ａｎｄ　Ｋｅｎｎｅｔｈ　Ｏ，Ｌｌｏｙｄ、　”Ｐｉｇ ｍｅｎｔａｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ 　Ｈｕｍａｎ　Ｍｅｌａｎｏｍａｓ　ａｎｄ　Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ：　Ｄｅ ｆｉｎｉｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ａ　Ｍｏｕｓｅ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔ ｉｂｏｄｙ”、Ｊ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｄｅｍｍ、、　８５　：　１６９−１７ ４．１９８５；ＭＳＨレセプター：　５ｅｔｈ　Ｊ、　Ｏｒｌｏｗ、　５ａｒａ 　Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ、　ａｎｄ　ＪｏｈｎＭ、　Ｐａｗｅｌｅｋ、１ｎｔｅｒ ｎａｌ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　５ｉｔｅｓ　ｆｏｒ　ＭＳＨ：　Ａｎａｌｙｓｅｓ　 １ｎＷｉｌｄ　Ｔｙｐｅ　ａｎｄ　Ｖａｒｉａｎｔ　Ｃｌｏｕｄｍａｎ　Ｍｅｌ ａｎｏｍａ　Ｃｅ１ｌｓ：、Ｊ、　Ｃｅｌｌｕｌ本発明によるメラニンは生理学 的に許容できる担体と混合して上述した用途を有する組成物を形成することがで きる。

本発明の実施において有用な生理学的に許容できる担体は当分野で公知のもので あり、そのような担体には、制御放出のためのカルボキシメチレンコポリマー； 経皮放出のためのアクリルアミド；局所施用のための化粧基材等が含まれるが、 これらの例示に限定されない。

さらに、所望するなら、本態様による組成物は溶剤、香料、サンスクリーン剤、 保存剤、およびキレート剤からなる群から選択された少なくとも一つの添加剤を 含む。

本発明の実施において有用な化粧基材はよく知られてものであり、ローション、 クリーム、軟膏、口紅、頬紅、カバーアップ、ファウンデーション、およびダス ティングパウダーが含まれる。

これらの例としては、例えば米国特許番号４．２２８．１５１　：４．２８２． ２０６および２．９４９．４０３号に開示される。

本発明の組成物を、ガラス、プラスチック用着色剤として、または例えばＵＶ分 解に対する保護のための工業製品用保護剤として使用する場合、本発明の組成物 はガラスもしくはプラスチックまたは工業製品に混合されるだろう。その可溶性 のおかげで、本発明の組成物はガラスもしくはプラスチックまたは工業製品に容 易に混合される。そのような用途に対しては、担体、希釈剤等は生理学的に許容 できるものである必要はないだろう。そのような用途に対し池の常套的な薬剤も またそこに組み込むことが出来る。

本発明の用途に適した溶剤には、例えばエタノール、イソプロピルアルコール、 ベンジルアルコール、グランドナツツオイル等のオイル、蒸留および／または脱 イオン水、生理食塩水等が含まれる。適用方法に従って特定の溶剤を選択すれば よいだろう。

本発明の組成物は局所施用に使用する場合、保存剤を入れることもまた望ましい 。本発明の組成物の好ましい投与形態は局所投与である。さらに、本発明のメラ ニンは、低レベルのＵＶ照射光下において色素形成系を刺激する物質と併用する こともできる。

保存剤はよく知られたものであり、メチルパラベン、“ＤＯＷＡＣＩＬ　２００ ０”およびプロピルパラベンが例示される。

所望するならば、本発明の組成物の酸性度または塩基性度を減らすために、当分 野の知識に従って塩基、酸、あるいは緩衝液を添加することもできる。

エアゾール、クリーム、ローション、または他の組成物中のメラニンの濃度は、 好ましくは１．　Ｏｎ＋ｇ／＋ｎｌから１００ｍｇ／ｍｌであるが、この濃度範 囲に限定されない。

溶液はそれに溶解させる発色団の濃度によって異なった色を呈する。例えば濃い 赤色溶液は、より多量の溶剤で希釈し、発色団を追加しなければオレンジやピン クになる。可溶性メラニンの場合、かなりの高濃度、例えば０．５ｍｇ／ｍｌで 水に溶解させたとき、黒褐色を呈する。可溶性メラニンの濃度を、例えばＯ，１ ｍｇ／＋ｎｌに減らすように水を加えれば溶液は黄金色になる。木材の希釈によ って、吸収スペクトルには何らのシフトをもたらすものではなく、むしろ視覚的 な認知と考えられる。

非酵素的調製に対しては、５．６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸、 ５．６−ジヒドロキシインドール、および３−アミノ−チロシンは例えばヒト等 の哺乳動物の皮膚上で一緒混合されるまで、例えばミクロスフェア−内、または 別々のチューブや容器中で個別に維持する。

該メラニンは、市販のジヒドロキシアセトン（Ｄ）ＩＡ）の調製品、例えばＬａ ｎｃｏｍｅ’　ｓ　Ｃｏｎｑｕｅ　ｌｅ　ｄｕ　Ｓｏｌ　ｏｉｌ’と単に混合す ることによって数日間で皮膚に固着され、水や石鹸に対して耐性となる。

ＤＨＡは明らかにメラニンと種々のファクター、例えば皮膚中の蛋白とを共有結 合させる架橋剤として作用する。他の架橋剤も同じかあるいはそれ以上の結果を 達成できる可能性がある。ＤＨＡと共に処理するさらなる長所は、そのような処 理によってメラニンのスペクトル特性を変化させ、Ｕｖあるいは可視スペクトル を通して一定した吸光度を与える。メラニンと無水酢酸の処理もまたメラニンの スペクトル特性を変化させる。

図面の簡単な説明 第１図は、ドーパクロムの代謝に対する２つの経路の図式を表す。

第２Ａ−Ｃ図は、リン酸ナトリウム緩衝液（０，１Ｍ、　ｐＨ７，８，２０℃） 中で酸素添加しながらインキュベートしたＤＨＩＣＡ（５ｍＭ）の種々の時間に おけるスペクトル分析を示すグラフを表したものであり、ドーパクロムタウトメ ラーゼ反応（酵素子ドーパクロム５ｍＭのインキュベーション）（第２Ｄ図）と 比較したものである。

第３図は各ｐＨ条件下におけるＤＨＩＣＡ単独（・−・）、またはＤＨＩＣＡ　 ＋ＤＨ＋　（○□○）のインキュベーションによるメラニンの形成を示すグラフ を表す。

第４図はＤＨＩＣＡ−メラニンのスペクトルに対する通気量の影響を示すグラフ を表す。

第５図はｐＨの一機能としてＤＩＩＩＣＡ−メラニンの溶解性を示すグラフを表 す。

第６図はＨＰＬＣモレキュラーシーブカラム上でのＤＨＩＣＡ−メラニンのクロ マトグラフィーを示すグラフを表す。

第７図はＤＨＩＣＡ（１０％）および３−アミノ−チロシン（９（１％）の混合 物からなる可溶性メラニンのスペクトル特性を示すグラフを表す。

（本頁以下余白） 図面の簡単な説明 さて、図面についてより具体的に言及する；第１図は、ドーパクロムの代謝の二 つの経路を図式化して表したものである。試験管中ではドーパクロムは自然にジ ヒドロキシインドール（ＤＨＩ）に転化し、そのプロセス中にそのカルボキシル 基は消失する。しかしながら、酵素ドーパクロムタウトメラーゼが存在する場合 、ドーパクロムは５，６−シヒドロキシインドールー２−カルボン酸（ＤＨＩＣ Ａ）に転化する。

第２Ａ−Ｃ図は、リン酸ナトリウム緩衝液（０，１Ｍ、　ｐＨ７，８，２０°Ｃ ）中で酸素添加しながらインキュベートしたＤＨＩ　ＣＡ（５ｍＭ）の種々の時 間におけるスペクトル分析を示すグラフを表したものであり、ドーパクロムタウ トメラーゼ反応（酵素子ドーパクロム５ｍＭのインキュベート）の生成物のスペ クトル分析のグラフ（２Ｄ）と比較したものである（Ａ＝１５分、Ｂ＝４８時間 ；Ｃ＝９６時間）。非酵素的に合成された“ＤＨＩＣＡ−メラニン”　（第２Ｃ 図）は、酵素的に合成されたメラニンのスペクトル（第２Ｄ図）と同様のスペク トルを表すと考えられる。

また、それらのグラフは、メラニンが紫外及び可視領域の光線を吸収するという ことも示している。したがって、メラニンはサンスクリーン及びＵＶ保護剤とし ての効能に対する必須条件を満たす。

第３図は、種々のｐＨにおけるＤＨＩＣＡ単独（・−・）又はＤＨＩ　Ｃ，Ａ＋ ＤＨＩ　（○−○）をインキュベートすることによるメラニンの生成を示すグラ フを表したものである。

それらの化合物を、ｐＨ５（酢酸ナトリウムＯ，１Ｍ）　、ｐＨ６（すン酸ナト リウム０．１Ｍ）及びｐＨ７（リン酸ナトリウム０．１Ｍ）において５ｍＭの濃 度で酸素添加しながらインキュベートして、アリコートの光学濃度（１：５０希 釈）を２４時間にわたって測定した。ＤＨＩ単独の場合の結果は示していない。

というのは、この物質がスペクトル分析により正確に定量できない沈殿物を生じ るためである。ＤＨＩＣＡ及びＤＨＩをいっしょにインキュベートした場合には 、可溶性メラニンの生成速度及び生成炭がり、ＨＩ　ＣＡ単独の場合よりも著し く増大した。これは、ＤＨＩＣＡ及びＤＨＩの優先共重合を示している（メラニ ンの濾過前及び濾過後のこれらのデータの定量値についての第１表参照）。これ らの結果はその共重合反応がｐＨが上昇するにつれて増大するということを証明 している。より有利には、３−アミノ−チロシンを該反応に含めることができ、 ＤＨＩＣＡ及び／又はＤＨＩと共重合させ得る。

第１表は、濾過前と０．２２　ミクロンのフィルターを通して濾過した後のメラ ニンの定量値を表す。結果は、ｐＨ７における第３図に示した同様の実験から得 られたものである。

第１表：ＤＨＩＣＡ及び／又はＤＨＩから合成したメラニンの濾過９ 前駆体　光学濃度（４５０μ） −濾過　＋濾過 ＤＨＩ　ＣＡ　、３４１　．３５１ ＤＨＩ　、２８５　．０３５ ＤＨＩＣＡ＋ＤＨＩ　１．１９０　．９９９＊ＤＨＩ　（５ｍＭ）及びＤＨＩＣ Ａ（５ｍＭ）を、別々に又はいっしょに、ｐＨ７のＯ，１Ｍリン酸ナトリウム中 で室温で２４時間、勢いよく混合した。アリコートを濾過し、試料を水で１：２ ０に希釈して、光学濃度を分光光度計で測定した。

第４図は、ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンのスペクトルにおける通気の効果を表してい る。ＤＨＩ　ＣＡ　（５ｍＭ）をリン酸ナトリウム緩衝液（０，１Ｍ、　ｐＨ７ ，８）中で、部分嫌気（脱気した緩衝液、栓をしたフラスコ）及び通気（通気し た緩衝液、開口フラスコ）条件下、室温でインキュベートすることによりＤＨＩ 　ＣＡ−メラニンを合成した。７２時間勢いよく混合した後、スペクトル分析し た。通気／嫌気スペクトルの割合を示す。その結果、ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンの 合成は、通気により増大し、通気の効果は不均一であり、可視光線領域（３００ ｎｍ以上）において最も明白であった。

第５図は、ｐＨの作用としてＤＨＩ　ＣＡ−メラニンの可溶性を表す。ＤＨＩ　 ＣＡ−メラニン（○□○）又はモデルのペプチドｇｌｕ：ｔｙｒ　（・□・）　 （Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、チロシンに対するグルタミン酸の割 合が１＝１、平均分子量が２０．０００ないしｓｏ、　ｏｏｏダルトンからなる ）を０．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液に溶解して、１（ＣＩを用いてｐＨを分 離アリコート中で調節した。

室温で２時間後、前記アリコートを遠心分離しく１０００　ｇ、１０分）、上清 部分の光学濃度を分光光度計において波長２８０ｎｍで測定した。その結果から ＤＨＩ　ＣＡ−メラニン及びｇｌｕ：ｔｙｒペプチドの両方とも中性ｐＨ付近（ ｐＨ６−８）で可溶性であり、酸性ｐＨて沈殿するということがわかる。ＤＨＩ 　ＣＡ−メラニン及びｇｌｕ：ｔｙｒペプチドとの間のこれらの類似点は、カル ボン酸残基に共通する表れと一致する。ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンが酸性ｐＨで沈 殿する場合、それらはブタノール又はブトキシェタノールなどの有機溶媒に容易 に溶解し得る。

第６図はＨＰＬＣモレキュラーシーブカラム上のＤＨＩ　ＣＡ−メラニンのクロ マトグラフィーを表す。開口フラスコを用いて、ＤＨＩＣＡ（５ｍＭ）をリン酸 ナトリウム（０，１Ｍ、　ｐＨ７，８）中で９６時間勢いよく振とうしながらイ ンキュベートすることによりＤＨＩＣＡ−メラニンを合成した。その材料をＷａ ｔｅｒｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ＰＡＫ　３００　ＳＷカラムに注いだ。その移動度 は分子量約２０゜ＯＯＯないし７０．０００の公知の球状タンパク質の移動度に 似ていた。

その結果、上記の合成条件下においては分子量２０．０００−７０．０００ダル トンの範囲のＤＨＩＣＡ−メラニンが生成するということがわかる。しかしなが ら、合成条件によって分子量は変動するということに注意する必要がある；ある 実験においては材料がＨＰＬＣカラムの隙間に溶出したが、これは分子量２００ ．０００ダルトン以上のものに相当した。また、ＨＰＬＣカラムは球状タンパク 質に対して較正した。ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンの二次及び三次構造を決定しなけ ればならないので、分子量値は概算値にすぎない。

第２表は透析及び濾過後のＤＨＩ　ＣＡ十ＤＨＩの回収を表す。

メラニンは、１２．０００〜１４．０００ダルトンの排除限界を持つ透析チュー ブ内に残って、０．２２ミクロンのフィルターを通過した。また、メラニンは、 冷凍／解凍、沸騰に対して安定であり、凍結乾燥後に定量的に再融解できるとい うことがわかった（示されていない）。

第２表＋　ＤＨＩ　ＣＡ／ＤＨＩ−メラニンの透析及び濾過“処理二　％　出発 原料 透析　濾過 ＋　−１０３±９ −　＋　１０１±１１ ＋　＋　１０２±８ ＊ＤＨＩ　ＣＡ及びＤＨＩを、０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７，４中で、１ ．２：１．０　（ＤＨＩＣＡ：ＤＨＩ）のモル比及び総前駆体濃度１０ｍＭで、 ２０℃で４８時時間−よく混合した。室温で約８週間保存した後、その材料のア リコートを標準透析チューブ（排除限界１２．０００ないし１４．０００ダルト ン）中で徹底的に透析及び／又は０．０２μフイルターを通して濾過した。透析 チューブ中に残った材料及び／又はフィルターを通過した材料を４５０ｎｍにお ける光学濃度を定量し、そのデータを出発原料についての％に標準化した。その 結果を２つの試料の平均上範囲で示す。

第７図は、ＤＨＩＣＡ（１０％）及び３−７　ミ／　−チｏ　シン（９０％）の 混合物からなる可溶性メラニンのスペクトル特性を表す。

かかるメラニンをそのグラフに示したようにジヒドロキシアセトン又は無水酢酸 で処理した。どちらの処理でも、該メラニンの吸光度がよりなめらかになったこ と、特に、約３４０ｎｍでの未処理のメラニンにみられるスペクトルのピークが 減少したことがわかる。ジヒドロキシアセトンを用いたメラニンの処理は、哺乳 類の皮膚へのメラニンの付着の増大に都合がよい。

本発明を以下の実施例について記載するが、本発明はこれらに限定されるもので はない。

実施例１：酵素源 ＤＨＩＣＡを含むメラニンの合成に使用する酵素は、ドーパクロムタウトメラー ゼ活性を示す生物源から得ることができる。

そのような活性はヒトを含む多数の哺乳類及び昆虫について記述されてきた（Ｐ ａｗｅｌｅｋ、Ｊ、Ｍ、　”Ａｆｔｅｒ　Ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ？”、　Ｐｉｇ ｍｅｎｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４：５３−６２．１９９１；　Ｓｕｇ ｕｍａｒａｎ、Ｍ、”ＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｆｏｒ　Ｍａ ｍｍａｌｉａｎ　Ｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔ ｈ　１ｎｓｅｃｔ　Ｃｕｔｉｃｕｌａｒ　５ｃｌｅｒｏｔｉｚａｔｉｏｎ”　Ｆ ＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　２９３：４−１０゜１９９１；　Ｌｉ、Ｊ、　ａｎｄ 　Ｎａｐｐｉ、Ａ、Ｊ、“Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉ ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ　Ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｉｎ　Ｄｒ ｏｓｏｐｈｉｌａ　Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ　”　。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、　１８０ニア２４ −７２９．１９９１）　ｏ昆虫においては酵素活性は、結局ＤＨＩＣＡよりもむ しろＤＨＩの生成に帰するのでＤＨＩ　ＣＡメラニンの生成には役に立たないと 推定される。これに対し、ドーパクロムタウトメラーゼ及びドーパクロムの混合 物の哺乳類反応生成物は多数研究の結果ＤＨＩＣＡであることが確認された（第 １図）。

（本頁以下余白） 実施例２：ＤＨＩＣＡ−メラニンの酵素的合成適当な反応容器内で、０，１Ｍリ ン酸ナトリウムの緩衝水溶液中、ｐＨ６，８，１５〜３７℃で、例えば、培養マ ウスメラノサイトの抽出物から得たドーパクロムタウトメラーゼの活性調製品を ５ｍＭドーパクロムと混合した。橙色のドーパクロムが１時間以内に無色のＤＨ ＩＣＡに互変異性化された。アンプル通気しながらさらにインキュベーションす ると（第４図）、ＤＨＩＣＡの自動重合によりＤＨＩＣＡ−メラニンが生成した （第２Ｄ図）。あるいは、ＤＨＩＣＡ　（５ｍＭ）をＤＨＩ　（５ｍＭ）、３− アミノ−チロシン（５ｍＭ）、またはシスティン（５ｍＭ）のいずれか一つ、ま たは、種々の組み合わせとともに通気しながらインキュベーションしたところ、 ＤＨＩ　ＣＡとともに重合してメラニンを生成した。さらに、タウトメラーゼ反 応によるＤＨＩＣＡの生成に続いて、過酸化水素（５０ｍＭ）および／またはＣ ｕ”＋やＦｅ＋＋のような金属イオン（１ｍＭ）を添加して反応速度を上げるこ とができ、それによりメラニン生成に要する時間を短縮することができた。Ｈｉ 　Ｏ！および／または金属イオンを上記のようなりＨＩＣＡおよび／またはＤＨ Ｉ　ＣＡとＤＨＩ、３−アミノ−チロシンまたはシスティンとの種々の組み合わ せとともに添加することもできる。このようにして製造したメラニンは、少なく とも０．４５ミクロンのフィルターに通すことができ（第１表および第２表）、 ｐＨ４以下で沈殿した（第５図）が、透析不能で（第２表）、分子量が少なくと も１０．０００ダルトンより太き（２０，０００〜７０．０００ダルトン（第６ 図）のオーダーにより近く、凍結、解凍および沸騰に対して安定であった。

実施例３二ＤＨＩＣＡ−メラニンの非酵素的合成りＨＩ　ＣＡ　（１０ｍＭ）を ０．２Ｍ水酸化アルミニウム中で通気しながら１５〜７０℃で７２時間インキュ ベーションした。

ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンをＤＨＩ　ＣＡの自動重合により生成した（第２Ａ−Ｃ 図）。実施例２に記載したような反応を早めるための他の適当な前駆体および手 順を用いることもできる。非酵素的に合成したメラニンの特性は酵素的に合成し たメラニン（実施例２）のものと同一であった。

実施例４：ＤＨＩＣＡ−メラニンのヒトの皮膚および毛髪への固着方法 ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンを、最終濃度１〜５％（ｗｔ／ｖｏｌ）となるように、 ジヒドロキシアセトン、例えば、Ｌａｎｃｏｍｅ’ｓ　ＣｏｎｑｕｅＩｅ　ｄｕ 　Ｓａｔ　ｏｉｌ”の市販品と混合し、所望の程度の暗色化が達成されるまで均 等に皮膚に塗った。このメラニンは皮膚に固着し、適当な濃度で、当業界に公知 のジヒドロキシアセトンの正味着色効果（ｎｅｔ　ｃｏＩｏｒｉｎｇ−ｅｆｆｅ ｃｔｓ）をマスクまたは変化させた。

次いで、同様の手順をメラニンの毛髪への固着について行うことができる。ある いは、ＤＨＡ　（５〜５０ｍＭ）を実施例２に記載した合成反応において添加す ることができ、このようにして製造したメラニンは皮膚および毛髪への固着性を 示した。

実施例５　：　ＤＨＩ　ＣＡ−メラニンのスペクトル特性を変化させる方法 実施例２に記載のように、好ましくは共重合した３−アミノ−チロシンモノマー を含むＤＨＩ　ＣＡ−メラニン（１０％ｗｔ／ｖｏｌ）を、等モルのジヒドロキ シアセトンと室温で、あるいは、等モルの無水酢酸と氷上で１時間混合した。ジ ヒドロキシアセトンまたは無水酢酸の量は、好ましくは等モル濃度であるが、所 望のスペクトル変化の程度に依存し、１０倍モル過剰となるように増加させるこ とができる（第７図）。

実施例６：有機溶媒への溶解性に対するＤＨＪＣＡ−メラニンの適応 ｐＨを４以下に下げることにより、ＨＣＩまたは酢酸のような酸を用いてＤＨＩ ＣＡ−メラニン（１０％ｗｔ／ｖｏｌ）を水溶液から沈殿させた（第５図）。沈 殿した物質を風乾、凍結乾燥またはエーテル抽出のいずれかにより乾燥した。次 いで、乾燥メラニンをブタノールまたはブトキシェタノールのいずれかにこの有 機溶媒の０．０５〜５容量％の範囲の濃度で（しがし、この濃度範囲に限定され るわけではない。）溶解した。

実施例７：ＤＨＩＣＡ−メラニンによるビールの着色所望の着色が達成されるま で、好ましくは共重合した３−アミノ−チロシンモノマーを含むＤＨＩＣＡ−メ ラニン（１０％ｗｔ／ｖｏｌ）を、例えば、バドヮイザービールと混合した。メ ラニン濃度は、ビール液の０．０　Ｏ５〜１．０重量％の間で（しがし、この濃 度範囲に限定されるわけではない。）変化させた。

本明細書および請求の範囲の記載は説明するためのものであり、限定するための ものではなく、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り種々の修正および変更 をなしうることか理解されよう。

ｒ工ＣＪ＋　１ ｒ工σ・　２ Ｆ工Ｇ、３ ｎＣ，４ ＦＩＧ、５ フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　ＣＩ、’　識別記号　庁内整理番号Ａ　２３　Ｇ　９１０ ２　２１１４−４ＢＡ　２３　Ｌ　２１５８ Ａ６１Ｋ　７１００　Ｗ　９０５１−４ＣＤ　９０５１−４Ｃ ７１０６８６１５−４Ｃ ７／４２　９２８４−４Ｃ ＣＯ８Ｇ　７３１００　ＮＴＢ　９２８５−４Ｊ８３１００　ＮＯＷ　８４１６ −４Ｊ ＣＯ８Ｋ　５／３４９２　ＫＢＮ　７２４２−４ＪＣ０９Ｂ　６７／４２　Ａ　 ７３０６−４ＨＣ１２Ｐ　１７／１８　Ｂ　７４３２−４ＢＤＯ６Ｐ　３１０４ 　Ｚ　９３５６−４Ｈ（８１）指定間　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、 　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。

ＴＤ、ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＨ。

ＤＥ、ＤＫ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＫＺ、ＬＫ、ＬＵ、ＭＧ、 ＭＷ、ＮＬ、Ｎｏ、Ｒ○、ＲＵ、ＳＤ、ＳＥ、ＵＳ ＦＩ （７２）発明者　オスバー、マイケル　ピー。

アメリカ合衆国　０６５１４　コネチカット州ハムデン、ウッディン　ストリー ト５０４番地 （７２）発明者　オルロウ、セス　ジェイ。

アメリカ合衆国　１１１０６　ニューヨーク州ロング　アイランド　シティ−２ エイ ピーティー、９エイ、３４　アベニュー　２１−７４番地

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．ｐＨ５〜９で水溶液に可溶性である合成メラニン。
2. ２．ｐＨ６．５〜７．５で水溶液に可溶性である、請求の範囲第１項記載のメラ ニン。
3. ３．粒子サイズが０．４５ミクロンより小さい、請求の範囲第１項記載のメラニ ン。
4. ４．溶解後も、該メラニンは沸騰、凍結および解凍しても可溶性を保持し、有機 溶媒に可溶性で、約１０，０００キロダルトン以上の分子量を有し、哺乳類の皮 膚および毛髪に対して染色性である、請求の範囲第１項記載のメラニン。
5. ５．ドーパクロムとドーパクロムの５．６−ジヒドロキシインドール−２−カル ボン酸への互変異性化を触媒する能カを有する酵素または他の適当な触媒とを反 応混合物中で組み合わせることを特徴とし、但し、前記混合物は任意に５，６− ジヒドロキシインドールおよび３−アミノ−チロシンの少なくともーつをさらに 含有する、可溶性メラニンの製造方法。
6. ６．酵素がドーパクロムタウトメラーゼである、請求の範囲第５項記載の方法。
7. ７．５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸を緩衝水溶液に溶解し、 通気することを含む、合成可溶性メラニンの製造方法。
8. ８．反応混合物がさらに５，６−ジヒドロキシインドールを含有する、請求の範 囲第７項記載の可溶性メラニンの製造方法。
9. ９．反応混合物がさらに３−アミノ−チロシンを含有する、請求の範囲第７項記 載の可溶性メラニンの製造方法。
10. １０．反応混合物がさらに３−アミノ−チロシンおよび５，６−ジヒドロキシイ ンドールを含有する、請求の範囲第７項記載の可溶性メラニンの製造方法。
11. １１．反応混合物がさらにジヒドロキシアセトンを含有する、請求の範囲第７項 記載の可溶性メラニンの製造方法。
12. １２．反応混合物がさらに無水酢酸を含有する、請求の範囲第７項記載の可溶性 メラニンの製造方法。
13. １３．前記方法を酸素の存在下で行うことをさらに含む、請求の範囲第７項記載 の方法。
14. １４．反応混合物に少なくとも一種のスルフヒドリル含有化合物および金属イオ ンを添加し、それにより得られるメラニンの色を変化させる、請求の範囲第７項 記載の方法。
15. １５．生理学的に許容できる担体と混合した請求の範囲第１項記載の可溶性メラ ニンを含む、サンスクリーンまたは哺乳類の皮膚若しくは毛髪に自然な日焼け色 を与えるための組成物。
16. １６．日焼け色を生じるのに有効な量の請求の範囲第１項記載の可溶性メラニン を、単独で、あるいは、生理学的に許容できる担体と混合して、哺乳類に投与す ることを含む、自然な日焼け色を哺乳類の皮膚および毛髪に与え、それにより日 光への暴露の影響から保護する方法。
17. １７．前記した目的に有効な量の請求の範囲第１項記載の可溶性メラニンを、単 独で、または、生理学的に許容できる担体と混合して、皮膚に塗ることを含む、 炎症後の低色素沈着（ｈｙｐｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を処置する方法。
18. １８．前記した目的に有効な量の請求の範囲第１項記載の可溶性メラニンをガラ ス、プラスチック、または塗料に適用するか、または、混ぜることを含む、ガラ ス、プラスチック、または塗料の着色方法。
19. １９．前記した目的に有効な量の請求の範囲第１項記載の可溶性メラニンを工業 材料に適用するか、または、混ぜることを含む、紫外線への暴露による損傷から 工業材料を保護する方法。
20. ２０．請求の範囲第１項記載の可溶性メラニンで着色したコーヒー、紅茶、ソー ダ、ビール、アルコール飲料、アイスクリーム、フローズンヨーグルト、または バーベキュー味のポテトチップスを含む食品。