JPH0759585A - プルランオリゴ糖の製造法 - Google Patents
プルランオリゴ糖の製造法Info
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- JPH0759585A JPH0759585A JP5206589A JP20658993A JPH0759585A JP H0759585 A JPH0759585 A JP H0759585A JP 5206589 A JP5206589 A JP 5206589A JP 20658993 A JP20658993 A JP 20658993A JP H0759585 A JPH0759585 A JP H0759585A
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- oligosaccharides
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 プルランを原料としてプルランオリゴ糖を製
造する。 【構成】 プルランを、有機溶媒と水との混合液中で、
プルランを構成する糖同士の結合を切断する加水分解酵
素を用いて分解することによりプルランオリゴ糖を得
る。
造する。 【構成】 プルランを、有機溶媒と水との混合液中で、
プルランを構成する糖同士の結合を切断する加水分解酵
素を用いて分解することによりプルランオリゴ糖を得
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、プルランオリゴ糖の製
造法に関し、特に、高重合度のプルランオリゴ糖を製造
する方法を提供するものである。
造法に関し、特に、高重合度のプルランオリゴ糖を製造
する方法を提供するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、糖質が生理機能と関わりがあるこ
とが知られるようになり、研究が活発に行われている。
また、低齲蝕性のものや、腸内細菌叢を正常化する働き
をするもの、静菌作用を有するもの、あるいはサイクロ
デキストリンのように包接作用を有するものなど、種々
の作用を有するオリゴ糖が知られるようになり、食品工
業等に貢献している。
とが知られるようになり、研究が活発に行われている。
また、低齲蝕性のものや、腸内細菌叢を正常化する働き
をするもの、静菌作用を有するもの、あるいはサイクロ
デキストリンのように包接作用を有するものなど、種々
の作用を有するオリゴ糖が知られるようになり、食品工
業等に貢献している。
【０００３】このようなオリゴ糖は、直接醗酵生産物と
して得られるものもあるが、通常は多糖類の分解によっ
て製造されるものが多い。従来、多糖類の分解は、水系
での酵素分解、酸加水分解により行われている。
して得られるものもあるが、通常は多糖類の分解によっ
て製造されるものが多い。従来、多糖類の分解は、水系
での酵素分解、酸加水分解により行われている。
【０００４】ところで、多糖類の一種であるプルラン
は、黒色酵母とよばれる不完全菌の一種であるAureobas
idium pullulans をスクロースや澱粉部分加水分解物な
どを炭素源とした培地で培養することにより得られる水
溶性の細胞外中性多糖である。その分子構造は、グルコ
ースの３量体であるマルトトリオースがα−１，６グリ
コシド結合により繰返し結合した直鎖状のグルカンであ
り、Aerobacterなどのプルラナーゼによって、α−１，
６結合が切断される。
は、黒色酵母とよばれる不完全菌の一種であるAureobas
idium pullulans をスクロースや澱粉部分加水分解物な
どを炭素源とした培地で培養することにより得られる水
溶性の細胞外中性多糖である。その分子構造は、グルコ
ースの３量体であるマルトトリオースがα−１，６グリ
コシド結合により繰返し結合した直鎖状のグルカンであ
り、Aerobacterなどのプルラナーゼによって、α−１，
６結合が切断される。
【０００５】プルランは、不定形、非結晶の無味無臭の
白色粉末であり、我が国で澱粉同様に使用制限や表示義
務のない食品として取り扱われており、可食性フィルム
や易分解プラスチックなど幅広い実用化がなされてい
る。また、プルランはα−１，６グリコシド結合を含む
ことにより難消化性であり、イン・ビボにおけるビフィ
ズス菌増殖促進剤となることが報告されており（特開平
２−２８９５２０号公報）、その部分分解物であるプル
ランオリゴ糖も同様の性質があることが期待される。
白色粉末であり、我が国で澱粉同様に使用制限や表示義
務のない食品として取り扱われており、可食性フィルム
や易分解プラスチックなど幅広い実用化がなされてい
る。また、プルランはα−１，６グリコシド結合を含む
ことにより難消化性であり、イン・ビボにおけるビフィ
ズス菌増殖促進剤となることが報告されており（特開平
２−２８９５２０号公報）、その部分分解物であるプル
ランオリゴ糖も同様の性質があることが期待される。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】前述したように、種々
のオリゴ糖やその製法が知られるようになったきたが、
プルランオリゴ糖については殆ど報告されていない。
のオリゴ糖やその製法が知られるようになったきたが、
プルランオリゴ糖については殆ど報告されていない。
【０００７】本発明は、上記観点からなされたものであ
り、プルランオリゴ糖、特に高重合度のプルランオリゴ
糖を製造することを目的としたものであり、プルランを
原料として、酵素分解によりプルランオリゴ糖を得る方
法を提供することを課題とする。
り、プルランオリゴ糖、特に高重合度のプルランオリゴ
糖を製造することを目的としたものであり、プルランを
原料として、酵素分解によりプルランオリゴ糖を得る方
法を提供することを課題とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するために種々研究を重ねた結果、プルランを有機
溶媒存在化で酵素分解することにより、高重合度のプル
ランオリゴ糖が生成することを見出し、本発明に至っ
た。
解決するために種々研究を重ねた結果、プルランを有機
溶媒存在化で酵素分解することにより、高重合度のプル
ランオリゴ糖が生成することを見出し、本発明に至っ
た。
【０００９】すなわち本発明は、プルランを、プルラン
を構成するグルコース同士の結合を切断する加水分解酵
素を用いて分解することによりプルランオリゴ糖を製造
する方法であって、プルランと前記加水分解酵素とを、
有機溶媒と水との混合液中で共存させることを特徴とす
るプルランオリゴ糖の製造法である。
を構成するグルコース同士の結合を切断する加水分解酵
素を用いて分解することによりプルランオリゴ糖を製造
する方法であって、プルランと前記加水分解酵素とを、
有機溶媒と水との混合液中で共存させることを特徴とす
るプルランオリゴ糖の製造法である。
【００１０】尚、本明細書において、高重合度プルラン
オリゴ糖とは、主としてグルコースの６〜３０量体程度
のものをいう。以下、本発明を詳細に説明する。
オリゴ糖とは、主としてグルコースの６〜３０量体程度
のものをいう。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１１】上述したように、本発明の高重合度プルラ
ンオリゴ糖の製造法は、プルランを原料として、有機溶
媒と水との混合系で酵素分解を行うことからなる。ここ
で、原料となるプルランは、例えば、Aureobasidium pu
llulans をスクロースや澱粉部分加水分解物などを炭素
源とした培地で培養することにより得られる。また、市
販されているものを使用してもよい。
ンオリゴ糖の製造法は、プルランを原料として、有機溶
媒と水との混合系で酵素分解を行うことからなる。ここ
で、原料となるプルランは、例えば、Aureobasidium pu
llulans をスクロースや澱粉部分加水分解物などを炭素
源とした培地で培養することにより得られる。また、市
販されているものを使用してもよい。
【００１２】酵素分解に用いる加水分解酵素は、プルラ
ンを構成するグルコース同士の結合を切断する酵素であ
り、例えばプラナーゼ、イソアミラーゼ、アミログリコ
シダーゼ等が挙げられるが、特に、プルラナーゼのよう
なα−１，６グリコシド結合を切断する酵素が好まし
い。
ンを構成するグルコース同士の結合を切断する酵素であ
り、例えばプラナーゼ、イソアミラーゼ、アミログリコ
シダーゼ等が挙げられるが、特に、プルラナーゼのよう
なα−１，６グリコシド結合を切断する酵素が好まし
い。
【００１３】この酵素反応は液相で行ってもよいが、酵
素を不溶性担体に結合したいわゆる固定化酵素を用いて
行ってもよい。本発明においては、固定化法は特に問わ
ない。
素を不溶性担体に結合したいわゆる固定化酵素を用いて
行ってもよい。本発明においては、固定化法は特に問わ
ない。
【００１４】酵素反応に使用する有機溶媒としては、メ
タノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノー
ル、ブタノール等のアルコール類及びアセトン等のケト
ン類、シクロヘキサン、ドデカン等の炭化水素類が挙げ
られるが、本発明においては、特に親水性有機溶媒が好
ましく用いられる。
タノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノー
ル、ブタノール等のアルコール類及びアセトン等のケト
ン類、シクロヘキサン、ドデカン等の炭化水素類が挙げ
られるが、本発明においては、特に親水性有機溶媒が好
ましく用いられる。
【００１５】本発明においてプルランオリゴ糖を得るに
は、上記有機溶媒と水との混合系で酵素反応を行う。
尚、水は緩衝液であってもよい。有機溶媒の濃度は、５
〜６０（v/v）％ が好ましい。また、原料基質であるプ
ルラン濃度は、反応液に対して５〜３０（w/v）％ で
あることが、収率の点から好ましい。
は、上記有機溶媒と水との混合系で酵素反応を行う。
尚、水は緩衝液であってもよい。有機溶媒の濃度は、５
〜６０（v/v）％ が好ましい。また、原料基質であるプ
ルラン濃度は、反応液に対して５〜３０（w/v）％ で
あることが、収率の点から好ましい。
【００１６】使用する有機溶媒とその濃度は、酵素の種
類、得ようとする重合度により適宜設定する。酵素反応
は、用いる酵素の至適条件下で行うのが好ましいが、得
られるオリゴ糖の重合度を高くするためには、穏やかな
条件下で反応を行ってもよい。至適条件としては、例え
ば酵素にプルラナーゼを用いる場合には２０〜５０℃、
ｐＨ４．５〜８．０が挙げられる。
類、得ようとする重合度により適宜設定する。酵素反応
は、用いる酵素の至適条件下で行うのが好ましいが、得
られるオリゴ糖の重合度を高くするためには、穏やかな
条件下で反応を行ってもよい。至適条件としては、例え
ば酵素にプルラナーゼを用いる場合には２０〜５０℃、
ｐＨ４．５〜８．０が挙げられる。
【００１７】反応条件、特に反応時間、プルランに対す
る酵素量等を変化させることにより、得ようとするプル
ランオリゴ糖の重合度を調整する。予め、ＨＰＬＣ（高
速液体クロマトグラフィー）等により、反応生成物を分
析し、条件を決定しておくとよい。
る酵素量等を変化させることにより、得ようとするプル
ランオリゴ糖の重合度を調整する。予め、ＨＰＬＣ（高
速液体クロマトグラフィー）等により、反応生成物を分
析し、条件を決定しておくとよい。
【００１８】反応生成物の中から希望の重合度のものを
得るには、ゲル濾過法やＨＰＬＣを用いて分取する。ま
た、上記のように、α−１，６グリコシド結合を切断す
る酵素を用いて製造されるプルランオリゴ糖は、グルコ
ースの３×ｎ量体（ｎは整数）として得られるが、これ
をさらにアミログリコシダーゼ等で消化すると、異なる
組成のプルランオリゴ糖が得られる。
得るには、ゲル濾過法やＨＰＬＣを用いて分取する。ま
た、上記のように、α−１，６グリコシド結合を切断す
る酵素を用いて製造されるプルランオリゴ糖は、グルコ
ースの３×ｎ量体（ｎは整数）として得られるが、これ
をさらにアミログリコシダーゼ等で消化すると、異なる
組成のプルランオリゴ糖が得られる。
【００１９】プルランオリゴ糖は、エタノール濃度が６
５％（V/V）以上ではほとんどが不溶性となるので、沈
澱物として遠心分離等により集積することが可能であ
る。さらに、適当な濃度に溶解してから必要に応じてゲ
ル濾過等で精製することができる。
５％（V/V）以上ではほとんどが不溶性となるので、沈
澱物として遠心分離等により集積することが可能であ
る。さらに、適当な濃度に溶解してから必要に応じてゲ
ル濾過等で精製することができる。
【００２０】
【作用】プルラナーゼは、プルランのα−１，６グルコ
シド結合を切断するエンド型の加水分解酵素であり、プ
ルランの分解反応が進むとマルトトリオースにまで分解
される。しかし、反応系の水の濃度が減少すると反応の
平衡が逆方向の転移又は合成に変化する。すなわち、高
濃度の有機溶媒系でこのような酵素反応を行わせること
により、反応の平衡をシフトさせ、水系では得られない
高重合度のオリゴ糖を得ることができるようになると推
定される。
シド結合を切断するエンド型の加水分解酵素であり、プ
ルランの分解反応が進むとマルトトリオースにまで分解
される。しかし、反応系の水の濃度が減少すると反応の
平衡が逆方向の転移又は合成に変化する。すなわち、高
濃度の有機溶媒系でこのような酵素反応を行わせること
により、反応の平衡をシフトさせ、水系では得られない
高重合度のオリゴ糖を得ることができるようになると推
定される。
【００２１】尚、本発明においては、反応を有機溶媒系
で行うことにより、雑菌等による汚染の心配がないの
で、滅菌処理操作、設備が不要である。
で行うことにより、雑菌等による汚染の心配がないの
で、滅菌処理操作、設備が不要である。
【００２２】
【実施例】以下に、本発明の実施例を説明する。尚、プ
ルランは、実施例１〜６においては、研究用試薬（和光
純薬工業株式会社製）を、実施例７では食品工業用（林
原株式会社製）を使用した。プルラナーゼは、プルラナ
ーゼ「アマノ」（天野製薬株式会社製；９０５Ｕ／ｍ
ｌ）を使用した。尚、１Ｕは、プルランを基質として、
これにｐＨ６．０、４０℃でプルラナーゼを作用させた
とき、１分間に１マイクロモルのグルコースに相当する
還元力の増加をもたらす酵素量である。
ルランは、実施例１〜６においては、研究用試薬（和光
純薬工業株式会社製）を、実施例７では食品工業用（林
原株式会社製）を使用した。プルラナーゼは、プルラナ
ーゼ「アマノ」（天野製薬株式会社製；９０５Ｕ／ｍ
ｌ）を使用した。尚、１Ｕは、プルランを基質として、
これにｐＨ６．０、４０℃でプルラナーゼを作用させた
とき、１分間に１マイクロモルのグルコースに相当する
還元力の増加をもたらす酵素量である。
【００２３】また、以下の有機溶媒の濃度はＶ／Ｖ％で
あり、いずれも５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）と
の混合液である。反応生成物の分析は、反応後に９０℃
で１０分間加熱して酵素を失活させた後、ＨＰＬＣによ
り行い、得られた反応生成物の総量（未反応基質を除
く）に対する各重合度のオリゴ糖の割合を算出した。
あり、いずれも５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）と
の混合液である。反応生成物の分析は、反応後に９０℃
で１０分間加熱して酵素を失活させた後、ＨＰＬＣによ
り行い、得られた反応生成物の総量（未反応基質を除
く）に対する各重合度のオリゴ糖の割合を算出した。
【００２４】ＨＰＬＣは、ポンプにはLC-6AD、検出器に
は示差屈折率計 RID-6A、オーブンにはCTO-6A（以上、
島津製作所製）を用い、カラムは（株）トーソー製TSKg
el AMIDE80を使用し、オーブンの温度７０℃で分析を行
った。
は示差屈折率計 RID-6A、オーブンにはCTO-6A（以上、
島津製作所製）を用い、カラムは（株）トーソー製TSKg
el AMIDE80を使用し、オーブンの温度７０℃で分析を行
った。
【００２５】以下において、Ｇ３、Ｇ６は、グルコース
の３量体、６量体を表す。
の３量体、６量体を表す。
【００２６】
【実施例１】プルラン１ｇ、プルラナーゼ希釈液（９１
Ｕ／ｍｌ）１ｍｌ、エタノール３ｍｌ、リン酸緩衝液６
ｍｌを混合し、５０℃の恒温槽中で、マグネチックスタ
ーラを使用して緩やかに撹拌しながら反応を行った。比
較例１として、エタノールの代わりにリン酸緩衝液を加
えて同様に反応を行った。
Ｕ／ｍｌ）１ｍｌ、エタノール３ｍｌ、リン酸緩衝液６
ｍｌを混合し、５０℃の恒温槽中で、マグネチックスタ
ーラを使用して緩やかに撹拌しながら反応を行った。比
較例１として、エタノールの代わりにリン酸緩衝液を加
えて同様に反応を行った。
【００２７】経時的に反応液から一定量を分取し、反応
生成物の分析を、グルコース３量体及び６量体以上のプ
ルランオリゴ糖について行った。加えたプルランの重量
に対するプルランオリゴ糖の重量の百分率（％）を、プ
ルランオリゴ糖への変換率とした。結果を表１に示す。
また、全生成物についての変換率を図１に示す。
生成物の分析を、グルコース３量体及び６量体以上のプ
ルランオリゴ糖について行った。加えたプルランの重量
に対するプルランオリゴ糖の重量の百分率（％）を、プ
ルランオリゴ糖への変換率とした。結果を表１に示す。
また、全生成物についての変換率を図１に示す。
【００２８】
【表１】 また、実施例について、３８０時間反応後の生成物（３
量体〜５４量体）への変換率を図２に示す。図中の横軸
は、グルコースを１とした生成物の重合度を表す。
量体〜５４量体）への変換率を図２に示す。図中の横軸
は、グルコースを１とした生成物の重合度を表す。
【００２９】この結果から、水系での反応生成物は大部
分が３量体（マルトトリオース）であるが、エタノール
含有系では反応時間の経過と共に６量体以上のプルラン
オリゴ糖が増加するのがわかる。
分が３量体（マルトトリオース）であるが、エタノール
含有系では反応時間の経過と共に６量体以上のプルラン
オリゴ糖が増加するのがわかる。
【００３０】
【実施例２】実施例１で得られた１４０時間反応後の反
応液に、アミログルコシダーゼ（シグマ社製）を１２Ｕ
／ｍｌとなるように、又はα−アミラーゼを１０Ｕ／ｍ
ｌとなるように添加し、室温で１時間反応後、ＨＰＬＣ
で生成物を分析した。アミログルコシダーゼ処理した結
果を図３に示す。図３から明らかなように、アミログル
コシダーゼ処理後には、グルコースの３×ｎ量体（ｎは
整数）は完全に消化され、新たなプルランオリゴ糖が生
成した。また、プルランオリゴ糖は、α−アミラーゼに
よって分解されず、難消化性であることが予想される。
更に、アミログルコシダーゼ処理されたプルランオリゴ
糖は、より難消化性の強いオリゴ糖であると考えられ
る。
応液に、アミログルコシダーゼ（シグマ社製）を１２Ｕ
／ｍｌとなるように、又はα−アミラーゼを１０Ｕ／ｍ
ｌとなるように添加し、室温で１時間反応後、ＨＰＬＣ
で生成物を分析した。アミログルコシダーゼ処理した結
果を図３に示す。図３から明らかなように、アミログル
コシダーゼ処理後には、グルコースの３×ｎ量体（ｎは
整数）は完全に消化され、新たなプルランオリゴ糖が生
成した。また、プルランオリゴ糖は、α−アミラーゼに
よって分解されず、難消化性であることが予想される。
更に、アミログルコシダーゼ処理されたプルランオリゴ
糖は、より難消化性の強いオリゴ糖であると考えられ
る。
【００３１】
【実施例３】３５％エタノール系における至適酵素濃度
を検討した。プルラン１０％及び適宜希釈したプルラナ
ーゼを含む反応液１ｍｌを、２０℃の恒温槽に入れ、２
４時間静置した。反応生成物を分析した結果を図４に示
す。
を検討した。プルラン１０％及び適宜希釈したプルラナ
ーゼを含む反応液１ｍｌを、２０℃の恒温槽に入れ、２
４時間静置した。反応生成物を分析した結果を図４に示
す。
【００３２】この結果から、上記条件では、酵素濃度が
１０Ｕ／ｍｌをピークとしてグルコース６量体以上のプ
ルランオリゴ糖が得られ、この濃度を越えると３量体へ
の分解が進むことがわかる。
１０Ｕ／ｍｌをピークとしてグルコース６量体以上のプ
ルランオリゴ糖が得られ、この濃度を越えると３量体へ
の分解が進むことがわかる。
【００３３】
【実施例４】次に、エタノール濃度がプルランオリゴ糖
の収率に与える影響を調べた。プルラン１０％、終濃度
９．１Ｕ／ｍｌのプルラナーゼ、０〜５０％のエタノー
ルを含む反応液を、２０℃の恒温槽に入れて静置するこ
とにより反応を行った。２２時間後及び４３時間後の反
応生成物を分析した結果を、各々図５（ａ）、（ｂ）に
示す。
の収率に与える影響を調べた。プルラン１０％、終濃度
９．１Ｕ／ｍｌのプルラナーゼ、０〜５０％のエタノー
ルを含む反応液を、２０℃の恒温槽に入れて静置するこ
とにより反応を行った。２２時間後及び４３時間後の反
応生成物を分析した結果を、各々図５（ａ）、（ｂ）に
示す。
【００３４】この結果から、上記条件下では、最も高い
変換率でグルコース６量体以上のプルランオリゴ糖が得
られるエタノールの濃度は、反応２２時間では３０％、
反応４３時間では４０％であり、そのときの変換率は各
々約６０％、約８０％に達した。
変換率でグルコース６量体以上のプルランオリゴ糖が得
られるエタノールの濃度は、反応２２時間では３０％、
反応４３時間では４０％であり、そのときの変換率は各
々約６０％、約８０％に達した。
【００３５】さらに、エタノール４０％存在下で４３時
間反応を行った場合のプルランオリゴ糖の組成を図６に
示す。この条件では、非常に高い収率で６量体以上のプ
ルランオリゴ糖が得られることが明らかである。
間反応を行った場合のプルランオリゴ糖の組成を図６に
示す。この条件では、非常に高い収率で６量体以上のプ
ルランオリゴ糖が得られることが明らかである。
【００３６】
【実施例５】本発明により得られるプルランオリゴ糖の
回収方法を検討した。実施例４のエタノール３０％を含
む２２時間反応液に、９９．５％エタノールを緩やかに
撹拌しながら添加した。添加量の増加とともに、透明な
反応液が次第に白濁し、沈殿物が生成した。
回収方法を検討した。実施例４のエタノール３０％を含
む２２時間反応液に、９９．５％エタノールを緩やかに
撹拌しながら添加した。添加量の増加とともに、透明な
反応液が次第に白濁し、沈殿物が生成した。
【００３７】このようにして反応液のエタノール濃度が
６５％及び７７％となるようにエタノールを添加した
後、室温（２０℃）で緩やかに３時間撹拌し、反応液を
濾過して沈殿物を得た。この沈殿物を凍結乾燥器等を用
いて完全に乾燥させ、白色の粉末を得た。
６５％及び７７％となるようにエタノールを添加した
後、室温（２０℃）で緩やかに３時間撹拌し、反応液を
濾過して沈殿物を得た。この沈殿物を凍結乾燥器等を用
いて完全に乾燥させ、白色の粉末を得た。
【００３８】上記で得られた粉末を一定量の水に再溶解
させ、ＨＰＬＣにより各重合度のプルランオリゴ糖の組
成を調べ、反応直後に調べた組成と比較することによ
り、各重合度毎の回収率を算出した。結果を図７に示
す。この結果から、エタノールの終濃度が６５％では、
重合度２１（マルトトリオースの７量体）以上のプルラ
ンオリゴ糖が沈澱物として９０％以上回収でき、また、
エタノールの終濃度が７７％以上では、重合度１２以上
のプルランオリゴ糖が沈澱物として９０％以上回収でき
た。
させ、ＨＰＬＣにより各重合度のプルランオリゴ糖の組
成を調べ、反応直後に調べた組成と比較することによ
り、各重合度毎の回収率を算出した。結果を図７に示
す。この結果から、エタノールの終濃度が６５％では、
重合度２１（マルトトリオースの７量体）以上のプルラ
ンオリゴ糖が沈澱物として９０％以上回収でき、また、
エタノールの終濃度が７７％以上では、重合度１２以上
のプルランオリゴ糖が沈澱物として９０％以上回収でき
た。
【００３９】
【実施例６】次に、有機溶媒の種類を変えて、プルラン
オリゴ糖の製造を行った。プルラン１０％、終濃度９．
１Ｕ／ｍｌのプルラナーゼ、終濃度３０％の各種有機溶
媒を含む反応液を、２０℃の恒温層中に静置することに
より反応を行った。１８時間反応後のプルランオリゴ糖
の組成を調べた。
オリゴ糖の製造を行った。プルラン１０％、終濃度９．
１Ｕ／ｍｌのプルラナーゼ、終濃度３０％の各種有機溶
媒を含む反応液を、２０℃の恒温層中に静置することに
より反応を行った。１８時間反応後のプルランオリゴ糖
の組成を調べた。
【００４０】結果を図８に示す。この結果から、極性
（親水性）の高い有機溶媒ほどグルコース６量体以上の
プルランオリゴ糖への変換率が高いことがわかる。
（親水性）の高い有機溶媒ほどグルコース６量体以上の
プルランオリゴ糖への変換率が高いことがわかる。
【００４１】
【実施例７】食品工業用のプルランを用いて、プルラン
オリゴ糖を大量製造した実施例を説明する。
オリゴ糖を大量製造した実施例を説明する。
【００４２】プルランとして、食品工業用プルラン
（「プルランＰＦ２０」林原株式会社製）を用いた。こ
のプルランを１０％、エタノール３０％、終濃度９．１
Ｕ／ｍｌのプルラナーゼを含む反応液３００ｍｌを５０
０ｍｌの三角フラスコに入れ、撹拌しながら２０℃で２
０時間反応を行った。このときの反応液中のプルランオ
リゴ糖の組成を図９に示す。
（「プルランＰＦ２０」林原株式会社製）を用いた。こ
のプルランを１０％、エタノール３０％、終濃度９．１
Ｕ／ｍｌのプルラナーゼを含む反応液３００ｍｌを５０
０ｍｌの三角フラスコに入れ、撹拌しながら２０℃で２
０時間反応を行った。このときの反応液中のプルランオ
リゴ糖の組成を図９に示す。
【００４３】反応終了後、９９％エタノールを終濃度が
６０％となるように加え、室温で３時間緩やかに撹拌し
た。これを濾紙（TOYO Filter paper No.6）で濾過し、
沈殿物を得た。この沈殿物を凍結乾燥器で２４時間乾燥
させ、白色粉末２１．５ｇを得た。最終的なプルランオ
リゴ糖の収率は原料に対し７１．１％であった。
６０％となるように加え、室温で３時間緩やかに撹拌し
た。これを濾紙（TOYO Filter paper No.6）で濾過し、
沈殿物を得た。この沈殿物を凍結乾燥器で２４時間乾燥
させ、白色粉末２１．５ｇを得た。最終的なプルランオ
リゴ糖の収率は原料に対し７１．１％であった。
【００４４】
【発明の効果】本発明は、多糖類を親水性有機溶媒と水
との混合系で酵素分解を行うこととしたことにより、プ
ルランオリゴ糖を効率よく製造することができる。
との混合系で酵素分解を行うこととしたことにより、プ
ルランオリゴ糖を効率よく製造することができる。
【図１】 反応時間とプルランオリゴ糖の収率との関係
を示す図。
を示す図。
【図２】 反応液中の各重合度のプルランオリゴ糖の組
成を示す図。
成を示す図。
【図３】 反応液中の各重合度のプルランオリゴ糖の組
成を示す図。
成を示す図。
【図４】 酵素濃度がプルランオリゴ糖の組成に与える
影響を示す図。
影響を示す図。
【図５】 エタノール濃度がプルランオリゴ糖の組成に
与える影響を示す図。
与える影響を示す図。
【図６】 反応液中の各重合度のプルランオリゴ糖の組
成を示す図。
成を示す図。
【図７】 各重合度のプルランオリゴ糖の回収率を示す
図。
図。
【図８】 有機溶媒の種類とプルランオリゴ糖の収率と
の関係を示す図。
の関係を示す図。
【図９】 反応液中の各重合度のプルランオリゴ糖の組
成を示す図。
成を示す図。
Claims (5)
- 【請求項１】 プルランを、プルランを構成するグルコ
ース同士の結合を切断する加水分解酵素を用いて分解す
ることによりプルランオリゴ糖を製造する方法であっ
て、プルランと前記加水分解酵素とを、有機溶媒と水と
の混合液中で共存させることを特徴とするプルランオリ
ゴ糖の製造法。 - 【請求項２】 前記加水分解酵素がα−１，６グリコシ
ド結合を切断する酵素である請求項１記載のプルランオ
リゴ糖の製造法。 - 【請求項３】 前記有機溶媒が、親水性有機溶媒である
請求項１又は２記載のプルランオリゴ糖の製造法。 - 【請求項４】 前記有機溶媒の濃度が、５〜６０（V/
V）％である請求項１〜３のいずれか一項に記載のプル
ランオリゴ糖の製造法。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれか一項に記載の方
法により得られるプルランオリゴ糖を、さらにアミログ
リコシダーゼで消化することを特徴とするプルランオリ
ゴ糖の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5206589A JPH0759585A (ja) | 1993-08-20 | 1993-08-20 | プルランオリゴ糖の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5206589A JPH0759585A (ja) | 1993-08-20 | 1993-08-20 | プルランオリゴ糖の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0759585A true JPH0759585A (ja) | 1995-03-07 |
Family
ID=16525910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5206589A Pending JPH0759585A (ja) | 1993-08-20 | 1993-08-20 | プルランオリゴ糖の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0759585A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010139100A1 (zh) * | 2009-05-31 | 2010-12-09 | 江南大学 | 一种麦芽三糖基-β-环糊精的酶法制备方法 |
| JP2011205933A (ja) * | 2010-03-29 | 2011-10-20 | Aichi Prefecture | 高濃度糖化液の製造方法 |
| CN103740785A (zh) * | 2013-12-28 | 2014-04-23 | 天津北洋百川生物技术有限公司 | 高密度发酵生产普鲁兰多糖的方法 |
| US9868969B2 (en) | 2006-01-25 | 2018-01-16 | Tate & Lyle Ingredients Americas Llc | Fiber-containing carbohydrate composition |
| US10568839B2 (en) | 2011-01-11 | 2020-02-25 | Capsugel Belgium Nv | Hard capsules |
| US11319566B2 (en) | 2017-04-14 | 2022-05-03 | Capsugel Belgium Nv | Process for making pullulan |
| US11540549B2 (en) | 2019-11-28 | 2023-01-03 | Tate & Lyle Solutions Usa Llc | High-fiber, low-sugar soluble dietary fibers, products including them and methods for using them |
| US11576870B2 (en) | 2017-04-14 | 2023-02-14 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
-
1993
- 1993-08-20 JP JP5206589A patent/JPH0759585A/ja active Pending
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10344308B2 (en) | 2006-01-25 | 2019-07-09 | Tate & Lyle Ingredients Americas Llc | Fiber-containing carbohydrate composition |
| US9868969B2 (en) | 2006-01-25 | 2018-01-16 | Tate & Lyle Ingredients Americas Llc | Fiber-containing carbohydrate composition |
| US9957537B2 (en) | 2006-01-25 | 2018-05-01 | Tate & Lyle Ingredients Americas Llc | Fiber-containing carbohydrate composition |
| US9963726B2 (en) | 2006-01-25 | 2018-05-08 | Tate & Lyle Ingredients Americas Llc | Fiber-containing carbohydrate composition |
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| US10568839B2 (en) | 2011-01-11 | 2020-02-25 | Capsugel Belgium Nv | Hard capsules |
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| US11319566B2 (en) | 2017-04-14 | 2022-05-03 | Capsugel Belgium Nv | Process for making pullulan |
| US11576870B2 (en) | 2017-04-14 | 2023-02-14 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
| US11878079B2 (en) | 2017-04-14 | 2024-01-23 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
| US11540549B2 (en) | 2019-11-28 | 2023-01-03 | Tate & Lyle Solutions Usa Llc | High-fiber, low-sugar soluble dietary fibers, products including them and methods for using them |
| US12161142B2 (en) | 2019-11-28 | 2024-12-10 | Tate & Lyle Solutions Usa Llc | Methods for using high-fiber, low-sugar soluble dietary fibers |
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