JPH0795958B2 - 駆虫性生物学的変換生成物 - Google Patents
駆虫性生物学的変換生成物Info
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- JPH0795958B2 JPH0795958B2 JP1271442A JP27144289A JPH0795958B2 JP H0795958 B2 JPH0795958 B2 JP H0795958B2 JP 1271442 A JP1271442 A JP 1271442A JP 27144289 A JP27144289 A JP 27144289A JP H0795958 B2 JPH0795958 B2 JP H0795958B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
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- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
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- A61P33/10—Anthelmintics
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
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Description
【発明の詳細な説明】 アルバース−ションバーグ（Albers−Schonberg）等に
よる米国特許第4,310,519号にはストレプトミセス ア
ベルミチリス（Streptomyces avermitilis）の培養から
調製されるＣ−076天然産物（現在はアベルメクチン化
合物と呼ばれる）が開示されている。チャバラ（Chabal
a）等による米国特許第4,199,569号にはアベルメクチン
化合物の22,23−ジヒドロ還元生成物が13位のα−Ｌ−
オレアンドロースの糖基の１つ又は両方を除去する方法
と共に開示されている。13位酸素原子の天然配置はαで
あることが見い出されている（環の平面より下）。本発
明は合成的に製造された13−エピ−22,23−ジヒドロア
ベルメクチンBla/Blbアグリコンを13−エピアベルメク
チングリコシル化化合物へ生物学的に変換することを包
含する。
よる米国特許第4,310,519号にはストレプトミセス ア
ベルミチリス（Streptomyces avermitilis）の培養から
調製されるＣ−076天然産物（現在はアベルメクチン化
合物と呼ばれる）が開示されている。チャバラ（Chabal
a）等による米国特許第4,199,569号にはアベルメクチン
化合物の22,23−ジヒドロ還元生成物が13位のα−Ｌ−
オレアンドロースの糖基の１つ又は両方を除去する方法
と共に開示されている。13位酸素原子の天然配置はαで
あることが見い出されている（環の平面より下）。本発
明は合成的に製造された13−エピ−22,23−ジヒドロア
ベルメクチンBla/Blbアグリコンを13−エピアベルメク
チングリコシル化化合物へ生物学的に変換することを包
含する。
本発明は以前に知られていない微生物、ストレプトミセ
ス アベルミチリスMA−5542で公知のアベルメクチン化
合物の生物学的変換によって製造される新規な化合物の
製造方法に関する。従って本発明の目的はかかる新規な
化合物について記載することである。更に本発明の目的
はかかる新規な化合物を製造するために使用される方法
について記載することである。尚更に本発明の目的はか
かる化合物を製造するために使用される新規な微生物に
ついて記載することである。別の目的は駆虫剤及び寄生
虫撲滅剤といった化合物の用途について記載することで
ある。更に目的は以下の記述を読むことによって明白に
なるであろう。
ス アベルミチリスMA−5542で公知のアベルメクチン化
合物の生物学的変換によって製造される新規な化合物の
製造方法に関する。従って本発明の目的はかかる新規な
化合物について記載することである。更に本発明の目的
はかかる新規な化合物を製造するために使用される方法
について記載することである。尚更に本発明の目的はか
かる化合物を製造するために使用される新規な微生物に
ついて記載することである。別の目的は駆虫剤及び寄生
虫撲滅剤といった化合物の用途について記載することで
ある。更に目的は以下の記述を読むことによって明白に
なるであろう。
本発明の化合物は次の構造式で最良に表わされる。
本発明は、同化可能な炭素源、窒素源及び無機塩を含有
する水性栄養培地中でストレプトミセスアベルミチリス
MA−5542の培養株、13−エビ−イベルメクチンアグリコ
ンを発酵させることを特徴とする 式 （式中R1は水素又はメチルである）を有する化合物の製
造方法である。
する水性栄養培地中でストレプトミセスアベルミチリス
MA−5542の培養株、13−エビ−イベルメクチンアグリコ
ンを発酵させることを特徴とする 式 （式中R1は水素又はメチルである）を有する化合物の製
造方法である。
本発明によれば調節された条件下ストレプトミセス ア
ベルミチリスMA−5542と同定された微生物の菌株を増殖
させ、発酵ブイヨン中に13−エピ−イベルメクチンアグ
リコンである基質を包含させることによって製造される
新規な物質が記載される。この微生物はメルクカルチュ
アコレクションでMA−5542と同定され、受け入れ番号AT
CC 53814として12301パークラウンドライブ、ロックビ
ル、MD 20852のアメリカンタイプカルチュア コレクシ
ョンから公的に入手することができる。
ベルミチリスMA−5542と同定された微生物の菌株を増殖
させ、発酵ブイヨン中に13−エピ−イベルメクチンアグ
リコンである基質を包含させることによって製造される
新規な物質が記載される。この微生物はメルクカルチュ
アコレクションでMA−5542と同定され、受け入れ番号AT
CC 53814として12301パークラウンドライブ、ロックビ
ル、MD 20852のアメリカンタイプカルチュア コレクシ
ョンから公的に入手することができる。
ストレプトミセス アベルミチリスMA−5542、ATCC5381
4の形態学的及び培養上の特徴は次の通りである。
4の形態学的及び培養上の特徴は次の通りである。
MA5542ストレプトミセス アベルミチリスの培養上の特
徴 オートミル寒天 栄養増殖：裏面：硝子質表面：扁平コロニー、全縁。気
中菌糸：多量の粉末帯灰白色 可溶性色素：黄褐色 ツァベック−ドックス寒天（スクロース硝酸塩寒天） 栄養増殖：良好、無色。増殖の周囲に透明層。
徴 オートミル寒天 栄養増殖：裏面：硝子質表面：扁平コロニー、全縁。気
中菌糸：多量の粉末帯灰白色 可溶性色素：黄褐色 ツァベック−ドックス寒天（スクロース硝酸塩寒天） 栄養増殖：良好、無色。増殖の周囲に透明層。
気中菌糸：多量、帯灰白色 可溶性色素：わずかに褐色化 EGGアルブミン寒天 栄養増殖：黄色扁平増殖 気中菌糸：無し 可溶性色素：無し グリセロールアスパラギン寒天 栄養増殖：裏面：オフホワイト。表面：増殖は少ない、
オフホワイト扁平コロニー、不斉歯状縁。
オフホワイト扁平コロニー、不斉歯状縁。
気中菌糸：散在、オフホワイト 可溶性色素：無し 無機塩−デンプン寒天 栄養増殖：非常に少ない、半透明な扁平コロニー、縁は
不規則、増殖域の下の培地はわずかに透明 気中菌糸：無し 可溶性色素：無し チロシン栄養寒天 栄養増殖：裏面：暗褐色〜黒色、表面：同じ 気中菌糸：無し 可溶性色素：暗褐色 チロシンの分解：無し スキムミルク寒天 栄養増殖：くすんだ褐色 気中菌糸：多量 帯灰白色 可溶性色素：暗褐色 カゼインの加水分解：良好 酵母エキス−麦芽エキス寒天 栄養増殖：裏面：黄褐色〜薄茶色、表面：黄色増殖、不
斉歯状縁。十分に胞子形成されたコロニーは扇形を示
す。
不規則、増殖域の下の培地はわずかに透明 気中菌糸：無し 可溶性色素：無し チロシン栄養寒天 栄養増殖：裏面：暗褐色〜黒色、表面：同じ 気中菌糸：無し 可溶性色素：暗褐色 チロシンの分解：無し スキムミルク寒天 栄養増殖：くすんだ褐色 気中菌糸：多量 帯灰白色 可溶性色素：暗褐色 カゼインの加水分解：良好 酵母エキス−麦芽エキス寒天 栄養増殖：裏面：黄褐色〜薄茶色、表面：黄色増殖、不
斉歯状縁。十分に胞子形成されたコロニーは扇形を示
す。
気中菌糸：まばらから多量までの青緑色でわずかに灰
色。
色。
可溶性色素：黄褐色 栄養寒天 栄養増殖：黄褐色がかった褐色 気中菌糸：散在、灰色がかっている 可溶性色素：薄茶色 デンプン栄養寒天 栄養増殖：黄褐色がかった褐色 気中菌糸：散在、灰色 可溶性色素：薄茶色 デンプンの加水分解：良好 トマトペースト−オートミール 栄養増殖：少々〜無し ゼラチン穿刺 栄養増殖：褐色の環 気中菌糸：無し 可溶性色素：褐色 ゼラチン液化：無し ペプトン−鉄−酵母エキス寒天斜面 栄養増殖：帯灰褐色 気中菌糸：無し 可溶性色素：暗褐色〜黒色 メラニン：陽性 H2:陽性 ツァベック−ドックス寒天斜面 栄養増殖：無色 気中菌糸：無し 可溶性色素：無し トイプトン−酵母エキスブイヨン 可溶性色素：暗褐色 炭素利用 プリドハム−ゴットリーブ基礎培地＋１％炭素源；“Me
thods for Characterization of Streptomyces Specie
s"、International Journal of Systemic Bacte−violo
gy、第16巻、No.3、1966年７月、313〜340頁の基準に従
ってグレードに分けられる。
thods for Characterization of Streptomyces Specie
s"、International Journal of Systemic Bacte−violo
gy、第16巻、No.3、1966年７月、313〜340頁の基準に従
ってグレードに分けられる。
NS（炭素源無し） 増殖せず α−Ｄ−グルコース（陽性対照） 増殖せず Ｄ−アラビノース − Ｌ−アラビノース − Ｄ−フルクトース − Ｌ−グルコース − イノシトール − α−Ｄ−ラクトース − β−Ｄ−ラクトース − Ｄ−マルトース − Ｄ−マンニトール − Ｄ−マンノース − Ｌ−マンノース − Ｄ−ラフィノース − Ｌ−ラムノース − スクロース − Ｄ−キシロース − Ｌ−キシロース − 読み取りは全て28℃で３週間温置した後行なった。
顕微鏡的特徴−（1000×暗視野相）−培養菌は直径0.6
μの線状菌糸を分岐しながら増殖する。胞子は側枝とし
て形成するしっかりと巻きつけられた鎖にある。胞子形
成はオートミール、ツアベック−ドックス、グリセロー
ルアスパラギン、スキム−ミルク及び酵母−麦芽寒天で
明らかである。
μの線状菌糸を分岐しながら増殖する。胞子は側枝とし
て形成するしっかりと巻きつけられた鎖にある。胞子形
成はオートミール、ツアベック−ドックス、グリセロー
ルアスパラギン、スキム−ミルク及び酵母−麦芽寒天で
明らかである。
培養菌MA−5542はストレプトミセス アベルミチリスの
バリン陰性菌であり、これは他のストレプトミセス ア
ベルミチリス菌株とは著しく異なり、このMA−5542は少
量のアベルメクチン化合物（以前にはＣ−076化合物と
呼ばれていた）しか産生しない。
バリン陰性菌であり、これは他のストレプトミセス ア
ベルミチリス菌株とは著しく異なり、このMA−5542は少
量のアベルメクチン化合物（以前にはＣ−076化合物と
呼ばれていた）しか産生しない。
13−エピ−イベルメクチンアグリコン開始物質は米国特
許第4,587,247号に記載される方法で立体特異的に製造
される。
許第4,587,247号に記載される方法で立体特異的に製造
される。
本化合物はストレプトミセス アベルミチリスMA−554
2、ATCC53814の菌株を用いて以下に記載される条件下で
適当な水性培養培地の好気性発酵中に産生される。これ
らの巨大環状化合物を生産する方法では多くの抗生物質
の生産に使用されるような水性培地が適当である。
2、ATCC53814の菌株を用いて以下に記載される条件下で
適当な水性培養培地の好気性発酵中に産生される。これ
らの巨大環状化合物を生産する方法では多くの抗生物質
の生産に使用されるような水性培地が適当である。
かかる栄養培地は微生物によって同化可能な炭素源及び
窒素源及び一般に低レベルの無機塩を含む。更に発酵培
地は微生物の増殖及び所望化合物の生産に必要な金属の
痕跡を含んでもよい。これらは通常、炭素及び窒素の複
合源中十分な濃度で存在させ、栄養源として使用するこ
とができるが勿論所望されるならば別々に培地に添加す
ることができる。
窒素源及び一般に低レベルの無機塩を含む。更に発酵培
地は微生物の増殖及び所望化合物の生産に必要な金属の
痕跡を含んでもよい。これらは通常、炭素及び窒素の複
合源中十分な濃度で存在させ、栄養源として使用するこ
とができるが勿論所望されるならば別々に培地に添加す
ることができる。
一般に糖、例えばデキストロース、スクロース、マルト
ース、ラクトース、デキストラン、セレロース、コーン
ミール、オート麦粉等の炭水化物及びデンプンが栄養培
地中適当な同化可能な炭素源である。培地中に利用され
る炭素源の正確な量は幾分培地中の他の成分に依存する
が、通常培地の１〜10g/の炭水化物量が十分適してい
ることが見い出される。これらの炭素源は個々に使用す
ることができるが、いくつかの炭素源を同一培地中で混
合してもよい。
ース、ラクトース、デキストラン、セレロース、コーン
ミール、オート麦粉等の炭水化物及びデンプンが栄養培
地中適当な同化可能な炭素源である。培地中に利用され
る炭素源の正確な量は幾分培地中の他の成分に依存する
が、通常培地の１〜10g/の炭水化物量が十分適してい
ることが見い出される。これらの炭素源は個々に使用す
ることができるが、いくつかの炭素源を同一培地中で混
合してもよい。
種々の窒素源例えば酵母加水分解物、酵母自己分解物、
酵母細胞、トマトペースト、コーンミール、オート麦
粉、大豆ミール、カゼイン加水分解物、酵母エキス、コ
ーン浸漬液、醸造可溶成分、綿実粉、肉エキス等は、本
化合物の生産中、ストレプトミセス アベルミチリスMA
−5542、ATCC53814によって容易に同化できる。種々の
窒素源は、単独で又は培地の１〜5g/の量で混合して
使用することができる。
酵母細胞、トマトペースト、コーンミール、オート麦
粉、大豆ミール、カゼイン加水分解物、酵母エキス、コ
ーン浸漬液、醸造可溶成分、綿実粉、肉エキス等は、本
化合物の生産中、ストレプトミセス アベルミチリスMA
−5542、ATCC53814によって容易に同化できる。種々の
窒素源は、単独で又は培地の１〜5g/の量で混合して
使用することができる。
培地中に混入することができる栄養無機塩には、ナトリ
ウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシ
ウム、リン酸、硫酸、塩素、炭酸、及び類似のイオンを
生成することができる通常の塩である。またコバルト、
マンガン等の金属も痕跡包含される。
ウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシ
ウム、リン酸、硫酸、塩素、炭酸、及び類似のイオンを
生成することができる通常の塩である。またコバルト、
マンガン等の金属も痕跡包含される。
以下及び実施例で記載される培地は使用することができ
るかなり様々な培地を単に例示するものであり、限定さ
れるものではないことは特記すべきである。
るかなり様々な培地を単に例示するものであり、限定さ
れるものではないことは特記すべきである。
次はストレプトミセス アベルミチリス、ATCC53814の
菌株を発育させるのに適当な培地の具体例である。
菌株を発育させるのに適当な培地の具体例である。
培地の組成 培地１ デキストロース 20 g. ペプトン 5 g. 肉エキス 5 g. 一次酵母 3 g. NaCl 5 g. CaCO3（pH調整後） 3 g. 蒸留水 1000ml. pH7.0 培地２ トマトペースト 20 g. 修飾デンプン（CPC） 20 g. 一次酵母 10 g. CoCl26H2O 0.005 g. 蒸留水 1000ml. pH7.2〜7.4 培地３（斜面培地） デキストロース 10.0 g. バクトアスパラギン 0.5 g. K2HPO4 0.5 g. バクト寒天 15.0 g. 蒸留水 1000ml. pH7.0 培地４（種子培地） 可溶性デンプン 10.0 g. アルダミンpH 5.0 g. NZアミンＥ 5.0 g. 牛肉エキス 3.0 g. MgSO4 7H2O 0.5 g. セレロース 1.0 g. Na2HPO4 0.190 g. KH2PO4 0.182 g. CaCO3 0.5 g. 蒸留水 1000ml. pH7.0〜7.2 培地５ トマトペースト 40.0 g. オート麦粉 10.0 g. セレロース 10.0 g. コーン浸漬液 5.0 g. 痕跡性元素混合物 10.0 g. 蒸留水 1000ml. pH6.8 痕跡性元素混合物 1000ml. FeSO4・7H2O 1000mg. MnSO4・4H2O 1000mg. CuCl2・2H2O 25.0 g. CaCl2 100.0mg. H2BO3 56.0mg. （NH4）2MoO44H2O 10.0mg. ZnSO4・7H2O 200.0mg. 蒸留水 1000ml. 培地６ 修飾されたCPC工業用デンプン（CPC社から入手） 40.0
g. 醸造可溶成分 7.0 g. 自己分解酵母（アルダミンpH イーストプロダクツ社か
ら入手） 5.0 g. CoCl2・6H2O 50.0mg. 蒸留水 1000ml. pH7.3 ストレプトミセス アベルミチリス、MA−5542ATCCを使
用する発酵は、約20〜40℃の温度で行なうことができ
る。最適の結果として約24〜30℃の温度でこれらの発酵
を行なうことが最も都合がよい。約27〜28℃の温度が最
適である。本化合物の生産に適当な栄養培地のpHは約5.
0〜8.5に変化させることができ、約6.0〜7.5が好適であ
る。
g. 醸造可溶成分 7.0 g. 自己分解酵母（アルダミンpH イーストプロダクツ社か
ら入手） 5.0 g. CoCl2・6H2O 50.0mg. 蒸留水 1000ml. pH7.3 ストレプトミセス アベルミチリス、MA−5542ATCCを使
用する発酵は、約20〜40℃の温度で行なうことができ
る。最適の結果として約24〜30℃の温度でこれらの発酵
を行なうことが最も都合がよい。約27〜28℃の温度が最
適である。本化合物の生産に適当な栄養培地のpHは約5.
0〜8.5に変化させることができ、約6.0〜7.5が好適であ
る。
13−エピ−イベルメクチンアグリコンはストレプトミセ
ス アベルミチリスMA−5542の発酵に発酵培地１当り
0.1〜1.0gの量で加えられる。１当り0.1〜0.5g使用す
ることが好ましい。開始物質は発酵サイクル中いかなる
時にも加えることができる。化合物は培養菌を加え発酵
を始める前に培地成分に加えるか又は発酵工程中に加え
ることができる。培養は生物学的変換を十分な時間行な
うために出発物質をサイクルが50％完了する前に好まし
くはサイクルが25％完了する前に発酵に加えることが好
ましい。
ス アベルミチリスMA−5542の発酵に発酵培地１当り
0.1〜1.0gの量で加えられる。１当り0.1〜0.5g使用す
ることが好ましい。開始物質は発酵サイクル中いかなる
時にも加えることができる。化合物は培養菌を加え発酵
を始める前に培地成分に加えるか又は発酵工程中に加え
ることができる。培養は生物学的変換を十分な時間行な
うために出発物質をサイクルが50％完了する前に好まし
くはサイクルが25％完了する前に発酵に加えることが好
ましい。
小規模な発酵は栄養培地の適当量を公知の滅菌技術を使
用するフラスコ中に装填し、ストレプトミセス アベル
ミチリスMA−5542、ATCC53814の胞子あるいは栄養細胞
増殖をフラスコに接種し、フラスコをコットンでかるく
栓をして、発酵を約28℃の恒温室温で95〜300rpmの回転
振盪機で約２〜10日間進行させることによって実施する
ことが便利である。大規模な仕事に対しては、撹拌機
と、発酵培地に通気する手段を備えた適当なタンクで発
酵を行なうのが好適である。栄養培地はタンク中で調製
され、滅菌後、ストレプトミセス アベルミチリスMA−
5542の栄養細胞増殖源を接種する。発酵は栄養培地を約
24〜37℃の温度で撹拌及び／又は通気しながら１〜８日
間続けておく。通気の程度は、発酵槽の大きさ、撹拌速
度等のいくつかの因子に依存する。一般に大規模な発酵
は約95〜300rpm及び１分当り約50〜500（CFM）の空気
で撹拌する。
用するフラスコ中に装填し、ストレプトミセス アベル
ミチリスMA−5542、ATCC53814の胞子あるいは栄養細胞
増殖をフラスコに接種し、フラスコをコットンでかるく
栓をして、発酵を約28℃の恒温室温で95〜300rpmの回転
振盪機で約２〜10日間進行させることによって実施する
ことが便利である。大規模な仕事に対しては、撹拌機
と、発酵培地に通気する手段を備えた適当なタンクで発
酵を行なうのが好適である。栄養培地はタンク中で調製
され、滅菌後、ストレプトミセス アベルミチリスMA−
5542の栄養細胞増殖源を接種する。発酵は栄養培地を約
24〜37℃の温度で撹拌及び／又は通気しながら１〜８日
間続けておく。通気の程度は、発酵槽の大きさ、撹拌速
度等のいくつかの因子に依存する。一般に大規模な発酵
は約95〜300rpm及び１分当り約50〜500（CFM）の空気
で撹拌する。
全発酵ブイヨンからの新規化合物の分離及び該化合物の
回収は、溶媒抽出及び種々のクロマトグラフィー技術を
溶媒系を用いるクロマトグラフィー分別の適用によって
実施される。
回収は、溶媒抽出及び種々のクロマトグラフィー技術を
溶媒系を用いるクロマトグラフィー分別の適用によって
実施される。
本化合物はわずかしか水に溶解しないが、有機溶媒に溶
解する。この性質は発酵ブイヨンから化合物を回収する
ために好都合に使用できる。従ってある回収方法では、
全発酵ブイヨンを有機溶媒のほぼ同量と混合する。任意
の有機溶媒を使用することができるが、水不混和性溶媒
例えば酢酸エチル、塩化メチレン、クロロホルム等を使
用することが好ましい。一般に最大回収を得るために数
回の抽出が望ましい。溶媒は本化合物並びに本化合物の
抗寄生虫作用のない他の物質を除去する。溶媒が水不混
和性の場合層を分離し、減圧下で有機溶媒を蒸発させ
る。残留物を好ましくはシリカゲルを含有するクロマト
グラフィーカラムに装填する。カラムは所望の生成物と
いくらかの不純物を保持するが、不純物の多く特に無極
性不純物を通過させる。カラムを適度の極性有機溶媒例
えば塩化メチレン又はクロロホルムで洗浄して更に不純
物を除去し、次に塩化メチレン又はクロロホルムとアセ
トン、メタノール及びエタノール等が好適である有機溶
媒との混合物で洗浄する。溶媒を蒸発させ、残留物を更
にクロマトグラフィー媒質としてシリカゲル、酸化アル
ミニウム、イオン交換樹脂、デキストランゲル等を用
い、溶離剤として種々の溶剤及び溶剤を併用してカラム
クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、分取用
薄層クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー
を使用してクロマトグラフィー処理する。薄層、高圧液
体及び分取用層クロマトグラフィーは本化合物の存在の
検出及び分離するために使用することができる。上述の
技術並びに当業者に公知の他の技術の使用は本化合物を
含む精製組成物を生成する。所望の化合物の存在は生物
学的活性は物理化学特性に対して種々のクロマトグラフ
ィー画分を分析することによって決定される。本化合物
の構造は、化合物の様々なスペクトル特性、特に核磁気
共鳴、質量スペクトル、紫外線スペクトル及び赤外線ス
ペクトルの詳細な分析によって決定されている。
解する。この性質は発酵ブイヨンから化合物を回収する
ために好都合に使用できる。従ってある回収方法では、
全発酵ブイヨンを有機溶媒のほぼ同量と混合する。任意
の有機溶媒を使用することができるが、水不混和性溶媒
例えば酢酸エチル、塩化メチレン、クロロホルム等を使
用することが好ましい。一般に最大回収を得るために数
回の抽出が望ましい。溶媒は本化合物並びに本化合物の
抗寄生虫作用のない他の物質を除去する。溶媒が水不混
和性の場合層を分離し、減圧下で有機溶媒を蒸発させ
る。残留物を好ましくはシリカゲルを含有するクロマト
グラフィーカラムに装填する。カラムは所望の生成物と
いくらかの不純物を保持するが、不純物の多く特に無極
性不純物を通過させる。カラムを適度の極性有機溶媒例
えば塩化メチレン又はクロロホルムで洗浄して更に不純
物を除去し、次に塩化メチレン又はクロロホルムとアセ
トン、メタノール及びエタノール等が好適である有機溶
媒との混合物で洗浄する。溶媒を蒸発させ、残留物を更
にクロマトグラフィー媒質としてシリカゲル、酸化アル
ミニウム、イオン交換樹脂、デキストランゲル等を用
い、溶離剤として種々の溶剤及び溶剤を併用してカラム
クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、分取用
薄層クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー
を使用してクロマトグラフィー処理する。薄層、高圧液
体及び分取用層クロマトグラフィーは本化合物の存在の
検出及び分離するために使用することができる。上述の
技術並びに当業者に公知の他の技術の使用は本化合物を
含む精製組成物を生成する。所望の化合物の存在は生物
学的活性は物理化学特性に対して種々のクロマトグラフ
ィー画分を分析することによって決定される。本化合物
の構造は、化合物の様々なスペクトル特性、特に核磁気
共鳴、質量スペクトル、紫外線スペクトル及び赤外線ス
ペクトルの詳細な分析によって決定されている。
本発明の新規な化合物はヒト及び動物の治療及び農業に
於て駆虫剤、殺虫剤及びダニ駆虫剤として著しい寄生虫
撲滅作用を有する。
於て駆虫剤、殺虫剤及びダニ駆虫剤として著しい寄生虫
撲滅作用を有する。
一般に寄生虫症として記載される疾患又は症候群は蠕虫
として知られる寄生虫を持つ動物宿主の感染によるもの
である。
として知られる寄生虫を持つ動物宿主の感染によるもの
である。
寄生虫症は家畜、例えばブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤ
ギ、イヌ、ネコ及びニワトリに流行する重大な経済上の
問題である。蠕虫の中で線虫として記載される蠕虫群は
様々な種類の動物に広範囲にわたってしばしば感染の原
因となる。上記で言及した動物に感染する最も一般的な
線虫属は、ヘモンカス（Haemonchus）、トリコストロン
ギス（Trichostronglus）、オスタータギア（Ostertagi
a）、ネマトジルス（Nematodirus）、クーペリア（Coop
eria）、アスカリス（Ascaris 蛔虫）、ブノストムム
（Bunostomum）、オエソファゴストムム（Oesophagosto
mum）、シャベルチア（Chabertia）、トリカリス（Tric
huris）、ストロンギルス（Stongylus）、トリコネマ
（Trichonema）、ジクチオカウルス（Dictyocaulus）、
カピラリア（Capillaria）、ヘテラキス（Heteraki
s）、トキソカラ（Toxocara）、アスカリジア（Ascarid
ia）、オキシウリス（Oxyuris）、アンシロストマ（Anc
ylostoma）、ウンシナリア（Uncinaria）、トキサスカ
リス（Toxascaris）及びパラスカリス（Parascaris）で
ある。これらのうちのあるものは例えばネマトジルス、
クーペリア、オエソファゴストムムは主として腸管を攻
撃し、一方、他の例えばヘモンカス及びオスタータギア
は胃に寄生しやすく、ジクチオカウルスは肺に見い出さ
れる。尚、他の寄生虫は、体の他の組織及び器官例えば
心臓、血管、皮下及びリンパ組織に位置することができ
る。寄生虫症として知られる寄生虫感染症は貧血、栄養
不良、衰弱、減量料、腸壁及び他の組織並びに器官の重
い損傷に通じ、治療されないままの場合には、感染宿主
の死に至る結果となる。本発明の化合物は、これらの寄
生虫に対して予期しない高活性を有し、更にまた犬のジ
ロフィラリア（Dirofilaria）、齧歯動物のネマトスピ
ロイデス（Nematospiroides）、サイファシア（Syphaci
a）、アスピクルリス（Aspiculuris）、ヒツジのルシリ
アsp.（Lucilia sp.金蝿属）のダニ（ticks,mites）、
シラミ、ノミ、アオバエのような動物及び鳥類の節足動
物の外部寄生体、ウシのハイポダーマsp.（Hypoderma s
p.皮膚蝿属）、ウマのガストロフィルス（Gastrophilu
s、馬蝿）及び齧歯動物のキュテレブラsp.（Cuterebra
sp.ウジムシ属）のような刺螯昆虫及びかかる遊走性の
双翅幼虫に対して有効である。
ギ、イヌ、ネコ及びニワトリに流行する重大な経済上の
問題である。蠕虫の中で線虫として記載される蠕虫群は
様々な種類の動物に広範囲にわたってしばしば感染の原
因となる。上記で言及した動物に感染する最も一般的な
線虫属は、ヘモンカス（Haemonchus）、トリコストロン
ギス（Trichostronglus）、オスタータギア（Ostertagi
a）、ネマトジルス（Nematodirus）、クーペリア（Coop
eria）、アスカリス（Ascaris 蛔虫）、ブノストムム
（Bunostomum）、オエソファゴストムム（Oesophagosto
mum）、シャベルチア（Chabertia）、トリカリス（Tric
huris）、ストロンギルス（Stongylus）、トリコネマ
（Trichonema）、ジクチオカウルス（Dictyocaulus）、
カピラリア（Capillaria）、ヘテラキス（Heteraki
s）、トキソカラ（Toxocara）、アスカリジア（Ascarid
ia）、オキシウリス（Oxyuris）、アンシロストマ（Anc
ylostoma）、ウンシナリア（Uncinaria）、トキサスカ
リス（Toxascaris）及びパラスカリス（Parascaris）で
ある。これらのうちのあるものは例えばネマトジルス、
クーペリア、オエソファゴストムムは主として腸管を攻
撃し、一方、他の例えばヘモンカス及びオスタータギア
は胃に寄生しやすく、ジクチオカウルスは肺に見い出さ
れる。尚、他の寄生虫は、体の他の組織及び器官例えば
心臓、血管、皮下及びリンパ組織に位置することができ
る。寄生虫症として知られる寄生虫感染症は貧血、栄養
不良、衰弱、減量料、腸壁及び他の組織並びに器官の重
い損傷に通じ、治療されないままの場合には、感染宿主
の死に至る結果となる。本発明の化合物は、これらの寄
生虫に対して予期しない高活性を有し、更にまた犬のジ
ロフィラリア（Dirofilaria）、齧歯動物のネマトスピ
ロイデス（Nematospiroides）、サイファシア（Syphaci
a）、アスピクルリス（Aspiculuris）、ヒツジのルシリ
アsp.（Lucilia sp.金蝿属）のダニ（ticks,mites）、
シラミ、ノミ、アオバエのような動物及び鳥類の節足動
物の外部寄生体、ウシのハイポダーマsp.（Hypoderma s
p.皮膚蝿属）、ウマのガストロフィルス（Gastrophilu
s、馬蝿）及び齧歯動物のキュテレブラsp.（Cuterebra
sp.ウジムシ属）のような刺螯昆虫及びかかる遊走性の
双翅幼虫に対して有効である。
本化合物はまたヒトに感染する寄生虫にも有用である。
人の寄生虫の最も一般的な胃腸管の寄生虫属は、アンシ
ロストマ（Ancylostoma）、ネカター（Necator）、アス
カリス（Ascaris）、ストロンギロイデス（Strongyloid
es）、トリキネラ（Trichinella）、カピラリア（Capil
laria）、トリクリス（Trichuris）及びエンテロビウス
（Enterobius）である。胃腸管以外に血液又は他の組織
及び器官に見い出される他の医薬的に重要な寄生虫属
は、ウケレリア（Wuchereria）、ブルギア（Brugia）、
オンコセルカ（Onchocerca）、ロア（Loa）、ドラクン
クルス（Dracunculus）のようなフィラリア虫及び腸以
外の場所の回虫、テトロンギロイデス及びトリキネラで
ある。化合物はまた節足動物が寄生している人、人を悩
ます刺螯昆虫及び他の双翅害虫に対して有用である。
人の寄生虫の最も一般的な胃腸管の寄生虫属は、アンシ
ロストマ（Ancylostoma）、ネカター（Necator）、アス
カリス（Ascaris）、ストロンギロイデス（Strongyloid
es）、トリキネラ（Trichinella）、カピラリア（Capil
laria）、トリクリス（Trichuris）及びエンテロビウス
（Enterobius）である。胃腸管以外に血液又は他の組織
及び器官に見い出される他の医薬的に重要な寄生虫属
は、ウケレリア（Wuchereria）、ブルギア（Brugia）、
オンコセルカ（Onchocerca）、ロア（Loa）、ドラクン
クルス（Dracunculus）のようなフィラリア虫及び腸以
外の場所の回虫、テトロンギロイデス及びトリキネラで
ある。化合物はまた節足動物が寄生している人、人を悩
ます刺螯昆虫及び他の双翅害虫に対して有用である。
化合物はまた家庭害虫例えば、ゴキブリ、ブラテラsp.
（Blatella sp.）着物の蛾、チネオラsp.（Tineola s
p.）、カーペットの甲虫、アタゲヌスsp.（Attagenus s
p.）及び家蝿ムスカドメスチカ（Musca domestica）に
対して有効である。
（Blatella sp.）着物の蛾、チネオラsp.（Tineola s
p.）、カーペットの甲虫、アタゲヌスsp.（Attagenus s
p.）及び家蝿ムスカドメスチカ（Musca domestica）に
対して有効である。
化合物はまた貯蔵穀物の昆虫の害虫例えばトリボリウム
sp.（Tribolium sp.）テネブリオsp.（Tenebrio sp.）
及び農業植物の昆虫の害虫例えばクモダニ（テトラニク
スsp.Tetranychus sp.）、アリマキ（アシルチオシフォ
ン、Acyrthiosiphon）、イナゴのような遊走性直翅及び
植物組織に棲息する幼虫期の昆虫に対して有用である。
化合物は土壌線虫及び植物寄生虫例えばメロイドギネs
p.（Meloidogyne sp.）の制御に殺線虫剤として有用で
あり、農業に重要であることができる。
sp.（Tribolium sp.）テネブリオsp.（Tenebrio sp.）
及び農業植物の昆虫の害虫例えばクモダニ（テトラニク
スsp.Tetranychus sp.）、アリマキ（アシルチオシフォ
ン、Acyrthiosiphon）、イナゴのような遊走性直翅及び
植物組織に棲息する幼虫期の昆虫に対して有用である。
化合物は土壌線虫及び植物寄生虫例えばメロイドギネs
p.（Meloidogyne sp.）の制御に殺線虫剤として有用で
あり、農業に重要であることができる。
これらの化合物は、単位用量形態、例えばカプセル剤、
巨丸剤又は錠剤で又は水薬として経口投与することがで
き、水薬は典型的にはベントナイトのような沈澱防止剤
及び湿潤剤又は類似の賦形剤を併用した通常水中の有効
成分の溶液、懸濁液又は分散液である。一般に水薬はま
た抗発泡剤を含有する。水薬処方は、通常有効化合物約
0.001〜0.5重量％を含有する。好ましい水薬処方は0.01
〜0.1重量％を含有することができる。カプセル剤及び
巨丸剤は、担体賦形剤、例えばデンプン、タルク、ステ
アリン酸マグネシウム又はリン酸二カルシウムと混和し
た有効成分を包含している。
巨丸剤又は錠剤で又は水薬として経口投与することがで
き、水薬は典型的にはベントナイトのような沈澱防止剤
及び湿潤剤又は類似の賦形剤を併用した通常水中の有効
成分の溶液、懸濁液又は分散液である。一般に水薬はま
た抗発泡剤を含有する。水薬処方は、通常有効化合物約
0.001〜0.5重量％を含有する。好ましい水薬処方は0.01
〜0.1重量％を含有することができる。カプセル剤及び
巨丸剤は、担体賦形剤、例えばデンプン、タルク、ステ
アリン酸マグネシウム又はリン酸二カルシウムと混和し
た有効成分を包含している。
本化合物を乾燥、固体単位用量形態で投与することが望
ましい場合有効化合物の所望量を含有するカプセル剤、
巨丸剤又は錠剤が通常使用される。これらの用量形態は
有効成分を適当な微細賦形剤、充填剤、崩壊剤及び／又
は結合剤例えばデンプン、ラクトース、タルク、ステア
リン酸マグネシウム、植物ゴム等と緊密に均質に混合す
ることによって調製される。かかる単位用量処方は、治
療される宿主動物の種類、感染の程度と種類及び宿主の
重量といった因子に依存して駆虫剤の全重量及び含有量
に関してかなり変化させることができる。
ましい場合有効化合物の所望量を含有するカプセル剤、
巨丸剤又は錠剤が通常使用される。これらの用量形態は
有効成分を適当な微細賦形剤、充填剤、崩壊剤及び／又
は結合剤例えばデンプン、ラクトース、タルク、ステア
リン酸マグネシウム、植物ゴム等と緊密に均質に混合す
ることによって調製される。かかる単位用量処方は、治
療される宿主動物の種類、感染の程度と種類及び宿主の
重量といった因子に依存して駆虫剤の全重量及び含有量
に関してかなり変化させることができる。
有効化合物を動物の飼料により投与する場合には、それ
らは飼料に緊密に分散させるか又は上層調味として若し
くはペレットの形態で使用されそれらは、仕上がった飼
料に添加されるか又は適宜別々に与えてもよい。他方、
本発明の抗寄生虫化合物は、非経口的に例えば、反芻
内、筋肉内、気管内又は皮下注射によって動物に投与す
ることができ、その場合有効成分は液体担体賦形剤に溶
解又は分散させる。非経口投与に対して好適には植物油
の種類例えば落花生油、綿実油等の使用し得る賦形剤と
適当に混和する。ソルケタール、グリセロール、ホルマ
ールを使用する有機製剤のような他の非経口賦形剤及び
非経口水性処方も使用される。有効化合物は投与のため
の非経口処方で溶解又は懸濁させ、かかる処方は、一般
に有効化合物0.55〜５重量％を含有する。
らは飼料に緊密に分散させるか又は上層調味として若し
くはペレットの形態で使用されそれらは、仕上がった飼
料に添加されるか又は適宜別々に与えてもよい。他方、
本発明の抗寄生虫化合物は、非経口的に例えば、反芻
内、筋肉内、気管内又は皮下注射によって動物に投与す
ることができ、その場合有効成分は液体担体賦形剤に溶
解又は分散させる。非経口投与に対して好適には植物油
の種類例えば落花生油、綿実油等の使用し得る賦形剤と
適当に混和する。ソルケタール、グリセロール、ホルマ
ールを使用する有機製剤のような他の非経口賦形剤及び
非経口水性処方も使用される。有効化合物は投与のため
の非経口処方で溶解又は懸濁させ、かかる処方は、一般
に有効化合物0.55〜５重量％を含有する。
本発明の抗寄生虫剤は主に寄生虫症の治療及び／又は予
防に用途が見い出せるが、他の寄生虫例えばダニ、シラ
ミ、ノミ、アオバエのような節足動物の寄生虫及び家畜
及び家禽の他の刺螯昆虫が引き起こす疾病の予防及び治
療にも有用である。またヒトを包含する他の動物に生じ
る寄生虫病の治療に有効である。最良の結果に使用され
る最適量は勿論使用される個々の化合物、治療される動
物の種類及び寄生虫感染又は外寄生の種類及び程度に依
存する。一般に経口投与による新規な化合物を動物の体
重1kg当たり約0.001〜10mgで良好な結果が得られ、かか
る全服用量は１〜５日といった比較的短期間にわたって
１回又は分割服用量で投与される。本発明の好適な化合
物を用いて１回の服用量で体重1kg当たり約0.025〜0.5m
gを投与することによって動物内のかかる寄生虫の優れ
た制御が得られる。必要な場合、再感染と戦うために繰
り返し治療され寄生虫の種類と使用される農業技術に依
存する。これらの材料を投与する技術は家畜病治療分野
の当業者に公知である。
防に用途が見い出せるが、他の寄生虫例えばダニ、シラ
ミ、ノミ、アオバエのような節足動物の寄生虫及び家畜
及び家禽の他の刺螯昆虫が引き起こす疾病の予防及び治
療にも有用である。またヒトを包含する他の動物に生じ
る寄生虫病の治療に有効である。最良の結果に使用され
る最適量は勿論使用される個々の化合物、治療される動
物の種類及び寄生虫感染又は外寄生の種類及び程度に依
存する。一般に経口投与による新規な化合物を動物の体
重1kg当たり約0.001〜10mgで良好な結果が得られ、かか
る全服用量は１〜５日といった比較的短期間にわたって
１回又は分割服用量で投与される。本発明の好適な化合
物を用いて１回の服用量で体重1kg当たり約0.025〜0.5m
gを投与することによって動物内のかかる寄生虫の優れ
た制御が得られる。必要な場合、再感染と戦うために繰
り返し治療され寄生虫の種類と使用される農業技術に依
存する。これらの材料を投与する技術は家畜病治療分野
の当業者に公知である。
本明細書に記載される化合物が動物の飼料成分として投
与されるか又は飲料水に溶解若しくは懸濁される場合、
組成物は有効化合物を不活性担体又は賦形剤に緊密に分
散させて提供される。不活性担体は抗寄生虫剤と反応せ
ずしかも動物に安全に投与することができるものを意味
する。好適には、飼料投与のための担体は動物食糧の一
成分であり又あってもよい。
与されるか又は飲料水に溶解若しくは懸濁される場合、
組成物は有効化合物を不活性担体又は賦形剤に緊密に分
散させて提供される。不活性担体は抗寄生虫剤と反応せ
ずしかも動物に安全に投与することができるものを意味
する。好適には、飼料投与のための担体は動物食糧の一
成分であり又あってもよい。
適当な組成物は有効成分が比較的大量に存在し、動物に
直接摂取させるか又は飼料に直接又は中間の希釈または
混和段階に添加させるのに適当な飼料プレミックス又は
添加物を包含する。かかる組成物に適当な代表的な担体
又は賦形剤は、具体的には醸造乾燥穀粒、コーンミー
ル、シトラスミール発酵残分、カミ殻粉、小麦ショー
ト、糖蜜可溶分、コーンコブミール、食用豆ミール飼
料、大豆粗粒、粉砕石灰岩等を包含する。有効化合物を
粉砕、撹拌、すりつぶす、ころがすといった方法によっ
て担体中に緊密に分散させる。有効化合物約0.005〜2.0
重量％を含有する組成物は飼料プレミックスとして特に
適当である。動物に直接与える飼料添加物は、有効化合
物約0.002〜0.3重量％を含有する。
直接摂取させるか又は飼料に直接又は中間の希釈または
混和段階に添加させるのに適当な飼料プレミックス又は
添加物を包含する。かかる組成物に適当な代表的な担体
又は賦形剤は、具体的には醸造乾燥穀粒、コーンミー
ル、シトラスミール発酵残分、カミ殻粉、小麦ショー
ト、糖蜜可溶分、コーンコブミール、食用豆ミール飼
料、大豆粗粒、粉砕石灰岩等を包含する。有効化合物を
粉砕、撹拌、すりつぶす、ころがすといった方法によっ
て担体中に緊密に分散させる。有効化合物約0.005〜2.0
重量％を含有する組成物は飼料プレミックスとして特に
適当である。動物に直接与える飼料添加物は、有効化合
物約0.002〜0.3重量％を含有する。
かかる添加物は仕上がった飼料が寄生虫病の治療及び制
御に必要とされる有効化合物の濃度を得るような量で動
物飼料に添加される。有効化合物の望ましい濃度は、前
述の因子に並びに使用される個々の化合物に依存して変
化するが、本発明の化合物は通常望ましい抗寄生虫結果
を得るために飼料中0.00001〜0.002％の濃度で供給され
る。
御に必要とされる有効化合物の濃度を得るような量で動
物飼料に添加される。有効化合物の望ましい濃度は、前
述の因子に並びに使用される個々の化合物に依存して変
化するが、本発明の化合物は通常望ましい抗寄生虫結果
を得るために飼料中0.00001〜0.002％の濃度で供給され
る。
本発明に関する化合物を用いるには、個々の成分が単離
精製されて、そのまま使用されることができる。他方、
もっと多くの個々の成分の混合物が使用されることもで
きる。発酵ブイヨンの精製から得られる種々の化合物を
完全に分離することは必要ではない。一般に２種以上の
化合物を含有するが、それらから除外される他の無関係
な化合物を有する混合物が得られ、かかる混合物は本明
細書に記載される寄生虫病の予防及び治療に使用される
ことができる。かかる混合物は一般に等量ではない割合
で化合物を含有するが、全ての化合物は実質的な活性を
有しており、混合物の抗寄生虫活性は正確に決定するこ
とができる。
精製されて、そのまま使用されることができる。他方、
もっと多くの個々の成分の混合物が使用されることもで
きる。発酵ブイヨンの精製から得られる種々の化合物を
完全に分離することは必要ではない。一般に２種以上の
化合物を含有するが、それらから除外される他の無関係
な化合物を有する混合物が得られ、かかる混合物は本明
細書に記載される寄生虫病の予防及び治療に使用される
ことができる。かかる混合物は一般に等量ではない割合
で化合物を含有するが、全ての化合物は実質的な活性を
有しており、混合物の抗寄生虫活性は正確に決定するこ
とができる。
更に本化合物を動物の飼料に添加する場合には、発酵ブ
イヨンからの菌糸乾燥ケークを利用することが可能であ
る。菌糸は優位な活性を含有し、菌糸の活性レベルを決
定することができることから、直接動物飼料に添加する
ことができる。
イヨンからの菌糸乾燥ケークを利用することが可能であ
る。菌糸は優位な活性を含有し、菌糸の活性レベルを決
定することができることから、直接動物飼料に添加する
ことができる。
本発明に関する化合物はまた作物の生長中又は貯蔵中に
それらにダメージを与える農業害虫を撲滅するためにも
有用である。かかる農業害虫から守るために、公知技術
を用い、シロップ、粉剤、乳剤等として化合物が生長又
は貯蔵作用に適用される。
それらにダメージを与える農業害虫を撲滅するためにも
有用である。かかる農業害虫から守るために、公知技術
を用い、シロップ、粉剤、乳剤等として化合物が生長又
は貯蔵作用に適用される。
本化合物の駆虫活性は、飼料を介して、個々の化合物、
かかる化合物の混合物、濃縮抽出物等の試料を３日前に
胃腸内寄生虫で感染されたマウスに経口投与することに
よって測定することができる。投薬開始度、11、12及び
13日目にマウスの糞を卵にいて試験し、翌日マウスを殺
し、小腸基部に存在する寄生虫の数を決定する。感染未
投薬のコントロール群と比較し、卵及び寄生虫の数が著
しく減少している場合に活性化合物の存在が確認される
のである。
かかる化合物の混合物、濃縮抽出物等の試料を３日前に
胃腸内寄生虫で感染されたマウスに経口投与することに
よって測定することができる。投薬開始度、11、12及び
13日目にマウスの糞を卵にいて試験し、翌日マウスを殺
し、小腸基部に存在する寄生虫の数を決定する。感染未
投薬のコントロール群と比較し、卵及び寄生虫の数が著
しく減少している場合に活性化合物の存在が確認される
のである。
下記実施例は、本発明が更に十分に理解されるために掲
載されている。かかる実施例は、本発明を限定するもの
として解釈されるためのものではない。
載されている。かかる実施例は、本発明を限定するもの
として解釈されるためのものではない。
実施例 培養菌：ストレプトミセス アベルミチリスMA5542培地 Ａ g/ グルコース 20 ハイケース 20 酵母エキス 20 KNO3 2.0 FeSO4・7H2O 0.025 NaCl 0.5 MgSO4 0.5 MnSO4 0.005 ZnSO4 0.01 CaCl2・2H2O 0.02 pH 7.0 培地Ａは培養菌の種子発育及び保存に利用される。
Ｂ 乳餅 20 アルダミンpH ４ グルコース 90 MgSO4・7H2O 0.5 CoCl2・6H2O 0.1mg/ ZnSO2・7H2O 1.0mg/ FeCl3・6H2O 3.0mg/ CuSO4・5H2O 0.6mg/ pH 7.2 培地Ｂは転換に利用される。
基質 13−エピ−イベルメクチンアグリコン（13−エピ−22,2
3−ジヒドロアベルメクチンB1a/B1bアグリコとも呼ばれ
る）を米国特許第4,587,247号に記載される操作に従っ
て調製した。添加する基質を溶解するためにジメチルス
ルホキシドが使用される。
3−ジヒドロアベルメクチンB1a/B1bアグリコとも呼ばれ
る）を米国特許第4,587,247号に記載される操作に従っ
て調製した。添加する基質を溶解するためにジメチルス
ルホキシドが使用される。
転換 凍結ヴァイアルのS.アベルミチリスMA 5542を種子フラ
スコに接種し回転振盪機（220rpm）で27℃に於て18時間
温置した。転換フラスコに種子培養液1mlを接種し、回
転振盪機で27℃に於て温置した。13−エピ−イベルメク
チンアグリコンをMA 5542（4mg/フラスコ）に60時間で
加えた。10日間温置した後、培養液を回収した。85/15M
eOH/H2O中ホワットマンＣ−18パーティスフェアカラム
による分析用HPLCは２種の生物学的変換生産物を生ずる
ことを示す。これらは各々基質の２分と４分後に溶離す
る。単離及び精製操作は次の通り記載される。
スコに接種し回転振盪機（220rpm）で27℃に於て18時間
温置した。転換フラスコに種子培養液1mlを接種し、回
転振盪機で27℃に於て温置した。13−エピ−イベルメク
チンアグリコンをMA 5542（4mg/フラスコ）に60時間で
加えた。10日間温置した後、培養液を回収した。85/15M
eOH/H2O中ホワットマンＣ−18パーティスフェアカラム
による分析用HPLCは２種の生物学的変換生産物を生ずる
ことを示す。これらは各々基質の２分と４分後に溶離す
る。単離及び精製操作は次の通り記載される。
単離及び精製 全ブイヨン20mlを遠心し、細胞をメタノール20mlで３回
抽出し真空中で乾固し、MeOH 5mlに溶解した。得られた
溶液を濾過し、窒素気流下で1mlに濃縮した。分取用HPL
Cクロマトグラフィーを次の通り実施した。デュポンゾ
ルバックスＣ−18カラム（21.2mm×25cm）に200μを
５回注入した。移動相は80％水性MeOHで７μ／分とし
た。各々70分と116分の２つのピークを集めた。溶媒を
真空下で蒸発させて除去した。核磁気共鳴及び質量分析
を用いて70分のピークが13−エピ−イベルメクチンモノ
サッカライドとして同定され116分のピークは13−エピ
−５−Ｏ−メトキシイベルメタチンアグリコンとして同
定された。
抽出し真空中で乾固し、MeOH 5mlに溶解した。得られた
溶液を濾過し、窒素気流下で1mlに濃縮した。分取用HPL
Cクロマトグラフィーを次の通り実施した。デュポンゾ
ルバックスＣ−18カラム（21.2mm×25cm）に200μを
５回注入した。移動相は80％水性MeOHで７μ／分とし
た。各々70分と116分の２つのピークを集めた。溶媒を
真空下で蒸発させて除去した。核磁気共鳴及び質量分析
を用いて70分のピークが13−エピ−イベルメクチンモノ
サッカライドとして同定され116分のピークは13−エピ
−５−Ｏ−メトキシイベルメタチンアグリコンとして同
定された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 493/22 Ｃ０７Ｈ 17/08 Ｌ (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 19/62 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (3)
- 【請求項１】同化可能な炭素源、窒素源及び無機塩を含
有する水性栄養培地中でストレプトミセスアベルミチリ
スMA−5542の培養株、13−エビ−イベルメクチンアグリ
コンを発酵させることを特徴とする 式 （式中R1は水素又はメチルである）を有する化合物又は
式 （式中R1は水素又はメチルである）を有する化合物の製
造方法。 - 【請求項２】13−エビ−イベルメクチンアグリコンを発
酵培地１当り0.1〜1.0gの範囲で加える請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】13−エビ−イベルメクチンアグリコンを発
酵培地１当り0.1〜0.5gの範囲で加える請求項２記載
の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US25956088A | 1988-10-18 | 1988-10-18 | |
| US259,560 | 1988-10-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02300188A JPH02300188A (ja) | 1990-12-12 |
| JPH0795958B2 true JPH0795958B2 (ja) | 1995-10-18 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1271442A Expired - Lifetime JPH0795958B2 (ja) | 1988-10-18 | 1989-10-18 | 駆虫性生物学的変換生成物 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0365088B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0795958B2 (ja) |
| AU (1) | AU618136B2 (ja) |
| CA (1) | CA1339481C (ja) |
| DE (1) | DE68921408D1 (ja) |
| NZ (1) | NZ230948A (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| NZ240128A (en) * | 1990-10-15 | 1994-01-26 | Merck & Co Inc | Production of 13-beta and 5-beta ivermectin monoglucopyranosides from |
| US5250422A (en) * | 1990-10-15 | 1993-10-05 | Merck & Co., Inc. | Biotransformation process for the production of invermectin derivatives |
| EP0637244B1 (en) * | 1992-03-23 | 2001-01-03 | Merck & Co. Inc. | A strain of streptomyces avermitilis glycosylates avermectin compounds |
| CN103642865B (zh) * | 2013-11-18 | 2015-09-30 | 宁夏泰瑞制药股份有限公司 | 一种阿佛曼链霉菌发酵生产伊维菌素的培养基和发酵方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4199569A (en) | 1977-10-03 | 1980-04-22 | Merck & Co., Inc. | Selective hydrogenation products of C-076 compounds and derivatives thereof |
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|---|---|---|---|---|
| PH15982A (en) * | 1977-10-03 | 1983-05-18 | Merck & Co Inc | Selective hydrogenation producta of c-076 compounds and derivatives thereof |
| IL56149A (en) * | 1977-12-19 | 1989-09-28 | Merck & Co Inc | 13-halo and 13-deoxy derivatives of c-076 compounds,their preparation and method for the treatment of parasitic infections in animals therewith |
| US4203976A (en) * | 1978-08-02 | 1980-05-20 | Merck & Co., Inc. | Sugar derivatives of C-076 compounds |
| EP0277916B1 (de) * | 1987-02-04 | 1994-05-25 | Ciba-Geigy Ag | Mikrobielles Verfahren zur Herstellung von Milbemycin-Derivaten |
-
1989
- 1989-09-29 CA CA000615344A patent/CA1339481C/en not_active Expired - Fee Related
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- 1989-10-13 EP EP89202592A patent/EP0365088B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-13 DE DE68921408T patent/DE68921408D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-17 AU AU42955/89A patent/AU618136B2/en not_active Ceased
- 1989-10-17 ZA ZA897851A patent/ZA897851B/xx unknown
- 1989-10-18 JP JP1271442A patent/JPH0795958B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4199569A (en) | 1977-10-03 | 1980-04-22 | Merck & Co., Inc. | Selective hydrogenation products of C-076 compounds and derivatives thereof |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU618136B2 (en) | 1991-12-12 |
| JPH02300188A (ja) | 1990-12-12 |
| AU4295589A (en) | 1990-04-26 |
| EP0365088B1 (en) | 1995-03-01 |
| NZ230948A (en) | 1992-05-26 |
| ZA897851B (en) | 1990-07-25 |
| EP0365088A3 (en) | 1991-04-24 |
| CA1339481C (en) | 1997-09-30 |
| EP0365088A2 (en) | 1990-04-25 |
| DE68921408D1 (de) | 1995-04-06 |
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