JPH0772172B2 - Ｌ−プロリンの分離精製法 - Google Patents
Ｌ−プロリンの分離精製法Info
- Publication number
- JPH0772172B2 JPH0772172B2 JP23631486A JP23631486A JPH0772172B2 JP H0772172 B2 JPH0772172 B2 JP H0772172B2 JP 23631486 A JP23631486 A JP 23631486A JP 23631486 A JP23631486 A JP 23631486A JP H0772172 B2 JPH0772172 B2 JP H0772172B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proline
- acetyl
- oxyproline
- mixture
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 title claims description 40
- 229960002429 proline Drugs 0.000 title claims description 38
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 title claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- GNMSLDIYJOSUSW-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-proline Chemical compound CC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GNMSLDIYJOSUSW-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 10
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 10
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 10
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000000397 acetylating effect Effects 0.000 claims description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 4
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000008548 L-prolines Chemical class 0.000 description 2
- -1 N-acetyl compound Chemical class 0.000 description 2
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- YKYOUMDCQGMQQO-UHFFFAOYSA-L cadmium dichloride Chemical compound Cl[Cd]Cl YKYOUMDCQGMQQO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 239000004469 amino acid formulation Substances 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 238000011914 asymmetric synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000011982 enantioselective catalyst Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pyrrole Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 従来、Ｌ−プロリンは総合アミノ酸製剤として輸液等へ
の配合がなされ、消化器疾患の患者等の栄養補給に利用
されているものであるが、近年においては、Ｎ−メルカ
プトアシル−Ｌ−プロリンが血圧降下剤として顕著な効
果を持つことが見い出され、またＬ−プロリン誘導体を
不斉触媒として用いるケトンの光学活性アルコールへの
還元等、高選択的な不斉合成反応が報告されるなど（T.
Mukaiyama,Chem.Lett.1984（12）2071）その利用価値は
医薬に限らず合成化学工業分野にも増大しつつあるもの
である。
の配合がなされ、消化器疾患の患者等の栄養補給に利用
されているものであるが、近年においては、Ｎ−メルカ
プトアシル−Ｌ−プロリンが血圧降下剤として顕著な効
果を持つことが見い出され、またＬ−プロリン誘導体を
不斉触媒として用いるケトンの光学活性アルコールへの
還元等、高選択的な不斉合成反応が報告されるなど（T.
Mukaiyama,Chem.Lett.1984（12）2071）その利用価値は
医薬に限らず合成化学工業分野にも増大しつつあるもの
である。
［従来の技術］ Ｌ−プロリンは天然のアミノ酸であり、多くの蛋白質中
に含まれているが、特にゼラチン中に多くその含有率は
約15％にも達する。従って安価に多量に入手し得るゼラ
チンを加水分解し、これより分離精製操作を加えること
により工業的に安価に生産し得るものである。
に含まれているが、特にゼラチン中に多くその含有率は
約15％にも達する。従って安価に多量に入手し得るゼラ
チンを加水分解し、これより分離精製操作を加えること
により工業的に安価に生産し得るものである。
Ｌ−プロリンの分離法としては、古くは蛋白加水分解物
よりのエステル分留法（Fischer,E.,Z.Physiol.Chem.,3
3,151（1901））や銅塩法（Klabunde,H.K.,J.Biol.Che
m.,90,293（1931））、ブタノール抽出法（Dakin,H.D.,
Z.Phisiol.Chem.,44,499（1920））および、Ｌ−プロリ
ンのみを選択的に沈殿させるロダニル塩法（Bergmann,
M.,J.Biol.Chem.,110.471（1935））等が知られている
が、これらの方法は精製純度が低く、銅やクロムなど重
金属を用いる点等、工業的規模での実施が困難なもので
ある。
よりのエステル分留法（Fischer,E.,Z.Physiol.Chem.,3
3,151（1901））や銅塩法（Klabunde,H.K.,J.Biol.Che
m.,90,293（1931））、ブタノール抽出法（Dakin,H.D.,
Z.Phisiol.Chem.,44,499（1920））および、Ｌ−プロリ
ンのみを選択的に沈殿させるロダニル塩法（Bergmann,
M.,J.Biol.Chem.,110.471（1935））等が知られている
が、これらの方法は精製純度が低く、銅やクロムなど重
金属を用いる点等、工業的規模での実施が困難なもので
ある。
一方、ゼラチン加水分解物を亜硝酸で処理し、他の一級
のＬ−アミノ酸をオキシ酸として分別した後に得られる
Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物よりピクリン
酸塩（Town,B.W.,Biol.Chem.J.（London）、30,1837（1
936））もしくは塩化カドミウム塩（Sprer,H.,et al,
Z.Physiol.Chem.,187,84（1930））としてＬ−プロリン
のみを分離精製する方法が見い出されている。
のＬ−アミノ酸をオキシ酸として分別した後に得られる
Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物よりピクリン
酸塩（Town,B.W.,Biol.Chem.J.（London）、30,1837（1
936））もしくは塩化カドミウム塩（Sprer,H.,et al,
Z.Physiol.Chem.,187,84（1930））としてＬ−プロリン
のみを分離精製する方法が見い出されている。
しかしながら、これらもまた爆発性をもつピクリン酸や
重金属のカドミウムを用いなければならない点等、Ｌ−
プロリンの工業的分離精製法として充分なものではなか
った。
重金属のカドミウムを用いなければならない点等、Ｌ−
プロリンの工業的分離精製法として充分なものではなか
った。
［発明の目的］ 本発明は、安価かつ工業的規模で、純度の高いＬ−プロ
リンを分離精製する方法を提供することを目的とする。
リンを分離精製する方法を提供することを目的とする。
［発明の経緯］ 本発明者らは、上記目的に沿って鋭意検討の結果、以下
に示す知見を得た。
に示す知見を得た。
まず、Ｌ−プロリンはアルコールに易溶性の唯一のアミ
ノ酸であり、Ｌ−オキシプロリンを含む他のＬ−アミノ
酸と性質を異にするため、このアルコールに対する溶解
性を利用し、分離精製する方法が考えられる。
ノ酸であり、Ｌ−オキシプロリンを含む他のＬ−アミノ
酸と性質を異にするため、このアルコールに対する溶解
性を利用し、分離精製する方法が考えられる。
しかしながら、Ｌ−オキシプロリンはＬ−プロリンの存
在下ではアルコールにも溶け込むため、Ｌ−プロリンを
純度良く分離精製することは困難である。また一般のＬ
−アミノ酸について行なわれる、水からの再結晶法につ
いてもＬ−プロリンに比べＬ−オキシプロリンの溶解度
は小さいため、Ｌ−オキシプロリンの混入量が多い場
合、これを除去することは出来ず分離精製は困難であ
る。
在下ではアルコールにも溶け込むため、Ｌ−プロリンを
純度良く分離精製することは困難である。また一般のＬ
−アミノ酸について行なわれる、水からの再結晶法につ
いてもＬ−プロリンに比べＬ−オキシプロリンの溶解度
は小さいため、Ｌ−オキシプロリンの混入量が多い場
合、これを除去することは出来ず分離精製は困難であ
る。
そこで本発明者らはＬ−プロリンの誘導体での分離精製
を考え、種々検討を行った。その結果、最も安価に製造
されるＮ−アシル体であるＮ−アセチル−Ｌ−プロリン
は良好な結晶性をもつこと、また水に対する溶解度を調
べたところ、他のＬ−オキシプロリンを含めたＬ−アミ
ノ酸のＮ−アセチル体のもつ傾向とはまったく逆に、Ｎ
−アセチル−Ｌ−プロリンの溶解度はＬ−プロリンに比
べて著しく減少すること（25℃においては1/20に減少す
る）、そのためＬ−プロリンとＬ−オキシプロリンに関
しては、遊離体とＮ−アセチル体では溶解度差が逆転す
ることを見い出した（第１図参照）。
を考え、種々検討を行った。その結果、最も安価に製造
されるＮ−アシル体であるＮ−アセチル−Ｌ−プロリン
は良好な結晶性をもつこと、また水に対する溶解度を調
べたところ、他のＬ−オキシプロリンを含めたＬ−アミ
ノ酸のＮ−アセチル体のもつ傾向とはまったく逆に、Ｎ
−アセチル−Ｌ−プロリンの溶解度はＬ−プロリンに比
べて著しく減少すること（25℃においては1/20に減少す
る）、そのためＬ−プロリンとＬ−オキシプロリンに関
しては、遊離体とＮ−アセチル体では溶解度差が逆転す
ることを見い出した（第１図参照）。
この事実に基づき、ゼラチンの加水分解物より得られる
Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物をアセチル化
して得られるＮ−アセチル体混合物よりのＮ−アセチル
−Ｌ−プロリンの分離精製を検討したところ、Ｎ−アセ
チル−Ｌ−プロリンは、Ｎ−アセチル−Ｌ−オキシプロ
リンの混入することなく高純度で分離精製されることを
見い出した。またＮ−アセチル−Ｌ−プロリンは容易に
脱アセチル化されＬ−プロリンを高収率で与えるため、
Ｌ−プロリンの安価で工業的規模での実施可能を目的と
する本発明を完成に至った。
Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物をアセチル化
して得られるＮ−アセチル体混合物よりのＮ−アセチル
−Ｌ−プロリンの分離精製を検討したところ、Ｎ−アセ
チル−Ｌ−プロリンは、Ｎ−アセチル−Ｌ−オキシプロ
リンの混入することなく高純度で分離精製されることを
見い出した。またＮ−アセチル−Ｌ−プロリンは容易に
脱アセチル化されＬ−プロリンを高収率で与えるため、
Ｌ−プロリンの安価で工業的規模での実施可能を目的と
する本発明を完成に至った。
［発明の構成］ すなわち本発明は、ゼラチン加水分解液より得られるＬ
−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物をアセチル化
し、生成するＮ−アセチル−Ｌ−プロリンを水より晶析
させ高純度で単離することを特徴とするＬ−プロリンの
分離精製法にある。
−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物をアセチル化
し、生成するＮ−アセチル−Ｌ−プロリンを水より晶析
させ高純度で単離することを特徴とするＬ−プロリンの
分離精製法にある。
本発明で用いるＬ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合
物は、従来法に従いゼラチンを鉱酸水溶液で加水分解し
て亜硝酸で処理した後、共存するオキシ酸および一部の
Ｌ−オキシプロリンを除去した後に得られるもので、用
いるゼラチンにより多少変動はみられるが、通常Ｌ−プ
ロリン:L−オシプロリン＝10:2（重量組成比）で含むも
のである。
物は、従来法に従いゼラチンを鉱酸水溶液で加水分解し
て亜硝酸で処理した後、共存するオキシ酸および一部の
Ｌ−オキシプロリンを除去した後に得られるもので、用
いるゼラチンにより多少変動はみられるが、通常Ｌ−プ
ロリン:L−オシプロリン＝10:2（重量組成比）で含むも
のである。
Ｎ−アセチル化は上記混合物を無水酢酸を用いたSchott
en-Baumann法にて行ない、反応液を中和後、脱塩操作を
行ないＮ−アセチル−Ｌ−プロリン、Ｌ−アセチル−Ｌ
−オキシプロリン混合物を得る。
en-Baumann法にて行ない、反応液を中和後、脱塩操作を
行ないＮ−アセチル−Ｌ−プロリン、Ｌ−アセチル−Ｌ
−オキシプロリン混合物を得る。
Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリンの分離精製は、上記Ｎ−ア
セチル体混合物を水に溶解させ、Ｎ−アセチル−Ｌ−プ
ロリンのみを晶析させることにより行なう。第１図より
求めた溶解度曲線より共存するＮ−アセチル−Ｌ−オキ
シプロリンが晶出しない様行なうことが必要で、用いる
水量が少ない場合、晶析量は増大するが純度の低下をも
たらす結果となり、逆に多い場合は晶析量は少なく効率
の良い分離精製操作とはならないため、通常は、Ｎ−ア
セチル−Ｌ−プロリン含有量に対し２〜３倍量の水に室
温で溶解させ、これを０〜５℃まで冷却し晶析した結晶
を濾取することによって高純度のＮ−アセチル−Ｌ−プ
ロリンを良好な収率で得ることが出来る。
セチル体混合物を水に溶解させ、Ｎ−アセチル−Ｌ−プ
ロリンのみを晶析させることにより行なう。第１図より
求めた溶解度曲線より共存するＮ−アセチル−Ｌ−オキ
シプロリンが晶出しない様行なうことが必要で、用いる
水量が少ない場合、晶析量は増大するが純度の低下をも
たらす結果となり、逆に多い場合は晶析量は少なく効率
の良い分離精製操作とはならないため、通常は、Ｎ−ア
セチル−Ｌ−プロリン含有量に対し２〜３倍量の水に室
温で溶解させ、これを０〜５℃まで冷却し晶析した結晶
を濾取することによって高純度のＮ−アセチル−Ｌ−プ
ロリンを良好な収率で得ることが出来る。
また、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリンからは、鉱酸水溶液
で煮沸することによって、脱アセチル化により高収率で
Ｌ−プロリンを得ることが出来る。
で煮沸することによって、脱アセチル化により高収率で
Ｌ−プロリンを得ることが出来る。
［実施例］ 以下に実施例を挙げ本発明をさらに詳しく説明する。
Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物の調製 ゼラチン50kgを８規定塩酸105lに懸濁し、６時間還流さ
せて加水分解を行なった。反応液を減圧下で濃縮して塩
酸分を留去後、水を加えて200lとし、活性炭2kgを加え
て脱色濾過を行なった。濾過液に40％亜硝酸ナトリウム
水溶液90lを45℃以下で滴下させ、その後55〜60℃で１
時間反応させた。反応液を減圧下でシロップ状まで濃縮
した後、６規定塩酸50lを加えて、３時間還流を行なっ
た。この溶液を冷却した後、エーテル20lを加えて撹拌
を行ない、オキシ酸を抽出した。その後、再び減圧下で
シロップ状まで濃縮し、水150lを加えてアンバーライト
IR-4Bを充填したカラムに通して塩酸を吸着除去した。
カラム流出液に活性炭1kgを加えて脱色濾過し、減圧下
でシロップ状まで濃縮した。この濃縮溶液にメタノール
50lを加えて撹拌を行ない、５℃まで冷却した。析出し
た一部のＬ−オキシプロリンを濾過した後、濾液を減圧
下で濃縮するとシロップ状のＬ−プロリン、Ｌ−オキシ
プロリン混合物4.70kgが得られた（アミノ酸自動分析計
よりＬ−プロリン3.60kg、Ｌ−オキシプロリン0.71kgを
含有することを確認した）。
せて加水分解を行なった。反応液を減圧下で濃縮して塩
酸分を留去後、水を加えて200lとし、活性炭2kgを加え
て脱色濾過を行なった。濾過液に40％亜硝酸ナトリウム
水溶液90lを45℃以下で滴下させ、その後55〜60℃で１
時間反応させた。反応液を減圧下でシロップ状まで濃縮
した後、６規定塩酸50lを加えて、３時間還流を行なっ
た。この溶液を冷却した後、エーテル20lを加えて撹拌
を行ない、オキシ酸を抽出した。その後、再び減圧下で
シロップ状まで濃縮し、水150lを加えてアンバーライト
IR-4Bを充填したカラムに通して塩酸を吸着除去した。
カラム流出液に活性炭1kgを加えて脱色濾過し、減圧下
でシロップ状まで濃縮した。この濃縮溶液にメタノール
50lを加えて撹拌を行ない、５℃まで冷却した。析出し
た一部のＬ−オキシプロリンを濾過した後、濾液を減圧
下で濃縮するとシロップ状のＬ−プロリン、Ｌ−オキシ
プロリン混合物4.70kgが得られた（アミノ酸自動分析計
よりＬ−プロリン3.60kg、Ｌ−オキシプロリン0.71kgを
含有することを確認した）。
実施例１ Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物1.0kg（Ｌ−
プロリン766g、Ｌ−オキシプロリン151g含有）を水6lに
溶解させ、NaOH624gを加えて溶解させた。この溶液を５
〜10℃に冷却した後、撹拌しながら無水酢酸820mlを１
時間で滴下させ、その後室温にて２時間反応させた。こ
の反応液を、濃塩酸を用いてpHを2.5に調整した後減圧
下で濃縮し、メタノール4lを加えて析出した塩化ナトリ
ウムを濾取し、濾液をシロップ状まで濃縮した。これに
水2lを加えて撹拌し、均一溶液とした。さらに、ゆるや
かに撹拌しながら５℃まで徐々に冷却すると結晶が析出
した。一夜放置した後、結晶を濾取して乾燥するとＮ−
アセチル−Ｌ−プロリン721gを得た。この収率は69％で
あった。また、融点（mp）は116〜117℃であり、比旋光
度は▲［α］20 D▼＝−115.60°（Ｃ＝２、H2O）であっ
た。なお、標準Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリンのmpは118
℃で、比旋光度は▲［α］20 D▼＝−116.50°である。
プロリン766g、Ｌ−オキシプロリン151g含有）を水6lに
溶解させ、NaOH624gを加えて溶解させた。この溶液を５
〜10℃に冷却した後、撹拌しながら無水酢酸820mlを１
時間で滴下させ、その後室温にて２時間反応させた。こ
の反応液を、濃塩酸を用いてpHを2.5に調整した後減圧
下で濃縮し、メタノール4lを加えて析出した塩化ナトリ
ウムを濾取し、濾液をシロップ状まで濃縮した。これに
水2lを加えて撹拌し、均一溶液とした。さらに、ゆるや
かに撹拌しながら５℃まで徐々に冷却すると結晶が析出
した。一夜放置した後、結晶を濾取して乾燥するとＮ−
アセチル−Ｌ−プロリン721gを得た。この収率は69％で
あった。また、融点（mp）は116〜117℃であり、比旋光
度は▲［α］20 D▼＝−115.60°（Ｃ＝２、H2O）であっ
た。なお、標準Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリンのmpは118
℃で、比旋光度は▲［α］20 D▼＝−116.50°である。
このものを薄層クロマトグラフィー（セルロース;n−ブ
タノール：酢酸：水＝2:1:1）によって、ワン スポッ
トであることを確認する。
タノール：酢酸：水＝2:1:1）によって、ワン スポッ
トであることを確認する。
次に、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン700gを水30lに溶解
させ、濃塩酸600mlを加えて３時間還流を行なった。こ
の溶液を冷却した後、30％NaOH水溶液でpHを6.3に調整
した。この溶液を電気透析装置により塩化ナトリウムを
除いた後、減圧下で水を留去させエタノール500mlを加
えて撹拌しながら５℃まで冷却し、析出した結晶を濾取
して乾燥すると、Ｌ−プロリン359gが得られた。反応の
収率は70％であり、比旋光度▲［α］25 D▼＝−85.18°
（Ｃ＝２、H2O）であった。なお、標準Ｌ−プロリンの
比旋光度▲［α］25 D▼＝−85.0°（Ｃ＝２、H2O）であ
る。
させ、濃塩酸600mlを加えて３時間還流を行なった。こ
の溶液を冷却した後、30％NaOH水溶液でpHを6.3に調整
した。この溶液を電気透析装置により塩化ナトリウムを
除いた後、減圧下で水を留去させエタノール500mlを加
えて撹拌しながら５℃まで冷却し、析出した結晶を濾取
して乾燥すると、Ｌ−プロリン359gが得られた。反応の
収率は70％であり、比旋光度▲［α］25 D▼＝−85.18°
（Ｃ＝２、H2O）であった。なお、標準Ｌ−プロリンの
比旋光度▲［α］25 D▼＝−85.0°（Ｃ＝２、H2O）であ
る。
実施例２ Ｌ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物4.0kgを実施
例１に従い、NaOH2.50kg、無水酢酸3.28lを用いてアセ
チル化処理した後、得られるシロップ状Ｎ−アセチル体
混合物に水9lを加えて撹拌し、均一溶液とした。さら
に、ゆるやかに撹拌しながら３℃まで徐々に冷却すると
結晶が析出した。一晩放置した後、結晶を濾取して乾燥
すると、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン2.72kgを得た。こ
の収率は65％であり、融点（mp）は117〜118℃、比旋光
度は▲［α］20 D▼＝−114.30（Ｃ＝２、H2O）であっ
た。
例１に従い、NaOH2.50kg、無水酢酸3.28lを用いてアセ
チル化処理した後、得られるシロップ状Ｎ−アセチル体
混合物に水9lを加えて撹拌し、均一溶液とした。さら
に、ゆるやかに撹拌しながら３℃まで徐々に冷却すると
結晶が析出した。一晩放置した後、結晶を濾取して乾燥
すると、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン2.72kgを得た。こ
の収率は65％であり、融点（mp）は117〜118℃、比旋光
度は▲［α］20 D▼＝−114.30（Ｃ＝２、H2O）であっ
た。
このものを実施例１と同様に薄層クロマトグラフィーに
よって測定したところ、ワン スポットであることを確
認した。
よって測定したところ、ワン スポットであることを確
認した。
次に、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン2.70kgを実施例１に
従い脱アセチル化することにより、Ｌ−プロリン1.43kg
を得た。この収率は72％であり、比旋光度は▲［α］25
D▼＝−85.0°（Ｃ＝２、H2O）であった。
従い脱アセチル化することにより、Ｌ−プロリン1.43kg
を得た。この収率は72％であり、比旋光度は▲［α］25
D▼＝−85.0°（Ｃ＝２、H2O）であった。
［発明の効果］ 以上に説明したように、ゼラチンの加水分解物より得ら
れるＬ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物を、Ｎ−
アセチル化する本発明のＬ−プロリンの分離精製法は、
安価でかつ工業的規模で、高純度のＬ−プロリンの分離
精製が可能となった。
れるＬ−プロリン、Ｌ−オキシプロリン混合物を、Ｎ−
アセチル化する本発明のＬ−プロリンの分離精製法は、
安価でかつ工業的規模で、高純度のＬ−プロリンの分離
精製が可能となった。
第１図は、（１）Ｌ−プロリン、（２）Ｌ−オキシプロ
リン、（３）Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン、（４）Ｎ−
アセチル−Ｌ−オキシプロリンの遊離体およびＮ−アセ
チル体の温度と溶解量（g/水100g）の関係を示したグラ
フである。
リン、（３）Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン、（４）Ｎ−
アセチル−Ｌ−オキシプロリンの遊離体およびＮ−アセ
チル体の温度と溶解量（g/水100g）の関係を示したグラ
フである。
Claims (1)
- 【請求項１】ゼラチン加水分解液より得られるＬ−プロ
リン、Ｌ−オキシプロリン混合物をアセチル化し、生成
するＮ−アセチル−Ｌ−プロリンを水より晶析させ高純
度で単離することを特徴とするＬ−プロリンの分離精製
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23631486A JPH0772172B2 (ja) | 1986-10-06 | 1986-10-06 | Ｌ−プロリンの分離精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23631486A JPH0772172B2 (ja) | 1986-10-06 | 1986-10-06 | Ｌ−プロリンの分離精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6391364A JPS6391364A (ja) | 1988-04-22 |
| JPH0772172B2 true JPH0772172B2 (ja) | 1995-08-02 |
Family
ID=16998962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23631486A Expired - Lifetime JPH0772172B2 (ja) | 1986-10-06 | 1986-10-06 | Ｌ−プロリンの分離精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0772172B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6937037B2 (en) | 1995-11-09 | 2005-08-30 | Formfactor, Et Al. | Probe card assembly for contacting a device with raised contact elements |
-
1986
- 1986-10-06 JP JP23631486A patent/JPH0772172B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6937037B2 (en) | 1995-11-09 | 2005-08-30 | Formfactor, Et Al. | Probe card assembly for contacting a device with raised contact elements |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6391364A (ja) | 1988-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1447287A3 (ru) | Способ очистки даунорубицина гидрохлорида | |
| JPH0569116B2 (ja) | ||
| JP3421338B2 (ja) | バンコマイシンの製造方法 | |
| JPH0772172B2 (ja) | Ｌ−プロリンの分離精製法 | |
| EP0126887B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von reinem L-Leucin | |
| US5801241A (en) | Cyclohexanone extraction of 3-hydroxymethylcephalosporins | |
| JPS58103355A (ja) | タウリンの製造法 | |
| US4562153A (en) | Process for the separation of L-leucine and L-isoleucine | |
| JP2781140B2 (ja) | シアル酸またはその類縁体の精製方法 | |
| CZ282048B6 (cs) | Způsob přípravy čistého oxytetracyklinu a meziprodukt pro tuto přípravu | |
| JP2522034B2 (ja) | α−ケト酸・アミノ酸塩化合物及びその製造方法 | |
| JP3080801B2 (ja) | タウリンの精製法 | |
| JPS604168A (ja) | トリプトフアンの晶析法 | |
| JPS60133887A (ja) | エラスタ−ゼの製法 | |
| JPH0267256A (ja) | カルニチンおよびカルニチンニトリルの単離精製法 | |
| JPS6156094A (ja) | イソプロピルヒダントインからｄ−バリンの製造方法 | |
| JPS58188862A (ja) | Ｎ−アシルカルノシンの製造法 | |
| JPS61115093A (ja) | モラノリン誘導体の製法 | |
| SU960163A1 (ru) | Способ очистки L-пролина | |
| CA1043775A (en) | Process for recovering glucagon | |
| JPH0798802B2 (ja) | 光学活性インドリン―２―カルボン酸の製造法 | |
| JPS6137798A (ja) | グリチルリチン酸の精製法 | |
| JPS6366821B2 (ja) | ||
| JPH01186850A (ja) | ２−メチルフェニルアラニン類の分離精製法 | |
| KR900007657B1 (ko) | 일렉소시드 디의 정제방법 |