JPH08220094A - 血漿中ｇｍｐ−１４０の測定法 - Google Patents
血漿中ｇｍｐ−１４０の測定法Info
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- JPH08220094A JPH08220094A JP7020193A JP2019395A JPH08220094A JP H08220094 A JPH08220094 A JP H08220094A JP 7020193 A JP7020193 A JP 7020193A JP 2019395 A JP2019395 A JP 2019395A JP H08220094 A JPH08220094 A JP H08220094A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 血漿中のＧＭＰ−１４０を測定する方法にお
いて、被検血漿として、採血した全血に（ａ）エチレン
ジアミン四酢酸又はその塩、（ｂ）クエン酸又はその
塩、（ｃ）アデノシン又はその誘導体、及び（ｄ）テオ
フィリン又はその誘導体を含有する抗凝固・抗血小板剤
組成物を添加した後、当該血液より採取した血漿を使用
する血漿中ＧＭＰ−１４０の測定法。 【効果】 血漿の採取条件に影響されず、血漿中のＧＭ
Ｐ−１４０を正確に測定することができる。
いて、被検血漿として、採血した全血に（ａ）エチレン
ジアミン四酢酸又はその塩、（ｂ）クエン酸又はその
塩、（ｃ）アデノシン又はその誘導体、及び（ｄ）テオ
フィリン又はその誘導体を含有する抗凝固・抗血小板剤
組成物を添加した後、当該血液より採取した血漿を使用
する血漿中ＧＭＰ−１４０の測定法。 【効果】 血漿の採取条件に影響されず、血漿中のＧＭ
Ｐ−１４０を正確に測定することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、特定の抗凝固・抗血小
板剤組成物を用い、血漿中のＧＭＰ−１４０を正確に測
定することができるＧＭＰ−１４０の測定法に関する。
板剤組成物を用い、血漿中のＧＭＰ−１４０を正確に測
定することができるＧＭＰ−１４０の測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】最近、
トロンビンにより活性化をうけた血小板の膜に検出され
る糖蛋白として発見されたＧＭＰ−１４０（Ｇｒａｎｕ
ｌｅ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１４０：Ｐ
−ｓｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ６２Ｐなどとも呼ばれる）
が、血漿中にも存在することが明らかになった。このＧ
ＭＰ−１４０は、従来血小板活性化の分子マーカーとし
て臨床検査で使用されているβ−トロンボグロブリン
（β−ＴＧ）や血小板第４因子（ＰＦ−４）などと比べ
て採血条件の影響を受けないとの知見が得られたことか
ら、新たなマーカーとして期待されている。
トロンビンにより活性化をうけた血小板の膜に検出され
る糖蛋白として発見されたＧＭＰ−１４０（Ｇｒａｎｕ
ｌｅ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１４０：Ｐ
−ｓｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ６２Ｐなどとも呼ばれる）
が、血漿中にも存在することが明らかになった。このＧ
ＭＰ−１４０は、従来血小板活性化の分子マーカーとし
て臨床検査で使用されているβ−トロンボグロブリン
（β−ＴＧ）や血小板第４因子（ＰＦ−４）などと比べ
て採血条件の影響を受けないとの知見が得られたことか
ら、新たなマーカーとして期待されている。
【０００３】しかしながら、ＧＭＰ−１４０の測定に用
いる被検血漿の採取条件は、β−ＴＧ等ほど影響を受け
ないものの、実際には、血漿を分離するまでの採血した
血液の放置温度や放置時間などにより測定値が変動する
という問題があった。特に臨床検査においては、血漿分
離までの放置温度や放置時間を一定にすることが困難で
あることから、このような測定値の変動は重要な問題と
なる。
いる被検血漿の採取条件は、β−ＴＧ等ほど影響を受け
ないものの、実際には、血漿を分離するまでの採血した
血液の放置温度や放置時間などにより測定値が変動する
という問題があった。特に臨床検査においては、血漿分
離までの放置温度や放置時間を一定にすることが困難で
あることから、このような測定値の変動は重要な問題と
なる。
【０００４】一般に臨床検査で用いられる抗凝固剤であ
る凝固検査用のクエン酸ナトリウムや、血球検査用のエ
チレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を添加した後、採取
する方法で得られる被検血漿では、ＧＭＰ−１４０の測
定値の変動は改善されなかった。また、より効果の高い
抗凝固（抗血小板）剤であるＰＧＥ1等を使用すること
も可能であるが、これらの物質は不安定であるため、臨
床検査には適さないという問題がある。
る凝固検査用のクエン酸ナトリウムや、血球検査用のエ
チレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を添加した後、採取
する方法で得られる被検血漿では、ＧＭＰ−１４０の測
定値の変動は改善されなかった。また、より効果の高い
抗凝固（抗血小板）剤であるＰＧＥ1等を使用すること
も可能であるが、これらの物質は不安定であるため、臨
床検査には適さないという問題がある。
【０００５】従って、本発明の目的は、採血した全血か
ら被検血漿を採取するまでの放置温度や放置時間など、
血漿の採取条件に影響されず、ＧＭＰ−１４０の濃度を
正確に測定することができる血漿中のＧＭＰ−１４０の
測定方法を提供することにある。
ら被検血漿を採取するまでの放置温度や放置時間など、
血漿の採取条件に影響されず、ＧＭＰ−１４０の濃度を
正確に測定することができる血漿中のＧＭＰ−１４０の
測定方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは鋭意研究を行った結果、採血した全血に特定
の抗凝固・抗血小板剤組成物を添加した後、得られる血
漿を用いれば、血漿中のＧＭＰ−１４０濃度を正確に測
定できることを見出し、本発明を完成した。
発明者らは鋭意研究を行った結果、採血した全血に特定
の抗凝固・抗血小板剤組成物を添加した後、得られる血
漿を用いれば、血漿中のＧＭＰ−１４０濃度を正確に測
定できることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は、血漿中のＧＭＰ−１
４０を測定する方法において、被検血漿として、採血し
た全血に（ａ）エチレンジアミン四酢酸又はその塩、
（ｂ）クエン酸又はその塩、（ｃ）アデノシン又はその
誘導体、及び（ｄ）テオフィリン又はその誘導体を含有
する抗凝固・抗血小板剤組成物を添加した後、当該血液
より採取した血漿を使用することを特徴とする血漿中Ｇ
ＭＰ−１４０の測定法を提供するものである。
４０を測定する方法において、被検血漿として、採血し
た全血に（ａ）エチレンジアミン四酢酸又はその塩、
（ｂ）クエン酸又はその塩、（ｃ）アデノシン又はその
誘導体、及び（ｄ）テオフィリン又はその誘導体を含有
する抗凝固・抗血小板剤組成物を添加した後、当該血液
より採取した血漿を使用することを特徴とする血漿中Ｇ
ＭＰ−１４０の測定法を提供するものである。
【０００８】本発明において用いられる抗凝固・抗血小
板剤組成物は、（ａ）エチレンジアミン四酢酸又はその
塩、（ｂ）クエン酸又はその塩、（ｃ）アデノシン又は
その誘導体、及び（ｄ）テオフィリン又はその誘導体を
含有するものである。ここで用いられるエチレンジアミ
ン四酢酸又はその塩（ａ）及びクエン酸又はその塩
（ｂ）は、血液中のカルシウムイオンをキレートし、ト
ロンビン生成を阻害する作用を有し、血液抗凝固剤とし
て知られているものである。これらの塩としてはナトリ
ウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩が好ましい。ま
た、アデノシン又はその誘導体（ｃ）及びテオフィリン
又はその誘導体（ｄ）は、主に血小板のホスホジエステ
ラーゼを阻害して血小板内サイクリックＡＭＰ濃度を上
昇させる作用を有し、抗血小板剤として知られているも
のである。アデノシンの誘導体としては、２−クロロア
デノシン、ジデオキシアデノシン、５′−デオキシ−
５′−メチルチオアデノシン等が挙げられ、テオフィリ
ン誘導体としてはイソブチル−メチルキサンチン等が挙
げられる。
板剤組成物は、（ａ）エチレンジアミン四酢酸又はその
塩、（ｂ）クエン酸又はその塩、（ｃ）アデノシン又は
その誘導体、及び（ｄ）テオフィリン又はその誘導体を
含有するものである。ここで用いられるエチレンジアミ
ン四酢酸又はその塩（ａ）及びクエン酸又はその塩
（ｂ）は、血液中のカルシウムイオンをキレートし、ト
ロンビン生成を阻害する作用を有し、血液抗凝固剤とし
て知られているものである。これらの塩としてはナトリ
ウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩が好ましい。ま
た、アデノシン又はその誘導体（ｃ）及びテオフィリン
又はその誘導体（ｄ）は、主に血小板のホスホジエステ
ラーゼを阻害して血小板内サイクリックＡＭＰ濃度を上
昇させる作用を有し、抗血小板剤として知られているも
のである。アデノシンの誘導体としては、２−クロロア
デノシン、ジデオキシアデノシン、５′−デオキシ−
５′−メチルチオアデノシン等が挙げられ、テオフィリ
ン誘導体としてはイソブチル−メチルキサンチン等が挙
げられる。
【０００９】抗凝固・抗血小板剤組成物中へのこれら
（ａ）〜（ｄ）成分の配合割合は、モル比で（ａ）：
（ｂ）：（ｃ）：（ｄ）＝５〜１５４：１１０〜１３
０：２．５〜４０：５〜３０であるのが好ましい。ま
た、抗凝固・抗血小板剤組成物は、クエン酸を緩衝剤と
して用い、pH４〜８、特にpH５程度の緩衝液とするのが
望ましい。
（ａ）〜（ｄ）成分の配合割合は、モル比で（ａ）：
（ｂ）：（ｃ）：（ｄ）＝５〜１５４：１１０〜１３
０：２．５〜４０：５〜３０であるのが好ましい。ま
た、抗凝固・抗血小板剤組成物は、クエン酸を緩衝剤と
して用い、pH４〜８、特にpH５程度の緩衝液とするのが
望ましい。
【００１０】このような組成の抗凝固・抗血小板剤組成
物は、予め気密性に富む容器に充填しておくのが好まし
い。かかる容器の素材は、気密性を保てる素材であれば
特に限定されず、各種ポリマー基剤、例えばポリエチレ
ンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレン（ＰＥ）、
ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、シリ
コーン処理ガラス等が挙げられるが、ポリエチレンテレ
フタレートが特に好ましい。また、この容器は減圧して
おき、そのまま真空採血管として用いるのが好ましい。
従って、容器の形状はチューブ状又は試験管状であるこ
とが好ましい。
物は、予め気密性に富む容器に充填しておくのが好まし
い。かかる容器の素材は、気密性を保てる素材であれば
特に限定されず、各種ポリマー基剤、例えばポリエチレ
ンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレン（ＰＥ）、
ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、シリ
コーン処理ガラス等が挙げられるが、ポリエチレンテレ
フタレートが特に好ましい。また、この容器は減圧して
おき、そのまま真空採血管として用いるのが好ましい。
従って、容器の形状はチューブ状又は試験管状であるこ
とが好ましい。
【００１１】本発明方法により血漿中のＧＭＰ−１４０
を測定するには、まず採血した全血に前記抗凝固・抗血
小板剤組成物を添加する。添加量は、特に限定されない
が、（ａ）〜（ｄ）成分が最終濃度で（ａ）＝０．５〜
１５．４mM、（ｂ）＝１１〜１３mM、（ｃ）＝０．２５
〜４mM、（ｄ）＝０．５〜３mMとなるようにするのが好
ましい。添加方法は、採血した後、その全血に添加して
もよいが、予め抗凝固・抗血小板剤組成物を入れた真空
採血管を用いて採血することにより、採血と同時に血液
と抗凝固・抗血小板剤組成物が混合されてもよい。この
ように、本発明方法においては、真空採血管の利用が可
能であり、これにより、操作の簡略化、採血条件を一定
にでき、測定結果の信頼性がより向上する。
を測定するには、まず採血した全血に前記抗凝固・抗血
小板剤組成物を添加する。添加量は、特に限定されない
が、（ａ）〜（ｄ）成分が最終濃度で（ａ）＝０．５〜
１５．４mM、（ｂ）＝１１〜１３mM、（ｃ）＝０．２５
〜４mM、（ｄ）＝０．５〜３mMとなるようにするのが好
ましい。添加方法は、採血した後、その全血に添加して
もよいが、予め抗凝固・抗血小板剤組成物を入れた真空
採血管を用いて採血することにより、採血と同時に血液
と抗凝固・抗血小板剤組成物が混合されてもよい。この
ように、本発明方法においては、真空採血管の利用が可
能であり、これにより、操作の簡略化、採血条件を一定
にでき、測定結果の信頼性がより向上する。
【００１２】次に、抗凝固・抗血小板剤組成物が添加さ
れた血液より被検血漿を採取するには、常法、例えば１
〜３０℃で約３０００回転、約１５分間遠心することに
より行われる。得られた被検血漿を用いてＧＭＰ−１４
０を測定するには、常法に従って行えばよく、例えばＲ
ＩＡ、ＥＬＩＳＡ等の免疫測定法により行うことができ
る。
れた血液より被検血漿を採取するには、常法、例えば１
〜３０℃で約３０００回転、約１５分間遠心することに
より行われる。得られた被検血漿を用いてＧＭＰ−１４
０を測定するには、常法に従って行えばよく、例えばＲ
ＩＡ、ＥＬＩＳＡ等の免疫測定法により行うことができ
る。
【００１３】
【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を更に説明す
る。
る。
【００１４】実施例１ ５mlのＰＥＴ製の採血管（積水化学工業社製）に、１５
４mMエチレンジアミン四酢酸・２カリウム、２０mMアデ
ノシン及び２０mMテオフィリンを含む１３０mMクエン酸
ナトリウム緩衝液（pH５．０）０．１５mlを封入して、
採血用試験管を得た。採血直前１週間に薬物投与のない
健常者５名を供血者とし、肘静脈より２１Ｇの注射針を
装着したディスポーザブル注射筒を用いて採血した。冷
却下（４℃）に保存した採血用試験管に、この血液１．
３５mlを直ちに加え、穏やかに転倒混和した後、同じく
冷却下に０分、６０分、１８０分間放置した。その後、
同じく冷却下に、３０００回転で１５分間遠心し、血漿
を分離した。この血漿の上層から４００μl を被検血漿
としてＧＭＰ−１４０の測定に用いた。ＧＭＰ−１４０
の測定は、市販のＥＬＩＳＡキット（ＧＭＰ−１４０測
定キット（宝酒造社製））を用い、比較的希釈直線性が
良好で、希釈後の濃度が検量線の範囲内にある４倍希釈
で行った。結果を表１に示した。なお、表中、「血漿分
離」は採血から血漿分離までの放置時間を示し、数値は
平均値を示す。
４mMエチレンジアミン四酢酸・２カリウム、２０mMアデ
ノシン及び２０mMテオフィリンを含む１３０mMクエン酸
ナトリウム緩衝液（pH５．０）０．１５mlを封入して、
採血用試験管を得た。採血直前１週間に薬物投与のない
健常者５名を供血者とし、肘静脈より２１Ｇの注射針を
装着したディスポーザブル注射筒を用いて採血した。冷
却下（４℃）に保存した採血用試験管に、この血液１．
３５mlを直ちに加え、穏やかに転倒混和した後、同じく
冷却下に０分、６０分、１８０分間放置した。その後、
同じく冷却下に、３０００回転で１５分間遠心し、血漿
を分離した。この血漿の上層から４００μl を被検血漿
としてＧＭＰ−１４０の測定に用いた。ＧＭＰ−１４０
の測定は、市販のＥＬＩＳＡキット（ＧＭＰ−１４０測
定キット（宝酒造社製））を用い、比較的希釈直線性が
良好で、希釈後の濃度が検量線の範囲内にある４倍希釈
で行った。結果を表１に示した。なお、表中、「血漿分
離」は採血から血漿分離までの放置時間を示し、数値は
平均値を示す。
【００１５】比較例１及び２ 実施例１と同様の採血管に、３．２％クエン酸ナトリウ
ム水溶液（ＣＮ：比較例１）又は１０mg／mlエチレンジ
アミン四酢酸・２カリウム生理食塩水（ＥＫ：比較例
２）を０．１５ml封入した採血用試験管を用いる以外は
実施例１と同様にして、被検血漿を採取し、実施例１と
同様にして、ＧＭＰ−１４０を測定した。結果を表１に
併せて示した。
ム水溶液（ＣＮ：比較例１）又は１０mg／mlエチレンジ
アミン四酢酸・２カリウム生理食塩水（ＥＫ：比較例
２）を０．１５ml封入した採血用試験管を用いる以外は
実施例１と同様にして、被検血漿を採取し、実施例１と
同様にして、ＧＭＰ−１４０を測定した。結果を表１に
併せて示した。
【００１６】
【表１】
【００１７】表１の結果から明らかなように、採血直後
に血漿分離を行った０分放置では、実施例１の値が最も
低く、また実施例１では、６０分、１８０分放置後にお
いても、ＧＭＰ−１４０の測定値に変動がなかった。こ
れに対し、比較例１及び２では、放置時間の延長に伴っ
て、測定値の上昇が認められた。
に血漿分離を行った０分放置では、実施例１の値が最も
低く、また実施例１では、６０分、１８０分放置後にお
いても、ＧＭＰ−１４０の測定値に変動がなかった。こ
れに対し、比較例１及び２では、放置時間の延長に伴っ
て、測定値の上昇が認められた。
【００１８】実施例２ すべての操作を室温（２５℃）で行った以外は実施例１
と同様にして、被検血漿を採取し、実施例１と同様にし
て、ＧＭＰ−１４０を測定した。結果を表２に示した。
と同様にして、被検血漿を採取し、実施例１と同様にし
て、ＧＭＰ−１４０を測定した。結果を表２に示した。
【００１９】比較例３、４ すべての操作を室温（２５℃）で行った以外は比較例
２、３と同様にして、被検血漿を採取し、実施例１と同
様にして、ＧＭＰ−１４０を測定した。結果を表２に併
せて示した。
２、３と同様にして、被検血漿を採取し、実施例１と同
様にして、ＧＭＰ−１４０を測定した。結果を表２に併
せて示した。
【００２０】
【表２】
【００２１】表２の結果から明らかなように、採血直後
に血漿分離を行った０分放置では、実施例２の値が最も
低く、６０分放置までまったく、ＧＭＰ−１４０の測定
値に変動がなかった。また、冷却下（４℃）で操作を行
った実施例１の測定値と比較しても変動がなかった。こ
れに対し、比較例３及び４では、放置時間の延長によ
り、また冷却下（４℃）で操作を行った比較例１及び２
と比べても、測定値の上昇が認められた。
に血漿分離を行った０分放置では、実施例２の値が最も
低く、６０分放置までまったく、ＧＭＰ−１４０の測定
値に変動がなかった。また、冷却下（４℃）で操作を行
った実施例１の測定値と比較しても変動がなかった。こ
れに対し、比較例３及び４では、放置時間の延長によ
り、また冷却下（４℃）で操作を行った比較例１及び２
と比べても、測定値の上昇が認められた。
【００２２】
【発明の効果】本発明によれば、採血した全血から被検
血漿を採取するまでの放置温度や放置時間などの血漿の
採取条件に影響されず、血漿中のＧＭＰ−１４０の濃度
を正確に測定することができ、しかも安価に経済的に測
定することができるので、特に臨床検査などにおいて有
用である。
血漿を採取するまでの放置温度や放置時間などの血漿の
採取条件に影響されず、血漿中のＧＭＰ−１４０の濃度
を正確に測定することができ、しかも安価に経済的に測
定することができるので、特に臨床検査などにおいて有
用である。
フロントページの続き (72)発明者 対馬 千秋 北海道札幌市中央区北８条西21丁目 (72)発明者 小林 邦彦 北海道札幌市厚別区厚別南５−15−10
Claims (1)
- 【請求項１】 血漿中のＧＭＰ−１４０を測定する方法
において、被検血漿として、採血した全血に（ａ）エチ
レンジアミン四酢酸又はその塩、（ｂ）クエン酸又はそ
の塩、（ｃ）アデノシン又はその誘導体、及び（ｄ）テ
オフィリン又はその誘導体を含有する抗凝固・抗血小板
剤組成物を添加した後、当該血液より採取した血漿を使
用することを特徴とする血漿中ＧＭＰ−１４０の測定
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7020193A JPH08220094A (ja) | 1995-02-08 | 1995-02-08 | 血漿中ｇｍｐ−１４０の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7020193A JPH08220094A (ja) | 1995-02-08 | 1995-02-08 | 血漿中ｇｍｐ−１４０の測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08220094A true JPH08220094A (ja) | 1996-08-30 |
Family
ID=12020349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7020193A Pending JPH08220094A (ja) | 1995-02-08 | 1995-02-08 | 血漿中ｇｍｐ−１４０の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08220094A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7011938B2 (en) * | 2000-11-08 | 2006-03-14 | Barts And The London Nhs Trust | Method of measuring platelet activation |
-
1995
- 1995-02-08 JP JP7020193A patent/JPH08220094A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7011938B2 (en) * | 2000-11-08 | 2006-03-14 | Barts And The London Nhs Trust | Method of measuring platelet activation |
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