JPH08168390A

JPH08168390A - 高度不飽和脂肪酸含有グリセリドの製造方法

Info

Publication number: JPH08168390A
Application number: JP6313725A
Authority: JP
Inventors: Yoshio Tominaga; 嘉男富永; Akio Sugihara; 耿雄杉原; Yuji Shimada; 裕司島田; Kazuteru Maruyama; 一輝丸山; Chikako Shiina; 智香子椎名; Hide Nakayama; 秀中山
Original assignee: Maruha Corp; Osaka City Government
Current assignee: Osaka City Government; Maruha Nichiro Corp
Priority date: 1994-12-16
Filing date: 1994-12-16
Publication date: 1996-07-02
Anticipated expiration: 2020-08-31
Also published as: JP3689443B2

Abstract

(57)【要約】【構成】卵黄リン脂質にホスホリパーゼＡ₂を作用さ
せて該卵黄リン脂質を加水分解し、該加水分解反応によ
り遊離したアラキドン酸含有脂肪酸を抽出し、得られる
アラキドン酸含有脂肪酸にグリセリンを添加し次いでリ
パーゼを作用させてグリセリドを合成し、得られるグリ
セリドに再度リパーゼを作用させて該グリセリドを加水
分解することによりアラキドン酸含有グリセリドを濃縮
精製することを特徴とするアラキドン酸高濃度含有グリ
セリドの製造方法。【効果】本発明により、アラキドン酸を高濃度に含有
するグリセリドが得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、酵素反応を用いたアラ
キドン酸高濃度含有グリセリドの製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】高度不飽和脂肪酸の一種であるアラキド
ン酸は、炭素を20個、二重結合を４個有するω−６系列
に属する脂肪酸である。アラキドン酸は生体内でプロス
タグランジン、トロンボキサン、ロイコトリエン等の局
所ホルモンの前駆体として極めて重要な生理活性物質で
あり、乳幼児向け食品、健康補助食品、医薬品等に幅広
く利用可能な物質として期待されている。

【０００３】これまでに知られているところのアラキド
ン酸を含む油脂（グリセリド）としては、モルティエラ
（Mortierella)属糸状菌によって生産される油脂が報告
されている（新免芳史，月刊フードケミカル，12月号，
53−61，1990）。そして、前記モルティエラ属糸状菌に
よって生産される油脂は、アラキドン酸を25％含有する
トリグリセリドを主成分としておりアラキドン酸含有量
が高く、アラキドン酸の供給源としてふさわしいもので
ある。

【０００４】しかし、かかる油脂は微生物によって生産
されることから、特殊栄養食品として取り扱われる乳児
用調製粉乳等に前記油脂を添加するためには、添加の認
可を受けなければならない。このため厳格な審査を経な
ければならず、実際に使用するまでにはかなりの困難が
あると予想される。

【０００５】従って、乳児用調製粉乳等にアラキドン酸
含有油脂を添加するには、天然物由来のものが好まし
い。天然物由来でアラキドン酸含量の高い油脂として
は、アワビ、トコブシ等の貝類の可食部中に含まれる油
脂が知られている（それぞれ、脂肪酸組成でアラキドン
酸が10％程度含まれる）。

【０００６】しかし、アワビ、トコブシ等を大量に確保
することは困難であり、従って現在では、天然物由来で
あってアラキドン酸含量の高い油脂を容易に確保するこ
とは困難である。そこで、入手が容易な天然物からアラ
キドン酸含量の高い油脂を得る方法の開発が望まれてい
る。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、天然物であ
る卵黄を原料にしてアラキドン酸を高濃度含有するグリ
セリドを製造する方法を提供することを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
に基づいて鋭意研究を行った結果、リン脂質、特に鶏卵
の卵黄レシチン中に約３％のアラキドン酸が含まれてい
ることに着目し、これを原料としてホスホリパーゼ及び
リパーゼを用いることにより、アラキドン酸を高濃度に
含有するグリセリドを製造することに成功し、本発明を
完成するに至った。

【０００９】すなわち、本発明は、卵黄リン脂質にホス
ホリパーゼＡ₂を作用させて該卵黄リン脂質を加水分解
し、該加水分解反応により遊離したアラキドン酸含有脂
肪酸を抽出し、得られるアラキドン酸含有脂肪酸にグリ
セリンを添加し次いでリパーゼを作用させてグリセリド
を合成し、得られるグリセリドに再度リパーゼを作用さ
せて該グリセリドを加水分解することによりアラキドン
酸含有グリセリドを濃縮精製することを特徴とするアラ
キドン酸高濃度含有グリセリドの製造方法である。

【００１０】以下、本発明を詳細に説明する。（１）原料本発明に用いる原料としては、例えば、市販の鶏卵、業
務用加塩卵黄、卵黄レシチン及びその濃縮物等の卵黄が
挙げられる。そして、これらの卵黄から抽出した卵黄レ
シチンを、アラキドン酸含有グリセリド製造のための原
料とすることができる。

【００１１】（２）卵黄レシチンの加水分解及び遊離脂
肪酸の回収抽出した卵黄レシチンにホスホリパーゼＡ₂を作用させ
て、β−位の構成脂肪酸を加水分解し、遊離脂肪酸とリ
ゾリン脂質を得る。卵黄レシチンの加水分解は、レシチ
ン１部（重量部，以下同じ）に対して0.001〜1.0部の
水、及びホスホリパーゼＡ₂を添加して反応させること
により行う。

【００１２】ここで、α−位にアラキドン酸はほとんど
含まれておらず、β−位がその主要な存在位置である。
ホスホリパーゼＡ₂はβ−位のみを特異的に加水分解す
る酵素であり、該酵素によってアラキドン酸が遊離脂肪
酸画分に２倍に濃縮されて得られる。ここで、酵素は活
性の高いものが望ましく、具体的には、ブタ膵臓由来の
ホスホリパーゼＡ₂、蛇毒由来のホスホリパーゼＡ₂等が
挙げられる。

【００１３】また、添加する水としては、例えば、緩衝
液、蒸留水、イオン交換水、井戸水、水道水等が挙げら
れ、また、そのｐＨは４〜10、好ましくは６〜８が適し
ている。このｐＨを調節するために緩衝液を用いると更
に効果的である。反応温度は20〜80℃、好ましくは35〜
70℃で行うのが良く、攪拌しても、基質に水を分散させ
た後静置状態で反応させてもよい。酵素量はリン脂質１
ｇ当たり２〜2000Ｕ、好ましくは20〜200Ｕが適してお
り、反応時間は酵素量、反応温度によって適宜変えるこ
とができ、通常0.5〜50時間である。上記加水分解方法
によれば、リン脂質の脱アシル化が円滑に進行し、遊離
の脂肪酸（アラキドン酸が濃縮されている）及びリゾリ
ン脂質が効率良く得られる。

【００１４】アラキドン酸が濃縮された遊離の脂肪酸に
ついては、反応生成物中の水分１重量部に対して、8.5
〜80重量部のアセトンを添加して、アセトン可溶部分か
ら分離回収することによって得られる。得られた脂肪酸
については、塩酸飽和メタノールでメチルエステル化
し、ガスクロマトグラフィーに掛けることによりその組
成を分析することができる。なお、リゾリン脂質の生成
量は、加水分解前に存在するレシチンが加水分解後リゾ
レシチンに変換した割合の重量％を変換率として表す。
この変換率は、イヤトロスキャン（ＴＬＣ−ＦＩＤ法）
で分析することが可能である。

【００１５】（３）グリセリドの合成及びその回収本発明においては、グリセリドの合成は、リパーゼの逆
反応を利用することによって、上記脂肪酸とグリセリン
との縮合反応により合成できる。本発明のグリセリドの
合成は、脂肪酸１部に対して0.05〜10部のグリセリン、
０〜１部の水及びリパーゼを添加して反応させる方法に
より行う。添加する酵素としては、キャンディダ(Candi
da) 属等の酵母由来のリパーゼ、シュウドモナス（Pseu
domonas)属等の細菌由来のリパーゼ、ジオトリカム(Geo
trichum)属、リゾプス(Rhizopus)属、リゾムコール（Rh
izomucor) 属等の糸状菌由来のリパーゼが好ましい。

【００１６】また、添加水としては、前記と同様であ
り、そのｐＨは３〜９、好ましくは４〜８が適してお
り、このｐＨを調節するために緩衝液を用いると更に効
果的である。反応温度は20〜80℃、好ましくは25〜45℃
で行うのが良く、攪拌しながら反応させるのが好まし
い。酵素量は脂肪酸１ｇ当たり100〜30,000Ｕが適して
おり、反応時間は酵素量、反応温度によって適宜変える
ことができ、通常0.5〜120時間である。上述のグリセリ
ド合成方法によれば、脂肪酸とグリセリンの縮合反応が
円滑に進行し、トリグリセリドを主成分とするアラキド
ン酸含有グリセリドを効率よく得ることができる。

【００１７】アラキドン酸含有グリセリドについては、
水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等のアルカリで未反
応の脂肪酸を石鹸にした後、ヘキサンで抽出することに
よって分離回収できる。また、グリセリドの脂肪酸組成
については、ナトリウムメチラート法によりメチルエス
テル化してガスクロマトグラフィーにより分析すること
ができる。なお、グリセリドの組成については、イヤト
ロスキャン（ＴＬＣ−ＦＩＤ法）によって分析すること
ができる。

【００１８】（４）グリセリドの加水分解本発明では上記（３）で得られたグリセリドを再度リパ
ーゼを用いて加水分解処理することにより、グリセリド
中にアラキドン酸をさらに濃縮精製することができる。
本発明のグリセリド画分へのアラキドン酸の濃縮方法
は、上記（３）で得られたグリセリド１部に対して、0.
01〜10部の水及びリパーゼを添加して反応させるもので
ある。

【００１９】添加する酵素は前記と同様であり、キャン
ディダ(Candida) 属等の酵母由来のリパーゼ、シュウド
モナス（Pseudomonas)属等の細菌由来のリパーゼ、ジオ
トリカム(Geotrichum)属、リゾプス(Rhizopus)属、リゾ
ムコール（Rhizomucor) 属等の糸状菌由来のリパーゼが
好ましい。また、添加水についても前記と同様であり、
そのｐＨは３〜９、好ましくは４〜８が適しており、こ
のｐＨを調節するために緩衝液を用いると更に効果的で
ある。

【００２０】反応温度は20〜80℃、好ましくは25〜45℃
で行うのが良く、攪拌しながら反応させるのが好まし
い。酵素量は脂肪酸１ｇ当たり50〜1,500 Ｕが適してお
り、反応時間は酵素量、反応温度によって適宜変えるこ
とができ、通常0.5 〜72時間である。上述のグリセリド
の濃縮法によれば、加水分解反応が円滑に進行し、トリ
グリセリドが主成分となったアラキドン酸含有油脂を効
率よく濃縮精製することができる。

【００２１】得られたアラキドン酸含有グリセリドにつ
いては、水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなどのアル
カリで未反応の脂肪酸を石鹸にした後、ヘキサンで抽出
することによって分離回収できるまた、グリセリドの脂
肪酸組成については、ナトリウムメチラート法によりメ
チルエステル化してガスクロマトグラフィーにより分析
することができる。グリセリドの組成については、イヤ
トロスキャン（ＴＬＣ−ＦＩＤ法）によって分析するこ
とができる。

【００２２】

〔実施例１〕

【００２３】（１）リン脂質の加水分解市販卵黄レシチン（和光純薬（株）製）400ｇ（リン脂
質16.7％，トリグリセリド81.0％，脂肪酸2.3％）にホ
スホリパーゼＡ₂酵素液1.5ml(ノボノルディスクバイオ
インダストリー（株）社製、レシターゼ（Lecitase) 10
L 、10,000 U/ml)を混合し、これらをスターラーで攪拌
して酵素液を分散させた後、この混合物を50℃の恒温槽
中に入れて再度スターラーで攪拌しながら反応させた。

【００２４】反応時間８時間で反応を終了して、リゾリ
ン脂質を分離するためアセトンを添加した。アセトンは
レシチン１部に対して９部になるように3.6kg 添加し
て、十分に攪拌後遠心分離してアセトン層とアセトン不
溶部分（リン脂質及びリゾリン脂質含有画分）に分離し
た。アセトン不溶部分の分析はイヤトロスキャン法によ
り、原料レシチンのリン脂質中のホスファチジルコリン
がリゾホスファチジルコリンに変換した重量％を測定し
た。

【００２５】その結果、リゾリン脂質の変換率は33.7％
重量％であった。アセトン可溶部分から脂肪酸を抽出す
るために、まずエバポレーターでアセトンを完全に留去
して油分を得た。再度１L のｎ−ヘキサンに溶解してか
ら、１L の２Ｎ−水酸化カリウム／エタノール溶液を加
えて、脂肪酸をカリウム塩にすることにより、脂肪酸画
分を水−エタノール層（下層）に移行させた。

【００２６】分離したヘキサン層（上層）に再度500 ml
の２Ｎ−水酸化カリウム／エタノールを加え、脂肪酸の
再抽出を行った。抽出した水−エタノール層を合わせ
て、１L のｎ−ヘキサンを加えて４Ｎ−塩酸で中和する
ことにより、ヘキサン層に脂肪酸を抽出した。エバポレ
ーターによりｎ−ヘキサンを留去して脂肪酸を濃縮した
ところ、6.4ｇが得られた。この脂肪酸を塩酸−メタノ
ール法によりメチルエステル化してガスクロマトグラフ
ィーにより脂肪酸組成を分析した結果、パルミチン酸1
4.4％、ステアリン酸7.2％、オレイン酸38.2％、リノー
ル酸19.6％、アラキドン酸5.7％、ドコサヘキサエン酸
9.5 ％であった。

【００２７】（２）グリセリドの合成（１）で得られた脂肪酸４ｇ、グリセリン４ｇ、水0.8m
lからキャンディダ・シリンドラシエ（Candida cylindr
acea,名糖産業（株）社製）のリパーゼ3,000Ｕを添加し
て、35℃で攪拌（250rpm) しながら70時間反応させてグ
リセリドを合成した。反応後、反応液に50mlの２Ｎ−水
酸化カリウム／エタノール溶液を加えて、脂肪酸をカリ
ウム塩にすることにより、水−エタノール層（下層）に
移行させて、50mlのｎ−ヘキサンでグリセリドを抽出し
た。分離した水−エタノール層に再度25mlのｎ−ヘキサ
ンを加えることによりグリセリドを再抽出した。

【００２８】エバポレーターによりｎ−ヘキサンを留去
して脂肪酸を濃縮したところ、1.9ｇのグリセリドが得
られた。このグリセリド画分をイヤトロスキャン（ＴＬ
Ｃ−ＦＩＤ）で分析したところ、トリグリセリド87％、
ジグリセリド12％、モノグリセリド１％であった。ま
た、この画分をナトリウムメチラート法によりメチルエ
ステル化してガスクロマトグラフィーにより脂肪酸組成
を分析した結果、パルミチン酸14.9％、ステアリン酸9.
5％、オレイン酸35.4％、リノール酸17.2％、アラキド
ン酸7.9％、ドコサヘキサエン酸7.1％であった。

【００２９】（３）グリセリドの加水分解（２）で得られたグリセリド1.5ｇ、水1.5ｇ、キャンデ
ィダ・シリンドラシエ（Candida cylindracea,名糖産業
（株）社製）のリパーゼ360 Ｕを添加して、35℃で攪拌
（500rpm) しながら16時間加水分解を行った。加水分解
反応後の反応液は、十分平衡に達していた。次いで、こ
の反応液からリパーゼを含む水層を除去して加水分解油
を得た。更に、この反応液に50mlの２Ｎ−水酸化カリウ
ム／エタノール溶液を加えて、脂肪酸をカリウム塩にす
ることにより、水−エタノール層（下層）に移行させ
て、50mlのｎ−ヘキサンでグリセリドを抽出した。

【００３０】分離した水−エタノール層に再度25mlのｎ
−ヘキサンを加えることによりグリセリドを再抽出し
た。エバポレーターによりｎ−ヘキサンを留去して濃縮
したところ、0.7 ｇのグリセリドが得られた。

【００３１】このグリセリド画分をイヤトロスキャン
（ＴＬＣ−ＦＩＤ）で分析したところ、トリグリセリド
84％、ジグリセリド13％、モノグリセリド３％であっ
た。また、この画分を（２）と同様にしてガスクロマト
グラフィーにより脂肪酸組成を分析した結果、パルミチ
ン酸10.3％、ステアリン酸7.5 ％、オレイン酸26.4％、
リノール酸15.2％、アラキドン酸16.5％、ドコサヘキサ
エン酸15.1％であった。

【００３２】以上のことから、本発明によりアラキドン
酸を高濃度に含有するグリセリドを製造することができ
る。すなわち、前記のモルティエラ属糸状菌によって生
産されるアラキドン酸含有量が25％の油脂には及ばない
ものの、天然物由来の原料から、アラキドン酸高濃度含
有グリセリドを容易にかつ大量に製造することができる
ものであり、本発明の製造方法は、本発明者らが初めて
確立したものである。

【００３３】

【発明の効果】本発明により、アラキドン酸を高濃度に
含有するグリセリドが得られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者丸山一輝茨城県つくば市和台16番２マルハ株式会社中央研究所内 (72)発明者椎名智香子茨城県つくば市和台16番２マルハ株式会社中央研究所内 (72)発明者中山秀茨城県つくば市和台16番２マルハ株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】卵黄リン脂質にホスホリパーゼＡ₂を作
用させて該卵黄リン脂質を加水分解し、該加水分解反応
により遊離したアラキドン酸含有脂肪酸を抽出し、得ら
れるアラキドン酸含有脂肪酸にグリセリンを添加し次い
でリパーゼを作用させてグリセリドを合成し、得られる
グリセリドに再度リパーゼを作用させて該グリセリドを
加水分解することによりアラキドン酸含有グリセリドを
濃縮精製することを特徴とするアラキドン酸高濃度含有
グリセリドの製造方法。