JPH08169845A

JPH08169845A - ヒト由来アンチトロンビン−ｉｉｉの新規用途

Info

Publication number: JPH08169845A
Application number: JP7007731A
Authority: JP
Inventors: Kenji Okajima; 研二岡嶋; Yuji Taoka; 祐二田岡
Original assignee: Green Cross Corp Japan; Green Cross Corp Korea
Current assignee: Tanabe Pharma Corp; GC Biopharma Corp
Priority date: 1994-01-21
Filing date: 1995-01-20
Publication date: 1996-07-02
Anticipated expiration: 2021-08-09
Also published as: JP3806945B2

Abstract

(57)【要約】【構成】ヒト由来アンチトロンビン−III （ＡＴ−II
I ）を有効成分とする運動機能障害予防治療剤、組織障
害予防治療剤、脊髄障害予防治療剤、脊髄障害に由来す
る病態の予防治療剤および脊髄虚血予防治療剤。【効果】ＡＴ−III は、哺乳動物における運動機能障
害及び組織障害に対する改善作用を有し、特に脊髄障害
（例えば脊髄虚血等）に起因する組織障害、運動機能障
害の改善作用を有する。またＡＴ−III は、脊髄保護作
用および脊髄障害に伴う合併症の改善効果を有する。従
って、ＡＴ−III は運動機能障害予防治療剤、組織障害
予防治療剤、脊髄障害予防治療剤、脊髄障害に由来する
病態の予防治療剤および脊髄虚血予防治療剤として有用
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒト由来アンチトロン
ビン−III （以下、単にＡＴ−III という）の新規作用
を利用した新規薬剤に関する。すなわち、ＡＴ−III を
有効成分とする運動機能障害予防治療剤、ＡＴ−III を
有効成分とする組織障害予防治療剤、ＡＴ−III を有効
成分とする脊髄障害予防治療剤、ＡＴ−III を有効成分
とする脊髄障害に由来する病態の予防治療剤およびＡＴ
−III を有効成分とする脊髄虚血予防治療剤に関する。

【０００２】

【従来技術・発明が解決しようとする課題】ＡＴ−III
は血漿中に存在するα₂グロブリンに属する糖蛋白質の
一種で、その分子量は６５，０００〜６８，０００であ
り、プロテアーゼ阻害活性を有し、トロンビンの凝固活
性を強く阻害する。また、トロンビンに対する阻害作用
のみならず、その他の凝固因子、例えば活性化Ｘ因子、
活性化IX因子などに対する阻害作用をも有している。そ
の他、プラスミンやトリプシンに対する阻害作用がある
ことも報告されている。これらの阻害作用は、一般にヘ
パリンの共存下でより速やかに進行することが知られて
いる。このような薬理作用を有するＡＴ−III は、凝固
異常亢進の補正、具体的には汎発性血管異常症（ＤＩ
Ｃ）の治療を目的として用いられるものである。

【０００３】ところで、胸部大動脈瘤手術において脊髄
虚血によって引き起こされる対麻痺は、その発生頻度が
２．２〜２４％と報告されており、重篤な合併症として
注目されている。その対策として一時的バイパスなどの
手術手技の工夫やインスリン、ステロイドなどによる薬
理的脊髄保護による方法が報告されているが、その効果
は十分とはいえない。

【０００４】本発明は、ＡＴ−III の従来知られていな
かった作用を利用した新規な薬剤を提供することを目的
とする。つまり、ＡＴ−III の新規な医薬用途を提供す
ることを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ＡＴ−III に運動
機能障害、組織障害等の改善効果があることを見出し、
本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明はＡＴ−III を有効成分とす
る運動機能障害予防治療剤、組織障害予防治療剤、およ
び脊髄障害予防治療剤に関する。

【０００７】本発明で使用されるＡＴ−III は、ヒト由
来のもので、医薬として使用できる程度に精製されたも
のであれば特に制限されるものではなく、例えばヒトの
全血、血漿、血清または凝固した血液から圧搾された血
清等から精製することができる。使用される血液として
は、特にＨＢｓ抗原、抗ＨＩＶ抗体に陰性であり、ＧＴ
Ｐが正常値の２倍以下であるものが好ましい。

【０００８】ＡＴ−III を調製するための出発原料とし
ては、例えば血漿のコーン分画法における画分IV−１，
画分IV，上清Ｉまたは上清II＋III （ＥＰ公開５５１０
８４）等が使用される。ＡＴ−III の精製法としては、
例えば特開昭４８−３５０１７号明細書、特公昭５９−
７６９３号明細書に開示の方法、疎水性クロマト（特開
平１−２７５６００号）、陰イオン交換体処理（特開平
２−４７１７号）等が例示される。また、ＡＴ−III は
細胞培養法（例えば、特表昭５７−５００７６８号公報
参照）、遺伝子工学法（例えば、特開昭５８−１６２５
２９号公報参照）などにより調製されるものであっても
よい。また、市販のＡＴ−III 製剤（例えば商品名：ノ
イアート、（株）ミドリ十字製等）を用いることもでき
る。

【０００９】本発明の有効成分であるＡＴ−III は、ヒ
ト、イヌ、ウシ、ウマ、マウス、ラット等の哺乳動物に
おける運動機能障害の予防治療、組織障害の予防治療の
作用・効果を有する。ここに運動機能障害とは、中枢神
経や末梢神経等の障害により運動機能に異常をきたす病
態をいい、例えば脊髄障害（例えば脊髄損傷，脊髄虚
血，脊髄の手術）に起因するものが例示され、具体的に
は、例えば運動麻痺，完全麻痺，半側麻痺，対麻痺等が
挙げられる。また、ここに組織障害とは、各種臓器の傷
害および機能障害を含むあらゆる障害を意味し、例えば
脊髄組織の障害等が挙げられる。特に、胸部大動脈瘤手
術における合併症として生じる、脊髄虚血により発生す
る組織障害または運動機能障害（例えば、対麻痺）等に
対して、ＡＴ−III は治療、予防効果を有する。

【００１０】従って、ＡＴ−III は運動機能障害予防治
療剤、組織障害予防治療剤、脊髄障害予防治療剤および
脊髄虚血予防治療剤として有用であり、特に脊髄障害
（例えば、脊椎傷害、脊髄虚血）に起因する病態（例え
ば、運動機能障害または組織障害の少なくとも一つを含
む病態）の予防および／または治療剤として有用であ
る。

【００１１】本発明の予防治療剤においては、有効成分
としてＡＴ−III 単独の態様で用いられることが好まし
い。

【００１２】本発明の予防治療剤は、本発明の目的に反
しない限り通常医薬品に用いられる薬理的に許容される
添加剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）、安定化剤
または製薬上必要な成分を配合していてもよい。添加剤
・安定化剤としては、糖類，例えばブドウ糖，果糖等の
単糖類、ショ糖，乳糖，麦芽糖等の二糖類、マンニトー
ル，ソルビトール等の糖アルコール；クエン酸，リンゴ
酸，酒石酸等の有機酸またはその塩（例えば、ナトリウ
ム塩，カリウム塩，カルシウム塩等）；グリシン，アス
パラギン酸，グルタミン酸等のアミノ酸またはその塩
（例えば、ナトリウム塩等）；ポリエチレングリコー
ル，ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合
体，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の
界面活性剤；ヘパリン，アルブミンなどが挙げられる。

【００１３】本発明製剤は、ＡＴ−III と上記成分とを
適宜混合し、粉末剤，液剤，顆粒剤，錠剤，カプセル
剤，シロップ剤，注射剤等の態様に調製され、経口的ま
たは非経口的に投与される。好ましくは、静脈投与の態
様である。本製剤は、特にＡＴ−III を薬理的に許容さ
れる添加剤とともに凍結乾燥品としておき用時溶解して
使用する態様の製剤とするか、もしくは液状製剤とする
ことが好ましい。かかる製剤は、要すれば使用時に注射
用蒸留水や滅菌精製水等によって約１〜１００ＡＴ−II
I 単位／ｍｌ溶液として、より好ましくは生理的に等張
な塩濃度および生理的に好ましいｐＨ値（ｐＨ６〜８）
に調整される。

【００１４】本発明製剤の投与量は症状，体重，性別，
動物種等によって適宜選択すればよく、一般的にヒトの
成人に対しては、ＡＴ−III として運動機能障害、組織
障害、脊髄障害、脊髄虚血の各予防、治療のいずれにお
いても、通常１〜１０００単位／ｋｇ体重／日、好まし
くは１０〜５００単位／ｋｇ体重／日を１日１〜数回に
分けて投与する。例えば、静脈内投与の場合１０〜１０
０単位／ｋｇ体重／日の投与量で投与することが好まし
い。本明細書において、ＡＴ−III の力価は、１単位が
正常人血漿１ｍｌ中に含まれるＡＴ−III 量に相当す
る。

【００１５】

【実験例・実施例】以下、本発明を詳細に説明するため
実験例および実施例を挙げるが、本発明はこれらによっ
て何ら限定されるものではない。

【００１６】実験例１（１）実験方法被験薬としてアンチトロンビン−III （以下ＡＴ−III
）、ヘパリン、ＡＴ−III ＋ヘパリン、Ｄａｎｓｙｌ
−ＧｌｙＧｌｙＡｒｇ−Ｃｈｌｏｒｍｅｔｈｙｌｋｅｔ
ｏｎｅ処理ＦＸａ（以下ＤＥＧＲ−Ｘａという）等をそ
れぞれ３ｍｇ／ｋｇ体重の割合でラットに経静脈投与
し、その３０分後、各ラットの第１２胸椎を２０ｇの重
錘で圧迫して脊髄損傷を与えた。各種被験薬を投与した
各脊髄損傷ラットについて、後肢運動機能、脊髄組織中
の出血量、脊髄組織中の血管透過性などを比較検討し
て、ＡＴ−III の脊髄損傷保護効果を調べた。なお、運
動障害の判定は脊髄圧迫した２４時間後に行い、障害程
度は以下のＴａｒｌｏｖの評価法用いて客観的に評価し
た。 −評価− ０：随意運動なし（いわゆる完全対麻痺）、１：関節の
動きを認めうる、２：良好な関節の動きを認めるが起立
不能、３：起立と歩行可能、４：跳躍および疾走可能。

【００１７】（２）結果および考察後肢運動機能および完全対麻痺の割合は表１に示す通り
であった。この結果から、ＡＴ−III 単独を前投与して
おくことにより、脊髄損傷に対して保護効果があり、運
動機能障害が著明に軽減することが判明した。

【００１８】

【表１】

【００１９】また、脊髄組織中の出血量もＡＴ−III 単
独前投与により約４０％軽減した。かかるＡＴ−III の
脊髄保護作用はヘパリンの併用で相殺され、またヘパリ
ンやＤＥＧＲ−Ｘａでは効果がなかったことから血液抗
凝固作用以外の作用機序によることが考えられる。

【００２０】実験例２（１）実験方法脊髄損傷後にＡＴ−III を投与した場合の効果、すなわ
ち、ＡＴ−III 投与による治療効果を検討した。まず、
実験例１の方法に準じて脊髄損傷ラットを作成した。実
験は以下の４群で行い、その効果を比較した。被験薬
無投与群、ＡＴ−III 前投与群（脊髄損傷を与える３
０分前に、ＡＴ−III を投与量２５０単位／ｋｇ体重の
割合で静脈内投与したもの）、ＡＴ−III 低投与群
（脊髄損傷を与えた３０分後に、ＡＴ−III を投与量２
５０単位／ｋｇ体重の割合で静脈内投与したもの）、
ＡＴ−III 高投与群（脊髄損傷を与えた３０分後に、Ａ
Ｔ−III を投与量５００単位／ｋｇ体重の割合で静脈内
投与したもの）。尚、効果の確認および評価は実験例１
の方法に準じて行った。

【００２１】（２）結果および考察後肢運動機能および完全対麻痺の割合は表２に示す通り
であり、運動機能障害はＡＴ−III 単独を後投与するこ
とにより著明に減少した。

【００２２】

【表２】

【００２３】実験例３脊髄損傷後にＡＴ−III を投与した場合におけるミエロ
ペルオキシダーゼ（以下、ＭＰＯという）の障害局所で
の挙動を確認した。ＭＰＯは局所の障害度の指標となる
ものである。まず、実験例１の方法に準じて脊髄損傷ラ
ットを作成した。実験は以下の３群で行い、その効果を
比較した。正常ラット群、ＡＴ−III 無投与群（脊
髄損傷群）、ＡＴ−III 後投与群（脊髄損傷を与えた
３０分後に、ＡＴ−III を投与量２５０単位／ｋｇ体重
の割合で静脈内投与したもの）。各群のラットについ
て、脊髄損傷２４時間後に損傷した脊髄組織中のＭＰＯ
量を吸光度測定法（波長４６０ｎｍ）により測定した。
結果を表３に示す。ＡＴ−III 投与により、ＭＰＯは約
１／２に減少し、脊髄組織の障害度が軽減していること
が判明した。

【００２４】

【表３】

【００２５】実験例４（１）実験方法脊髄虚血は、ラット（体重３００〜４００ｇ）の左胸部
を開胸し、胸部大動脈（第５胸椎レベル）を３０分間結
紮することにより行った。ＡＴ−III を、脊髄虚血処置
の３０分前（２５０単位／ｋｇ体重）または脊髄虚血処
置の１５分後（５００単位／ｋｇ体重）に、各ラットに
経静脈投与し、後肢運動機能，脊髄組織中の好中球集積
量（虚血１２時間後にＭＰＯ活性として測定）を指標と
して、ＡＴ−III の運動機能障害に対する保護効果およ
び組織障害に対する予防治療効果を調べた。なお、運動
障害の判定および評価は脊髄虚血２４時間後に、実験例
１に準じてＴａｒｌｏｖの評価法により行った。また、
ＭＰＯ活性は吸光度測定法（波長４６０ｎｍ）により測
定した。

【００２６】（２）結果後肢運動機能障害の程度（点数）および完全対麻痺の割
合を表４に示す。ＡＴ−III 単独投与群（前および後投
与でも）において、運動機能障害および対麻痺が著明に
改善した。

【００２７】

【表４】

【００２８】脊髄組織中のＭＰＯ活性（腰髄部での脊
髄）は、開胸のみの模擬手術群（結紮処置なし、ＡＴ−
III 無投与群、ｎ＝４）で１３．８±１１．８単位／ｇ
組織、ＡＴ−III 無投与群（結紮処置、ｎ＝４）で９
２．４±１３．１単位／ｇ組織、ＡＴ−III 後投与群
（ｎ＝４）で４１．６±１１．２単位／ｇ組織であっ
た。ＭＰＯは局所の障害度の指標となるものであり、Ａ
Ｔ−III 投与によりＭＰＯは１／２以下に減少し、障害
度が軽減していることが判明した。

【００２９】実験例５急性毒性（ＬＤ₅₀）はマウス、ラットの雌雄による差は
なく、静脈内投与、経口投与ともＡＴ−III １５０００
単位／ｋｇ体重以上、皮下投与ではＡＴ−III２０００
０単位／ｋｇ体重以上であった。また、サル（雄）では
静脈内投与でＡＴ−III ６０００単位／ｋｇ体重以上で
あった。

【００３０】実施例１コーンの冷アルコール分画法で得られた画分IV−１のペ
ースト１０ｋｇを生理食塩水１００リットルに懸濁し、
硫酸バリウムを５（ｗ／ｖ）％になるように加え、室温
で３０分間撹拌し、微量に存在するプロトロンビンを硫
酸バリウムに吸着させて除去した。この上清液をｐＨ
６．５に調整し、ポリエチレングリコール＃４０００を
１３（ｗ／ｖ）％になるように加え、生じた沈澱を遠心
分離して除き、さらにポリエチレングリコール＃４００
０を３０（ｗ／ｖ）％になるように加え、さらに生じた
沈澱を遠心分離して回収した。この沈澱を冷生理食塩水
約２０リットルに溶解し、予め生理食塩水で調製された
ヘパリンセファロースを充填したカラムへ注入し、ＡＴ
−III をカラムに吸着させた。このカラムを０．４Ｍの
塩化ナトリウム溶液で洗浄して不純蛋白を除いたのち、
２．０Ｍの塩化ナトリウム溶液をカラムに流して溶出し
てくる部分を回収した。このＡＴ−III の水溶液にクエ
ン酸ナトリウムを０．６Ｍの濃度に加え、ｐＨ７．８に
調整した後６０℃で１０時間の加熱処理を施し、続いて
０．９％塩化ナトリウム溶液に対し１夜透析を行いつつ
濃縮してＡＴ−III の１（ｗ／ｖ）％水溶液を得、必要
に応じて濾過または遠心分離を行って透明な液とした。
このＡＴ−III の１（ｗ／ｖ）％水溶液にマンニトール
２（ｗ／ｖ）％とクエン酸ナトリウム０．２（ｗ／ｖ）
％を加え、塩化ナトリウムが０．５％になるように少量
の冷蒸留水で希釈し、１Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ
７．６に調整した後、滅菌したミリポアフィルターで除
菌濾過し、５００単位づつ分注し、凍結乾燥を行って乾
燥製剤とした。

【００３１】実施例２１バイアル中、ＡＴ−III ５００単位マンニトール２００ｍｇ塩化ナトリウム５０ｍｇクエン酸ナトリウム５２ｍｇよりなる凍結乾燥品を用時２０ｍｌの注射用蒸留水に溶
解して、静注用製剤とした。

【００３２】

【発明の効果】ＡＴ−III は哺乳動物に対して、運動機
能障害および組織障害の改善作用を有し、特に脊髄損傷
や脊髄虚血に起因する組織障害または運動機能障害、例
えば対麻痺等に改善作用を有する。従って、ＡＴ−III
は運動機能障害予防治療剤、組織障害予防治療剤、脊髄
損傷予防治療剤および脊髄虚血予防治療剤として有用で
ある。また、ＡＴ−III は脊髄保護作用および脊髄障害
（例えば、脊髄損傷，脊髄虚血等）に由来する運動機能
障害あるいは対麻痺等の改善効果、また脊髄障害に伴う
合併症（例えば、静脈血栓症、肺血栓症など）の改善効
果を有する。従って、ＡＴ−III は脊髄障害予防治療剤
および脊髄障害に由来する病態（運動機能障害，組織障
害など）の予防治療剤として有用である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とする運動機能障害予防治療剤。
【請求項２】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とする組織障害予防治療剤。
【請求項３】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とする脊髄障害予防治療剤。
【請求項４】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とする脊髄障害に由来する病態の予防治療剤。
【請求項５】脊髄障害が脊髄損傷または脊髄虚血のい
ずれかであることを特徴とする請求項３または４記載の
予防治療剤。
【請求項６】脊髄障害に由来する病態が運動機能障害
または組織障害のいずれかであることを特徴とする請求
項４または５に記載の脊髄障害に由来する病態の予防治
療剤。
【請求項７】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とする脊髄虚血予防治療剤。