JPH08103267A - ベタインアルデヒド脱水素酵素およびそれをコードする遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 新規なベタインアルデヒド脱水素酵素（ＢＡ
ＤＨ）、それをコ−ドする遺伝子および当該遺伝子を含
有する形質転換体を提供する。 【構成】 大麦の緑葉からｍＲＮＡからｃＤＮＡライブ
ラリーを作成し、プラ−クハイブリダイゼ−ションによ
り得られたＢＡＤＨｃＤＮＡをクロ−ニングして、ベク
タ−に組み込み、エレクトロポレ−ション法により、該
ｃＤＮＡを植物中に導入する。 【効果】 ＢＡＤＨをコ−ドする遺伝子を導入した植物
には、耐乾燥性、耐塩性が付与される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ベタインアルデヒド脱
水素酵素、すなわちベタイン生合成の最終ステップにお
いてベタインアルデヒドを脱水素化しベタインを生成さ
せる酵素、それをコードする遺伝子、および該遺伝子を
含有する形質転換体に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】一般
に、植物は乾燥条件、塩類集積などの種々の環境ストレ
ス下に置かれると、そのストレスに応答して適応機能を
示す様になる。一番簡単な適応モデルは、植物細胞が何
らかの方法で細胞内外の浸透圧格差を維持し、再び吸水
により膨圧を回復するというものである。しかし、この
場合細胞内代謝系酵素そのものを耐塩性、耐乾性にする
必要があり、環境変化に対しての適応が困難になる。従
って、多くの耐塩性植物が行っているように、外的浸透
圧変化に応じて細胞内の浸透圧を維持するために特別な
化合物、適合溶質、を合成する方法が適応機能として優
れている。

【０００３】適合溶質としては、グリシンベタイン、プ
ロリンなどの両性化合物、ピニトール、ソルビトール、
マンニトールなどのポリオール類が知られている。これ
らの化合物は水溶性に富み代謝されにくく、かつ代謝に
影響を及ぼさないなどの特徴を有し、浸透圧調節に適し
ている。グリシンベタイン（一般にベタインと略される
ので、以下単に「ベタイン」と略記する）は、最もよく
研究されている適合溶質である。ベタインは、アカザ
科、イネ科、ナス科などの高等植物のほか、耐塩性ラン
藻、大腸菌などにおいても適合溶質として機能している
ものと考えられ、その生合成系が精力的に解析されてい
る。

【０００４】大腸菌では、コリンを出発物質として、コ
リン脱水素酵素やベタインアルデヒド脱水素酵素により
ベタインが合成されており、各酵素に対応する遺伝子と
してｂｅｔＡ、ｂｅｔＢ遺伝子が知られている（Ｊ．Ｇ
ｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１３４，１７３７（１９
８８））。一方高等植物では、ベタインは葉緑体中で大
腸菌におけるのと同様の経路で生合成される事が明らか
になっている。この生合成の初反応は、コリンモノオキ
シゲナーゼによって行われ、第２段目の反応は、ベタイ
ンアルデヒド脱水素酵素（以下、「ＢＡＤＨ」と略記す
る）によって行われる。すでに、双子葉植物のホウレン
ソウやサトウダイコンからはこのＢＡＤＨをコ−ドする
遺伝子のｃＤＮＡが単離されている（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８７，２７４５
（１９９０）；Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１
８，１（１９９２））。

【０００５】これらＢＡＤＨの発現は、転写レベルで制
御されており、塩ストレスによって誘導される。このこ
とから、植物のＢＡＤＨをコ−ドする遺伝子のｃＤＮ
Ａ、あるいは大腸菌のｂｅｔＡ、ｂｅｔＢ遺伝子を恒常
的に発現させる事により、耐塩性、耐乾燥性植物の作出
が可能なると考えられている。しかしながら、これまで
に単離されたＢＡＤＨ遺伝子はわずかであり、しかも単
子葉植物ではいまだ単離されていない。そのため、新規
なＢＡＤＨ、それをコードする遺伝子、およびそれを用
いた植物生理学的、分子生物学的なストレス機構の解明
が求められていた。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者は、新規なＢＡ
ＤＨおよびそれをコードする遺伝子を取得して、植物に
おける耐ストレス機構を植物生理学的、分子生物学的に
解析する事を目的として検討を重ねてきた結果、単子葉
植物から初めてＢＡＤＨをコ−ドする遺伝子のｃＤＮＡ
を単離し、本発明を完成するに至った。

【０００７】即ち本発明の要旨は、配列表の配列番号１
に記載のアミノ酸配列で表されることを特徴とするベタ
インアルデヒド脱水素酵素（ＢＡＤＨ）、それをコード
する遺伝子および当該遺伝子を含有してなる形質転換体
に存する。以下、本発明につき詳細に説明する。本発明
においては、大麦（例えば、Ｈｏｒｄｅｎ ｖｕｌｇａ
ｒｅ Ｌ． １１６ Ｊｅｏｎｊｕ Ｎａｔｉｖｅ Ｋ
ｏｒｃａ）をグロースチェンバー等で生育させ、その葉
を材料に用いる。高濃度のＮａＣｌを添加し、２日間程
度栽培した大麦の緑葉をワーリング ブレンダー等で磨
砕し、フェノール抽出、エタノール沈殿等によって全Ｒ
ＮＡを得る。次いで、塩化リチウム処理によってＤＮＡ
や低分子ＲＮＡを除去した後、常法に従いオリゴ（ｄ
Ｔ）セルロースカラムにより、ポリＡ部分を持つＲＮ
Ａ、すなわち単子葉植物におけるｍＲＮＡ、（以下、ｐ
ｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮＡと記載する）を得る。

【０００８】ｃＤＮＡクローニングキットによって、上
記のｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、さらにλ ファ−
ジベクタ−にクローニングしてｃＤＮＡライブラリーを
作成する。このｃＤＮＡライブラリーから、ホウレンソ
ウやサトウダイコン由来のＢＡＤＨをコードする遺伝子
のＤＮＡ断片をプローブとして、プラークハイブリダイ
ザーションを行い、スクリーニングする。ポジティブプ
ラークよりファージＤＮＡを抽出し、ベクタ−に組み込
まれたｃＤＮＡをプラスミドにサブクローニングし、塩
基配列を決定する。また、そのＤＮＡ情報よりタンパク
質のコード領域を決定する。

【０００９】かくして決定されるＤＮＡ断片の塩基配列
およびこれより推定されるアミノ酸配列は、配列表の配
列番号１に示すものが挙げられるが、かかるＤＮＡ断片
がコードするポリペプチドがベタインアルデヒド脱水素
酵素活性を損なわない範囲で、一部のアミノ酸または核
酸を除去、置換あるいは付加する事の改変を行ったもの
も本発明に含まれる。

【００１０】この様にして単離されたｃＤＮＡがＢＡＤ
Ｈをコードしているか否かの確認は、他の植物（たとえ
ばホウレンソウ、サトウダイコン）で既に単離されてい
る同遺伝子とのホモロジー検索によって推測できる。ま
た、大腸菌や植物の発現ベクターに上記ｃＤＮＡを組み
込み、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３
１，７９７（１９９０）に記載の方法に従ってそれら粗
タンパク質中のベタインアルデヒド脱水素酵素活性を測
定する事によっても、同活性を確認することができる。

【００１１】さらに、得られたＢＡＤＨの遺伝子は、植
物内で発現するプロモーター（たとえばカリフラワーモ
ザイクウイルスの３５Ｓプロモーター）およびターミネ
ーター（たとえばノパリン合成酵素遺伝子由来のターミ
ネーター）等と連結してキメラ遺伝子を作成し、大腸菌
プラスミド（たとえばｐＵＣ１９、ｐＢＲ３２２など）
に組み込み増幅した後、エレクトロポーレーション法を
用いてタバコ等の植物細胞に導入することができる。ま
た、アグロバクテリウムのＴｉプラスミドやＲｉプラス
ミドに組み込んだり、バイナリーベクターとして使用す
る事により、アグロバクテリウムを介して他の植物に導
入することができる。

【００１２】

【実施例】以下、本発明を実施例により更に具体的に説
明するが、本発明はその要旨を越えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。 実施例１ 大麦 ｐｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮＡの単離 グロースチェンバーで生育した（１６時間、明所、２５
℃；８時間、暗所、１８℃）大麦（Ｈｏｒｄｅｎ ｖｕ
ｌｇａｒｅ Ｌ．１１６ Ｊｅｏｎｊｕ Ｎａｔｉｖｅ
Ｋｏｒｃａ）に塩ストレスを与えるため、最終濃度が
３００ｍＭになるまで１日おきに１００ｍＭのＮａＣｌ
を添加した後、さらに３００ｍＭ ＮａＣｌ下で２日間
栽培した。材料として、こうしてストレスを与えて栽培
した大麦の緑葉を用いた。約１０ｇの大麦の葉を、液体
窒素で凍結後、テフロンホモジナイザーで磨砕し、１５
ｍｌの抽出溶液（４Ｍ グアニジンチオシアネート、２
５ｍＭ クエン酸ナトリウム、０．５％ ザルコシル及
び０．１Ｍ ２−メルカプトエタノール（ｐＨ７．
０））を加えた。更に、２Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ
４．０）を加えた後、フェノールとクロロホルムとイソ
アミルアルコールを２５：２４：１の容積比で混合した
溶液を抽出溶液と同量加えてよく混合した後、４℃で１
５分間放置した。この試料を１０，０００×ｇで２０分
間遠心分離し、その水層を回収した。この水層と同量
（約１５ｍｌ）のイソプロパノールを加え、−２０℃で
１時間冷却し、全核酸を沈殿させた。遠心分離（１０，
０００×ｇ、２０分間、４℃）後、回収した核酸に前述
の抽出溶液を１ｍｌ加え、攪拌後、再度イソプロパノー
ルで核酸を沈殿させた。遠心分離によって回収した核酸
ペレットに７５％のエタノールを加え洗浄後、減圧乾燥
を行って全核酸標品を得た。

【００１３】こうして得られた乾燥全核酸標品を、１５
ｍｌのＴＥバッファー（１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ
７．５）及び１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解し、５Ｍ 塩化
リチウムを１０ｍｌ加えて最終濃度を２Ｍとし、４℃で
１晩放置した。１０，０００×ｇで２０分間の遠心分離
により、上清に残るＤＮＡや低分子のＲＮＡを除去した
全ＲＮＡ画分を沈殿として回収した。得られた沈殿を２
Ｍ 塩化リチウムに懸濁し再度遠心分離で沈殿を回収
し、７０％ エタノールで洗浄した後に減圧乾燥を行っ
て全ＲＮＡ標品を得た。

【００１４】こうして得られた乾燥全ＲＮＡ標品を、バ
ッファ− ４．５ｍｌ（１０ｍＭトリス−塩酸、１０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ及び０．２％ ＳＤＳ（ｐＨ７．５））に
溶解し、６８℃で３分間処理した後、氷水中で急冷し
た。０．５ｍｌの５Ｍ 塩化リチウムを加え、遠心分離
によって不溶物を除去した後、上清を０．５Ｍ 塩化リ
チウム、１０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．５）、１０
ｍＭ ＥＤＴＡ及び０．２％ＳＤＳで平衡にしておいた
オリゴ（ｄＴ）セルロースカラムにかけた。カラムを約
５倍量の上記バッファーで洗浄した後、１０ｍＭ トリ
ス−塩酸（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ及び０．０
５％ ＳＤＳでｐｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮＡを溶出した。ｐ
ｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮＡ溶出液に、５Ｍ 塩化リチウム水
溶液とエタノールを１：２４の容積比で混合した溶液を
２．５倍容加え、−２０℃で一晩放置した後遠心分離を
行い、得られた沈殿を７０％エタノールで洗浄後、減圧
乾燥してｐｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮＡを得た。

【００１５】実施例２ ｃＤＮＡライブラリーの作製と
遺伝子のスクリーニング ｃＤＮＡライブラリーの作製は、アマシャム社のプロト
コールに従った。すなわち、乾燥ｐｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮ
Ａ ５μｇを鋳型として、オリゴ（ｄＴ）１２−１８，
逆転写酵素によって１本鎖ｃＤＮＡを合成した。次い
で、上記の反応液にＤＮＡポリメラーゼＩ、ＲＮａｓｅ
Ｈを加え、１６℃で２時間反応させて２本鎖ｃＤＮＡを
合成した。更に，Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼを加え、３７
℃で１０分間反応させて２本鎖ｃＤＮＡの末端を平滑に
した。反応を停止した後、フェノール抽出によって２本
鎖ｃＤＮＡを回収した。このＤＮＡをサイズフラクショ
ネーションカラムを用いてゲル濾過による分画を行い、
目的のサイズ（約１．０〜３ｋｂ）のＤＮＡを回収し
た。

【００１６】このｃＤＮＡをλ ファ−ジベクタ−の１
種である、λ ＺＡＰＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）
のＥｃｏＲＩによる切断部位に組み込んだ。この大麦の
ｃＤＮＡを含むファージを大腸菌ＤＨ５αに感染させ、
プラ−クを形成させた後、プラークハイブリダイザーシ
ョンを行った。プローブには、ホウレンソウのＢＡＤＨ
をコ−ドする遺伝子のうち、３’側の６９３ｂｐを用い
た。この断片はホウレンソウのｃＤＮＡを鋳型としてＰ
ＣＲ法（５’側プライマー：５’−ＴＴＴＧＡＡＧＡＴ
ＧＴＴＧＡＴＡＴＴＧＡ−３’（配列表の配列番号
２）；３’側プライマー：５’−ＴＧＧＡＧＡＴＡＴＣ
ＡＧＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧ−３’（配列表の配列番
号３））により得た。このプローブＤＮＡ断片は、アマ
シャム社のランダムプライマーラベリングシステムを用
い、32Ｐでラベルした。

【００１７】約６０万個の独立したプラークについて、
ハイブリダイゼーションを行ったところ、プローブとハ
イブリダイズした３個のポジティブプラークが得られ
た。そのうち、１つのファージにはＢＡＤＨをコードす
る最長のｃＤＮＡを含む事がわかった。このクローン
（以下、「ｐＢＡＤ」と略記する）には約１．８ｋｂの
ｃＤＮＡが組み込まれており、全塩基配列を決定したと
ころ、ｐＢＡＤは全長１８２６ｂｐ、５’末端から５０
５アミノ酸をコードするオ−プン リ−ディングフレ−
ム（ＯＲＦ）を持っていた。ｐＢＡＤの全塩基配列を配
列表の配列番号１にしめす。また３’非翻訳領域のう
ち、１６８２ｂｐから１６８７ｂｐにポリアデニレーシ
ョンシグナルであると推定される部分も見い出された。

【００１８】この翻訳ポリペプチドをホウレンソウ、サ
トウダイコンのＢＡＤＨ遺伝子と比較すると、それぞれ
７０％、６９％の相同性を示した。しかし、大腸菌の遺
伝子とは３７％の相同性しか示さなかった。また、一般
の脱水素酵素に見られるＮＡＤ+ の結合部位である−Ｖ
ＴＬＥＬＧＧＫＳＰ−（配列表の配列番号４）という配
列にほぼ共通な１０個のアミノ酸配列も存在していた。
また３’末端には、パーオキシゾームへの移行シグナル
と考えられるＳＫＬモチーフも存在した。

【００１９】実施例３ 大麦ベタインアルデヒド脱水素
酵素遺伝子のタバコへの導入とその発現 大麦のＢＡＤＨをコ−ドする遺伝子を、ｐＢＩ１２１
（ＥＭＢＯ Ｊ．，６，３９０１（１９８７））におけ
るカリフラワーモザイクウイルスの３５Ｓプロモーター
の下流に組み込んだ。さらに、このプラスミド（ｐＢＢ
Ｈ）をアグロバクテリウムＬＢＡ４４０４にエレクトロ
ポレーション法によって導入した（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉ
ｄ．Ｒｅｓ．，１７，６４６７（１９８９））。タバコ
（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｃｖ． ＳＲ
１）への形質転換はリーフディスク法で行い、カナマイ
シン耐性の有無により、形質転換体を選抜した（Ｐｌａ
ｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，ｍａｎｕ
ａｌ １）。

【００２０】形質転換タバコにおけるＢＡＤＨの活性
を、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，１４８５（１９８
７）に従って測定すると、非形質転換体には存在しない
ＢＡＤＨ活性が検出できた。その結果を図１に示す。図
中、ＷＴは野生株（非形質転換体）を表し、ＢＨ２およ
びＢＨ３はともに形質転換体を表す。また同図中上部
に、各個体におけるＢＡＤＨのウエスタンブロッティン
グパターンを示した。

【００２１】実施例４ ストレス条件下でのＢＡＤＨ遺
伝子の発現 大麦で単離されたＢＡＤＨ遺伝子を用い、ノザン解析に
よって本遺伝子の発現様式を調べた。塩や水によるスト
レスあるいは乾燥条件下で大麦を生育させ、その植物の
葉や根から全ＲＮＡを抽出し、アガロースゲルでＲＮＡ
を電気泳動した後、ナイロンメンブレンに写した。プロ
ーブにはｐＢＡＤのＥｃｏＲＩ−ＡｐａＩ断片（約０．
７ｋｂ）を用いた。その結果、ＢＡＤＨをコ−ドする遺
伝子は３００ｍＭのＮａＣｌ、４８時間の塩ストレス下
における誘導により転写量が約８倍に増加したことが確
認された。

【００２２】また、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
を用いた水ストレス下でも塩ストレスと同様、ＢＡＤＨ
をコ−ドする遺伝子の転写量が増加した。ＢＡＤＨは、
アブシジン酸（ＡＢＡ）によっても誘導されることか
ら、本遺伝子はＡＢＡを介した適応機構に関与している
ことが示唆された。

【００２３】

【発明の効果】ＢＡＤＨ遺伝子を導入した植物には、耐
塩性、耐乾燥性が付与される。

【００２４】

【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：１８２６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 生物名：ホルデン バルガレ（Ｈｏｒｄｅｎ ｖｕｌｇ
ａｒｅ） 株名：Ｌ．１１６ Ｊｅｏｎｊｕ Ｎａｔｉｖｅ Ｋｏ
ｒｃａ 組織の種類：緑葉 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：４８．．１５６２ 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 CACCACCGTC ACCACCCAGG CGCCCACCTC GCCGGAGCAG AGTAGCC ATG GCC GCG CCC 59 Met Ala Ala Pro 1 CCA GCG ATC CCG CGC CGC GGC CTC TTC ATC GGC GGC GGG TGG CGC GAG 107 Pro Ala Ile Pro Arg Arg Gly Leu Phe Ile Gly Gly Gly Trp Arg Glu 5 10 15 20 CCC ACC CTG GGC CGC CAC ATC CCC GTC ATC AAC CCG GCC ACC GAG GAC 155 Pro Thr Leu Gly Arg His Ile Pro Val Ile Asn Pro Ala Thr Glu Asp 25 30 35 ACC ATC GGC GAC ATC CCG GCA GCC ACC GCG GAG GAC GTC GAG CTC GCC 203 Thr Ile Gly Asp Ile Pro Ala Ala Thr Ala Glu Asp Val Glu Leu Ala 40 45 50 GTC GCG GCC GGC GGT CCG GTT CTT GCT CGA CGG CGG GAG CCC TGG GCG 251 Val Ala Ala Gly Gly Pro Val Leu Ala Arg Arg Arg Glu Pro Trp Ala 55 60 65 CGC GCT TCC GGG GCC ACG CGT GCC AAG TAT CTG AAC GCG ATC GCC GCT 299 Arg Ala Ser Gly Ala Thr Arg Ala Lys Tyr Leu Asn Ala Ile Ala Ala 70 75 80 AAG ATT ACA GGA AAG ATA GCG TAT CTG GCA TTG CTG GAG ACG GTT GAT 347 Lys Ile Thr Gly Lys Ile Ala Tyr Leu Ala Leu Leu Glu Thr Val Asp 85 90 95 100 TCT GGA AAA CCC AAG GAT GAA GCA GTT GCT GAC ATG GAC GAT GTT GCT 395 Ser Gly Lys Pro Lys Asp Glu Ala Val Ala Asp Met Asp Asp Val Ala 105 110 115 GCA TGC TTT GAG TAC TAT GCT GCT CTG GCT GAA GCC TTA GAT GGG AAA 443 Ala Cys Phe Glu Tyr Tyr Ala Ala Leu Ala Glu Ala Leu Asp Gly Lys 120 125 130 CAA CAT GCA CCA ATC TCT CTG CCC ATG GAA GAA TTC AAG ACC TAT GTT 491 Gln His Ala Pro Ile Ser Leu Pro Met Glu Glu Phe Lys Thr Tyr Val 135 140 145 CTT AAA GAA CCC ATC GGG GTT GTT GGA CTC ATC ACT CCC TGG AAC TAT 539 Leu Lys Glu Pro Ile Gly Val Val Gly Leu Ile Thr Pro Trp Asn Tyr 150 155 160 CCT TTG TTG ATG GCT ACT TGG AAG GTT GCA CCT GCC CTG GCT GCT GGG 587 Pro Leu Leu Met Ala Thr Trp Lys Val Ala Pro Ala Leu Ala Ala Gly 165 170 175 180 TGT ACA GCT GTG TTA AAA CCA TCT GAG CTG GCA TCT CTA ACT TGC TTA 635 Cys Thr Ala Val Leu Lys Pro Ser Glu Leu Ala Ser Leu Thr Cys Leu 185 190 195 GAG CTC GGC GCA ATA TGT GAA GAG ATA GGA CTG CCT TCA GGA GTT CTG 683 Glu Leu Gly Ala Ile Cys Glu Glu Ile Gly Leu Pro Ser Gly Val Leu 200 205 210 AAC ATA ATT ACT GGT CTG GGC CCT GAC GCA GGT GCT CCA ATA GCT TCA 731 Asn Ile Ile Thr Gly Leu Gly Pro Asp Ala Gly Ala Pro Ile Ala Ser 215 220 225 CAT CCC CAT GTG GAT AAG ATC GCT TTT ACA GGA AGT ACT GCA ACT GGT 779 His Pro His Val Asp Lys Ile Ala Phe Thr Gly Ser Thr Ala Thr Gly 230 235 240 AAG ACG ATA ATG ACC GCT GCT GCT CAA ATG GTT AAG CCT GTT TCA TTA 827 Lys Thr Ile Met Thr Ala Ala Ala Gln Met Val Lys Pro Val Ser Leu 245 250 255 260 GAG CTT GGT GGC AAA AGT CCT CTT GTT ACC TTT GAT GAT GTT GCT GAC 875 Glu Leu Gly Gly Lys Ser Pro Leu Val Thr Phe Asp Asp Val Ala Asp 265 270 275 ATT GAC AAA GCT GTT GAA TGG CCC ATG TTG GGT TGT TTT TTC AAT GGT 923 Ile Asp Lys Ala Val Glu Trp Pro Met Leu Gly Cys Phe Phe Asn Gly 280 285 290 GGT CAA GTT TGC AGT GCA ACT TCT CGC CTA CTT CTC CAT GAA AAA ATT 971 Gly Gln Val Cys Ser Ala Thr Ser Arg Leu Leu Leu His Glu Lys Ile 295 300 305 GCA GAG CCA TTT TTG GAT AGA CTT GTC GAA TGG GCA AAG AAT ATT AAA 1019 Ala Glu Pro Phe Leu Asp Arg Leu Val Glu Trp Ala Lys Asn Ile Lys 310 315 320 ATC TCA GAC CCA CTA GAA GAA GGT TGC AGG CTG GGT TCA GTC ATC AGT 1067 Ile Ser Asp Pro Leu Glu Glu Gly Cys Arg Leu Gly Ser Val Ile Ser 325 330 335 340 AAA GGG CAG TAT GAA CAG ATC AAG AAG TTC ATC TCA ACA GCA AGA AGT 1115 Lys Gly Gln Tyr Glu Gln Ile Lys Lys Phe Ile Ser Thr Ala Arg Ser 345 350 355 GAA GGT GCT ACA ATT TTG CAT GGG GGT GAC CGA CCA AAG CAT CTC GGA 1163 Glu Gly Ala Thr Ile Leu His Gly Gly Asp Arg Pro Lys His Leu Gly 360 365 370 AAA GGG TTC TTC ATT GAA CCC ACT ATT AAT ACA GGC GTT AGC ACA TCA 1211 Lys Gly Phe Phe Ile Glu Pro Thr Ile Asn Thr Gly Val Ser Thr Ser 375 380 385 ATG CAA ATT TGG AGA GAG GAA GTC TTT GGA CCA GTC ATC TGT GTG AAA 1259 Met Gln Ile Trp Arg Glu Glu Val Phe Gly Pro Val Ile Cys Val Lys 390 395 400 GTA TTC AAG ACA GAG AGG GAA GCC GTC GAG CTT GCA AAT GAT ACG CAC 1307 Val Phe Lys Thr Glu Arg Glu Ala Val Glu Leu Ala Asn Asp Thr His 405 410 415 420 TAT GGC TTG GCT GGT GGT GTG ATC TCT GAT GAT CTA GAG AGG TGT GAG 1355 Tyr Gly Leu Ala Gly Gly Val Ile Ser Asp Asp Leu Glu Arg Cys Glu 425 430 435 CGT ATC GCA AAG GTT ATT CAC TCT GGA ATT GTT TGG AAA AAC TGC TCG 1403 Arg Ile Ala Lys Val Ile His Ser Gly Ile Val Trp Lys Asn Cys Ser 440 445 450 CAA CCG ACT CTG GTT CAA GCT CCG TGG GGA GGG AAC AAG CGG AGT GGT 1451 Gln Pro Thr Leu Val Gln Ala Pro Trp Gly Gly Asn Lys Arg Ser Gly 455 460 465 TTC GGC CGG GAG CTA GGA GAA TGG GGC CTC GAG AAC TAC CTG AGC GTG 1499 Phe Gly Arg Glu Leu Gly Glu Trp Gly Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Val 470 475 480 AAA CAA GTC ACC AGG TAC TGC AAA GAT GAG CTA TAC GGT TGG TAC CAG 1547 Lys Gln Val Thr Arg Tyr Cys Lys Asp Glu Leu Tyr Gly Trp Tyr Gln 485 490 495 500 CGC CCA TCC AAG CTG TAG ATGACTTGAG AGTTGAGACG AGGCGTCCAT GTCATGAGAA 1605 Arg Pro Ser Lys Leu Stop 505 TGGAGCCTCG TTCACTGGAG GACGGGATGA ATCCTGATCT TGTGCACGGG GGGAGACTTC 1665 TGTACAGCGG TTTCGCAATA ATGCCATTGT ATGTATGGCA AACTTGGTTA TGGACTTATG 1725 GTAGCGCGTG TCGTCGAGCC TGTGACAGAT GTGGTTGATC AGAACTCACA AACTTGCTAG 1785 AGTAAAAACG ACATTACGTT CTGCTGCTTT CGTTGTATGG C 1826

【００２５】配列番号：２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 TTTGAAGATG TTGATATTGA 20

【００２６】配列番号：３ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 TGGAGATATC AGTTACAATG GTGG 24

【００２７】配列番号：４ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【図面の簡単な説明】

【図１】形質転換タバコにおけるＢＡＤＨ活性を表す図
面である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 9/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
   列で表されることを特徴とするベタインアルデヒド脱水
   素酵素。
2. 【請求項２】 請求項１記載のベタインアルデヒド脱水
   素酵素をコードする遺伝子。
3. 【請求項３】 配列表の配列番号１に記載の塩基配列で
   表されることを特徴とする請求項２記載の遺伝子。
4. 【請求項４】 請求項２または３に記載の遺伝子を含有
   してなる形質転換体。