JPH08205889A - 光学活性体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】光学活性体の製造法の提供。 【解決手段】式（I） 【化１】 で表わされる化合物のラセミ体に、不斉加水分解する能
力を有する微生物の培養物またはその処理物を接触させ
ることを特徴とする、上記化合物の光学活性体の製造
法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、光学活性体の製造
法に関する。とりわけ、コレステロール低下作用及びト
リグリセライド低下作用などを有し、高脂血症治療薬と
して有用な化合物の光学活性体に関する。

【０００２】

【従来の技術】右旋性および左旋性の光学異性体の混合
物質から一方の光学異性体を光学的に分割することは、
通常強い薬効を有するのは右旋性物質（ｄ体）および左
旋性物質（ｌ体）のいずれか一方である場合が多いこと
から、実用上価値が高い。また、原薬のように光学的な
高純度が要求される場合には、高効率で右旋性物質およ
び左旋性物質を光学的に分割することが望ましい。一
方、ＥＰＡ５６７０２６，ＷＯ９５／２１８３４（特願
平６−１５５３１号に基づく出願）、ＥＰＡ６４５３７
７（特願平６−２２９１５９号に基づく出願），ＥＰＡ
６４５３７８（特願平６−２２９１６０号に基づく出
願）には、スクアレン合成酵素阻害作用を有し、コレス
テロール低下剤として有用な化合物が記載されている。
これらの化合物の光学活性体を、微生物を用いる等して
酵素的に有利に得る方法は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、コレ
ステロール低下剤及びトリグリセライド低下剤等の高脂
血症治療剤として有用な化合物の光学活性体を効率的に
得る方法を提供することである。本発明は、一般式
（I）

【化４】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
素基を、Ｒ₂およびＲ₃は同一または異なって水素，置換
されていてもよい炭化水素基あるいは置換されていても
よい芳香族複素環基を、Ｘ'はエステル化されたカルボ
キシル基あるいはアシル化された水酸基を有する置換基
を、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環または置換
されていてもよい芳香族複素環を、環Ｊ'は環構成原子
として３個以下のヘテロ原子を含有する７ないし８員の
複素環を、環Ｊ'はＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｘ'以外にさらに置
換基を有していてもよい。Ｃ*は不斉炭素原子を示す〕
で表わされる化合物の光学活性体を得るための効率的な
製造法を提供するものである。また、該製造法は、工業
的かつ安価な方法である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、式

【化５】 〔式中、環Ｍは環構成原子として不斉炭素を有する複素
環を、Ｒは置換基を、Ｃ*は不斉炭素原子を示す〕で表
される、環を構成する不斉炭素に結合する酢酸エステル
を、微生物を用いて光学分割することが可能ではないか
と考え、鋭意研究を重ねた結果、該酢酸エステルに、不
斉加水分解する能力を有する微生物の培養物またはその
処理物を接触させることによって、該エステルが不斉加
水分解され、目的とする光学活性体を効率的に生産させ
ることができることを見いだし、本発明を完成した。

【０００５】すなわち、本発明は （１）式（I）

【化６】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
素基を、Ｒ₂およびＲ₃は同一または異なって水素，置換
されていてもよい炭化水素基あるいは置換されていても
よい芳香族複素環基を、Ｘ'はエステル化されたカルボ
キシル基あるいはアシル化された水酸基を有する置換基
を、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環または置換
されていてもよい芳香族複素環を、環Ｊ'は環構成原子
として３個以下のヘテロ原子を含有する７ないし８員の
複素環を、環Ｊ'はＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃及びＸ'以外にさらに
置換基を有していてもよい。Ｃ*は不斉炭素原子を示
す〕で表わされる化合物を、酵素的不斉加水分解反応に
付すことを特徴とする式（I）の化合物の光学活性体の
製造法、（２）酵素的不斉加水分解反応を、不斉加水分
解する能力を有する微生物の培養物またはその処理物と
接触させることにより行う上記（１）記載の光学活性体
の製造法、（３）式（I）で表わされる化合物の光学活
性体を分離することを特徴とする上記（１）記載の製造
法、

【０００６】（４）式（I）で表される化合物が式

【化７】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
素基を、Ｒ₂およびＲ₃は同一または異なって水素，置換
されていてもよい炭化水素基あるいは置換されていても
よい芳香族複素環基を、Ｚ₂はＳ(Ｏ)_q（ｑは０，１もし
くは２を示す）またはＯを、Ｘは結合手または２価の原
子鎖を、Ｙはエステル化されたカルボキシル基またはア
シル化された水酸基を、環Ｂは置換されていてもよいベ
ンゼン環を示す〕で表わされる化合物である上記（１）
記載の製造法、（５）式（I）で表される化合物が式

【化８】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
素基を、Ｙ₁はエステル化されたカルボキシル基を、環
Ｂは置換されていてもよいベンゼン環を、環Ｃは置換さ
れていてもよいベンゼン環を示す〕で表わされる化合物
である上記（１）記載の製造法、

【０００７】（６）微生物が細菌または糸状菌である上
記（２）記載の製造法、（７）細菌がシュードモナス
（Pseudomonas）属またはバチルス（Bacillus）属に属
する微生物である上記（６）記載の製造法、（８）シュ
ードモナス属に属する微生物が、シュードモナス・テト
ロレンス（Pseudomonas taetrolens），シュードモナス
・ディミヌタ（Pseudomonas diminuta），シュードモナ
ス・エアルギノサ（Pseudomonas aeruginosa）またはシ
ュードモナス・ベシクラリス（Pseudomonas vesiculari
s）である上記（７）記載の製造法、（９）シュードモ
ナス属に属する微生物が、シュードモナス・テトロレン
スＩＦＯ１２６９１，シュードモナス・ディミヌタＩＦ
Ｏ１３１８２，シュードモナス・エアルギノサＩＦＯ３
９２３またはシュードモナス・ベシクラリスＩＦＯ１２
１６５である上記（７）記載の製造法、（１０）バチル
ス属に属する微生物が、バチルス・サチルス（Bacillus
subtilis）である上記（７）記載の製造法、（１１）
バチルス属に属する微生物が、バチルス・サチルスＩＦ
Ｏ３０２６である上記（７）記載の製造法、（１２）糸
状菌がフミコラ（Humicola）属またはリゾパス（Rhizop
us）属に属する微生物である上記（６）記載の製造法、
（１３）フミコラ属に属する微生物が、フミコラ・ラヌ
ギノサ（Humicola lanuginosa）である上記（１２）記
載の製造法、（１４）リゾパス属に属する微生物が、リ
ゾパス・デレマー（Rhizopus delemer）である上記（１
２）記載の製造法である。

【０００８】本発明においては、化合物（I）に、微生
物の培養物またはその処理物を接触させ、光学活性体を
得る。式（I）で表わされる化合物は、式（Ia）

【化９】 〔式中、各記号は前記と同意義である〕で表わされる化
合物および式（Ib）

【化１０】 〔式中、各記号は前記と同意義である〕で表される化合
物の混合物（ラセミ体）である。式（Ia）および（Ib）
で表わされる化合物はいずれも光学活性体であり、
（Ｒ）はＲ−配置を、（Ｓ）はＳ−配置を示す。

【０００９】以下、本発明を更に詳細に説明する。式
（I）〔（Ia），（Ib）を含む〕，（II）および（III）
において、Ｒ₁で示される「置換されていてもよい炭化
水素基」の炭化水素基としては、脂肪族鎖式（非環状）
炭化水素基、脂環式炭化水素基およびアリール基などが
挙げられるが、なかでも脂肪族鎖式炭化水素基が好まし
い。 該炭化水素基の脂肪族鎖式（非環式）炭化水素基として
は、直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基、例え
ば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基などが挙
げられる。なかでも分枝状アルキル基が好ましい。該ア
ルキルとしては、例えばメチル，エチル，ｎ−プロピ
ル，イソプロピル，ｎ−ブチル，イソブチル，sec−ブ
チル，tert−ブチル，ｎ−ペンチル，イソペンチル，ネ
オペンチル，１−メチルプロピル，ｎ−ヘキシル，イソ
ヘキシル，１,１−ジメチルブチル，２,２−ジメチルブ
チル，３,３−ジメチルブチル，３,３−ジメチルプロピ
ル，２−エチルブチル，ｎ−ヘプチルなどのＣ_1-7アル
キルが挙げられ、なかでも、ｎ−プロピル，イソプロピ
ル，イソブチル，ネオペンチルなどのＣ_3-5アルキルが
好ましく、特にイソブチル，ネオペンチルなどが好まし
い。該アルケニル基としては、例えば、ビニル、アリ
ル、イソプロペニル、２−メチルアリル、１−プロペニ
ル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プ
ロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニ
ル、２−エチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテ
ニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２
−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−
メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセ
ニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニ
ル等のＣ_2-6アルケニルが挙げられ、なかでも、ビニ
ル、アリル、イソプロペニル、２−メチルアリル、２−
メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニ
ル、３−メチル−２−ブテニル等が特に好ましい。該ア
ルキニル基としては、例えば、エチニル、１−プロピニ
ル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３
−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペ
ンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキ
シニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシ
ニル等のＣ_2-6アルキニルが挙げられ、中でもエチニ
ル、１−プロピニル、２−プロピニル等が特に好まし
い。

【００１０】該炭化水素基の脂環式炭化水素基として
は、飽和または不飽和の脂環式炭化水素基、例えば、シ
クロアルキル基、シクロアルケニル基、シクロアルカジ
エニル基等が挙げられる。該シクロアルキル基としては
炭素数３〜９個のシクロアルキル基が好ましく、例え
ば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、
シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シ
クロノニル等が挙げられ、中でも、シクロプロピル、シ
クロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のＣ
_3-6シクロアルキル基が好ましい。該シクロアルケニル
基としては、例えば、２−シクロペンテン−１−イル、
３−シクロペンテン−１−イル、２−シクロヘキセン−
１−イル、３−シクロヘキセン−１−イル、１−シクロ
ブテン−１−イル、１−シクロペンテン−１−イル等の
Ｃ_3-6シクロアルケニルが挙げられる。該シクロアルカ
ジエニル基としては、例えば、２,４−シクロペンタジ
エン−１−イル、２，４−シクロヘキサジエン−１−イ
ル、２，５−シクロヘキサジエン−１−イルなどのＣ
_3-6シクロアルカジエニルが挙げられる。該炭化水素基
のアリール基としては、炭素数６〜１６の単環式または
縮合多環式芳香族炭化水素基が挙げられ、例えば、フェ
ニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル、アセナ
フチレニル等が挙げられ、なかでもフェニル、１−ナフ
チル、２−ナフチル等のＣ_6-10のアリール基が特に好ま
しい。

【００１１】Ｒ₁で示される「置換されていてもよい炭
化水素基」の置換基としては、置換されていてもよいア
リール基、置換されていてもよいシクロアルキル基もし
くはシクロアルケニル基、置換されていてもよい複素環
基、置換されていてもよいアミノ基、置換されていても
よい水酸基、置換されていてもよいチオール基、ハロゲ
ン（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、オキソ等が挙
げられ、該炭化水素基はこれらの任意の置換基で置換可
能な位置に１〜５個（好ましくは１〜３個）置換されて
いてもよい。該置換されていてもよいアリール基のアリ
ール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フ
ェナントリル、アセナフチレニル等のＣ_6-16アリール基
が挙げられ、なかでもフェニル、１−ナフチル、２−ナ
フチル等のＣ_6-10のアリール基が好ましい。該置換され
ていてもよいアリールの置換基としては、炭素数１〜３
個のアルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、プロポキ
シ等）、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ
素）、炭素数１〜３個のアルキル基（例、メチル、エチ
ル、プロピル等）等が挙げられ、該アリール基はこれら
の任意の置換基で１〜２個置換されていてもよい。該置
換されていてもよいシクロアルキル基のシクロアルキル
基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペ
ンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等のＣ_3-7シ
クロアルキル基等が挙げられる。該置換されていてもよ
いシクロアルキル基の置換基とその置換数としては、前
記置換されていてもよいアリール基における置換基と同
様な種類と個数が挙げられる。該置換されていてもよい
シクロアルケニル基のシクロアルケニル基としては、シ
クロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、
シクロヘキセニル等のＣ_3-6シクロアルケニル基等が挙
げられる。該置換されていてもよいシクロアルケニル基
の置換基とその置換数としては、前記置換されていても
よいアリール基における置換基と同様な種類と個数が挙
げられる。該置換されていてもよい複素環基の複素環基
としては、ともに環系を構成する原子（環原子）とし
て、酸素、硫黄、窒素のうち少なくとも１個，好ましく
は１〜４個のヘテロ原子をもつ芳香族複素環基及び、飽
和あるいは不飽和の非芳香族複素環基（脂肪族複素環
基）が挙げられるが、好ましくは芳香族複素環基であ
る。該芳香族複素環基としては、芳香族単環式複素環基
（例、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イ
ソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダ
ゾリル、ピラゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、
１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−オキサジアゾ
リル、フラザニル、１,２,３−チアジアゾリル、１,２,
４−チアジアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、１,
２,３−トリアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、テト
ラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピ
ラジニル、トリアジニル等）及び５〜８員環が２〜３個
縮合した芳香族縮合複素環基（例：ベンゾフラニル、イ
ソベンゾフラニル、ベンゾ〔ｂ〕チエニル、インドリ
ル、イソインドリル、１Ｈ−インダゾリル、ベンズイミ
ダゾリル、ベンゾオキサゾリル、１,２−ベンゾイソオ
キサゾリル、ベンゾチアゾリル、１,２−ベンゾイソチ
アゾリル、１Ｈ−ベンゾトリアゾリル、キノリル、イソ
キノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニ
ル、フタラジニル、ナフチリジニル、プリニル、プテリ
ジニル、カルバゾリル、α−カルボリニル、β−カルボ
リニル、γ−カルボリニル、アクリジニル、フェノキサ
ジニル、フェノチアジニル、フェナジニル、フェノキサ
チイニル、チアントレニル、フェナトリジニル、フェナ
トロリニル、インドリジニル、ピロロ〔１,２−ｂ〕ピ
リダジニル、ピラゾロ〔１,５−ａ〕ピリジル、イミダ
ゾ〔１,２−ａ〕ピリジル、イミダゾ〔１,５−ａ〕ピリ
ジル、イミダゾ〔１,２−ｂ〕ピリダジニル、イミダゾ
〔１,２−ａ〕ピリミジニル、１,２,４−トリアゾロ
〔４,３−ａ〕ピリジル、１,２,４−トリアゾロ〔４,３
−ｂ〕ピリダジニル等）が挙げられるが、なかでもフリ
ル、チエニル、インドリル、イソインドリル、ピラジニ
ル、ピリジル、ピリミジニルなどの５〜６員芳香族単環
式複素環基が好ましい。該非芳香族複素環基としては、
例えば、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、
チエタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフリル、チオ
ラニル、ピペリジル、テトラヒドロピラニル、モルホリ
ニル、チオモルホリニル、ピペラジニル等４〜８員非芳
香族複素環基が挙げられる。該置換されていてもよい複
素環基は１〜４個、好ましくは１〜２個の置換基を有し
ていてもよく、このような置換基としては、炭素数１〜
３個のアルキル基（例：メチル、エチル、プロピル等）
等が挙げられる。該置換されていてもよいアミノ基（ア
ミノ基、モノ−又はジ−置換アミノ基が含まれる）、置
換されていてもよい水酸基、及び置換されていてもよい
チオール基における置換基としては、例えば低級（Ｃ
_1-3）アルキル（例、メチル、エチル、プロピル等）等
が挙げられる。また、Ｒ₁で表わされる置換されていて
もよい炭化水素基における炭化水素基が脂環式炭化水素
基又はアリール基である場合、置換基としては、さらに
炭素数１〜３個のアルキル基（例、メチル，エチル，プ
ロピルなど）でもよい。さらに、上述のように、Ｒ₁は
オキソ基を置換基として有していてもよく、このような
オキソ基で置換された炭化水素基であるカルボン酸アシ
ル基もＲ₁に含まれる。このような例としては例えば置
換基を有していてもよい炭素数１〜６のアシル基（例、
フォルミル，アセチル，プロピオニル，ブチリル，イソ
ブチリル，バレリル，イソバレリル，ピバロイル，ヘキ
サノイル，ジメチルアセチル，トリメチルアセチルな
ど）が挙げられる。また該アシル基は、置換可能な位置
に１〜５個の置換基を有していてもよく、該置換基とし
ては、ハロゲン（例、フッ素，塩素，臭素）が挙げられ
る。

【００１２】式（I）および（II）において、Ｒ₂および
Ｒ₃で示される「置換されていてもよい炭化水素基」の
炭化水素基としては、脂肪族鎖式炭化水素基、脂環式炭
化水素基およびアリール基などが挙げられるが、なかで
も脂肪族鎖式炭化水素基およびアリール基が好ましい。
該炭化水素基の脂肪族鎖式炭化水素基としては、直鎖状
または分子鎖状の脂肪族炭化水素基、例えば、アルキル
基、アルケニル基、アルキニル基などが挙げられる。な
かでもアルキル基が好ましい。該アルキルとしては、例
えばメチル，エチル，ｎ−プロピル，イソプロピル，ｎ
−ブチル，イソブチル，sec−ブチル，tert−ブチル，
ｎ−ペンチル，イソペンチル，ネオペンチル，１−メチ
ルプロピル，ｎ−ヘキシル，イソヘキシル，１，１−ジ
メチルブチル，２，２−ジメチルブチル，３，３−ジメ
チルブチル，３，３−ジメチルプロピル，２−エチルブ
チルなどのＣ_1-6アルキルが挙げられ、なかでも、メチ
ル，エチル，プロピル，イソプロピル，イソブチル，ブ
チル，ｔ−ブチルなどのＣ_1-4アルキルが好ましい。該
アルケニル基としては、例えば、ビニル、アリル、イソ
プロペニル、２−メチルアリル、１−プロペニル、２−
メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニ
ル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−
エチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、３
−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテ
ニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−
３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３
−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル等のＣ
_2-6アルケニルが挙げられ、なかでも、ビニル、アリ
ル、イソプロペニル、２−メチルアリル、２−メチル−
１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−メ
チル−２−ブテニル等Ｃ_2-4アルケニルが特に好まし
い。該アルキニル基としては、例えば、エチニル、１−
プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチ
ニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニ
ル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニ
ル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニ
ル、５−ヘキシニル等のＣ_2-6アルキニルが挙げられ、
中でもエチニル、１−プロピニル、２−プロピニル等Ｃ
_2-3アルキニルが特に好ましい。

【００１３】該炭化水素基の脂環式炭化水素基として
は、前記Ｒ₁で詳述されている脂環式炭化水素基と同様
なものが挙げられる。該炭化水素基のアリール基として
は、単環式または縮合多環式芳香族炭化水素基が挙げら
れ、例えば、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナ
ントリル、アセナフチレニル等Ｃ_6-16アリール基が挙げ
られ、なかでもフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル
等Ｃ_6-10アリール基が特に好ましい。Ｒ₂およびＲ₃で示
される「置換されていてもよい炭化水素基」の置換基と
しては、前記Ｒ₁で示される「置換されていてもよい炭
化水素基」の置換基で挙げられたものと同様なものが挙
げられ、このような置換基を、通常１〜４個、好ましく
は１〜２個有していてもよい。Ｒ₂およびＲ₃が「置換さ
れていてもよいアルキル基」である場合、該置換されて
いてもよいアルキル基の置換基としては、好ましくは、
ハロゲン（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、炭素数
１〜４個の低級アルコキシ基（例、メトキシ、エトキ
シ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブト
キシ等）等が挙げられる。

【００１４】Ｒ₂およびＲ₃が「置換されていてもよいア
リール基」である場合、該アリール基の置換基として
は、好ましくは、ハロゲン（例、フッ素、塩素、臭素、
ヨウ素など），置換されていてよい低級アルキル，置換
されていてよい低級アルコキシ，置換されていてもよい
水酸基，ニトロ，シアノなどが挙げられ、これらの置換
基の同一又は異なる１〜３個（好ましくは１〜２個）で
置換されていてもよい。該低級アルキルとしては、例え
ば、メチル，エチル，ｎ−プロピル，イソプロピル，ｎ
−ブチル，イソブチル，sec−ブチル，tert−ブチル等
の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられるが、特にメチ
ル，エチルが好ましい。該低級アルコキシとしては、メ
トキシ，エトキシ，ｎ−プロポキシ，イソプロポキシ，
ｎ−ブトキシ，イソブトキシ，sec−ブトキシ，tert−
ブトキシ等の炭素数１〜４のアルコキシ基が挙げられる
が、特にメトキシ，エトキシが好ましい。該置換されて
いてもよい低級アルキル基又は置換されていてもよい低
級アルコキシ基の置換基としては、ハロゲン原子（例、
フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等）等が挙げられ、任意の
位置に１〜５個置換されていてもよい。該置換されてい
てもよい水酸基における置換基としては、例えば低級
（Ｃ_1-4）アルキル基（例、メチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル等）、Ｃ_3-6シ
クロアルキル基（シクロプロピル、シクロブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル等）、Ｃ_6-16アリール基
（例、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル等）、Ｃ
_7-14アラルキル基（例、ベンジル、フェネチルなど）な
どが挙げられる。また、これらの置換基は、隣接する置
換基同志で環を形成していてもよく、例えば、Ｒ₂また
はＲ₃で表される「置換されていてもよいアリール基」
のアリール基がフェニルである場合、

【化１１】 で示されるものが挙げられ、さらに該環は低級
（Ｃ_1-3）アルキル基（例、メチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル等）などで１〜４個置換されていても
よい。

【００１５】Ｒ₂およびＲ₃で示される「置換されていて
もよい芳香族複素環基」の芳香族複素環基としては、Ｒ
₁で表される置換されていてもよい炭化水素基の置換基
として詳述されている芳香族複素環基が挙げられるが、
なかでもフリル，チエニル，インドリル，イソインドリ
ル，ピラジニル，ピリジル，ピリミジル，イミダゾリル
などの、Ｏ，Ｓ，Ｎのヘテロ原子を１〜２個環構成原子
として含む５〜６員芳香族単環式複素環が好ましい。該
芳香族複素環基の置換基としては、炭素数１〜３個のア
ルキル（例、メチル，エチル，プロピルなど）などが挙
げられ、これらを１〜４個有していてもよい。Ｒ₂およ
びＲ₃のいずれか一方は水素が好ましい。上記した中で
も、Ｒ₂およびＲ₃としては、いずれか一方が置換されて
いてもよいフェニル基が好ましく、さらに好ましくは、
置換されたフェニル基、特に、塩素、臭素等のハロゲ
ン，低級（Ｃ_1-3）アルコキシなどで置換されたフェニ
ル基が好ましく、他方は水素が好ましい。

【００１６】式（I）において、Ｘ'で示される「エステ
ル化されたカルボキシル基を有する置換基」としては、
エステル化されたカルボキシル基を置換基として有する
置換基およびエステル化されたカルボキシル基が挙げら
れる。該エステル化されたカルボキシル基としては、下
記Ｙで定義されるエステル化されたカルボキシル基で挙
げられるものと同様なものが挙げられる。Ｘ'で示され
る「アシル化された水酸基を有する置換基」としては、
アシル化された水酸基を置換基として有する置換基およ
びアシル化された水酸基が挙げられる。該アシル化され
た水酸基としては、下記Ｙで定義されるアシル化された
水酸基で挙げられるものと同様なものが挙げられる。

【００１７】Ｘ'としては、例えば、式（a）

【化１２】 〔式中、Ｘは結合手または２価の原子鎖を、Ｙはエステ
ル化されたカルボキシル基，アシル化された水酸基を示
す〕で表される基が挙げられる。

【００１８】式（a）中、Ｘで示される「２価の原子
鎖」としては、好ましくは、直鎖部分を構成する原子数
が１〜７個、さらに好ましくは１〜４個である２価の鎖
であればいずれでもよく、側鎖を有していてもよい。本
発明の不斉加水分解すなわち酵素的光学対掌体選択的加
水分解の効率の点からは、特にＸは原子数１〜２個であ
る２価の鎖が好ましい。例えば、

【化１３】 で表わされるものが挙げられ、式中、ｍ、ｎは独立して
０、１、２又は３を表わし、Ｅは結合手または酸素原
子、イオウ原子、スルホキシド、スルホン、−Ｎ(Ｒ₅)
−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮ(Ｒ₆)−あるいは−ＮＨＣ
ＯＮＨ−を表わす。ここでＲ₄及びＲ₆は水素、置換され
ていてもよい低級アルキル基、置換されていてもよいア
ラルキル基、置換されていてもよいフェニル基を示す。
また、Ｒ₅は水素、低級アルキル基、アラルキル基又は
アシル基を示す。Ｒ₄及びＲ₆で示される「置換されてい
てもよい低級アルキル基」のアルキル基としては、炭素
数１〜６個の直鎖もしくは分枝状の低級アルキル基
（例：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、
ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペン
チル、イソペンチル、ネオペンチル等）が挙げられる。
該置換されていてもよい低級アルキル基は、１〜４個，
好ましくは１〜２個置換基を有していてもよく、これら
の置換基としては、芳香族複素環基（例、フリル、チエ
ニル、インドリル、イソインドリル、ピラジニル、ピリ
ジル、ピリミジル、イミダゾリルなどＮ，Ｏ，Ｓのヘテ
ロ原子を１〜４個含む５〜６員芳香族複素環）、置換さ
れていてもよいアミノ基、置換されていてもよい水酸
基、置換されていてもよいチオール基、エステル化され
ていてもよいカルボキシル基、ハロゲン原子（例、フッ
素、塩素、臭素、ヨウ素）などが挙げられる。該置換さ
れていてもよいアミノ基（アミノ基又はモノ−又はジ−
置換アミノ基）、置換されていてもよい水酸基、及び置
換されていてもよいチオール基における置換基として
は、低級（Ｃ_1-3）アルキル（例、メチル、エチル、プ
ロピルなど）などが挙げられる。該エステル化されてい
てもよいカルボキシル基としては、例えばメトキシカル
ボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、
フェノキシカルボニル、１−ナフトキシカルボニルなど
Ｃ_2-5アルコキシカルボニル及びＣ_7-11アリールオキシ
カルボニルが挙げられるが、好ましくはメトキシカルボ
ニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニルであ
る。

【００１９】Ｒ₄及びＲ₆で示される「置換されていても
よいアラルキル基」のアラルキル基としてはベンジル、
ナフチルメチル、フェニルプロピル、フェニルブチル等
Ｃ_7-15アラルキル基が挙げられる。該置換されていても
よいアラルキル基は１〜４個好ましくは１〜２個の置換
基をもっていてもよく、これらの置換基としては、ハロ
ゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、炭素数
１〜３個のアルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、プ
ロポキシ基）、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、ス
ルフヒドリル基等が挙げられる。Ｒ₄及びＲ₆で示される
「置換されていてもよいフェニル基」の置換基として
は、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ
素）、Ｃ_1-3アルコキシ（例、メトキシ、エトキシ、プ
ロポキシなど）、Ｃ_1-3アルキル（例、メチル、エチ
ル、プロピル）などが挙げられる。ただし、Ｒ₄はメチ
レン鎖ごとに異なっていてもよい。また、Ｒ₅で示され
る「低級アルキル基」及び「アラルキル基」としては、
炭素数１〜４個の低級アルキル基（例、メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等）、炭素数
７〜１５個のアラルキル基（例、ベンジル、フェネチ
ル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ナフチルメチ
ル等）が挙げられる。

【００２０】Ｒ₅で示される「アシル基」としては、低
級（Ｃ_1-6）アルカノイル基（例、ホルミル、アセチ
ル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリ
ル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイルなど）、
低級（Ｃ_3-7）アルケノイル基（例、アクリロイル、メ
タクリロイル、クロトノイル、イソクロトノイルな
ど）、Ｃ_4-7シクロアルカンカルボニル基（例、シクロ
プロパンカルボニル基、シクロブタンカルボニル基、シ
クロペンタンカルボニル基、シクロヘキサンカルボニル
基など）、低級（Ｃ_1-4）アルカンスルホニル基（例、
メシル、エタンスルホニル、プロパンスルホニルな
ど）、アロイル基（例、ベンゾイル、ｐ−トルオイル、
１−ナフトイル、２−ナフトイルなど）、Ｃ_6-10アリー
ル低級（Ｃ_2-4）アルカノイル基（例、フェニルアセチ
ル、フェニルプロピオニル、ヒドロアトロポイル、フェ
ニルブチリルなど）、Ｃ_6-10アリール低級（Ｃ_3-5）ア
ルケノイル基（例、シンナモイル、アトロポイルな
ど）、Ｃ_6-10アレーンスルホニル基（例、ベンゼンスル
ホニル、ｐ−トルエンスルホニル基など）などが挙げら
れる。

【００２１】さらに、Ｘとしては、二重結合を含んでい
る炭素鎖または−Ｌ−ＣＨ(ＯＨ)−（Ｌは結合手または
直鎖状もしくは分枝状のアルキレン鎖を示す）でもよ
い。該「二重結合を含んでいる炭素鎖」としては、好ま
しくは、直鎖部分を構成する炭素数が２〜７個、さらに
好ましくは２〜４個であるものが挙げられ、側鎖を有し
ていてもよい。該炭素鎖における二重結合は、直鎖部分
あるいは分枝鎖部分のいずれか一方または両方に含まれ
るものであるが、好ましくは直鎖部分に含まれるものが
挙げられる。また、該炭素鎖に含まれる二重結合の数は
可能な限り特に限定されないが、１〜２個が好ましい。
該二重結合を含んでいる炭素鎖としては、例えば、ビニ
レン，プロペニレン，ブテニレン，ブタジエニレン，メ
チルプロペニレン，エチルプロペニレン，プロピルプロ
ペニレン，メチルブテニレン，エチルブテニレン，プロ
ピルブテニレン，メチルブタジエニレン，エチルブタジ
エニレン，プロピルブタジエニレン，ペンテニレン，ヘ
キセニレン，ヘプテニレン，ペンタジエニレン，ヘキサ
ジエニレン，ヘプタジエニレンなどが挙げられるが、好
ましくは、ビニレン，プロペニレン，ブテニレン，ブタ
ジエニレンが挙げられる。Ｌで示される「直鎖状もしく
は分枝状のアルキレン鎖」としては、例えば、直鎖状も
しくは分枝状の炭素数１〜６個のアルキレン鎖が挙げら
れ、例えば、メチレン，エチレン，トリメチレン，テト
ラメチレン，ペンタメチレン，ヘキサメチレン，ヘプタ
メチレン，プロピレン，エチルメチレン，エチルエチレ
ン，プロピルエチレン，ブチルエチレン，メチルテトラ
メチレン，メチルトリメチレンなどの２価基が挙げられ
るが、好ましくは、メチレン，エチレン，トリメチレ
ン，プロピレンなどの炭素数１〜３個のものが挙げられ
る。

【００２２】上記した中でも、Ｘ'としては、式（b）

【化１４】 〔式中、Ｙ₁はエステル化されたカルボキシル基を示
す。Ｘは前記と同意義を示す〕で表される基が好まし
い。式（a）および（b）中、Ｘで示される「２価の原子
鎖」としては、好ましくは、直鎖部分を構成する炭素数
が１〜４個（より好ましくは１個）である直鎖状あるい
は分枝鎖状のアルキレン鎖が挙げられる。該アルキレン
鎖としては、例えば、メチレン，エチレン，トリメチレ
ン，テトラメチレン，ペンタメチレン，ヘキサメチレ
ン，ヘプタメチレン，プロピレン，エチルメチレン，エ
チルエチレン，プロピルエチレン，ブチルエチレン，メ
チルテトラメチレン，メチルトリメチレンなどの２価基
が挙げられるが、好ましくは、メチレン，エチレン，ト
リメチレン，プロピレンなどの炭素数１〜４個のものが
挙げられる。

【００２３】式（a）および（b）において、ＹおよびＹ
₁で示される「エステル化されたカルボキシル基」とし
ては、Ｃ_2-7アルコキシカルボニル（例、メトキシカル
ボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、
イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソ
ブトキシカルボニル、tert−ブトキシカルボニル、sec
−ブトキシカルボニル、ペンチルオキシカルボニル、イ
ソペンチルオキシカルボニル、sec−ペンチルオキシカ
ルボニル、ネオペンチルオキシカルボニル、tert−ペン
チルオキシカルボニルなどの（低級(Ｃ_1-6)アルコキ
シ）カルボニルなど）、Ｃ_7-14アリールオキシカルボニ
ル（例、フェノキシカルボニル、１−ナフトキシカルボ
ニル）、Ｃ_8-12アラルキルオキシカルボニル（例、ベン
ジルオキシカルボニルなど）などが挙げられる。なかで
も低級アルコキシカルボニル（好ましくはメトキシカル
ボニル、エトキシカルボニルなど）、フェノキシカルボ
ニル、ベンジルオキシカルボニルが好ましい。

【００２４】Ｙで示される「アシル化された水酸基」と
しては、炭素数１〜６のアシル基（例、フォルミル，ア
セチル，プロピオニル，ブチリル，イソブチリル，バレ
リル，イソバレリル，ピバロイル，ヘキサノイル，ジメ
チルアセチル，トリメチルアセチルなど）で置換された
水酸基が挙げられる。また該アシル基は、置換可能な位
置に１〜５個の置換基を有していてもよく、該置換基と
しては、ハロゲン（例、フッ素，塩素，臭素）などが挙
げられる。上記した中でも、Ｘ'としては、エステル化
されたカルボキシル基で置換されているアルキル基（と
りわけＣ_1-3アルキル基）が好ましい。式（I）におい
て、環Ａで示される芳香族複素環としては、Ｒ₁で詳述
されている芳香族複素環基が挙げられるが、なかでも

【化１５】 で表されるものが好ましい。

【００２５】環Ａで示される「置換されていてもよいベ
ンゼン環」および「置換されていてもよい芳香族複素
環」の置換基としては、ハロゲン（例、フッ素、塩素、
臭素、ヨウ素）、炭素数１〜４個の置換されていてもよ
い低級アルキル基（例、メチル、エチル、プロピル、ブ
チル、tert−ブチル等）、炭素数１〜４個の置換されて
いてもよい低級アルコキシ基（例：メトキシ、エトキ
シ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、tert−ブ
トキシ等）、水酸基、ニトロ基、シアノなどが挙げられ
る。環Ａはこれらの置換基を１〜３個、好ましくは１〜
２個有していてもよい。また、これらの置換基は、隣接
する置換基同志で環を形成してもよい。該置換されてい
てもよい低級アルキル基又は置換されていてもよい低級
アルコキシ基の置換基としては、ハロゲン原子（例、フ
ッ素、塩素、臭素、ヨウ素）等が挙げられ、任意の位置
に１〜３個置換されていてもよい。環Ａとしてはメトキ
シもしくは塩素原子で置換されたものが好ましく、特に
塩素原子で置換されたものが好ましい。式（II）および
（III）において、環Ｂで示される「置換されていても
よいベンゼン環」の置換基としては、ハロゲン（例、フ
ッ素，塩素，臭素，ヨウ素）、炭素数１〜４個の置換さ
れていてもよい低級アルキル基（例、メチル、エチル、
プロピル、ブチル、tert−ブチル等）、炭素数１〜４個
の置換されていてもよい低級アルコキシ基（例：メトキ
シ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキ
シ、tert−ブトキシ等）、水酸基、ニトロ基、シアノな
どが挙げられる。環Ｂはこれらの置換基を１〜３個、好
ましくは１〜２個有していてもよい。また、これらの置
換基は、隣接する置換基同志で環を形成してもよい。該
置換されていてもよい低級アルキル基又は置換されてい
てもよい低級アルコキシ基の置換基としては、ハロゲン
原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）等が挙げら
れ、任意の位置に１〜３個置換されていてもよい。環Ｂ
としてはメトキシもしくは塩素原子で置換されたものが
好ましく、特に塩素原子で置換されたものが好ましい。

【００２６】式（I）において、環Ｊ'で示される「環構
成原子として３個以下のヘテロ原子を含有する７ないし
８員の複素環」における複素環としては、例えば、Ｏ，
Ｓ(Ｏ)_q（ｑは０，１または２を示す）およびＮのうち
の少なくとも１個を含む７〜８員の飽和もしくは不飽和
（好ましくは飽和）の複素環が挙げられる。ただし、該
複素環の環を構成する原子（環構成原子）におけるヘテ
ロ原子は３個以下（好ましくは２個）である。また、環
Ｊ'は、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｘ'で示される基以外に、さら
に置換基を置換可能な位置に、１〜２個有していてもよ
い。該置換基としては、該置換基が環Ｊ'上の窒素原子
に結合する場合、アルキル基（例、メチル，エチル，ｎ
−プロピル，イソプロピル，ｎ−ブチル，イソブチル，
tert−ブチル，ｎ−ペンチル，イソペンチル，ネオペン
チル等のＣ_1-6アルキルなど），アシル基（例、フォル
ミル，アセチル，プロピオニル，ブチロイル等のＣ_1-4
アシル基）などが挙げられる。該アルキル基またはアシ
ル基は、さらにハロゲン原子（例、フッ素，塩素，臭
素，ヨウ素）で１〜５個置換されていてもよい。また、
該置換基が環Ｊ'上の炭素原子に結合する場合、該置換
基としては、オキソ，チオキソ，置換されていてもよい
水酸基（例、ＯＨ，メトキシ，エトキシ，プロポキシ，
イソプロポキシ，プロペニルオキシ，アリルオキシ，ブ
トキシ，イソブトキシ，sec−ブトキシ，t−ブトキシ，
２−ブテニルオキシ，３−ブテニルオキシ，イソブテニ
ルオキシ，ペントキシ，イソペントキシ，ヘキシルオキ
シなど），置換されていてもよいアミノ基（例、アミ
ノ，メチルアミノ，エチルアミノ，プロピルアミノ，プ
ロペニルアミノ，イソプロピルアミノ，アリルアミノ，
ブチルアミノ，イソブチルアミノ，ジメチルアミノ，メ
チルエチルアミノなど）などが挙げられる。環Ｊ'とし
ては、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｘ'で示される基以外に、置換可
能な位置に、オキソまたはチオキソが置換しているもの
が好ましい。

【００２７】環Ａと環Ｊ'とからなる縮合環としては、
例えば

【化１６】 などが挙げられる。

【００２８】式（I）としては、式（IA）

【化１７】 〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｘ'，環Ａは前記と同意義を示
す。環Ｊ₁は７員の複素環を、Ｚ₁は−Ｎ(Ｒ₇)−（Ｒ₇は
水素，アルキル基またはアシル基を示す），−Ｓ(Ｏ)_q
−（ｑは０，１または２を示す），−ＣＨ₂−または−
Ｏ−を、ＧはＯまたはＳを示す〕で表わされるものが好
ましい。

【００２９】上記式（IA）中、Ｒ₇で示されるアルキル
基としては、炭素数１〜６個の直鎖もしくは分枝状の低
級アルキル基（例、メチル，エチル，ｎ−プロピル，イ
ソプロピル，ｎ−ブチル，イソブチル，tert−ブチル，
ｎ−ペンチル，イソペンチル，ネオペンチルなど）が挙
げられ、ハロゲン原子（例、フッ素，塩素，臭素，ヨウ
素）などで１〜５個置換されていてもよい。Ｒ₇で示さ
れるアシル基としては、Ｃ_1-4アシル基（例、フォルミ
ル，アセチル，プロピオニル，ブチロイルなど）が挙げ
られ、ハロゲン原子（例、フッ素，塩素，臭素，ヨウ
素）などで１〜５個置換されていてもよい。式（IA）
中、Ｚ₁としては、Ｓ(Ｏ)_q（ｑは０，１または２を示
す），Ｏが好ましい。またＧとしてはＯが好ましい。式
（IA）としては、さらに好ましくは、式（II）

【化１８】 〔式中、各記号は前記と同意義である〕で表わされるも
のが好ましい。

【００３０】式（II）としては、式（III）

【化１９】 〔式中、各記号は前記と同意義である〕で表されるもの
が特に好ましい。式（III）中、環Ｃで示される「置換
されていてもよいベンゼン環」の置換基としては、ハロ
ゲン（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素など），置換さ
れていてよい低級アルキル，置換されていてよい低級ア
ルコキシ，置換されていてもよい水酸基，ニトロ，シア
ノなどが挙げられ、これらの置換基の同一又は異なる１
〜３個（好ましくは１〜２個）で置換されていてもよ
い。該低級アルキルとしては、例えば、メチル，エチ
ル，ｎ−プロピル，イソプロピル，ｎ−ブチル，イソブ
チル，sec−ブチル，tert−ブチル等の炭素数１〜４の
アルキル基が挙げられるが、特にメチル，エチルが好ま
しい。該低級アルコキシとしては、メトキシ，エトキ
シ，ｎ−プロポキシ，イソプロポキシ，ｎ−ブトキシ，
イソブトキシ，sec-フ゛トキシ,tert−ブトキシ等の炭素数１
〜４のアルコキシ基が挙げられるが、特にメトキシ，エ
トキシが好ましい。該置換されていてもよい低級アルキ
ル基又は置換されていてもよい低級アルコキシ基の置換
基としては、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、
ヨウ素等）等が挙げられ、任意の位置に１〜５個置換さ
れていてもよい。該置換されていてもよい水酸基におけ
る置換基としては、例えば低級（Ｃ_1-4）アルキル基
（例、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチ
ル、ｔ−ブチル等）、Ｃ_3-6シクロアルキル基（シクロ
プロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキ
シル等）、Ｃ_6-10アリール基（例、フェニル、１−ナフ
チル、２−ナフチル等）、Ｃ_7-14アラルキル基（例、ベ
ンジル、フェネチルなど）などが挙げられる。

【００３１】式（III）で表される化合物としては、３
位と５位の置換基が７員環の面に対し、互いに反対方向
を向いているトランス体である化合物が好ましい。従っ
て、本発明の製造法によって得られる光学活性体の好ま
しい化合物は下式で表わされる化合物である。

【化２０】 〔式中、各記号の意味は、式（III）のそれぞれの記号
の意味と同じである。〕式（I）〔以下（Ia），（I
b），（Iah），（Ibh），(IＡ)および（III）を含む〕
で表わされる化合物の塩としては、例えば塩酸塩、臭化
水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機塩、例え
ば酢酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、フマール酸塩、マレ
イン酸塩、トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩
等の有機酸塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カル
シウム塩、アルミニウム塩等の金属塩、例えばトリエチ
ルアミン塩、グアニジン塩、アンモニウム塩、ヒドラジ
ン塩、キニーネ塩、シンコニン塩等の延期の塩等の薬理
学的に許容されうる塩が挙げられる。とりわけナトリウ
ム塩が好ましい。

【００３２】本発明においては、一般式（I）で表され
る化合物の右旋性および左旋性の光学異性体の混合物
に、不斉加水分解する能力を有する微生物の培養物また
はその処理物を接触させることによって、該化合物の光
学活性体を得ることができる。具体的には、例えば、式
（Ia）

【化２１】 〔式中、各記号は前記と同意義である〕で表される化合
物および式（Ib）

【化２２】 〔式中、各記号は前記と同意義である〕で表される化合
物の混合物に、微生物の培養物またはその処理物を接触
させることによって、何れか一方の化合物を不斉加水分
解することができる。つまり、式（Ia）で表される化合
物を式（Iah）

【化２３】 〔式中、Ｘ'aはカルボキシル基あるいは水酸基を有する
置換基を示し、その他の記号は前記と同意義である〕で
表される化合物に、または式（Ib）で表される化合物を
式（Ibh）

【化２４】 〔式中、Ｘ'aはカルボキシル基あるいは水酸基を有する
置換基を示し、その他の記号は前記と同意義である〕で
表される化合物に不斉加水分解することができる。得ら
れた反応液を、公知の方法、例えば蒸留，再結晶，溶媒
抽出，転溶，晶出，クロマトグラフィー（例、カラムク
ロマトグラフィー）等によって精製することによって、
目的とする光学活性体を得ることができる。このとき、
目的化合物が、例えば、一般式（Iah）で表される化合
物である場合、式（Ia）で表される化合物を不斉加水分
解する能力を有する微生物の培養物またはその処理物を
用いればよいが、次のようにしても得ることができる。
まず、式（Ib）で表される化合物を不斉加水分解する能
力を有する微生物の培養物またはその処理物を用いて、
式（Ibh）で表される化合物（不斉加水分解物）と式（I
a）で表される化合物との混合物を得る。次に、該混合
物から式（Ia）で表される化合物を単離し、該化合物を
化学的にまたは酵素的に加水分解することによって、一
般式（Iah）で表される化合物を得る。

【００３３】本発明に用いる微生物としては、一般式
（I）で表される化合物を不斉加水分解する能力を有す
る微生物であればいずれでも良く、例えば細菌、糸状菌
などが挙げられる。細菌としては、シュードモナス（Ps
eudomonas）属，バチルス（Bacillus）属に属する微生
物などが挙げられる。シュードモスナ属に属する微生物
としては、シュードモナス・テトロレンス（Pseudomona
s taetrolens），シュードモナス・ディミヌタ（Pseudo
monas diminuta），シュードモナス・エアルギノサ（Ps
eudomonas aeruginosa），シュードモナス・ベシクラリ
ス（Pseudomonasvesicularis）などが挙げられ、より具
体的にはシュードモナス・テトロレンスＩＦＯ１２６９
１，シュードモナス・ディミヌタＩＦＯ１３１８２，シ
ュードモナス・エアルギノサＩＦＯ３９２３，シュード
モナス・ベシクラリスＩＦＯ１２１６５などが挙げられ
る。バチルス属に属する微生物としては、バチルス・サ
チルス（Bacillus subtilis）などが挙げられ、より具
体的にはバチルス・サチルスＩＦＯ３０２６などが挙げ
られる。上記ＩＦＯ番号のついている菌株は、リスト・
オブ・カルチャーズ（LIST OF CULTURES）第９版，1992
年（財団法人発酵研究所（大阪市淀川区））に記載され
ており、該発酵研究所から入手することができる。糸状
菌としては、フミコラ（Humicola）属，リゾパス（Rhiz
opus）属に属する微生物などが挙げられる。フミコラ属
に属する微生物としては、フミコラ・ラヌギノサ（Humi
cola lanuginosa）などが挙げられる。リゾパス（Rhizo
pus）属に属する微生物としては、リゾパス・デレマー
（Rhizopus delemer）などが挙げられる。またフミコラ
・ラヌギノサおよびリゾパス・デレマーの培養物から得
たリパーゼはバイオキャタリスト社（Biocatalyst Lt
d., イギリス）製としてコスモ・バイオ株式会社から販
売されている（総合カタログ，No.9 1993-95）。これ
らの微生物はそのまま用いても良いが、反応の変換率ま
たは基質に対する立体特異性を向上させる目的で、変異
処理したものを用いても良い。

【００３４】上記微生物の培養に用いる培地としては、
該微生物が増殖できるものあればよい。得られた培養物
またはその処理物に、一般式（I）で表される化合物を
接触させることによって、該化合物の光学活性体を生成
することができる。培地の炭素源としては、ブドウ糖，
ショ糖，麦芽糖，デキストリン，でん粉，グリセロー
ル，油脂類（例えば大豆油，オリーブ油など），各種脂
肪酸（例えばパルミチン酸，ステアリン酸，オレイン酸
など）などが用いられる。窒素源としては、例えば、肉
エキス，酵母エキス，ペプトン，乾燥酵母，大豆粉，脱
脂大豆粉，コーンスティープリカー，ペプトン，カゼイ
ン，綿実粉，尿素，アンモニウム塩（例えば、硫酸アン
モニウム，塩化アンモニウム，硝酸アンモニウム，酢酸
アンモニウムなど）が用いられる。無機塩としては、例
えば、りん酸一カリウム，りん酸二カリウム，りん酸一
ナトリウム，りん酸二ナトリウム，硝酸ナトリウム，硫
酸マグネシウム，炭酸カルシウム，塩化ナトリウム，お
よびその他のナトリウム，カリウム，カルシウム，マグ
ネシウム塩などが、さらに鉄，マンガン，亜鉛，コバル
ト，ニッケルなどの塩類が適宜用いられる。その他、ア
ミノ酸，ペプチド，ビタミン類，核酸類などを含有させ
ても良い。培地の pＨを調節する目的で無機または有機
の酸、アルカリを加え、消泡の目的で、油脂類，界面活
性剤などの適量が培地に添加される。培地の pＨは５〜
９、さらに好ましくは６〜８である。培養は静置培養ま
たは通気撹拌培養で行なわれる。温度は約２０から４５
℃、さらに好ましくは約２８から３７℃である。培養時
間は約１０から９６時間、さらに好ましくは約１６から
７２時間である。

【００３５】本発明で用いられる「培養物」とは、上記
の微生物の培養で得られる培養液である。「処理物」と
は、培養物のろ過または遠心分離で得られる菌体あるい
は培養上清、菌体の超音波処理、フレンチプレス処理、
アルミナ磨砕、溶菌酵素処理、界面活性剤、有機溶媒処
理などで得られる菌体破砕物あるいは細胞抽出液、培養
上清あるいは細胞抽出液から硫安分画、イオン交換クロ
マトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、ゲルろ過、
アフィニティクロマトグラフィーなどによって得られる
酵素標品などである。また、菌体あるいは酵素をゼライ
トなどの担体に固定化したものを用いてもよい。本発明
では、基質である一般式（I）で表される化合物を上記
の培養物またはその処理物と混合する等して接触させて
反応を行わせることにより、該化合物の光学活性体を得
ることができる。上記の微生物を培養して得られた培養
物が培養液である場合には、培養液に基質を添加して反
応を行わせればよい。このとき基質は、微生物を培地に
接種する時またはそれ以前に添加してもよく、また微生
物の増殖と同時に添加してもよい。基質はそのまま反応
液に添加しても良いが、有機溶媒（例えば、Ｎ,Ｎ−ジ
メチルホルムアミド，Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド，
ジメチルスルホキシド，エタノール，メタノール，トル
エンなど）などに適当な濃度になるよう溶解してから添
加してもよい。また上記微生物の培養物の処理物から得
られた酵素を基質との反応に用いる場合には、酵素を適
当な溶媒（例、食塩水，リン酸緩衝液，トリス−塩酸緩
衝液など）に溶解してから、基質との反応に供すればよ
い。このとき基質は前記したような適当な溶媒に溶解さ
せてもよい。また基質を適当な溶媒に溶解させておいて
から、酵素を添加してもよい。このとき酵素は前記した
ような適当な溶媒に溶解させておいてもよい。さらに酵
素および基質の両方を適当な溶媒に同時に溶解させて反
応を行わせてもよい。

【００３６】本反応は、水溶液中で行うことができる
が、有機溶媒（例えばトルエン，酢酸エチル，イソプロ
ピルエーテル，ジクロロメタン，イソプロピルエーテル
など）中、あるいは水溶液と有機溶媒との二相系で行っ
ても良い。本反応において、反応液中の原料化合物（基
質）の濃度は約０.１〜１００mg／ml、好ましくは約５
〜３０mg／ml、より好ましくは約１〜１０mg／mlであ
る。加えられる微生物の培養物またはその処理物の量は
菌体またはその相当量の処理物を湿菌体重量として、反
応液１ml当り１〜５０mgが適当である。反応温度は約１
５から８０℃、さらに好ましくは約２０から４２℃であ
る。pＨは約４〜１１、さらに好ましくは約６〜９であ
る。反応時間は約１０分から９６時間、さらに好ましく
は約１から４８時間である。反応液中に、所望により、
有機溶媒反応促進剤、酵素安定剤などを添加してもよ
い。反応は静置、振とう、撹拌のいずれの条件でもよ
い。また必要に応じて菌体または酵素を適当な担体に固
定化し、バイオリアクターで反応させてもよい。

【００３７】本発明の反応において、一般式（I）で表
される化合物から式（Ih）

【化２５】 〔式中、Ｘ'aはカルボキシル基あるいは水酸基を有する
置換基を示し、その他の記号は前記と同意義である〕で
表される化合物への変換率は、以下の方法で求めること
ができる。

【数１】 〔式中、化合物（Ia），化合物（Ib）、化合物（Iah）
および化合物（Ibh）はそれぞれの反応後の量を示
す。〕 また生成物（または基質）の光学純度は、例えば、一般
式（Iah）で表される化合物が生成する場合には、

【数２】 〔式中、化合物（Iah），化合物（Ibh）は前記と同意義
である〕とする。化合物（Ia），化合物（Ib）、化合物
（Iah），化合物（Ibh）のそれぞれの反応後の量を求め
るには、例えば次のようにすればよい。反応後の反応液
を酢酸などで酸性に調節し、これに有機溶媒（例えば酢
酸エチル）を適当量（例えば等量）加えたのち撹拌す
る。生じた有機溶媒層を適当なキラルカラム（例えばウ
ルトロンＥＳ−ＯＶＭ）を用いる高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）にかけることにより、化合物（I
a），化合物（Ib）、化合物（Iah），化合物（Ibh）の
それぞれの量を測定することができる。

【００３８】一般式（I）,（IA）,（II）および（III）
で表される化合物は、例えば、ＥＰＡ５６７０２６号、
ＷＯ９５／２１８３４（特願平６−１５５３１号に基づ
く出願）、ＥＰＡ６４５３７７（特願平６−２２９１５
９号に基づく出願）、ＥＰＡ６４５３７８（特願平６−
２２９１６０号に基づく出願）などで開示され、これら
の公報の開示にしたがって製造することができる。又、
これらの化合物は、スクアレン合成酵素阻害作用、コレ
ステロール低下作用及びトリグリセライド低下作用を有
し、高脂血症予防治療剤として有用であり、上記公報の
方法に従い、使用することができる。本発明の製造法
は、例えば、ＥＰ５６７０２６号、特願平６−１５５３
１号、特願平６−２２９１５９号、特願平６−２２９１
６０号などで開示された、コレステロール低下作用，ト
リグリセライド低下作用などを有する化合物の光学活性
体を得るために有利に使用される。

【００３９】

【発明の実施の形態】以下に実施例を挙げて本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。

【実施例】

実施例１ シュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １２６９１，シ
ュードモナス・ディミヌタＩＦＯ １３１８２，シュー
ドモナス・ベシクラリスＩＦＯ １２１６５，シュード
モナス・エアルギノサＩＦＯ ３９２３をそれぞれ２０
０ml容エーレンマイヤー（Erlenmeyer）フラスコ中のト
リプチケース・ソイ・ブロス（Trypticase Soy Broth,
ＢＢＬ社）２０mlに接種し、２８℃で２４時間振とう下
で培養を行った。得られた培養液の０.２mlをグルコー
ス２％，カゼイン２.５％，ＫＨ₂ＰＯ₄ ０.１％，Ｎa
ＮＯ₃ ０.１％，ＭgＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.０５％，pＨ
７.０からなる培地（カゼイン培地）２０mlを含む２０
０ml容エーレンマイヤーフラスコに移し、２８℃で４２
時間振とう下で培養を行った。得られた培養液（２０m
l）にトランス−７−クロロ−５−（２−クロロフェニ
ル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−
テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸
エチルエステルのジメチルスルホキシド溶液（１０mg／
ml）２mlを添加し、２８℃で４.５時間、振とう下で反
応を行った。反応後の反応液の２mlを試験管に取り、こ
れに２０％酢酸（４０μl）を加えて反応液を酸性（pＨ
約４）にしたのち２mlの酢酸エチルを加えて撹拌した。
その酢酸エチル層をＨＰＬＣの移動層（後出）で適当に
希釈し、その希釈液をキラルカラムとしてウルトロンＥ
Ｓ−ＯＵＭ（信和化工）を、移動層として２０mＭ Ｋ
Ｈ₂ＰＯ₄（pＨ３.５）：アセトニトリル（７５：２５）
を用いるＨＰＬＣにかけ、加水分解反応の変換率、立体
選択性および加水分解物の光学純度を求めた。〔表１〕
にその結果を示す。

【００４０】

【表１】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 菌 体 変換率 立 体 光学純度 (％) 選択性 (％ ee) −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− シュードモナス・ディミヌタ IFO 13182 27.8 3R, 5S ＞ 99 シュードモナス・テトロレンス IFO 12691 26.7 3R, 5S ＞ 99 シュードモナス・ベシクラリス IFO 12165 9.0 3R, 5S ＞ 99 シュードモナス・エアルギノサ IFO 3923 3.1 3S, 5R ＞ 99 バチルス・サチルス IFO 3026 12.9 3S, 5R ＞ 99 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 以上の結果から、ＩＦＯ １３１８２，ＩＦＯ １２６
９１およびＩＦＯ １２１６５によって基質（ラセミ
体）が立体選択的に加水分解され、（３Ｒ，５Ｓ）−７
−クロロ−５−（２−クロロフェニル）−１−ネオペン
チル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１
−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸が生成し、ＩＦＯ ３
９２３によって（３Ｓ，５Ｒ）−７−クロロ−５−（２
−クロロフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−
１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピ
ン−３−酢酸が生成することが明らかになった。

【００４１】実施例２ バチルス・サチルスＩＦＯ ３０２６をデキストリン１
％，グルコース１％，グリセロール１％，ポリペプトン
０.５％，酵母エキス０.５％，肉エキス０.５％，食塩
０.３％，沈降性炭酸カルシウム０.５％，pＨ７.２から
なる培地（Ｎ−１培地）２mlを含む試験管に接種し、同
時にトランス−７−クロロ−（２−クロロフェニル）−
１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラ
ヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸エチル
エステルのジメチルスルホキシド溶液（４０mg／ml）５
０μl を添加したのち、２８℃で４８時間、振とう下で
培養および反応を行った。反応後の反応液の酢酸エチル
抽出液を希釈し、実施例１と同様の方法でＨＰＬＣで変
換率、立体選択性および光学純度を求めた。その結果、
バチルス・サチルスＩＦＯ ３０２６によって基質（ラ
セミ体）が立体選択的に加水分解され、（３Ｓ，５Ｒ）
−７−クロロ−５−（２−クロロフェニル）−１−ネオ
ペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−
４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸が生成すること
がわかった〔表１〕。

【００４２】実施例３ シュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １２６９１をト
リプチケース・ソイ・ブロス（ＢＢＬ社）２００mlを含
む１リットル容エーレンマイヤーフラスコ８本に接種
し、２８℃で２４時間振とう下で培養した。得られた培
養液約１.６リットルをグルコース２％，カゼイン２.５
％，ＫＨ₂ＰＯ₄ ０.１％，ＮaＮＯ₃ ０.１％，ＭgＳ
Ｏ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.０５％，pＨ７.０からなる培地（カ
ゼイン培地）１６０リットルを含む２００リットル容フ
ァーメンターに移し、２８℃で４２時間、通気、撹拌し
て培養を行った。２００ｇのトランス−７−クロロ−５
−（２,３−ジメトキシフェニル）−１−ネオペンチル
−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベ
ンゾオキサゼピン−３−酢酸エチルエステルを１８リッ
トルのジメチルスルホキシドに溶解し、この溶液を上記
の培養液１５０リットルに加え、２８℃で４８時間、撹
拌して反応を行った。反応液の２mlを取り、この酢酸エ
チル抽出液の希釈液をＨＰＬＣにかけたところ、上記の
加水分解反応の変換率は４４.２％であり、９９％ee 以
上の光学純度で３Ｒ，５Ｓ体が生成していることがわか
った。上記の反応終了液（１７１リットル）に、塩化ナ
トリウム（１７kg）を添加し、２Ｎ 塩酸で pＨを４に
調整後、酢酸エチル（８０および６０リットル）で２回
抽出した。酢酸エチル相を集め、これを２％食塩水（７
５リットル）で１回、続いて０.５％炭酸水素ナトリウ
ム水溶液（１５リットル）で２回洗浄した後、減圧下で
濃縮し油状物２９５ｇを得た。油状物をヘキサン（５０
０ミリリットルで１回，つづいて２００ミリリットルで
２回）洗浄した後、５０％メタノール（３０リットル）
に懸濁した。懸濁液を濃塩酸（ミリリットル）で pＨ７
に調整し、室温にて３時間撹拌後ろ紙ろ過し、ろ液をイ
オン交換樹脂ＩＲＡ−６８（１リットル、酢酸型、ロー
ム・アンド・ハース社製）のカラムに通液した。カラム
を７０％メタノール６リットルで洗浄後、続いて１Ｎ
水酸化ナトリウム／７０％メタノールで通液し、（３
Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（２,３−ジメトキシフ
ェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,
５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−
酢酸を含む粗画分７リットルを得た。この画分を濃塩酸
（４８６ミリリットル）で pＨを４に調整後、水（３リ
ットル）を加え、７℃で１２時間冷却した後、ろ紙ろ過
し、（３Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（２,３−ジメ
トキシフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−
１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピ
ン−３−酢酸粗結晶（６６.７ｇ）を得た。

【００４３】実施例４ ２２０ｇのトランス−７−クロロ−５−（２,４−ジメ
トキシフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−
１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピ
ン−３−酢酸エチルエステルを１２リットルのジメチル
スルホキシドに溶解した。この溶液を実施例３と同様の
方法で得られたシュードモナス・テトロレンスＩＦＯ
１２６９１の培養液（１５０リットル）に添加し、２８
℃で７２時間、撹拌して反応を行ったところ、４３.３
％の変換率で光学純度９９％ee 以上で（３Ｒ，５Ｓ）
体が生成していることがＨＰＬＣでわかった。反応液か
ら実施例３と同様の方法で精製を行い、（３Ｒ，５Ｓ）
−７−クロロ−５−（２,４−ジメトキシフェニル）−
１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラ
ヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸の結晶
（７６.１ｇ）が得られた。

【００４４】実施例５ ７５ｇのトランス−７−クロロ−５−（４−ヒドロキシ
−２−メトキシフェニル）−１−ネオペンチル−２−オ
キソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキ
サゼピン−３−酢酸エチルエステルを９リットルのジメ
チルスルホキシドに溶解した。この溶液を実施例３と同
様の方法で得られたシュードモナス・テトロレンスＩＦ
Ｏ １２６９１の培養液（１００リットル）に添加し、
２８℃で２４時間反応を行ったところ、４６.８％の変
換率で光学純度９９％ee 以上で（３Ｒ，５Ｓ）体が生
成していることがＨＰＬＣでわかった。上記の反応終了
液（１０２リットル）に、塩化ナトリウム（１０kg）を
添加し、２Ｎ 塩酸で（２.７リットル）で pＨを４に
調整後、酢酸エチル（６０リットル）で２回抽出した。
酢酸エチル相を集め、これを２％食塩水（７０リット
ル）で１回、続いて１％炭酸水素ナトリウム水溶液（３
５リットル）で２回洗浄した後、減圧下で濃縮し濃縮液
（２０リットル）を得た。濃縮液を低温下（０℃）３％
炭酸ナトリウム水溶液（２０リットル）で３回逆抽出し
た。水相を集め、６３％硫酸（８８０ミリリットル）で
pＨを７に調整し酢酸エチル（１７.５リットル）で２
回抽出した。酢酸エチル相を集め、０.１Ｎ 硫酸（１
７.５リットル）、水（１７リットル）で２回ずつ順次
洗浄し、減圧下で濃縮し、油状物（６１.１ｇ）を得
た。油状物にクロロホルムを加え３００mlとし、シリカ
ゲル（５００ml、Kieselgel ６０、７０〜２３０メッシ
ュ、独メルク社製）のカラムに通液した。カラムをクロ
ロホルム、クロロホルム−メタノール（２０：１）で順
次通液したところ、クロロホルム−メタノール（２０：
１）による溶出部から（３Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５
−（４−ヒドロキシ−２−メトキシフェニル）−１−ネ
オペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ
−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸を含む粗画分
３リットルが得られた。この画分を濃縮乾固した後、乾
固物（１８.８ｇ）を酢酸エチルに溶解後結晶化して、
（３Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（４−ヒドロキシ−
２−メトキシフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキ
ソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサ
ゼピン−３−酢酸の無色結晶（１４.７ｇ）を得た。

【００４５】実施例６ ２００ｇのトランス−７−クロロ−５−（２−メトキシ
フェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,
３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３
−酢酸エチルエステルを１３.５リットルのジメチルス
ルホキシドに溶解した。この溶液を実施例３と同様の方
法で得られたシュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １
２６９１の培養液（１７０リットル）に添加し、２８℃
で５４時間撹拌して反応を行ったところ、４５％の変換
率で光学純度９９％ee 以上で（３Ｒ，５Ｓ）体が生成
していることがＨＰＬＣでわかった。上記の反応終了液
（７１リットル）に、塩化ナトリウム（６kg）を添加
し、２Ｎ 塩酸で（４.０リットル）で pＨを４に調整
後、酢酸エチル（６０リットル）で２回抽出した。酢酸
エチル相を集め、これを２％食塩水（６０リットル）で
１回、続いて１％炭酸水素ナトリウム水溶液（３０リッ
トル）で２回洗浄した後、減圧下で濃縮し、濃縮液（２
０リットル）を得た。濃縮液を低温下（０℃）３％炭酸
ナトリウム水溶液（２０リットル）で４回逆抽出した。
水相を集め、６３％硫酸（１.９リットル）で pＨを７
に調整し酢酸エチル（２５リットル）で２回抽出した。
酢酸エチル相を集め、０.１Ｎ 硫酸（２５リット
ル）、水（２５リットル）で２回ずつ順次洗浄し、減圧
下で濃縮し、油状物（１３６ｇ）を得た。油状物にクロ
ロホルムを加え６５０mlとし、シリカゲル（１.１リッ
トル、Kieselgel ６０、７０〜２３０メッシュ、独メル
ク社製）のカラムに通液した。カラムをクロロホルム、
クロロホルム−メタノール（２０：１）で順次通液した
ところ、クロロホルム−メタノール（２０：１）による
溶出部から（３Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（２−メ
トキシフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−
１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピ
ン−３−酢酸を含む粗画分５.５リットルが得られた。
この画分を濃縮乾固した後、乾固物（１１４.２ｇ）を
酢酸エチルに溶解後結晶化して、（３Ｒ，５Ｓ）−７−
クロロ−５−（２−メトキシフェニル）−１−ネオペン
チル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１
−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸の無色結晶（４３.８
ｇ）を得た。

【００４６】実施例７ シュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １２６９１を実
施例３と同様の方法で２基のファーメンターを用いて培
養し、得られた培養液の３００リットルに４００ｇのト
ランス−７−クロロ−５−（２,３−ジメトキシフェニ
ル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−
テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸
エチルエステルを添加して反応させたところ、加水分解
反応の変換率は４４.７％で、９９％ee 以上の光学純度
で３Ｒ，５Ｓ体が生成していることがＨＰＬＣでわかっ
た。上記の反応終了液（３４０リットル）に、塩化ナト
リウム（３４kg）を添加し、２Ｎ 塩酸（８リットル）
で pＨを４に調整後、酢酸エチル（１７０リットル）で
抽出した。酢酸エチル相を２％食塩水（１００リット
ル）で１回、続いて０.５％炭酸水素ナトリウム水溶液
（１８リットル）で２回洗浄した後、減圧下で濃縮し油
状物４４０ｇを得た。油状物を水（２リットル）に懸濁
しヘキサン（４リットル）で洗浄した。水相のヘキサン
を減圧下で留去した後、水相を５０％メタノール懸濁液
（１２リットル）とした。５０％メタノール懸濁液の p
Ｈを１０Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２５ミリリット
ル）で７.８８に調整し、３０℃にて３時間撹拌後ろ紙
ろ過した。ろ液（１２リットル）の pＨを６Ｎ 塩酸
（６１ミリリットル）で４.１１に調整し、６℃で１４
時間冷却した後、ろ紙ろ過し、（３Ｒ，５Ｓ）−７−ク
ロロ−５−（２,３−ジメトキシフェニル）−１−ネオ
ペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−
４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸粗結晶（１３８.
１ｇ）を得た。

【００４７】実施例８ シュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １２６９１を実
施例３と同様の方法で２基のファーメンターを用いて培
養し、得られた培養液の３００リットルに３８９ｇのト
ランス−７−クロロ−５−（２−メトキシフェニル）−
１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラ
ヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸エチル
エステルを添加して反応させたところ、加水分解反応の
変換率は４３.５％で、９９％ee 以上の光学純度で３
Ｒ，５Ｓ体が生成していることがＨＰＬＣでわかった。
上記の反応終了後の反応液（３４７リットル）に、塩化
ナトリウム（３４.７kg）を添加し、２Ｎ 塩酸（７.６
リットル）で pＨを４に調整後、酢酸エチル（１７３.
５リットル）で抽出した。酢酸エチル相を２％食塩水
（１００リットル）で１回、続いて０.５％炭酸水素ナ
トリウム水溶液（１９リットル）で２回洗浄した後、減
圧下で濃縮し油状物４８２ｇを得た。油状物を５０％メ
タノール（２リットル）で洗浄後、固形分を５０％メタ
ノール懸濁液（１２リットル）とした。５０％メタノー
ル懸濁液をの pＨを２Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液（２
２０ミリリットル）で７.８６に調整し、３０℃にて２
時間撹拌後ろ紙ろ過した。ろ液（１２リットル）の pＨ
を６Ｎ 塩酸（３４ミリリットル）で３.８６に調整
し、６℃で８２時間冷却した後、ろ紙ろ過し、（３Ｒ，
５Ｓ）−７−クロロ−５−（２,３−ジメトキシフェニ
ル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−
テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸
粗結晶（１３４ｇ）を得た。粗結晶を６０％メタノール
（２.７リットル）に懸濁後１０Ｎ 水酸化ナトリウム
（２９ミリリットル）で pＨ８.０２に調整した。懸濁
液をグラスフィルターろ過した後、ろ液を吸着樹脂アン
バーライトＸＡＤ−２（１００ミリリットル）のカラム
に通液した。カラムを６０％メタノールで通液し、（３
Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（２,３−ジメトキシフ
ェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,
５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−
酢酸を含む画分３.５５リットルを得た。この画分を６
Ｎ 塩酸（３９ミリリットル）で４.０７に調整し、６
℃で６時間冷却した後、ろ紙ろ過し、（３Ｒ，５Ｓ）−
７−クロロ−５−（２,３−ジメトキシフェニル）−１
−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒ
ドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸粗結晶
（１１５ｇ）を得た。

【００４８】実施例９ シュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １２６９１およ
びシュードモナス・ディミヌタＩＦＯ １３１８２を実
施例１と同様の方法で培養し、それぞれの培養液を得
た。トランス−７−クロロ−５−（２−クロロフェニ
ル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−
テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸
のメチルエステル，エチルエステル，イソプロピルエス
テル，ｎ−ブチルエステル，フェニルエステルおよびベ
ンジルエステルをジメチルスルホキシドに１０mg／mlに
なるようにそれぞれ溶解した。これらの溶液の５０μl
を上記の培養液（０.５ml）にそれぞれ添加し、２８℃
で１６時間振とう下で反応を行った。反応後の反応液を
酢酸エチルで抽出し、その抽出液の希釈法をＨＰＬＣに
かけた。いずれの基質も上記の培養液によって不斉加水
分解を受け、（３Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（２−
クロロフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−
１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピ
ン−３−酢酸が生成していることがわかった。〔表２〕
に、上記の加水分解反応の変換率および（３Ｒ，５Ｓ）
体の光学純度を示す

【００４９】

【表２】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− シュードモナス・テトロレンス シュードモナス・ディミヌタ エステル 変換率 光学純度 変換率 光学純度 （％） (％ ee） （％） （％ ee） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− メチル 43.6 ＞ 99 48.2 ＞ 99 エチル 45.6 ＞ 99 45.0 ＞ 99 イソプロピル 10.4 ＞ 99 14.6 ＞ 99 ｎ−ブチル 4.1 ＞ 99 8.9 ＞ 99 フェニル 24.7 ＞ 99 32.0 ＞ 99 ベンジル 0.7 ＞ 99 6.5 ＞ 99 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−

【００５０】実施例１０ シュードモナス・テトロレンスＩＦＯ １２６９１およ
びシュードモナス・ディミヌタＩＦＯ １３１８２を実
施例１と同様の方法で培養し、それぞれの培養液を得
た。トランス−７−クロロ−５−（２−クロロフェニ
ル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−
テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸
エチルエステル(Ｏ体)およびトランス−７−クロロ−５
−（２−クロロフェニル）−１−ネオペンチル−２−オ
キソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−４，１−ベンゾチ
アゼピン−３−酢酸エチルエステル（Ｓ体)をジメチル
スルホキシドに１０mg／mlになるようにそれぞれ溶解し
た。これらの溶液の５０μl を上記の培養液（０.５m
l）に添加し、２８℃で１６時間振とう下で反応を行っ
た。反応後の反応液を酢酸エチルで抽出し、その希釈液
をＨＰＬＣにかけた。いずれの基質も上記の培養液によ
って不斉加水分解を受け、対応する（３Ｒ，５Ｓ）体が
生成していることがわかった。〔表３〕に、加水分解反
応の変換率および（３Ｒ，５Ｓ）体の光学純度を示す。

【００５１】

【表３】 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− シュードモナス・テトロレンス シュードモナス・ディミヌタ 基 質 変換率 光学純度 変換率 光学純度 （％） (％ ee） （％） （％ ee） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− Ｏ 45.6 ＞ 99 45.0 ＞ 99 Ｓ 25.6 ＞ 99 21.3 ＞ 99 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−

【００５２】実施例１１ ３mlのトリス−ＨＣl pＨ７.５に２４０mgのフミコラ・
ラヌギノサ由来のリパーゼ（バイオキャタリスト社，イ
ギリス）および３mgのトランス−７−クロロ−５−（２
−クロロフェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−
１,２,３,５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピ
ン−３−酢酸エチルエステルを入れ、３０℃で２２.５
時間、反応を行った。反応後の反応液を酢酸エチルで抽
出し、ＨＰＬＣで調べたところ、５１.２％の変換率で
（３Ｒ，５Ｓ）−７−クロロ−５−（２−クロロフェニ
ル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,５ −
テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸
（光学純度９４％）が生成していることがわかった。

【００５３】実施例１２ 実施例１１と同様にリゾパス・デレマー由来のリパーゼ
（バイオカタリスト社，イギリス）を用いて、トランス
−７−クロロ−５−（２−クロロフェニル）−１−ネオ
ペンチル−２−オキソ−１,２,３,５−テトラヒドロ−
４,１−ベンゾオキサゼピン−３−酢酸エチルエステル
を反応させたところ、３２％の変換率で３Ｒ，５Ｓ体
（光学純度８８％）が生成していることが分かった。

【００５４】実施例１３ シュードモナス・ディミヌタＩＦＯ １３１８２を、コ
ーンスティープリカー２％，リン酸二カリウム０.１
％，pＨ７からなる培地で２８℃で約２８時間培養した
のち、得られた培養液の３.２リットルをカゼイン２.５
％，リン酸一カリウム０.１％，硫安０.０５％，pＨ７
からなる培地１６０リットルを含む２００リットル容タ
ンクに移し、２８℃で４８時間培養を行った。３００ｇ
のトランス−７−クロロ−５−（２,３−ジメトキシフ
ェニル）−１−ネオペンチル−２−オキソ−１,２,３,
５−テトラヒドロ−４,１−ベンゾオキサゼピン−３−
酢酸エチルエステルを７kgのジメチルホネムアミドに溶
解し、この溶液を上記の培養液（約１５０リットル）に
加え、２４℃で７１時間、撹拌して反応を行った。反応
液をメタノールで４０倍に希釈し、その希釈液を、ＨＰ
ＬＣで分析したところ、加水分解反応の変換率は４１.
３％であり、９９％以上の光学純度で３Ｒ，５Ｓ体が生
成していることが確認された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:385） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:125） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:845） (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:845） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:385） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:125）

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式（I） 【化１】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
   素基を、Ｒ₂およびＲ₃は同一または異なって水素，置換
   されていてもよい炭化水素基あるいは置換されていても
   よい芳香族複素環基を、Ｘ'はエステル化されたカルボ
   キシル基あるいはアシル化された水酸基を有する置換基
   を、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環または置換
   されていてもよい芳香族複素環を、環Ｊ'は環構成原子
   として３個以下のヘテロ原子を含有する７ないし８員の
   複素環を、環Ｊ'はＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃及びＸ'以外にさらに
   置換基を有していてもよい。Ｃ*は不斉炭素原子を示
   す〕で表わされる化合物を、酵素的不斉加水分解反応に
   付すことを特徴とする式（I）の化合物の光学活性体の
   製造法。
2. 【請求項２】酵素的不斉加水分解反応を、不斉加水分解
   する能力を有する微生物の培養物またはその処理物と接
   触させることにより行う請求項１記載の光学活性体の製
   造法。
3. 【請求項３】式（I）で表わされる化合物の光学活性体
   を分離することを特徴とする請求項１記載の製造法。
4. 【請求項４】式（I）で表される化合物が式 【化２】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
   素基を、Ｒ₂およびＲ₃は同一または異なって水素，置換
   されていてもよい炭化水素基あるいは置換されていても
   よい芳香族複素環基を、Ｚ₂はＳ(Ｏ)_q（ｑは０，１もし
   くは２を示す）またはＯを、Ｘは結合手または２価の原
   子鎖を、Ｙはエステル化されたカルボキシル基またはア
   シル化された水酸基を、環Ｂは置換されていてもよいベ
   ンゼン環を示す〕で表わされる化合物である請求項１記
   載の製造法。
5. 【請求項５】式（I）で表される化合物が式 【化３】 〔式中、Ｒ₁は水素または置換されていてもよい炭化水
   素基を、Ｙ₁はエステル化されたカルボキシル基を、環
   Ｂは置換されていてもよいベンゼン環を、環Ｃは置換さ
   れていてもよいベンゼン環を示す〕で表わされる化合物
   である請求項１記載の製造法。
6. 【請求項６】微生物が細菌または糸状菌である請求項２
   記載の製造法。
7. 【請求項７】細菌がシュードモナス（Pseudomonas）属
   またはバチルス（Bacillus）属に属する微生物である請
   求項６記載の製造法。
8. 【請求項８】シュードモナス属に属する微生物が、シュ
   ードモナス・テトロレンス（Pseudomonas taetrolen
   s），シュードモナス・ディミヌタ（Pseudomonas dimin
   uta），シュードモナス・エアルギノサ（Pseudomonas a
   eruginosa）またはシュードモナス・ベシクラリス（Pse
   udomonas vesicularis）である請求項７記載の製造法。
9. 【請求項９】シュードモナス属に属する微生物が、シュ
   ードモナス・テトロレンスＩＦＯ１２６９１，シュード
   モナス・ディミヌタＩＦＯ１３１８２，シュードモナス
   ・エアルギノサＩＦＯ３９２３またはシュードモナス・
   ベシクラリスＩＦＯ１２１６５である請求項７記載の製
   造法。
10. 【請求項１０】バチルス属に属する微生物が、バチルス
    ・サチルス（Bacillus subtilis）である請求項７記載
    の製造法。
11. 【請求項１１】バチルス属に属する微生物が、バチルス
    ・サチルスＩＦＯ３０２６である請求項７記載の製造
    法。
12. 【請求項１２】糸状菌がフミコラ（Humicola）属または
    リゾパス（Rhizopus）属に属する微生物である請求項６
    記載の製造法。
13. 【請求項１３】フミコラ属に属する微生物が、フミコラ
    ・ラヌギノサ（Humicolalanuginosa）である請求項１２
    記載の製造法。
14. 【請求項１４】リゾパス属に属する微生物が、リゾパス
    ・デレマー（Rhizopus delemer）である請求項１２記載
    の製造法。