JPH0826998A - 哺乳類における肺細気管支漏出を軽減する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 本発明は有効量の葉酸拮抗物質、メトトレキ
セートの投与により哺乳類における肺毛細血管漏出を軽
減する方法を提供する。 【効果】 インターロイキン−２の抗腫瘍効果と抵触す
ることなく肺毛細血管漏出を軽減することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の分野】本発明は有効量の葉酸拮抗物質であるメ
トトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）を投与す
ることにより哺乳類における肺毛細血管漏出（ｌｕｎｇ
ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｌｅａｋ）を軽減する方法に関
する。

【０００２】

【発明の背景】肺毛細血管漏出症候群は、患者へのサイ
トカイン類、リンホカイン類、成長因子類、組み換えタ
ンパク質類などの投与によりもたらされる投薬量制限毒
性（ｄｏｓｅ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｔａｘｉｃｉｔｙ）
であり、高い罹患率を与える。肺毛細血管漏出は血管の
透過率の上昇によるものであり、多−臓器系機能障害
（ｍｕｌｔｉ−ｏｒｇａｎ ｓｙｓｔｅｍ ｄｙｓｆｕ
ｎｃｔｉｏｎ）及び全身性体液蓄積（ｇｅｎｅｒａｌｉ
ｚｅｄ ｆｌｕｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ）、な
らびに特に肺における体液の蓄積により顕症される。肺
毛細血管漏出を有する患者は医療に加えて呼吸及び換気
のサポート（ｓｕｐｐｏｒｔ）が必要である（Ｊ．Ｐ．
Ｓｉｅｇｅｌ ａｎｄ Ｒ．Ｋ．Ｐｕｒｉ，Ｉｎｔｅｒ
ｌｅｕｋｉｎ−２ ｔａｘｉｃｉｔｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏ
ｌ．９，ｐｐ６９４−７０４，１９９１を参照）。肺毛
細血管漏出の最も問題の多い影響は肺への体液の溢血で
あり、それにより間質性肺水腫が起こり、多くの場合サ
イトカイン、リンホカイン、成長因子又はタンパク質療
法の停止ならびに補足酸素及び他の呼吸及び換気支持手
段が必要である。

【０００３】これまでリンホカイン インターロイキン
−２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２）（ＩＬ−２）によ
って誘導される肺毛細血管漏出を軽減するためにコルチ
コステロイド類が用いられてきた。しかしコルチコステ
ロイド類はＩＬ−２の抗腫瘍効率に悪影響を与える（Ｖ
ｅｔｔｏ，Ｊ．Ｔ．，Ｍ．Ｚ．Ｐａｐａ，Ｍ．Ｔ．Ｌｏ
ｉｔｚｅ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．５：４９６−５
０３，１９８７；Ｐａｐａ Ｍ．Ｚ．，Ｊ．Ｔ．Ｖｅｔ
ｔｏ，Ｓ．Ｅ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎ，Ｊ．Ｊ．Ｍ
ｕｌｅ ａｎｄ Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ．Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．４６：５６１８−５６２３，１９８
６）。

【０００４】

【発明の概略】本発明は肺毛細血管漏出の軽減に有効な
量の葉酸拮抗物質、メトトレキセートを哺乳類に投与す
ることを含む、該哺乳類における肺毛細血管漏出を軽減
する方法を提供する。葉酸拮抗物質、メトトレキセート
の有効量は約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋ
ｇである。葉酸拮抗物質、メトトレキセートは経口的、
腹腔内、皮下又は静脈内に投与される。

【０００５】本発明の方法はリンホカイン、インターロ
イキン−２によっ誘導される肺毛細血管漏出を軽減する
ために特に有効である。インターロイキン−２によって
誘導される肺毛細血管漏出を軽減するために本発明の方
法を用いる場合、葉酸拮抗物質メトトレキセートをイン
ターロイキン−２の投与に添えて投与する。特に葉酸拮
抗物質メトトレキセートはＩＬ−２の腹腔内投与と同
時、その前又はその後に投与される。

【０００６】本発明は哺乳類における肺毛細血管漏出の
軽減に有効量のメトトレキセートを製薬学的に許容し得
る担体と共に含む組成物も提供する。

【０００７】

【発明の詳細な記述】本発明に従い、有効量の葉酸拮抗
物質メトトレキセートの投与により哺乳類における肺毛
細血管漏出を軽減する。

【０００８】メトトレキセートはＮ−［４−［［（２，
４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミ
ノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸として既知であ
り、構造式：

【０００９】

【化１】

【００１０】を有する。以下の参照文献はメトトレキセ
ートの製造（Ｓｅｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７１，１７５３（１９４９）を参
照）；メトトレキセートの代謝（Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１２２，１５
４（１９５８）及びＨｅｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２５，１００８，１０１
８（１９６５）を参照）；メトトレキセートの毒性：Ｃ
ｏｎｄｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ １３，２２
２−２４９（１９６０）、同上、２３，１２６（１９６
９）；メトトレキセートの薬物動態学的モデル：Ｂｉｓ
ｃｈｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ
５９，１４９（１９７０）；ｅｉｄｅｍ，同上、６０，
１１２８（１９７１）；メトトレキセートの代謝及び薬
物動態学：Ｗ．Ｅ．Ｅｖａｎｓ，Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｋｉｎｅｔ．１９８０，５１８−５４８；メトト
レキセートの臨床薬理学：Ｊ．Ｒ．Ｂｅｒｔｉｎｏ，Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３，３５９−３７５
（１９８１）；Ｊ．Ｊｏｌｉｖｅｔ ｅｔ ａｌ．，
Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０９，１０９４−１１０
４（１９８３）及び慢性関節リウマチにおけるメトトレ
キセートの臨床経験：Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１２，
Ｓｕｐｐｌ，１２，１−４４（１９８５）につき記載し
ている。

【００１１】メトトレキセートはジヒドロ葉酸レダクタ
ーゼを阻害する。葉酸はＤＮＡ合成、修復、細胞複製の
過程でこの酵素によりテトラヒドロ葉酸に還元されねば
ならい。従ってメトトレキセートは細胞の再生を妨害す
る。メトトレキセート添付文書、Ｌｅｄｅｒｌｅ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐｅａｒｌ Ｒｉｖｅｒ，Ｎ．
Ｙ．１０９６５及びその中の参照文献を参照されたい。
これまでメトトレキセートが毛細血管漏出を軽減すると
いう報告はない。

【００１２】哺乳類における肺毛細血管漏出の軽減に有
効な葉酸拮抗物質メトトレキセートの量は約０．０２５
ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇである。好ましい範囲
は０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇである。葉
酸拮抗物質メトトレキセートは経口的、腹腔内、皮下又
は静脈内に投与される。経口的投与が好ましい。

【００１３】本発明の明確な利点は、有効投薬量のメト
トレキセートの投与による毛細血管漏出の軽減が病院医
療の経費を減少させることである。患者は集中治療監視
において処置する必要はなく、呼吸及び換気支持は必要
でない。これまでＩＬ−２誘導肺毛細血管漏出の軽減に
用いられてきたコルチコステロイドと異なり、メトトレ
キセートはＩＬ−２の抗腫瘍有効性を損なわない。かく
してさらに、より高投薬量のＩＬ−２又は他のサイトカ
イン類、リンホカイン類もしくはタンパク質類を投与
し、抗がん応答速度を増加させることができる。

【００１４】インターロイキン−２（ＩＬ−２）はヒト
に投与するべく最初に精製された組み換えリンホカイン
類の１つであり、ある種のヒトの悪性（腎細胞がん及び
黒色腫）の処置のために最も研究されたリンホカインで
ある。がんのためのＩＬ−２療法に伴う投薬量制限毒性
は肺における毛細血管漏出である。

【００１５】ヒト組み換えインターロイキン−２製品、
ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ^Rは、分子量が約１５，３００ダル
トンの高度に精製されたタンパク質である。添付文書Ｃ
ｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉ
ｌｌｅ，ＣＡ及びその中の参照文献を参照されたい。化
学名はデス−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインタ
ーロイキン−２である。製品は、ヒトインターロイキン
−２遺伝子の類似体を含む遺伝子操作されたＥ．コリ
（Ｅ．ｃｏｌｉ）を用いた組み換えＤＮＡ法により生産
される。ヒト細胞系について行われた試験管内研究は：
ａ）リンパ球分裂促進（ｌｙｍｐｈｅｃｙｔｅ ｍｉｔ
ｏｇｅｎｅｓｉｓ）の強化及びヒトインターロイキン−
２依存性細胞系の長期成長の賦活；ｂ）リンパ球細胞障
害性の強化；ｃ）リンホカイン−活性化（ＬＡＫ）及び
ナチュラル（ＮＫ）キラー細胞活性の誘導；ならびに
ｄ）インターフェロン−ガンマ生産の誘導を含むＰＲＯ
ＬＥＵＫＩＮ^Rの免疫調節性（ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌ
ａｔｏｒｙ ｐｒｏｐｅｒｔｙ）を示す。選ばれたネズ
ミ腫瘍モデル及び病院において生体内で試験すると、Ｐ
ＲＯＬＥＵＫＩＮ^Rは投薬量依存的に複数の免疫学的効
果を与える。これらの効果には強いリンパ球増加症、好
酸球増多症及び血小板減少症を伴う細胞性免疫の活性
化、ならびに腫瘍壊死因子、ＩＬ−１及びガンマインタ
ーフェロンを含むサイトカイン類の生産が含まれる。ネ
ズミ腫瘍モデルにおける生体内実験は腫瘍成長の阻害を
示した。

【００１６】ＩＬ−２により誘導される毛細血管漏出の
軽減におけるメトトレキセートの有効性は、ＩＬ−２誘
導毛細血管漏出のネズミモデルにより示される（Ｍ．Ｒ
ｏｓｅｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ｅ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅ
ｎ ａｎｄ Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｅｘｔｒａ
ｖａｓａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ
Ｆｌｕｉｄ Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｓｙ
ｓｔｅｍｉｃ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−
２，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖ
ｏｌ．１３７，ｐｐ１７３５−１７４２，１９８６）。
メトトレキセートはＩＬ−２の投与に添えて投与され
る。そのような添付投与にはＩＬ−２の投与と同時、そ
の前又はその後の投与が含まれる。ＩＬ−２投与の前の
メトトレキセートの投与の場合、ＩＬ−２の投与の約１
時間〜約５時間前の時間を用いることができる。ＩＬ−
２投与の約１時間前の時間が好ましい。

【００１７】雄のＣ５７／Ｂ１６マウス（Ｃｈａｒｌｅ
ｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を用い
る。ヒトＩＬ−２、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ^R（比活性１
６．４ｘ１０⁶ＩＵ／ｍｇ）はＣｅｔｕｓ Ｏｎｃｏｌ
ｏｇｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃ
Ａから購入する。マウスを４日間かけて９投薬のＩＬ−
２（５００，０００ＩＵ／投薬）で腹腔内処置する。第
１日に２投薬のみ、第２日及び第３日に３投薬、第４日
に１投薬を投与する。ＩＬ−２の最後の投薬の３時間
後、マウスに１．０μＣｉの¹²⁵ヨウ素化牛血清アルブ
ミンを静脈内に注射する。放射性アルブミン投与の１時
間後、マウスの体重を測定し、犠牲にし、放射性の分析
のために血液のアリコートを集める。肺を２ｍｌのリン
酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）でフラッシし、切り出
し、ブロッティングし、秤量し、放射性に関して分析す
る。放射性測定はガンマカウンターを用いて行い、結果
を１分当たりのカウント数（ｃｐｍ）として示す。

【００１８】ＩＬ−２誘導毛細血管漏出へのメトトレキ
セートの効果を確かめるために、０．５ｍｇ／ｋｇ又は
０．２５ｍｇ／ｋｇ又は０．１２５ｍｇ／ｋｇの投薬量
のメトトレキセートを、ＩＬ−２の各投薬の１時間前に
経口的に投与する（従って４日間かけて９投薬のメトト
レキセートが投与され、各投薬はＩＬ−２の各投与の１
時間前に投与される）。メトトレキセートはＣｌｉｎｉ
ｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｃｔｉｏｎ，Ｌｅｄｅ
ｒｌｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐｅａｒｌ Ｒｉ
ｖｅｒ，ＮＹから得る。この実験の結果を表１に記載す
る。

【００１９】

【表１】

【００２０】＊ リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を
与えられた標準マウスと有意に異なる（Ｓｔｕｄｅｎｔ
ｔ 試験、ｐ＜０．０５）。

【００２１】† ＩＬ−２群と有意に異なる（Ｓｔｕｄ
ｅｎｔ ｔ 試験、ｐ＜０．０５）。 ＊＊ＩＬ−２の各投薬量＝５００，０００ＩＵ。

【００２２】各群は１０〜１５のマウスを含む。ＳＥ＝
平均の標準偏差。

【００２３】肺の重量及び肺に蓄積する放射性の増加は
マウスにおけるＩＬ−２誘導毛細血管漏出を示すのに用
いられるパラメーターであるので（Ｍ．Ｒｏｓｅｎｓｔ
ｅｉｎ，Ｓ．Ｅ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎ ａｎｄ
Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ Ｆｌｕｉｄ
Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ
Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂ
ｉｎａｎｔ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２，Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３７，
ｐｐ１７３５−１７４２，１９８６）、上に示す結果は
メトトレキセートがＩＬ−２により誘導される毛細血管
漏出の軽減に例外的に有効であることを示している。肺
の重量及び肺に蓄積する放射性は、ＩＬ−２群のマウス
と比較すると、メトトレキセートで予備処置したマウス
の場合に有意に低い。上表１に示される通り、メトトレ
キセートの最小有効量はＩＬ−２処置の１時間前に経口
的に投与される０．２５ｍｇ／ｋｇである。血液中に存
在する放射性はすべての群において類似であり、種々の
処置群のマウスに等量の放射性アルブミンが投与されて
いることを示している。

【００２４】上記と同一の試験案を用い、ＩＬ−２の毎
日の最初の投薬の投与の１時間前に、０．５ｍｇ／ｋｇ
又は１ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇのメトトレキセート
を毎日１回投薬しても、ＩＬ−２により誘導される毛細
血管漏出の軽減に有効である。

【００２５】雄のＣ５７／Ｂ１６マウス（Ｃｈａｒｌｅ
ｓ Ｒｉｖｅｒ．Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を用い
る。ヒトＩＬ−２、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ^R（比活性１
６．４ｘ１０⁶ＩＵ／ｍｇ）はＣｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡから購入
する。マウスを４日間かけて９投薬のＩＬ−２（５０
０，０００ＩＵ／投薬）で腹腔内処置する。第１日に２
投薬のみ、第２日及び第３日に３投薬、第４日に１投薬
を投与する。ＩＬ−２の最初の投薬の１時間前に毎日１
回の投薬のメトトレキセートを経口的に投与した。従っ
て４日間かけて４投薬のメトトレキセートが投与され
た。ＩＬ−２の最後の投薬の３時間後、マウスに１．０
μＣｉの¹²⁵ヨウ素化牛血清アルブミンを静脈内に注射
する。放射性アルブミン投与の１時間後、マウスの体重
を測定し、犠牲にし、放射性の分析のために血液のアリ
コートを集める。肺を２ｍｌのリン酸塩緩衝生理食塩水
（ＰＢＳ）でフラッシし、切り出し、ブロッティング
し、秤量し、放射性に関して分析する。放射性測定はガ
ンマカウンターを用いて行い、結果を１分当たりのカウ
ント数（ｃｐｍ）として示す。この実験の結果を表２に
示す。

【００２６】

【表２】

【００２７】＊ リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）標
準と比較してｐ＜０．０５、Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ 試
験。

【００２８】† ＩＬ−２群と比較してｐ＜０．０５。

【００２９】ＳＥ＝平均の標準偏差。

【００３０】ｎ＝群当たり１０。

【００３１】＊＊ＩＬ−２の各投薬量＝５００，０００
ＩＵ。

【００３２】メトトレキセート投与管理は２つの範疇
（１回又は複数回投薬）にわけることができるので、上
記の２つの実験はＩＬ−２誘導毛細血管漏出へのメトト
レキセートの有益な効果がスケジュール依存的でないこ
とを示す。従って当該技術分野における熟練者に既知の
１回又は複数回投薬管理を用いて治療的有効投薬量のメ
トトレキセートをデリバーすることができる。さらにＩ
Ｌ−２処置に対するメトトレキセート投与のタイミング
は、毛細血管漏出の減少の最大有益効果を達成できるよ
うに調節することができる。好ましい管理はＩＬ−２の
投与の１〜５時間前の０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜２．０ｍ
ｇ／ｋｇのメトトレキセートの経口的投与である。最も
好ましいのはＩＬ−２の投与の１時間前の０．０２５ｍ
ｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇのメトトレキセートの経口
的投与である。特に最も好ましい管理は、ＩＬ−２の投
与の１時間前の０．５ｍｇ／ｋｇのメトトレキセートの
経口的投与である。

【００３３】これまでコルチコステロイドがこのネズミ
モデルにおいて毛細血管漏出の処置のために用いられて
きたが、この薬剤を用いた処置はＩＬ−２の抗腫瘍効果
を損なう（Ｍ．Ｚ．Ｐａｐｐａ，Ｊ．Ｔ．Ｖｅｔｔｏ，
Ｓ．Ｅ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎ，Ｊ．Ｊ．Ｍｕｌｅ
ａｎｄ Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ．Ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆ Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ ｏｎ ｔｈ
ｅ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｌ
ｙｍｐｈｏｋｉｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋｉｌｌｅ
ｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２
ｉｎ Ｍｉｃｅ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
Ｖｏｌ．４６，ｐｐ５６１８−５６２３，１９８６）。

【００３４】コルチコステロイドと対照的に、メトトレ
キセートは以下の案を用いた結果により示される通り、
ＩＬ−２の有効性と抵触しない：雄のＣ５７／Ｂ１６マ
ウスにＭＣＡ−２０５腫瘍に由来する１ｘ１０⁴の細胞
を静脈内に注射する。以前の研究はメチルコラントレン
誘導がん（例えばＭＣＡ−１０５又はＭＣＡ−２０５）
に由来するこれらの腫瘍細胞がＩＬ−２療法に応答する
ことを示した（Ｍ．Ｚ．Ｐａｐｐａ，Ｊ．Ｔ．Ｖｅｔｔ
ｏ，Ｓ．Ｅ．Ｅｔｔｉｎｇｈａｕｓｅｎ，Ｊ．Ｊ．Ｍｕ
ｌｅ ａｎｄ Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ．Ｅｆｆｅ
ｃｔ ｏｆ Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ ｏｎ
ｔｈｅ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋｉｌ
ｌｅｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ
−２ｉｎ Ｍｉｃｅ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，Ｖｏｌ．４６，ｐｐ５６１８−５６２３，１９８
６）。２４時間後、ＭＣＡ−２０５処置マウスを群に分
ける（ｎ＝５／群）。１群のマウスをリン酸塩緩衝生理
食塩水で処置する（ＰＢＳ標準）。第２の群のマウスを
５００，０００ＩＵのＩＬ−２で１日に３回処置する。
さらに別の群のマウスを１日に３回、０．５ｍｇ／ｋｇ
又は０．２５ｍｇ／ｋｇのメトトレキセートの経口的投
薬で処置し、その１時間後にＩＬ−２で処置する。合計
１５投薬のＩＬ−２又はＩＬ−２とメトトレキセートを
５日間かけて投与する。メトトレキセートはＩＬ−２の
各投薬の１時間前に経口的に投与する。治療の５日後、
マウスを犠牲にし、肺をインディアインクで染色し（腫
瘍を現すため）、Ｆｅｋｅｔｔｅｓ溶液で脱染する。次
いで存在する腫瘤の数に関して肺に得点をつける。ＩＬ
−２の有効性の決定のためのこの案は、Ｆｒａｋｅｒｅ
ｔ ａｌ（Ｄ．Ｌ．Ｆｒａｋｅｒ，Ｊ．Ｌａｎｇｓｔｅ
ｉｎ，Ｊ．Ａ．Ｎｏｒｔｏｎ，Ｐａｓｓｉｖｅ Ｉｍｍ
ｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｔｕｍｏｒ Ｎ
ｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ Ｐａｒｔｉａｌｌｙ
Ａｂｒｏｇａｔｅｓ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ Ｔ
ａｘｉｃｉｔｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉ
ｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．１７０，ｐ
ｐ１０１５−１０２０，１９８９）により用いられた案
から適応させる。この実験の結果を表３に示す：

【００３５】

【表３】

【００３６】＊ 標準群と優位に異なる、ｐ＜０．０
５、ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ 試験；ＳＥ＝標準偏差。

【００３７】† 標準群との差なし、Ｓｔｕｄｅｎｔ
ｔ 試験。

【００３８】＊＊ＩＬ−２の各投薬量＝５００，０００
ＩＵ。

【００３９】上記の実験は、このＩＬ−２応答性ネズミ
腫瘍モデルにおいてメトトレキセートがＩＬ−２の有効
性と抵触しないことを示す。従ってＩＬ−２療法を受け
ている患者においてＩＬ−２の有効性は損なわれず、Ｉ
Ｌ−２により誘導される毛細血管漏出は軽減することが
予想される。さらに上記の結果は、この動物モデルにお
いてＩＬ−２の不在下におけるメトトレキセートは抗腫
瘍性を示さないことを示している。

【００４０】上記の実験の肺毛細血管漏出の軽減におけ
るメトトレキセートの作用の機構は確立されなかった。
しかしメトトレキセートはジヒドロ葉酸レダクターゼの
酵素活性を阻害することが既知である（Ｍ．Ｆｌｅｉｓ
ｈｅｒ，Ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ Ａｎａｌｏｇｓ，Ｍｅ
ｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｏ
ｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｆｆｉｃａｃ
ｙ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｍｏｎｉｔｏ
ｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．１５，ｐｐ５２１−５２６，１９９
３）。メトトレキセートを哺乳類に投与すると、それは
メトトレキセートポリグルタメートにも変換され、メト
トレキセートのポリグルタメートが例えばテトラヒドロ
葉酸を補因子として必要とする５−アミノイミダゾール
−４−カルボキシアミドリボヌクレオチドトランスホル
ミラーゼなどの他の酵素を阻害することも既知である。
従ってジヒドロ葉酸レダクターゼの他の疎外剤、例えば
（例えばＴｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ^R、Ｅｄａｔｒｅｘ
ａｔｅ^R）又は５−アミノイミダゾール−４−カルボキ
シアミドリボヌクレオチドトランスホルミラーゼの疎外
剤も肺毛細血管漏出の軽減に有用であろうと思われる。

【００４１】他のサイトカイン類、リンホカイン類、成
長因子類及び他の組み換えタンパク質類により誘導され
る毛細血管漏出（Ｋ．Ｓ．Ａｎｔｍａｎ，Ｊ．Ｄ．Ｇｒ
ｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｅｌｉａｓ ｅｔ ａｌ Ｅｆｆｅｃ
ｔ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｇｒ
ａｎｕｌｏｃｙｔｅ Ｍａｃｒｏｐｈａｓｅ Ｃｏｌｏ
ｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ ｏｎ
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｍｙｅｌ
ｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ
Ｊ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．３１９，５９３−５９８，１９
８８；Ｓ．Ｊ．Ｂｒａｎｄｔ，Ｗ．Ｐ．Ｐｅｔｅｒｓ，
Ｓ．Ｋ．Ａｔｗａｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ Ｍａｃｒ
ｏｐｈａｇｅ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ
Ｆａｃｔｏｒ ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ
Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ａｆｔｅｒ Ｈｉｇｈ
Ｄｏｓｅ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ａｕｔ
ｏｌｏｇｏｕｓ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅ
ｄ．，Ｖｏｌ．３１８：８６９−８７６，１９８８）も
葉酸拮抗物質メトトレキセートの投与により軽減するこ
とができると思われる。

【００４２】メトトレキセートは経口的に、例えば不活
性希釈剤又は同化可能な食用担体を用いて投与すること
ができ、あるいはそれを硬質又は軟質殻ゼラチンカプセ
ル中に封入することができ、あるいはそれを錠剤に圧縮
することができ、あるいはそれを常食の食物と混合する
ことができる。経口的治療的投与の場合、メトトレキセ
ートは賦形剤と混合し、摂取可能な錠剤（ｉｎｇｅｓｔ
ａｂｌｅ ｔａｂｌｅｔｓ）、バッカル錠剤、トロー
チ、カプセル、エリキサー、懸濁液、シロップ、ウェハ
ーなどの形態で用いることができる。そのような組成物
及び製剤は少なくとも０．０５％のメトトレキセートを
含まなければならない。組成物及び製剤のパーセントは
もちろん変えることができ、簡単には単位の重量の約２
〜６０％であることができる。そのような治療的に有効
な組成物中のメトトレキセートの量は、適した投薬量が
得られる量である。本発明に従う好ましい組成物又は製
剤は、経口的投薬単位形態が０．０２５〜２．０ｍｇ／
ｋｇのメトトレキセートを含むように製造される。

【００４３】錠剤、トローチ、丸薬、カプセルなどは以
下も含むことができる：トラガカントゴム、アラビアゴ
ム、コーンスターチ又はゼラチンなどの結合剤；リン酸
二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、アルギニ
ン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑
沢剤；及びスクロース、ラクトース又はサッカリンなど
の甘味料を加えることができ、あるいはペパーミント、
冬緑油又はチェリーフレーバーなどの風味料を加えるこ
とができる。投薬単位形態がカプセルの場合、それは上
記の種類の材料に加えて液体担体を含むことができる。
種々の他の材料がコーティングとして、又は他に投薬単
位の物理的形態を修正するために存在することができ
る。例えば錠剤、丸薬又はカプセルはシェラック、糖又
は両方で被覆することができる。シロップ又はエリキサ
ーはメトトレキセート、甘味料としてのスクロース、防
腐剤としてのメチル及びプロピルパラベン類、染料及び
チェリー又はオレンジフレーバーなどの風味料を含むこ
とができる。もちろんいずれの投薬単位形態の製造に用
いられるいずれの材料も製薬学的に純粋で、用いられる
量において実質的に無毒性でなければならない。さらに
メトトレキセートは持効性製剤及び調剤中に挿入するこ
とができる。

【００４４】メトトレキセートは非経口的又は腹腔内に
も投与することができる。メトトレキセートの溶液はグ
リセロール、液体ポリエチレングリコール類、及びそれ
らの混合物中で、ならびに油中で製造することができ
る。保存及び使用の通常の条件下で、これらの製剤は微
生物の成長を予防するために防腐剤を含む。

【００４５】注射用途に適した製薬学的形態には無菌の
水溶液又は分散液及び、無菌の注射用溶液又は分散液を
即席に製造するための無菌の粉末が含まれる。すべての
場合に形態は無菌でなければならず、シリンジによる扱
いが容易な程度に流動性でなければならない。形態は製
造及び保存の条件下で安定でなければならず、バクテリ
ア及び菌・カビなどの微生物の汚染作用に対して保護さ
れていなければならない。担体は例えば水、エチルアル
コール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレン
グリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）、そ
れらの適した混合物及び植物油を含む溶剤又は分散媒体
であることができる。適した流動性は、例えばレシチン
などのコーティングの使用により、分散液の場合は必要
な粒径の保持により、及び界面活性剤の使用により保持
することができる。微生物の作用の予防は種々の殺バク
テリア剤及び殺菌・殺カビ剤、例えばパラベン、クロロ
ブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールな
どにより行うことができる。多くの場合、等張化剤、例
えば糖又は塩化ナトリウムを含むのが好ましい。注射用
組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば
モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中
で用いることにより行うことができる。

【００４６】無菌の注射用溶液は、適した溶剤中の必要
量のメトトレキセートを上記で挙げた必要な他の種々の
成分と混合し、続いて濾過滅菌することにより製造され
る。一般に分散液はメトトレキセートを塩基性（ｂａｓ
ｉｃ）分散媒体及び上記で挙げた成分からの必要な他の
成分を含む無菌のビヒクル中に挿入することにより製造
される。無菌の注射用溶液の製造のための無菌粉末の場
合、好ましい製造法は真空乾燥及び凍結乾燥法であり、
それはあらかじめ無菌濾過されたその溶液からメトトレ
キセート及び他の追加の所望の成分の粉末を与える。

【００４７】本文で用いられる“製薬学的に許容し得る
担体”にはすべての溶剤、分散媒体、コーティング、殺
バクテリア剤及び殺菌・殺カビ剤、等張化剤ならびに吸
収遅延剤などが含まれる。製薬学的活性物質のためのそ
のような媒体及び薬剤の利用は当該技術分野において周
知である。従来の媒体又は薬剤が活性成分と不適合性で
ある場合を除いて治療的組成物におけるその利用が意図
される。補足的活性成分も組成物中に挿入することがで
きる。

【００４８】非経口的組成物を投与の容易さ、及び投薬
量の均一性のために投薬単位形態で調製するのが特に有
利である。本文で用いられる投薬単位形態は、処置され
る哺乳類の場合の１回の投薬量として適した物理的に分
離された単位を言い、各単位は所望の治療効果を与える
ために算出され、あらかじめ決められた量の活性材料を
必要な製薬学的担体と共に含む。本発明の新規な投薬単
位形態に関する規格は本文に詳細に開示されている通
り、（ａ）メトトレキセートの独特の特性及び達成され
るべき特定の治療効果（肺毛細血管漏出症候群の軽減）
ならびに（ｂ）体の健康が損なわれた疾患の状態にある
生存患者における肺毛細血管漏出症候群のためのメトト
レキセートの配合の技術分野における固有の制限により
指図され、それに依存する。

【００４９】メトトレキセートは、有効量において簡便
で有効に投与するために、適した製薬学的に許容し得る
担体と、前文で開示された投薬単位形態で配合される。
単位投薬形態は例えばメトトレキセートを約０．１〜４
００ｍｇの量で含むことができ、１〜２０ｍｇが好まし
い。割合で表すと、メトトレキセートは一般に担体１ｍ
ｌ当たり約０．１〜約４０ｍｇで存在する。補足的活性
成分を含む組成物の場合、投薬量は通常の投薬量及び該
成分の投与の方法を参照することにより決定する。

【００５０】１回の静脈内投薬、緩定常輸液（ｓｌｏｗ
ｃｏｎｓｔａｎｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）又は反復され
る毎日の投薬を投与することができる。最高約１〜１０
日の毎日の投薬で多くの場合に十分である。１日１回の
投薬又は１日に複数回の投薬、あるいは隔日もしくはよ
り頻度の少ない日に１回の投薬を分与することもでき
る。投薬管理からわかる通り、投与されるメトトレキセ
ートの量はインターロイキン−２誘導肺毛細血管漏出症
候群を軽減するのに十分でなければならない。

【００５１】本発明の主たる特徴及び態様は以下の通り
である。

【００５２】１．肺毛細血管漏出の軽減に有効な量のメ
トトレキセートを哺乳類に投与することを含む該哺乳類
における肺毛細血管漏出を軽減する方法。

【００５３】２．メトトレキセートの該有効量が約０．
０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇである上記１項
に記載の方法。

【００５４】３．該メトトレキセートが経口的、腹腔
内、皮下又は静脈内に投与される上記１項に記載の方
法。

【００５５】４．該メトトレキセートが経口的に投与さ
れる上記１項に記載の方法。

【００５６】５．該肺毛細血管漏出がインターロイキン
−２の投与により該哺乳類において誘導される上記１項
に記載の方法。

【００５７】６．メトトレキセートの投与がインターロ
イキン−２の投与に添えられる上記５項に記載の方法。

【００５８】７．該メトトレキセートがインターロイキ
ン−２の該投与と同時に投与される上記６項に記載の方
法。

【００５９】８．該メトトレキセートがインターロイキ
ン−２の該投与の前に投与される上記６項に記載の方
法。

【００６０】９．該メトトレキセートがインターロイキ
ン−２の投与の約１〜約５時間前に投与される上記８項
に記載の方法。

【００６１】１０．該メトトレキセートがインターロイ
キン−２の投与の約１時間前に投与される上記９項に記
載の方法。

【００６２】１１．約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２．０
ｍｇ／ｋｇの有効量のメトトレキセートを製薬学的に許
容し得る担体と共に含む、哺乳類における肺毛細血管漏
出を軽減するための投薬単位形態の組成物。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 肺毛細血管漏出（ｌｕｎｇ ｃａｐｉｌ
   ｌａｒｙ ｌｅａｋ）の軽減に有効な量のメトトレキセ
   ートを哺乳類に投与することを含む該哺乳類における肺
   毛細血管漏出を軽減する方法。
2. 【請求項２】 約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ
   ／ｋｇの有効量のメトトレキセートを製薬学的に許容し
   得る担体と共に含む、哺乳類における肺毛細血管漏出を
   軽減するための投薬単位形態の組成物。