JPH08301783A - 吸収性骨疾患予防・治療剤 - Google Patents
吸収性骨疾患予防・治療剤Info
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- JPH08301783A JPH08301783A JP7113232A JP11323295A JPH08301783A JP H08301783 A JPH08301783 A JP H08301783A JP 7113232 A JP7113232 A JP 7113232A JP 11323295 A JP11323295 A JP 11323295A JP H08301783 A JPH08301783 A JP H08301783A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】吸収性骨疾患を予防または治療する効果があ
り、副作用が軽度で安全な治療剤の提供、または骨吸収
抑制剤の提供。 【構成】トロンボモジュリンを有効成分として含有する
ことを特徴とする吸収性骨疾患の予防・治療剤、または
骨吸収抑制剤。
り、副作用が軽度で安全な治療剤の提供、または骨吸収
抑制剤の提供。 【構成】トロンボモジュリンを有効成分として含有する
ことを特徴とする吸収性骨疾患の予防・治療剤、または
骨吸収抑制剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はトロンボモジュリン（以
下、ＴＭと略す）を有効成分とすることを特徴とする骨
粗鬆症、悪性腫瘍等による高カルシウム血症または骨ペ
ージェット病等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、および
骨吸収抑制剤に関する。
下、ＴＭと略す）を有効成分とすることを特徴とする骨
粗鬆症、悪性腫瘍等による高カルシウム血症または骨ペ
ージェット病等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、および
骨吸収抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】骨組織は、絶えず代謝回転を続けてお
り、既存骨の一部は破骨細胞により吸収され、一方で
は、骨芽細胞により新生骨が形成されている。骨の形
態、骨量は、この骨代謝回転により維持されている。骨
量は、骨を吸収する破骨細胞群と骨を形成する骨芽細胞
群の機能的総和により決定される（吉川秀樹ら、日本臨
床、５２、２２６２−２２６７、１９９４）。
り、既存骨の一部は破骨細胞により吸収され、一方で
は、骨芽細胞により新生骨が形成されている。骨の形
態、骨量は、この骨代謝回転により維持されている。骨
量は、骨を吸収する破骨細胞群と骨を形成する骨芽細胞
群の機能的総和により決定される（吉川秀樹ら、日本臨
床、５２、２２６２−２２６７、１９９４）。
【０００３】吸収性骨疾患とは、破骨細胞群による骨吸
収量が骨芽細胞群による骨形成量より大となり、結果と
して骨量の減少が生じる疾患である。吸収性骨疾患には
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病があ
る。骨粗鬆症には、退行期骨粗鬆症と続発性骨粗鬆症が
あり、さらに退行期骨粗鬆症は閉経後あるいは卵巣摘出
後に認められるＩ型骨粗鬆症と、老人に認められるII型
骨粗鬆症がある。続発性骨粗鬆症とは、原因が明らかな
骨粗鬆症であり、慢性関節リュウマチ、ステロイド療
法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下症、副甲状腺機能
亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシング症候群、ター
ナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切除、腎不全、腎透
析、骨形成不全症、低アルカリフォスファターゼ血症、
ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制限、寝たきり、ア
ルコール中毒、宇宙飛行などが原因となる。また、原因
が明らかでない特発性若年性骨粗鬆症もある。吸収性骨
疾患はその頻度の高さに加え身体各部の骨折を引き起こ
して、いわゆる「寝たきり老人」に至らしめる原因疾患
として、高齢化社会の進む現在、医療のみならず、社会
問題としても注目されている。
収量が骨芽細胞群による骨形成量より大となり、結果と
して骨量の減少が生じる疾患である。吸収性骨疾患には
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病があ
る。骨粗鬆症には、退行期骨粗鬆症と続発性骨粗鬆症が
あり、さらに退行期骨粗鬆症は閉経後あるいは卵巣摘出
後に認められるＩ型骨粗鬆症と、老人に認められるII型
骨粗鬆症がある。続発性骨粗鬆症とは、原因が明らかな
骨粗鬆症であり、慢性関節リュウマチ、ステロイド療
法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下症、副甲状腺機能
亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシング症候群、ター
ナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切除、腎不全、腎透
析、骨形成不全症、低アルカリフォスファターゼ血症、
ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制限、寝たきり、ア
ルコール中毒、宇宙飛行などが原因となる。また、原因
が明らかでない特発性若年性骨粗鬆症もある。吸収性骨
疾患はその頻度の高さに加え身体各部の骨折を引き起こ
して、いわゆる「寝たきり老人」に至らしめる原因疾患
として、高齢化社会の進む現在、医療のみならず、社会
問題としても注目されている。
【０００４】破骨細胞群および骨芽細胞群は、その機能
の発現にあたって、さまざまなホルモンやサイトカイン
などの液性因子や細胞外基質蛋白による調節を受けてい
る。破骨細胞の分化や活性化を直接抑制する因子として
は、カルシトニン、プロスタグランジン、システインプ
ロテアーゼ阻害剤、Ｃ末端側副甲状腺関連蛋白質などが
しられており、ビスホスホネート、イプリフラボンなど
の骨吸収抑制剤の開発が進められている。
の発現にあたって、さまざまなホルモンやサイトカイン
などの液性因子や細胞外基質蛋白による調節を受けてい
る。破骨細胞の分化や活性化を直接抑制する因子として
は、カルシトニン、プロスタグランジン、システインプ
ロテアーゼ阻害剤、Ｃ末端側副甲状腺関連蛋白質などが
しられており、ビスホスホネート、イプリフラボンなど
の骨吸収抑制剤の開発が進められている。
【０００５】ＴＭは１９８１年にエスモンらにより血管
内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発見され、
その後１９８７年に鈴木らによりその全一次構造が明ら
かにされた糖蛋白質であり、トロンビンと結合してトロ
ンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロンビンに
よるプロテインＣ活性化を著しく促進させる。ＴＭは効
率よく凝固系を抑制することから、播種性血管内凝固症
候群（以下、ＤＩＣと略す）、各種血栓症等の予防や治
療に有用であることが示唆されている。一方、メイラー
ド・シー（Ｍａｉｌｌａｒｄ Ｃ．）らは骨芽細胞にお
いてＴＭが発現されていることを報告している〔エンド
クリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）、１３
３、６６８−６７４、１９９３〕が、ＴＭが骨組織に対
して作用を有することを記載した報告はこれまで知られ
ていない。
内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発見され、
その後１９８７年に鈴木らによりその全一次構造が明ら
かにされた糖蛋白質であり、トロンビンと結合してトロ
ンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロンビンに
よるプロテインＣ活性化を著しく促進させる。ＴＭは効
率よく凝固系を抑制することから、播種性血管内凝固症
候群（以下、ＤＩＣと略す）、各種血栓症等の予防や治
療に有用であることが示唆されている。一方、メイラー
ド・シー（Ｍａｉｌｌａｒｄ Ｃ．）らは骨芽細胞にお
いてＴＭが発現されていることを報告している〔エンド
クリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）、１３
３、６６８−６７４、１９９３〕が、ＴＭが骨組織に対
して作用を有することを記載した報告はこれまで知られ
ていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】これまで、骨粗鬆症等
の吸収性骨疾患の治療には、女性ホルモンの一つであり
骨形成を促進するエストロゲン、骨量減少を改善する活
性型ビタミンＤ3 、補充療法として用いられるカルシウ
ム剤、甲状腺から分泌されるペプチドホルモンで血清の
Ｃａ低下作用を有するカルシトニン、カルシトニンの誘
導体であるエルカトニン、エストロゲンの作用を増強す
るイプリフラボン等が用いられている。しかしながら、
エストロゲンでは子宮出血や、長期投与により血栓症や
癌の発症が報告されており、血栓症および乳癌や子宮癌
などのエストロゲン依存性腫瘍の疑いのある患者には禁
忌とされている。また、活性型ビタミンＤ3 、カルシト
ニン、エルカトニン、イプリフラボンでは悪心、嘔吐等
の胃腸障害、ショック症状、過敏症等の副作用が報告さ
れており、その効果は必ずしも満足のいくものではな
い。骨粗鬆症は治療期間の長い疾患であることからも、
副作用が軽度な、安全な治療薬を開発することは重要な
課題である。
の吸収性骨疾患の治療には、女性ホルモンの一つであり
骨形成を促進するエストロゲン、骨量減少を改善する活
性型ビタミンＤ3 、補充療法として用いられるカルシウ
ム剤、甲状腺から分泌されるペプチドホルモンで血清の
Ｃａ低下作用を有するカルシトニン、カルシトニンの誘
導体であるエルカトニン、エストロゲンの作用を増強す
るイプリフラボン等が用いられている。しかしながら、
エストロゲンでは子宮出血や、長期投与により血栓症や
癌の発症が報告されており、血栓症および乳癌や子宮癌
などのエストロゲン依存性腫瘍の疑いのある患者には禁
忌とされている。また、活性型ビタミンＤ3 、カルシト
ニン、エルカトニン、イプリフラボンでは悪心、嘔吐等
の胃腸障害、ショック症状、過敏症等の副作用が報告さ
れており、その効果は必ずしも満足のいくものではな
い。骨粗鬆症は治療期間の長い疾患であることからも、
副作用が軽度な、安全な治療薬を開発することは重要な
課題である。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ＴＭの各種
細胞に対する生理作用に関する研究を行っている途上、
ＴＭが骨細胞に作用し、骨吸収を抑制することを見いだ
し、さらに鋭意研究を重ねて本発明を完成した。
細胞に対する生理作用に関する研究を行っている途上、
ＴＭが骨細胞に作用し、骨吸収を抑制することを見いだ
し、さらに鋭意研究を重ねて本発明を完成した。
【０００８】以下に本発明を詳細に説明する。本発明の
第一の態様は、ＴＭを有効成分とすることを特徴とする
吸収性骨疾患予防・治療剤である。吸収性骨疾患には、
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病が含
まれる。
第一の態様は、ＴＭを有効成分とすることを特徴とする
吸収性骨疾患予防・治療剤である。吸収性骨疾患には、
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病が含
まれる。
【０００９】本発明の第二の態様は、ＴＭを有効成分と
することを特徴とする骨粗鬆症予防・治療剤である。骨
粗鬆症には、退行期骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症および特
発性若年性骨粗鬆症が含まれる。さらに、退行期骨粗鬆
症には閉経後あるいは卵巣摘出後に認められるＩ型骨粗
鬆症と、老人に認められるII型骨粗鬆症が含まれ、ま
た、続発性骨粗鬆症の原因としては慢性関節リュウマ
チ、ステロイド療法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下
症、副甲状腺機能亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシ
ング症候群、ターナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切
除、腎不全、腎透析、骨形成不全症、低アルカリフォス
ファターゼ血症、ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制
限、寝たきり、アルコール中毒、宇宙飛行などが挙げら
れる。
することを特徴とする骨粗鬆症予防・治療剤である。骨
粗鬆症には、退行期骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症および特
発性若年性骨粗鬆症が含まれる。さらに、退行期骨粗鬆
症には閉経後あるいは卵巣摘出後に認められるＩ型骨粗
鬆症と、老人に認められるII型骨粗鬆症が含まれ、ま
た、続発性骨粗鬆症の原因としては慢性関節リュウマ
チ、ステロイド療法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下
症、副甲状腺機能亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシ
ング症候群、ターナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切
除、腎不全、腎透析、骨形成不全症、低アルカリフォス
ファターゼ血症、ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制
限、寝たきり、アルコール中毒、宇宙飛行などが挙げら
れる。
【００１０】本発明の第三の態様は、ＴＭを有効成分と
することを特徴とする骨吸収抑制剤である。骨折後の治
癒促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨移植の生着率
上昇に有用性が期待される。また、研究用試薬としても
有用である。本発明に用いるＴＭは、トロンビンと結合
してトロンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロ
ンビンによるプロテインＣ活性化を著しく促進させる蛋
白性物質をすべて含む。従って、天然型あるいは遺伝子
工学的に産生されたいずれでも良く、遺伝子工学手法に
より得られる改変型あるいはキメラ型であってもよい。
医薬品とする場合、好ましくはヒト由来のＴＭが望まれ
る。さらに好ましくは、天然型のヒト尿由来の可溶性Ｔ
Ｍもしくは遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭがよい。
することを特徴とする骨吸収抑制剤である。骨折後の治
癒促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨移植の生着率
上昇に有用性が期待される。また、研究用試薬としても
有用である。本発明に用いるＴＭは、トロンビンと結合
してトロンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロ
ンビンによるプロテインＣ活性化を著しく促進させる蛋
白性物質をすべて含む。従って、天然型あるいは遺伝子
工学的に産生されたいずれでも良く、遺伝子工学手法に
より得られる改変型あるいはキメラ型であってもよい。
医薬品とする場合、好ましくはヒト由来のＴＭが望まれ
る。さらに好ましくは、天然型のヒト尿由来の可溶性Ｔ
Ｍもしくは遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭがよい。
【００１１】このようなＴＭは、天然型については、例
えば、ヒト尿由来の可溶性ＴＭとして、特開平３−８６
９００号公報に開示されている非還元状態での分子量が
５５，０００〜５８，０００および６０，０００〜６
５，０００の可溶性ＴＭおよび特開平３−２１８３９９
号公報に開示されている非還元状態での分子量が７２，
０００±３，０００および７９，０００±３，０００の
可溶性ＴＭがあげられる。遺伝子組換え型については、
例えば、遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭとして、特開平１
−６２１９号公報に開示されている少なくともアミノ末
端から３４５−４６２番目のアミノ酸配列を含む可溶性
ＴＭおよびＷＯ０９２／００３２５号公報に開示されて
いる少なくともアミノ末端から４−４４６番目のアミノ
酸配列を含む可溶性ＴＭがあげられる。また、特表平４
−５０５５５４号公報に開示されているヒト組織プラス
ミノーゲンアクチベーター等のアミノ酸配列の一部を含
んでいてもよい可溶性ＴＭ、ＷＯ９１／０４２７６号公
報に開示されているコンドロイチン及び／又はコンドロ
イチン硫酸を含む糖鎖を有する可溶性ＴＭおよび特開平
６−２７９４９７号公報に開示されているウシＴＭ由来
の酸性アミノ酸配列を含む配列を付加した可溶性ＴＭが
あげられる。
えば、ヒト尿由来の可溶性ＴＭとして、特開平３−８６
９００号公報に開示されている非還元状態での分子量が
５５，０００〜５８，０００および６０，０００〜６
５，０００の可溶性ＴＭおよび特開平３−２１８３９９
号公報に開示されている非還元状態での分子量が７２，
０００±３，０００および７９，０００±３，０００の
可溶性ＴＭがあげられる。遺伝子組換え型については、
例えば、遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭとして、特開平１
−６２１９号公報に開示されている少なくともアミノ末
端から３４５−４６２番目のアミノ酸配列を含む可溶性
ＴＭおよびＷＯ０９２／００３２５号公報に開示されて
いる少なくともアミノ末端から４−４４６番目のアミノ
酸配列を含む可溶性ＴＭがあげられる。また、特表平４
−５０５５５４号公報に開示されているヒト組織プラス
ミノーゲンアクチベーター等のアミノ酸配列の一部を含
んでいてもよい可溶性ＴＭ、ＷＯ９１／０４２７６号公
報に開示されているコンドロイチン及び／又はコンドロ
イチン硫酸を含む糖鎖を有する可溶性ＴＭおよび特開平
６−２７９４９７号公報に開示されているウシＴＭ由来
の酸性アミノ酸配列を含む配列を付加した可溶性ＴＭが
あげられる。
【００１２】ＴＭは現在臨床開発中のＤＩＣ治療薬であ
り、ヘパリンによる治療に付随するような出血傾向など
の副作用も少なく、医薬品としての安全性が高いことが
期待されている（保坂義隆ら、第５６回日本血液学会抄
録集、７９１題、１９９４）。また、ヘパリンおよび低
分子ヘパリンでは、その投与により骨量が減少すること
が知られている（西山雅彦ら、第６８回日本薬理学会年
会抄録集、Ｐ2 ２９３題、１９９５）。一方、本発明に
用いるＴＭは骨吸収を抑制することから、ＴＭはヘパリ
ンおよび低分子ヘパリンとは異なり、骨密度を高める作
用を有する抗凝固薬である。また、ＴＭは生体内半減期
が長く、医薬品として好ましい体内動態を示すことが確
認されている。
り、ヘパリンによる治療に付随するような出血傾向など
の副作用も少なく、医薬品としての安全性が高いことが
期待されている（保坂義隆ら、第５６回日本血液学会抄
録集、７９１題、１９９４）。また、ヘパリンおよび低
分子ヘパリンでは、その投与により骨量が減少すること
が知られている（西山雅彦ら、第６８回日本薬理学会年
会抄録集、Ｐ2 ２９３題、１９９５）。一方、本発明に
用いるＴＭは骨吸収を抑制することから、ＴＭはヘパリ
ンおよび低分子ヘパリンとは異なり、骨密度を高める作
用を有する抗凝固薬である。また、ＴＭは生体内半減期
が長く、医薬品として好ましい体内動態を示すことが確
認されている。
【００１３】本発明に用いるＴＭは、骨吸収抑制作用を
有する。従って、種々の吸収性骨疾患、例えば、骨粗鬆
症、骨ページェット病または悪性腫瘍等に付随する高カ
ルシウム血症などの予防・治療剤として使用することが
できる。また、慢性関節リュウマチを中心に膠原病では
骨の粗鬆化が進行している。従って、種々の膠原病、た
とえば慢性関節リュウマチにおける骨破壊、あるいはス
テロイド療法の副作用の一つである骨量の減少を予防・
治療または改善する目的で使用することができ、さらに
はこれらの疾患の治療促進が期待される。さらに、本発
明に用いるＴＭは骨吸収を抑制することから、各部位の
骨折後の治癒の促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨
移植の生着率を上げることが期待される。
有する。従って、種々の吸収性骨疾患、例えば、骨粗鬆
症、骨ページェット病または悪性腫瘍等に付随する高カ
ルシウム血症などの予防・治療剤として使用することが
できる。また、慢性関節リュウマチを中心に膠原病では
骨の粗鬆化が進行している。従って、種々の膠原病、た
とえば慢性関節リュウマチにおける骨破壊、あるいはス
テロイド療法の副作用の一つである骨量の減少を予防・
治療または改善する目的で使用することができ、さらに
はこれらの疾患の治療促進が期待される。さらに、本発
明に用いるＴＭは骨吸収を抑制することから、各部位の
骨折後の治癒の促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨
移植の生着率を上げることが期待される。
【００１４】本発明の製剤は有効成分としてＴＭを含有
していれば良く、公知のいかなる製剤学的製造法によっ
ても製造することができる。当該ＴＭは、薬剤として一
般的に用いられる適当な担体または、媒体、例えば滅菌
水や生理食塩水、植物油、鉱油、高級アルコール、高級
脂肪酸、無害性有機溶媒等、さらには必要に応じて賦形
剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、溶解補助
剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、保湿剤、酸化防止
剤、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜組合わせて、
生体に効果的に投与するのに適した注射剤、経鼻吸収
剤、経口剤、埋め込み製剤等の医薬品製剤、好ましくは
注射剤に調製することができ、これらの具体例のいくつ
かについては公知である。注射剤の製剤としては、例え
ば凍結乾燥品や、注射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに
封入した形等で提供できる。また、徐放性製剤として、
マイクロカプセル、マイクロスフェアー、リポソームあ
るいはナノスフェアーに内包した形態あるいは高分子基
剤含有製剤として投与することもできる。
していれば良く、公知のいかなる製剤学的製造法によっ
ても製造することができる。当該ＴＭは、薬剤として一
般的に用いられる適当な担体または、媒体、例えば滅菌
水や生理食塩水、植物油、鉱油、高級アルコール、高級
脂肪酸、無害性有機溶媒等、さらには必要に応じて賦形
剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、溶解補助
剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、保湿剤、酸化防止
剤、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜組合わせて、
生体に効果的に投与するのに適した注射剤、経鼻吸収
剤、経口剤、埋め込み製剤等の医薬品製剤、好ましくは
注射剤に調製することができ、これらの具体例のいくつ
かについては公知である。注射剤の製剤としては、例え
ば凍結乾燥品や、注射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに
封入した形等で提供できる。また、徐放性製剤として、
マイクロカプセル、マイクロスフェアー、リポソームあ
るいはナノスフェアーに内包した形態あるいは高分子基
剤含有製剤として投与することもできる。
【００１５】本発明の製剤は、例えば静脈内注射、皮下
注射、筋肉内注射、関節内注射、経口投与等の方法によ
って、例えば、ＴＭ蛋白量として一日約０．０１〜１０
００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、約０．１〜１００
μｇ／ｋｇとなる量を投与したり、埋め込み製剤や浸透
圧ポンプ等に封入し生体に留置することにより連続的に
投与することができる。
注射、筋肉内注射、関節内注射、経口投与等の方法によ
って、例えば、ＴＭ蛋白量として一日約０．０１〜１０
００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、約０．１〜１００
μｇ／ｋｇとなる量を投与したり、埋め込み製剤や浸透
圧ポンプ等に封入し生体に留置することにより連続的に
投与することができる。
【００１６】（取得例）以下にＴＭの取得例を挙げて、
本発明をより具体的に説明するが、本発明に用いるＴＭ
はこれらに限定されるものではない。
本発明をより具体的に説明するが、本発明に用いるＴＭ
はこれらに限定されるものではない。
【００１７】（可溶性ＴＭの取得例１） ヒト尿由来可溶性ＴＭの製造 特開平３−２１８３９９号公報に記載された方法に準じ
て調製した。すなわち、原尿１００Ｌをアクリル繊維で
濾過して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限
外濾過膜を使用して脱塩濃縮した。次いで、ＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビ
ン−アガロースクロマトグラフィーおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムを用いて順次精製し、活性画分を採取した（以下ＵＴ
Ｍ０と略す）。
て調製した。すなわち、原尿１００Ｌをアクリル繊維で
濾過して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限
外濾過膜を使用して脱塩濃縮した。次いで、ＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビ
ン−アガロースクロマトグラフィーおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムを用いて順次精製し、活性画分を採取した（以下ＵＴ
Ｍ０と略す）。
【００１８】（可溶性ＴＭの取得例２） 遺伝子組換え型ヒト可溶性ＴＭの製造 ＷＯ９２／００３２５号公報の方法に準じて製造した。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４９８残基よりなる
可溶性ＴＭを発現するベクターを調製し、これをＣＨＯ
細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行って高発現株を得
た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−トロンビン−アガ
ロースカラムとゲル濾過により精製し、アミノ酸配列は
同一であるが分子量の異なる２種類のＴＭ（ＲＴＭ１、
ＲＴＭ２）を得た。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４９８残基よりなる
可溶性ＴＭを発現するベクターを調製し、これをＣＨＯ
細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行って高発現株を得
た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−トロンビン−アガ
ロースカラムとゲル濾過により精製し、アミノ酸配列は
同一であるが分子量の異なる２種類のＴＭ（ＲＴＭ１、
ＲＴＭ２）を得た。
【００１９】（実験例）以下に本発明を詳細に説明する
ために実験例により効果を具体的に説明するが、本発明
はこれらによって、なんら限定されるものではない。
ために実験例により効果を具体的に説明するが、本発明
はこれらによって、なんら限定されるものではない。
【００２０】（実験例１：ＴＭによる骨吸収に対する効
果）軟部組織を除去したマウス脛骨および大腿骨をα−
ＭＥＭ培地中で細断し、さらにタッチミキサーで撹拌し
た後、静置して得られた上清画分を破骨細胞を含む全骨
細胞として用いた。次にタカダ・ワイ（Ｔａｋａｄａ
Ｙ．）らの方法〔ボーン・アンド・ミネラル（Ｂｏｎｅ
ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ）、１７、３４７−３５９、
１９９２〕に準じ、象牙の切片上での破骨細胞による吸
収窩形成に対する被検薬の阻害効果を調べた。象牙を厚
さ約１５０μｍ、直径６ｍｍの円形の象牙片に調製し、
５％ウシ胎児血清を含むα−ＭＥＭ培地の入った９６穴
プレート中でプレインキュベートした。象牙片上に、破
骨細胞を含む全骨細胞を加え３７℃にて２時間インキュ
ベートした後、非付着細胞を除去し、被検薬を含むα−
ＭＥＭ培地を添加し５日間培養した。なお、培地は培養
開始３日目に交換した。培養５日目に０．２５Ｍアンモ
ニア水を添加し反応を停止後、超音波処理により象牙片
上に付着した細胞を取り除いた。形成された吸収窩の面
積は酸性ヘマトキシリンで染色した後、顕微鏡下で測定
した。被検薬の効果は被検薬未添加群と被検薬群の吸収
窩の面積より阻害率として算出した。結果を図１および
図２に示す。図１から明らかなように、ＵＴＭ０は象牙
片上の吸収窩形成を用量依存的に抑制した。また、図２
から明らかなように、エルカトニン、遺伝子工学で作製
されたＲＴＭ１およびＲＴＭ２も象牙片上の吸収窩形成
を抑制した。また、ＷＯ９２／００３２５号公報の実施
例６−（２）の方法と同様にして作製された組換えヒト
尿ＴＭ（ｒｕＴＭ−Ａｌａ）も同様の効果が認められ
た。この象牙片上の吸収窩形成は骨吸収の指標であり、
エルカトニン等の吸収性骨疾患に用いられている薬物に
より抑制される。ゆえに、ＵＴＭ０、ＲＴＭ１、ＲＴＭ
２およびｒｕＴＭ−Ａｌａ等のＴＭは、吸収性骨疾患の
予防・治療作用を有する好ましい薬剤であると考えられ
る。
果）軟部組織を除去したマウス脛骨および大腿骨をα−
ＭＥＭ培地中で細断し、さらにタッチミキサーで撹拌し
た後、静置して得られた上清画分を破骨細胞を含む全骨
細胞として用いた。次にタカダ・ワイ（Ｔａｋａｄａ
Ｙ．）らの方法〔ボーン・アンド・ミネラル（Ｂｏｎｅ
ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ）、１７、３４７−３５９、
１９９２〕に準じ、象牙の切片上での破骨細胞による吸
収窩形成に対する被検薬の阻害効果を調べた。象牙を厚
さ約１５０μｍ、直径６ｍｍの円形の象牙片に調製し、
５％ウシ胎児血清を含むα−ＭＥＭ培地の入った９６穴
プレート中でプレインキュベートした。象牙片上に、破
骨細胞を含む全骨細胞を加え３７℃にて２時間インキュ
ベートした後、非付着細胞を除去し、被検薬を含むα−
ＭＥＭ培地を添加し５日間培養した。なお、培地は培養
開始３日目に交換した。培養５日目に０．２５Ｍアンモ
ニア水を添加し反応を停止後、超音波処理により象牙片
上に付着した細胞を取り除いた。形成された吸収窩の面
積は酸性ヘマトキシリンで染色した後、顕微鏡下で測定
した。被検薬の効果は被検薬未添加群と被検薬群の吸収
窩の面積より阻害率として算出した。結果を図１および
図２に示す。図１から明らかなように、ＵＴＭ０は象牙
片上の吸収窩形成を用量依存的に抑制した。また、図２
から明らかなように、エルカトニン、遺伝子工学で作製
されたＲＴＭ１およびＲＴＭ２も象牙片上の吸収窩形成
を抑制した。また、ＷＯ９２／００３２５号公報の実施
例６−（２）の方法と同様にして作製された組換えヒト
尿ＴＭ（ｒｕＴＭ−Ａｌａ）も同様の効果が認められ
た。この象牙片上の吸収窩形成は骨吸収の指標であり、
エルカトニン等の吸収性骨疾患に用いられている薬物に
より抑制される。ゆえに、ＵＴＭ０、ＲＴＭ１、ＲＴＭ
２およびｒｕＴＭ−Ａｌａ等のＴＭは、吸収性骨疾患の
予防・治療作用を有する好ましい薬剤であると考えられ
る。
【００２１】
【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をより具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００２２】（実施例１） ＵＴＭ０ ５ｍｇ 精製ゼラチン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。
【００２３】（実施例２） ＵＴＭ０ ５ｍｇ アルブミン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。
【００２４】（実施例３） ＲＴＭ１ １０ｍｇ 精製ゼラチン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。
【００２５】
【発明の効果】本発明のＴＭを有効成分とする予防・治
療剤は、骨吸収抑制作用を有する。従って、種々の骨吸
収が亢進している疾患、たとえば骨粗鬆症、悪性高カル
シウム血症、骨ページェット病および慢性関節リュウマ
チ等による骨減少等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、な
らびに骨折後の治癒促進や研究用試薬としての骨吸収抑
制剤として用いることができる。また、本発明のＴＭは
既存薬に比べ副作用が少ないことが期待され、長期間の
投与が可能な安全な治療薬となりうる。さらに、本発明
のＴＭは、ヘパリンや低分子ヘパリンによる治療に付随
する出血傾向や骨量減少等の副作用が少ないため、抗凝
固剤や透析用剤として用いる際も安全性の高いものであ
る。
療剤は、骨吸収抑制作用を有する。従って、種々の骨吸
収が亢進している疾患、たとえば骨粗鬆症、悪性高カル
シウム血症、骨ページェット病および慢性関節リュウマ
チ等による骨減少等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、な
らびに骨折後の治癒促進や研究用試薬としての骨吸収抑
制剤として用いることができる。また、本発明のＴＭは
既存薬に比べ副作用が少ないことが期待され、長期間の
投与が可能な安全な治療薬となりうる。さらに、本発明
のＴＭは、ヘパリンや低分子ヘパリンによる治療に付随
する出血傾向や骨量減少等の副作用が少ないため、抗凝
固剤や透析用剤として用いる際も安全性の高いものであ
る。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明に用いるＴＭ（ＵＴＭ０）の象牙にお
ける吸収窩の形成を抑制する効果を示すグラフである。
ける吸収窩の形成を抑制する効果を示すグラフである。
【図２】 本発明に用いるＴＭ（ＲＴＭ１およびＲＴＭ
２）およびエルカトニンの象牙における吸収窩の形成を
抑制する効果を示すグラフである。
２）およびエルカトニンの象牙における吸収窩の形成を
抑制する効果を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】トロンボモジュリンを有効成分とすること
を特徴とする吸収性骨疾患予防・治療剤。 - 【請求項２】前記吸収性骨疾患が骨粗鬆症である請求項
１記載の予防・治療剤。 - 【請求項３】トロンボモジュリンを有効成分とすること
を特徴とする骨吸収抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7113232A JPH08301783A (ja) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | 吸収性骨疾患予防・治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7113232A JPH08301783A (ja) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | 吸収性骨疾患予防・治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08301783A true JPH08301783A (ja) | 1996-11-19 |
Family
ID=14606921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7113232A Pending JPH08301783A (ja) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | 吸収性骨疾患予防・治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08301783A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013179910A1 (ja) | 2012-05-31 | 2013-12-05 | 学校法人近畿大学 | 抗癌剤に起因する末梢性神経障害性疼痛の予防及び／又は治療剤 |
| WO2021126822A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Blue Blood Biotech Corp. | Thrombomodulin functional domains for use in promoting osteoblast functions and bone healing |
| US11497795B2 (en) | 2018-09-28 | 2022-11-15 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Medicament for mitigating conditions and/or suppressing onset of peripheral neuropathy induced by anti-malignant tumor agent |
-
1995
- 1995-05-11 JP JP7113232A patent/JPH08301783A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013179910A1 (ja) | 2012-05-31 | 2013-12-05 | 学校法人近畿大学 | 抗癌剤に起因する末梢性神経障害性疼痛の予防及び／又は治療剤 |
| KR20150004855A (ko) | 2012-05-31 | 2015-01-13 | 갓코 호진 긴키 다이가쿠 | 항암제에서 기인하는 말초성 신경 장해성 동통의 예방 및/또는 치료제 |
| US10709767B2 (en) | 2012-05-31 | 2020-07-14 | Kinki University | Agent for prophylactic and/or therapeutic treatment of peripheral neuropathic pain caused by anticancer agent |
| US11497795B2 (en) | 2018-09-28 | 2022-11-15 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Medicament for mitigating conditions and/or suppressing onset of peripheral neuropathy induced by anti-malignant tumor agent |
| WO2021126822A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Blue Blood Biotech Corp. | Thrombomodulin functional domains for use in promoting osteoblast functions and bone healing |
| CN114786702A (zh) * | 2019-12-20 | 2022-07-22 | 宝血纯化科技股份有限公司 | 用于促进成骨细胞功能和骨愈合的血栓调节蛋白功能域 |
| EP4076491A4 (en) * | 2019-12-20 | 2024-02-07 | Blue Blood Biotech Corp. | FUNCTIONAL AREAS OF THROMBOMODULIN INTENDED FOR USE TO PROMOTE OSTEOBLAST FUNCTIONS AND BONE HEALING |
| CN114786702B (zh) * | 2019-12-20 | 2025-03-11 | 宝血纯化科技股份有限公司 | 用于促进成骨细胞功能和骨愈合的血栓调节蛋白功能域 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051025 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060530 |