JPH08188599A - ＩｇＹ抗体の分離精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】卵黄からＩｇＹ抗体を穏和な条件下で簡便に分
離精製することができ、工業的規模で実施可能な方法を
提供する。 【構成】カラム液体クロマトグラフィーにより卵黄から
ＩｇＹ抗体を分離精製するに際して、六角柱状又は針状
のヒドロキシアパタイトからなり且つ細孔容積が１〜５
ml/gであるヒドロキシアパタイト凝集体を充填したカラ
ムに、リポタンパク質を除去した卵黄成分を通す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、免疫抗原と特異的に反
応するＩｇＹ抗体を含む卵黄から、抗原特異性を有する
ＩｇＹ抗体を、穏和な条件下で簡便に分離精製する方法
に関する。

【０００２】

【従来技術】抗原で免疫したニワトリの卵黄から得られ
るＩｇＧ抗体は、マウスやラット等の他の哺乳類血清中
のＩｇＧと区別するため、一般にＩｇＹ抗体と呼ばれて
いる。ＩｇＹ抗体は、他の動物血清中に存在するＩｇＧ
に比較して、通常、卵黄中に高濃度に存在することや、
鶏卵が比較的安価に且つ大量に入手できることなどか
ら、医薬及び臨床検査などの分野で注目されている。従
来の分離精製方法は、例えばクロロホルム−塩析法や有
機溶媒による方法（免疫化学的同定法 第３版 p.89
東京化学同人）などがあるが、ＩｇＹ抗体を免疫学的研
究或いは臨床検査に応用するには、数種類の吸着及び分
離操作を施さなければならず、何れの方法も非常に手間
がかかり、工業的規模で実施できる簡便な方法とは言え
ない。

【０００３】また、最近発表されたＩｇＹ抗体の分離方
法として、卵黄からリポタンパク質を除去して得られる
卵黄成分について、硫酸ナトリウムを用いた塩析分離と
透析を繰り返し、イオン交換樹脂で分離する方法（アク゛リ
カルチャー ハ゛イオロシ゛カルケミストリー vol.54,NO.10,2531〜2535，199
0, 山本武彦等）等があるが、操作が複雑でやはり工業
的規模で実施できる簡便な方法とは言えない。一方、プ
ロテインＡなどをセファロースに結合させたアフィニテ
ィゲルを用いるアフィニティクロマト分離法は、ＩｇＹ
抗体以外の抗体については優れた分離精製方法として注
目されているが、ＩｇＹ抗体がプロテインＡに吸着しな
いため、ＩｇＹ抗体の分離には適用できない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、卵黄からＩ
ｇＹ抗体を穏和な条件下で簡便に分離精製することがで
き、工業的規模で実施可能な方法を提供するものであ
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＩｇＹ抗
体の分離精製法を種々検討した結果、特定のヒドロキシ
アパタイト凝集体をカラム充填剤とするカラム液体クロ
マトグラフィーが、簡便な方法であり且つ高い分離性能
を発揮する優れた分離精製方法であることを見出し、本
発明を完成するに至った。

【０００６】即ち、本発明はカラム液体クロマトグラフ
ィーにより卵黄からＩｇＹ抗体を分離精製するに際し
て、六角柱状又は針状のヒドロキシアパタイトからなり
且つ細孔容積が１〜５ml/gであるヒドロキシアパタイト
凝集体を充填したカラムに、リポタンパク質を除去した
卵黄成分を通すことを特徴とするＩｇＹ抗体の分離精製
方法である。

【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。 ○ＩｇＹ抗体 本発明において分離精製の対象となるＩｇＹ抗体は、抗
原で免疫した鶏の卵黄からイムノグロブリンとして得ら
れるものである。鶏を免疫する抗原には特に制限はな
く、例えばエイズウイルス、肝炎ウイルス及び腫瘍マー
カー等がある。

【０００８】○ヒドロキシアパタイト凝集体 本発明におけるカラム充填剤は、六角柱状又は針状のヒ
ドロキシアパタイトからなり且つ細孔容積が１〜５ml/g
であるヒドロキシアパタイト凝集体である。この凝集体
は特に通液性能に優れているので、工業的規模で分離精
製するのに適している。

【０００９】上記凝集体の好ましい製造方法は、特公平
6-24963 号公報に記載されており、具体的には六角柱状
または針状のモネタイトと水酸化カリウム及び／又は水
酸化リチウムを加熱下に反応させる製造方法である。以
下に、更に具体的にヒドロキシアパタイト凝集体の好ま
しい製造方法について説明する。

【００１０】＜モネタイトの製造方法＞ヒドロキシアパ
タイトの出発原料であるモネタイトの好ましい製造方法
としては、燐酸２ナトリウム又は燐酸２カリウムと塩化
カルシウムを、ブラッシャイトの脱水転移温度以上の高
温で混合撹拌して合成する方法がある。

【００１１】ヒドロキシアパタイト〔Ca10(PO4)6(OH)2
〕はCa/Pのモル比が１．６７であり、かつモネタイト
からヒドロキシアパタイトを得る反応は下式(1) のとお
りであるところから、モネタイトの原料であるカルシウ
ム化合物中のCaとリン化合物中のＰのモル比は０．９〜
１．１の範囲にあることが好ましい。 10CaHPO4 → Ca10(PO4)6(OH)2 ＋4H3PO4 (1) この範囲からずれて製造されたモネタイトを用いて製造
されたヒドロキシアパタイトは、Ca/Pのモル比が１．６
７よりずれ、純粋なヒドロキシアパタイト以外に副生物
が生成し、その性能が低下するおそれがある。

【００１２】モネタイトの原料であるカルシウム化合物
とリン化合物は水溶液として供給されるが、その際の濃
度は、各々０．０５〜２．０モル／l の範囲が好まし
く、更に好ましくは０．１〜１．０／l である。２．０
モル／l を超えると、モネタイト中に燐酸３カルシウム
等の副生物が混在し、最終的にヒドロキシアパタイトの
純度が落ち、引いては分離用充填剤としての吸着量が減
少する。一方、０．０５モル／l 未満では、得られるヒ
ドロキシアパタイトの粒径が細かくなり、通液性能が悪
くなるおそれがある。この濃度範囲では、濃度が高い
程、生成する粒子の粒径が大きくなり通液性能が向上
し、濃度が薄い程、吸着性能が向上する傾向を示し、用
途によって濃度を選べばよい。

【００１３】モネタイトを得るためのカルシウム化合物
とリン化合物との反応は、ブラッシャイトの脱水転移温
度である７５℃以上で行うことが望ましく、より望まし
い反応温度は９０℃以上、特に望ましくは９５℃以上で
ある。９０℃未満では、一部未反応なブラッシャイトが
残り純粋なモネタイトが得にくく、また１００℃を超え
る場合には水の急激な沸騰が起こり、モネタイトの凝集
化が進み難く、微小粒子が生成し易い。しかし、１００
℃を超える場合でも、例えば加圧等により沸騰を防ぐ場
合はこの限りではない。

【００１４】＜モネタイトとアルカリとの反応＞上記の
ようにして得たモネタイトと水酸化カリウム及び／又は
水酸化リチウムを加熱下に反応させることで、目的とす
るヒドロキシアパタイト凝集体を得ることができる。具
体的にはモネタイトを存在させた熱水中に水酸化カリウ
ム及び／又は水酸化リチウムの水溶液を滴下する方法、
或いは加熱した該アルカリ水溶液中にモネタイトを添加
してヒドロキシアパタイト凝集体を得る方法がある。反
応温度は、前記のモネタイトの反応と同様に、ブラッシ
ャイトの転移温度以上であることが好ましく、より好ま
しくは９０〜１００℃の範囲である。転移温度未満で
は、得られるヒドロキシアパタイト凝集体の粒径が小さ
くなる恐れがある。

【００１５】水溶液として用いる水酸化カリウム及び／
又は水酸化リチウムの濃度に特に制限はないが、濃度が
低い程、大粒径のヒドロキシアパタイト凝集体を形成す
る。しかし、極端に薄い場合には生産効率が悪くなり実
用的ではない。具体的には、モネタイトを存在させた熱
水中に水酸化カリウム及び／又は水酸化リチウムの水溶
液を添加させる場合、その濃度は、０．１〜５モル／ｌ
の範囲が好ましく、更に好ましくは０．２〜２モル／ｌ
の範囲である。

【００１６】水酸化カリウム及び／又は水酸化リチウム
の使用量は、モネタイト１モルに対して、０．４モル／
ｌ以上が好ましく、更に高純度のヒドロキシアパタイト
を得るには、０．６モル／ｌ以上とすることが好まし
い。上記アルカリの使用量の上限は特にないが、あまり
多いと、得られるヒドロキシアパタイトの水洗に手間が
かかり効率的ではなく、好ましくはモネタイト１モルに
対して１モル以下である。

【００１７】○前処理 本発明において、卵黄からＩｇＹ抗体を分離精製するに
際して、カラム充填層に卵黄を負荷する前に、予め卵黄
に対して以下の前処理を行う。

【００１８】＜卵白の分離＞卵黄を卵白と分離した後
に、卵黄を純水で綺麗に洗浄する。

【００１９】＜卵黄からのリポタンパク質の除去＞卵黄
からリポタンパク質を除去する。既に知られた好ましい
除去方法として、例えばカラギーナンを添加して遠心沈
降させる脱脂質方法（アグリカルチャーバイオロジカル
ケミストリー vol.54,NO.10,2531〜2535，1990, 山本武
彦等）や冷アセトンを添加する方法、その他純水を卵黄
の８倍程度以上に添加し遠心沈降により沈澱除去する方
法などがあり、本発明においていずれの方法でも良い。

【００２０】○カラム液体クロマトグラフィー 本発明におけるカラム液体クロマトグラフィーは、通常
の方法に従って行えばよく、先ず前記のヒドロキシアパ
タイト凝集体を溶離液中に分散させ、スラリー状態でカ
ラムに充填する。次に、通常、以下の４工程を実施す
る。

【００２１】＜カラムの平衡化＞溶出開始緩衝液をカラ
ム体積の約３倍以上流し、カラムの中を平衡化する。

【００２２】＜試料の吸着＞分離精製したい試料を溶出
開始緩衝液に分散又は溶解させて、ｐＨが大きく変化せ
ず、沈澱などがないことを確認してから、これをカラム
に注入してヒドロキシアパタイト凝集体からなるカラム
充填材に吸着させる。試料を吸着させた後は、カラムの
平衡化と同様にカラム体積の約３倍以上の溶出開始緩衝
液を流し、ヒドロキシアパタイト凝集体に吸着していな
い部分を流し出す。好ましい溶出開始緩衝液としては、
１〜１０ｍＭ程度の燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５〜１
０）及び燐酸カリウム緩衝液等の燐酸塩系緩衝液があ
り、その他上記の緩衝液に塩化ナトリウムを添加したも
のがあり、これらの緩衝液を各々単独で又は併用して用
いることができる。

【００２３】＜溶出＞上記のようにして吸着させた試料
を、溶出液の通液により溶出させる。溶出液は、溶出開
始緩衝液と同様に、種々の燐酸塩系緩衝液及びこれに塩
を添加させたものがあるが、多くの場合、溶出開始緩衝
液よりも濃度が高いか、或いはｐＨを変化させるなど、
分離精製したい成分が溶出し易い条件を選ぶ。特に好ま
しい溶出液は、３００〜５００ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ５〜１０）である。溶出に際して、試料中の種
々の成分を分離して溶出させるために、溶出開始緩衝液
とこれより燐酸塩濃度の高い溶出原液の２液を混合し、
その混合比率を変化させながら溶出液を通液する。代表
的な溶出方法としては、連続的に２液の配分を変化させ
るリニアグラジエント法と、段階的に変化させるステッ
プワイズ法があり、本発明においていずれの方法でも良
い。

【００２４】＜再生＞こうして、分離精製の対象とした
成分を溶出させた後、なるべく濃度の高い緩衝液〔例え
ば５００ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）〕で
全ての成分を溶出させた後に、溶出開始緩衝液で再び平
衡化しておく。

【００２５】本発明の方法により得られる抗体は、抗体
を用いる生体成分及び細胞に関する検出や測定全般に用
いることができ、例えばエンザイムイムノアッセイ（Ｅ
ＩＡ）法及び臨床診断薬などの用途がある。更に、免疫
組織化学、免疫細胞化学の分野おいて、蛍光標識抗体を
用いるフローサイトメトリー及び組織や細胞の免疫染色
等の幅広い用途がある。

【００２６】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳しく説明
する。先ず、以下のようにして、ＩｇＹ抗体を含有する
鶏卵を得た。

【００２７】試料の作成 ニワトリに３種類の抗原を約２週間毎に各々３回免疫
し、３回目の免疫から１週間後の鶏卵を試料とした。

【００２８】ＩｇＹ抗体の確認 上記で得た鶏卵より分離した卵黄に対して、従来法であ
るカラギーナンによる脱脂質法を施した試料（イ）、前
記試料（イ）に対してＮａ₂ ＳＯ₄ 塩析処理を施した試
料（ロ）、及び前記試料（ロ）に対してＤＥＡＥ（セフ
ァロースゲル）イオン交換処理を施した試料（ハ）の３
種について、還元剤（β−ＭＥ）存在下にドデシル硫酸
ナトリウムゲル電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を行っ
た（図１）。その結果、試料（イ）では多数の分離帯が
認められたが、試料（ロ）及び（ハ）ではＩｇＹ抗体の
分離帯が１本認められた。このように試料（ハ）におい
ては、試料（ロ）に比較して、分離帯の形が殆ど変化し
ていないので、試料（ロ）において、既に比較的高純度
に精製されているように見える。上記試料（イ）、
（ロ）及び（ハ）において認められた各分離帯の成分に
ついて、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）〔イングバ−ル
ら、「イムノケミストリー」、８巻、871ヘ゜ーシ゛(1971
年) 〕を用いて抗体活性を測定した結果、何れも活性が
認められたことから、上記試料（イ）、（ロ）及び
（ハ）において認められた各分離帯の成分はＩｇＹ抗体
を含有していることが確認された。

【００２９】次に、上記のようにして得た試料（イ）、
（ロ）及び（ハ）の３種について、針状のヒドロキシア
パタイトからなり、細孔容積が２．４ml/gであるヒドロ
キシアパタイト凝集体を用いて、以下のように液体クロ
マトグラフィーを行った。

【実施例１】 ＜試料（イ）からの分離精製＞先ず、１００ｍＭのＮａ
Ｃｌを含み、ｐＨ値が６．８である１０ｍＭ燐酸ナトリ
ウム緩衝液（以下Ａ液と呼ぶ）にヒドロキシアパタイト
凝集体を分散し、これをスラリー状態にして、内径２６
mmのポリエチレン製カラムに、ベッドボリュームが１０
mlとなるように充填してカラムを調製した。

【００３０】上記のようにしてヒドロキシアパタイト凝
集体を充填したカラムをＡ液で平衡化した後、このカラ
ムに総タンパク質で５mgの試料（イ）を負荷した。

【００３１】溶出は、上記Ａ液と１００ｍＭのＮａＣｌ
を含み、ｐＨ値が６．８である５００mM燐酸ナトリウム
緩衝液（以下Ｂ液と呼ぶ）の２種類の溶液を混合して行
った。即ち、Ａ液とＢ液を混合して、燐酸ナトリウム緩
衝液濃度を、１０，２０，５０，１００，２００，３０
０及び５００ｍＭと段階的に上げていった（ステップワ
イズ法）。なお、通液速度を２．５ml／分として、フラ
クションコレクターにより試験管１本当たり５mlずつ溶
出液を回収した。

【００３２】上記のようにして得た各フラクションにつ
いて、蛋白質の濃度及びＩｇＹ抗体の活性を測定し、そ
れらの結果を各々図２及び図３に示した。

【００３３】図２は、２８０ｎｍでの吸光度により示し
た各フラクションの蛋白質濃度である。図３は、酵素免
疫測定法（ＥＩＡ法）により測定し、４０５nmでの吸光
度により示した各フラクションのＩｇＹ抗体活性であ
り、鶏卵の免疫に用いた３種類の抗原（Ａ，Ｂ及びＣ）
に対する抗体活性を示している。これらの結果におい
て、フラクションNo.10 〜40及びNo.125〜135 において
蛋白質濃度が低いのにもかかわらず、強いＩｇＹ抗体活
性を示し、フラクションNo.10 〜40、No.100 〜110 及
びNo.125 〜135 の各々のピークにおいて３種類の抗原
に対する抗体活性の強さが異なっている。このことは、
リポタンパク質を除去しただけの卵黄成分をヒドロキシ
アパタイト凝集体を充填したカラムに通し、免疫に用い
たある特定の抗原に対する抗体活性が高いフラクション
を分取すれば、その抗原に対する特異性を有するＩｇＹ
抗体を高純度で分離し得ることを示している。

【００３４】

【実施例２】 ＜試料（ロ）からの分離精製＞先ず、ｐＨ値が６．８で
ある１ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液（以下Ｃ液と呼ぶ）に
ヒドロキシアパタイト凝集体を分散し、これをスラリー
状態にして内径１６mmのポリエチレン製カラムにベッド
ボリュームが６．０mlになるように充填してカラムを調
製した。上記のようにしてヒドロキシアパタイト凝集体
を充填したカラムをＣ液で平衡化した後、このカラムに
総タンパク質で５mgの試料（ロ）を負荷した。溶出は、
Ａ液と、ｐＨ値が６．８である３００mM燐酸ナトリウム
緩衝液（Ｄ液とする。）の２種類の溶液を混合して行っ
た。即ち、Ａ液とＢ液を混合して燐酸ナトリウム緩衝液
濃度を１，１５，３０，４５，６０及び３００ｍＭと段
階的に上げていった（ステップワイズ法）。なお、通液
速度を２．０ml／分とし、フラクションコレクターによ
り試験管１本当たり４mlずつ溶出液を回収した。

【００３５】上記のようにして得た各フラクションにつ
いて、実施例１と同様にして、蛋白質濃度及びＩｇＹ抗
体の活性を測定した。その結果を図４及び図５に示し
た。

【００３６】試料（ロ）は、図１に示したように、ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ（還元剤存在下）による分離では、ＩｇＹ
抗体のＨ鎖、Ｌ鎖のそれぞれ一本のバンドが示された
が、本発明の分離方法を用いると、図５に示したよう
に、６つの抗体活性の認められるピークに分離された。
図５中の最初のピーク（フラクションNo.1〜10）は、オ
ーバーチャージ（ヒドロキシアパタイト凝集体の吸着容
量を越えたサンプルの負荷による素通り画分）とも考え
られるが、フラクションNo.30 以降のピークは、タンパ
ク質濃度が低いにもかかわらず、強いＩｇＹ抗体活性を
示した。また各々のピークにおける３種類の抗原に対す
る活性の強さが違うことが分かった。以上のことから、
リポタンパク質を除去した後、Ｎａ₂ ＳＯ₄ 塩析処理を
施した卵黄成分を、ヒドロキシアパタイト凝集体を充填
したカラムに通すことにより、リポタンパク質を除去し
ただけの場合に比較して、ＩｇＹを更に精製できること
が判る。

【００３７】

【実施例３】 ＜試料（ハ）からの分離精製＞ヒドロキシアパタイト凝
集体をＡ液に分散し、これをスラリー状態にして内径２
６mmのポリエチレン製カラムに、ベッドボリューム１０
mlとなるように充填した。

【００３８】上記のようにしてヒドロキシアパタイト凝
集体を充填したカラムをＣ液で平衡化した後、このカラ
ムに総タンパク質で１mgの試料（ハ）を負荷した。溶出
はＡ液とＢ液の２種類の溶液を所定量混合して行った。
即ち、Ｂ液の濃度を調節することにより燐酸ナトリウム
緩衝液濃度を１０，２０，５０，１００，２００，３０
０，５００ｍＭと段階的に上げていった（ステップワイ
ズ法）。なお、通液速度を２．０ml／分とし、フラクシ
ョンコレクターにより試験管１本当たり４mlずつ溶出液
を回収した。

【００３９】上記のようにして得た各フラクションにつ
いて、実施例１と同様にして、蛋白質の濃度及びＩｇＹ
抗体の活性を測定した。タンパク質濃度の測定結果は図
６に、そして３種類の抗原（Ａ，Ｂ，Ｃ）を用いて免疫
したニワトリの卵のＩｇＹ抗体活性は図７に示した。

【００４０】試料（ハ）において、図１に示したよう
に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（還元剤存在下）による分離で
は、分離帯はＨ鎖とＬ鎖は各１本であったが、本発明の
分離精製方法を用いると、３つの抗体活性の認められる
ピークに分離された（図６，７）。また、各々のピーク
は３種類の抗原に対する活性の強さが違うことから、Ｄ
ＥＡＥでは識別されなかった抗体活性の違いを、ヒドロ
キシアパタイト凝集体では識別して分離・精製し得るこ
とが判る。以上のことから、ヒドロキシアパタイト凝集
体による分離は、ＩｇＹ抗体の分離精製能において、Ｄ
ＥＡＥイオン交換処理より優れた分別手法であることが
判る。

【００４１】比較のため、免疫をしていない卵黄試料に
ついて、試料（ロ）と同様にＮａ₂ＳＯ₄ 塩析処理を施
し、ヒドロキシアパタイト凝集体による分離を試み（図
８及び図９）、また図１０及び図１１には試料（ロ）に
ついてのＤＥＡＥによる分離結果を示した。図６と図７
の結果と図８と図９の結果を比較することにより、ヒド
ロキシアパタイト凝集体による分離ではＩｇＹ抗体をよ
り精密に分離することができることがわかる。また、図
４と図５の結果と図８と図９の結果を比較することによ
り、図５に示した６本のピークは、免疫により形成され
たＩｇＹ抗体の抗体活性（抗原特異性）に基づくもので
あることがわかる。

【００４２】

【発明の効果】本発明の方法によれば、穏和な条件下で
従来よりも簡便に、抗原特異性を有するＩｇＹ抗体を得
ることができる。しかも、Ｎａ₂ ＳＯ₄ 塩析処理したサ
ンプルや更にＤＥＡＥセルロースで処理したサンプルを
３種の抗原で免疫した鶏卵において、抗体活性の異なる
少なくとも２分画以上に分けることができることから、
本発明の方法は、従来の分離方法より優れた分離精製能
を有している。また、これは抗ペプチドＩｇＹ抗体に限
定されるものでなく、抗体を抗原決定基の特異性により
分離することが可能であることを示唆している。

【００４３】抗原特異性を有する抗体を得る従来の方法
は、動物に抗原を免疫し、血清から目的とする抗体を分
離精製するものであった。ニワトリの卵の採取は、血清
の採取と比較して、簡便であり、動物愛護の見地からも
好ましい。本発明は、穏和な条件下で簡便に工業的規模
でニワトリ卵黄から抗体を分離精製する方法として有用
である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる電気泳動写真である。

【図２】ヒドロキシアパタイトにより、カラギーナンで
処理した免疫卵黄を分離した結果であり、細線は蛋白質
の濃度を示し、太線は燐酸緩衝液の濃度を示す（以下、
図３〜図１１において同じ）。

【図３】ヒドロキシアパタイトにより、カラギーナンで
処理した免疫卵黄を分離した結果であり、細線は抗体活
性を示す。

【図４】ヒドロキシアパタイトにより、硫酸ナトリウム
塩で処理した免疫卵黄を分離した結果であり、細線は蛋
白質の濃度を示す。

【図５】ヒドロキシアパタイトにより、硫酸ナトリウム
塩で処理した免疫卵黄を分離した結果であり、細線は抗
体活性を示す。

【図６】ヒドロキシアパタイトにより、ＤＥＡＥで精製
したＩｇＹを分離した結果であり、細線は蛋白質の濃度
を示す。

【図７】ヒドロキシアパタイトにより、ＤＥＡＥで精製
したＩｇＹを分離した結果であり、細線は抗体活性を示
す。

【図８】ヒドロキシアパタイトにより、硫酸ナトリウム
塩で処理した非免疫卵黄を分離した結果であり、細線は
蛋白質の濃度を示す。

【図９】ヒドロキシアパタイトにより、硫酸ナトリウム
塩で処理した非免疫卵黄を分離した結果であり、細線は
抗体活性を示す。

【図１０】ＤＥＡＥにより、硫酸ナトリウム塩で処理し
た免疫卵黄を分離した結果であり、細線は蛋白質の濃度
を示す。

【図１１】ＤＥＡＥにより、硫酸ナトリウム塩で処理し
た免疫卵黄を分離した結果であり、細線は抗体活性を示
す。

フロントページの続き (72)発明者 山本 則幸 愛知県名古屋市港区船見町１番地の１ 東 亞合成株式会社名古屋総合研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】カラム液体クロマトグラフィーにより卵黄
   からＩｇＹ抗体を分離精製するに際して、六角柱状又は
   針状のヒドロキシアパタイトからなり且つ細孔容積が１
   〜５ml/gであるヒドロキシアパタイト凝集体を充填した
   カラムに、リポタンパク質を除去した卵黄成分を通すこ
   とを特徴とするＩｇＹ抗体の分離精製方法。