JPH01186850A - ２−メチルフェニルアラニン類の分離精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、２−メチルフェニルアラニン類の分離精製法
に関し、更に詳細には、２−メチルフェニルアラニン類
と２−メチルフェニルアラニンアミド類とを含有する水
溶液から純度の高い２−メチルフェニルアラニン類を分
離精製する方法に関する。

２−メチルフェニルアラニン類のし一体は、薬理作用を
有しており、その代表的な物質としてＬ−２−メチル−
３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニンが知ら
れている。この物質は、−船名としてメチルドーパと称
せられ、優れた血圧降下剤である。

また、その他のＬ−２−メチルフェニルアラニン類はそ
の原料物質である。

〔従来技術、発明が解決しようとする問題点〕２−メチ
ルフェニルアラニン類と２−メチルフェニルアラニンア
ミド類との分離法として、たとえば、特開昭５７−１８
６４９５号公報には分別晶析および溶媒抽出が記載され
ている。しかしながら、この公報においては、Ｌ−３，
４−ジメトキシ−α−メチルフェニルアラニンとＤ−３
，４−ジメトキシ−α−メチルフェニルアラニンアミド
のそれぞれをほぼ等モル含有する反応液からベンゼンに
よりＤ−３，４−ジメトキシ−α−メチルフェニルアラ
ニンアミドを分離回収した後の反応液の水層から煩雑な
操作を経てＮ−アセチル−３，４−ジメトキシ−α−メ
チルフェニルアラニン（Ｌ一体）の結晶を得ていること
が記載されているのみであって、を機溶媒のみを使用し
て目的物質である２−メチルフェニルアラニン類または
不純物を抽出することは記載されていないし、示唆され
て°もいない。

一方、アミノ酸の一般的な分離精製法として、イオン交
換樹脂による吸着分離法がある。すなわち、たとえば、
強塩基性イオン交換樹脂に、アミノ酸とアミノ酸アミド
とを含有する水溶液を通過させれば、アミノ酸のみが吸
着され、アミノ酸アミドは吸着されずに溶出する。つい
で、このアミノ酸を吸着した樹脂に酸を通過させれば、
アミノ酸は脱着、溶出され、高純度のアミノ酸が得られ
る。従って、この方法を２−メチルフェニルアラニン類
と２−メチルフェニルアラニンアミド類との分離に適用
すれば、高純度の２−メチルフェニルアラニン類が得ら
れることになる。しかしながら、２−メチルフェニルア
ラニン類は水に対する溶解度が小さいために、この吸着
分離操作において希薄な水溶液を使用せざるを得す、そ
の後の濃縮に多大なエネルギーを要し、実用に適さない
。

〔問題を解決するための手段、作用〕

本発明者らは、２−メチルフェニルアラニン類と２−メ
チルフェニルアラニンアミド類とを含有する水溶液から
、溶媒抽出法により高純度の２−メチルフェニルアラニ
ン類を分離回収すべく鋭意研究を重ねた結果、低級アル
コールおよび低級ケトンなどの中性の有機溶媒は２−メ
チルフェニルアラニン類を溶解しないが、２−メチルフ
ェニルアラニンアミド類を溶解することは公知ではある
が、大量の水の共存下では、２−メチルフェニルアラニ
ンアミド類の溶解・度は著しく低下するため、このよう
な水溶液からの２−メチルフェニルアラニン類の分離回
収にはこれらの中性の有機溶媒を使用することはできず
、これらの中性の有機溶媒を使用して２−メチルフェニ
ルアラニンアミド類を抽出して、高純度の２−メチルフ
ェニルアラニン類の結晶を得るためには、この水溶液を
濃縮して水を除去しなければばならないことを発見して
、本発明に到達した。

すなわち、本発明は、後記の一般式　■で示される２−
メチルフェニルアラニンアミド類と後記の一般式　ＩＩ
で示される２−メチルフェニルアラニン類とを含有する
水溶液を濃縮して水を除去し、該２−メチルフェニルア
ラニン類と少量の該２−メチルフェニルアラニンアミド
類とを含有する結晶を析出させ、得られた濃縮物に低級
アルコールまたは低級ケトンを添加して加熱し、該結晶
中の該２−メチルフェニルアラニンアミド類を溶出させ
、実質的に該２−メチルフェニルアラニン類のみを含有
す葛結晶を分離、回収して高純度の該２−メチルフェニ
ルアラニン類を得ることを特徴とする２−メチルフェニ
ルアラニン類の分離精製法である。

一般式　Ｉ −数式　■ （ただし、式中Ｈ１，Ｈ！は互いに同一または異なって
、水素原子もしくは低級アルキル基であるか、また　は
、Ｒ１，Ｒ露は互いに結合したメチレン基である。） 本発明における２−メチルフェニルアラニンアミド類は
前記の一般式　■で表される化合物であればよく、その
代表例は次の如くである。すなわち、 アラニンアミド また、本発明における２−メチルフェニルアラニン類は
、前記の一般式　■に示された化合物であり、その代表
例は、前記の２−メチルフェニルアラニンアミド類の代
表例に対応する化合物−前記の２−メチルフェニルアラ
ニンアミド類のアミド基がカルボキシル基に変換された
化合物−である。

本発明が適用される２−メチルフェニルアラニンアミド
類と２−メチルフェニルアラニン類とを含有する水溶液
（以下　原料水溶液　と記すこともある）は、どのよう
な製法によりて得られたものでもよく、特に制限はない
が、通常は、ＤＬ−２−メチルフェニルアラニンアミド
類にアミダーゼを含有する微生物の培養物、この微生物
の菌体もしくはこの菌体の処理物−たとえば、菌体の摩
砕物、固定化菌体など−または、この菌体から得られた
アミダーゼもしくは固定化されたアミダーゼなどを作用
させてＤＬ−２−メチルフェニルアラニン類を不斉加水
分解して得られた反応生成液である。

この反応生成液には、Ｌ−２−メチルフェニルアラニン
類とＤ−２−メチルフェニルアラニンアミド類とを含有
している場合およびＤ−２−メチルフェニルアラニン類
とＬ−２−メチルフェニルアラニンアミド類とを含有し
ている場合がある。

原料水溶液の２−メチルフェニルアラニンアミド類およ
び２−メチルフェニルアラニン類の濃度には、特に制限
はないが、たとえば、前記の生化学的な方法で得られた
反応生成液の場合には、通常は、どちらも１〜５ｗｔχ
程度程度である。

原料水溶液の濃縮は、減圧下、常圧下および加圧下のい
ずれでもよいが、通常は、５０〜８０℃程度で、好まし
くは５５〜６５℃程度で水分が蒸発するような減圧下と
される。

濃縮は、スラリー濃度が１０％１ｔ％以上乃至乾固する
まで行なわれる。スラリー濃度が高いほど好ましいが、
実用上は、２０〜８０−ｔχ程度が特に好ましい。

濃縮によって除去されるべき水の量は、原料水溶液の溶
存化合物の濃度から推算して予め決定することもできる
し、また、濃縮の過程において経時的にサンプリングし
た試料のスラリー濃度を確認することにより決定するこ
ともできる。

この濃縮によって析出せしめられた結晶には、少量の２
−メチルフェニルアラニンアミド類と、目的物質である
２−メチルフェニルアラニン類とが含有されている。

このようにして得られた濃縮物に、低級アルコールまた
は低級ケトンを添加して加熱し、結晶に含有されていた
２−メチルフェニルアラニンアミド類を溶解除去する。

使用される低級アルコールの代表例は、メタノール、エ
タノールおよびイソプロパツールなどである。また、使
用される低級ケトンの代表例は、アセトン、メチルエチ
ルケトンおよびジエチルケトンなどである。

これらの低級アルコールおよび低級ケトンのそれぞれの
使用量は、濃縮物１重量部に対して通常は１〜３０重量
部とされ、好ましくは３〜２０重量部とされる。

これらの低級アルコールおよび低級ケトンのそれぞれを
添加した後、３０〜１００℃程度に加熱しながら１０分
〜３時間程度撹拌することが好ましい。

このようにして、実質的に目的物である２−メチルフェ
ニルアラニン類のみを含有する結晶が残留する。

この結晶は、たとえば、濾過または遠心分離のような通
常の固液分離手段により、分離回収することができる。

このようにして分離回収された結晶は、低級アルコール
または低級ケトンなどの有機溶媒で洗浄することが好ま
しい。なお、この有機溶媒は、前記の濃縮物に添加され
た低級アルコールまたは低級ケトンと同じ低級アルコー
ルまたは低級ケトンを使用するのが最も好ましい。また
、洗浄に使用される有機溶媒の使用量には特に制限はな
いが、実用上、湿潤結晶の見掛は容積の０．３〜２容量
倍程度とされる。

このようにして得られた結晶は、必要に応じて再結晶、
吸着および／またはカラムクロマトグラフィなどの常法
によって精製して、さらに、純度をあげることができる
が、この結晶は、純度が極めて高いので、そのまま、使
用することもできる。

〔実施例〕

本発明を、実施例によりさらに具体的に説明する。

実施例Ｉ Ｄ　Ｌ−２−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシ
フェニル）アラニンアミド１０ｇを水１９０ｇに溶解し
た水溶液に微生物菌体を加えて、ＤＬ−２−メチル−３
−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニンアミ
ドを不斉加水分解し、微生物菌体を除去して得られた反
応生成液を原料水溶液とした。

この原料水溶液には、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−
メチレンジオキシフェニル）アラニン、Ｄ−２−メチル
−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニン
アミドおよびＬ−２−メチル−３−（３，４−メチレン
ジオキシフェニル）アラニンアミドが、それぞれ、４．
８ｇ、５．０ｇおよび０．２’ｇ含ま゛れていた。

この原料水溶液を５００−三ロフラスコに入れ、液温か
６０℃となるように減圧下で撹拌しつつ加温し、１６０
ｇの水を留去して、スラリー濃度２５−ｔχの濃縮物を
得た。

こめ濃縮物にメタノール４０ｇを添加し、６８〜７５°
Ｃで１時間還流しつつ加温した。加温後、フラスコ内の
液を３０℃に冷却し、液温を３０°Ｃに保ちながら３０
分間撹拌した後、フラスコ内の残留結晶を濾過によって
分離回収して、１０ｙｄのメタノールで２回洗浄し、次
いで乾燥して４．４４　ｇ　（２２，２ｎｄ）の乾燥結
晶を得た。

得られた結晶は、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−メチ
レンジオキシフェニル）アラニンの結晶であり、この結
晶の純度は９９．３７ｗｔＸであった。また、生化学的
不斉加水分解により得られたＬ−２−メチル−３−（３
，４−メチレンジオキシフェニル）アラニンに対するＬ
−２−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニ
ル）アラニンの回収率は、９２．６χである。

また、前記の濾過によって得られた濾液中には、Ｌ−２
−メチル−３−・（３，４−メチレンジオキシフェニル
）アラニン、Ｄ−２−メチル−３−（３，４−メチレン
ジオキシフェニル）アラニンアミドおよびＬ−２−メチ
ル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニ
ンアミドが、それぞれ、０．３６ｇ、５．０ｇおよび０
．２　ｇ含まれていた。

実施例２ ＤＬ−２−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフ
ェニル）アラニンアミド１０ｇを水１９０ｇに溶解した
水溶液に微生物菌体を加えて、ＤＬ−２−メチル−３−
（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニンアミド
を不斉加水分解し、微生物菌体を除去して得られた反応
生成液を原料水溶液とした。

この原料水溶液には、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−
メチレンジオキシフェニル）アラニン、Ｄ−２−メチル
−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニン
アミドおよびＬ−２−メチル−３−（３，４−メチレン
ジオキシ）フェニルアラニンアミドが、それぞれ、４．
９ｇ、ｓ、ｏｇおよび０．１ｇ含まれていた。

この原料水溶液を５００−三ロフラスコに入れ、液温か
６６℃となるように減圧下で撹拌しつつ加温し、１７６
ｇの水を留去し、スラリー濃度４１．６ｗｔχの濃縮物
を得た。

この濃縮物にエタノール３６．５ｇを添加し、７７〜８
２℃で１時間還流しつつ加温した。加温後、フラスコ内
の液を３０℃に冷却し、液温を３０℃に保ちながら３０
分間撹拌した後、フラスコ内の残留結晶を濾過によって
分離回収して、１０Ｍ＆のエタノールで２回洗浄し、次
いで乾燥して４．４８　ｇ　（２２，４ｄ）の乾燥結晶
を得た。

得られた結晶は、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−メチ
レンジオキシフェニル）アラニンの結晶であり、この結
晶の純度は９９．４５ｗｔχであった。また、生化学的
不斉加水分解により得られたＬ−２−メチル−３−（３
，４−メチレンジオキシフェニル）アラニンに対するＬ
−２−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニ
ル）アラニンの回収率は、９１．５χである。

また、前記の濾過によって得られた濾液中には、Ｌ−２
−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）
アラニン、Ｄ−２−メチル−３−（３，４−メチレンジ
オキシフェニル）アラニンアミドおよびＬ−２−メチル
−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニン
アミドが、それぞれ、０．４２ｇ、５．０ｇおよび０．
１ｇ含まれていた。

実施例３ ＤＬ−２−メチル−３−（３−メトキシ−４−ヒドロキ
シフェニル）アラニンアミド１０ｇを水１９０ｇに溶解
した水溶液に微生物菌体を加えて、ＤＬ−２−メチル−
３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）アラニ
ンアミドを不斉加水分解し、微生物菌体を除去して得ら
れた反応生成液を原料水溶液とした。

この原料水溶液には、Ｌ−２−メチル−３−（３−メト
キシ−４−ヒドロキシフェニル）アラニン、Ｄ−２−メ
チル−３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）
アラニンアミドおよびＬ−２−メチル−３−（３−メト
キシ−４−ヒドロキシフェニル）アラニンアミドが、そ
れぞれ、４．８ｇ、５．０ｇおよび０．２ｇ含まれてい
た。

この原料水溶液を５００ｄ三ロフラスコに入れ、液温か
６０℃となるように減圧下で撹拌しつつ加温し、１８０
　ｇの水を留去し、スラリー濃度２５−ｔχの濃縮物を
得た。

この濃縮物にイソプロピルアルコール８０ｇを添加し、
８８〜９２℃で１時間還流しつつ加温した。加温後、フ
ラスコ内の液を３０℃に冷却し、液温を３０℃に保ちな
がら３０分間撹拌した後、フラスコ内の残留結晶を濾過
によって分離回収して、１０Ｗ１のイソプロピルアルコ
ールで２回洗浄した後、乾燥して、４．３７　ｇ　（２
１，８ｄ）の乾燥結晶を得た。

得られた結晶は、Ｌ−２−メチル−３−（３−メトキシ
−４−ヒドロキシフェニル）アラニンの結晶であり、こ
の結晶の純度は９９．４５ｗｔχであった。また、生化
学的不斉加水分解により得られたＬ−２−メチル＝３−
（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）アラニンに
対するＬ−２−メチル−３−（３−メトキシ−４−ヒド
ロキシフェニル）アラニンの回−収率は、９１．０χで
ある。

また、前記の濾過によって得られた濾液中には、Ｌ−２
−メチル−３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニ
ル）アラニン、Ｄ−２−メチル−３−（３−メトキシ−
４−ヒドロキシフェニル）アラニンアミドおよびＬ−２
−メチル−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）
アラニンアミドが、それぞれ、０．４３ｇ、５．０ｇお
よび０．２ｇ含まれていた。

実施例４ ＤＬ−２−メチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニ
ル）アラニンアミド１０ｇを水１９０ｇに溶解した水溶
液に微生物菌体を加えて、Ｄ　Ｌ−２−メチル−３−（
３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニンアミドを不斉
加水分解し、微生物菌体を除去して得られた反応生成液
を原料水溶液とした。

この原料水溶液には、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−
ジヒドロキシフェニル）アラニン、Ｄ−２−メチル−３
−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニンアミドお
よびＬ−２−メチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェ
ニル）アラニンアミドが、それぞれ、４．９ｇ、５．０
ｇおよび０．１ｇ含まれていた。

この原料水溶液を５００ｉｄ三ロフラスコに入れ、液温
か６０℃となるように減圧下で撹拌しつつ加温し、１８
０ｇの水を留去し、スラリー濃度５０ｗｔχの濃縮物を
得た。

この濃縮物にアセトン６０ｇを添加し、６０〜６５℃で
１時間遍流しつつ加温した。加温後、フラスコ内の液を
３０℃に冷却し、液温を３０℃に保ちながら３０分間撹
拌した後、フラスコ内の残留結晶を濾過によって分離回
収して、１０Ｍ１のアセトンで２回洗浄した後、乾燥し
て、４．５０　ｇ　（２２，５ｍ）の乾燥結晶を得た。

　　　　　・ 得られた結晶は、Ｌ−２，メチル−３−（３，４−ジヒ
ドロキシフェニル）アラニンの結晶であり、この結晶の
純度は９９．５１ｖｔχであった。また、生化学的不斉
加水分解により得られたＬ−２−メチル−３−（３，４
−ジヒドロキシフェニル）アラニンに対するし−２−メ
チル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニン
の回収率は、９１．９χである。

また、前記の濾過によって得られた濾液中には、Ｌ−２
−メチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アラ
ニン、Ｄ−２−メチル−３−（３，４−ジヒドロキシフ
ェニル）アラニンアミドおよびＬ−２−メチル−３−（
３，４−ジヒドロキシフェニル）アラニンアミドが、そ
れぞれ、０．４ｇ、５．０ｇおよび０．１ｇ含まれてい
た。

実施例５ ＤＬ−２−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフ
ェニル）アラニンアミド１０ｇを水１９０ｇに溶解した
水溶液に微生物菌体を加えて、Ｄ　Ｌ−２−メチル−３
−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニンアミ
ドを不斉加水分解し、微生物菌体を除去して得られた反
応生成液を原料水溶液とした。

この原料水溶液には、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−
メチレンジオキシフェニル）アラニン、Ｄ−２−メチル
−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニン
アミドおよびＬ−２−メチル−３−（３，４−メチレン
ジオキシフェニル）アラニンアミドが、それぞれ、４．
９ｇ、５．０ｇおよび０．１ｇ含まれていた。

この原料水溶液を５００−三ロフラスコに入れ、液温か
６０℃となるように減圧下で撹拌しつつ加温し、１７０
ｇの水を留去し、スラリー濃度３３−ｔχの濃縮物を得
た。

この濃縮物にアセトン９０ｇを添加し、６０〜６５℃で
１時間還流しつつ加温した。加温後、フラスコ内の液を
３０℃に冷却し、液温を３０℃に保ちながら３０分間撹
拌した後、フラスコ内の残留結晶を濾過によって分離回
収して、１０−のアセトンで２回洗浄した後、乾燥して
４．５０　ｇ　（２２，５ｍ）の乾燥結晶を得た。

得られた結晶は、Ｌ−２−メチル−３−（３，４−メチ
レンジオキシフェニル）アラニンの結晶であり、この結
晶の純度は９９．２８ｖｔχであった。また、生化学的
不斉加水分解により得られたＬ−２−メチル−３−（３
，４−メチレンジオキシフェニル）アラニンに対するＬ
−２−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニ
ル）アラニンの回収率は、９１．８％である。

また、前記の濾過によって得られた濾液中には、Ｌ−２
−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）
アラニン、Ｄ−２−メチル−３−（３，４−メチレンジ
オキシフェニル）アラニンアミドおよびＬ−２−メチル
−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）アラニン
アミドが、それぞれ、０．４ｇ、５．０ｇおよび０．１
ｇ含まれていた。

〔発明の効果〕

、　本発明によれば、医薬品として広く使用されている
、たとえば、メチルドーパおよびその原料である２−メ
チルフェニルアラニン類を容易に、かつ、高純度で、し
かも効率よ（得ることが可能となる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 I で示される２−メチルフェニルアラニンアミ
   ド類と一般式IIで示される２−メチルフェニルアラニン
   類とを含有する水溶液を濃縮して水を除去し、該２−メ
   チルフェニルアラニン類と少量の該２−メチルフェニル
   アラニンアミド類とを含有する結晶を析出させ、得られ
   た濃縮物に低級アルコールまたは低級ケトンを添加して
   加熱し、該結晶中の該２−メチルフェニルアラニンアミ
   ド類を溶出させ、実質的に該２−メチルフェニルアラニ
   ン類のみを含有する結晶を分離、回収して高純度の該２
   −メチルフェニルアラニン類を得ることを特徴とする２
   −メチルフェニルアラニン類の分離精製法。 一般式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ 一般式II ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、式中Ｒ＾１、Ｒ＾２は互いに同一または異な
   って、水素原子もしくは低級アルキル基であるか、また
   は、Ｒ＾１、Ｒ＾２は互いに結合したメチレン基である
   。）