JPS5853757A - 免疫アフイニテイクロマトグラフイ−用吸着体及びその製法 - Google Patents

免疫アフイニテイクロマトグラフイ−用吸着体及びその製法

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JPS5853757A
JPS5853757A JP56151462A JP15146281A JPS5853757A JP S5853757 A JPS5853757 A JP S5853757A JP 56151462 A JP56151462 A JP 56151462A JP 15146281 A JP15146281 A JP 15146281A JP S5853757 A JPS5853757 A JP S5853757A
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reaction
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Toshio Mihara
三原　敏夫
Hiroyasu Suzuki
弘康 鈴木
Yoshiaki Ishimatsu
石松　義章
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Denki Kagaku Kogyo KK
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は繰返し使用しうる耐久性を有する免疫アフィニ
ティクロマトグラフィー用吸着体及びその製法に関し、
より詳しくはリガンドとして抗体を使用し、その活性を
低下させることなく高収率に担体に固定した免疫アフィ
ニティクロマトグラフィー用吸着体及びその製法に関す
る。
酵素基質反応、抗原抗体反応等の生物学的特異性を利用
したアフィニティクロマトグラフィーは特定の蛋白質を
分離精製する方法として優れたものであるが、これらに
ついては千畑他著講談社発行「アフィニティクロマトグ
ラフィー」、山崎他著講談社発行、「アフィニティーク
ロマトグラフィー」及びｒＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙＪ　３４．１９７４゜Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ　Ｐｒｅｓｓ　　などに詳細に記載されている。
また、免疫アフィニティークロマトグラフィーは、特異
的反応として抗原抗体反応を利用するもので、生体中に
含まれる微量有効成分を高純度に分離精製定量するこ々
あるいは迅速かつ定量的な各種分析や臨床診断システム
等に利用が可能であり例えば佐々木「化学と生物」誌す
〔ｌＯ〕第６５８頁にも記載されているように有用なも
のである。
アフィニティクロマトグラフィーにおいて、リガンドの
固定化方法は担体結合法、架橋法、包括法に大別され、
実用的、特に工業的規模のｍｍにおいては担体結合法に
属する共有結合法が最も優れたものであるといえる。
共有結合法の具体例としては、寒天中に含まれる多能類
であるアガロースを担体としこれに臭化シアンを用いて
活性化させ、さらにこれをリガンドのアミノ基と結合さ
せる方法（千畑ら「アフィニティークロマトグラフィー
」講談社）、アガロースの誘導体であるω−アミノアル
キルアミン−アガロースのアミノ基とリガンドのカルボ
キシル基をカルボジイミド試薬によりペプチド結合させ
る方法などが知られている。（千畑ら「アフィニティー
クロマトグラフィー」講談社） しかしこれらの方法においても、生物学的に活性なタン
パク質例えば抗体・酵素・ホルモン等の結合にはポリペ
プチド中のアミノ基、カルボキシル基等の活性官能基を
利用しており、固定化されたタンパク質の生物学的な活
性発現の低下等の悪影譬があり、実用的ではない。
またに７１ｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎは免疫学領域
に導入されたリンパ球の細胞融合法によると、特異性を
有する単クローン性抗体を純度よく、シかも大量に採取
することが可能になったと報告している。
（Ｎａｔｕｒｅ、　２５６．４９５．１９７５　）従来
の抗体は免疫動物の血清あるいは腹水から得られたもの
をそのまま用いるか又は冷エタノール法等で精製して用
いるもので特異性の異なる抗体の混合物であり、抗原特
異性、抗体力価等一定品質の抗体の生産は困難であった
。しかし上記細胞融合法により、単クローン性抗体は、
現在様々な抗原決定基例えば多糖類、脂質、酵素、細胞
表面抗原、ウィルス、ハプテン等に対して作られており
、市販もされておシ、入手あるいはその作製が容易であ
る。
単クローン性抗体は従来の抗血清から得られる抗体より
も特異性の高いものが得られ、抗原の精製、イムノアッ
セイ等への利用が考えられるが、従来の抗体結合法によ
り免疫的アフィニティークロマトグラフィー用吸着体の
調製を行ったのでは、高価なものとなり、また高特異的
な抗体が処理工程で損失するという欠点があった。
生物学的に活性なタンパク質は糖タンパク質であること
が多いが、一般に糖鎖部分は直接生物学的な活性に関係
しないとされ、特に抗体は糖タンパク質であり、糖鎖の
結合位置も解明されている。
例えばヒトの主要抗体であるＩｇＧは、糖鎖が定常部（
ｃｏｎｓｔａｎｔ　ｒｅｇｉｏｎ　）のＣＨ２ドメイン
に位置し、抗原認識又は補体結合に直接関与しないこと
が知られている。そこで、抗体中の糖鎖を化学的に修飾
し、結合する方法として、特開昭５２−１０４５９１が
開示されている。
本発明者らはこれら糖鎖部位を修飾した抗体を担体に結
合してなる吸着体をアフィニティクロマトグラフィーに
応用することを試みたが、特開昭５２−１０４５９１号
に示される方法では糖鎖を化学的に修飾する際に修飾さ
れた部位とポリペプチド部位の活性基とが同時に反応し
、自己会合などにより、抗体活性が阻害され、或いは抗
体の固定化収率が著しく低下するなどの欠点があった。
免疫アフィニティクロマトグラフィーにおいては高価な
単りローン性抗体会固定するにあたり、その固定化効率
の向上及び抗体活性の維持ひいては抗原回収率の向上は
工業的応用の成否を決定する重要な条件である。更にア
フィニティクロマトグラフィーにおいてはカラムに充填
しての繰返し使用を条件とするため、繰返し吸脱着に耐
える強度と適度の粒径を必須とする。
本発明者らは上記諸条件を満足すべく研究を重ね、固定
化効率の向上、抗体活性の低下防止を図るべく、糖鎖を
化学的に修飾する際の条件及び繰返し使用に耐える担体
を研究し、実用的に使用しうる免疫アフイニティクロマ
トグラフィー用吸着体及びその製法を完成するに至った
。すなわち、本発明はリガンドである抗体を過ヨウ素酸
又はその塩を用いてＰＨ１〜５の条件下で酸化して糖鎖
部分にアルデヒド基を形成させ、次にアミノ基又はヒド
ラジド基を有する固定化用担体と接触ｊせて、シッフ塩
基を形成して結合させ、水素化ホウ素ナトリウム等の還
元剤でシッフ塩基を還、元して安定化するものである。
本発明によれば高い固定化収率と抗体活性を有し、しか
も繰返し使用に耐える強度を併有する抗体吸着体が得ら
れ、実用的、工業的規模でのアフィニティクロマトグラ
フィーが可能になった。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明はリガンドである抗体を過ヨウ素酸又はその塩で
酸化して糖鎖部分のグリコール部を分断してアルデヒド
基を形成させ、次いでアミノ基又はヒドラジド基を有す
る固定化用担体と接触させてシッフ塩基反応で結合させ
、水素化料つ素ナトリウム等の還元剤でシッフ塩基を還
元して安定化するものである。
過ヨウ素酸罠よる酸化はグリコールの隣接ヒドロキシル
基間で起り、１モルのｌ０４−がＩＯ３−に還元される
と同時に２モルのアルデヒド基が生成する反応である。
この反応による生成物はグリコシド結合の種類によって
異るが、グリコール部が分断され、隣接ヒドロキシル基
が酸化され、次式に示すような構造の生成物が得られる
。
Ｃ１２０ＨＣＨ２０Ｈ シツフ塩基の形成は反応ＰＲに大きく依存し、アミノ基
含有化合物の塩基性度により、シッフ塩基形成が最大に
なるＰＨは異るが、抗体の場合は中性付近での形成が大
ぎい、　（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉａｔｒｙ１５．５２
３（”７８１）このことは下記の実験例からも判断する
ことができる。
実験例 ０、１　Ｍの緩衝液１０ｍ１にヒトＩｇＧ（生化学工業
物製１３ｍｇｆ、溶解し、ＮａＩＯ４１ｍｇを添加して
室温で３０分間反応させた。緩衝液はＰＨ２〜４がＣ１
ａｒｋ　ａｎｄ　Ｌｕｂｓの緩衝液、ＰＨ４〜６が酢酸
緩衝液、ＰＨ６〜８がリン酸緩衝液である。
次にエチレングリコールを最終濃度０．１　Ｍとなるよ
う添加し、温度４°Ｃで４Ｂ？間反応させ、その反応液
の光学密度（ＯＤ　６６０　ｎｍ）を測定して、第１図
に示した。
第１図から判るように中性付近が４度が大きく、ＩｇＧ
分子のアミノ基が関与した自己会合反応によるものと考
えられる。これは酸化反応時にＩｇＧ分子の糖鎖中のア
ルデヒド基とポリペプチド中のアミノ基の間にシッフ塩
基が形成され、ｈつ分子が自己会合したものである。従
って抗体の糖類の過ヨウ素酸又はその塩による酸化反応
は、副反応である抗体分子間のシッフ塩基の形成の抑制
されるＰＨで行うことが望ましい。特開昭５２−１０４
５９１の方法では、糖鎖の酸化反応をＰＨ６付近で行っ
ているが抗体の場合抗体分子の自己会合反応が生じ、抗
体活性及び固定化収率が大幅に低下する欠点がある。本
発明は、抗体の糖鎖の過ヨウ素酸又は、その塩による酸
化反応を、酸化反応時の副反応である抗体分子間の自己
会合反応を抑制するＰＨで行うことにより、固定化担体
への抗体の結合効率を大幅に改善すると共に高い抗原回
収率を有する担体を得ることができる。
糖鎖の酸化に使用する過ヨウ素酸あるいはその塩は、抗
体の１−１０万倍モル程度の範囲内で使用する。抗体の
１００倍モル以上使用すると、１時間以内の反応時間で
十分である。過ヨウ素酸溶液は九により分解するので、
反応は光を遮断して行った方がよいが、過剰量の過ヨウ
素酸溶液を使用し数時間以内の反応ならば、特に光を遮
断しなくて・も問題はない。
所定のＰＨを維持するためには、一般に緩衝液を使用す
るが、緩衝液としては、酸化反応によシ糖鎖に形成され
たアルデヒド基と反応する官能基を含有するもの以外は
すべて使用可能である。ただし、リン酸緩衝液は過ヨウ
素酸と反応するのでその使用を避けた方がよい場合もあ
る。緩衝液の濃度は０．００１〜ＬＭ、好ましくは０．
０１〜０．５Ｍで使用することが好ましい。緩衝液のＰ
Ｈは、抗体の糖鎖を過ヨウ素酸又はその塩で酸化する場
合、副反応を抑制するため、ＰＨ１〜５であるが、抗体
分子に酸変性が生じない範囲で低いことが望ましく、４
．５以下、より好ましくは２〜４である。
ＰＨ１以下では抗体分子の酸変性が著しく、又ＰＨ５以
上では副反応である抗体分子の自己会合反応が生じるの
で好ましくない。
抗体の糖鎖の酸化及広温度は、０〜６０°Ｃ１好ましく
は５〜２０°Ｃである。６０’（：’以上では抗体が失
活し、０°Ｃ以下では反応しない。
酸化剤としては、過ヨウ素酸又はその塩の他に、酸カリ
、塩素、硝酸等があるが、特に過ヨウ素酸又はその塩が
最も良好な結果が得られる。
酸化反応後残存する過剰の酸化剤は、糖鎖部分の過度の
酸化及び俄北丑ｉ酸化剤の担体への作用を避けるため除
去する必要がある。エチレングリコール・グリセリン・
グルコース・亜硫酸ナトリウム等、酸化剤により酸化さ
れ得る化学薬品を添加するか、又は酸化反応に使用した
のと同じ緩衝液に対して透析するか、又はその他一般的
な方法で除去することができる。
糖鎖にアルデヒド基を有する抗体を、少なくとも１つの
反応性アミノ基又はヒドラジド基を有する担体に結合さ
せる場合、反応のＰＲは５〜８好ましくはＰＨ６〜７で
ある。このＰＨ範囲外では、主反応である抗体の糖鎖中
のアルデヒド基と担′体のアミノ基又はヒドラジド基間
のシッフ塩基形成が抑制される。ＰＨ５〜８好ましくは
ＰＨ６〜７の緩衝液中で、抗体と担体を共存させ、０〜
２５℃で数時間から数日間反応させることにより、抗体
と担体をシック塩基反応で結合する。しかし形成された
シック塩基は、不安定であり、酸性又はアルカリ性条件
下で容易に分解する。免疫アフィニティークロマトグラ
フィーにおいては、抗体結合担体を繰り返し使用し、吸
着タンノ（り質の溶出も酸性条件で行うことが多い。従
って抗体と担体間のシック塩基を安定化する必要がある
。安定化は次式に示されるように、還元により行われる
。
還元 Ｒ１ＣＨ＝ＮＲ２−Ｒ１ＣＨ２−ＮＨＲ２（７ツフ塩基
）　　　　　（Ｒ，；抗体、Ｒ２；担体）抗体と担体間
のシック塩基の還元は、水素化ホウ素ナトリウム（Ｎａ
ＢＨ４）又はシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ
３ＣＮＩにより、θ°〜２５°Ｃ，ＰＨ５〜１０で、数
十分から数十時間の反応で行われる。
還元剤としては、１水累化ホ、つＪナト〃クネ又は、シ
アノ水素化ホＯ素ナトリ、や・、、！！−の他に、ヨウ
化水素・硫化水素・水素化アルミニウム、リチウム・亜
硫酸塩・硫化ナトリウム・硫化アンモニウム等が挙げら
れるが、特に水素化ホウ素ナトリウム又はシアノ水素化
ホウ素ナトリウムが最も好ましいものである。
固定化用担体としては、少なくとも１つの反応性アミノ
基又はヒドラジド基を有する多孔性セルロースビーズの
誘導体の他に、アミノ化又はヒドラジド化ポリスチレン
・架橋性アミノ化又はヒドラジド化ポバール・アミン化
又はヒドラジド°イヒアガロース・アミノ化又はヒドラ
ジド化デキストラン・アミノ化又はヒドラジド化ガラス
ピーズ等力Ｉ挙げられる。
アフィニテイクロマトグラフイーに用いる担体としては
、一般に合成ポリマーは物理的強度の充分なものは疎水
性に基づく非特異的吸着が起りやすく、ガラスピーズは
リガンドの吸着効率が劣るが多孔性セルローズビーズは
充分な物理的強度力；あり、しかも非特異的吸着がなく
、表面積が大きく、吸着効率が高く、かつ安価でちり、
本発明に最も適した担体の一つである。
少なくとも１つの反応性アミノ基又はヒドラジド基を有
する多孔性セルローズビーズの誘導体は、市販品例えば
アミンヘキシルセルロース（ＡＨ−セルロース、メルク
社製）、カルボメトキシセルロースヒドラジド（ＣＭ−
セルロースヒドラジドメルク社製］を使用してもよく、
又多孔性セルロースビーズから誘導体を作製して使用し
てもよい多孔性セルロースビーズがら誘導体を作製する
方法には、例えば多孔性セルロースビーズをエポキシ化
し、さらにアンモニアでアミン化する方法（有機合成化
学、第３８巻、第２号１２８貞（＝　８０　）　）、又
は臭化シアンで活性化し一般弐ＮＨ２（ＣＨ２）　ｎＮ
Ｈ２で示されるジアミン類を結合させてω−アミノアル
キルアミン−セルロースを得る方法（子細ら、「アフィ
ニティークロマトグラフィーｊ講談社）又は臭化シアン
活性化多孔性セルロースビーズに、一般式ＮＨ２ＮＨｃ
ｏ（ＣＨ２）ｎｃｏＮＨＮＨ２テ示すレルシヒドラジド
類を結合させて、ヒドラジド誘導体を得る方法などがあ
る。本発明に係るビーズは粒径５゜〜１０００μ、孔径
５ｏ〜１ｏｏｏ＾程度のも、のが好適であるが、この範
囲に制限されるもので杜ない。
これら担体は前記の条件を満足するものであればよく、
市販品を使用しても、また本発明の目的により適するよ
うに特別に調製したものであっても−よい。（Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌ、　Ｂｉｏｅｎｇ、　１８．１５０７（論
７６））本発明において用いる抗体は、公知の方法によ
。　　り免疫動物から得られる抗血清及び細胞融合法に
よシ得られる単クローン性抗体である。いずれの場合も
硫安塩析又は冷エタノール沈澱法等で精製して用いられ
るが、さらにＤＥＡＥ−セルロース又はゲル濾過等のカ
ラムクロマドグラフイーで精製して用いることが好まし
い。
以上詳述したように本発明は抗体の特異的反応に直接関
与していない糖鎖部分を酸化して−ｃＨ２−ＮＨ−又は
−ＣＨ２−ＮＨ−ＮＵ−ＣＯ−構造を介して担体に結合
させるものであシ、結合させるにあたシ反応条件を制御
することにょシ、抗体の不活性化を防ぎ〜結合効率を高
め、しかも繰返し使用に耐える物理的強度と高い抗原回
収率を維持しうるものである。
以下、実施例を挙げてさらに具体的に説明するが、本発
明はこれによって制限されるものではない。
なお、以下の実施例において抗原回収率は下記の方法に
よりて測定した。
１）抗原の放射性ヨウ素（１２６Ｉ）標識クロラミンＴ
法（Ｎａｔｕｒｅ、　１９４．４９５　（’６２））に
より１２５■で標識し、ゲル濾過によシ精爬した。
２）可溶性抗体の抗原結合量の測定 一定量の抗原量Ｊｔ（１２５Ｉ標識した抗原溶液の希釈
系列溶液を等量加えて良く攪拌し、一定時間放置後遠心
分離し、上清又は沈降物の放射活性を測定し、結合し得
る抗原量の最大値を求めた。
（抗原濃度、抗体濃度及び放置時間は予備実験により決
定した。） ３］　吸着体（固定化抗体）の抗原結合量の測定吸着体
をカラムに充填し　１２Ｊで標識した抗原を供給してア
フィニティクロマトグラフィーを行い、吸着された抗原
の放射活性を測定して、吸着体の抗原結合量を求めた。
４）　抗原回収率の算出 実際のカラム反応において吸着された抗原量（Ｘ）と吸
着体の作表に使用した可溶性抗体が結合し得る抗原量の
最大値（Ｙｌの比率で求めた。
すなわち、抗原回収率＝　Ｘ　ｘ　、ｉ　Ｄ、Ｑ−４％
）とした。
実施例１−１ アミン化多孔性セルロースビーズの調製性多孔性セルロ
ースビーズ（生化学工業株製、セルロファイン７００ｍ
ｌ１ｇ（固形分Ｊに蒸留水８ｍ４２ＮＮａＯＨ２１ｍｌ
、エビクロルヒビリフ６ｍｔを順次加え、４ｏ０Ｃで３
時間反応させ、ｓｓｏμｍｏｔｅ／ｇ（固形分）のエポ
キシ基を有するエポキシ化多孔性セルロースビーズを得
た。さらにこのエポキシ化多孔性セルロースビーズヲ濃
アンモニア水と４０°Ｃで２時間反応させ、ｓ　ＯＯｐ
ｍｏｔｅ／　ｇ　（固形分）のアミン基を有するアミノ
化多孔性セルロースビーズ全得た。
なおエポキシ基の定量は、塩酸による滴定法（Ｊ、　Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　９０．８７　（’７４０により
、アミノ基の定量はＩ　ｎｍａｎとｐｉｎｔｚｉａの方
法（Ｂｉｏｃｌｌｅｍｉｓｔｒｙ几４０７４　＋’６９
）　）によった。
実施例１−２ 抗ウシアルブミン抗体へのアルデヒド基の導入精製抗ウ
シアルブミン抗体を、ウサギの抗血清（富士臓器■袈）
より硫安塩析により調製した。
この精製抗ウシアルブミン抗体１５ｍｇ　ｆ、１０Ｔｎ
ｔの０．１　Ｍ酢酸緩衝液（ＰＨ３，７）に溶解し、Ｎ
ａｌ０゜１ｍｇを添加して、室温で３０分間反応させた
。次にエチレングリコールを最終濃度が０．１　Ｍとな
るよう添加し、４°Ｃで４時間反応した。さらにこの反
応液ｔ−４°Ｃで１８時間０．１　Ｍ酢酸緩衝液（ＰＨ
３，７）１ｔに対し透析した。
実施例１−３ アルデヒ゛ド基導入抗ウシアルブミン抗体のアミノ化多
孔性セルロースビーズへの結合 実施例１−２で調製したアルデヒド基導入抗ウシアルブ
ミン抗体に、実施例１−１で調製したアミノ化多孔性セ
ルロースビーズ０．４ｇ（固形分）を添加し、０．１Ｍ
炭酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ９３によりＰＨ１に６に調
整した。４°Ｃで一晩反応させた後、形成したシッフ塩
基にＮａＢＨ４５ｍｇを加え、４’Ｃ，５時間、ｌＰ　
Ｈａ　ｓの条件で処理して還元し安定化した。こうして
得られた抗ウシアルブミン抗体結合多孔性セルロースビ
ーズのウシアルブミン吸着量は、１ｇ（固形分）あた９
１５ｍｇであル、抗原回収率は９１％であった。
なお比較のため、ＮａＩＯ４７処理しない精製抗ウシア
ルブミン抗体を、上記と全く同様の方法でアミノ化多孔
性セルロースビーズと接触させたが、抗体の結合は全く
みられなかった。
比較例Ｉ　　ＣＮＢｒ活性化アガロースへの抗ウシアル
ブミン抗体の結合 市販のセファロース４Ｂ（ファルマシア社製）８ｒｒＬ
ｔをガラスフィルター上に移し、蒸留水２００ｒｒＬｔ
で洗浄、吸引後、蒸留水２０ｍｔに懸濁させた。攪拌下
、ｔＯＮＮａＯＨでＰＨを１１〜１２とし、これにＣＮ
Ｂｒ水溶液（Ｌ　５　ｇ　ＣＮＢｒ１５０ｒｒＬｔ蒸留
水）を徐々に添加した。この間ＰＨは１ＯＮＮａＯＨを
添加することにより１１−１２に維持した。反応液の温
度は３０’Ｃを越えないように操作した。反応終了後、
ガラスフィルターで濾過した。次いで冷蒸留水２００ｍ
ｌ　ｓさらに冷却した０、２５　Ｍ　ＮａＨＣＯａｌｏ
ｏｒｒＬｔを用いて洗浄して％　ＣＮＢｒ活性化アガロ
ースを得た。
仁うして得られたＣＮＢｒ活性化アガロース０．４ｇ（
固形分）を実施例１で調製した精製抗ウシアルブミン抗
体１５ｍｇを含有する０、２５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液
（α５　ＭＮ＆Ｃ１ＮａＣ１含有、５）２０ｍｔ中に懸
濁させ、４°Ｃで一晩反応させた。反応後残存する活性
基は０．２Ｍグリシン（ＰＨ＆５）’ｔ’室温で２時間
処理して除いた。
こうして得られた抗ウシアルブミン抗体結合アガロース
のウシアルブミン吸着量は、Ｉｇ（固形分）あたシ３ｍ
ｇであり、抗原回収率は１７チであった。
実施例２−１ 実施例１及び比較例１で調製した免疫アフィニティーク
ロマトグラフィー用親和性吸着体によるウシ血清中のア
ルブミンの・精御実験例実施例１で調製した抗ウシアル
ブミン抗体結合多孔性セルロースビーズ０．４ｇ（固形
分）及び比較例１で調製した抗ウシアルブミン抗体結合
アガロース０．６ｇ（固形分）をカラム（１ｍφ×２．
．５ｃｒｒＩ）ｋ充填し、ウシ血清０．１５ｍｔをカラ
ム上部より供給し、０．０２Ｍホウ酸緩衝液（ＰＨ８，
０，１５Ｍ　ＮａＣ１含有）を流下させた。カラムより
の溶出液のＯＤ２８０ｎｍが０．０３以下になるまで上
記と同じ緩衝液を通液後、２　Ｍ　ＫＳＣＮ溶液を通液
して吸着されていたウシアルブミンを溶出した。その結
果を表及び第２図に示す。
なお、蛋白量はＬｏｗｒｙの方法にしたがい測定した。
（Ｌｏｗｒｙ、　Ｏ，）Ｌ　、　Ｒｏｗｅｂｒｏｕｇｈ
、　Ｎ、　Ｊ、　Ｆａｌｌ。
Ａ、　Ｌ、　ａｎｄ　Ｒａｎｄａｌｌ、　Ｒ，Ｊ、　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　１９３２６５（１９５１））、第４図につい
ても同様である。
表 又、比較例１では流速が１０　ｍｔ　／　ｄ・ｈを越す
と精製が不可能であるのに反し、実施例１では流速が２
５ｍｔ／ｄ・ｈでも良好な結果が得られた。
なお、０．２Ｍグリシン−塩酸緩衝液による溶出画分が
ウシアルブミンであることは、オフタロニー法（新実験
化学講座２０−ＣＩ　）−生物化学、丸善）、により確
認し、この溶出画分をＳＤＳポリアクリルアミド電気泳
動で分析したところ、アルブミンのバンドのみを示した
。
実施例２−２ 実施例２−１で行ったと同じカラム操作を繰り返し行っ
たところ比較例１の方法で調製した抗ウシアルブミン抗
体結合アガロースは５回使用後、ウシアルブミン吸着容
量の顕著な低下を示したが、実施例１の方法で調製した
抗ウシアルブミン抗体結合多孔性セルロースビーズは１
５回使用後も、全くウシアルブミン吸着容量の低下はみ
られなかった。この結果を第３図に示す。
比較例２ 抗体の酸化反応ｔ−ＰＨ５以上で行った場合実施例１−
、．２において、精製抗ウシアルブミン抗体のＮａｌ０
．による酸化ｔ０．１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液　。
（ＰＨ６）中で行った。すなわち、１０　ｍｌ、　（Ｄ
　Ｏ１ＩＭＩＪン酸緩衝液（ＰＨ６）に抗体を１５ｍｇ
溶解し、ＮａＩＯ４１ｍｇを添加して室温で３０分反応
させた。
この時点で反応液が濁り、抗体の自己会合が明らかに認
められた。次にエチレングリコールを最終濃度が０．１
　Ｍとなるよう添加し、４°Ｃで４時間反応させた。０
．１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ＰＨ６）１／、に対し４″
′Ｃで１８時間透析後実施例ｉ−１の方法で調製したア
ミノ化多孔性セルロースビーズｌ　Ｏ，４ｇ（固形分）
添加し、４°Ｃで一晩反応させ、さらにＮａＢＨ４５ｍ
ｇによる還元処理を４°Ｃで５時間、ＰＨ＆５０条件で
行った。こうして得られた抗ウシアルブミン抗体結合多
孔性セルロースビーズのウシアルブミン吸着量は、１ｇ
（固形分）あたシ１　ｍｇであり、抗原回収率は６チで
あった。
実施例３−１ ヒドラジド化多孔性セルロースビーズの調製性多孔性セ
ルロースビーズ（生化学工業■製、セルロファイン？０
０ｍ）１　ｇｅ実施例１−１の方法でエポキシ化し、５
５０μｍａｔｅ　／　ｇ　（固形分）のエポキシ基を有
するエポキシ化多孔性セルロースピーズを得た。これを
アジピン酸ジヒドラジドの飽和溶液（約９０ｇ／ｌｔ・
０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ９））１０ｍｔに
懸濁させ、４’Ｃｆ−晩反応させた。反応後０．２　Ｍ
　ＮａＣ１で、洗液が２゜４．６−）ＩＪニトロベンゼ
ンスルホン酸（ＴＮＢＳ）反応に対し陰性になるまで洗
浄した。
こうして得られたヒドラジド化多孔性セルロースビーズ
は、１５０　ｔｔ　ｍｏｌｅ　／　ｇ　（固形分）のヒ
ドラジド基を有した。ヒドラジド基の定量はＴＮＢＳ法
で行った（　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　、　４　、１８１　（”７４））。
実施例３−２ 抗ヒトウロキナーゼ抗体へのアルデヒド基ノ導入 精製抗ヒトウロキナーゼ抗体を、ウサギの抗血清（ミド
リ十字■製）より硫安塩析により調製した。この精製抗
ヒトウロキナーゼ抗体１０ｍｇｔ、１０ｍｔの０．１　
Ｍ酢酸緩衝液（ＰＨ３，７３に溶解し、Ｎ！ＬＩＯ４１
ｍｇ　を添加して、室温で３０分間反応させた。次にエ
チレングリコールを最終濃度が０．０５Ｍとなるよう添
加し、４°Ｃで３時間反応させた。
さらにこの反応液を４’Ｃで１８時間、０．１　Ｍ酢酸
緩衝液（ＰＨ１７）１ｔに対し透析した。
実施例３−３ アルデヒド基導入抗ヒトウロキナーゼ抗体のヒドラジド
化多孔性セルロースビーズへの結合実施例３−２で調製
したアルデヒド基導入抗ヒトウロキナーゼ抗体に、実施
例３−１で調製したヒドラジド化多孔性セルロースビー
ズ０．５　ｇ　（固形分）を添加し、Ｑ、１Ｍ炭酸ナト
リウム緩衝液（ＰＨ９）によりＰＨを６に調整した。４
°Ｃで一晩反応後、ＮａＢＨ，５ｍｇを用いて４°Ｃ，
Ｓ時間、ＰＨ＆５の条件で処理して、シッフ塩基を安定
化させ、免疫アフィニティクロマトグラフィー用吸着体
を得た。
実施例４ 実施例３で調製した免疫アフィニティークロマトグラフ
ィー用吸着体による人尿中のウロキナ−ゼの精製 実施例３で調製した抗ヒトウロキナーゼ抗体結合多孔性
セルロースビーズ０．４ｇ（固形分）をカラム（ｌｃｒ
ｎφｘｚ！Ｍｍ）に充填し、人尿より得たウロキナーゼ
原末（７００国際単位／ｍｇ）０．２ｇをカラム上部よ
り供給し、０．１ＭＩＪン酸緩衝生理食塩水（ＰＨ７，
５）を流下させた。溶出液のＯＤ２８０ｎｍが０．０３
以下になるまで上記と同じ緩衝液を通液後、１．５ＭＫ
ＳＣＮで吸着されていたウロキナーゼを溶出させた。こ
の結果を第４図に示す。
ＫＳＣＮによる溶出液を透析してＫＳＣＮを除去し一低
温で濃縮してさらに凍結乾燥したところ、１３万国際単
位／ｍｇタンパクの比活性をもつウロキナーゼが得られ
、活性回収率は９２チであった。また発熱性物質の試験
結果は陰性であった。
なお本カラム操作を繰り返し１０回行ったが、ヒトウロ
キナーゼの吸着容量の低下は全くみられなかった◎ ウロキナーゼ活性の測定は、フィブリ゛ン平板法（Ｐ、
　Ｌ、　Ｗａｌｔｏｎ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｉｍ、　Ａ
ｃｔａ、　１３．６８０（”６６））で、発熱性物質の
試験は日本薬局方一般試験法第２７項発熱性試験法に準
じ、投与量は６００００国際単位／Ｋｙで行った。
【図面の簡単な説明】
第１図は抗体をＮａＩＯ４で酸化する際のＰＨと反応液
の光学密度との関係を示すグラフ、第２図及び第４図は
それぞれウシアルブミン及びウロキナーゼのアフィニテ
ィーカラムによる精製結果を示すグラフ、第３図はカラ
ム操作における吸着量と繰返し回数との関係を示すグラ
フである。 手続補正書 昭和５６年１Ｑ月３／日 ！％訂庁長官島田春樹殿 １・　事件の表示 昭和５６年特許願第１５１４６２号 ２　発明の名称 体及びその製法 １　補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　〒１００東京都千代田区有楽町１丁目４番１号自
　　発 ５、補ｒの対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６６　　補正の内容 （１）　　明細書、３頁、下から２行「・・・方法にお
いても、’Ｊ　’ｅ　ｒ・・・方法においては、」に訂
正する。 （２ン　　同、６頁、４〜５行の「高価な単りＰ−ン性
抗体を固定するにあたシ、」を「抗体を固定化するにあ
たり、」に訂正する。 （３）　　同、８頁、６行の に訂正する。 （４）　　同、１７頁、８行の「抗原溶液」ヲ「抗体溶
液」に訂正する。 （５）　　同、１８３Ｎ、９行の「エビクロルヒビリン
」を「エピクロルヒドリン」に訂正する。 （６）同、２３頁、４行のｒ　０．２　Ｍグリシン−塩
酸緩衝液Ｊ　ｆ　ｒ２Ｍ’　ＫＳＣＮ溶液」に訂正する
。 以上

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）炭水化物部位のグリコール部が酸化分断されてな
    るＣＨＯ基を有する抗体と側鎖にアミノ基又はヒドラジ
    ド基を有する担体とが−ＣＨ，−ＮＨ−構造又は−ＣＨ
    ，−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−構造を介して結合していると共
    に、カラムに充填し１０回以上の吸脱着を繰返しても８
    ０チ以上の抗原回収率を有する免疫アフィニティクロマ
    トグラフイー用吸着体。
  2. （２）ＰＨ１〜５の範囲で抗体に酸化剤を作用せしめ、
    抗体の糖鎖部位のグリコール部をアルデヒド基に酸化し
    た後、アミノ基又はヒドラジド基を有する担体と結合さ
    せ、上記結合部分を還元してカラム使用によ９１０回以
    上の吸脱着を繰返しても８０チ以上の抗原回収率を有す
    る免疫アフィニティクロマトグラフィー用吸着体の製法
    。
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Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61181966A (ja) * 1984-12-06 1986-08-14 ユ−オ−ピ−　インコ−ポレイテツド カルボキシル基でつながれた固定化抗体
JPH01165600A (ja) * 1987-11-14 1989-06-29 Roehm Gmbh 固定化抗体およびその製法
WO2004058687A1 (ja) * 2002-12-26 2004-07-15 Shionogi Co., Ltd. 糖鎖捕捉分子を用いた糖鎖精製濃縮法および糖鎖構造解析法
EP1731540A4 (en) * 2004-03-31 2011-03-02 Sumitomo Bakelite Co POLYMER PARTICLE
JP2016526416A (ja) * 2013-06-24 2016-09-05 エクステラ・メディカル・コーポレーション マンノース被覆基材を含有する血液濾過システム
US10188783B2 (en) 2005-12-13 2019-01-29 Exthera Medical Corporation Method for extracorporeal removal of pathogenic microbe, an inflammatory cell or an inflammatory protein from blood
WO2019039545A1 (ja) * 2017-08-23 2019-02-28 Jsr株式会社 クロマトグラフィー用担体、リガンド固定担体、クロマトグラフィーカラム、標的物質の精製方法、及びクロマトグラフィー用担体の製造方法
US10457974B2 (en) 2013-11-08 2019-10-29 Exthera Medical Corporation Methods for diagnosing infectious diseases using adsorption media
US10537280B2 (en) 2011-02-15 2020-01-21 Exthera Medical Corporation Device and method for removal of blood-borne pathogens, toxins and inflammatory cytokines
US10786615B2 (en) 2016-03-02 2020-09-29 Exthera Medical Corporation Method for treating drug intoxication
US10857283B2 (en) 2014-09-22 2020-12-08 Exthera Medical Corporation Wearable hemoperfusion device
US11123466B2 (en) 2009-12-01 2021-09-21 Exthera Medical Corporation Methods for removing cytokines from blood with surface immobilized polysaccharides
US11266772B2 (en) 2012-06-13 2022-03-08 Exthera Medical Corporation Use of heparin and carbohydrates to treat cancer
JPWO2023106379A1 (ja) * 2021-12-08 2023-06-15
US11844895B2 (en) 2014-04-24 2023-12-19 Exthera Medical Corporation Method for removing bacteria from blood using high flow rate
US11911551B2 (en) 2016-03-02 2024-02-27 Exthera Medical Corporation Method for treating drug intoxication
US12090261B2 (en) 2019-05-16 2024-09-17 Exthera Medical Corporation Method for modulating endothelial glycocalyx structure

Cited By (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61181966A (ja) * 1984-12-06 1986-08-14 ユ−オ−ピ−　インコ−ポレイテツド カルボキシル基でつながれた固定化抗体
JPH01165600A (ja) * 1987-11-14 1989-06-29 Roehm Gmbh 固定化抗体およびその製法
US9683006B2 (en) 2002-12-26 2017-06-20 Sumitomo Bakelite Co., Ltd. Method of purifying/concentrating sugar chains with a sugar chain-trapping molecule and method of analyzing sugar chain structure
WO2004058687A1 (ja) * 2002-12-26 2004-07-15 Shionogi Co., Ltd. 糖鎖捕捉分子を用いた糖鎖精製濃縮法および糖鎖構造解析法
JPWO2004058687A1 (ja) * 2002-12-26 2006-04-27 塩野義製薬株式会社 糖鎖捕捉分子を用いた糖鎖精製濃縮法および糖鎖構造解析法
JP2010046665A (ja) * 2002-12-26 2010-03-04 Shionogi & Co Ltd 糖鎖捕捉分子を用いた糖鎖精製濃縮法および糖鎖構造解析法
JP2010046666A (ja) * 2002-12-26 2010-03-04 Shionogi & Co Ltd 糖鎖捕捉分子を用いた糖鎖精製濃縮法および糖鎖構造解析法
US9139607B2 (en) 2002-12-26 2015-09-22 Sumitomo Bakelite Co., Ltd. Method of purifying/concentrating sugar chain with sugar chain-trapping molecule and method of analyzing sugar chain structure
EP1731540A4 (en) * 2004-03-31 2011-03-02 Sumitomo Bakelite Co POLYMER PARTICLE
JP2012122073A (ja) * 2004-03-31 2012-06-28 Sumitomo Bakelite Co Ltd ポリマー粒子
JP5026070B2 (ja) * 2004-03-31 2012-09-12 住友ベークライト株式会社 ポリマー粒子
US11065378B2 (en) 2005-12-13 2021-07-20 Exthera Medical Corporation Method for extracorporeal removal of a pathogenic microbe, an inflammatory cell or an inflammatory protein from blood
US10188783B2 (en) 2005-12-13 2019-01-29 Exthera Medical Corporation Method for extracorporeal removal of pathogenic microbe, an inflammatory cell or an inflammatory protein from blood
US10688239B2 (en) 2005-12-13 2020-06-23 Exthera Medical Corporation Method for extracorporeal removal of a pathogenic microbe, an inflammatory cell or an inflammatory protein from blood
US11123466B2 (en) 2009-12-01 2021-09-21 Exthera Medical Corporation Methods for removing cytokines from blood with surface immobilized polysaccharides
US10537280B2 (en) 2011-02-15 2020-01-21 Exthera Medical Corporation Device and method for removal of blood-borne pathogens, toxins and inflammatory cytokines
US11266772B2 (en) 2012-06-13 2022-03-08 Exthera Medical Corporation Use of heparin and carbohydrates to treat cancer
US10639413B2 (en) 2013-06-24 2020-05-05 Exthera Medical Corporation Blood filtration system containing mannose coated substrate
JP2016526416A (ja) * 2013-06-24 2016-09-05 エクステラ・メディカル・コーポレーション マンノース被覆基材を含有する血液濾過システム
US11306346B2 (en) 2013-11-08 2022-04-19 Exthera Medical Corporation Methods for diagnosing infectious diseases using adsorption media
US10457974B2 (en) 2013-11-08 2019-10-29 Exthera Medical Corporation Methods for diagnosing infectious diseases using adsorption media
US10487350B2 (en) 2013-11-08 2019-11-26 Exthera Medical Corporation Methods for diagnosing infectious diseases using adsorption media
US11844895B2 (en) 2014-04-24 2023-12-19 Exthera Medical Corporation Method for removing bacteria from blood using high flow rate
US10857283B2 (en) 2014-09-22 2020-12-08 Exthera Medical Corporation Wearable hemoperfusion device
US10786615B2 (en) 2016-03-02 2020-09-29 Exthera Medical Corporation Method for treating drug intoxication
US11911551B2 (en) 2016-03-02 2024-02-27 Exthera Medical Corporation Method for treating drug intoxication
CN110997133A (zh) * 2017-08-23 2020-04-10 Jsr株式会社 色谱用载体、配体固定载体、色谱柱、靶物质的纯化方法和色谱用载体的制造方法
JPWO2019039545A1 (ja) * 2017-08-23 2020-10-01 Jsr株式会社 クロマトグラフィー用担体、リガンド固定担体、クロマトグラフィーカラム、標的物質の精製方法、及びクロマトグラフィー用担体の製造方法
TWI799441B (zh) * 2017-08-23 2023-04-21 日商Ｊｓｒ股份有限公司 層析用載體﹑配位子固定載體﹑層析管柱﹑標的物質之純化方法，及層析用載體之製造方法
KR20200043990A (ko) * 2017-08-23 2020-04-28 제이에스알 가부시끼가이샤 크로마토그래피용 담체, 리간드 고정 담체, 크로마토그래피 칼럼, 표적 물질의 정제 방법 및 크로마토그래피용 담체의 제조 방법
WO2019039545A1 (ja) * 2017-08-23 2019-02-28 Jsr株式会社 クロマトグラフィー用担体、リガンド固定担体、クロマトグラフィーカラム、標的物質の精製方法、及びクロマトグラフィー用担体の製造方法
US12161993B2 (en) 2017-08-23 2024-12-10 Jsr Corporation Chromatography carrier, ligand-immobilizing carrier, chromatography column, target substance purification method, and chromatography carrier production method
US12090261B2 (en) 2019-05-16 2024-09-17 Exthera Medical Corporation Method for modulating endothelial glycocalyx structure
JPWO2023106379A1 (ja) * 2021-12-08 2023-06-15
WO2023106379A1 (ja) * 2021-12-08 2023-06-15 国立大学法人 東京大学 セルロース多孔粒子及びこれからなる培養用マイクロキャリア

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