JPH0770130A - 新規な環状エンジイン抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 一般式（Ｉ） （式中Ｒ₁ は水素、或いはＲ₅ −ＯＣＯ−基を意味し、
Ｒ₅ は（置換）フェニル、（置換）ベンジル、（置換）
Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル、（置換）ナフチル、8-キノリル、
9-フルオレニルメチル、2-モルフォリノエチル、4-メト
キシ-9- アクリジニル、2-アントラキノリルメチル、6-
ヒドロキシ-2- アントラキノリル基を意味し、Ｒ₂ は、
水素、ヒドロキシ、低級アルコキシ基、低級アシルオキ
シ基を意味し、Ｒ₃ は、水素、ヒドロキシ、低級アルコ
キシ、低級アルキルシリルオキシ、低級アシルオキシ基
を意味し、Ｒ₄ は、低級アルキル基を意味する。）にて
示される新規な環状エンジイン化合物及び当該環状エン
ジイン化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。 【効果】 本発明化合物は、ＤＮＡ切断という新しい作
用機構によって腫瘍細胞の増殖を阻止し、抗腫瘍剤とし
て有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な環状エンジイン化
合物、及びそれらを有効成分として含有する抗腫瘍剤に
係わる。

【０００２】

【従来の技術】近年、分子内に特徴的なエンイン構造を
有し、極めて強力な抗癌活性を示す抗腫瘍性抗生物質が
相次いで発見された。カリチェミシン [J. Am. Chem.So
c., Vol. 109, 3466-3468 (1987)] 、エスペラミシン
[J. Am. Chem.Soc., Vol. 109, 3462-3464 (1987)]、ダ
イネミシンA [J. Antibiot., Vol.42, 1449-1452(199
0)] 、及びネオカルチノスタチンクロモフォア[Tetrahe
dron Lett., Vol. 26, 331-334 (1985)] の４つの化合
物である。前三者は共通する10員環環状エンジイン構造
を有しているが、後者は９員環環状ジエンジイン構造を
有している。これらの化合物はいずれも分子の構造変化
により分子内のエンイン部分がBergman 型の反応を行っ
て芳香環化を起こし、発生するベンゼノイドジラジカル
がDNA を切断することにより抗癌活性が発現することが
証明されている。

【０００３】この全く新しい抗癌活性の発現機構と特徴
的な構造から、ここ数年これらの化合物の合成研究が活
発に行われている。S. L. Schreiber らはダイネミシン
Ａの５環性類縁体の合成を報告している[J. Am. Chem.
Soc., Vol. 112, 7410-7411 (1990)] 。K. C. Nicolaou
らはダイネミシンＡの４環性類縁体を合成し、その抗腫
瘍活性を報告している[ 国際特許 WO 92/02522] 。又、
ダイネミシンＡの３環性類縁体は、P. A. Wenderら[J.
Am. Chem. Soc., Vol. 113, 2311-2313 (1991)]、及び
P. Magnus ら[J. Chem. Soc., Chem Commun., 544-546
(1991)] により報告されており、本発明者らも、ダイネ
ミシンＡの３環性類縁体の合成を報告している[Chem. L
ett., 1271-1274 (1991)] 。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、今までにな
い全く新規な環状エンジイン構造を有し、且つ新規なDN
A 切断機構によって、従来の抗腫瘍剤よりもさらに優れ
た抗腫瘍活性を有する化合物及びそれを有効成分とする
臨床上有用である抗腫瘍剤を提供することを目的とする
ものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ダイネミシ
ンＡを母化合物としてデザインした全く新規な構造を有
する環状エンジイン化合物が、極めて優れた抗腫瘍活性
を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。

【０００６】即ち、本発明は、一般式（Ｉ）

【０００７】

【化２】

【０００８】（式中Ｒ₁ は水素、或いはＲ₅ −ＯＣＯ−
基を意味し、Ｒ₅ はフェニル、置換フェニル、ベンジ
ル、置換ベンジル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル、置換Ｃ₁ −Ｃ
₁₀アルキル、ナフチル、置換ナフチル、8-キノリル、9-
フルオレニルメチル、2-モルフォリノエチル、4-メトキ
シ-9- アクリジニル、2-アントラキノリルメチル、6-ヒ
ドロキシ-2- アントラキノリル基を意味し、Ｒ₂ は、水
素、ヒドロキシ、低級アルコキシ基、低級アシルオキシ
基を意味し、Ｒ₃ は、水素、ヒドロキシ、低級アルコキ
シ、低級アルキルシリルオキシ、低級アシルオキシ基を
意味し、Ｒ₄ は、低級アルキル基を意味する。）にて示
される新規な環状エンジイン化合物、及びそれらを有効
成分として含有する抗腫瘍剤に関する。

【０００９】一般式（Ｉ）で示される化合物は、下記反
応工程１、２、３及び４に示すプロセス及び方法により
製造することができる。これらの製造方法は単なる例示
であって、これらに限定されるものではない。

【００１０】反応工程１は、一般式（Ｉ）で示される化
合物のうちＲ₁ がＲ₅ −ＯＣＯ−基であり、Ｒ₃ がヒド
ロキシ基である化合物（I-a ）の製造法を示したもので
ある。出発物質であるキノリン誘導体１は、Chem. Let
t., 1271-1274 (1991) に記載の方法に従って合成する
ことができる。この化合物にテトラヒドロフランのよう
なエーテル系溶媒中でGrignard試薬を付加し、次いでＲ
₅ −ＯＣＯClと反応させることにより１（２Ｈ）−キノ
リンカルボン酸誘導体２を得る。化合物２をアルコール
溶媒中でp-トルエンスルホン酸のような酸触媒下に、保
護基であるtert−ブチルジメチルシリル基を除去して化
合物３を得る。

【００１１】化合物３のオレフィンを適当な溶媒、例え
ばジクロロメタン中で過酸化物、好ましくはm-クロロ過
安息香酸により立体選択的にエポキシ化してエポキシア
ルコール４を得る。化合物４の水酸基を酸化剤、好まし
くはDMSO酸化によりエポキシケトン５を得る。

【００１２】化合物５をベンゼン或いはエーテルのよう
な溶媒中で塩基、例えばn-プロピルアミン或いはn-ブチ
ルアミンの存在下にPd錯体−Cu(I) を触媒として、Tetr
ahedron Lett., Vol. 29, 4217-4220 (1988)に記載の化
合物（Ｚ）−１−クロロ−４−トリメチルシリル−１−
ブテン−３−インとカプリングしてエンジイン６を得
る。Pd錯体としては、ビス（トリフェニルホスフィン）
パラジウム(II)アセテート錯体、テトラキス（トリフェ
ニルホスフィン）パラジウム(0) 錯体、或いはトリス
（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム(0)-クロロホ
ルム錯体が好ましい。

【００１３】また、Cu(I) 触媒としてはヨウ化銅(I) が
好ましい。次いで、化合物６をテトラヒドロフラン、或
いはアセトニトリルのような溶媒中、クラウンエーテル
の存在下にフッ化セシウムにより閉環して、一般式（I-
a ）で示される環状エンジイン化合物を得ることができ
る。

【００１４】

【化３】

【００１５】反応工程２は、化合物（I-a ）の別途合成
法を示したものである。即ち、一般式（I ）で示される
化合物のうちＲ₁ がＰｈＯＣＯ−基であり、Ｒ₃ がヒド
ロキシ基である化合物（I-b ）とＲ₅ −ＯNaとの求核置
換反応により化合物（I-a ）を製造することができる。
反応溶媒としては、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサ
ンのようなエーテル系溶媒、アセトニトル、N,N-ジメチ
ルホルムアミド等の溶媒が好ましく、反応温度は、0 〜
50℃が好ましい。

【００１６】

【化４】

【００１７】反応工程３は、化合物（I-a ）から一般式
（Ｉ）で示される化合物のうちＲ₁ がＲ₅ −ＯＣＯ−基
である化合物（I-c ）の製造法を示したものである。ヒ
ドロキシ基のアルキル化、アシル化、シリル化、及びデ
ヒドロキシ化は公知の一般的方法により容易に行うこと
ができる。

【００１８】

【化５】

【００１９】反応工程４は、化合物（I-c ）から一般式
（Ｉ）で示される化合物のうちＲ₁ が水素である化合物
（I-d ）の製造法を示したものである。テトラヒドロフ
ランのようなエーテル系溶媒中還元剤、好ましくは水素
化リチウムアルミニウムによりカルバメートのみを還元
して製造することができる。

【００２０】

【化６】

【００２１】次に上記製法によって得られる一般式
（Ｉ）で示される環状エンジイン化合物の代表例を表１
に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】

【発明の効果】本発明による新規な環状エンジイン化合
物は、今までにない全く新規な構造を有し、且つ新規な
DNA 切断作用機構による優れた抗腫瘍活性を有してお
り、該化合物を有効成分とする抗腫瘍剤は極めて臨床上
有用である。

【００２４】

【医薬とする場合の剤型及び投与量】本発明による一般
式（Ｉ）で示される環状エンジイン化合物を有効成分と
して製剤化する場合の剤型に制限はなく、従って錠剤、
カプセル剤、散剤、顆粒剤のような固形製剤となすこと
も、溶液、懸濁液、乳剤のような液状製剤となすことも
でき製剤化は常法により行うことができる。

【００２５】固形製剤の場合には、デンプン、乳糖、グ
ルコース、燐酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウ
ム、アラビアゴム等の賦形剤を用いることができ、必要
であれば、滑沢剤、崩壊剤、被覆剤、着色剤等も使用す
ることができる。液状製剤の場合には安定剤、溶解補助
剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤等を含有してい
ることができる。

【００２６】本発明による化合物の投与量はその種類、
剤型、疾患の程度、或いは患者の年齢等の要素に依存す
るが、通常成人に対して0.1 〜100mg ／日程度が適当で
ある。

【００２７】

【実施例等】次に、製造例、薬効試験例及び製剤例によ
り本発明を具体的に説明する。

【００２８】実施例１ ４−［１−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシ
リル］オキシ］エチル］−２−エチニル−１（２Ｈ）−
キノリンカルボン酸フェニル ４−［１−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシ
リル］オキシ］エチル］キノリン 1.00g (3.48mmol) を
無水テトラヒドロフラン15mlに溶解し、-60 ℃で撹拌下
に0.5M臭化エチニルマグネシウム- テトラヒドロフラン
溶液8.35ml (4.18mmol) を滴下した。反応混合物を0 ℃
まで昇温し、再び-60 ℃に冷却した後、クロロ炭酸フェ
ニル 654mg (4.18mmol)を滴下した。反応混合物を25℃
まで昇温し、１時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウム
水溶液を加え、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を水
洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
した後、減圧濃縮して粗生成物を得た。これをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（エーテル−ｎ−ヘキサン
=1:1）により精製して標題化合物を1.50g （定量的）得
た。

【００２９】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ 0.11 (3H,
s), 0.13 (3H, s), 1.49 (3H, d,J=6.4Hz), 2.21 (1H,
d, J=2.0Hz), 4.73 (1H, q, J=6.4Hz), 5.96 (1H, dd,J
=6.8, 2.4Hz), 6.08 (1H, d, J=6.8Hz), 7.12〜7.41 (8
H, m), 7.80 (1H, dd, J=7.8, 2Hz). EI-MS m/z ：433 (M+).

【００３０】実施例２ ４−（１−ヒドロキシエチル）−２−エチニル−１（２
Ｈ）−キノリンカルボン酸フェニル ４−［１−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシ
リル］オキシ］エチル］−２−エチニル−１（２Ｈ）−
キノリンカルボン酸フェニル 1.50g(3.48mmol) をメタ
ノール 20ml に溶解し、p-トルエンスルホン酸一水和物
330mg(1.74mmol)を加えて25℃で３時間撹拌した。反応
混合物にピリジン138mg (1.74mmol)を加えた後、減圧濃
縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、水洗し、飽和食塩
水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃
縮して粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（エーテル−ｎ−ヘキサン=1:1）により精
製して標題化合物を1.00g（収率91% ）得た。

【００３１】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ1.56 (3H,
d, J=6Hz), 1.87 (1H, d, J=4Hz),2.23 (1H, d, J=3H
z), 4.91 (1H, m), 6.00 (1H, dd, J=6, 3Hz), 6.18 (1
H,dd, J=6, 1Hz), 7.15 〜7.42 (7H, m), 7.60 (1H, d
d, J=8, 2Hz), 7.76(1H, d, J=8Hz). EI-MS m/z ：319 (M+).

【００３２】実施例３ ７ｂ−（１−ヒドロキシエチル）−２−エチニル−１
ａ，７ｂ−ジヒドロオキシレノ［ｃ］キノリン−３（２
Ｈ）−カルボン酸フェニル ４−（１−ヒドロキシエチル）−２−エチニル−１（２
Ｈ）−キノリンカルボン酸フェニル 550mg (1.72mmol)
をジクロロメタン 10ml に溶解し、リン酸水素ナトリウ
ム 740mg (5.20mmol) を加え5゜C に冷却し、これにm-ク
ロロ過安息香酸450mg (2.60mmol)を約５分間で加えた。
反応混合物を5゜C で２時間撹拌した後、チオ硫酸ナトリ
ウム水溶液を加えて過剰のm-クロロ過安息香酸を還元
し、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を水洗し、
飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した
後、減圧濃縮して標題化合物を550mg （収率95% ）得
た。

【００３３】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ1.44 (3H,
d, J=6Hz), 1.58 (1H, s), 2.23(1H,d, J=2Hz), 4.09
(1H, d, J=3Hz), 4.84 (1H, q, J=6Hz), 5.94 (1H, t,J
=2Hz), 7.13 (2H, d, J=7Hz), 7.18 〜7.30 (2H, m),
7.32〜7.43 (3H, m),7.54 (1H, dd, J=8, 1Hz), 7.60
(1H, d, J=8Hz). EI-MS m/z ：335 (M+).

【００３４】実施例４ ７ｂ−アセチル−２−エチニル−１ａ，７ｂ−ジヒドロ
オキシレノ［ｃ］キノリン−３（２Ｈ）−カルボン酸フ
ェニル ７ｂ−（１−ヒドロキシエチル）−２−エチニル−１
ａ，７ｂ−ジヒドロオキシレノ［ｃ］キノリン−３（２
Ｈ）−カルボン酸フェニル 520mg (1.55mmol) をジクロ
ロメタン 4ml及び無水ジメチルスルホキシド 8mlに溶解
し、トリエチルアミン 3.20ml (23.0mmol)を加えた。溶
液を氷浴上で冷却し、三酸化イオウ- ピリジン錯体 2.4
7g (15.5mmol) を約5 分間で加え、25℃で1.5 時間撹拌
した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加
え、酢酸エチルで２回抽出し、有機層を水洗し、飽和食
塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧
濃縮して粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（ジクロロメタン）により精製して標題
化合物を450mg （収率87% ）得た。

【００３５】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ 2.27(1H,
d, J=2Hz), 2.37 (3H, s), 4.04(1H,d, J=3Hz), 5.99
(1H, d, J=3Hz), 7.13 (2H, d, J=8Hz), 7.26 (2H,br-
t, J=8Hz), 7.32 〜7.45 (3H, m), 7.58 (1H, br-d, J
=8Hz), 7.69 (1H,dd, J=8, 1Hz). EI-MS m/z ：333 (M+).

【００３６】実施例５ ７ｂ−アセチル−１ａ，７ｂ−ジヒドロ−２−［（Ｚ）
−６−（トリメチルシリル）−３−ヘキセン−１、５−
ジイニル］オキシレノ［ｃ］キノリン−３（２Ｈ）−カ
ルボン酸フェニル ７ｂ−アセチル−２−エチニル−１ａ，７ｂ−ジヒドロ
オキシレノ［ｃ］キノリン−３（２Ｈ）−カルボン酸フ
ェニル 1.23g (3.70mmol) 、酢酸パラジウム(II) 42mg
(0.185mmol) 、及びトリフェニルホスフィン 97mg (0.3
7mmol)を脱気した無水ベンゼン 30ml に溶解し、この溶
液に（Ｚ）−１−クロロ−４−トリメチルシリル−１−
ブテン−３−イン 5.86g (37.0mmol) 及びn-プロピルア
ミン0.76ml (9.25mmol) を加え、25℃で1.5 時間撹拌し
た。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、
エーテルで３回抽出し、有機層を水洗し、飽和食塩水で
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し
て粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（エーテル−ｎ−ヘキサン=1:1）により精製し
て標題化合物を1.17g （収率78% ）得た。

【００３７】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ 0.23 (9H,
s), 2.37 (3H, s), 4.07 (1H, d,J=2.5Hz), 5.69 (1
H, dd, J=11, 2.0Hz), 5.84 (1H, d, J=11Hz), 6.24(1
H,d,J=2.5Hz), 7.14 (2H, d, J=8.0Hz), 7.19 〜7.29
(2H, m), 7.33〜7.44(3H, m), 7.59 (1H, br-d, J=8.0H
z), 7.71 (1H, dd, J=8.0, 1.0Hz). EI-MS m/z ：455 (M+).

【００３８】実施例６ （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
トリメチルシリルオキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，
２，１０−（エポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロ
ドデシン−１−カルボン酸フェニル フッ化セシウム 43.8mg (0.288mmol) を無水テトラヒド
ロフラン 20ml に懸濁し、これに７ｂ−アセチル−１
ａ，７ｂ−ジヒドロ−２−［（Ｚ）−６−（トリメチル
シリル）−３−ヘキセン−１、５−ジイニル］オキシレ
ノ［ｃ］キノリン−３（２Ｈ）−カルボン酸フェニル 7
8mg (0.19mmol)を無水テトラヒドロフラン 2.5mlに溶解
して加え、更に１８−クラウン−６ エーテル 76mg(0.
288mmol) を無水テトラヒドロフラン 2mlに溶解して加
え、25℃で３時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アン
モニウム溶液を加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機層
を水洗し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した後、減圧濃縮して粗生成物を得た。これをシリ
カゲル薄層クロマトグラフィー（エーテル−ｎ−ヘキサ
ン=1:1）により精製して標題化合物を11mg（収率16% ）
得た。

【００３９】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ1.73 (3H,
s), 4.07 (1H, d, J=3.0Hz), 5.67(1H, dd, J=10, 2.0
Hz), 5.82 (1H, d, J=10Hz), 5.89 (1H, dd, J=3.0,2.0
Hz), 7.14 (2H, br-d, J=8.0Hz), 7.20〜7.28 (2H, m),
7.31〜7.41(3H,m),7.51 (1H, br-d, J=8.0Hz), 8.80
(1H, br-d, J=8.0Hz). EI-MS m/z ： 383 (M+).

【００４０】実施例７ （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
アセトキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，２，１０−（エ
ポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロドデシン−１−
カルボン酸エチル （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０
Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，４，７，８−テトラデヒドロ−
２，９−ジヒドロ−９−トリメチルシリルオキシ−９−
メチル−１Ｈ−１０，２，１０−（エポキシメテノ）−
１−ベンズアザシクロドデシン−１−カルボン酸エチル
17mg (0.051mmol) をピリジン 0.8mlに溶解し、その中
へ無水酢酸 0.8mlを加え、室温にて34時間撹拌した。反
応混合物にトルエンを加えて減圧濃縮し粗生成物を得
た。これをシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ジクロ
ロメタン）により精製して標題化合物を8.2mg （収率43
% ）得た。

【００４１】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ1.29 (3H,
t, J=7.0Hz), 1.80 (3H, s), 2.21(3H, s), 4.09 (1H,
d, J=3.0Hz), 4.23 (2H, m), 5.66 (1H, dd, J=9.5,
1.5 Hz), 5.83 (1H, d, J=9.5Hz), 5.84 (1H, m), 7.17
(1H, m), 7.32 (1H,dt, J=8.0, 1.5Hz), 7.39 (1H, b
r-d, J=8.0Hz), 8.00 (1H, br-d, J=8.0Hz).EI-MS m/
z： 377 (M+).

【００４２】実施例８ （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
トリメチルシリルオキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，
２，１０−（エポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロ
ドデシン−１−カルボン酸フェニル （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
トリメチルシリルオキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，
２，１０−（エポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロ
ドデシン−１−カルボン酸フェニル 2.0mg (5.4 μmol)
を無水ピリジン0.1ml に溶解し、ビス（トリメチルシリ
ル）トリフルオロアセトアミド 0.1ml (0.4mmol)を加え
て25℃で24時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し
て標題化合物を2.4mg（定量的）得た。

【００４３】¹H-NMR (270MHz,CDCl₃ ) ：δ 0.29 (9H,
s), 1.71 (3H, s), 4.06 (1H, d,J=2.9Hz), 5.64 (1H,
dd, J=10, 2.0Hz), 5.81 (1H, d, J=10Hz), 5.89 (1H,
m),7.14 (2H, br-d, J=8.0Hz), 7.20〜7.28 (2H, m),
7.31〜7.41(3H, m),7.51 (1H, br-d, J=8.0Hz), 8.69
(1H, dd, J=8.3, 1.5Hz). EI-MS m/z ： 455 (M+).

【００４４】実施例９ （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
トリメチルシリルオキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，
２，１０−（エポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロ
ドデシン （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
トリメチルシリルオキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，
２，１０−（エポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロ
ドデシン−１−カルボン酸フェニル2.4mg (5.4μmol)を
無水テトラヒドロフラン1ml に溶解し5 ℃に冷却した。
この溶液に1.0M水素化リチウムアルミニウム−テトラヒ
ドロフラン溶液 14 μl (14 μmol)を滴下し、5 ℃で30
分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶
液 50 μl を加えた後、エーテル約5ml を加え、有機層
を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮して標題
化合物の粗生成物を得た。標題化合物は室温下に於て極
めて不安定である。 FAB-MS m/z： 336 [ (M+H)+].

【００４５】薬効試験例１（DNA 切断活性） DNA 溶液は、90% のSupercoiled DNA を含むバクテリオ
ファージφX174を滅菌した50mMリン酸緩衝液(pH7.4) に
て32.5μg/mlに調製した。本発明による環状エンジイン
化合物は、ジメチルスルホキシドに溶解して10mM溶液を
作製した。反応液はDNA 溶液 2μl 、環状エンジイン化
合物溶液 1μl 、及び50mMリン酸緩衝液10μl を混合し
て作製した。上記反応液を37℃、18時間インキュベート
した。反応終了後各溶液に0.25%ブロモフェノールブル
ー含有30% グリセロール溶液 2μl を添加混合し、1%ア
ガロースゲル電気泳動（50V 、40分）を行った。泳動後
ゲルを 0.5μg/mlの臭化エチジウム溶液にて15分間処理
し、紫外線（312nm ）照射してDNA を検出した。DNA 切
断活性の判定は、Linear DNAとNicked DNAの増加を指標
とし、視察により行った。電気泳動の結果を図１に示し
た。全ての被検薬物においてLinear DNAとNicked DNA
が検出され、DNA 切断活性を示すことが明らかとなっ
た。

【００４６】薬効試験例２（KB細胞に対する増殖阻害活
性） 5 ×10⁴ 個／mlのKB細胞を12穴培養プレートに0.7ml/we
llで植え込み、37℃で24時間培養後に薬物を添加した培
地と交換し、更に、48時間培養した。被検薬物はジメチ
ルスルホキシドに溶解して1mg/ml溶液を作製し、EMEM 1
0%牛胎児血清培地で希釈して0.1 、1 、10μg/mlの薬物
濃度を調製した。薬物添加時と薬物添加後48時間後に、
細胞をトリプシン-EDTA で剥離した後、細胞数（核数）
をコールターカウンターで計測した。増殖阻害率は次式
により算出し、グラフより 50%増殖阻害濃度（IC₅₀）を
求めた結果を表２に示した。

【００４７】 増殖阻害率(%) = (A - B) ／(A - C) ×100 A ：薬物無添加区の48時間後の細胞数 B ：薬物添加区の48時間後の細胞数 C ：薬物添加時の細胞数

【００４８】薬効試験例３（L1210 細胞に対する増殖阻
害活性） L1210 細胞を12穴培養プレートに2.5 ×10⁴ 個／ml／we
llで植え込み、同時に薬物を添加し、37℃で48時間培養
した。被検薬物は薬効試験例２と同様にして調製した。
但し、培地はRPMI1640 10%牛胎児血清培地を使用した。
薬物添加後48時間後に、細胞数（核数）をコールターカ
ウンターで計測した。増殖阻害率は次式により算出し、
グラフより 50%増殖阻害濃度（IC₅₀）を求めた結果を表
２に示した。

【００４９】 増殖阻害率(%) = (A - B) ／(A - C) ×100 A ：薬物無添加区の48時間後の細胞数 B ：薬物添加区の48時間後の細胞数 C ：薬物添加時の細胞数

【００５０】薬効試験例４（MOLT-4細胞に対する増殖阻
害活性） MOLT-4細胞を12穴培養プレートに1 ×10⁵ 個／ml／well
で植え込み、同時に薬物を添加し、37℃で48時間培養し
た。被検薬物は薬効試験例３と同様にして調製した。薬
物添加後48時間後に、細胞数（核数）をコールターカウ
ンターで計測した。増殖阻害率は次式により算出し、グ
ラフより50% 増殖阻害濃度IC₅₀）を求めた結果を表２に
示した。

【００５１】 増殖阻害率(%) = (A - B) ／(A - C) ×100 A ：薬物無添加区の48時間後の細胞数 B ：薬物添加区の48時間後の細胞数 C ：薬物添加時の細胞数

【００５２】

【表２】

【００５３】製剤例１（錠剤） 下記諸成分を配合して、常法により錠剤を製造した。

【００５４】製剤例２（注射剤） 下記諸成分を配合して、常法により注射剤を製造し、無
菌下にバイアルに装填した。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は薬効試験例１（ＤＮＡ切断活性）におけ
る電気泳動結果を示すものである。

【符号の説明】

１〜Ｌｉｎｅａｒ ＤＮＡ ２〜コントロール ３〜実施例７の化合物 ４〜実施例６の化合物 ５〜実施例９の化合物

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 海野 良一 名古屋市東区東外堀町35番地 株式会社三 和化学研究所内 (72)発明者 稲垣 英晃 名古屋市東区東外堀町35番地 株式会社三 和化学研究所内 (72)発明者 城森 孝仁 名古屋市東区東外堀町35番地 株式会社三 和化学研究所内 (72)発明者 道下 久 名古屋市東区東外堀町35番地 株式会社三 和化学研究所内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式（Ｉ） 【化１】 （式中Ｒ₁ は水素、或いはＲ₅ −ＯＣＯ−基を意味し、
   Ｒ₅ はフェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジ
   ル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル、置換Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル、ナ
   フチル、置換ナフチル、8-キノリル、9-フルオレニルメ
   チル、2-モルフォリノエチル、4-メトキシ-9- アクリジ
   ニル、2-アントラキノリルメチル、6-ヒドロキシ-2- ア
   ントラキノリル基を意味し、Ｒ₂ は、水素、ヒドロキ
   シ、低級アルコキシ基、低級アシルオキシ基を意味し、
   Ｒ₃ は、水素、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アル
   キルシリルオキシ、低級アシルオキシ基を意味し、Ｒ₄
   は、低級アルキル基を意味する。）にて示される新規な
   環状エンジイン化合物。
2. 【請求項２】請求項１に記載の化合物が、 （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
   ４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
   アセトキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，２，１０−（エ
   ポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロドデシン−１−
   カルボン酸エチル （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
   ４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
   トリメチルシリルオキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，
   ２，１０−（エポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロ
   ドデシン−１−カルボン酸フェニル （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
   ４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
   ヒドロキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，２，１０−（エ
   ポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロドデシン−１−
   カルボン酸フェニル （２Ｒ^＊，５Ｚ，９Ｓ^＊，１０Ｒ^＊, １６Ｒ^＊）−３，
   ４，７，８−テトラデヒドロ−２，９−ジヒドロ−９−
   ヒドロキシ−９−メチル−１Ｈ−１０，２，１０−（エ
   ポキシメテノ）−１−ベンズアザシクロドデシンである
   ことを特徴とする新規な環状エンジイン化合物。
3. 【請求項３】請求項１、２に記載の化合物を有効成分と
   して含有する抗腫瘍剤。