JPH08245694A - 血圧降下物質とその製造用中間体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造方法 - Google Patents
血圧降下物質とその製造用中間体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造方法Info
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- JPH08245694A JPH08245694A JP7077162A JP7716295A JPH08245694A JP H08245694 A JPH08245694 A JP H08245694A JP 7077162 A JP7077162 A JP 7077162A JP 7716295 A JP7716295 A JP 7716295A JP H08245694 A JPH08245694 A JP H08245694A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ゼインを尿素で溶解変性させた後に、尿素を
ゲル濾過によって除去し、サーモライシンにより分解す
ることで、血圧降下物質を得る。 【効果】 医薬品、食品、または健康食品として安全か
つ実用的でＡＣＥ阻害効果を有し、工業的生産に適した
血圧降下物質を提供することができる。
ゲル濾過によって除去し、サーモライシンにより分解す
ることで、血圧降下物質を得る。 【効果】 医薬品、食品、または健康食品として安全か
つ実用的でＡＣＥ阻害効果を有し、工業的生産に適した
血圧降下物質を提供することができる。
Description
【０００１】
【０００２】本発明は、血圧降下物質とその製造用中間
体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造
方法に関する。
体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造
方法に関する。
【０００３】本発明に係る血圧降下物質は、高血圧の予
防、および治療のために医薬品、食品、健康食品として
利用可能である。
防、および治療のために医薬品、食品、健康食品として
利用可能である。
【０００４】
【０００５】血圧の調節には、いくつかの機構がある。
【０００６】その一つレニン-アンギオテンシン系で
は、肝臓から分泌されるアンギオテンシンノーゲンが腎
臓に存在するレニンによってアンギオテンシン-Iとな
り、アンギオテンシン-Iは血中のアンギオテンシン変換
酵素（以下ＡＣＥと略称）によってアンギオテンシン-I
Iに変換される。
は、肝臓から分泌されるアンギオテンシンノーゲンが腎
臓に存在するレニンによってアンギオテンシン-Iとな
り、アンギオテンシン-Iは血中のアンギオテンシン変換
酵素（以下ＡＣＥと略称）によってアンギオテンシン-I
Iに変換される。
【０００７】アンギオテンシン-IIは強力な昇圧ペプチ
ドであり、血管平滑筋を収縮させて血圧を上昇させる。
ドであり、血管平滑筋を収縮させて血圧を上昇させる。
【０００８】また、ＡＣＥはカリクレイン-キニン系に
も作用し、降圧性のブラジキニンを分解して血圧の上昇
に作用する。
も作用し、降圧性のブラジキニンを分解して血圧の上昇
に作用する。
【０００９】このＡＣＥを阻害することによって、血圧
の上昇抑制が可能である。
の上昇抑制が可能である。
【００１０】ＡＣＥ阻害剤としては、カプトプリルなど
が医薬品として実用化されている。
が医薬品として実用化されている。
【００１１】また、ＡＣＥ阻害剤として、多くの薬品、
高度に精製されたペプチド、食品などが報告されてい
る。
高度に精製されたペプチド、食品などが報告されてい
る。
【００１２】しかし、食品としては高度に精製されたペ
プチドは実用的ではなく、単に食品または健康食品とし
て報告されたものはその効果が弱かったり持続性がない
等、疑問のあるものが多い。
プチドは実用的ではなく、単に食品または健康食品とし
て報告されたものはその効果が弱かったり持続性がない
等、疑問のあるものが多い。
【００１３】従来のＡＣＥ阻害ペプチドは、蛋白分解物
を高度に精製したものやアミノ酸から合成したものが殆
どである。
を高度に精製したものやアミノ酸から合成したものが殆
どである。
【００１４】これらはコストの面からも食品としての実
用性は少ないものであった。
用性は少ないものであった。
【００１５】また、大豆や小麦などからいくつかの血圧
降下物質が得られており、医薬品および食品として報告
されているが、十分な効果を示すものは見あたらない。
降下物質が得られており、医薬品および食品として報告
されているが、十分な効果を示すものは見あたらない。
【００１６】例えば、特開平２−２４００２８号公報に
は、血圧降下剤として、ゼインのサーモライシン加水分
解物が記載されている。
は、血圧降下剤として、ゼインのサーモライシン加水分
解物が記載されている。
【００１７】
【００１８】しかしながら、上記の特開平２−２４００
２８号公報に記載の血圧降下剤は、ゼインが水に溶け
ず、ゼインの分解に時間がかかることから、工業的生産
に適したものではない。
２８号公報に記載の血圧降下剤は、ゼインが水に溶け
ず、ゼインの分解に時間がかかることから、工業的生産
に適したものではない。
【００１９】従って、本発明の目的は、医薬品、食品、
または健康食品として安全かつ実用的でＡＣＥ阻害効果
を有し、工業的生産に適した血圧降下物質を提供するこ
とにある。
または健康食品として安全かつ実用的でＡＣＥ阻害効果
を有し、工業的生産に適した血圧降下物質を提供するこ
とにある。
【００２０】
【００２１】本発明者らは、これらの問題を解決するた
めに種々の検討を行った結果、とうもろこしの蛋白質で
ある、水に不溶性のゼインを、前記の特開平２−２４０
０２８号公報に記載されているように、懸濁状態で直接
酵素により分解するのではなく、アンモニア等を含有す
る尿素等の蛋白質変性剤の溶液に溶解し、さらにゲル濾
過カラム等により、ゼインと尿素等の蛋白質変性剤の分
離を行い、ゼインを酵素分解を受けやすい状態にした後
に、サーモライシンなどの蛋白質分解酵素で分解したも
のに顕著なＡＣＥ阻害作用があり、血圧降下剤として有
効であり、高血圧治療及び予防に利用できることを見い
出し、本発明を完成するに至った。
めに種々の検討を行った結果、とうもろこしの蛋白質で
ある、水に不溶性のゼインを、前記の特開平２−２４０
０２８号公報に記載されているように、懸濁状態で直接
酵素により分解するのではなく、アンモニア等を含有す
る尿素等の蛋白質変性剤の溶液に溶解し、さらにゲル濾
過カラム等により、ゼインと尿素等の蛋白質変性剤の分
離を行い、ゼインを酵素分解を受けやすい状態にした後
に、サーモライシンなどの蛋白質分解酵素で分解したも
のに顕著なＡＣＥ阻害作用があり、血圧降下剤として有
効であり、高血圧治療及び予防に利用できることを見い
出し、本発明を完成するに至った。
【００２２】即ち、本発明の課題を解決するための手段
は、下記のとおりである。
は、下記のとおりである。
【００２３】第１に、ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性
させた後に、該変性剤を除去し、プロテアーゼにより分
解することで得られる血圧降下物質。
させた後に、該変性剤を除去し、プロテアーゼにより分
解することで得られる血圧降下物質。
【００２４】第２に、ゼインを尿素で溶解変性させた後
に、尿素をゲル濾過によって除去し、サーモライシンに
より分解することで得られる血圧降下物質。
に、尿素をゲル濾過によって除去し、サーモライシンに
より分解することで得られる血圧降下物質。
【００２５】第３に、ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性
させた後に、該変性剤を除去することで得られるプロテ
アーゼ易分解性ゼイン。
させた後に、該変性剤を除去することで得られるプロテ
アーゼ易分解性ゼイン。
【００２６】第４に、ゼインを尿素で溶解変性させた後
に、尿素をゲル濾過によって除去することで得られるプ
ロテアーゼ易分解性ゼイン。
に、尿素をゲル濾過によって除去することで得られるプ
ロテアーゼ易分解性ゼイン。
【００２７】第５に、ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性
させ、容易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、該
変性剤を除去し、プロテアーゼにより分解することで製
造する血圧降下物質の製造方法。
させ、容易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、該
変性剤を除去し、プロテアーゼにより分解することで製
造する血圧降下物質の製造方法。
【００２８】第６に、ゼインを尿素で溶解変性させ、容
易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、尿素をゲル
濾過によって除去し、サーモライシンにより分解するこ
とで製造する血圧降下物質の製造方法。
易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、尿素をゲル
濾過によって除去し、サーモライシンにより分解するこ
とで製造する血圧降下物質の製造方法。
【００２９】第７に、ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性
させ、容易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、該
変性剤を除去することで製造するプロテアーゼ易分解性
ゼインの製造方法。
させ、容易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、該
変性剤を除去することで製造するプロテアーゼ易分解性
ゼインの製造方法。
【００３０】第８に、ゼインを尿素で溶解変性させ、容
易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、尿素をゲル
濾過によって除去することで製造するプロテアーゼ易分
解性ゼインの製造方法。
易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、尿素をゲル
濾過によって除去することで製造するプロテアーゼ易分
解性ゼインの製造方法。
【００３１】本発明によると、ゼインを蛋白質変性剤に
より溶解変性させることで、ゼインの分子内結合が緩や
かとなり酵素作用を受け易い状態となる。
より溶解変性させることで、ゼインの分子内結合が緩や
かとなり酵素作用を受け易い状態となる。
【００３２】そして、該酵素作用を受け易い状態のもの
を、プロテアーゼによって速やかに分解することで、Ａ
ＣＥ阻害活性を持つゼインの酵素分解物が短時間に高収
率で得られる。
を、プロテアーゼによって速やかに分解することで、Ａ
ＣＥ阻害活性を持つゼインの酵素分解物が短時間に高収
率で得られる。
【００３３】本発明で用いる蛋白質変性剤としては、尿
素や塩酸グアニジンを使用することができる。
素や塩酸グアニジンを使用することができる。
【００３４】また、ゼインを溶解する際には、アンモニ
アや苛性ソーダを使用することができる。
アや苛性ソーダを使用することができる。
【００３５】蛋白質変性剤の除去は、特に限定されるも
のではないが、ゲルの種類などは任意で良く、Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ等、分子篩が可能なゲルを用いることが出来
る。
のではないが、ゲルの種類などは任意で良く、Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ等、分子篩が可能なゲルを用いることが出来
る。
【００３６】なお、バッファーについても特に定めるも
のではなく、ゲルの種類に応じたバッファーを流すこと
でゼインの分離を行うことができる。
のではなく、ゲルの種類に応じたバッファーを流すこと
でゼインの分離を行うことができる。
【００３７】分離の際のｐＨは、７．０〜１０．０が可
能であるが、８．５付近が好ましく、ｐＨが７．０未満
の場合はゼインの析出が起こり、ｐＨが１０．０を越え
るとゼインと色素等不純物との分離が悪くなる。
能であるが、８．５付近が好ましく、ｐＨが７．０未満
の場合はゼインの析出が起こり、ｐＨが１０．０を越え
るとゼインと色素等不純物との分離が悪くなる。
【００３８】また、サーモライシン等の酵素により分解
する際のｐＨ等の条件は、使用する酵素に適した条件を
用いることができる。
する際のｐＨ等の条件は、使用する酵素に適した条件を
用いることができる。
【００３９】分解に際しては、例えば、０.５Ｎの水酸
化ナトリウム等を用いてｐＨを一定にする。
化ナトリウム等を用いてｐＨを一定にする。
【００４０】
【実施例１】
【００４１】とうもろこしに含まれるゼインを、溶媒抽
出、脱脂、乾燥により調製し、８Ｍ尿素−１％アンモニ
ア溶液に溶解し、ゼインを蛋白質変性させた。
出、脱脂、乾燥により調製し、８Ｍ尿素−１％アンモニ
ア溶液に溶解し、ゼインを蛋白質変性させた。
【００４２】そして、１０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．５）で平衡化したゲルカラム（商品名＝Ｂｉｏ−
Ｇｅｌ Ｐ−２）を用いて変性剤を分離除去した。
Ｈ８．５）で平衡化したゲルカラム（商品名＝Ｂｉｏ−
Ｇｅｌ Ｐ−２）を用いて変性剤を分離除去した。
【００４３】分離された白色乳液状の変性ゼインを捕集
し、該ゼインをｐＨ８.０付近になるように０.５Ｎの水
酸化ナトリウムを用いてサーモライシンで約２時間分解
し、煮沸による熱変性によって酵素の失活を行ない、酵
素の活性を停止した。
し、該ゼインをｐＨ８.０付近になるように０.５Ｎの水
酸化ナトリウムを用いてサーモライシンで約２時間分解
し、煮沸による熱変性によって酵素の失活を行ない、酵
素の活性を停止した。
【００４４】なお、分解の際に用いる酵素は任意のもの
を用いることができるが、サーモライシンを用いた場合
には比較的高い阻害活性を持つ分解物が得られる。
を用いることができるが、サーモライシンを用いた場合
には比較的高い阻害活性を持つ分解物が得られる。
【００４５】また、酵素の反応を停止する際には、煮沸
を行う以外にも、酵素の阻害剤などを加えても良い。
を行う以外にも、酵素の阻害剤などを加えても良い。
【００４６】得られた分解物を、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ法
の山本らによる変法（日本胸部疾患学会雑誌１８
（５），Ｐ２９７−３０３，１９８０）により、ＡＣＥ
阻害活性の指標となるＩＣ５０（５０％阻害の濃度、以
下ＩＣ５０と略称する）を測定したところ、４０μｇ／
ｍｌ以下であり、ここで得られた分解物は、３時間以内
の分解で十分な活性を持つものであった。
の山本らによる変法（日本胸部疾患学会雑誌１８
（５），Ｐ２９７−３０３，１９８０）により、ＡＣＥ
阻害活性の指標となるＩＣ５０（５０％阻害の濃度、以
下ＩＣ５０と略称する）を測定したところ、４０μｇ／
ｍｌ以下であり、ここで得られた分解物は、３時間以内
の分解で十分な活性を持つものであった。
【００４７】ただし、分解時間を長くしても阻害活性は
変わらなかった。
変わらなかった。
【００４８】なお、以下の例でもＩＣ５０は、Ｌｉｅｂ
ｅｒｍａｎ法の山本らによる変法により測定した。
ｅｒｍａｎ法の山本らによる変法により測定した。
【００４９】ここで、ゼインを変性処理することなく、
サーモライシンを用い水に懸濁した状態での直接分解法
では、分解に２４時間程度かかり、且つ収量は著しく低
かった。
サーモライシンを用い水に懸濁した状態での直接分解法
では、分解に２４時間程度かかり、且つ収量は著しく低
かった。
【００５０】
【実施例２】
【００５１】実施例１と同様に調製した５００ｍｇのゼ
インを、１０ｍｌの８Ｍ尿素−１％アンモニア溶液に溶
解し、蛋白質変性させた。
インを、１０ｍｌの８Ｍ尿素−１％アンモニア溶液に溶
解し、蛋白質変性させた。
【００５２】次に、１０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
８．５）にて平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２ （ｆ
ｉｎｅ）カラム（φ３ｃｍ×４０ｃｍ）で、ゼインから
尿素を分離除去した。
８．５）にて平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２ （ｆ
ｉｎｅ）カラム（φ３ｃｍ×４０ｃｍ）で、ゼインから
尿素を分離除去した。
【００５３】分離されたゼインは、白い濁った乳白液と
して得られた。
して得られた。
【００５４】これに、１ｍｇ／ｍｌのサーモライシン
（和光純薬製）溶液２．５ｍｌを加えて４０℃，ｐＨ
８．０で２時間分解を行った。
（和光純薬製）溶液２．５ｍｌを加えて４０℃，ｐＨ
８．０で２時間分解を行った。
【００５５】分解終了後、沸騰水中で３０分処理して酵
素反応を止め、凍結真空乾燥して３１０ｍｇの粉末を得
た。
素反応を止め、凍結真空乾燥して３１０ｍｇの粉末を得
た。
【００５６】乾燥粉末のＡＣＥに対するＩＣ５０（μｇ
／ｍｌ）を、実施例１と同様に、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ法
の山本らによる変法により測定したところ、１６．６μ
ｇ／ｍｌであり、充分な活性を有するものであった。
／ｍｌ）を、実施例１と同様に、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ法
の山本らによる変法により測定したところ、１６．６μ
ｇ／ｍｌであり、充分な活性を有するものであった。
【００５７】
【実施例３】
【００５８】尿素変性ゼイン溶液からゲル濾過による尿
素の分離除去について、以下のように検討した。
素の分離除去について、以下のように検討した。
【００５９】１０ｇのゼインを４００ｍｌの８Ｍ尿素−
１％アンモニア溶液に溶解して蛋白質変性させた後、１
０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）で平衡化した
Ｂｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２（ｆｉｎｅ）カラム（φ１０ｃ
ｍ×４０ｃｍ）を用いて、尿素を分離した。
１％アンモニア溶液に溶解して蛋白質変性させた後、１
０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）で平衡化した
Ｂｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２（ｆｉｎｅ）カラム（φ１０ｃ
ｍ×４０ｃｍ）を用いて、尿素を分離した。
【００６０】そして、得られた各フラクションについ
て、ゼイン由来の吸光度（ＯＤ＝２８０ｎｍ）と尿素を
測定した。
て、ゼイン由来の吸光度（ＯＤ＝２８０ｎｍ）と尿素を
測定した。
【００６１】吸光度測定には日立分光光度計（Ｕ−２０
００）を用い、尿素測定には尿素窒素−テストワコー
（和光純薬製）を用いた。
００）を用い、尿素測定には尿素窒素−テストワコー
（和光純薬製）を用いた。
【００６２】その測定結果を、図１に示す。
【００６３】図１によると、尿素とゼインは明確に分離
していることが確認できる。
していることが確認できる。
【００６４】ゼインのフラクションを集めてサーモライ
シン（和光純薬製）１００ｍｇを１００ｍｌの水に溶解
して加え、４０℃で２時間分解を行った。
シン（和光純薬製）１００ｍｇを１００ｍｌの水に溶解
して加え、４０℃で２時間分解を行った。
【００６５】その後沸騰水中で３０分加熱して酵素反応
を停止し、凍結真空乾燥して、６．９３ｇの凍結乾燥粉
末を得た。
を停止し、凍結真空乾燥して、６．９３ｇの凍結乾燥粉
末を得た。
【００６６】
【実施例４】
【００６７】２７．５ｇのゼインを、５５０ｍｌの８Ｍ
尿素−１％アンモニア溶液に溶解し、一晩攪拌した後、
８０００ｒｐｍで２０分間遠心分離をして沈殿を取り除
き、ゲル濾過カラムによる尿素の分離除去を行った。
尿素−１％アンモニア溶液に溶解し、一晩攪拌した後、
８０００ｒｐｍで２０分間遠心分離をして沈殿を取り除
き、ゲル濾過カラムによる尿素の分離除去を行った。
【００６８】カラム分離は、Ｂｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２
（ｆｉｎｅ）をφ１２０ｍｍ×１０００ｍｍのカラムに
４００ｍｍの高さに充填し、１０ｍＭのトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ８．５）にて十分に平衡化させたものにより行
った。
（ｆｉｎｅ）をφ１２０ｍｍ×１０００ｍｍのカラムに
４００ｍｍの高さに充填し、１０ｍＭのトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ８．５）にて十分に平衡化させたものにより行
った。
【００６９】カラムで分離された白濁部分を分取し、約
８００ｍｌの易分解性ゼインを得た。
８００ｍｌの易分解性ゼインを得た。
【００７０】これにサーモライシン（和光純薬製）２５
０ｍｇを２５０ｍｌの水に溶解して加え、３７℃で一定
時間（１、２、３または６時間）分解した。
０ｍｇを２５０ｍｌの水に溶解して加え、３７℃で一定
時間（１、２、３または６時間）分解した。
【００７１】分解に際しては、０．５Ｎの水酸化ナトリ
ウムを用い、ｐＨ８．０に調整しながら行なった。
ウムを用い、ｐＨ８．０に調整しながら行なった。
【００７２】分解終了後に沸騰水中で３０分処理し、凍
結真空乾燥して、各分解時間における分解物を各々得
た。
結真空乾燥して、各分解時間における分解物を各々得
た。
【００７３】得られた各分解時間における分解物につい
て、ＡＣＥに対するＩＣ５０を各々測定した。
て、ＡＣＥに対するＩＣ５０を各々測定した。
【００７４】その結果は、次のとおりであった。
【００７５】分解時間１時間のもののＩＣ５０は、３
１．６μｇ／ｍｌであった。分解時間２時間のもののＩ
Ｃ５０は、１６．１μｇ／ｍｌであった。分解時間３時
間のもののＩＣ５０は、１８．３μｇ／ｍｌであった。
分解時間６時間のもののＩＣ５０は、２３．９μｇ／ｍ
ｌであった。
１．６μｇ／ｍｌであった。分解時間２時間のもののＩ
Ｃ５０は、１６．１μｇ／ｍｌであった。分解時間３時
間のもののＩＣ５０は、１８．３μｇ／ｍｌであった。
分解時間６時間のもののＩＣ５０は、２３．９μｇ／ｍ
ｌであった。
【００７６】上記のゲル分離後のゼインにおける酵素分
解時間とＩＣ５０の関係について考察すると、酵素分解
時間が２時間の場合が最もＩＣ５０が低くＡＣＥ阻害活
性の高いことが判明した。
解時間とＩＣ５０の関係について考察すると、酵素分解
時間が２時間の場合が最もＩＣ５０が低くＡＣＥ阻害活
性の高いことが判明した。
【００７７】
【実施例５】
【００７８】とうもろこし蛋白ゼインの大部分を占める
α−ゼインについて、酵素分解物中のペプチドを分取し
てアミノ酸配列を決定すると共に、ＡＣＥ阻害活性との
関係を調査すべく、下記に示すように実施した。
α−ゼインについて、酵素分解物中のペプチドを分取し
てアミノ酸配列を決定すると共に、ＡＣＥ阻害活性との
関係を調査すべく、下記に示すように実施した。
【００７９】７０％エタノールで抽出して得た粗α−ゼ
イン１００ｍｇを、５０℃にて４Ｍ尿素−１％アンモニ
ア溶液に溶解し放置後、実施例４と同様に、ゲル濾過に
より尿素を分離除去し、変性ゼインを得た。
イン１００ｍｇを、５０℃にて４Ｍ尿素−１％アンモニ
ア溶液に溶解し放置後、実施例４と同様に、ゲル濾過に
より尿素を分離除去し、変性ゼインを得た。
【００８０】該変性ゼインに、対ゼイン１／１００量の
サーモライシンを加え、３７℃でｐＨ８．０に調整しな
がら３時間分解を行ない、凍結真空乾燥した。
サーモライシンを加え、３７℃でｐＨ８．０に調整しな
がら３時間分解を行ない、凍結真空乾燥した。
【００８１】凍結真空乾燥後、分解物を１００％エタノ
ールに溶かして遠心分離し、上澄みと沈殿に分けた。
ールに溶かして遠心分離し、上澄みと沈殿に分けた。
【００８２】上澄みは濃縮してＦ−１画分とし、沈殿は
７５％エタノールに溶解、遠心分離し、その上澄みを濃
縮してＦ−２画分とした。
７５％エタノールに溶解、遠心分離し、その上澄みを濃
縮してＦ−２画分とした。
【００８３】Ｆ−１及びＦ−２画分のＩＣ５０は、それ
ぞれ２２μｇ／ｍｌ及び４３μｇ／ｍｌであった。
ぞれ２２μｇ／ｍｌ及び４３μｇ／ｍｌであった。
【００８４】ペプチドの分画は、０．１％ＴＦＡ溶液中
で日本分光社製逆相−ＨＰＬＣ Ｌｏｎｇ Ｃ１８ Ｃ
ｏｌｕｍｎを用いて行った。
で日本分光社製逆相−ＨＰＬＣ Ｌｏｎｇ Ｃ１８ Ｃ
ｏｌｕｍｎを用いて行った。
【００８５】その結果を図２に示す。
【００８６】また、得られた個々のフラクションについ
て、ＡＣＥ阻害の相対活性を求めると共に、アミノ酸配
列を決定した。
て、ＡＣＥ阻害の相対活性を求めると共に、アミノ酸配
列を決定した。
【００８７】各フラクションのＡＣＥ阻害の相対活性及
びそれに相当するペプチドのＩＣ−５０（公知文献も参
照）を、表１［Ｆ−１画分（１００％エタノール）］、
表２［Ｆ−２画分（７５％エタノール）］に示す。
びそれに相当するペプチドのＩＣ−５０（公知文献も参
照）を、表１［Ｆ−１画分（１００％エタノール）］、
表２［Ｆ−２画分（７５％エタノール）］に示す。
【００８８】
【表１】
【００８９】
【表２】
【００９０】これらの結果を考察すると、ＩＣ５０の低
いものが多く見られ、全体のＡＣＥ阻害活性を高くして
いるものと思われる。
いものが多く見られ、全体のＡＣＥ阻害活性を高くして
いるものと思われる。
【００９１】
【実施例６】
【００９２】５ｇのゼインを、１００ｍｌの８Ｍ尿素−
１％アンモニア溶液に溶解し、６０００ｒｐｍで１５分
間遠心分離をして沈殿を取り除き、得られた上澄みに対
してゲル濾過カラムによる尿素の分離除去を行った。
１％アンモニア溶液に溶解し、６０００ｒｐｍで１５分
間遠心分離をして沈殿を取り除き、得られた上澄みに対
してゲル濾過カラムによる尿素の分離除去を行った。
【００９３】カラム分離は、１０ｍＭのトリス塩酸緩衝
液で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２カラム（φ３０
ｍｍ×４００ｍｍ）で処理し、ゼインから尿素を分離除
去した。
液で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−２カラム（φ３０
ｍｍ×４００ｍｍ）で処理し、ゼインから尿素を分離除
去した。
【００９４】分離されたゼイン溶液に、サーモライシン
（和光純薬製）５０ｍｇを水に溶かしたものを加え、４
０℃で２時間分解を行った。
（和光純薬製）５０ｍｇを水に溶かしたものを加え、４
０℃で２時間分解を行った。
【００９５】同様に、デナチーム（ナガセ生化学工業
(株)製）、Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ製）、パパイン（Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ製）、プロテアーゼＡ（天野製
薬製）の４種類の酵素について、各々、５０ｍｇを水に
溶かしたものを分離されたゼイン溶液に加え、４０℃で
２時間分解を行った。
(株)製）、Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ製）、パパイン（Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ製）、プロテアーゼＡ（天野製
薬製）の４種類の酵素について、各々、５０ｍｇを水に
溶かしたものを分離されたゼイン溶液に加え、４０℃で
２時間分解を行った。
【００９６】分解に際しては、いずれも０．５Ｎの水酸
化ナトリウム溶液を用いてｐＨを調整しながら行なっ
た。
化ナトリウム溶液を用いてｐＨを調整しながら行なっ
た。
【００９７】この時、中和に要した０．５Ｎの水酸化ナ
トリウム溶液の所要量を図３に示す。
トリウム溶液の所要量を図３に示す。
【００９８】分解終了後に沸騰水中で３０分処理し、凍
結真空乾燥して、各分解時間における分解物を各々得
た。
結真空乾燥して、各分解時間における分解物を各々得
た。
【００９９】そして、得られた各分解時間における分解
物について、ＡＣＥに対するＩＣ５０を各々測定した。
物について、ＡＣＥに対するＩＣ５０を各々測定した。
【０１００】その結果は、次のとおりであった。
【０１０１】サーモライシンを用いた場合は、分解時の
ｐＨが８．０であり、ＩＣ５０が３１．２μｇ／ｍｌで
あった。
ｐＨが８．０であり、ＩＣ５０が３１．２μｇ／ｍｌで
あった。
【０１０２】パパインを用いた場合は、分解時のｐＨが
７．５であり、ＩＣ５０が１３５．０μｇ／ｍｌであっ
た。
７．５であり、ＩＣ５０が１３５．０μｇ／ｍｌであっ
た。
【０１０３】デナチームを用いた場合は、分解時のｐＨ
が８．０であり、ＩＣ５０が４５０．７μｇ／ｍｌであ
った。
が８．０であり、ＩＣ５０が４５０．７μｇ／ｍｌであ
った。
【０１０４】Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎを用いた場合は、分
解時のｐＨが８．５であり、ＩＣ５０が３３２．３μｇ
／ｍｌであった。
解時のｐＨが８．５であり、ＩＣ５０が３３２．３μｇ
／ｍｌであった。
【０１０５】プロテアーゼＡを用いた場合は、分解時の
ｐＨが８．０であり、ＩＣ５０が２０６．７μｇ／ｍｌ
であった。
ｐＨが８．０であり、ＩＣ５０が２０６．７μｇ／ｍｌ
であった。
【０１０６】上記の結果を考察すると、いずれの酵素に
も活性は見られるが、サーモライシンが最も良好であっ
た。
も活性は見られるが、サーモライシンが最も良好であっ
た。
【０１０７】
【０１０８】本発明に係る分解物の病態動物に対する生
理活性について、下記のように試験した。
理活性について、下記のように試験した。
【０１０９】実施例４で得たゼイン分解物（１、２、３
または６時間分解のもの）を、脳卒中易発症性高血圧自
然発症ラット（ＳＨＲＳＰ）に対し、各々一回経口投与
し、その後経時的にラットの血圧をＴａｉｌ ｃｕｆｆ
法（室町機械ＫＫ ＭＫ−１０３０型）により、各々測
定した。
または６時間分解のもの）を、脳卒中易発症性高血圧自
然発症ラット（ＳＨＲＳＰ）に対し、各々一回経口投与
し、その後経時的にラットの血圧をＴａｉｌ ｃｕｆｆ
法（室町機械ＫＫ ＭＫ−１０３０型）により、各々測
定した。
【０１１０】その結果を、図４に５匹の平均値として実
測値データを示し、図５に投与前の状態からの血圧変動
値をコントロールに対比して示した。
測値データを示し、図５に投与前の状態からの血圧変動
値をコントロールに対比して示した。
【０１１１】これらの結果を考察すると、水を与えたも
の（コントロール）の血圧は、ほぼ一定であるが、ゼイ
ン分解物を与えたものは水を与えたものに比較して最大
で２０ｍｍＨｇの血圧降下を示した。
の（コントロール）の血圧は、ほぼ一定であるが、ゼイ
ン分解物を与えたものは水を与えたものに比較して最大
で２０ｍｍＨｇの血圧降下を示した。
【０１１２】また、実施例４で得たゼイン分解物は、２
４時間後も血圧降下作用があり、効果が長時間持続して
いることが確認できる。
４時間後も血圧降下作用があり、効果が長時間持続して
いることが確認できる。
【０１１３】従って、本発明によると、製造工程におけ
る酵素処理時間を大幅に短縮することができるため工業
的生産に適しており、得られたゼイン分解物の阻害活性
が高く、血圧降下作用が長時間持続する。
る酵素処理時間を大幅に短縮することができるため工業
的生産に適しており、得られたゼイン分解物の阻害活性
が高く、血圧降下作用が長時間持続する。
【０１１４】
【０１１５】本発明によると、医薬品、食品、または健
康食品として安全かつ実用的でＡＣＥ阻害効果を有し、
工業的生産に適した血圧降下物質を提供することができ
る。
康食品として安全かつ実用的でＡＣＥ阻害効果を有し、
工業的生産に適した血圧降下物質を提供することができ
る。
【図１】ゲル濾過分離の結果を示す図
【図２】ＨＰＬＣによる分離結果を示す図
【図３】尿素除去ゼイン溶液の各種プロテアーゼによる
加水分解の際の中和に要した水酸化ナトリウム溶液の所
要量を示す図
加水分解の際の中和に要した水酸化ナトリウム溶液の所
要量を示す図
【図４】ゼイン分解物の血圧に対する効果を示す図
【図５】ゼイン分解物の血圧に対する効果をコントロー
ルに対する血圧変動値として示す図
ルに対する血圧変動値として示す図
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＵ Ａ６１Ｋ 37/18 ＡＢＵ
Claims (8)
- 【請求項１】 ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性させた
後に、該変性剤を除去し、プロテアーゼにより分解する
ことで得られる血圧降下物質。 - 【請求項２】 ゼインを尿素で溶解変性させた後に、尿
素をゲル濾過によって除去し、サーモライシンにより分
解することで得られる血圧降下物質。 - 【請求項３】 ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性させた
後に、該変性剤を除去することで得られるプロテアーゼ
易分解性ゼイン。 - 【請求項４】 ゼインを尿素で溶解変性させた後に、尿
素をゲル濾過によって除去することで得られるプロテア
ーゼ易分解性ゼイン。 - 【請求項５】 ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性させ、
容易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、該変性剤
を除去し、プロテアーゼにより分解することで製造する
血圧降下物質の製造方法。 - 【請求項６】 ゼインを尿素で溶解変性させ、容易に酵
素分解を受ける性質を付加した後に、尿素をゲル濾過に
よって除去し、サーモライシンにより分解することで製
造する血圧降下物質の製造方法。 - 【請求項７】 ゼインを蛋白質変性剤で溶解変性させ、
容易に酵素分解を受ける性質を付加した後に、該変性剤
を除去することで製造するプロテアーゼ易分解性ゼイン
の製造方法。 - 【請求項８】 ゼインを尿素で溶解変性させ、容易に酵
素分解を受ける性質を付加した後に、尿素をゲル濾過に
よって除去することで製造するプロテアーゼ易分解性ゼ
インの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7077162A JPH08245694A (ja) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | 血圧降下物質とその製造用中間体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7077162A JPH08245694A (ja) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | 血圧降下物質とその製造用中間体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08245694A true JPH08245694A (ja) | 1996-09-24 |
Family
ID=13626097
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7077162A Pending JPH08245694A (ja) | 1995-03-09 | 1995-03-09 | 血圧降下物質とその製造用中間体であるプロテアーゼ易分解性ゼイン及びそれらの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08245694A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002088098A (ja) * | 2000-09-11 | 2002-03-27 | Senmi Ekisu Co Ltd | アコヤ貝由来のａｃｅ阻害ペプチド |
| WO2005118619A1 (ja) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 血圧降下作用を有するジペプチド |
| FR2925500A1 (fr) * | 2007-12-21 | 2009-06-26 | Vincience Sa | Peptide derive d'une proteine de la famille des aquaporines et composition cosmetique et/ou pharmaceutique le contenant |
| FR2925501A1 (fr) * | 2007-12-21 | 2009-06-26 | Vincience Sa | Peptide activateur de la synthese des aquaporines et composition cosmetique et/ou pharmaceutique le contenant |
| CN107964034A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-04-27 | 江苏大学 | 酪蛋白活性肽的超声辅助模拟消化方法及保健食品应用 |
| CN114471388A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-13 | 大连民族大学 | 一种普遍适用的疏水外壳凝胶微粒的制备方法 |
-
1995
- 1995-03-09 JP JP7077162A patent/JPH08245694A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002088098A (ja) * | 2000-09-11 | 2002-03-27 | Senmi Ekisu Co Ltd | アコヤ貝由来のａｃｅ阻害ペプチド |
| WO2005118619A1 (ja) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 血圧降下作用を有するジペプチド |
| JPWO2005118619A1 (ja) * | 2004-06-03 | 2008-05-08 | キリンホールディングス株式会社 | 血圧降下作用を有するジペプチド |
| FR2925500A1 (fr) * | 2007-12-21 | 2009-06-26 | Vincience Sa | Peptide derive d'une proteine de la famille des aquaporines et composition cosmetique et/ou pharmaceutique le contenant |
| FR2925501A1 (fr) * | 2007-12-21 | 2009-06-26 | Vincience Sa | Peptide activateur de la synthese des aquaporines et composition cosmetique et/ou pharmaceutique le contenant |
| WO2009112645A1 (fr) * | 2007-12-21 | 2009-09-17 | Societe D'extraction Des Principes Actifs S.A. (Vincience) | Peptide activateur de la synthese des aquaporines |
| WO2009106715A3 (fr) * | 2007-12-21 | 2009-10-22 | Societe D'extraction Des Principes Actifs S.A. (Vincience) | Peptide derive d'une proteine de la famille des aquaporines |
| US8450456B2 (en) | 2007-12-21 | 2013-05-28 | Isp Investments Inc. | Activating peptide of the synthesis of aquaporins and cosmetic and/or pharmaceutical composition containing it |
| CN107964034A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-04-27 | 江苏大学 | 酪蛋白活性肽的超声辅助模拟消化方法及保健食品应用 |
| CN114471388A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-13 | 大连民族大学 | 一种普遍适用的疏水外壳凝胶微粒的制备方法 |
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