JPH0762153B2 - 酵素含有洗浄剤組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

技術分野 本発明は、優れた洗浄力を有する酵素を含有する洗浄剤
組成物に関する。 従来技術 従来、衣類の汚れに対する洗浄力をより向上させた洗浄
剤組成物を得るために、アミラーゼ、プロテアーゼ、セ
ルラーゼなどの酵素を配合することがよく知られている
（特公昭47-45802号公報、同48-30646号、特開昭47-373
3号公報、同52-128904号公報、同53-56204号公報、同56
-129298号公報）。その中でも特にバチルス属（Bacillu
s）から生産されるアルカリプロテアーゼが一般に使用
されており、ノボ・インダストリー社の「アルカラー
ゼ」（Alcalase）、「エスペラーゼ」（Esperase）、
「サビナーゼ」（Savinase）、ギスト・ブロカーズ社の
「マキサターゼ」（Maxatase）、ナガセ生化学工業
（株）の「ビオプラーゼ」等の商品名で市販されてい
る。 しかながら、これらの酵素を配合した洗浄剤組成物は、
酵素による洗浄力向上効果はある程度あるものの、いま
だ不十分であり、よりいっそうの洗浄力向上効果を発揮
する酵素含有洗浄剤組成物の開発がまたれていた。 発明の目的 本発明は、洗浄力向上効果に優れた酵素含有洗浄剤組成
物を提供するものである。 発明の構成 本発明の酵素含有洗浄剤組成物は、バチルス・エスピー
（Bacillus sp.）Ｙ株（微工研条寄第1029号）から生産
されるアルカリプロテアーゼと、該アルカリプロテアー
ゼ以外の他種の酵素とを含有することを特徴とする。 以下、本発明についてさらに詳細に説明する。 本発明で用いられるアルカリプロテアーゼは新規な酵素
であり、広く自然界よりアルカリプロテアーゼ産生菌を
検索した結果見い出された、バチルス属（Bacillus）に
属する１菌種、バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ
株から産生されたものである。 バチルス・エスピーＹ株は、微工研条寄第1029号（FERM
BP-1029）として工業技術院微生物工業技術研究所に寄
託されている。また、バチルス・エスピーＹ株について
は、特願昭60-123021号として既に出願された出願明細
書に記載されている。 以下にその箘学的詳細を説明する。 なお、箘学的性質および分類方法は、Bergey′s Manual
of Determinative Bacteriology第８版（1974）、R.E.
Gordenの検索表（1972）に準じて行なった。pH10の培地
は、炭酸ナトリウム１％を加えて調製した。温度および
pHに関する成育最適範囲の測定は、温度勾配バイオフォ
トレコーダーで行なった。 A.形態的性質 肉汁寒天培地上で35℃にて２日間培養したとき、以下の
形態的特徴が観察される。 １）細胞の形および大きさ： 桿菌、0.4-0.5μｍ×1.7-1.9μｍ。 ２）多形性：なし。 ３）運動性：周鞭毛を有し運動性あり。 ４）胞子：胞子を形成し、形成途上で細胞は先端近くか
ら膨張する。成熱した胞子はレモン型であり、大きさ
は、0.7-0.9μｍ×1.0〜1.2μｍ。 ５）グラム染色性：陽性。 ６）抗酸性：陰性。 B.培養的性質 １）肉汁寒天平板培養： pH7.0にて生育して、円形、偏平状、全縁のコロニーを
形成する。該コロニーの表面は滑らかで光沢有り、該周
辺部は淡褐色、該中心部は半透明の淡褐色。 pH10.0にて生育して、円形、偏平状、全縁のコロニーを
形成する。該コロニーの表面は滑らかで光沢有り、クリ
ーム色。 ２）肉汁寒天斜面培養： pH7.0およびpH10.0にて拡帯状に生育し、光沢のあるク
リーム色ないし淡褐色のコロニーを形成する。赤褐色の
色素を僅かに生成する。 ３）肉汁液体培養： pH7.0にて生育するが、菌膜は形成しない。 pH10.0にて生育が良好で、菌膜は形成しない。 ４）肉汁ゼラチン穿刺培養： pH7.0にて僅かに液化する。 pH10.0にて液化する。 ５）リトマス・ミルク pH7.0にて生育が非常に悪い。 pH10.0にて生育する。 ミルクの凝固は見られない。培地がアルカリ性のため、
リトマスの変色は不明。 C.生理的性質 １）硝酸塩の還元：陽性。 ２）脱窒反応：陰性。 ３）MRテスト：陰性。 ４）VRテスト：陰性。 ５）インドールの生成：陰性。 ６）硫化水素の生成：陰性。 ７）デンプンの加水分解：陽性。 ８）クエン酸の利用:Koserの培地では利用しない。Chri
stensenの培地では僅かに利用する。 ９）無機窒素源の利用：硝酸塩は利用しない。アンモニ
ウム塩は利用しない。 10）色素の生成：水溶性の赤褐色の色素を菌体組成物と
に生産する。 11）ウレアーゼ：陽性。 12）オキシダーゼ：陽性。 13）カタラーゼ：陽性。 14）生育の温度範囲:33ないし35℃付近（20ないし47
℃）が良好。 15）生育のpH範囲:10.0付近（60ないし12.0）が良好。 16）酸素に対する態度：好気性下でも嫌気性下でも生育
する。 17）Ｏ−Ｆテスト：陰性。 18）糖類から酸およびガスの生成:D−グリコース、Ｄ−
マンノース、Ｄ−フラクトース、麦芽糖、ショ糖、トレ
ハロース、Ｄ−マンニット、デンプンから酸を生成する
が、ガスは生成しない。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロ
ース、Ｄ−ガラクトース、乳糖、イノシット、グリセリ
ンからは酸もガスも生成しない。 D.その他の性質 １）塩化ナトリウムに対する耐性:10％NaCl下で生育す
る。 以上の性質を総括すると、まず、本菌株は、カラターゼ
陽性、通性好気性で耐熱胞子を有するグラム陽性の桿菌
であることにより、バチルス属の細菌である。 本菌株が、バチルス・アルカロフィルスに属すると思わ
れるため、理研、堀越らのバチルス・アルカロフィルス
No.221（ATCC 21522）、No.58（特公昭48-2792号、50-1
6435号参照）、およびNo.D−６（特公昭56-4236参照）
と菌学的性質を比較した。本菌株とバチルス・アルカロ
フィルスNo.21、No.58、No.D−６とは、アルカリ性の培
地（pH10）で良く生育する点で一致するが、無機窒素源
の利用に関して、本菌株が、硝酸塩およびアンモニウム
塩を利用できないのに対して、上記公知の菌株らは、利
用できる。また、生育pHの範囲において、本菌株がpH6
からpH12であるのに対して、No.221は、pH7からpH11で
あり、No.58、No.D−６は、pH7.5からpH11であり、上記
公知の菌株は、pH7.0以下では生育できない点で異な
る。生育温度の範囲においても、本菌株が20℃から47℃
であり、最適温度範囲が33℃から35℃であるのに対し
て、No.221は55℃、No.58は45℃まで生育でき、最適温
度が37℃から40℃であり、No.D−６も最適温度が35℃か
ら40℃と高く、本菌株と異なる。また、本菌株と、糖類
からの酸の生成をNo.D−６と比較すると、本菌株がＬ−
アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−ガラクトース、グ
リセリンから酸を生成しないのに対して、No.D−６は生
成する。更に、本菌株は、10％食塩下でも成育し、上記
公知の菌株とは区別される。 このように本菌株は公知のバチルス・アルカロフィルス
の菌株とは異なるが、上述の菌学的性質からバチルス・
アリカロフィルス類緑菌と判断することが妥当である。 バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株を培養して得
られるアルカリプロテアーゼは、Ya酵素とYb酵素との２
種類であり、それぞれ特願昭60-123022号および特願昭6
0-286944号に記載されている。 バチルス・エスピーＹ株の培養は、例えば次のようにし
て行なうことができる。まず、可溶性デンプン２％、硫
酸マグネシウム0.02％を含む液体培地と、乾燥酵母１
％、リン酸水素カリウム0.1％を含む液体培地とを、そ
れぞれ121℃にて20分間別々に滅菌した後、各20mlを500
mlの坂口フラスコに分注し、更に滅菌済みの炭酸ナトリ
ウムを終濃度１％となるように該フラスコに加え、50ml
の培養液を調製する。該培養液にバチルス・エスピー
（Bacillus sp.）Ｙ株を接種し、該培養液を30℃で15時
間培養し、種培養液を調製する。該種培養液100mlを同
じ組成の培地3.5lの入った酵素タンクに加え、該タンク
に30℃で毎分3.5lの空気を送りながら70時間通気撹拌培
養して微生物液を得る。 Ya酵素とYb酵素との分離・製造法は第１図に示した通り
である。まず、微生物培養液を、10000rpmで５分間遠心
分離し上清を得た。次に上清液を70％飽和の硫安塩析に
かけた。更に得られた沈殿物を20mMトリス−塩酸緩衝液
（Caイオン2mM添加、pH7.2）に溶解し、同緩衝液に対し
て透析し、Ｙ粗酵素（以下、単にＹ酵素と称す）を得
た。続いてＹ酵素溶液を、ジエチルアミノエチル（DEA
E）‐53セルロースのアニオン交換クロマトグラフィー
にかけ10mMホウ酸緩衝液（pH9.3）で溶出させ、非吸着
画分を得た。さらに続いて該非吸着画分を、再び70％飽
和の硫安塩析にかけた。得られた沈殿物を再び20mMトリ
ス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.2）に溶解し、
同緩衝液に対して透析した。更にまた該溶液を、トロパ
ールHW-55のゲル過クロマトグラフィーにかけ、20mM
トリスー塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.2）で溶出
させ、活性のある画分を集めた。さらに該画分を70％飽
和の硫安塩析にかけ、得られた沈殿物を20mMトリス−塩
酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.2）に対して透析し
た。最後に変性蛋白質を除去するために、透析後の活性
画分をミリポアフィスターで過し、精製Ya酵素（以
下、単にYa酵素と称す）を得た。 一方、得られたＹ酵素溶液をジエチルアミノエチル（DE
AE）‐53セルロースのアニオン交換クロマトグラフィー
にかけ20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH
7.2）で非吸着画分としてYa酵素を溶出あせた後、０〜
0.5M塩化ナトリウムを含む同緩衝液を用い、直線濃度勾
配で溶出し、Yb酵素の粗画分を得た。該クロマトグラフ
ィーの溶出曲線を第２図に示す。さらに続いて該Yb粗画
分を、再び70％飽和の硫安塩析にかけた。得られた沈殿
物を50mMリン酸緩衝液（pH7.0）に溶解し、同緩衝液に
対して透析した。さらに該溶液をヘモグロビン−アガロ
ース、アフィニティーカラムクロマトグラフィーにか
け、50mMリン酸緩衝液（pH7.0）で溶出させ、活性のあ
る画分を集めた。さらに該画分を70％飽和の硫安塩析に
かけ、得られた沈殿物を20mMトリス−塩案緩衝液（Caイ
オン2mM添加、pH7.2）に溶解し、同緩衝液に対して透析
した。さらに該溶液をトロパールHW-55のゲル過クロ
マトグラフィーにかけ、20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイ
オン2mM添加、pH7.2）で溶出させ、活性のある画分を集
めた。さらに該画分を70％飽和の硫安塩析にかけ、得ら
れた沈殿物を20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添
加、pH7.2）に溶解し、同緩衝液に対して透析し、精製Y
b酵素（以下、単にYb酵素と称す）を得た。 精製済みのYa酵素およびYb酵素を試料としたゲル過ク
ロマトグラフィーの溶出曲線を、それぞれ第12図および
第13図に示す。樹脂としてトヨパールHW-55を用い、溶
出液として20mMトリス塩酸緩衝液（pH7.2,Caイオン2mM
を含む）を用い、展開を上昇法により実施した。また、
精製済みのYa酵素を試料とした高速液体クロマトグラフ
ィーの溶出曲線を第14図に示す。機種はウオーターズWI
SP-710Bを用い、I-125カラムを２本直列させ、50mMリン
酸緩衝液で溶出させた。以上から明らかなように、Ya酵
素およびYb酵素は完全に精製された。 すなわち、バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株を
培養することによって得られるアルカリプロテアーゼで
あるＹ酵素は、はYa酵素とYb酵素との混合物であり、そ
の比率はYa酵素/Yb酵素＝90/10〜50/50である。 次に前述した方法に従って得られたYa酵素、Yb酵素およ
びＹ酵素について説明する。 〔１〕基質特異性 Ya酵素およびYb酵素の作用は、蛋白質の加水分解であ
る。その酵素の基質特異性を第１表に示す。また、バチ
ルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株より同時に生産さ
れるYa酵素およびYb酵素との混合物の基質特異性も同様
に評価し、比較した。 Ａ酵素［バチルス・リケニフォルミス（Bacillus Liche
niformis）より単離されたアルカリプロテアーゼ（商品
名アルカラーゼ、ノボ社）の活性を100としたときの相
対分解率を次の条件で測定した。 条件：温度 35℃ pH 10.5（50mMホウ酸緩衝液） 反応時間 60分 基質温度 １％ただしヘモグロビンは0.4％ 酵素使用量 100APU/mlただし卵白は500APU/ml 蛋白質分解率すなわち活性の測定は、アンソン−萩原の
変法に従った。反応後過した反応溶液の吸光度を275n
mにて測定した。１分間にチロシン１μｇを遊離させる
酵素活性を１アルカリプロテアーゼ単位（APU）とし
た。 この表から、Ya酵素はケラチンに対して特異性が強く、
Yb酵素は卵白に対する特異性が強く、不溶性蛋白質であ
るケラチンに対しては弱いことが分かる。また、Ya酵素
とYb酵素の混合物であるＹ酵素は、公知のＡ酵素より広
範な基質に対して強く作用する特徴を有する。 〔２〕至適pHおよび安定pH領域 Ya酵素およびYb酵素の至適pHおよび安定pH領域のグラフ
図を第３図および４図に示す。用いた緩衝液は以下のと
おりである。 pH領域 緩衝液 3.5- 5.5 酢酸 4.5- 7.0 クエン酸 6.0- 8.0 リン酸 7.5- 9.0 トリス‐HCl 8.0- 9.0 ホウ酸‐HCl 9.0-10.5 グリシン−NaOH 9.5-11.0 ホウ酸−NaOH 11.0-12.0 リン酸−NaOH 12.0-13.0 KCl-NaOH 至適pHを調べるに当っては、カゼイン0.6％を含む20mM
の各緩衝液に各酵素を約400APU/mlとなるように加え、3
5℃で10分間反応させ活性を測定した。至適pHでの活性
を100とするときの各pHでの相対活性を求めた。安定pH
領域を調べるに当っては、20mMの各緩衝液に各酵素を約
400APU/mlとなるように加え、25℃で24時間インキュー
ベートした後、活性を測定した。インキューベータ前の
活性を100として各pHでの相対活性を求めた。第３図か
ら分かるように、Ya酵素の至適pHは10.0ないし12.5であ
り、安定pH領域は6.5ないし13.0である。第４図から分
かるように、Yb酵素の至適pHは9.0ないし10.0であり、
安定pH領域は6.5ないし12.0である。 〔３〕至適温度及び耐熱性 Ya酵素およびYb酵素の至適温度と耐熱性を第５図および
６図に示す。至適温度を調べるに当っては、基質として
0.6％のカゼインを含むpH10.5の緩衝液に各酵素を加
え、10分間各温度で反応させた。35℃での活性を100と
して各温度での相対活性を求めた。耐熱性は次のように
して調べた。50mMホウ酸−NaOH緩衝液（35℃でpH10.5）
に約400APU/mlの酵素を加え、各温度で10分間熱処理
し、氷冷した後、活性を測定した。第５図から分かるよ
うに、Ya酵素の至適温度は70℃であり、55℃の温度まで
活性が維持される。 第６図から分かるように、Yb酵素の至適温度は65ないし
70℃の範囲であり、50℃の温度まで100％活性が維持さ
れる。 〔４〕紫外線吸収スペクトル Ya酵素およびYb酵素の紫外吸収スペクトルを第７図およ
び第８図に示す。試料を50mMのトリスー塩酸緩衝液（pH
8.0）に溶かし、紫外線吸収スペクトルを測定したとこ
ろ、Ya酵素は276nmの波長で極大吸収を示し、その波長
での吸光係数E^1% _1cmは7.4と計算された。一方、Yb酵素
は278nmの波長で極大吸収を示し、その波長での吸光係
数▲^1% _1cm▼は9.5と計算された。 〔５〕金属イオンの影響 金属イオンのYa酵素およびYb酵素の活性に与える影響を
調べた。その結果を第２表および第３表に示す。20mMホ
ウ酸−NaOH緩衝液（pH10.5）にYa酵素またはYb酵素を約
400APU/mlを加え、更に各種金属塩を1mMの濃度で添加
し、各所定の条件で処理後残存活性を測定した。数値は
０分の活性を100としてその相対活性で表す。 この第２表から、Ya酵素は硫酸銅、硝酸銀、塩化第２水
銀、塩化カドミウムの添加により活性は阻害されるが、
塩化カルシウムの添加では活性の熱に対する安定性が増
すことが分かる。 また、第３表から、Yb酵素は硫酸銅、硝酸銀、塩化第２
水銀の添加により、活性が阻止されることが分かる。 バチルス属に属する菌の生産するアルカリプロテアーゼ
は、一般にCa²⁺によって熱安定性を増すことから、Ca²⁺
の効果をみるため、5mMのCa²⁺を含む50mMホウ酸−NaOH
緩衝液（35℃でpH10.5）に約400APU/mlの酵素を加え、
各温度で10分間熱処理し、氷冷した後活性を測定して残
存活性を求めた。比較のため、Ca²⁺を加えない条件でも
同時に評価した。その結果を第４表に示す。数値は０分
の活性を100としてその相対活性で表す。 Caイオンの添加により、熱に対する安定性がYa酵素では
約５℃、Yb酵素では約10℃向上することが分かった。 〔６〕阻害剤の影響 Ya酵素およびYb酵素に対する各種の阻害剤の影響を調べ
た。条件および方法は以下の通りである。50mMトリス−
塩酸緩衝液（pH7.2）でYa酵素またはYb酵素を800APU/ml
になるよう調製した。各阻害剤を添加して、35℃で30分
間インキュベート後、残存活性を測定した。値は、阻害
剤無添加のものを100とした相対活性で示した。その結
果を第５表に示す。 この表から分かるように、Ya酵素およびYb酵素は、カゼ
インを基質とした場合、EDTA（エチレンジアミン四酢
酸）およびPCMB（p-クロロマーキュリー安息考酸）、ア
ンチパイン（Antipain）、キモスタチン（Chymostati
n）では活性が阻害されないが、DFP（ジイソプロピルフ
ルオロリン酸）およびPMSF（フェニルメタンスルフィニ
ルフルオリド）では活性が阻害されることより、活性中
心にセリンを有するプロテアーゼである。 〔７〕分子量 Ya酵素およびYb酵素の分子量をゲル過クロマトグラフ
ィーにより調べた。充填剤には、トヨパールHW-55を用
い、20mMトリス−塩酸緩衝液（Caイオン2mM添加、pH7.
2）を溶出液とした。標準蛋白に以下の蛋白（カッコ内
は分子量）を用いて検量線を作成した。蛋白アルブミン
（43,000）、サーモライシン（37,500）、ズブチリシン
（27,600）、キモトリプシノーゲン（25,700）、ミオグ
ロビン（17,200）、チトクロームＣ（11,700）を用い
た。検量線を第９図に示す。この方法により、Ya酵素の
分子量は21,000、Yb酵素の分子量は40,000と決定した。 〔８〕等電点 Ya酵素およびYb酵素の等電点を等電点電気泳動法により
調べた。カラム用担体には、ファルマライト３−10を用
いた。Ya酵素およびYb酵素の等電点電気泳動模様を第10
図および11図に示す。この方法によりYa酵素の等電点は
10.1、Yb酵素の等電点は5.1と決定した。

〔９〕アミノ酸組成 Ya酵素およびYb酵素のアミノ酸組成〔アミノ酸分析器JL
C-200A（日本電子）使用〕を調べた。なお、トリプトフ
ァンはアルカリ分解法、システィンは過蟻酸酸化法によ
り測定した。その組成を公知のプロテアーゼのものと比
較して第６表に示す。 その結果、他の酵素と比べてYa酵素はトリプトファン、
セリン、バリンなどYb酵素はトリプトファン、ヒスチジ
ン、アルギニン、アスパラギン酸、グリシン、アラニン
などのアミノ酸組成において顕著な相違が見られる。 〔10〕元素分析値 Ya酵素およびYb酵素の元素分析値を第７表に示す。 最後にまとめとして、Ya酵素およびYb酵素の各種性状を
Ａ酵素、バチルス属の好アルカリ性細菌の生産する公知
のアルカリプロテアーゼのもと比較して後記の第８表に
示す。 他の類似した公知のアルカリプロテアーゼ（Ｅ−1,E−
2,API-21,No,221については第８表の注を参照）と比較
すると、至適pHはＡ酵素、Ｅ−1,E−２およびAPI-21が1
0〜11、No.221が11〜12であり、Ya酵素は10〜12.5と領
域が高pH側に広く、Yb酵素の至適pHは９〜10であり、Ya
酵素と他の公知のアルカリプロテアーゼに比べて低い。 次に、至適温度がYa酵素およびYb酵素が70℃付近にある
のに対して、Ａ酵素、No.221は60℃、API-21は45〜50℃
と低く、Ｅ−１、Ｅ−２においては、75℃とYa酵素およ
びYb酵素より高く、この点においても異なる。 また、Ya酵素およびYb酵素は5mMCa²⁺イオン存在下で、
Ａ酵素、No.221、API-21の酵素と同様に耐熱性が約５〜
10℃向上するが、バチルスNo.D−６株（第８表の注を参
照）の生産するＥ−１、Ｅ−２はCa²⁺イオンによる熱安
定性の増大が認められない点で異なる。 更に、Yb酵素の分子量が４万と公知のアルカリプロテア
ーゼに比べて大きく、等電点も5.1と低いことからも、
明らかに別種のものと言える。 以上のことから本酵素は従来知られているアルカリプロ
テアーゼのいずれとも異なる。よって本酵素を新規酵素
と判断することが妥当であり、アリカリプロテアーゼYa
およびYbと命名した。 本発明のアルカリプロアーゼ（Ｙ酵素）の配合量は特に
限定されないが、好ましくは、洗浄剤組成物1kg当り50
〜10000APU、さらに好ましくは1000〜5000APUである。 本発明に用いられる上記アルカリプロテアーゼ以外の他
種の酵素としては、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアー
ゼ、セルラーゼなどが挙げられるが、その中でもバチル
ス属（Bacillus）から生産されるアルカリプロテアーゼ
が好適であり、ノボインダストリー社の「アルカラー
ゼ」（Alcalase）、「エスペラーゼ」（Esperase）、
「サビナーゼ」（Savinase）、ギストブロカーズの「マ
クサターゼ」（Maxatase）、「マクサカール」（Maxaca
l）、ナガセ生化学工業の「ピオプラーゼ」等の商品名
で市販されている。 これらの酵素は１種または２種以上で洗浄剤組成物に配
合される。この配合量は特に限定されないが、好ましく
は0.05〜10wt％、さらに好ましくは0.1〜5wt％の範囲で
洗浄剤組成物に配合される。 本発明の洗浄剤組成物の中には、さらに必要に応じて任
意成分を配合することができる。任意成分としては、一
般に洗浄剤組成物に用いられる界面活性剤、ビルダー、
再汚染防止剤、漂白剤、酵素、蛍光増白剤、ハイドロト
ロープ、無機塩、香料などがあげられる。 界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤、ノニオン
性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤
または双性イオン界面活性剤などが用いられる。アニオ
ン性界面活性剤としては、通常のスルホネート系、サル
フェート系、ホスフェート系のアニオン性界面活性剤お
よび石鹸が使用される。スルホネート系アニオン性界面
活性剤としては、C_8〜22の直鎖または分枝鎖のアルキル
ベンゼンスルホン酸塩、C_8〜22の直鎖アルキルスルホン
酸塩、C_8〜22の長鎖オレフィンスルホン酸塩などが挙げ
られる。また、サルフェート系アニオン性界面活性剤と
しては、C_8〜22の直鎖または分枝鎖のアルキルないしア
ルケニル硫酸エステル塩、C_8〜22のポリオキシエチレン
（EO＝１〜７モル）直鎖または分枝鎖のアルキルない
しアルケニルエーテル硫酸エステル塩、C_8〜22のポリオ
キシエチレン（EO＝１〜７モル）直鎖または分枝鎖の
アルキルフェニルエーテル硫酸エステル塩などが挙げら
れる。ここでEOは、エチレンオキシドの平均付加モル
数を示す。また、ホスフェート系アニオン性界面活性剤
としては、C_8〜22のモノアルキル（またはアルケニ
ル）、ジアルキル（またはアルケニル）あるいはセスキ
リン酸塩、C_8〜22のポリオキシエチレン（EO＝１〜７
モル）モノアルキル（またはアルケニル）、ジアルキル
（またはアルケニル）あるいはセスキリン酸塩などが挙
げられる。石鹸としては、C_8〜24の飽和または不飽和脂
肪酸塩が挙げられる。これらのアニオン性界面活性剤の
対イオンとしての陽イオンは、例えばナトリウム、カリ
ウム、マグネシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ
土類金属イオン、モノエタノールアミン、ジエタノール
アミン、トリエタノールアミンなどのアルカノールアミ
ン、アンモニウムなどである。 ノニオン性界面活性剤としては、C_8〜22のポリオキシエ
チレン（EO＝１〜25モル）直鎖または分枝鎖のアルキ
ルまたはアルケニルエーテル、C_8〜18のポリオキシエチ
レン（EO＝１〜25モル）アルキルまたはアルケニルフ
ェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピ
レンブロックコポリマーなどのオキシアルキレン付加化
合物、C_8〜24の飽和または不飽和脂肪酸アルカノールア
ミドまたはそのアルキレンオキサイド付加物、C_12〜14
の第三級アミンオキシドなどが挙げられる。 両性界面活性剤としては、ジメチルジアルキル
（C_8〜18）アルキルカルボキシベタイン、ジアルキル
（C_8〜18）アミノアルキレンカルボン酸塩、２−アルキ
ル−１−カルボキシ−１−ヒドロキシエチルイミダゾリ
ウムベタインなどが挙げられる。 カチオン性界面活性剤としては、下記の一般式（Ｉ）、
（II）、（III）で表されるものが挙げられる。 （式中のR₁、R₂、R₃、R₄の少なくとも１つはC_12〜24の
アルキルまたはアルケニル基であり、その他はC_1〜4の
アルキル基またはヒドロキシアルキル基あるいはベンジ
ル基を表わし、Ｘはハロゲンを表わす。） （式中のR₅とR₆はC_12〜24のアルキル基またはアルケニ
ル基、R₇はC_1〜4のアルキル基またはヒドロキシアルキ
ル基あるいはベンジル基、R₆はＨまたはCH₃、ｎは１〜
５の整数、Ｘはハロゲンを表わす。） （式中のR₉とR₁₀はC_12〜24のアルキル基またはアルケニ
ル基、ｌおよびｍは１〜20の整数、Ｘはハロゲンを表わ
す。） これらの界面活性剤はそれぞれ単独で用いてもよいし、
２種以上組合せてもよく、その配合量は10〜50wt％が適
当であり、好ましくは20〜40wt％である。 ビルダーとしては、オルソリン酸塩、ピロリン酸塩、ト
リポリリン酸塩、メタリン酸塩、ヘキサメタリンル酸塩
等のリン酸塩；ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢
酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸、ジエチ
レントリアミン五酢酸等のアミノカルボン酸またはこれ
らの塩；クエン酸、ジグリコール酸、リンゴ酸、シュウ
酸、酒石酸、コハク酸などの多価カルボン酸またはこれ
らの塩；ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、アクリル
酸共重合体、ポリマレイン酸、ポリフマル酸、無水マレ
イン酸共重合体などの高分子電解質またはこれらの塩；
ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、カル
ボキシメチルセルロースなどの非電解離高分子；一般式 （IV）で表わされる結晶性または無定形アルミノケイ酸
塩、炭酸塩などの無機塩；トリエタノールアミン、ジエ
タノールアミン、モノエタノールアミンなどのアルカノ
ールアミンが挙げられる。 ｘ（M₂O又はＭ′Ｏ）・Al₂O₃・ｙ（SiO₂）・ｗ（H₂O）
…… （IV） （式中のＭはアルカリ金属、Ｍ′はカルシウムと交換可
能なアルカリ土類金属、ｘ、ｙ、ｗは各成分のそれぞれ
のモル数を表わし、一般的には、ｘは0.7〜1.5yは１〜
３、ｗは任意の数である。） これらビルダーは１種または２種以上組合せて用いら
れ、洗浄剤組成物中に好ましくは１〜50wt％、さらに好
ましくは５〜30wt％配合させる。再汚染防止剤として
は、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコ
ール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンな
どが、蛍光増白剤としては、4,4′−ビス（２−スルホ
スチリル）−ビフェニル塩、4,4′−ビス（４−クロロ
−３−スルホスチリル）−ビフェニル塩、２−（スチル
フェニル）ナフトチアゾール誘導体、4,4′−ビス（ト
リアゾール−２−イル）スチルベン誘導体、ビス（トリ
アジニルアミノ）スチルベンジスルホン酸などが、ハイ
ドロトロープとしては低級アルコール、多価アルコー
ル、低級アリールスルホン酸またはその塩などが挙げら
れ、これらの各成分はいずれもそれぞれ単独で用いても
よいし、２種以上組合せてもよい。 発明の効果 本発明によれば、バチルス・エスピーＹ株から生産され
る新規なアルカリプロテアーゼとこれ以外の他種の酵素
とを併用して用いることにより、優れた洗浄力向上効果
が発揮され、従来知られていた酵素含有洗浄剤組成物に
比べて顕著に洗浄力が改良された極めて実用性の高い洗
浄剤組成物が実現できる。 次に、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
各実施例における評価は、以下の試験方法に従って行な
った。 ・洗浄力 US.Testing社のTerg-O-Tometerを洗浄装置として使用
し、これにタンパク質配合湿式人工汚垢布10枚とセバム
布、洗浄メリヤス布を入れ浴比30倍に合わせ、120r.p.m
で25℃10分間洗浄する。洗浄後は、所定の洗浄濃度のも
の900mlを用い、すすぎは900mlの水で３分間行なう。使
用水は３°DHのものを用いた。洗浄力は次式で算出す
る。 なお、本洗浄力試験法は、油化学30,432（1981）「新し
い人工汚垢に関する研究（第１報）」に準ずる。 実施例１ ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステルナト
リウム塩（炭素数13、直鎖率50％、EO＝３）20wt％、
ポリオキシエチレンアルキルエーテル（炭素数12〜13、
直鎖率80％、EO＝15）15wt％を基準配合組成とし、こ
れに第９表に示すようにアルカノールアミン、パラトル
エンスルホン酸、酵素を含有させた各種液体洗浄剤組成
物を調製し、それぞれの組成物の洗浄力を評価し、その
結果を第９表に示した。 実施例２ 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム10wt％、α
−オレフィンスルホン酸ナトリウム10wt％、ケイ酸ナト
リウム（SiO/Na₂Oのモル比２）10wt％、炭酸ナトリウム
10wt％、ポリエチレングリコール（＃6000）1wt％、牛
脂石鹸1wt％、ゼオライト（4A型）15wt％、水5wt％を基
準配合組成とし、第10表に示すように酵素を含有させた
粒状洗浄剤組成物を調製し、それぞれの組成物の洗浄力
の評価し、その結果を第10表に示した。

【図面の簡単な説明】

第１図はYa酵素およびYb酵素の精製段階を示すフローシ
ートである。 第２図はＹ酵素のDEAE-53セルロースのアニオン交換ク
ロマトグラフィーにかけた際の溶出曲線を示すグラフで
ある。 第３図はYa酵素の至適pHおよび安定pH領域を、第４図は
Yb酵素の至適pHおよび安定pH領域を示すグラフである。 第５図はYa酵素の至適温度および耐熱性を、第６図はYb
酵素の至適温度および耐熱性を示すグラフである。 第７図はYa酵素の紫外線吸収スペクトル曲線を、第８図
はYb酵素の紫外線吸収スペクトル曲線を示すグラフであ
る。 第９図はYa酵素およびYb酵素の分子量決定の際の検量線
を示すグラフである。 第10図はYa酵素の、第11図はYb酵素のそれぞれ等電点電
気泳動模様を示すグラフである。 第12図はYa酵素の、第13図はYb酵素のそれぞれゲル過
クロマトグラフィー溶出曲線を示すグラフである。 第14図はYa酵素の高速液体クロマトグラフィー溶出曲線
を示すグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】バチルス・エスピー（Bacillus sp.）Ｙ株
   （微工研条寄第1029号）から生産されるアルカリプロテ
   アーゼと他種の酵素とを含有することを特徴とする酵素
   含有洗浄剤組成物。