JPH0812593A - インシュリン標準液 - Google Patents

インシュリン標準液

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Abstract

(57)【要約】 【目的】 長期間の保存安定性を維持しつつ、患者検体
と同一の挙動を示すインシュリン標準液を提供すること
を目的とする。 【構成】 インシュリン標準液に、安定剤として下記式
(I) 【化1】 〔式中、Aは水素原子又は水酸基、Bは、 【化2】 Cは水素原子又は基 【化3】 である〕の胆汁酸アミド誘導体が添加されているインシ
ュリン標準液。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫反応を利用して検
体中のインシュリン濃度を測定する際に用いるインシュ
リン標準液(インシュリンキャリブレータ)に関する。
【0002】
【従来の技術】免疫反応を利用して、抗原や抗体を定量
的に測定する試験では、予め既知濃度の抗原(例えば、
ホルモンなどの生理活性物質) や抗体を含む試料(キャ
リブレータ)を測定して検量線を作成しておき、次いで
検体を測定し、検量線から検体中に含まれる抗原または
抗体の濃度を求めることができる。ここで用いられるキ
ャリブレータは、様々な方法で安定化されている。たと
えば、従来のインシュリンキャリブレータとしては、凍
結乾燥品や高濃度のインシュリン標準液があり、使用時
に水で溶解あるいは適当な濃度に希釈して用いるものが
知られている。
【0003】また、特公昭60-30651号公報には、経鼻液
剤としてのインシュリン溶液に界面活性剤を添加し、保
存安定性を高めることが記載されている。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】一般に、キャリブレー
タには、長期間の保存安定性だけでなく、患者検体と同
じ挙動を示すことが要求される。すなわち、同じインシ
ュリン濃度の患者検体とキャリブレータとで、同じ測定
値が得られなければならない。従って、インシュリン標
準液を安定化させるために添加した物質が、インシュリ
ン濃度を測定する反応系に悪影響を与えてはならない。
【0005】本発明者の実験によれば、各種界面活性剤
をインシュリン標準液に添加し、免疫凝集反応を利用し
てインシュリン濃度を測定した場合、界面活性剤未添加
と比べて反応が増強/抑制され、見かけ上インシュリン
濃度が高値/低値を示し、本来のインシュリン濃度とは
乖離した値を示した。標準液と検体とが同一の挙動を示
さないことは、標準液としては致命的である。
【0006】また、凍結乾燥品を水で溶解するものや高
濃度のインシュリン標準液を希釈するものは、溶解操作
や希釈操作に伴う誤差の問題が生じる。さらに、凍結乾
燥品を水で溶解するものは、溶解後の安定性が悪い。本
発明は、長期間の保存安定性を維持しつつ、患者検体と
同一の挙動を示すインシュリン標準液を提供することを
目的とする。
【0007】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、インシ
ュリン標準液に、安定剤として下記式(I)
【0008】
【化4】
【0009】〔式中、Aは水素原子又は水酸基、Bは、
【0010】
【化5】
【0011】Cは水素原子又は基
【0012】
【化6】
【0013】である〕の胆汁酸アミド誘導体が添加され
ているインシュリン標準液が提供される。つまり、本発
明のインシュリン標準液においては、インシュリン及び
緩衝液からなるインシュリン水溶液に、上記式(I)の
化合物を添加すれば、低濃度のインシュリン標準液にお
いても、長期間の保存安定性を維持しつつ、免疫凝集反
応に影響を与えないことを見出した。
【0014】本発明のインシュリン標準液は、主として
インシュリン及び緩衝液からなり、これに安定剤として
上記式(I)の胆汁酸アミド誘導体が添加されている。
緩衝液としては、通常インシュリン等のホルモン類、抗
原や抗体等を保持するために用いられる緩衝液であれ
ば、特に限定されるものではなく、TRIS緩衝液、H
EPES緩衝液、リン酸緩衝液等、種々の緩衝液を挙げ
ることができる。また、インシュリン標準液中のインシ
ュリン濃度は1〜1000μU/mlの濃度範囲が好ましい。
【0015】本発明において、式(I)の胆汁酸アミド
誘導体の具体例としては、3−〔(3−コールアミドプ
ロピル)ジメチルアンモニオ〕−1−プロパンスルホネ
ート(CHAPS)、3−〔(3−コールアミドプロピ
ル)ジメチルアンモニオ〕−2−ハイドロキシ−1−プ
ロパンスルホネート(CHAPSO)、N,N−ビス
(3−D−グルコンアミドプロピル)コールアミド(B
IGCHAP)、N,N−ビス(3−D−グルコンアミ
ドプロピル)デオキシコールアミド(deoxy-BIGCH
AP)が挙げられるが、CHAPSが最も好ましい。胆
汁酸アミド誘導体の濃度は、測定系に影響を及ぼさない
範囲で添加する必要があるが、0.01〜1.0w/v
%が好適であり、さらには0.1〜0.4w/v% が
好ましい。濃度が低過ぎると長期間の保存安定性を維持
できず、高すぎると免疫凝集反応に影響を与え、正しい
インシュリン濃度を測定することができなくなる。
【0016】インシュリン標準液のpHは5.0 〜9.0 が好
適であり、さらには、pH7.0 付近が好ましい。pHは公知
の緩衝剤によって調整される。さらに、本発明のインシ
ュリン標準液においては、細菌の繁殖を抑えるために
は、アジ化ナトリウム 等の抗菌剤を反応系に悪影響を
及ぼさない範囲の濃度で加えておくと好都合である。
【0017】なお、本発明のインシュリン標準液は、免
疫凝集反応用だけではなく、ラジオイムノアッセイ(RIA
法) やエンザイムイムノアッセイ(EIA法) 等の公知の免
疫測定法用の標準液としても使用できる。
【0018】
【作用】本発明のインシュリン標準液によれば、インシ
ュリンを含有する水溶液を安定化させるとともに、イン
シュリンの測定系に悪影響を与えることがない。本発明
者らは、インシュリン標準液に、インシュリン水溶液を
安定化させることができる種々の界面活性剤を添加し、
測定系への影響を確認した。しかし、一般にインシュリ
ン標準液の安定化に用いられている界面活性剤は、免疫
凝集反応を増強/抑制した。
【0019】
【実施例】本発明のインシュリン標準液の実施例を以下
に示す。実施例1 リコンビナント・ヒトインシュリン17.0μU/ml
(L)、69.0μU/ml(M)及び175.0μU
/ml(H)をそれぞれ含む10mM PBS緩衝液(pH7.
0) を調製した。
【0020】この溶液に、CHAPSを0.1又は1.
0w/v%添加し、インシュリン標準液を調製し、イン
シュリン標準液におけるインシュリン濃度を、以下のよ
うに測定した。種々の濃度のインシュリンを含有するイ
ンシュリン標準液 10 μl 、抗インシュリン抗体感作ラ
テックス懸濁液10μl 及び反応緩衝液(10mM トリス緩衝
剤を含む水溶液,pH6.0)80 μl を混合し、45℃で15分間
反応させた後、免疫凝集測定装置(PAMIA-10,東亜医用電
子株式会社) で測定した。その結果を表1に示す。
【0021】なお、対照として、リコンビナント・ヒト
インシュリンのみを含む10mM PBS緩衝液(pH7.0) を
10 μl 、抗インシュリン抗体感作ラテックス懸濁液10
μl及び反応緩衝液(10mM トリス緩衝剤を含む水溶液,pH
6.0)80 μl を混合し、上記と同様に、インシュリン濃
度を測定した。さらに、比較例として、CHAPSのか
わりに、トリトンX−100、NP−40(日光ケミカ
ルズ(株)、ポリオキシエチレン(40)ノニルフェニ
ルエーテルの50%水溶液)及びドデシル硫酸ナトリウ
ムをそれぞれ0.1又は1.0w/v%含有するインシ
ュリン標準液を調製し、同様にインシュリン濃度を測定
した。
【0022】
【表1】
【0023】表1から明らかなように、インシュリンを
含有する10mM PBS緩衝液のみの溶液及びCHAPS
を含有するインシュリン標準液の場合には、インシュリ
ン含量とほぼ同様の値を示し、特にCHAPSはインシ
ュリン測定に影響のないことが分かった。一方、トリト
ンX−100及びNP−40の場合には、0.1w/v
%においては見かけ上インシュリン濃度が高値を示し、
1.0w/v%においては低値を示した。また、希釈に
よる濃度のずれも大きく、検量線の形自体が変化してい
ることがわかった。ドデシル硫酸ナトリウムの場合に
は、0.1w/v%では測定系に影響が出なかったが、
1.0w/v%では低値を示した。実施例2 リコンビナント・ヒトインシュリン 91.22μU/ml (初期
濃度) を含む10mMPBS緩衝液(pH7.0) に、CHAPSを
0.1w/v%添加し、インシュリン標準液とした。
対照としてCHAPS 未添加のものを用い、37℃で保
存し、所定期間経過後インシュリン濃度を実施例1と同
様に測定した。その結果を図1に示す。
【0024】図1から明らかなように、インシュリン標
準液においては、CHAPS未添加のものと比較し、安
定性は良好であった。なお、図1中残存率とは、 (所定期間経過後のインシュリン濃度)/(インシュリ
ン初期濃度)×100(%) で表される値である。
【0025】
【効果】本発明のインシュリン標準液によれば、低濃度
においても、長期間の保存安定性を維持し、かつ患者検
体と同一の挙動を示すインシュリン標準液を提供するこ
とができ、患者検体中のインシュリン濃度を正確に求め
ることができる。また、水溶液であるので、そのまま使
用することができ、凍結乾燥品のように使用に際して水
で溶解する手間を省くことができる。さらに、溶解操作
に伴う誤差もなくすることができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明のインシュリン標準液の保存期間とイン
シュリン残存率との関係を示したグラフである。

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 インシュリン標準液に、安定剤として下
    記式(I) 【化1】 〔式中、Aは水素原子又は水酸基、Bは、 【化2】 Cは水素原子又は基 【化3】 である〕の胆汁酸アミド誘導体が添加されていることを
    特徴とするインシュリン標準液。
  2. 【請求項2】 式(I)の胆汁酸アミド誘導体が、3−
    〔(3−コールアミドプロピル)ジメチルアンモニオ〕
    −1−プロパンスルホネートである請求項1記載のイン
    シュリン標準液。
  3. 【請求項3】 式(I)の胆汁酸アミド誘導体濃度が、
    0.1〜1.0w/v%である請求項1又は2いずれか
    記載のインシュリン標準液。
  4. 【請求項4】 インシュリンが、1〜1000mU/m
    l含有されている請求項1〜3のいずれか記載のインシ
    ュリン標準液。
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