JPH08175990A - Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法 - Google Patents
Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法Info
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- JPH08175990A JPH08175990A JP31499594A JP31499594A JPH08175990A JP H08175990 A JPH08175990 A JP H08175990A JP 31499594 A JP31499594 A JP 31499594A JP 31499594 A JP31499594 A JP 31499594A JP H08175990 A JPH08175990 A JP H08175990A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 低濃度でＰＩ３キナーゼ阻害作用を示すＰＩ
３キナーゼ阻害剤及びその製造法を提供する。 【構成】 下記一般式（Ｉ）で表わされるジデプシド
を、ＰＩ３キナーゼ阻害剤の有効成分とする。 【化１】 但し、上記一般式（Ｉ）中、Ｒは水素原子，β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基またはβ−Ｄ−ガラクトピラノシル基
を表わす。
３キナーゼ阻害剤及びその製造法を提供する。 【構成】 下記一般式（Ｉ）で表わされるジデプシド
を、ＰＩ３キナーゼ阻害剤の有効成分とする。 【化１】 但し、上記一般式（Ｉ）中、Ｒは水素原子，β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基またはβ−Ｄ−ガラクトピラノシル基
を表わす。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はジデプシドを有効成分と
するＰＩ３キナーゼ阻害剤に関する。
するＰＩ３キナーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、フォスファチジルイノシトール
（ＰＩ）のイノシトール環のＤ−３の位置をリン酸化す
るＰＩ３キナーゼ（Nature，３１５，２３９−２４２
（１９８５）；Nature，３３２，６４４−６４６（１９
８８））が、多くの増殖因子受容体や癌遺伝子産物と直
接的な関連を持つことで注目されている。
（ＰＩ）のイノシトール環のＤ−３の位置をリン酸化す
るＰＩ３キナーゼ（Nature，３１５，２３９−２４２
（１９８５）；Nature，３３２，６４４−６４６（１９
８８））が、多くの増殖因子受容体や癌遺伝子産物と直
接的な関連を持つことで注目されている。
【０００３】ＰＩ３キナーゼはこれまでとは異なったＰ
Ｉ代謝経路をとり、チロシンキナーゼを介して細胞増殖
や癌化に重要な役割を果していることが明らかになって
きた。したがってＰＩ３キナーゼの阻害剤は新しいタイ
プの抗腫癌剤となることが期待される。
Ｉ代謝経路をとり、チロシンキナーゼを介して細胞増殖
や癌化に重要な役割を果していることが明らかになって
きた。したがってＰＩ３キナーゼの阻害剤は新しいタイ
プの抗腫癌剤となることが期待される。
【０００４】癌の化学療法の分野においては多くの化学
物質が医薬品として実用化されているが、多くの場合薬
効が不十分なだけでなく、これらの薬剤に対する腫瘍細
胞の耐性の問題も臨床上の使用法を複雑にしている。
〔第４７回日本癌学会総会記事、１２頁〜１５頁（１９
８８年）参照〕。このような状況下、癌治療の分野にお
いては常に新規な抗腫瘍性物質の開発が求められてい
る。
物質が医薬品として実用化されているが、多くの場合薬
効が不十分なだけでなく、これらの薬剤に対する腫瘍細
胞の耐性の問題も臨床上の使用法を複雑にしている。
〔第４７回日本癌学会総会記事、１２頁〜１５頁（１９
８８年）参照〕。このような状況下、癌治療の分野にお
いては常に新規な抗腫瘍性物質の開発が求められてい
る。
【０００５】また、従来の抗腫瘍性物質はその作用機序
が細胞の分裂増殖の基本機構に対する抑制作用に基づい
ていることから、その作用は癌細胞のみに限定されるも
のではなく、正常細胞にも非特異的な細胞毒作用を与
え、結果として薬物投与時に副作用をもたらすことが臨
床上の大きな問題となっており、必ずしも満足すべき状
況ではない。従って、癌細胞特異的に作用し、正常細胞
に対して副作用を持たない抗腫瘍剤の登場が望まれてい
る。
が細胞の分裂増殖の基本機構に対する抑制作用に基づい
ていることから、その作用は癌細胞のみに限定されるも
のではなく、正常細胞にも非特異的な細胞毒作用を与
え、結果として薬物投与時に副作用をもたらすことが臨
床上の大きな問題となっており、必ずしも満足すべき状
況ではない。従って、癌細胞特異的に作用し、正常細胞
に対して副作用を持たない抗腫瘍剤の登場が望まれてい
る。
【０００６】さらに、ＰＩ３キナーゼは好中球、血小板
の活性化にも深く関与している。したがってＰＩ３キナ
ーゼ阻害剤は好中球、血小板の活性化を抑えることによ
り、新しいメカニズムの抗炎症剤や抗動脈硬化剤となる
ことが期待される。
の活性化にも深く関与している。したがってＰＩ３キナ
ーゼ阻害剤は好中球、血小板の活性化を抑えることによ
り、新しいメカニズムの抗炎症剤や抗動脈硬化剤となる
ことが期待される。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、常に要求さ
れているところの、新規な抗腫瘍剤、抗炎症剤あるいは
抗動脈硬化剤としての利用が期待される、ＰＩ３キナー
ゼ阻害剤及びその製造法を提供することにより、これら
の問題点を解決しようとするものである。
れているところの、新規な抗腫瘍剤、抗炎症剤あるいは
抗動脈硬化剤としての利用が期待される、ＰＩ３キナー
ゼ阻害剤及びその製造法を提供することにより、これら
の問題点を解決しようとするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物が
抗生物質などの生理活性物質を生産することに着目し、
自然界より多数の試料を採取して、それらから分離され
た多種類の培養物について検討を重ねた結果、不完全糸
状菌綱に属する分生子柄束形成菌の培養物中に、ＰＩ３
キナーゼ阻害作用を有する物質が含有されていることを
見出し、その物質の構造を明らかにし、本発明を完成す
るに至った。
抗生物質などの生理活性物質を生産することに着目し、
自然界より多数の試料を採取して、それらから分離され
た多種類の培養物について検討を重ねた結果、不完全糸
状菌綱に属する分生子柄束形成菌の培養物中に、ＰＩ３
キナーゼ阻害作用を有する物質が含有されていることを
見出し、その物質の構造を明らかにし、本発明を完成す
るに至った。
【０００９】すなわち本発明の要旨は、下記一般式
（Ｉ）で表わされるジデプシドを有効成分とするＰＩ３
キナーゼ阻害剤、及び下記一般式（Ｉ）で表されるジデ
プシドを産生する微生物を適当な培地で培養して、培養
物中にジデプシドを生成蓄積せしめ、その培養物からジ
デプシドを採取するジデプシドの製造法において、ジデ
プシドを産生する微生物として不完全糸状菌綱に属する
分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７
１１）を用いることを特徴とする方法に存する。
（Ｉ）で表わされるジデプシドを有効成分とするＰＩ３
キナーゼ阻害剤、及び下記一般式（Ｉ）で表されるジデ
プシドを産生する微生物を適当な培地で培養して、培養
物中にジデプシドを生成蓄積せしめ、その培養物からジ
デプシドを採取するジデプシドの製造法において、ジデ
プシドを産生する微生物として不完全糸状菌綱に属する
分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７
１１）を用いることを特徴とする方法に存する。
【００１０】
【化２】
【００１１】但し、上記一般式（Ｉ）中、Ｒは水素原
子，β−Ｄ−グルコピラノシル基またはβ−Ｄ−ガラク
トピラノシル基を表わす。
子，β−Ｄ−グルコピラノシル基またはβ−Ｄ−ガラク
トピラノシル基を表わす。
【００１２】以下本発明を詳細に説明する。 ＜１＞本発明のＰＩ３キナーゼ阻害剤 本発明のＰＩ３キナーゼ阻害剤は、上記一般式（Ｉ）で
表わされるジデプシド（以下、単に「ジデプシド」とい
う。）を有効成分として含有する。このジデプシドは、
環状アデノシン−３’，５’−モノリン酸ホスホジエス
テラーゼ阻害活性を有する化合物として特公平５−１７
７７号公報に開示されている。
表わされるジデプシド（以下、単に「ジデプシド」とい
う。）を有効成分として含有する。このジデプシドは、
環状アデノシン−３’，５’−モノリン酸ホスホジエス
テラーゼ阻害活性を有する化合物として特公平５−１７
７７号公報に開示されている。
【００１３】しかしながら、これらの化合物がＰＩ３キ
ナーゼ阻害作用を有することについては全く知られてい
ない。本発明は、このジデプシドがＰＩ３キナーゼ阻害
作用を有することを初めて見出し、その知見に基づいて
なされたものである。尚、このジデプシドの物理化学的
性質及びＰＩ３キナーゼ阻害作用は、後記実施例に示し
た。また、本発明に用いるジデプシドの入手方法は後述
する。
ナーゼ阻害作用を有することについては全く知られてい
ない。本発明は、このジデプシドがＰＩ３キナーゼ阻害
作用を有することを初めて見出し、その知見に基づいて
なされたものである。尚、このジデプシドの物理化学的
性質及びＰＩ３キナーゼ阻害作用は、後記実施例に示し
た。また、本発明に用いるジデプシドの入手方法は後述
する。
【００１４】本発明のＰＩ３キナーゼ阻害剤は、これを
医薬として用いるに当たり、通常の製剤担体とともに投
与経路に応じた製剤とする事ができる。例えば、経口投
与では錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の形態
に調剤される。経口投与用固形製剤を調製するに当た
り、慣用の賦形剤、結合剤、滑択剤、その他着色剤、崩
壊剤等を用いることができる。
医薬として用いるに当たり、通常の製剤担体とともに投
与経路に応じた製剤とする事ができる。例えば、経口投
与では錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の形態
に調剤される。経口投与用固形製剤を調製するに当た
り、慣用の賦形剤、結合剤、滑択剤、その他着色剤、崩
壊剤等を用いることができる。
【００１５】賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプ
ン、タルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶セルロー
ス、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、
グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等が
挙げられ、結合剤としてはポリビニルアルコール、ポリ
ビニルエーテル、エチルセルロース、アラビアゴム、シ
エラック、白糖等が挙げられ、滑沢剤としてはステアリ
ン酸マグネシウム、タルク等が挙げられる。その他、着
色剤、崩壊剤も通常公知のものを用いることができる。
ン、タルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶セルロー
ス、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、
グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等が
挙げられ、結合剤としてはポリビニルアルコール、ポリ
ビニルエーテル、エチルセルロース、アラビアゴム、シ
エラック、白糖等が挙げられ、滑沢剤としてはステアリ
ン酸マグネシウム、タルク等が挙げられる。その他、着
色剤、崩壊剤も通常公知のものを用いることができる。
【００１６】尚、錠剤は周知の方法によりコーティング
してもよい。また液状製剤は水性または油性の懸濁液、
溶液、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよ
く、通常用いられる方法にて調製される。注射剤を調製
する場合はジデプシドにｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化
剤、等張剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、
筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができる。ま
た、坐剤を製造する際の基剤としては、例えばカカオ
脂、ポリエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸トリグ
リセライド、ウイテプゾール（ダイナマイトノーベル社
の登録商標）等の油脂性基剤を用いることができる。
してもよい。また液状製剤は水性または油性の懸濁液、
溶液、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよ
く、通常用いられる方法にて調製される。注射剤を調製
する場合はジデプシドにｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化
剤、等張剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、
筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができる。ま
た、坐剤を製造する際の基剤としては、例えばカカオ
脂、ポリエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸トリグ
リセライド、ウイテプゾール（ダイナマイトノーベル社
の登録商標）等の油脂性基剤を用いることができる。
【００１７】さらに、本発明のジデプシド以外のＰＩ３
キナーゼ阻害剤を併用してもよいが、他のＰＩ３キナー
ゼ阻害剤との併用は本発明に必須ではない。かくして調
製される製剤は、各種癌あるいは腫瘍、各種炎症、動脈
硬化症等に対して治療効果が期待される。投与量として
は、患者の症状、体重、年齢等によって異なり、一様に
服用することは出来ないが、ジデプシドの量として、通
常成人１日当たり約１０〜２０００ｍｇの範囲が好まし
く、これを通常１日１〜４回に分けて投与するのが望ま
しい。
キナーゼ阻害剤を併用してもよいが、他のＰＩ３キナー
ゼ阻害剤との併用は本発明に必須ではない。かくして調
製される製剤は、各種癌あるいは腫瘍、各種炎症、動脈
硬化症等に対して治療効果が期待される。投与量として
は、患者の症状、体重、年齢等によって異なり、一様に
服用することは出来ないが、ジデプシドの量として、通
常成人１日当たり約１０〜２０００ｍｇの範囲が好まし
く、これを通常１日１〜４回に分けて投与するのが望ま
しい。
【００１８】＜２＞本発明に用いるジデプシドの入手法 本発明に用いる上記ジデプシドは、例えば、これを産生
する微生物を適当な培地で培養し、その培養物、すなわ
ち菌体及び／又は培養上清から、ジデプシドを単離する
ことによって、もしくは得られたジデプシドを化学的修
飾することによって得られる。かかる微生物としては、
不完全糸状菌綱に分類されるカビ類等が挙げられ、具体
的には後述する不完全糸状菌綱に属する分生子柄束形成
菌（シンネマータス ファンジャイ：Synnematous fung
i）Ｄ２９４９株が挙げられる。
する微生物を適当な培地で培養し、その培養物、すなわ
ち菌体及び／又は培養上清から、ジデプシドを単離する
ことによって、もしくは得られたジデプシドを化学的修
飾することによって得られる。かかる微生物としては、
不完全糸状菌綱に分類されるカビ類等が挙げられ、具体
的には後述する不完全糸状菌綱に属する分生子柄束形成
菌（シンネマータス ファンジャイ：Synnematous fung
i）Ｄ２９４９株が挙げられる。
【００１９】以下に、上記微生物の培養、ジデプシドの
単離、精製について詳しく例示する。
単離、精製について詳しく例示する。
【００２０】（１）培養 本発明においては、例えば不完全糸状菌綱に分類され、
ジデプシドを産生する微生物を、通常の微生物が利用し
うる栄養物を含有する培地で培養する。炭素源として
は、グルコース、水アメ、デキストリン、シュクロー
ス、デンプン、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また
窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープ
・リカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、
硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用できる。
その他必要に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウ
ム、マグネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硝酸およ
びその他のイオンを生成することのできる無機塩類を培
地に添加することは有効である。また菌の生育を助けジ
デプシドの生産を促進するような有機および無機物を培
地に適当に添加することができる。
ジデプシドを産生する微生物を、通常の微生物が利用し
うる栄養物を含有する培地で培養する。炭素源として
は、グルコース、水アメ、デキストリン、シュクロー
ス、デンプン、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また
窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープ
・リカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、
硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用できる。
その他必要に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウ
ム、マグネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硝酸およ
びその他のイオンを生成することのできる無機塩類を培
地に添加することは有効である。また菌の生育を助けジ
デプシドの生産を促進するような有機および無機物を培
地に適当に添加することができる。
【００２１】培養法としては、好気的条件下での培養
法、特に寒天培地等を用いた固体培養法及び液体培地を
用いた深部培養法が最も適している。培養に適当な温度
は１５〜３０℃であるが、多くの場合、２０〜２７℃付
近で培養する。ジデプシドの生産は、培地や培養条件に
より異なるがフラスコ内の固体培養法である寒天培地表
面培養法では、通常７〜２１日の間、その蓄積が最高に
達する。培養物中のジデプシドの蓄積量が最高になった
時に培養を停止し、培養物からジデプシドを単離精製す
る。
法、特に寒天培地等を用いた固体培養法及び液体培地を
用いた深部培養法が最も適している。培養に適当な温度
は１５〜３０℃であるが、多くの場合、２０〜２７℃付
近で培養する。ジデプシドの生産は、培地や培養条件に
より異なるがフラスコ内の固体培養法である寒天培地表
面培養法では、通常７〜２１日の間、その蓄積が最高に
達する。培養物中のジデプシドの蓄積量が最高になった
時に培養を停止し、培養物からジデプシドを単離精製す
る。
【００２２】（２）化学的修飾 本発明に用いるジデプシドは、例えば培養物から得られ
たジデプシドを化学的修飾することによっても得られ
る。
たジデプシドを化学的修飾することによっても得られ
る。
【００２３】例えば本発明のジデプシド中、グリコシド
結合を有するものを酸性条件下、加溶媒分解することに
よって得ることができる。グリコシド結合を有するジデ
プシドを例えば、水、エタノール、メタノールなどの極
性溶媒中、適当な濃度の硫酸、塩酸などを作用させて、
グリコシド結合脱離ジデプシドに導き、反応混合物から
グリコシド結合脱離ジデプシドを単離精製する。
結合を有するものを酸性条件下、加溶媒分解することに
よって得ることができる。グリコシド結合を有するジデ
プシドを例えば、水、エタノール、メタノールなどの極
性溶媒中、適当な濃度の硫酸、塩酸などを作用させて、
グリコシド結合脱離ジデプシドに導き、反応混合物から
グリコシド結合脱離ジデプシドを単離精製する。
【００２４】（３）ジデプシドの単離、精製 本発明に用いるジデプシドは、脂溶性物質であるので、
培養物または修飾反応混合物から単離精製するにあたっ
ては、この特性を利用して行うことができる。すなわ
ち、例えば酢酸エチル、クロロルホルム等による溶媒抽
出法；シリカゲル、アルミナ、ＯＤＳ、ダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化学（株）製）等の合成吸着剤や、セフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のゲル濾
過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、あるいは高速
液体クロマトグラフィー；さらにシリカゲル等を担体と
した分取薄層クロマトグラフィー等が有効である。
培養物または修飾反応混合物から単離精製するにあたっ
ては、この特性を利用して行うことができる。すなわ
ち、例えば酢酸エチル、クロロルホルム等による溶媒抽
出法；シリカゲル、アルミナ、ＯＤＳ、ダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化学（株）製）等の合成吸着剤や、セフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のゲル濾
過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、あるいは高速
液体クロマトグラフィー；さらにシリカゲル等を担体と
した分取薄層クロマトグラフィー等が有効である。
【００２５】＜３＞本発明のジデプシドの製造法 本発明のジデプシドの製造法は、不完全糸状菌綱に属す
る分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株（以下、「Ｄ２９４
９」と略記することがある）を用いることを特徴とす
る。このＤ２９４９株は、本発明者らにより双子葉植物
体上より新たに分離された真菌類の一種であり、その菌
学的性状は次の通りである。
る分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株（以下、「Ｄ２９４
９」と略記することがある）を用いることを特徴とす
る。このＤ２９４９株は、本発明者らにより双子葉植物
体上より新たに分離された真菌類の一種であり、その菌
学的性状は次の通りである。
【００２６】Ｄ２９４９株の形態学的性状 ポテトデキストロース寒天（ＰＤＡ），麦芽寒天（Ｍ
Ａ），オートミール寒天（ＯＡ），及び三浦培地（ＬＣ
Ａ）上，２７℃で生育は中程度であり、１週間の培養で
コロニーの径は５〜６ｃｍとなり、その形態は平たんで
ビロード状である。コロニーは、灰緑色〜暗灰緑色を呈
し、裏面は灰緑色〜暗褐色を呈する。基底菌糸は分岐
し、多数の隔壁を有し、巾は３．１μｍに至り、褐色を
呈する。気生菌糸の発達は豊富であり、菌糸は分岐し隔
壁を有する。
Ａ），オートミール寒天（ＯＡ），及び三浦培地（ＬＣ
Ａ）上，２７℃で生育は中程度であり、１週間の培養で
コロニーの径は５〜６ｃｍとなり、その形態は平たんで
ビロード状である。コロニーは、灰緑色〜暗灰緑色を呈
し、裏面は灰緑色〜暗褐色を呈する。基底菌糸は分岐
し、多数の隔壁を有し、巾は３．１μｍに至り、褐色を
呈する。気生菌糸の発達は豊富であり、菌糸は分岐し隔
壁を有する。
【００２７】培養２週間後に、培地表面に密に集合した
分生子柄（分生子柄束）を形成し、分生子柄束は、高さ
１０ｍｍに達し、巾は２５〜７３μｍに至る。分生子柄
束形成菌（Synnematous fungi ）の場合、通常分生子柄
束の先端あるいは側面に分生子形成が見られるが、Ｄ２
９４９株では、どの培地で培養した場合にも分生子等の
特徴的な形態は観察できなかった。 生育温度（ＰＤＡ上、１週間培養）：１５〜３０℃
（最適温度２７℃） 生育ｐＨ（ＬＣＡ上、１週間培養）：３〜９（最適生
育ｐＨ６〜７）
分生子柄（分生子柄束）を形成し、分生子柄束は、高さ
１０ｍｍに達し、巾は２５〜７３μｍに至る。分生子柄
束形成菌（Synnematous fungi ）の場合、通常分生子柄
束の先端あるいは側面に分生子形成が見られるが、Ｄ２
９４９株では、どの培地で培養した場合にも分生子等の
特徴的な形態は観察できなかった。 生育温度（ＰＤＡ上、１週間培養）：１５〜３０℃
（最適温度２７℃） 生育ｐＨ（ＬＣＡ上、１週間培養）：３〜９（最適生
育ｐＨ６〜７）
【００２８】以上の性質から、Ｄ２９４９株を不完全糸
状菌綱に属する分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株と称呼す
ることにした。なおＤ２９４９株は、工業技術院生命工
学工業技術研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１４７１１の受託
番号で寄託されている。
状菌綱に属する分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株と称呼す
ることにした。なおＤ２９４９株は、工業技術院生命工
学工業技術研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１４７１１の受託
番号で寄託されている。
【００２９】本発明においては、前記の菌を通常の微生
物が利用し得る栄養物を含有する培地で培養する。栄養
源としてはグルコース，水飴，デキストリン，シュクロ
ース，デンプン，糖蜜及び動・植物油等を使用できる。
また窒素源として大豆粉，小麦胚芽，コーンスティープ
・リカー，綿実粕，肉エキス，ペプトン，酵母エキス，
硫酸アンモニウム，硝酸ソーダ及び尿素等を使用でき
る。その他必要に応じて、ナトリウム，カリウム，カル
シウム，マグネシウム，コバルト，塩素，リン酸，硫酸
及びその他のイオンを生成することの出来る無機塩類を
培地に添加することは有効である。また菌の生育を助
け、本ジデプシドの生産を促進するような有機及び無機
物を適当に培地に添加することができる。
物が利用し得る栄養物を含有する培地で培養する。栄養
源としてはグルコース，水飴，デキストリン，シュクロ
ース，デンプン，糖蜜及び動・植物油等を使用できる。
また窒素源として大豆粉，小麦胚芽，コーンスティープ
・リカー，綿実粕，肉エキス，ペプトン，酵母エキス，
硫酸アンモニウム，硝酸ソーダ及び尿素等を使用でき
る。その他必要に応じて、ナトリウム，カリウム，カル
シウム，マグネシウム，コバルト，塩素，リン酸，硫酸
及びその他のイオンを生成することの出来る無機塩類を
培地に添加することは有効である。また菌の生育を助
け、本ジデプシドの生産を促進するような有機及び無機
物を適当に培地に添加することができる。
【００３０】培養法としては、好気的条件での培養法、
特に固体培養法や深部培養法が適している。培養に適当
な温度は１５〜３０℃であるが、より好ましくは２０〜
２７℃付近で培養する。ジデプシドの生産は培地や培養
条件により異なるが、固体培養，振とう培養，タンク培
養のいずれにおいても通常２〜１４日間でその蓄積が最
高に達する。培養中のジデプシドの蓄積量が最高になっ
た時に培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製す
る。
特に固体培養法や深部培養法が適している。培養に適当
な温度は１５〜３０℃であるが、より好ましくは２０〜
２７℃付近で培養する。ジデプシドの生産は培地や培養
条件により異なるが、固体培養，振とう培養，タンク培
養のいずれにおいても通常２〜１４日間でその蓄積が最
高に達する。培養中のジデプシドの蓄積量が最高になっ
た時に培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製す
る。
【００３１】本発明に用いるジデプシドは、後記実施例
に示すように低濃度でＰＩ３キナーゼ阻害活性を有する
ことから、これを含有するＰＩ３キナーゼ阻害剤は有効
な抗腫瘍剤，抗炎症剤，抗動脈硬化剤等として利用でき
ることが期待される。
に示すように低濃度でＰＩ３キナーゼ阻害活性を有する
ことから、これを含有するＰＩ３キナーゼ阻害剤は有効
な抗腫瘍剤，抗炎症剤，抗動脈硬化剤等として利用でき
ることが期待される。
【００３２】
【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、ジデプシド
の性状に基づきその製造法を種々考案することができ
る。
の性状に基づきその製造法を種々考案することができ
る。
【００３３】従って本発明は、本実施例に限定されるも
のではなく、実施例に示すジデプドの修飾手段は勿論、
ジデプシドの性状に基づいて公知の手段を施して生産，
濃縮，抽出，精製されたジデプシドを有効成分とするＰ
Ｉ３キナーゼ阻害剤は、すべて本発明に包含される。
のではなく、実施例に示すジデプドの修飾手段は勿論、
ジデプシドの性状に基づいて公知の手段を施して生産，
濃縮，抽出，精製されたジデプシドを有効成分とするＰ
Ｉ３キナーゼ阻害剤は、すべて本発明に包含される。
【００３４】実施例１ ＜１＞Ｄ２９４９株の培養 水アメ４０ｇ，大豆油３ｇ，ソルピー（日清製油社製、
粉末状大豆蛋白の商標）２０ｇ，ファーマメディア（ト
レダス社製、綿実粕の商標）１０ｇ，サングレイン（サ
ングロス社製、可溶性植物蛋白の商標）５ｇ，ＣａＣＯ
3 ３ｇ，ＦｅＳＯ4・７Ｈ2 Ｏ １０ｍｇ，ＣｏＣｌ2・
６Ｈ2Ｏ １０ｍｇ，ＮｉＣｌ2 １０ｍｇと水道水１Ｌを
含有する培地（ｐＨ６．０）を４０ｍｌずつ２００ｍｌ
三角フラスコ２０本に分注し、１２１℃で２０分間オー
トクレーブ減菌した。この種培養用培地にＤ２９４９株
を１白金耳づつ植菌し、２７℃で４日間、２１０回転に
て振とう培養した。
粉末状大豆蛋白の商標）２０ｇ，ファーマメディア（ト
レダス社製、綿実粕の商標）１０ｇ，サングレイン（サ
ングロス社製、可溶性植物蛋白の商標）５ｇ，ＣａＣＯ
3 ３ｇ，ＦｅＳＯ4・７Ｈ2 Ｏ １０ｍｇ，ＣｏＣｌ2・
６Ｈ2Ｏ １０ｍｇ，ＮｉＣｌ2 １０ｍｇと水道水１Ｌを
含有する培地（ｐＨ６．０）を４０ｍｌずつ２００ｍｌ
三角フラスコ２０本に分注し、１２１℃で２０分間オー
トクレーブ減菌した。この種培養用培地にＤ２９４９株
を１白金耳づつ植菌し、２７℃で４日間、２１０回転に
て振とう培養した。
【００３５】別にマルトース８０ｇ，ＫＨ2ＰＯ4 ４．
２ｇ，Ｋ2ＨＰＯ4 ０．８ｇ，ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １
ｇ，ＮＨ4ＮＯ3 １ｇ，ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ２ｍｇ，Ｚ
ｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ３．２ｍｇ，ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ
０．３ｍｇ，ＭｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．２ｍｇ，（Ｎ
Ｈ4）6Ｍｏ7Ｏ24・４Ｈ2Ｏ ０．２ｍｇと脱塩水１Ｌを
含有するゲッチンゲン大学培地（ｐＨ６．０）を４０ｍ
ｌずつ、２００ｍｌ三角フラスコ２０本に分注し、１２
１℃、２０分間オートクレーブ減菌した。
２ｇ，Ｋ2ＨＰＯ4 ０．８ｇ，ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １
ｇ，ＮＨ4ＮＯ3 １ｇ，ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ２ｍｇ，Ｚ
ｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ３．２ｍｇ，ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ
０．３ｍｇ，ＭｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．２ｍｇ，（Ｎ
Ｈ4）6Ｍｏ7Ｏ24・４Ｈ2Ｏ ０．２ｍｇと脱塩水１Ｌを
含有するゲッチンゲン大学培地（ｐＨ６．０）を４０ｍ
ｌずつ、２００ｍｌ三角フラスコ２０本に分注し、１２
１℃、２０分間オートクレーブ減菌した。
【００３６】この主発酵培地に前記種培養液を４ｍｌず
つ接種し、２７℃において７日間、２１０回転にて振と
う培養した。
つ接種し、２７℃において７日間、２１０回転にて振と
う培養した。
【００３７】＜２＞培養により製造したジデプシドの精
製 上記で得られた培養液にフラスコ１本当たり４０ｍｌの
アセトンを添加し、撹拌抽出して１．４Ｌのアセトン水
溶液を得た。
製 上記で得られた培養液にフラスコ１本当たり４０ｍｌの
アセトンを添加し、撹拌抽出して１．４Ｌのアセトン水
溶液を得た。
【００３８】減圧下、溶媒を留去した後、水５００ｍｌ
と酢酸エチル５００ｍｌを加え、水層を塩酸でｐＨ２に
調整して抽出した。酢酸エチル層を分取し、溶媒を減圧
留去して７．２ｇ残渣を得た。これを蒸留水に懸濁し、
オクタデシルシリカゲル（ＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ １Ｍ
Ｙ）５０ｇを充填したカラム上にチャージした。カラム
をアセトニトリル−水混液（３：２）２５０ｍｌで洗っ
た後、アセトニトリル−水混液（４：１）２５０ｍｌで
溶出した画分を減圧下で濃縮し、８４０ｍｇの粗ジデプ
シドを得た。
と酢酸エチル５００ｍｌを加え、水層を塩酸でｐＨ２に
調整して抽出した。酢酸エチル層を分取し、溶媒を減圧
留去して７．２ｇ残渣を得た。これを蒸留水に懸濁し、
オクタデシルシリカゲル（ＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ １Ｍ
Ｙ）５０ｇを充填したカラム上にチャージした。カラム
をアセトニトリル−水混液（３：２）２５０ｍｌで洗っ
た後、アセトニトリル−水混液（４：１）２５０ｍｌで
溶出した画分を減圧下で濃縮し、８４０ｍｇの粗ジデプ
シドを得た。
【００３９】上記で得られた粗ジデプシド１０９ｍｇ
を、分取シリカゲルＴＬＣプレート（ＭＥＲＣＫ社、Ｐ
ＳＣ−Fertigplatten Kieselgel ６０Ｆ2545、２０×２
０ｃｍ，Schichtdicke（層厚）２ｍｍ）６枚を用いて、
展開溶媒としてクロロホルム−イソプロパノール−水−
酢酸混液（１００：４０：５：１）を用いて３回展開す
ることにより分離した。
を、分取シリカゲルＴＬＣプレート（ＭＥＲＣＫ社、Ｐ
ＳＣ−Fertigplatten Kieselgel ６０Ｆ2545、２０×２
０ｃｍ，Schichtdicke（層厚）２ｍｍ）６枚を用いて、
展開溶媒としてクロロホルム−イソプロパノール−水−
酢酸混液（１００：４０：５：１）を用いて３回展開す
ることにより分離した。
【００４０】ジデプシドはＲｆ ０．４５（ジデプシド
１）とＲｆ ０．３０（ジデプシド２）に分離されたの
で、各画分をＴＬＣプレートからかきとって展開溶媒で
溶出した。
１）とＲｆ ０．３０（ジデプシド２）に分離されたの
で、各画分をＴＬＣプレートからかきとって展開溶媒で
溶出した。
【００４１】それぞれ溶媒を留去後、アセトニトリル−
水混液（１：４）に懸濁し、オクタデシルシリカゲルカ
ラム（Waters社、Sep-Pak Cartidge）にチャージして、
同混液５ｍｌで洗浄後、アセトニトリル−水混液（４：
１）５ｍｌで溶出して、溶出液から溶媒を留去し、ジデ
プシド１ ５６．８ｍｇ，ジデプシド２ ４５．３ｍｇを
得た。
水混液（１：４）に懸濁し、オクタデシルシリカゲルカ
ラム（Waters社、Sep-Pak Cartidge）にチャージして、
同混液５ｍｌで洗浄後、アセトニトリル−水混液（４：
１）５ｍｌで溶出して、溶出液から溶媒を留去し、ジデ
プシド１ ５６．８ｍｇ，ジデプシド２ ４５．３ｍｇを
得た。
【００４２】＜３＞化学的修飾によるジデプシドの製造 上記＜２＞で得られたジデプシド１ ４１．０ｍｇを、
５％ＨＣｌを含むメタノール中、室温２２時間反応させ
た後、溶媒を減圧下で留去した。残渣を少量のクロロホ
ルムに溶かし、あらかじめクロロホルム：メタノール：
酢酸混液（２００：４：１）で充填したシリカゲルカラ
ム（シリカゲル ５ｇ）にチャージし、同混液で展開し
て６．３ｍｇの粗ジデプシド３を得た。これをｎ−ヘキ
サン中で粉末にし、３．６ｍｇのジデプシド３を得た。
５％ＨＣｌを含むメタノール中、室温２２時間反応させ
た後、溶媒を減圧下で留去した。残渣を少量のクロロホ
ルムに溶かし、あらかじめクロロホルム：メタノール：
酢酸混液（２００：４：１）で充填したシリカゲルカラ
ム（シリカゲル ５ｇ）にチャージし、同混液で展開し
て６．３ｍｇの粗ジデプシド３を得た。これをｎ−ヘキ
サン中で粉末にし、３．６ｍｇのジデプシド３を得た。
【００４３】＜４＞ジデプシドの構造決定 （１）ジデプシド１の構造 こうして精製されたジデプシド１は、下記の理化学的性
質より構造解析をした結果、前記一般式（Ｉ）中、Ｒが
β−Ｄ−グルコピラノシル基であるＴＰＩ−１であると
同定された。
質より構造解析をした結果、前記一般式（Ｉ）中、Ｒが
β−Ｄ−グルコピラノシル基であるＴＰＩ−１であると
同定された。
【００４４】１）・陽イオン ＳＩマススペクトル：６
７１（［Ｍ＋Ｎａ］+ ） ・陰イオン ＳＩマススペクトル：６４７（［Ｍ−Ｈ］-
） ２）ＵＶスペクトル（メタノール中）λmax （ｎｍ）：
２５３ ３）1Ｈ−ＮＭＲ （重メタノール中，５００ＭＨｚ）δ
（ｐｐｍ）： 0.88(3H,t,J=6.8Hz), 0.90(3H,t,J=6.7Hz), 1.29(16H,m), 1.61(4H,m), 2.66(2H,m), 2.97(2H,t,J=7.6Hz), 3.4〜3.5(4H,m), 3.72(1H,dd,J=5.0Hz,12.2Hz), 3.90(1H,d,J=12.2Hz)， 4.93(1H,d,J=6.9Hz), 6.43(1H,d,J=2.5Hz), 6.59(1H,d,J=2.5Hz), 6.62(1H,d,J=2.3Hz), 6.69(1H,d,J=2.3Hz)
７１（［Ｍ＋Ｎａ］+ ） ・陰イオン ＳＩマススペクトル：６４７（［Ｍ−Ｈ］-
） ２）ＵＶスペクトル（メタノール中）λmax （ｎｍ）：
２５３ ３）1Ｈ−ＮＭＲ （重メタノール中，５００ＭＨｚ）δ
（ｐｐｍ）： 0.88(3H,t,J=6.8Hz), 0.90(3H,t,J=6.7Hz), 1.29(16H,m), 1.61(4H,m), 2.66(2H,m), 2.97(2H,t,J=7.6Hz), 3.4〜3.5(4H,m), 3.72(1H,dd,J=5.0Hz,12.2Hz), 3.90(1H,d,J=12.2Hz)， 4.93(1H,d,J=6.9Hz), 6.43(1H,d,J=2.5Hz), 6.59(1H,d,J=2.5Hz), 6.62(1H,d,J=2.3Hz), 6.69(1H,d,J=2.3Hz)
【００４５】４）13Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール中、１２
５ＭＨｚ）（ｐｐｍ）： 14.4(q), 14.4(q), 23.7(t), 23.7(t), 30.3(t), 30.3(t), 30.6(t), 30.8(t), 32.7(t), 33.0(t), 33.0(t), 33.0(t), 34.9(t), 36.8(t), 62.6(t), 71.3(d), 75.0(d), 78.1(d), 78.3(d),102.4(d), 103.1(d),108.9(d),111.8(d),113.9(s),115.9(s), 116.0(d),145.0(s),149.0(s),155.4(s),158.1(s), 161.6(s),164.0(s),168.1(s),174.2(s)
５ＭＨｚ）（ｐｐｍ）： 14.4(q), 14.4(q), 23.7(t), 23.7(t), 30.3(t), 30.3(t), 30.6(t), 30.8(t), 32.7(t), 33.0(t), 33.0(t), 33.0(t), 34.9(t), 36.8(t), 62.6(t), 71.3(d), 75.0(d), 78.1(d), 78.3(d),102.4(d), 103.1(d),108.9(d),111.8(d),113.9(s),115.9(s), 116.0(d),145.0(s),149.0(s),155.4(s),158.1(s), 161.6(s),164.0(s),168.1(s),174.2(s)
【００４６】上記物理化学的データはＴＰＩ−１の文献
値（特公平５−１７７７号公報）と一致した。
値（特公平５−１７７７号公報）と一致した。
【００４７】（２）ジデプシド２の構造 前記のようにして精製されたジデプシド２は、下記の理
化学的性質より構造解析をした結果、前記一般式（Ｉ）
中、Ｒがβ−Ｄ−ガラクトピラノシル基であるＴＰＩ−
２であると同定された。
化学的性質より構造解析をした結果、前記一般式（Ｉ）
中、Ｒがβ−Ｄ−ガラクトピラノシル基であるＴＰＩ−
２であると同定された。
【００４８】１）・陽イオン ＳＩマススペクトル：６
７１（［Ｍ＋Ｎａ］+ ） ・陰イオン ＳＩマススペクトル：６４７（［Ｍ−Ｈ］-
） ２）ＵＶスペクトル（メタノール中）λmax （ｎｍ）：
２５３ ３） 1Ｈ−ＮＭＲ （重メタノール中，５００ＭＨｚ）
δ（ｐｐｍ）： 0.87(3H,t,J=6.9Hz), 0.89(3H,t,J=6.8Hz), 1.28(16H,m), 1.61(4H,m), 2.67(2H,m), 2.96(2H,t,J=7.8Hz), 3.58(1H,dd,J=3.0Hz,9.8Hz), 3.68(1H,dd,J=6.0Hz,6.0Hz), 3.75(1H,dd,J=5.2Hz,11.2Hz), 3.81(2H,m), 3.89(1H,d,J=3.5Hz), 4.87(1H,d,J=7.8Hz), 6.41(1H,d,J=1.9Hz), 6.59(1H,d,J=1.9Hz),6.63(1H,d,J=2.3Hz), 6.70(1H,d,J=2.3Hz)
７１（［Ｍ＋Ｎａ］+ ） ・陰イオン ＳＩマススペクトル：６４７（［Ｍ−Ｈ］-
） ２）ＵＶスペクトル（メタノール中）λmax （ｎｍ）：
２５３ ３） 1Ｈ−ＮＭＲ （重メタノール中，５００ＭＨｚ）
δ（ｐｐｍ）： 0.87(3H,t,J=6.9Hz), 0.89(3H,t,J=6.8Hz), 1.28(16H,m), 1.61(4H,m), 2.67(2H,m), 2.96(2H,t,J=7.8Hz), 3.58(1H,dd,J=3.0Hz,9.8Hz), 3.68(1H,dd,J=6.0Hz,6.0Hz), 3.75(1H,dd,J=5.2Hz,11.2Hz), 3.81(2H,m), 3.89(1H,d,J=3.5Hz), 4.87(1H,d,J=7.8Hz), 6.41(1H,d,J=1.9Hz), 6.59(1H,d,J=1.9Hz),6.63(1H,d,J=2.3Hz), 6.70(1H,d,J=2.3Hz)
【００４９】４）13Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール中、１２
５ＭＨｚ）（ｐｐｍ）： 14.4(q), 14.4(q), 23.7(t), 23.7(t), 30.3(t), 30.3(t), 30.6(t), 30.9(t), 32.7(t), 33.0(t), 33.0(t), 33.1(t), 34.9(t), 36.8(t), 62.4(t), 70.2(d), 72.4(d), 75.0(d), 77.2(d),102.4(d), 103.8(d),109.0(d),111.7(d),114.1(s),115.8(s), 116.0(d),144.9(s),149.0(s), 155.3(s),158.3(s), 161.5(s),164.0(s),168.1(s),174.3(s)
５ＭＨｚ）（ｐｐｍ）： 14.4(q), 14.4(q), 23.7(t), 23.7(t), 30.3(t), 30.3(t), 30.6(t), 30.9(t), 32.7(t), 33.0(t), 33.0(t), 33.1(t), 34.9(t), 36.8(t), 62.4(t), 70.2(d), 72.4(d), 75.0(d), 77.2(d),102.4(d), 103.8(d),109.0(d),111.7(d),114.1(s),115.8(s), 116.0(d),144.9(s),149.0(s), 155.3(s),158.3(s), 161.5(s),164.0(s),168.1(s),174.3(s)
【００５０】上記物理化学的データはＴＰＩ−２の文献
値（特公平５−１７７７号公報）と一致した。
値（特公平５−１７７７号公報）と一致した。
【００５１】（３）ジデプシド３の構造 上記のようにして精製されたジデプシド３は、下記の理
化学的性質より構造解析をした結果、前記一般式（Ｉ）
中 Ｒが水素原子であるＴＰＩ−５である同定された。
化学的性質より構造解析をした結果、前記一般式（Ｉ）
中 Ｒが水素原子であるＴＰＩ−５である同定された。
【００５２】 １）ＦＤマススペクトル：４８６（Ｍ+） ２）ＵＶスペクトル（メタノール中）λmax （ｍｍ）：
２７０，３０５ ３）1Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホルム中、３００ＭＨ
ｚ）： 0.85(3H,t,J=6.6Hz), 0.88(3H,t,J=6.6Hz), 1.29(16H,m), 1.65(4H,m), 2.97(4H,m), 6.32(1H,d,J=2.6Hz), 6.33(1H,d,J=2.6Hz), 6.61(1H,d,J=2.4Hz), 6.73(1H,d,J=2.4Hz), 11.27(1H,S)
２７０，３０５ ３）1Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホルム中、３００ＭＨ
ｚ）： 0.85(3H,t,J=6.6Hz), 0.88(3H,t,J=6.6Hz), 1.29(16H,m), 1.65(4H,m), 2.97(4H,m), 6.32(1H,d,J=2.6Hz), 6.33(1H,d,J=2.6Hz), 6.61(1H,d,J=2.4Hz), 6.73(1H,d,J=2.4Hz), 11.27(1H,S)
【００５３】上記物理化学的データはＴＰＩ−５の文献
値（特公平５−１７７７号公報）と一致した。
値（特公平５−１７７７号公報）と一致した。
【００５４】実施例２ ジデプシドのＰＩ３キナーゼ阻害作用 実施例１で得られたジデプシドについて、ＰＩ３キナー
ゼの阻害活性を測定した。この測定はCarpenterらの方
法（Ｊ．Biol．Chem., ２６５，１９７０４−１９７１
１（１９９０））に基づき、牛の肝臓から部分精製した
ＰＩ３キナーゼを用いて行なった。
ゼの阻害活性を測定した。この測定はCarpenterらの方
法（Ｊ．Biol．Chem., ２６５，１９７０４−１９７１
１（１９９０））に基づき、牛の肝臓から部分精製した
ＰＩ３キナーゼを用いて行なった。
【００５５】すなわち、ホスファチジルイノシトール１
６７μＭ，［γ−32Ｐ］ＡＴＰ（１．０μＣｉ），５０
ｍＭ Tris−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），５０ｍＭ ＮａＣ
ｌ，０．５ｍＭ ＥＧＴＡ，５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ，４０
ｎｇ牛肝臓部分精製ＰＩ３キナーゼ、並びにジデプシド
試料を含む反応溶液５０ｍｌを３７°で２０分間インキ
ュベートした。
６７μＭ，［γ−32Ｐ］ＡＴＰ（１．０μＣｉ），５０
ｍＭ Tris−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），５０ｍＭ ＮａＣ
ｌ，０．５ｍＭ ＥＧＴＡ，５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ，４０
ｎｇ牛肝臓部分精製ＰＩ３キナーゼ、並びにジデプシド
試料を含む反応溶液５０ｍｌを３７°で２０分間インキ
ュベートした。
【００５６】５００ｍｌのクロロホルム／メタノール／
濃塩酸（２００：２００：１、（Ｖ／Ｖ／Ｖ））を加え
て反応を停止させた後、１２５μｌの１Ｎ塩酸を加えて
混合し、遠心分離（１６，０００ｒｐｍ，１０秒）によ
り、２層に分離した。上層を除いた後、下層の溶媒を留
去し、得られた反応生成物をクロロホルム１０μｌに溶
解して薄層板（シルカゲル６０Ｆ254）にスポットし
た。
濃塩酸（２００：２００：１、（Ｖ／Ｖ／Ｖ））を加え
て反応を停止させた後、１２５μｌの１Ｎ塩酸を加えて
混合し、遠心分離（１６，０００ｒｐｍ，１０秒）によ
り、２層に分離した。上層を除いた後、下層の溶媒を留
去し、得られた反応生成物をクロロホルム１０μｌに溶
解して薄層板（シルカゲル６０Ｆ254）にスポットし
た。
【００５７】この後、薄層板をクロロホルム／メタノー
ル／２８％アンモニウム水／水（１７．５：２５：３．
７５：６（Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ））により展開した。展開後
の薄層板におけるホスファチジルイノシトール−３−リ
ン酸画分をオートラジオグラフィーにより確認した。さ
らに、この画分を切り出してバイアル瓶に入れ、メタノ
ール４ｍｌを加えた後、ホスファチジルイノシトール−
３−リン酸に取り込まれた32Ｐの放射活性を、チェレン
コフ効果により液体シンチレーションカウンターを用い
て定量した。
ル／２８％アンモニウム水／水（１７．５：２５：３．
７５：６（Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ））により展開した。展開後
の薄層板におけるホスファチジルイノシトール−３−リ
ン酸画分をオートラジオグラフィーにより確認した。さ
らに、この画分を切り出してバイアル瓶に入れ、メタノ
ール４ｍｌを加えた後、ホスファチジルイノシトール−
３−リン酸に取り込まれた32Ｐの放射活性を、チェレン
コフ効果により液体シンチレーションカウンターを用い
て定量した。
【００５８】その結果、ＴＰＩ−１，ＴＰＩ−２，ＴＰ
Ｉ−５の５０％阻害濃度は、それぞれ１５．８，５．
６，８．３μＭであった。この結果から明らかなように
本発明に用いるジデプシドは低濃度でＰＩ３キナーゼ阻
害活性を有する。
Ｉ−５の５０％阻害濃度は、それぞれ１５．８，５．
６，８．３μＭであった。この結果から明らかなように
本発明に用いるジデプシドは低濃度でＰＩ３キナーゼ阻
害活性を有する。
【００５９】
【発明の効果】本発明に用いるジデプシドは、低濃度で
ＰＩ３キナーゼ阻害作用を示すので、これを含有するＰ
Ｉ３キナーゼ阻害剤は抗腫瘍剤，抗炎症剤，抗動脈硬化
剤等として期待される。
ＰＩ３キナーゼ阻害作用を示すので、これを含有するＰ
Ｉ３キナーゼ阻害剤は抗腫瘍剤，抗炎症剤，抗動脈硬化
剤等として期待される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｈ 15/203 Ｃ１２Ｐ 7/62 19/44 //(Ｃ１２Ｐ 7/62 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 千葉 紀子 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地三 菱化学株式会社横浜総合研究所内 (72)発明者 三川 隆 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地三 菱化学株式会社横浜総合研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で表わされるジデプシ
ドを有効成分とするＰＩ３キナーゼ阻害剤。 【化１】 但し、上記一般式（Ｉ）中、Ｒは水素原子，β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基またはβ−Ｄ−ガラクトピラノシル基
を表わす。 - 【請求項２】 前記一般式（Ｉ）で表されるジデプシド
を産生する微生物を適当な培地で培養して、培養物中に
ジデプシドを生成蓄積せしめ、その培養物からジデプシ
ドを採取するジデプシドの製造法において、 ジデプシドを産生する微生物として不完全糸状菌綱に属
する分生子柄束形成菌Ｄ２９４９株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
４７１１）を用いることを特徴とする方法。
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| JP31499594A JPH08175990A (ja) | 1994-12-19 | 1994-12-19 | Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法 |
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