JPH0827010A

JPH0827010A - 制癌免疫療法剤

Info

Publication number: JPH0827010A
Application number: JP6188756A
Authority: JP
Inventors: Tetsuo Yamamoto; 哲郎山本; Tsunaichi Iwatani; 綱一岩谷; Kazutomo Ohashi; 一智大橋; Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤
Original assignee: NICHINICHI SEIYAKU KK; Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: NICHINICHI SEIYAKU KK; Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1994-07-19
Filing date: 1994-07-19
Publication date: 1996-01-30

Abstract

(57)【要約】【構成】エンテロコッカス・フェカリス属に属する微
生物の菌体又はその処理物とドコサヘキサエン酸とを有
効成分として含む、制癌免疫療法剤【効果】本発明の制癌免疫療法剤に使用されるエンテ
ロコッカス属菌は、腸内乳酸球菌であり、またドコサヘ
キサエン酸も、食品中に含有されている成分であるた
め、毒性及び副作用がなく、乳酸菌単独で用いるよりも
増強された制癌活性を有する。従って、本発明の制癌療
法剤は、乳癌、大腸癌等の種々の癌の治療薬及び改善薬
として期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は強い制癌作用を示す、制
癌免疫療法剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌の治療において、免疫療法は重要な部
分を占めている。制癌免疫療法剤として、これまでにピ
シバニール、クレスチン、レンチナン等が知られている
が、それらの活性は未だ満足すべきものではない。

【０００３】最近、乳酸菌の一種である、エンテロコッ
カス・フェカリス（Enterococcusfaecalis）菌（腸球
菌）に経口投与で制癌作用のあることが見いだされ、こ
のものは免疫力を高めることにより制癌作用を発現する
ことが明らかにされた（大橋ら、薬学雑誌,113,396-399
(1993)）。しかしながら、この菌と他の薬剤もしくは他
の食品との併用効果は検討されていなかった。

【０００４】一方、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）は、
脳や網膜等の興奮性膜に多く含まれているｎ−３系の不
飽和脂肪酸であり、アラキドン酸カスケードを阻害する
作用を有していることが知られている。ドコサヘキサエ
ン酸には記憶、学習能の改善、視力低下抑制、発癌抑制
作用、免疫抑制作用等の薬理活性があるとされている。
また、ＤＨＡを多く含む魚油にもマクロファージ活性の
抑制（Dustin L. B. et al., J. Immunol., 144,4888-4
897(1990)）ＬＴＢ₄、ＬＴＣ₄産生を抑制する（Lokesh
B. R. et al., Biochem. Biophys. Acta, 958,99-107(1
988)）などの報告があり、臓器移植においてＣｙＡと併
用すると免疫抑制効果が増強されるとの報告（Kelley
V. E. et al., Transplantation, 48,98-102(1989)）も
ある。また、自己免疫疾患である、慢性関節リウマチや
乾癬の患者にこの魚油を投与して効果が上がったという
報告（特開平１−６６１１８号公報、特開平３−９００
２２号公報）、ベーチェット病患者への投与では皮膚症
状が改善したという報告（橋本喬司他、厚生省特定疾患
ベーチェット病調査研究班、平成３年度研究業績，185-
187）がある。しかしながら、免疫賦活剤との併用した
場合の効果については、全く知られていなかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、エンテロコ
ッカス・フェカリス菌の有する免疫賦活による制癌作用
が増強された制癌免疫療法剤を提供することを目的とす
る。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、エンテロ
コッカス・フェカリス菌の制癌作用の増強について種々
検討した結果、この菌とドコサヘキサエン酸を組み合わ
せると制癌作用が増強されることを見いだし、本発明を
完成するに至った。

【０００７】すなわち本発明は、エンテロコッカス・フ
ェカリス菌とドコサヘキサエン酸とを有効成分として含
む、制癌免疫療法剤に関するものである。

【０００８】エンテロコッカス・フェカリス菌は、レン
サ球菌に属し、腸内に存在する常在菌の一種である（Pe
ter H. A. S. et al., Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology. vol.2(1986)）。本発明においては、こ
の菌種に属する種々の菌株を用いることができるが、特
に制癌活性が高い点で、ＮＦ−１０１１菌株を用いるこ
とが好ましい。この菌株は、ヒトの糞便中より単離さ
れ、Maekawaらの分類（Maekawa S. et al., Microbiol.
Immunol., 36,671-681(1992)）に従うと、５型の血清
型に属する分離頻度の低い特殊な菌株である。該菌株は
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第１２５
６４号として寄託されている。

【０００９】以下にエンテロコッカス・フェカリスＮＦ
−１０１１の分離手段及び同菌株の菌学的及び生理学的
性質を示す。

【００１０】（１）分離手段健常者の糞便の加熱滅菌水による１０倍希釈物を適切な
選択培地（ＫＭＮ寒天平板及びＳＦ寒天平板）に塗抹
し、好気条件下３７℃で、４８〜７２時間培養し、菌集
落を出現させた。この菌集落を別の同種平板培地に画線
塗布し、同様に培養して菌集落を再び出現させた。同様
の操作を数回繰り返し、単一の菌種だけからなる単一集
落を分離した。この新分離菌株について、菌学的（形態
的、生化学的及び血清学的）性状を調べ、エンテロコッ
カス・フェカリス(Enterococcus faecalis)に属すると
分類同定した。

【００１１】（２）菌学的及び生理学的性質 ───────────────────────────── 性状判定 ───────────────────────────── グラム染色性＋菌形態球形カタラーゼ − 溶血性 α 血清群Ｄ増殖性１０℃ ＋４５℃ ＋５０℃ ＋熱耐性６０℃ ３０分＋胆汁エスクリン添加培地での生育＋ｐＨ９．６培地での生育＋６．５％食塩添加培地での生育＋メチレンブルー染色性＋ゼラチン液化 − ０．０１％ＴＴＣ添加培地での生育＋テルライト添加培地での生育＋酸生成の有無グリセロール＋Ｌ−アラビノース − Ｄ−リボース＋Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース＋Ｄ−ガラクトース＋Ｄ−フラクトース＋Ｄ−マンノース＋マルトース＋マンニトール＋シュクロース＋Ｌ−ソルボース − Ｄ−ソルビトール＋Ｌ−ラムノース − ラクトース＋アミグタリン＋エスクリン＋セロビオース＋メリビオース − イヌリン − メレジトース＋ ───────────────────────────── ＋；陽性、−；陰性ＴＴＣ；２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド

【００１２】本発明において、エンテロコッカス・フェ
カリス菌は、生菌体もしくは死菌体のいずれの形でも用
いることができるが、in vitroでの実験において、生菌
体に対し死菌体がより強力な腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）産
生能を有する点で、死菌体を用いることが好ましい。

【００１３】本発明に用いるドコサヘキサエン酸とは、
遊離酸を始め、その塩、エステル、グリセリド、リン脂
質、コリン化合物、アスコルビン酸化合物、アミノ酸化
合物等を意味する。本発明に用いるドコサヘキサエン酸
としては、医薬目的では、純度９０％以上のものが好ま
しく、純度９５％以上のものが特に好ましい。

【００１４】このようなドコサヘキサエン酸はドコサヘ
キサエン酸を含む油脂や混合物から、たとえば、特開平
４−９５０４８号公報、特開平４−１５９３９８号公
報、及び特開平４−２４３８４９号公報に記載の方法に
より、ドコサヘキサエン酸を分離、生成することによっ
て得られる。

【００１５】ドコサヘキサエン酸を含む油脂としては、
好ましくは総脂肪酸中のドコサヘキサエン酸の占める割
合が５％以上のものが良く、このようなものの例を挙げ
るとイワシ、サバ、アジ、サケ、サンマ等の青背魚より
抽出した魚油、マグロやカツオなどの大型海産魚の眼窩
脂肪由来の魚油、微生物や海藻由来の油脂、オキアミ
油、タラやイカ肝臓より抽出した海産物由来の油脂など
が好ましい例として挙げられる。

【００１６】本発明の制癌免疫療法剤は治療のために経
口的に投与することができる。経口投与剤としては散
剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいは
シロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることが
できる。これらの製剤は活性成分に薬理学的、製剤学的
に認容される製造助剤を加えることにより常法に従って
製造される。更に公知の技術により持続性製剤とするこ
とも可能である。当該製造助剤を用いる場合は、本発明
の制癌免疫療法剤中のＮＦ−１０１１の配合量は、患者
の年齢、性別、体重、症状、あるいは投与形態により異
なるが、通常は１〜７０重量％、好ましくは５〜５０重
量％である。また、ドコサヘキサエン酸の配合量も、患
者の年齢、性別、体重、症状、あるいは投与形態により
異なるが、通常は１〜５０重量％、好ましくは５〜３０
重量％である。

【００１７】上記製造助剤としては、賦形剤（例：澱
粉、乳糖、結晶セルロース、乳糖カルシウム、メタケイ
酸アルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸）、崩壊剤
（例：カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチル
セルロースカルシウム）、潤滑剤（例：ステアリン酸マ
グネシウム、タルク）、コーテング剤（例：ヒドロキシ
エチルセルロース）、矯味剤などの製剤用成分が使用さ
れる。

【００１８】上記構成成分を有する本発明の制癌免疫療
法剤は、公知の製造法、たとえば日本薬局方第１０版製
剤総則記載の方法ないし適当な改良を加えた方法によっ
て製造することができる。

【００１９】

【実施例】以下本発明を実施例により詳細に説明する。
ただし、本発明はこれらの実施例によって限定されるも
のではない。

【００２０】実施例１（菌体の調製） Enterococcus faecalisＮＦ−１０１１をロゴサ液体培
地１０リットルに接種（菌数；１０⁶個／ｍｌ）し、３
７℃１６時間静置培養を行い、生菌数１０⁹個／ｍｌの
培養液を得た。得られた培養液を１２，０００ｒｐｍで
遠心分離して集菌し、これを生理的食塩水（０．８５％
ＮａＣｌ水溶液）で２回洗浄して、１００ｍｌ蒸留水に
懸濁し、１１０℃１０分間加熱した。その後凍結乾燥に
より死菌体菌末を得た。

【００２１】以下にロゴサ液体培地の組成を示す。トリプチケース１０ｇ酵母エキス５ｇトリプトース３ｇリン酸一カリウム３ｇリン酸二カリウム３ｇクエン酸三アンモニウム２ｇツイーン８０（界面活性剤）１ｇグルコース２０ｇシステイン塩酸塩０．２ｇ塩類溶液（１のとおり）５ｍｌ蒸留水１，０００ｍｌ（ｐＨを水酸化ナトリウム溶液で７．０に調整、１２１
℃１５分間加熱滅菌）（１）塩類溶液；ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ１１．５ｇＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ０．６８ｇＭｎＳＯ₄・２Ｈ₂Ｏ２．４ｇ蒸留水１００ｍｌ

【００２２】実施例２．日本ＳＬＣより購入したＣ３Ｈ
／ＨｅＮ系マウス（雄性、６週齢、体重２２±１ｇ）
を、マウス用粉末飼料（ＣＥ−２、日本クレア製）及び
滅菌水道水を与え、温度２５±２℃、湿度６０±１０
％、照明周期１２時間の部屋で６日間予備飼育した後、
平均体重が同じになるように８匹づつ３群（ＮＦ−１０
１１群、ＤＨＡ＋ＮＦ−１０１１群、対照群）に群分け
した。

【００２３】ＭＭ４６乳癌細胞はＣ３Ｈ／ＨｅＮ系マ
ウス腹腔内で継代培養したものを使用した。マウス腹腔
内移植後１週間目のＭＭ４６乳癌細胞を採取し、ＰＢＳ
（−）（通常のＰＢＳからＣａＣｌ₂とＭｇＣｌ₂・６Ｈ
₂Ｏを除いた緩衝液）に浮遊、７００ｒｐｍ、５分の遠
心洗浄を３回繰り返した後、ＰＢＳ（−）で濃度調節し
たものを上記マウス腹部皮内に生細胞数が１×１０⁶個
／匹になるよう移植した。

【００２４】ＭＭ４６乳癌を移植した次の日からＮＦ−
１０１１群、ＤＨＡ＋ＮＦ−１０１１群は実施例１で得
た菌体を５％配合した飼料を自由摂取させた。また、Ｄ
ＨＡ＋ＮＦ−１０１１群へのＤＨＡ（ＤＨＡエチルエス
テル体９８％）及び対照群ならびにＮＦ−１０１１群に
は蒸留水を、各々１０ｍｌ／ｋｇ／日になるよう胃ゾン
デによる強制投与を行った。

【００２５】腫瘍移植後３６日目に体重を測定した後、
腫瘍組織を摘出し、重量測定を行った。結果を表１に示
す。

【００２６】表１ ──────────────────────────────────── 腫瘍重量（ｇ）体重（ｇ）腫瘍の相対重量(%) ──────────────────────────────────── 対照群３．９６２８．２１４．０４ＮＦ−１０１１群２．６８２６．２１０．２３ＤＨＡ＋ＮＦ−１０１１群２．４８２７．９８．８９ ────────────────────────────────────

【００２７】ＮＦ−１０１１の単独投与群では腫瘍の相
対重量は対照群に比べて２７％減少し、ＮＦ−１０１１
とＤＨＡを併用すると３７％の減少が認められ、併用に
よって制癌活性の増強効果が認められた。

【００２８】

【発明の効果】本発明の制癌免疫療法剤は、増強された
制癌活性を有する。従って、本発明の制癌療法剤は、乳
癌、大腸癌等の種々の癌の治療薬及び改善薬として期待
される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者大橋一智三重県阿山郡伊賀町大字柘植町3353−１アーバンライフ柘植110号室 (72)発明者矢澤一良神奈川県相模原市鵜野森１丁目28番10号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】エンテロコッカス・フェカリス菌とドコ
サヘキサエン酸とを有効成分として含む、制癌免疫療法
剤
【請求項２】エンテロコッカス・フェカリス菌がエン
テロコッカス・フェカリスＮＦ−１０１１である、制癌
免疫療法剤