JPH0818986B2 - レトロウイルスに感染した患者を治療するための２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エン（２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン）の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の技術分野】本発明は、レロトウイルス、特にエ
イズに感染した患者を治療するためのヌクレオシド
２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エン（２’，
３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン）
の製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】後天的免疫不全症候群（「エイズ」）の
病原はレトロウイルスと呼ばれるリンパ節症関連ウイル
ス（ＬＡＶ）［Ｆ．バレーシノウシ、Ｊ．Ｃ．チヤマ
ン、Ｆ．レイ、Ｍ．Ｔ．ヌゲイレ、Ｓ．シャマレット、
Ｊ．グルエスト、Ｃ．ダウゲット、Ｃ．アクスラーブリ
ン、Ｆ．ベジネット−ブルン、Ｃ．ルージウー、Ｗ．ロ
ーゼンバウム及びＬ．モンタニエール、サイエンス（１
９８３）、第２２０巻、第８６８〜８７０頁］又はヒト
Ｔリンパ趨向性ウイルスIII （ＨＴＬＶ III）［Ｍ．ポ
ポビック、Ｍ．Ｇ．サルンガドハルン、Ｅ．リード及び
Ｒ．Ｃ．ガロ、サイエンス（１９８４）、第２２４巻、
第４９７〜５０８頁］である。現在、最良の証拠はこれ
らが同一ウイルスであるか又は近縁の変種であるという
考えを支持している［Ｌ．ラトナー、Ｗ．ハゼルチン、
Ｒ．パタルカ等、ネイチャー（１９８５）、第３１３
巻、第２２７〜２８５頁］。２’，３’−ジデオキシシ
チジン−２’−エンはホロビッツ等によって最初に合成
された［Ｊ．Ｐ．ホロビッツ、Ｊ．チュワ、Ｍ．ノエ
ル、Ｊ．Ｔ．ドナッチ、ジャーナル・オーガニック・ケ
ミストリー（１９６７）、第３２巻、第８１７頁］。

【０００３】ヒロアキ・ミツヤ及びサムエル・ブローダ
ー［プロシーディング・ナショナル・アカデミー・サイ
エンス・ＵＳＡ、第８３巻、第１９１１〜１９４５頁、
１９８６年３月］は、ヒトＴ−リンパ趨向性ウイルスII
I 型（ＨＴＬＶ III／ＬＡＶ）の感染性及び細胞病理作
用をインビトロで阻止する試みとしてプリン及びピリミ
ジンヌクレオシド誘導体、すなわち２’，３’−ジデオ
キシヌクレオシドの試験を記載している。

【０００４】

【発明の目的】本発明はレトロウイルスに感染したヒト
を含む温血動物の治療に関係し、該治療は、温血動物
（たとえばヒト患者）へ抗レトロウイルス効果量の
２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エン（２’，
３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン）
又はその医薬上許容しうる塩を単独で若しくは希釈剤と
混合して或いは薬物として投与することからなってい
る。

【０００５】

【発明の要点】したがって、本発明は、レトロウイルス
に感染した温血動物へ投与するための、抗レトロウイル
ス有効量の２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エ
ン若しくはその医薬上許容しうる塩を単独で若しくは希
釈剤と混合して又は薬物として含有する温血動物のレト
ロウイルス治療剤を開示する。２’，３’−ジデオキシ
シチジン−２’−エン（２’，３’−ジデオキシ−
２’，３’−ジデヒドロシチジン）の構造は次の通りで
ある：

【化１】 ２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エン（２’，
３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン）
は次の反応式にしたがって製造することができる：

【化２】 したがって、本発明は、（ａ）２’，３’−ジデオキシ
ウリジン−２’−エンをトリエチルアミンを存在させた
溶剤中でアセチル化して、対応のアセテートを生成さ
せ、（ｂ）このアセテートを４−クロルフェニルホスホ
ロジクロリデート及び１，２，４−トリアゾールとピリ
ジン中で反応させて４−トリアゾリルピリミジノン誘導
体を生成させ、（ｃ）この４−トリアゾリルピリミジノ
ン誘導体をアンモニア水溶液及びジオキサンと数時間〜
数日間反応させ、次いで（ｄ）メタノール性アンモニア
を添加することを特徴とする２’，３’−ジデオキシ−
２’，３’−ジデヒドロシチジンの製造方法を提供す
る。

【０００６】上記反応式においては次の工程が行なわれ
る：化合物１（２’，３’−ジデオキシウリジン−２’
−エン）をピリジン（Ｐｙ）中にて無水酢酸（Ａｃ₂
Ｏ）でアセチル化するが、トリエチルアミンを存在させ
た溶剤中で塩化アセチルにより行なって対応のアセテー
ト、すなわち５’−Ｏ−アセチル−２’，３’−ジデオ
キシウリジン−２’−エンを生成させることができ、こ
れを次いで４−クロルフェニルホスホロジクロリデート
及び１，２，４−トリアゾールによりピリジン中で室温
にて処理することにより４−トリアゾリルピリミジノン
誘導体３を生成させる。ジオキサン中の水性アンモニア
（１：３）による４−トリアゾリルピリミジノン誘導体
のその後の処理を数時間〜数日間行ない、次いでメタノ
ール性アンモニアを室温で１晩添加して２’，３’−ジ
デオキシシチジン−２’−エン（２’，３’−ジデオキ
シ−２’，３’−ジデヒドロシチジン）（化合物４）を
生成させる。

【０００７】本発明者等は、２’，３’−ジデオキシシ
チジン−２’−エン（２’，３’−ジデオキシ−２’，
３’−ジデヒドロシチジン）がレトロウイルス、たとえ
ばマウス白血病ウイルス及びＨＴＬＶ III／ＬＡＶウイ
ルス（エイズウイルス）に対し抗ウイルス活性を有する
ことを突き止めた。

【０００８】レトロウイルスはＲＮＡウイルスであっ
て、そのゲノムは一本鎖ＲＮＡのコピーを有する。ビリ
オンは逆転写酵素を含有する。限定はしないがレトロウ
イルスの例は動物の白血病及び肉腫ウイルス、霊長動物
のフォーミー（ｆｏａｍｙ）ウイルス及び幾種かのスロ
ーウイルス、たとえば羊のビスナ（ｖｉｓｎａ）及びメ
ジ（ｍａｅｄｉ）を包含する。

【０００９】２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−
エンは３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺ
Ｔ）よりもずっと良好な水溶性を有する。さらに、
２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エンは対応の
塩酸塩及びその他の塩まで容易に変換することができ、
これらはさらにその水溶性を向上する。水溶性は薬剤組
成物につき臨界的な因子である。

【００１０】活性化合物、すなわち２’，３’−ジデオ
キシシチジン−２’−エン（２’，３’−ジデオキシ−
２’，３’−ジデヒドロシチジン）は薬物として投与す
ることができる。この薬物は、本発明の化合物を含む錠
剤（トローチ剤及び顆粒を包含する）、糖衣錠、カプセ
ル、丸薬、アンプル又は座薬の形態とすることができ
る。

【００１１】本明細書で使用する「薬物」という用語
は、医薬投与に適する物理的に分離した個々の部分を意
味する。「投与単位型の薬物」という本明細書に使用す
る用語は、医薬投与に適しそれぞれ本発明による化合物
の１日投与量或いは１日投与量の複数回分（４回分ま
で）又は準複数回分（４０分の１回まで）をキャリヤと
共に含有する及び（又は）エンベロプ内に包封した物理
的に分離する個々の単位を意味する。薬物が１日投与量
を含有するか、或いはたとえば１日投与量の半分、１／
３若しくは１／４を含有するかどうかは、この薬物を１
回で投与するか或いはそれぞれ毎日２回、３回若しくは
４回投与するかどうかに依存する。

【００１２】さらに、この活性化合物は水性若しくは非
水性希釈剤、シロップ、顆粒若しくは粉末における活性
化合物の懸濁剤、溶液若しくは乳剤として投与すること
もできる。錠剤、糖衣錠、カプセル及び丸薬に形成する
のに適した活性化合物を含有する医薬組成物（たとえば
顆粒）に使用しうる希釈剤は次のものを包含する：
（ａ）充填剤及び増量剤、たとえば澱粉、砂糖、マニト
ール及び珪酸；（ｂ）結合剤、たとえばカルボキシメチ
ルセルロース及びその他のセルロース誘導体、アルギン
酸塩、ゼラチン及びポリビニルピロリドン；（ｃ）加湿
剤、たとえばグリセリン；（ｄ）崩壊剤、たとえば寒
天、炭酸カルシウム及び重炭酸ナトリウム；（ｅ）溶解
阻止剤、たとえばパラフィン；（ｆ）吸収促進剤、たと
えば第四アンモニウム化合物；（ｇ）表面活性剤、たと
えばセチルアルコール及びグリセリンモノステアレー
ト；（ｈ）吸着キャリヤ、たとえばカオリン及びベント
ナイト；（ｉ）滑剤、たとえばタルク、ステアリン酸カ
ルシウム及びマグネシウム、並びに固体ポリエチレング
リコール。

【００１３】活性化合物を含む錠剤、糖衣錠、カプセル
及び丸薬は慣用のコーティング、エンベロプ、保護マト
リックスを有することができ、これには乳白剤を含有さ
せることもできる。さらに、これらは活性成分のみを好
ましくは腸管の特定部分で、できれば長時間にわたって
放出するよう構成することもできる。コーティング、エ
ンベロプ及び保護マトリックスは、たとえば高分子物質
又はワックスで作成することができる。さらに、活性成
分は上記希釈剤の１種若しくは数種と共にマイクロカプ
セル化型として構成することもできる。座薬に形成する
のに適した医薬組成物に使用する希釈剤はたとえば通常
の水溶性希釈剤、たとえばポリエチレングリコール及び
脂肪（たとえば椰子油及び高級エステル、たとえばＣ₁₄
アルコールとＣ₁₆脂肪酸とのエステル）又はこれら希釈
剤の混合物とすることができる。

【００１４】溶液及び乳剤である医薬組成物は、たとえ
ば慣用の希釈剤（勿論、表面活性剤が存在しない限り２
００以下の分子量を有する溶剤を除く）、たとえば溶
剤、溶解剤及び乳化剤を含有することができる。限定は
しないが、これら希釈剤の特定例は水、エチルアルコー
ル、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢
酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエー
ト、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコー
ル、ジメチルホルムアミド、油類（たとえば落花生
油）、グリセリン、テトラヒドロフルフリルアルコー
ル、ポリエチレングリコール、並びにソルビトールの脂
肪酸エステル又はその混合物である。非経口投与には、
溶液及び乳剤を無菌としかつ必要に応じ血液等張性とす
べきである。

【００１５】懸濁剤である医薬組成物は通常の希釈剤、
たとえば液体希釈剤（たとえば水、エチルアルコール、
プロピレングリコール）表面活性剤（たとえばエトキシ
ル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソ
ルバイト及びソルビタンエステル）、マイクロクリスタ
リンセルロース、アルミニウムメタ水酸化物、ベントナ
イト、寒天及びトラガカント又はその混合物を含有する
ことができる。さらに、これら医薬組成物は着色料及び
保存料、並びに香料及び着香性添加物（たとえばペパー
ミント油及びユーカリ油）並びに甘味料（たとえばサッ
カリン及びアスパルテーム）を含有することもできる。

【００１６】医薬組成物は一般に、全組成物に対し０．
５〜９０重量％の活性成分を含有する。活性成分に加
え、医薬組成物及び薬物はさらに他の医薬上活性な化合
物を含有することもできる。本発明の薬物における希釈
剤は、医薬組成物に関連して上記したもののいずれであ
ってもよい。この種の薬物は、唯一の希釈剤として２０
０未満分子量を有する溶剤を含むことができる。本発明
による薬物の好適な１日投与量は静脈内投与の場合には
２．５〜２５０ｍｇの活性成分であり、経口投与の場合
には２５〜２５０ｍｇの活性成分である。

【００１７】この活性化合物は経口的、非経口的（たと
えば筋肉内、腹腔内、皮下又は静脈内）、経腸的又は局
部的、好ましくは経口的若しくは非経口的、特に舌下若
しくは静脈内で投与される。好適医薬組成物及び薬物
は、したがってたとえば経口若しくは非経口投与のよう
な投与に適したものである。本発明における投与は好ま
しくは経口若しくは非経口投与である。

【００１８】一般に、体重１ｋｇ当たり毎日０．０１〜
１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５〜５ｍｇ／ｋｇの
量を静脈内投与し、或いは体重１ｋｇ当たり毎日０．０
５〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｋｇ
を経口投与して有効な結果を達成するのが有利であると
判明した。しかしながら、しばしばこれらの投与量から
外れる必要もあり、特に処置すべきヒト患者若しくは動
物の性質及び体重、処置に対するこの患者の個々の反応
性、活性成分を投与する組成物の種類、投与を行なう方
式、並びに病気の進行状況、或いは投与すべき間隔に応
じて変化させる必要がある。したがって、或る場合には
上記最少投与量よりも少なく使用すれば充分であり、又
他の場合には上記上限値を越えて所望の結果を達成しな
ければならないこともある。より多量を投与する場合、
これらを１日の範囲で数回の個々の投与に分割すること
が推奨される。

【００１９】

【実施例】以下、限定はしないが実施例により本発明を
さらに説明する。例 １ ：２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−エン
の合成 無水酢酸（１．００ｇ、１０．０ミリモル）をピリジン
１０ｍｌ中の化合物１（０．４２ｇ、２．００ミリモ
ル）の撹拌溶液へ０℃（氷浴）にて徐々に添加した。得
られた溶液を４℃にて１晩静置させた。溶剤及び過剰の
無水酢酸を減圧除去した。残存する残留物を５０ｍｌの
ＣＨＣｌ₃ に溶解させ、分液漏斗にて５０ｍｌづつのＨ
₂ Ｏ（３回）、飽和ＮａＨＣＯ₃ （２回）及び再びＨ₂
Ｏ（２回）で洗浄した。ＣＨＣｌ₃ 溶液をノリットで清
澄化させ、無水ＭｇＳＯ₄ で脱水しかつ濾過した。次い
で濾液を濃縮して残留物を得、これを精製することなく
直ちに次の製造に使用した。

【００２０】このアセテートを１０ｍｌのピリジンに溶
解した。冷水浴中で撹拌しながら、４−クロルフェニル
ホスホロジクロリデート（０．７４ｇ、３．００ミリモ
ル）を滴加し、次いで１，２，４−トリアゾール（０．
４１ｇ、６．００ミリモル）を添加した。この混合物を
室温にて３日間撹拌し、次いで減圧下に濃縮した（約３
０℃）。得られた残留物を２５ｍｌのＣＨ₂ Ｃｌ₂ に溶
解させ、２５ｍｌのＨ₂ Ｏ（２回）及び５０％ＮａＨＣ
Ｏ₃ 溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。このＣＨ₂Ｃｌ₂ 溶
液をノリットで清澄化させ、ＭｇＳＯ₄ で脱水しかつ濾
過した。濾液を減圧下で蒸発乾固させてガラス状残留物
（４−トリアゾリルピリミジノン誘導体）を生成させ、
これを２５ｍｌのＮＨ₄ ＯＨ−ジオキサン（１：３）に
溶解させた。混合物を室温にてホイートン圧力瓶内で５
時間撹拌した。次いでこの溶液を濃縮し、かつ残留物を
前記圧力瓶内にて室温にて２５ｍｌの飽和メタノール性
アンモニア中で１晩撹拌した。次いで、この溶液を減圧
下に少容積まで濃縮し、かつシリカゲルカラム（ＣＨＣ
ｌ₃ −ＭｅＯＨ、３：１、Ｒ_f ０．３４）にてクロマト
グラフにかけ、０．１７ｇ（化合物１に対し４０％）の
生成物を得た：ｍｐ１６３〜１６５℃；ＵＶ（０．１Ｎ
ＨＣｌ）λｍａｘ２７５ｎｍ（ε１１，３４０）、λ
ｍｉｎ２３７ｎｍ；ＵＶ（０．１Ｎ ＮａＯＨ）λｍａ
ｘ２６７ｎｍ（ε７，０１０）、λｍｉｎ２４７ｎｍ；
ＮＭＲ（Ｍｅ₂ ＳＯ−ｄ₆ ）δ３．５６（ｍ、２Ｈ、
５’−Ｈ）、４．７５（ｍ、１Ｈ、４’−Ｈ）、４．９
５（ｂｒｓ、１Ｈ、５’−ＯＨ、Ｄ₂ Ｏ交換可能）、
５．６８（ｄ、１Ｈ、５−Ｈ）、５．８８（ｍ、１Ｈ、
３’−Ｈ、ビニル）、６．３３（ｍ、１Ｈ、２’−Ｈ、
ビニル）、６．８９（ｍ、１Ｈ、１’−Ｈ）、７．１２
〜７．１９（ｂｒ ｄ、１Ｈ、４−ＮＨ₂ 、Ｄ₂ Ｏ交換
可能）、７．６８（ｄ、１Ｈ、６−Ｈ）。出発化合物１
は、ホロビッツ等の方法［Ｊ．Ｐ．ホロビッツ、Ｊ．チ
ュア、Ｍ．ノエル、Ｊ．Ｐ．ドナッチ、ジャーナル・オ
ーガニック・ケミストリー（１９６７）、第３２巻、第
８１７頁］によって２’−デオキシウリジンから作成し
た。

【００２１】例 ２：生物学的活性 ＸＣ−分析によるモロニー・マウス白血病ウイルス（Ｍ
−ＭｕＬＶ）に対する抗ウイルススクリーニングの分析
手順：ＸＣ分析方式は、Ｖ．クレメント等によりプロシ
ーディング・ナショナル・アカデミー・サイエンス、第
６３巻、第７５３〜７５８頁（１９６９）に初期に記載
されかつＷ．ローベ等により改変された［バイロロジ
ー、第４２巻、第１１３６〜１１３９頁（１９７０）］
マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）の間接的定量法であ
る。この試験は、ＭｕＬＶで増産的に感染したマウス繊
維芽細胞（ＳＣ−１細胞）と共に培養した際のＸＣ細胞
ラインにおける合胞変化（syncytial change）の発生に
基づいている。ＸＣ細胞ラインは、ラウス肉腫ウイルス
（ＲＳＶ）［Ｊ．スボバダ等、ホリヤ・バイオロジー、
第９巻、第７７〜８１頁（１９８３）］のプラハ（Prag
ue）株により誘発させたラット腫瘍から得たものであ
る。この細胞ラインはＲＳＶゲノムを含有するが、ヘル
パウイルスの不存在下では感染性ウイルスを生じない。
１０Ｅ６ＳＣ−１細胞を６０ｍｍペトリ皿上へアールス
の最小必須培地（ＥＭＥＭ）−１０％胎児牛血清（ＦＢ
Ｓ）中にて接種した。翌日、これらの細胞に２５μｇ／
ｍｌのＤＥＡＥ−デキストランを含有するウイルス希釈
液０．５ｍｌを接種した。ペトリ皿を湿潤化した５％Ｃ
Ｏ₂ の培養器にて３７℃で１時間維持した。次いで、ウ
イルス接種物を除去し、適当濃度の試験化合物を含有す
る５ｍｌの培地（１つの濃度につき２枚のペトリ皿）で
置換した。１０％ＦＢＳを含有する培地をウイルス対照
皿へ添加した。培地（試験化合物を含有するもの又は含
有しないもの）は４８時間で交換した。

【００２２】ウイルス接種してから５日後、培養液をデ
カントし、かつ細胞に「ＧＥ」殺菌電球により３０秒間
照射した（６０エルグ／ｍｍ² ／ｓｅｃ．ＵＶ−光）。
培養物には直ちに５ｍｌのＥＭＥＭ−１０％ＦＢＳ／皿
１枚にて１０⁶ 個のＸＣ細胞を載せた。この培地を２日
間隔で取換えた。ＸＣ細胞を添加してから４日後、培養
物を固定すると同時にギムザ染色により１０〜１５分間
染色した。

【００２３】ウイルスプラーク数（すなわち合胞細胞又
は多核巨大細胞の局所的密集体を含有する細胞シートの
領域）を倒立顕微鏡を用いて計数した。各薬剤濃度にお
けるウイルスプラーク数の阻止％を次のように計算し
た： 阻止％＝１００−［（試験化合物の各濃度における合胞
の平均数／ウイルス対照における合胞の平均数）×１０
０］ ＥＤ₅₀（ＩＤ₅₀）：リード−ムエンチ（Reed-Muench ）
法を用いる蓄積及び阻止 ＥＤ₅₀：５０％阻止に対する有効投与量 各化合物の平均阻止投与量（ＩＤ₅₀）は、リード−ムエ
ンチ法を用いた阻止％の結果から計算した。

【００２４】２’，３’−ジデオキシシチジン−２’−
エンの抗ウイルス活性を２’，３’−ジデオキシシチジ
ンと比較して下記表１に示す。２’，３’−ジデオキシ
シチジンは、培養におけるＨＴＬＶ III／ＬＡＶウイル
スに対する公知の有力な化合物である［ミツヤ及びブロ
ーダー、上記］。

【表１】

【００２５】例 ３：２’，３’−ジデオキシ−２’，
３’−ジデヒドロシチジン（２’，３’−ジデオキシシ
チジン−２’−エン）の抗ウイルス活性 Ａ．ＨＴＬＶIII ／ＬＡＶの阻止に対する細胞分析（細
胞変性効果、蛍光性、生存性） ヌクレオシドアナログ ：１ミリモルの溶液をガラス器で
蒸留した蒸溜水内で作成し、かつ０．２μフィルタを通
してフィルタ滅菌した。次いで、１５％胎児牛血清とペ
ニシリンとストレプトマイシンとグルタミンとを含有す
るＲＰＭＩ１６４０培地にて希釈した。細胞培養物 ：ＨＴＬＶ−Ｉ形質転換細胞ラインＭＴ−２
（ＭＴ−２細胞はＨＴＬＶ−Ｉにより形質転換された胎
盤帯血液から得られるリンパ球である）を、表２に要約
する薬剤濃度を有する各培地試料に０．５×１０⁶ 個の
細胞／ｍｌで懸濁させた。培養物を２４穴ＴＣプレート
にて０．６６ｍｌ／穴１個の割合で薬剤中に１晩培養し
た（約９時間）。ウイルス ：約１０⁵ 感染単位／ｍｌの力価を有するＰＨ
Ａ（フィトヘマグルチニンＡ）芽細胞にて作成したＨＴ
ＬＶ III／ＬＡＶを１０μｌの量で０．６６ｍｌの培養
物へ添加した。ＰＨＡはリンパ球を刺戟して増殖させ、
かつ芽球化を行なった。感染中心を形成する１０００単
位を各薬剤濃度の重複穴部に添加した。細胞対照は、各
薬剤濃度にて模擬感染させた。分析 ：感染してから７日目かつ薬剤処理してから８日目
に、培養物を細胞変性効果につき肉眼検査し、かつエア
ロソルブ・キャニスタを用いてＴＪ６遠心分離機で１２
００ｒｐｍにて遠心分離することにより個々に収穫し
た。これらの細胞を２００μｌのＰＢＳに再懸濁させ
た。各重複物からそれぞれ２０μｌを集め、かつトリパ
ンブルー排除法を用いて生存性につき染色した。各重複
物のそれぞれ２０μｌを複数穴のスライドにスポット
し、乾燥させかつアセトン固定して蛍光測定した。蛍光分析 ：アセトン固定した細胞をモノクローナル抗体
αｐ１８（モノクローナル抗体αｐ１８はＨＴＬＶ III
ウイルスに向けられる）によって染色し、このモノクロ
ーナル抗体はモノクローナル希釈剤に直接結合されると
共に、これに加えられたエバンスブルー対比染料を含有
した。細胞カウント数は各薬剤濃度につき各重複物から
の１視野を反映する。

【００２６】結論：表２のデータは、２’，３’−ジデ
オキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン（２’，３’
−ジデオキシシチジン−２’−エン）がＨＴＬＶ III／
ＬＡＶ感染に対しインビトロで抗ウイルス活性を示し、
かつ有効投与量が２’，３’−ジデオキシシチジンと同
じ範囲であることを示している。

【表２】

【００２７】Ｂ．逆転写酵素分析 次の刊行物は逆転写酵素分析を記載している：Ａ．Ｍ．
プリンス、Ｂ．ホロビッツ、Ｈ．ジヒテルミューラ、
Ｗ．ステファン及びＲ．Ｃ．ガロ、カンサー・リサーチ
（補遺）、第４５巻、第４５９２Ｓ頁（１９８５）；
Ｔ．Ｓ．サリン、Ｙ．タグチ、Ｓ．デイジー、Ａ．ソー
ントン、Ｒ．Ｃ．ガロ及びＢ．オベルグ、バイオケミカ
ル・ファーマコロジー、第３４巻、第４０７５頁（１９
８５）；及びベセスダ・リサーチ・ラボラトリーのカタ
ログ及び刊行物案内、第１７頁（１９８５）。

【００２８】この方法は、感染したミトゲン刺戟のヒト
末梢血液単核細胞におけるヒト免疫不全症ウイルス（Ｈ
ＩＶ若しくはＨＴＬＶ III／ＬＡＶ）に対する化合物の
抗ウイルス活性を測定する。感染してから５日後、ウイ
ルスを遠心分離によって収穫し、かつウイルスペレット
を破壊して逆転写酵素分析にかけた。この分析の結果を
下記表３に示す。

【表３】

【００２９】結論：表３のデータは、２’，３’−ジデ
オキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン（２’，３’
−ジデオキシシチジン−２’−エン）の阻止活性を確認
している。以上、本発明を例示の目的で限定せずに説明
したが、本発明の思想及び範囲を逸脱することなく各種
の改変をなしうることが了解されよう。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）２’，３’−ジデオキシウリジン
   −２’−エンをトリエチルアミンを存在させた溶剤中で
   アセチル化して、対応のアセテートを生成させ、 （ｂ）このアセテートを４−クロルフェニルホスホロジ
   クロリデート及び１，２，４−トリアゾールとピリジン
   中で反応させて４−トリアゾリルピリミジノン誘導体を
   生成させ、 （ｃ）この４−トリアゾリルピリミジノン誘導体をアン
   モニア水溶液及びジオキサンと数時間〜数日間反応さ
   せ、次いで （ｄ）メタノール性アンモニアを添加することを特徴と
   する２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロ
   シチジンの製造方法。
2. 【請求項２】 アセチル化を無水酢酸で行なう請求項１
   記載の方法。
3. 【請求項３】 溶剤がピリジンである請求項１記載の方
   法。
4. 【請求項４】 工程（ｂ）を室温で行なう請求項１記載
   の方法。