JPH08500826A

JPH08500826A - Ｌｆａ−１仲介疾患を処置する方法

Info

Publication number: JPH08500826A
Application number: JP6506552A
Authority: JP
Inventors: ジャルデュー、ポーラ・エム; モンゴメリー、ブルース
Original assignee: ジェネンテク，インコーポレイテッド
Priority date: 1992-08-21
Filing date: 1993-08-20
Publication date: 1996-01-30
Also published as: DE69315847D1; GR3026344T3; AU687755B2; US20050281817A1; CA2140933A1; DE69315847T2; ES2112431T3; IL106756A; US5622700A; WO1994004188A1; ATE161192T1; US20040120960A1; EP0656789B1; AU5083693A; EP0656789A1; MX9305070A; DK0656789T3; IL106756A0; US20020197248A1; ZA936128B

Abstract

(57)【要約】ＬＦＡ−１仲介疾患に罹患している、またはその危険性がある哺乳動物に、ＬＦＡ−１アンタゴニストの治療的有効量である初期用量を投与し、続いて１日を基準に計算してアンタゴニストの初期用量の１００％未満であるＬＦＡ−１アンタゴニストの治療的有効量であるその後の間欠的用量を投与するための方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】ＬＦＡ−１仲介疾患を処置する方法発明の背景発明の分野本発明は、望ましくない免疫反応に陥っている哺乳動物、好ましくは人間を処置する方法に関するものである。特に本発明は、移植された移植片および免疫疾患により惹起されるようなＬＦＡ−１仲介疾患を改善する方法に関するものである。背景および関連技術の説明Ｔリンパ球により仲介される異常および疾病の処置は、多くの経路から取り組まれてきた。慢性関節リウマチ（ＲＡ）はこのような異常の１つである。ＲＡに対する現行の治療は臥床、温熱の適用、および薬物である。サリチラートが現在好ましい薬物であるが、これは特に、免疫抑制剤および副腎皮質ステロイド類のような他の代替薬物が基礎疾患自身よりも大きな病的状態を引き起こし得るためである。非ステロイド性抗炎症薬が利用でき、それらの多くはＲＡ患者において有効な鎮痛、解熱、および抗炎症活性を有する。これらは、インドメタシン、フェニルブタゾン、フェニル酢酸誘導体、例えばイブプロフェンおよびフェノプロフェン、ナフタレン酢酸類（ナプロキセン）、ピロールアルカン酸（トメチン）、インドール酢酸類（スリンダック）、ハロゲン化アントラニル酸（メクロフェナム酸ナトリウム）、ピロキシカム、ならびにジフルニサルを包含する。ＲＡにおける使用のためのその他の薬物は、クロロキンのような抗マラリア薬、金塩類およびペニシラミンを包含する。これらの代替薬はしばしば網膜の損傷ならびに腎および骨髄毒性を包含する重篤な副作用を産む。メソトレキサートのような免疫抑制剤は、それらの毒性の故に、重篤で緩解しないＲＡの処置にのみ使用されてきた。コルチコステロイド類もまた望ましくない副作用（例えば白内障、骨粗鬆症、およびクッシング病症候群）の原因となり、多くのＲＡ患者において良好に寛容されない。Ｔリンパ球により仲介されるもう１つの障害は、移植後の宿主または移植片の拒絶である。移植された同種移植片および異種移植片の生着を延長し、または移植片対宿主の拒絶を防止するための試みは、実験モデルおよび医学的実践の両者において、主に受容者の免疫装置の抑制を中心に置いてきた。この処置は予防的免疫抑制および／または移植片拒絶の処置をそのねらいとしている。予防的免疫抑制のために使用される薬物の例は、細胞毒性薬物、抗代謝薬、コルチコステロイド類、および抗リンパ球血清を包含する。予防的免疫抑制において特に有効であることがわかった非特異的免疫抑制剤（アザチオプリン、プロモクリプチン、メチルプレドニソロン、プレドニソン、そして最も最近ではシクロスポリンＡ）は、移植の臨床的成功を著しく改善した。腎臓移植後のシクロスポリンＡの腎毒性は、プレドニソロンのようなステロイドの同時投与、またはアザチオプリンと共にプレドニソロンを同時投与することによって軽減された。さらに、抗リンパ球グロブリン、引続きシクロスポリンＡを使用して、腎臓がうまく移植された。評価されている別のプロトコルは、移植前に受容者に全リンパ照射を実施し、その後最少限の免疫抑制剤を移植後に使用することである。拒絶に対する処置には、ステロイド、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン類、ヘテロローガスな抗リンパ球グロブリン、および、ＯＫＴ−３を包含する種々の白血球集団に対するモノクローナル抗体の使用が含まれる。一般にはＪ．Pediatrics、１１１巻１００４−１００７頁（１９８７）、そして詳細には米国特許第４６６５０７７号を参照されたい。免疫抑制剤の主たる合併症は感染症である。これに加えて、全身的免疫抑制は、望ましくない毒性効果（例えば腎臓移植後にシクロスポリンＡが使用された場合の腎毒性）、および造血幹細胞のレベルの低下を伴う。免疫抑制薬はさらに、肥満、創傷治癒の遷延、ステロイド高血糖、ステロイド精神病、白血球減少症、胃腸出血、リンパ腫、および高血圧を引き起こし得る。これらの合併症を考慮して移植免疫学者等は、抗原特異的なやり方で免疫応答性を抑制する（その結果、ドナーの同種抗原に対する反応のみが失われる）方法を追求してきた。さらに、自己免疫疾患を専門とする医師等は、自己抗原に対する反応のみが失われるように自己免疫反応を抑制する方法を捜し求めている。このような特異的免疫抑制は一般に、移植される組織の抗原性または拒絶を仲介することのできる特異的細胞のいずれかを修飾することによって達成されてきた。或る事例では、免疫または寛容のいずれが誘導されるかは、抗原が免疫系に提示されるやり方に依存する。移植の前に同種移植組織を組織培養中で生育させることにより前処理すると、２つのマウスのモデル系においてＭＨＣ障壁に対して永久許容が導かれることが判明した。ラファティー等、TranspIantation、２２巻１３８−１４９頁（１９７６）；ボウエン等、Ｌancet、２巻５８５−５８６頁（１９７９）。このような処置は、通過するリンパ系細胞の涸渇、そしてそれ故に組織免疫原性に必要な刺激細胞集団の不在をもたらすという仮説が提示されている。ラファティー等、Ａnnu．Ｒev．Ｉmmunol．、１巻１４３頁（１９８３）。さらに、ラファティー等、Ｓcience、１８８巻２５９−２６１頁（１９７５）（臓器培養中に維持された甲状腺）、およびゴアズ等、Ｊ．Ｉmmunol．、１３７巻１４８２−１４８５頁（１９８６）およびフォーストマン等、Ｐroc．Ｎatl ．Ａcad．Ｓci．Ｕ．Ｓ．Ａ．、７８巻５１５６−５１５９頁（１９８１）（移植前にマウス抗Ｉａ抗血清および補体で処理したランゲルハンス島細胞）を参照されたい。また、リンパ球毒性薬物およびガンマ線照射により前処置したドナー動物から取得しインビトロで１０日間培養した甲状腺は、いかなる正常な同種受容者によっても拒絶されなかった。ゴーズおよびバッハ、Ｊ．Ｅxp．Ｍed．、１４９巻１２５４−１２５９頁（１９７９）。これらの技術は全てドナーのリンパ球細胞の涸渇または除去を含んでいる。血管および腎臓移植のような幾つかのモデルにおいては、皮膚移植には存在しない相関である、クラス１１適合と同種移植片生着の延長との相関が存在する。ペスコヴィッツ等、Ｊ．Ｅxp．Ｍed．、１６０巻１４９５−１５０８頁（１９８４）；コンティ等、Ｔransplant．Ｐroc．、１９巻６５２−６５４頁（１９８７）。故にドナー−受容者のＨＬＡ適合が利用された。加えて、移植前の輸血が有効であることがわかった。オペルズ等、Ｔransplant．Ｐroc．、４巻２５３頁（１９７３）；パーシジュン等、Ｔransplant．Ｐroc．、２３巻３９６頁（１９７９）。移植前の輸血、ドナー−受容者のＨＬＡの適合、および移植後の免疫抑制療法（シクロスポリンＡ）の組合せは移植片の生着率を有意に改善し、その効果は相加的であることがわかった。オペルズ等、Ｔransplant．Ｐroc．、１７巻２１７９頁（１９８５）。移植の応答は、ＭＨＣ抗原のための免疫レセプターに対する抗体によって修飾することもできる。ブルーストーン等、Ｉmmunol．Ｒev．、９０巻５−２７頁（１９８６）。さらに、移植片の生着は、特異的免疫抑制を産む宿主反応を導く抗移植片抗体の存在下で延長され得る。ランカスター等、Ｎature、３１５巻３３６−３３７頁（１９８５）。ＭＨＣ抗原に対する宿主の免疫反応は、臓器移植の準備手順としての骨髄移植を使用することにより特異的に修飾することができる。即ち、ドナーの骨髄接種物から成熟Ｔ細胞を涸渇させるために抗Ｔ細胞モノクローナル抗体を使用し、骨髄移植が移植片対宿主病を招かないようにするのである。ミュラー−ラックホルツ等、Ｔransplant．Ｐroc．、８巻５３７−５４１頁（１９７６）。さらに、骨髄移植のために残っている宿主リンパ系細胞の成分が、全く同種の移植片を用いた場合に起こる免疫不全の問題を解決する。内皮細胞へのリンパ球の接着が、炎症の過程における重要な事象である。Ｔ細胞および内皮細胞の活性化状態に応じて、知られている内皮細胞へのリンパ球の接着経路が少なくとも三つある。Ｔ細胞の免疫認識は、Ｔ細胞レセプターおよび接着レセプターの寄与を必要とし、これらは抗原提示細胞へのＴ細胞の付着を促進し、且つＴ細胞活性化のための調節シグナルを伝達する。幾つかの病的状態につながるこれらの細胞接着相互作用に関与するリンパ球上の主要なインテグリンレセプターとして、リンパ球機能関連（ＬＦＡ）抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤ１１ａ、α鎖／ＣＤ１８、β鎖）が同定されている。内皮細胞免疫グロブリン様接着分子であるＩＣＡＭ−１が、ＬＦＡ−１に対する既知のリガンドであり、移植片拒絶、乾癖、および関節炎に直接関係している。ＬＦＡ−１は、抗原提示細胞に応答しヘルパーＴ細胞によるリンホカインの産生、キラーＴ細胞の仲介する標的細胞の溶解、およびＴ細胞−Ｂ細胞相互作用による免疫グロブリン産生を含む幅広い白血球機能に必要とされる。Ｔ細胞およびＢ細胞上の抗原レセプターの活性化は、ＬＦＡ−１を高い親和性でそのリガンドに結合することを可能にする。ＬＦＡ−１に対するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）は、ＬＦＡ−１の機能の最初の同定および研究を導いた。ダヴィグノン等、Ｊ．Ｉmmunol．、１２７巻５９０頁（１９８１）。ＬＦＡ−１は白血球上にのみ存在し［クレンスキー等、Ｊ．Ｉmmunol．、１３１巻６１１頁（１９８３）］、そしてＩＣＡＭ−１は、活性化白血球、皮膚繊維芽細胞、および内皮上に分布している。ダスティン等、Ｊ．Ｉ mmunol．、１３７巻２４５頁（１９８６）。かつての研究は、多くのインビトロＴ細胞依存免疫機能および限られた数のインビボ免疫反応に及ぼす抗ＣＤ１１ａＭＡｂの作用を調べている。インビトロでは、抗ＣＤ１１ａＭＡｂは、Ｔ細胞の活性化［キュイパーズ等、Ｒｅｓ．Ｉ mmunol．、１４０巻４６１頁（１９８９）］、Ｔ細胞依存Ｂ細胞増殖および分化［ダヴィグノン等、上記；フィッシャー等、Ｊ．Ｉmmunol．、１３６巻３１９８頁（１９８６）］、細胞傷害性Ｔ細胞による標的細胞の溶解［クレンスキー等、上記］、免疫複合体の形成［サンダーズ等、Ｊ．Ｉmmunol．、１３７巻２３９５頁（１９８６）；メンツァー等、Ｊ．Ｉmmunol．、１３５巻９頁（１９８５）］および血管内皮へのＴ細胞の接着を阻害する。ロー等、Ｊ．Ｉmmunol．、１４３巻３３２５頁（１９８９）。さらに、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する抗体５Ｃ６は、マクロファージおよびＴ細胞の両者によるランゲルハンス島内浸潤を防止し、マウスにおけるインシュリン依存性真性糖尿病の進行を阻害することが判明した。ハッチングズ等、Ｎature、３４８巻６３９頁（１９９０）。ＬＦＡ−１−ＩＣＡＭ−１相互作用がインビトロでのＴ細胞機能の最適化に必要であるという所見、および、抗ＣＤ１１ａＭＡｂが蛋白抗原に対する寛容を誘導し［ベンジャミン等、Ｅur．Ｊ．Ｉmmunol．、１８巻１０７９頁（１９８８）］そしてマウスにおける腫瘍移植片の生着を延長する［ヘギー等、Ｔransplanta tion、３７巻５２０−５２３頁（１９８４）］という所見は、これらの分子に対するＭＡｂを人間での移植片拒絶の防止について試験するための基礎であった。霊長類での実験もまた実施されている。例えば、サルでの実験に基づくと、ＩＣＡＭ−１に対するＭＡｂが腎臓移植片拒絶を防止または覆しさえすることが示唆されている。コシミ等、「Ｒ６．５、細胞間接着分子−１に対するモノクローナル抗体による、カニクイザル受容者の腎臓同種移植片の免疫抑制」、スプリンガー等（編）、Ｌeukocyte Ａdhesion Ｍolecules（ニューヨーク：スプリンガー、１９８８）、２７４頁；コシミ等、Ｊ．Ｉmmuno1ogy、１４４巻４６０４ −４６１２頁（１９９０）。さらに、カニクイザルへのインビボでの抗ＣＤ１１ａＭＡｂの投与は、皮膚同種移植片の生着を延長した。バーリン等、Ｔranspl an tat1on、５３巻８４０−８４９頁（１９９２）。遺伝病を持つ子供において骨髄不適合の半数体移植片の拒絶をうまく防止した最初のラット抗マウスＣＤ１１ａ抗体（２５−３；ＩｇＧ１）の使用は、フィッシャー等、Ｌancet、２巻１０５８頁（１９８６）によって報告された。最小限の副作用が観察された。さらに、フィッシャー等、Ｂlood、７７巻２４９頁（１９９１）；ヴァン・ディジュケン等、Ｔransp1antation、４９巻８８２頁（１９９０）；およびペレッツ等、Ｂone Ｍarrow Ｔransp1antion、４巻３７９頁（１９８９）をも参照されたい。さらに、抗体２５−３は、人間におけるステロイド耐性の急性移植片対宿主病の制御に有効であった。ストッパ等、Ｔransplant ．Ｉnt．、４巻３−７頁（１９９１）。しかしながらこれらの結果は、このＭＡｂを用いる、または別の試験的研究においての、ＬＦＡ−１の不変鎖に対する抗ＣＤ１８ＭＡｂを用いる白血病成人患者の移植［マラニンチ等、Ｂone Ｍarrow Ｔransp1ant、４巻１４７−１５０頁（１９８９）］においては再現性が無かった。バウム等、Ｔransp1antation４７巻４７２頁（１９８９）。さらに、ラット抗マウスＣＤ１１ａＭＡｂ、２５ −３は、人間の腎臓移植における急性拒絶の過程を制御することができなかった。ルモーフ等、Ｔransp1antation、５２巻２９１頁（１９９１）。人間の移植におけるモノクローナル抗体の使用についての総説は、ダンタルおよびソウリロー、Ｃurrent Ｏpinion in Ｉmmuno1ogy、３巻７４０−７４７頁（１９９１）により供されている。最近の報告は、抗ＬＦＡ−１または抗ＩＣＡＭ−１ＭＡｂのいずれかによる短時間の処置が、最初から脈管化された異所性心臓同種移植片の生着をマウスにおいて僅かに延長する事を示した。イソベ等、Ｓcience、２５５巻１１２５頁（１９９２）。しかしながら、このモデルで長期間の移植片の生着を達成するためには、両方のＭＡｂによる併用処置が必要であった。個別的には、抗ＬＦＡ−１ＭＡｂ単独では、最大用量４ｍｇ／kg／日で毎日投与後週に１回の処置を用いる場合、最初から脈管化されていない異所性（耳介）マウス心臓移植片の生着を強力且つ有効に延長することが示された。ナカクラ等、Ｊ．Ｈeart Ｌung Ｔransplant．、１１巻２２３頁（１９９２）［Ｔhe Ｎ ew Ｙork Ｔimes、Ｂ６頁（１９９２年３月１０日、火曜日）、サンドラ・ブレイクスリーによる「研究所における新しい技術が臓器移植の拒絶を防止する」をも参照されたい。］。最初から脈管化されていない心臓同種移植は最初から脈管化されている心臓同種移植よりＭＡｂによる生着の延長に対し、より免疫原性且つ抵抗性である。ワレン等、Ｔｒansplant．Ｐroc．、５巻７１７頁（１９７３）；トレージャー等、Ｔransp1antation、４７巻５８７頁（１９８９）。後者の文献は、初期に高用量そしてその後はより低用量を用いたＬ３Ｔ４に対する抗体による処置を論じている。ナカクラ等、上記により用いられたものと同様の抗体を使用した齧歯類の硬化症型疾患の処置に関する別の研究が、イェドノック等、Ｎature、３５６巻６３ −６６頁（１９９２）により報告されている。ＬＦＡ−１仲介疾患を処置するための抗ＬＦＡ−１抗体ならびにＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、およびＬＦＡ−３ならびにこれらの抗体の使用についてのさらなる開示は、９１年１１月２８日公開のＷＯ９１／１８０１１号、９１年１１月１４日公開のＷＯ９１／１６９２８号、９１年１１月１４日公開のＷＯ９１／１６９２７号、９１年６月１３日公開のカナダ国特許出願２００８３６８号、９０年１２月１３日公開のＷＯ９０／１５０７６号、９０年９月２０日公開のＷＯ９０／１０６５２号、９０年９月１９日公開のＥＰ３８７６６８号、９０年７月２６日公開のＷＯ９０／０８１８７号、９０年８月１日公開のＥＰ３７９９０４号、８９年１２月１３日公開のＥＰ３４６０７８号、米国特許第５０７１９６４号、米国特許第５００２８６９号、８８年１１月１０日公開のオーストラリア国特許出願８８１５５１８号、８８年１１月９日公開のＥＰ２８９９４９号、および８９年２月２２日公開のＥＰ３０３６９２号を包含する。抗ＬＦＡ−１または抗ＩＣＡＭ−１抗体をうまく利用する上の方法は伝統的な免疫抑制薬物療法の改善を示す。しかしながらこれらは、免疫系を過度に抑制（且つ感染の有意な危険性を創出する）するかまたは長期の寛容には不十分であるかいずれかであると予想される、最小または固定用量より高い用量を主張している。当分野には、自己免疫疾患、移植片対宿主または宿主対移植片拒絶、およびＴ細胞炎症反応のようなＬＦＡ−１により仲介される疾患をより良く処置し、その結果副作用を最小限にし、自己または外来抗原に対する特異的寛容を維持する必要性が存在する。したがって、ＬＦＡ−１仲介疾患に対する耐性を維持するための、副作用が最小限である改善法を提供することが本発明の１つの目的である。移植において移植片の生着を延長することがもう１つの目的である。移植患者に大用量の免疫抑制剤を使用することから起こる毒性および他の望ましくない作用を最小限とすることが、さらなる目的である。さらに別の目的は、宿主に、特異的免疫疾患を惹起する物質または抗原に対する選択的寛容を提供し、その結果、常套的な免疫抑制剤または用量が使用された場合に起こる感染および免疫系へのその他の侵襲に対し罹患性を低下させることである。これらのおよびその他の目的は、当業者にとって明らかとなるであろう。発明の要約これらの目的は、哺乳動物にＬＦＡ−１アンタゴニストの治療的有効量である初期用量を投与し、続いて１日を基準に計算してＬＦＡ−１アンタゴニストの初期用量の１００％未満であるＬＦＡ−１アンタゴニストの治療的有効量であるその後の間欠的用量を投与し、それにより当該哺乳動物に当該疾患の選択的寛容を獲得させることからなる、哺乳動物においてＬＦＡ−１仲介疾患を処置する方法によって達成される。好ましくは、ＬＦＡ−１アンタゴニストは抗ＬＦＡ−１抗体、特に抗ＣＤ１１ａである。驚くべきことに、特異的寛容は用量計画を調節することにより誘導される事、そして処置の過程を通じてアンタゴニストの用量を最初のレベルと同じに維持する必要は無い事が判明した。さらに、移植時の移植片の生着が、最初高用量を与え、その後持続的維持用量を与える投与計画を用いることにより延長されることもまた意外なことであった。ただ１種類の薬物を使用するこの投与法が、疾患を引き起こす物質に対する宿主の選択的寛容をもたらし、その結果宿主の防御系が著しく低下しなかったこともまた予想外であった。本明細書に記載の移植法は同種移植および異種移植の両者に適用可能であり、異種移植の使用は、人間からの組織の供給が限られていることにより遭遇する困難を克服するものである。図面の簡単な説明図１Ａおよび１Ｂは、それぞれ、Ｃ３Ｈマウス受容者における最初から脈管化されていない異所性（耳介）ＢＡＬＢ／ｃ心臓移植片の生着の延長についての、１−１３日のＭ１７（抗ＣＤ１１ａＭＡｂ、星印）およびシクロスポリンＡ（ＣｓＡ、丸印）による処置の、効力比較および力価を示す図である。図２は、ＢＡＬＢ／ｃからＣ３Ｈマウスへの計数的心臓移植バイオアッセイから誘導されたデータのイソボログラムプロットである。この検定を用いて、異なる用量のＭ１７およびＣｓＡ（ｎ＝５／用量群）による毎日の併用処置が移植片の生着に及ぼす効果を評価した。移植後１４日における生着移植片パーセントをこの検定の終点として使用した。図３は、Ｃ３Ｈマウス受容者（ｎ＝４−１４／群）における異所性（耳介）の、最初から脈管化されていないＢＡＬＢ／ｃ心臓移植片の生着に及ぼすＭ１７用量（腹腔内、ｉ．ｐ．）および投与計画の効果を示す図である。マンーフィットニーＵ試験を用いて、群間の生着時間における相違についての統計学的有意性のレベル（小サイズの試料用に補正）を決定した。ｐ＞０．０５を有意でない（ＮＳ）と考えた。白抜きの丸はラットＩｇＧ２ａイソタイプ対照２mg／kgの０−１３日間毎日投与であり、塗りつぶした正方形は、Ｍ１７２mg／kgの０−１３日間毎日投与であり、塗りつぶした丸はＭ１７２mg／kgの０−１３日間３日毎の投与であり、三角形はＭ１７２mg／kgの０−２０日間毎日投与、続いて９８日まで週に１回投与であり、そして星印はＭ１７８mg／kgの０−１４日間毎日投与、続いて９９日まで２mg／kgの２過間毎の投与である。図４は、ＢＡＬＢ／ｃ同種抗原に対して前感作されたＣ３Ｈ受容者マウスにおけるＢＡＬＢ／ｃ耳一心臓同種移植片生着に及ぼす異なったＭ１７処置計画の効果を示す図である。正方形はラットＩｇＧ２ａイソタイプ対照であり、丸はＭ１７であり、ここで塗りつぶしてあるものは−７ないし−３日であり、陰を付してあるものは−７ないし１３日であり、そして白抜きは０ないし１３日である。図５は、フローサイトメトリーにより測定された、脾臓リンパ球数の相対的比率に及ぼすＭ１７処置の効果を示す図である。白抜きの棒は非処置であり、陰付きの棒はラットＩｇＧ２ａイソタイプ対照による処置であり、そして塗りつぶした棒はＭ１７による処置であり、ここで、処置とは、０ないし１３日の４mg／kg ／日ｉ．ｐ．である。図６は、ＣｏｎＡに対するＣ３Ｈ脾臓細胞のインビトロ増殖反応に及ぼすインビボのＭ１７処置の効果を示す図である。³Ｈ−ＴｄＲ取り込みにおける平均の変化パーセント対ＣｏｎＡ濃度のグラフの陰付きの部分は阻害を表わし、一方陰の無い部分は活性化を表わす。ｐ値は対照に対する値である。図７は、宿主対移植片膝窩リンパ節（ＰＬＮ）過形成検定に及ぼすＭ１７による処置の効果を示す図である。ｐ値は対照に対する値である。図８は、人間の混合リンパ球反応に及ぼす抗ＣＤ１８（白抜きの丸）、抗ＣＤ１１ａ（塗りつぶした丸）、抗ＩＣＡＭ（白抜きの正方形）およびイソタイプ対照（塗りつぶした正方形）の阻害効果を示す図である。図９は、細胞傷害性Ｔリンパ球が標的細胞を死滅させることに対する対照抗体（塗りつぶした棒）、Ｈ５２（破線でうめた棒）、抗ＣＤ１１ｂ（中等度に陰を付した棒）、抗ＣＤ１１ａ（白抜きの破線付きの棒）、抗ＣＤ１８（白抜きの棒）、および抗ｇｐ１２０（濃い陰を付した棒）の効果を示す図である。図１０は、免疫原ジニトロフルオロベンゼンに対するマウスの接触感受性に及ぼすＭ１７の効果を示す図である。好ましい態様の説明Ｉ．定義「ＬＦＡ−１仲介疾患」という語は、リンパ球上のＬＦＡ−１レセプターの関与する細胞接着相互作用により引き起こされる病的状態を意味する。係る疾患の例は、Ｔ細胞炎症反応、例えば乾癖を包含する炎症性皮膚疾患；炎症性腸疾患に付随する反応（例えばクローン病および潰瘍性大腸炎）；成人呼吸窮迫症候群；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；アレルギー状態、例えば湿疹および喘息ならびにＴ細胞の浸潤および慢性炎症反応を含むその他の状態；皮膚過敏反応（ツタウルシおよび毒カシを含む）；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；自己免疫疾患、例えば慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、真性糖尿病、多発性硬化症、レイノー症候群、自己免疫性甲状腺炎、実験的自己免疫性脳脊髄炎、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、および結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症および脈管炎に典型的に見いだされるサイトカインおよびＴリンパ球により仲介される遅延型過敏症に付随する免疫反応；悪性貧血；白血球漏出を含む疾患；ＣＮＳ炎症性疾患、敗血症または外傷から派生する多臓器傷害症候群；自己免疫性溶血性貧血；重症筋無力症；抗原抗体複合体仲介疾患；移植片対宿主または宿主体移植片病を含む全ての型の移植等を包含する。このような疾患の「処置」とは、治療、予防処置、移植片の拒絶の防止、および長期的基礎に基づく移植片の寛容の誘導を包含する。「初期」投与とは、その処置において投与される最後の投与ではない投与を意味し、その疾患が最初に課された（または最初に現われまたは最初に診断された）時および／またはその前、例えば移植片の移植が行なわれた日、好ましくは少なくともその疾患が最初に課され、現われ、または診断された時に投与される投与を意味する。初期投与は１回の投与である必要はないが、最後の投与ではない。「その後の」投与は、初期投与に続く投与であって、その処置のために投与される最後の投与を含む。この後者の投与は、第二の移植片を単独で寛容するのには通常不充分である維持用量である。本明細書中使用される「移植片」という語は、受容者への移植のためにドナーから誘導される生物学的材料を意味する。移植片は、例えばランゲルハンス島細胞のような単離細胞、新生児の羊膜のような組織、骨髄、造血前駆細胞、ならびに臓器、例えば皮膚、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺葉、肺、腎臓、管状臓器（例えば腸管、血管、または食道）等、様々な材料を包含する。管状臓器は、食道、血管、または胆管の損なわれた部分と置き換えるのに使用することができる。皮膚移植片は、火傷のみならず、損傷を受けた腸管の仕上げとして、または横隔膜ヘルニアのような或る種の欠陥の閉鎖にも使用することができる。移植片は、死体または生きているドナーであるとに拘らず、人間を含む任意の哺乳動物の供給源から誘導される。好ましくは、移植片は骨髄または心臓のような臓器であり、移植片のドナーおよび宿主はＨＬＡクラス１１抗原が適合している。「哺乳動物」という語は、人間、飼い慣らされたおよび農場の動物、ならびに動物園、スポーツ、または愛玩動物、例えば犬、馬、猫、牛等を包含する哺乳類に分類される任意の動物を意味する。好ましくは、本明細書中の哺乳動物は人間である。本明細書中使用される「哺乳動物宿主」という語は、任意の適合する移植受容者を意味する。「適合する」という語は、提供された移植片を受け入れるであろう哺乳動物宿主を意味する。好ましくは宿主は人間である。移植片のドナーおよび宿主のいずれもが人間である場合、これらは、組織適合性が改善されるよう、好ましくはＨＬＡクラス１１抗原が適合している。本明細書中使用される「ドナー」という語は、そこから移植片が誘導される、死んだまたは生きている哺乳動物種を意味する。好ましくはドナーは人間である。人間のドナーは好ましくは、身体検査において正常であり、また、主要血液型障壁の交差は同種移植片の生着を害する可能性があるため、主要ＡＢＯ血液型が同じである、ボランティアの血族のドナーである。しかしながら、例えばＯ型のドナーの腎臓をＡ、ＢまたはＡＢ型の受容者に移植することは可能である。「移植する」という語およびその変化形は、その移植が同系（ドナーおよび受容者が遺伝的に等しい場合）、同種（ドナーおよび受容者が異なった遺伝的起源を有するが同じ種である場合）、または異種（ドナーおよび受容者が異なった種である場合）であるとに拘らず、宿主への移植片の挿入を意味する。したがって典型的な筋書きにおいては、宿主は人間であり、移植片は、同じまたは異なる遺伝的起源を有する人間から誘導される同種移植片である。別の筋書きにおいては、ヒヒの心臓を人間の受容宿主に移植するといったように、移植片はこれが移植される種とは異なる種から誘導され、例えば豚の心臓弁、または動物のβランゲルハンス島細胞もしくは神経細胞を人間の宿主に移植するといったように、系統発生学上遠く隔たった種の動物を包含する種から誘導される。「ＬＦＡ−１アンタゴニスト」という語は一般に、ＣＤ１１ａもしくはＣＤ１８のいずれかまたはこの両者に対する抗体を意味するが、さらに、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１の可溶性型（例えば、ＩＣＡＭ−１細胞外ドメインの単独または免疫グロブリン配列と融合したもの）、ＩＣＡＭ−１に対する抗体、およびそのフラグメント、またはＬＦＡ−１およびＩＣＡＭ−１の相互作用を阻害できるその他の分子をも包含する。「抗ＬＦＡ−１抗体」または「抗ＬＦＡ−１ＭＡｂ」という語は、ＣＤ１１ａもしくはＣＤ１８のいずれかまたはこの両者に対する抗体を意味する。抗ＣＤ１１ａ抗体は、例えばＭＨＭ２４［ヒルドレス等、Ｅur．Ｊ．Ｉmmunol．、１３巻２０２−２０８頁（１９８３）］、Ｒ３．１（ＩｇＧ１）［Ｒ．ロスライン、ベーリンガー・インゲルハイム・ファーマシューティカルズ・Ｉnc．、リッジフィールド、ＣＴ］、２５−３（または２５．３）、イムノテク、フランスから入手し得るＩｇＧ１［オリーヴ等、フェルドマン編、「ヒトＴ細胞クローン、免疫調節への新たな試み」、クリフトン、ＮＪ、ヒューマナ、１９８６、１７３頁］、ＫＢＡ（ＩｇＧ２ａ）［ニシムラ等、Ｃｅll.Ｉmmunol.、１０７巻３２頁（１９８７），ニシムラ等、同書、９４巻１２２頁（１９８５）］、Ｍ７／１５（ＩｇＧ２ｂ）［スプリンガー等、Ｉmmunol．Ｒev. 、６８巻１７１頁（１９８２）］、ＩＯＴ１６［フェルモット・デスロチェス等、Ｓcand. Ｊ．Ｉmmunol．、３３巻２７７−２８６頁（１９９１）］、ＳＰＶＬ７［フェルモット・デスロチェス等、上記］、およびＡＴＣＣより入手し得るラット抗マウスＣＤ１１ａ抗体であるＭ１７（ＩｇＧ２ａ）を包含する。抗ＣＤ１８抗体の例は、ＭＨＭ２３［ヒルドレス等、上記］、Ｍ１８／２（ＩｇＧ２ａ）［サンチェスーマドリッド等、Ｊ．Ｅxp．Ｍed．、１５８巻５８６頁（１９８３）］、Ｈ５２［フィキート等、Ｊ．Ｃlin．Ｌab．Ｉmmunol．、３１巻１４５−１４９頁（１９９０）］、Ｍａｓ１９１ｃ［フェルモット・デスロチェス等、上記］、ＩＯＴ１８［フェルモット・デスロチェス等、上記］、６０．３［テイラー等、Ｃlin．Ｅxp．Ｉmmunol．、７１巻３２４−３２８頁（１９８８）］、および６０．１［カンパーナ等、Ｅur．Ｊ．Ｉmmunol．、１６巻５３７−５４２頁（１９８６）］を包含する。抗体を包含するその他の好適なＬＦＡ−１アンタゴニストの例は、ハッチングズ等、上記、９１年１１月２８日公開のＷＯ９１／１８０１１号、９１年１１月１４日公開のＷＯ９１／１６９２８号、９１年１１月１４日公開のＷＯ９１／１６９２７号、９１年６月１３日公開のカナダ国特許出願２００８３６８号、９０年１２月１３日公開のＷＯ９０／１５０７６号、９０年９月２０日公開のＷＯ９０／１０６５２号、９０年９月１９日公開のＥＰ３８７６６８号、９０年８月１日公開のＥＰ３７９９０４号、８９年１２月１３日公開のＥＰ３４６０７８号、米国特許第５０７１９６４号、米国特許第５００２８６９号、８８年１１月１０日公開のオーストラリア国特許出願８８１５５１８号、８８年１１月９日公開のＥＰ２８９９４９号、および８９年２月２２日公開のＥＰ３０３６９２号に記載されている。抗体は、鶏ならびに齧歯類、ヤギ、霊長類、および人間のような哺乳動物を包含する任意の供給源からのものが適当である。好ましくは、抗体は、処置される種と同じ種由来のものであり、より好ましくは抗体はヒト化（即ち人間の構成成分を全て持っている）されており宿主は人間である。抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗体とすることができるが、好ましくはモノクローナル抗体であって、これは常套的技術により製造することができる。抗体はＩｇＧ−１、２、−３、もしくは−４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、または一方のクラス由来のＦｖもしくはＣＤＲが別のクラスに置き換えられているクラス内キメラである。抗体はエフェクター機能の可能なＦｃドメインを有していてよく、または補体の結合もしくはＡＤＣＣへの参加ができなくともよい。補助療法のために本明細書中使用される「免疫抑制剤」という語は、移植片が移植される宿主の免疫系を抑制または遮断するように作用する物質を意味する。これはサイトカイン産生を抑制し、自己抗原の発現を下方調節または抑制し、またはＭＨＣ抗原を遮断する物質を包含するであろう。このような物質の例は、２ −アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン類（米国特許第４６６５０７７号、上記、を参照されたい）、アザチオプリン（または、アザチオプリンに対して望ましくない反応があるならばシクロホスファミド）；ブロモクリプチン；グルタルアルデヒド（米国特許第４１２０６４９号、上記、に記載されるように、これはＭＨＣ抗原を遮断する）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントに対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；グルココルチコステロイド類のようなステロイド類、例えばプレドニソン、メチルプレドニソロン、およびデキサメタゾン；サイトカインまたは抗インターフェロン−γ、−β、もしくは−α抗体を包含するサイトカインレセプターアンタゴニスト；抗腫瘍壊死因子−α抗体；抗腫瘍壊死因子−β抗体；抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２レセプター抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；ヘテロローガスな抗リンパ球グロブリン；汎Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（９０年７月２６日公開のＷＯ９０／０８１８７号）、ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞レセプター（コーエン等、米国特許第５１１４７２１号）；Ｔ細胞レセプターフラグメント［オフナー等、Ｓcience、２５１巻４３０−４３２頁（１９９１）］；ハウウェル、ＷＯ９０／１１２９４号；イアンウェイ、Ｎature、３４１巻４８２頁（１９８９），およびウァンダーバーク、ＷＯ９１／０１１３３号］；およびＴ１０Ｂ９のようなＴ細胞レセプター抗体（ＥＰ３４０１０９号）を包含する。これらの物質は、本発明において使用されるＣＤ１１ａまたはＣＤ１８アンタゴニストと同時にまたは別な時に投与され、文献に開示されるのと同じまたはより少ない用量で使用される。好ましい補助免疫抑制剤は、行なわれる移植の型を包含する処置される疾患の型、および患者の病歴を包含する多くの因子に依存するであろうが、シクロスポリンＡ、グルココルチコステロイド（最も好ましくはプレドニソンまたはメチルプレドニソロン）、ＯＫＴ−３モノクローナル抗体、アザチオプリン、ブロモクリプチン、ヘテロローガスな抗リンパ球グロブリン、またはそれらの混合物から選択するのが一般的総合的に好ましい。宿主による「移植された移植片の寛容の増強」とは、移植される宿主において移植片の生着を延長すること、即ち宿主の免疫系を抑制してその結果外来移植片をより良く寛容する事を意味する。「間欠的」または「周期的」投与とは、一定の期間連続的であって且つ好ましくは１日以上間隔の空いた規則的な間隔の空く投与である。疾患の「選択的寛容」とは、その疾患を惹起する特異的物質に対する宿主免疫系による寛容であるが、二回目の同種または異種移植片を拒絶する宿主の能力を保持していることを意味する。好ましくはこの寛容は、それ以外の点で免疫系が損なわれていないような寛容である。ＩＩ．発明を実施する様式高用量のＬＦＡ−１アンタゴニストによる初期誘導と低用量のアンタゴニストによるその後の継続処置を用いる処置方法において、優れた免疫抑制効果が見られる。抗体をアンタゴニストとして使用する場合、これらは任意の適当な技術によって製造される。ＬＦＡ−１またはそのαもしくはβ鎖のいずれかまたはその他の任意の適当な免疫原を使用して、抗ＬＦＡ−１または抗ＩＣＡＭ抗体の形成を誘導することができ、それらは常套的スクリーニングにより同定される。このような抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗体のいずれか、または係る抗体の抗原結合フラグメント（例えばＦ（ａｂ）またはＦ（ａｂ）₂フラグメント）であってよい。抗体はＬＦＡ−１またはＩＣＡＭ−１について一価または多価であり、且つＬＦＡ−１もしくは１ＣＡＭ−１について単一特異性であるかまたはＬＦＡ−１もしくはＩＣＡＭ−１および予め定められた抗原について多特異性である。ＬＦＡ−１アンタゴニストが１つの治療過程に使用され、異なったアンタゴニストが別の治療段階に使用され（例えば初期または維持用量）、またはそれらが組み合わされて使用される（例えば、ＩＣＡＭ−１に対する抗体およびＬＦＡ−１に対する抗体）。ＬＦＡ−１またはＩＣＡＭ−１に対するポリクローナル抗体は、一般に、ＣＤ１１ａもしくはＣＤ１８ポリペプチドもしくはそれらの二量体またはＩＣＡＭ− １を、アジュバントと共に、複数回皮下（ｓ．ｃ．）または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することにより、動物で作製する。二価のまたは誘導体形成物質、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した複合体形成）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水琥珀酸、ＳＯＣｌ₂、またはＲ¹Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ［式中、ＲおよびＲ¹は異なったアルキル基である］を使用して、免疫される種において免疫原性のある蛋白、例えばスカシガイヘモシアニン、血清アルブミン、牛チログロブリン、または大豆トリプシンインヒビターに、ＬＦＡ−１またはＩＣＡＭ−１抗原ポリペプチド（標的アミノ酸配列を含むその鎖およびフラグメントを包含する）をコンジュゲートさせるのが有用であり得る。宿主動物またはそれから得られる培養された抗体産生細胞の抗体刺激の経路およびスケジュールは一般に、抗体刺激および産生のための確立された常套的技術に従う。試験モデルとしてマウスが頻繁に使用されるが、人間の対象またはここから得られる抗体産生細胞を包含する任意の哺乳動物対象を本発明の工程に従って処理し、人間を包含する哺乳動物のハイブリッドセルライン産生の基礎として役立たせることもできる。動物は典型的には、複合体１mgまたは１μg（それぞれウサギまたはマウスの場合）をフロイント完全アジュバント３容量と合し、この溶液を複数の部位に皮内注射することにより、免疫原性複合体または誘導体に対して免疫する。１ヶ月後、フロイント不完全アジュバント（またはその他の適当なアジュバント）に入れた当初の１／５ないし１／１０量の複合体を複数の部位に皮下注射することにより、この動物を追加免疫する。７ないし１４日後、動物から採血し、血清を抗体力価について検定する。動物は、この力価がプラトーに達するまで追加免疫する。好ましくは、動物は同じＬＦＡ−１またはＩＣＡＭポリペプチドの複合体ではあるが異なった蛋白にコンジュゲートさせ、および／または異なった架橋剤を介してコンジュゲートさせた複合体によって追加免疫する。複合体は組み替え細胞培養中で蛋白融合物として生成させることもできる。さらに、免疫反応を促進させるため、ミョウバンのような凝集剤を使用する。モノクローナル抗体は、免疫した動物から免疫細胞−−典型的には脾臓細胞またはリンパ節組織からのリンパ球−−を回収し、この細胞を常法、例えば骨髄腫細胞との融合またはエプスタイン−バー（ＥＢ）ウイルス形質転換により不死化し、所望の抗体を発現するクローンをスクリーニングすることにより製造する。ケーラーおよびミルシュタイン、Ｅur．Ｊ．Ｉmmunol．、６巻５１１頁（１９７６）により最初に記載され、ハマーリング等、「モノクローナル抗体およびＴ細胞ハイブリドーマ」、エルセヴィア、Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１）によっても記載されているハイブリドーマ技術は、多くの特異的抗原に対する高レベルのモノクローナル抗体を分泌するハイブリッドセルラインを生産するため広く採用されている。或る種の細胞を別の種の細胞と融合させることは可能である。しかしながら、免疫された抗体産生細胞と骨髄腫とは同じ種由来であることが好ましい。ハイブリッドセルラインは細胞培養培地中インビトロで培養に維持することができる。抗体を産生するセルラインは、ヒポキサンチン−アミノプテリンチミジン（ＨＡＴ）培地中の連続セルラインからなる組成物中で選択および／または維持することができる。事実、いったんハイブリドーマセルラインが確立されるとそれは、様々な栄養的に充分な培地上に維持することができる。その上、このハイブリッドセルラインは、凍結および液体窒素下での貯蔵を包含するかなり多数の常套的方法で保管および保存することができる。凍結されたセルラインは、回復させ、無限に培養してモノクローナル抗体の合成および分泌を再開させることができる。分泌された抗体は、沈澱化、イオン交換クロマトグラフィー、親和クロマトグラフィー等のような常法により、組織培養上清から回収される。本明細書に記載の抗体は、場合によりＩｇＧまたはＩｇＭをプールされた血漿から精製するためにこれまで使用されてきた、これら免疫グロブリンの精製のための常套的方法、例えばエタノールまたはポリエチレングリコール沈澱法によってハイブリドーマ細胞培養からも回収される。この精製された抗体は無菌濾過する。通常はマウスモノクローナル抗体が使用されるが、本発明はこれに限定されない。事実、人間の抗体が使用でき、好ましいことが立証され得る。このような抗体は人間のハイブリドーマを使用することにより得ることができる（コート等、「モノクローナル抗体および癌治療」、アラン・Ｒ．リス、７７頁（１９８５））。事実、本発明によれば、適当な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適当な生物活性（例えばＩＣＡＭ−１を結合させる能力）の人間の抗体分子由来の遺伝子とスプライスすることによる、キメラ抗体の産生のために開発された技術（モリソン等、Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．、８１巻６８５１頁（１９８４）；ノイバーガー等、Ｎature、３１２巻６０４頁（１９８４）；タケダ等、Ｎature、３１４巻４５２頁（１９８５）；ＥＰ１８４１８７号；ＥＰ１７１４９６号；ＥＰ１７３４９４号；ＰＣＴＷＯ８６／０１５３３号；シャウ等、Ｊ．Ｎat．Ｃanc．Ｉnst．、８０巻１５５３−１５５９頁（１９８８）；モリソン、Ｓcience、２２９巻１２０２−１２０７頁（１９８５）；およびオイ等、Ｂ ioTechniques、４巻２１４頁（１９８６））を用いることができ、係る抗体は本発明の範囲内にある。モノクローナル抗体の生成の副行路となる、抗体分子の抗原結合領域（Ｆａｂフラグメントとして知られる）の組み替えＤＮＡ版を作製する技術は、本発明の実施の範囲内に包含される。免疫した動物から取得した免疫系細胞から抗体特異的メッセンジャーＲＮＡ分子を抽出し、これらを相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に転写し、そしてこのｃＤＮＡを細菌発現系にクローニングする。本発明の実施に好適なこのような技術の１つの例はスクリプス／ストラタジーンの研究者により開発され、それは、発現されたＦａｂ蛋白を周辺腔（細菌の細胞膜と細胞壁との間）に移動させまたは分泌させるリーダ−配列を含む適当なバクテリオファージラムダベクターを組み込むものである。極めて多数の機能的Ｆａｂフラグメントを迅速に生成し、該抗原を結合するものについてスクリーニングすることができる。このようなＬＦＡ−１−またはＩＣＡＭ−結合分子（ＬＦＡ−１またはＩＣＡＭポリペプチドに対する特異性を有するＦａｂフラグメント）は、本明細書中に定義され、論じられ、そして特許請求されている「抗体」という語の中に特に包含されている。典型的には、本発明に係る方法において使用されるＬＦＡ−１アンタゴニストは、これを周囲温度、適当なｐＨ、および所望の純度で、生理学上許容し得る担体、即ち用いられる用量および濃度において受容者にとって非毒性である担体と混合することによって製剤化される。製剤のｐＨは主にその用途およびアンタゴニストの濃度に依存するが、好ましくは大体約３ないし約８の範囲である。ｐＨ５の酢酸緩衝液中の製剤が好適な態様である。本発明における使用のためのＬＦＡ−１アンタゴニストは好ましくは無菌である。無菌性は、（０．２ミクロン）膜で無菌濾過することにより容易に達成される。ＬＦＡ−１アンタゴニストは、再構成のための凍結乾燥製剤も許容し得るが、通常は水溶液として保存する。このアンタゴニスト組成物は、良好な医学的実践に合致した方法で製剤化され、用量決定され、そして投与される。この状況における考慮のための因子は、処置されるその疾患、処置されるその哺乳動物、個々の患者の臨床的状態、疾患の原因、薬物のデリバリー部位、投与の方法、投与のスケジュール、および臨床医に知られるその他の因子を包含する。投与されるべきＬＦＡ−１アンタゴニストの「治療的有効量」は、このような考察により決定され、且つ、慢性関節リウマチを処置し、炎症反応を低下させ、免疫刺激物の寛容を誘導し、宿主による移植片の拒絶もしくは逆の拒絶をもたらす免疫反応を防止し、または移植された移植片の生着を延長することを包含する、ＬＦＡ−１仲介疾患を防止、緩解、または処置するために必要な最少量である。このような量は、好ましくは、宿主にとって毒性でありまたは宿主を有意により感染させ易くする量より少ない。一般的な案として、非経口的に投与される用量当りのＬＦＡ−１アンタゴニストの初期の薬学的有効量は、１日当り約０．１ないし２０mg／kg（患者の体重）の範囲であり、使用されるＬＦＡ−１アンタゴニストの典型的な初期の範囲は０．３ないし１５mg／kg／日であろう。しかしながら上に述べたように、これらの示唆される抗体量は治療上の裁量に任されるところ大である。適当な用量および投与スケジュールを選択する際の重要な因子は、上に指摘したように、得られる結果である。例えば、進行中のそして急性の移植片拒絶の処置のためには初期に、または、移植片の機能の突然の低下を特徴とする急性の拒絶の処置のためには後の段階で、比較的高用量が必要とされ得る。その後の用量が初期用量の１００％より低い場合、これは日用量を基礎として計算される。したがって、例えば、投与計画２mg／kg／日で毎日２週間の注射とこれに続く０．５mg／kg／日で２週間に１回９９日間の投与から成る場合、これは１日を基に計算すると、後の用量が初期用量の約１．８％となる（即ち、２／日／１００％＝０．５／１４日／ｘ％、ｘ＝〜１．８％）。好ましくは、後の用量は、ＬＦＡ−１アンタゴニストの初期用量の約５０％未満、より好ましくは約２５％未満、より好ましくは約１０％未満、さらに好ましくは約５％未満、そして最も好ましくは約２％未満である。最も有効な結果を得るために、疾患にもよるが、初期用量は、その疾患の最初の徴候、診断、出現、または存在とできるだけ近接して、または自己免疫疾患の緩解中に投与する。好ましくは、初期投与は、移植された移植片の場合と同様、抗原への暴露前に開始する。さらに、初期投与が抗原への暴露に先立ってまたはそれと実質上同時である場合、後の投与は、特に移植では初期投与より長期間行なわれる事、そして患者の生涯継続する必要はないが持続的間欠的維持用量である事が好ましい。好ましいスケジュールでは、初期用量（即ち、１日に１回投与よりは頻繁で連続的注入まで且つこれを含む用量で、望ましくない免疫反応の時点またはその前に投与される）およびその後の用量が、ほぼ週に１回より多くなく定期的に投与されるような投与スケジュールである。より好ましくは、特定の疾患に応じて、そして特に移植のためには、初期の日用量は、抗原、例えば移植片への暴露または急性免疫反応（自己免疫疾患の場合のように）の開始後少なくとも約１週間、好ましくは少なくとも約２週間投与され、その後の用量は、初期投与が終了した後、２週間に１回よりは頻繁でなく（好ましくは２週間に１回）少なくとも約５週間、好ましくは少なくとも約１０週間投与する。別の好ましい態様、特にアンタゴニストが抗ＣＤ１１ａまたは抗ＣＤ１８抗体である態様においては、初期投与は、移植の実施後約１日ないし４週間、より好ましくは約１週間ないし３週間、より好ましくは約２週間ないし３週間で終了し、移植実施前約１週間から移植とほぼ同時までに開始する。ＬＦＡ−１アンタゴニストは、非経口的、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内、そして局所免疫抑制処置が望まれるならば病変内投与（移植前に移植片をアンタゴニストで潅流またはその他の方法でアンタゴニストと接触させることを包含する）を包含する任意の適当な手段により投与する。非経口的注入は筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を包含する。さらに、ＬＦＡ−１アンタゴニストは特に、漸減する用量のＬＦＡ−１アンタゴニストをパルス注入する事により好適に投与される。好ましくはこの投与は注射によって、最も好ましくはその投与が短時間であるか長期間であるかに部分的に応じて静脈内または皮下注射によってなされる。ＬＦＡ−１アンタゴニストは所望により、問題の疾患の防止または処置に現在使用されている１またはそれ以上の薬物と共に製剤化されるが必ずしもその必要はない。例えば慢性関節リウマチの場合、この抗体はグルココルチコステロイドと組み合わせて投与することができる。さらに、Ｔ細胞レセプターペプチド療法は、自己免疫性脳脊髄炎の臨床徴候を防止する好適な補助療法である。オフナー等、上記。移植のために、この抗体は、免疫抑制効果を調節するため、上に定義されたような免疫抑制剤、例えばシクロスポリンＡと同時にまたは別個に投与することができる。このようなその他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するＬＦＡ −１アンタゴニストの量、疾患または処置の型、および上に論じたその他の因子に依存する。これらは一般に上文で使用されたのと同じ用量および投与経路で、またはこれまで用いられた用量の約１ないし９９％で使用される。上述の様々な自己免疫疾患は、その疾患の結果として攻撃する自己抗原に対する免疫寛容を誘導する様式でＬＦＡ−１アンタゴニストにより処置される。この点において自己免疫疾患は宿主対移植片拒絶に似ており、同様の様式でＬＦＡ− １アンタゴニストで処置される。しかしながらこれらの疾患では、移植前の移植片とは異なり患者は既に標的抗原に対する免疫反応を開始している。したがって、このような患者では常法、例えばシクロスポリンＡまたはその他の常套的免疫抑制剤（単独またはＬＦＡ−１アンタゴニストと共に）の常套的使用によってまず免疫抑制の一過性状態を誘導し且つこれを維持し、または、緩解（自己免疫反応の病理学的または機能的徴候の消失または実質的な減少）の期間が出現するまで患者を監視することが望ましい。好ましくは、一過性免疫抑制は、例えば実施例１でさらに記載されるように常套的治療を用いたＴ細胞の涸渇によって誘導される。その後、免疫抑制誘導剤を投与停止した場合または緩解がその他の理由で破棄された場合のリバウンドを防ぐために、ＬＦＡ−１アンタゴニストを投与する。別法として、緩解した患者の状態を突発の徴候について注意深く監視し、最初の機能的または生化学的突発の出現時に速やかに初期投与法を開始し、突発がおさまるまで継続する。この期間内のＬＦＡ−１投与は、本明細書の他の箇所に記載されている初期用量を構成する。自己免疫疾患の場合、初期投与は約１週間ないし１６週間持続させることになるであろう。その後、より低用量のＬＦＡ−１アンタゴニストの維持用量を、移植片または宿主拒絶の緩解のために本明細書中に開示される様式と実質上同じ様式で投与するが、幾つかの例においては、その後のまたは維持的投与を移植の場合より長い期間に延長することが望ましい。本発明のある態様においては、或る抗原または抗原を含有する組成物がその自己免疫反応の原因であることがわかっているならば、ＬＦＡ−１アンタゴニストの初期投与の後にその抗原を患者に投与し（所望によりＩＬ−１および／またはガンマインターフェロンと共に）、他の抗原に対する患者の反応を最小限に免疫抑制しつつ該抗原に対する自己免疫反応の再現を抑制するため、その後そのアンタゴニストの用量を維持する。患者は隔離するのが最適であり、好ましくは、ＬＦＡ−１アンタゴニストによる初期の処置の時点で、移植医療で現在用いられているような無菌環境に隔離する。患者にはいかなる感染もあってはならない。この状態を維持用量の間も保つ必要はなく、実際これが本発明の一つの利点である。即ち、患者は維持用量で処置される間、周囲抗原（移植片または自己抗原以外）に対する実質上正常な免疫反応を開始することができる。本発明は特に移植された移植片の生着を延長および寛容を増強し易い。移植片は、所望により、任意の適当な方法を用いて重要な手術後の期間（最初の３ヶ月）系統的、機能的に監視する。このような方法の１つは、トムスン等、Ａcta Ｒadiol．、２９巻１３８−１４０頁（１９８８）により記載されるような９９Ｔｃｍ−ペルテクネタートを用いる放射性核種静脈内血管造影法である。さらに、本明細書に記載の方法は、同時的多臓器潅流および移植に従い易い（トレドーペレイラおよびマッケンジー、Ａm．Ｓurg．、４６巻１６１−１６４頁（１９８０））。幾つかの例においては、例えば適当なアミノ酸またはポリマーの使用により、または生理学上許容し得る荷電官能基の供給源を結合させることにより、正または負に荷電した基を供給するよう移植片の表面を修飾することが望ましい。例えば、負に荷電した表面は、血管が血液凝固を減少させるのに適している。さらに、或る状況では、例えばフェニルアラニン、セリンまたはリジンを表面に結合させることにより、表面を疎水性または親水性とすることが望ましい。これら表面修飾のために特に有効な免疫抑制剤はグルタルアルデヒドである。上に述べたように、移植片の寛容を誘導するため、所望により移植前に有効量の抗体を投与してもよい。移植後初期に用いられるのと同じ用量およびスケジュールを使用することができる。さらに、移植に先立ち所望により移植片を米国特許第５１３５９１５号に記載のようにＴＧＦ−β組成物と接触させてもよい。簡単に述べるとこの接触は、好適には、移植片を該組成物と共にインキュベートまたは該組成物で潅流し、または該組成物を移植片の１またはそれ以上の表面に適用することを含む。この処理は、製剤中のＴＧＦ−βの濃度、処理される移植片、および製剤の個々の型、といった因子に応じて、一般に少なくとも１分間、好ましくは１分間ないし７２時間、より好ましくは２分間ないし２４時間行なう。やはり記載したように、移植片はＬＦＡ−１アンタゴニストと同時にまたは別個に潅流される。潅流は任意の適当な方法によって達成される。例えば、臓器は、１９８４年９月５日公開のＤＤ２１３１３４号に記載のような、圧調節器ならびにポンプおよび臓器の間に位置するオーバーフローを有する定圧潅流を供する装置を介して潅流することができる。別法として、１９８４年１１月２１日公開のＥＰ１２５８４７号に記載のように、臓器を密閉扉を介した高圧室に置き、容器から流体を吸引するポンプによって潅流液をこの室に供給し、使用済みの潅流液をバルブにより容器に戻す。移植片を処理した後、これを適切に長期間保存しまたは直ちに移植操作に使用する。上記のように製剤中に血液代替物（例えばペルフルオロ化学エマルジョン）を使用することにより、または１９８５年４月９日公開のＪＰ６００６１５０１号に記載のように、冷却した等張物質および抗凝固剤を含有するＴＧＦ−βの製剤、続いて摘出された臓器を細胞の破壊なしに凍結させるためのグリセロールにより、移植片を潅流することにより、保存寿命を増進することができる。さらに、米国特許第４４６２２１５号および４４９４３８５号に記載されるように、臓器を細胞壊死させることなく半永久的に保存するために、臓器を凍結温度まで冷却しつつ既知の潅流液（ＴＧＦ−βおよび／または既述のＬＦＡ−１アンタゴニストを含有）と共に保存することができる。特に心臓移植に関して、ペアレント等、Ｃryobiology、１８巻５７１−５７６頁（１９８１）は、５℃での移植前冷冠潅流が初期の移植期間の間同種移植片の保護を増強することを報告している。移植片の保存に必要とみなされるならば、これらのまたはその他の方法のいずれもが本発明の範囲内にある。移植の前に、好ましくは、移植片を生理食塩水に浸すことによりまたはこの目的のために適当な他の手段により、移植片を洗浄してＴＧＦ−β組成物を含まないようにする。移植前にＬＦＡ−１アンタゴニストを除去するのは望ましくない。さらに、移植前に、所望により宿主に１またはそれ以上のドナー特異的血液輸血を行なって移植片生着を助けてもよい。これに代わる方法は、移植手術前または後に宿主を全リンパ照射に付すことである。その移植受容者にとって有益であるならば他のいかなる移植前操作も本発明方法の一部として実施することができる。本発明は以下の実施例を参照することによりさらに完全に理解されるであろう。しかしながらこれらは本発明の範囲を限定するものと解してはならない。実施例１抗ＣＤ１１ａ抗体を用いるマウス心臓移植モデルババニー等、Ｊ．Ｐharmacol．Ｅxp．Ｔher．、２４４巻２５９頁（１９８８）に記載のようにして、新生児ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２^d）の心臓を雄成体（８ないし１０週齢）Ｃ３Ｈ（Ｈ−２^k）マウスの背側耳介に移植した。マウスは全て特異的無病原体条件で飼育し、スタンフォード大学メディカルセンター、ザ・デパートメント・オブ・コンパラティヴ・メディスンより入手した。使用された試薬は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、ロックヴィル、ＭＤから入手し得るＭ１７（クローンＭ１７／４．４１１．９、腹水から精製されたラットＩｇＧ２ａ抗マウスＣｄ１１ａＭＡｂ（ＡＴＣＣ受理番号ＴＩＢ２１７）、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ；ｉ．ｖ．製剤、サンド、イースト・ハノーヴァー、ＮＪ）、またはＩｇＧ２ａ（ラットイソタイプ対照、ザイムド・Ｓ．サンフランシスコ、ＣＡ）であった。Ｍ１７（ｎ＝３−９／用量群）またはＣｓＡ（ｎ＝５−２０／用量群）は移植の日（Ｍ１７）または移植後初日（ＣｓＡ）から開始して２週間、毎日ｉ．ｐ．でマウスに投与した。結果を、それぞれ効果および力価を表わす図１Ａおよび１Ｂに示す。非処置（ｎ＝１０５）またはラットＩｇＧ２ａイソタイプ対照処置（ｎ＝９）マウスにおける移植片は、それぞれ１０．６３±０．１日（メジアンの移植片生着時間［ＭＳＴ］±Ｓ．Ｅ．；メジアンの生着＝１０．０日）および１０．０±０．３日（メジアンの生着＝１０．０日）で拒絶された。ＣｓＡと比較してＭ１７は移植片の生着をはるかに効果的且つ強力に延長した。４mg／kg／日のＭ１７で処置したマウスのＭＳＴは５８日に拡大したが、一方ＣｓＡの最大寛容用量（２５mg／kg／日）で処置されたマウスではＭＳＴはわずか２４日間であった（図１Ａ）。実際、２mg／kg／日のＭ１７は移植片の生着を２５mg／kg／日のＣｓＡよりはるかに有意に延長した（ｐ＜０．０５）。投与されたＭ１７の最高用量（４mg／kg／日）は観察され得る毒性をもたらさなかった。免疫抑制についての用量反応曲線を得るためのＭ１７およびＣｓＡの相対的免疫抑制力価を定量的に比較するために、計数的インビトロマウス心臓同種移植バイオアッセイを使用した。モリス、Ｔransplant．Ｒev．、６巻３９頁（１９９２）。各々の用量群についてｌｏｇ₁₀用量の関数としての１４日目に拍動している心臓同種移植片の平均パーセントをロジスティック回帰により当てはめた。Ｍ１７およびＣｓＡのＥＤ₅₀を比較する時（用量は、これら二つの薬物間の分子量の相違のため、対照に対するnmol／kgとして表現する）、Ｍ１７はＣｓＡのおよそ５０００倍強力であった（Ｍ１７およびＣｓＡのＥＤ₅₀はそれぞれ１．４８nm ol／kgおよび８．１０μmole／kgであった）。図１Ｂを参照されたい。Ｍ１７およびＣｓＡの力価の間には劇的な格差がある。いかなる新しい免疫抑制剤も最初はＣｓＡと組み合わせて臨床使用される傾向があるため、異なる用量のＭ１７およびＣｓＡを組み合わせてＢＡＬＢ／ｃ心臓移植のＣ３Ｈ受容者に２週間投与した。Ｍ１７およびＣｓＡが相互作用して拮抗的、付加的、または共同的な免疫抑制を産むか否かを決定するために、イソボログラム分析を用いて移植片の生着データを評価した。ベレンバウム、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．、４１巻９３頁（１９８９）により記載された幾何学的イソボログラム法によると、付加性イソボールは１００％の移植片生着に要するＭ１７およびＣｓＡの最少用量を合した線として定義される。図２は、Ｍ１７およびＣｓＡは拮抗的に相互作用していないことを示しており、むしろＭ１７およびＣｓＡによる併用処置は、これらの薬物が付加的に相互作用する場合に予想される用量で１００％の移植片生着をもたらした。Ｍ１７による２週間以上の処置が移植片の生着を増強するか否かを決定するために、２mg／kg／日のＭ１７を３週間毎日投与し、引続き移植後９８日目まで週に１回の処置とした。９８日目に処置を終了したにも拘らず、幾つかの心臓移植片はさらに９０日以上収縮し続けた（図３）。別の群では、受容者のマウスを、８mg／kg／日のＭ１７で２過間毎日、引続き２mg／kg用量で２過間に１回９９日目まで処置した。この処置法は、低用量のＭ１７で処置したマウスと比較して、無期限に生着する心臓移植片の数を実質上増加させた（図３）。８mg／kg／日のＭ１７による手術後初期期間の処置が２mg／kg／日での処置より有効に移植片の長期生着を誘導したのであるから、手術時に接近したＭ１７の高血液レベルが長期の移植片生着にとって重要であるのかも知れない。２mg／kg／日のＭ１７による長期の処置が幾つかの受容者において無期限の移植片生着を産んだため、この免疫抑制の特異性を、これらの動物において、最初の移植の１５４日後に、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２^b）心臓移植片をそれらの反対側の耳介に移植することにより、調査した。Ｃ５７移植片が速やかに拒絶されても最初のＢＡＬＢ／ｃ移植片は拒絶されなかった。Ｃ５７移植片に対するＭＳＴは、非免疫抑制マウスに移植されたＣ５７移植片のＭＳＴと有意に（ｐ＞０．０５）異なっていなかった（第１表）。故に、処置されたマウスの免疫系は第三者の同種抗原に対し完全に反応できることから、Ｍ１７による限定された処置は長期の非特異的免疫抑制を惹起しなかった。 ^a マンーフィットニーＵ試験（小サイズの試料用に補正）を用いてＭ１７処置および非処置マウス間におけるＣ５７移植片の生着の統計学的差異のレベルを決定した。ｐ＞０.０５は有意でないと考えた（ＮＳ）。通常、ＭＡｂによる長期の処置は、長期のＭＡｂ処置の治療効果を制限する異種抗体の反応を導き出す。ノーマン、Ｓem．Ｎephro1ogy、１２巻３１５頁（１９９２）。しかしながらここで、Ｍ１７による長期処置は短期処置より有効であることが判明した（図３）。本明細書中のこの結果は、Ｍ１７に対するマウスの異種反応が他のＭＡｂに対する反応とは異なっていることを示唆した。Ｍ１７処置したマウスの血清中のマウス抗ラット抗体を、捕捉抗体としてＭ１７を使用し西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートさせたラット抗マウスＩｇＧ抗体で発色させるＥＬＩＳＡによって測定した。これらの研究の結果は、異種抗体反応はＭ１７処置用量に逆相関していることを示した。例えば、０．２５mg／kg／日のＭ１７で処置されたマウスは１５日目までに抗ラット免疫グロブリン反応を産んだが、同時に４mg／kg／日で処置されたマウスはラット免疫グロブリンに反応しなかった。Ｍ１７が移植片拒絶を抑制する能力をさらに特性決定するために、冗進性拒絶モデルを使用した。一次ＢＡＬＢ／ｃ心臓をＣ３Ｈ受容者に移植してこれらのマウスをＢＡＬＢ／ｃ同種抗原に対して感作し、４日後に除去した。即ち、マウス（ｎ＝５−１０／群）を、一時的なＢＡＬＢ／ｃ異所性（耳介）非脈管化心臓移植片で−７ないし−３日まで前感作し、この−３日の時点でこれらの一時移植片を有する耳を除去した。０日目に二次ＢＡＬＢ／ｃ心臓移植片を移植した後、個々の生着時間およびＭＳＴ（図４中の水平線）を決定し、これらを各処置群について図４に示す。相異なる処置群および対照群における移植片生着時間の間の統計学的有意性のレベルを、マンーフィットニーＵ試験（小サイズの試料用に補正）を用いて算出した。ｐ＞０．０５は有意でないと考えた（ＮＳ）。４mg／kgのイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａで−７ないし１３日までｉ．ｐ．処置したマウスの反対側耳介に移植された二次移植片は、全て冗進性拒絶を受け、鼓動しなかった。図４を参照されたい。異なったスケジュール（一次移植の日と比較して）を用いて４mg／kg／日のＭ１７を受容者にｉ．ｐ．投与した。或るマウスの群は、一次心臓が移植された日から二次移植片の移植の２週間後まで、４mg／kg／日のＭ１７で処置した。これらのマウスにおける移植片のＭＳＴは４２日間であった。このスケジュールおよび用量のＭ１７は感作を防止した。何故ならこれらのマウスにおける移植片のＭＳＴは、４mg／kg／日のＭ１７で移植後最初の２週間処置された非感作受容者における移植片のＭＳＴと有意に相違しなかった（ｐ＞０．０５）からである。他の実験結果は、Ｍ１７処置の時期が、処置の持続期間より重要であることを示した。Ｍ１７による処置を一次心臓移植の日まで遅らせたマウスにおける二次移植片のＭＳＴは、同じようにＭ１７で処置された非感作マウスにおける移植片のＭＳＴより有意に低かった（ｐ＜０．０５）。故に、Ｍ１７処置は、いったん感作が起こってしまえば、同種活性を排除するものではなかった。他の実験では、一次移植片が所定の位置にあった４日間だけＭ１７で処置されたマウスにおける二次移植片のＭＳＴは、一次心臓移植の日から二次移植片の移植後２週間まで処置されたマウスにおける二次移植片のＭＳＴと有意に異ならない（ｐ＞０．０５）ことが示された。即ち、Ｍ１７は、冗進性拒絶を防止するために、感作の期間だけ投与する必要があるに過ぎなかった。二次移植片の移植前に４日間Ｍ１７で処置されたマウスにおける二次移植片のＭＳＴもまた、０−１３日までＭ１７で処置された非感作受容者における移植片のＭＳＴと有意に異なっていなかった（ｐ＞０．０５）。このように、Ｍ１７による短期間の前処置は、移植後のより長いＭ１７処置過程より有効性が低いということはなかった。重篤な拒絶が非処置マウスに現われる移植後４または６日目までＭ１７処置（２mg／kg／日）を遅らせると、移植片の生着は、対照より僅かに延長されるだけであった（それぞれ１６および１４日間のＭＳＴ）。同様に、他の研究者は、抗ＣＤ１１ａＭＡｂが人間において急性の腎同種移植片拒絶を逆転させないことを見いだした。ルモーフ等、上記。これらの結果ならびにダヴィグノン等、上記、のインビトロの発見およびスプリンガー等、Ａnnu．Ｒev．Ｉmmunol．、５巻２２３頁（１９８７）の結論は、免疫反応の初期の処置がＭ１７の免疫抑制効果にとって重要であることを示唆している。４mg／kg／日のＭ１７で２週間処置されたマウス（ｎ＝５）からの脾臓、胸腺、およびリンパ節の組織学を、フローサイトメトリー研究を用いて決定した。処置されなかったマウスまたは４mg／kgのイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａまたはＭ１７による毎日のｉ．ｐ．処置後１４日のマウス（ｎ＝５／群）由来の全Ｔ細胞（抗Ｔｈｙ１．２−ＦＩＴＣ）、ＣＤ４（抗Ｌ３Ｔ４−ＰＥ）、およびＣＤ８（抗Ｌｙｔ２−ＦＩＴＣ）Ｔ細胞サブセット、Ｂ細胞（抗Ｂ２２０−ＰＥ；全てのＭＡｂはカルタグ、Ｓ．サンフランシスコ、ＣＡから入手）、およびＬＦＡ −１＋（抗ＣＤ１１ａ−ＦＩＴＣ。これはＭ１７とは異なるエピトープを認識する；クローン２Ｄ７、ファーミンゲン、サンディエゴ、ＣＡ）牌臓細胞のパーセントを、プロファイル１１（クールター・エジュピクス、ヒアリー、ＦＬ）を用いて測定した。フローサイトメトリー研究（図５）は、汎ＴＮＣＤ４、およびＣＤ８マーカーを発現する脾臓Ｔ細胞のパーセントの増加を示した。さらに、ＬＦＰ−１＋脾臓細胞のパーセントは、Ｍ１７−、ＩｇＧ２ａ−、または非処置マウス間で実質上相違しなかった。そのうえ、対照と比較してＭ１７処置マウスにおける脾臓当りの白血球の収量に低下の証拠はなかった。故に、Ｍ１７は、中枢または末梢のリンパの涸渇による免疫抑制を惹起してはいないようである。さらに、これらのマウスにおける全血球数の計数は、Ｍ１７処置はＩｇＧ２ａ処置（ｎ＝３）対照マウスと比較してリンパ球の数を抑制していないことを示した。Ｍ１７による処置がＴ細胞の涸渇を惹起せず、また本明細書における結果および他の研究者による結果［イソベ等、上記］がＬＦＡ−１は抗ＬＦＡ−１ＭＡｂによる処置の後に発現されることを示していることから、Ｍ１７はＴ細胞の機能的不活性化により免疫抑制を引き起こしているかも知れない。そこで、４mg／ kg／日のＭ１７で２週間毎日処置されたマウス由来の免疫細胞の機能を、ＣｏｎＡに対する脾臓細胞のインビトロ増殖反応を測定することにより評価した。４mg ／kg／日のイソタイプ対照ＩｇＧ２ａ（ｎ＝５）またはＭ１７（ｎ＝５）のいずれかにより１４日間毎日ｉ．ｐ．処置した後に、脾臓を摘出し、細胞を、相異なる濃度のＣｏｎＡ（ヴェクター、バーリンガム、ＣＡ）を含む９６ウェルプレート中のＫＣ２０００（ヘーゼルトン・バイオロジクス、レネクサ、ＫＳ）で培養した。細胞の増殖を³Ｈ−ＴｄＲ（ＩＣＮ・ラジオケミカルズ、アーヴィン、ＣＡ、比活性６．７Ｃｉ／ｍＭ）で１６−１８時間パルスすることにより評価し、³Ｈ−ＴｄＲの取り込みをシンチレーション分光法（パッカード、ダウナーズ・グローヴ、ＩＬ）によって測定した。各ＣｏｎＡ濃度について平均の崩壊／分（ｄｐｍ）を、対照マウスおよびＭ１７処置マウスから、細胞についてのバックグラウンドｄｐｍを差し引いた後に算出した。このデータを、対照マウス由来の脾臓細胞におけるｄｐｍと比較したＭ１７処置マウス由来の脾臓細胞におけるｄｐｍの変化パーセントとして表現した。スチューデントのｔ試験を用いて決定されたｐ＞０．０５を有意でない（ＮＳ）と考えた。図６は、低いＣｏｎＡ濃度では、Ｍ１７処置されたマウス由来の脾臓細胞の増殖反応は、ＩｇＧ２ａ処置された対照マウス由来の脾臓細胞の反応の１５０−２００％活性化されたことを示している。これらのデータは、Ｍ１７による処置がＴ細胞活性化を損なっていないことを示している。宿主対移植片膝窩リンパ節（ＰＬＮ）過形成検定を用いて、Ｍ１７がインビボで同種抗原に対する反応を抑制する機作を調べた。０日目に、２．５ｘ１０⁶の照射ＢＡＬＢ／ｃ脾臓細胞を、Ｃ３Ｈマウス（ｎ＝５／群）の各々左後足の足底に注射し、このマウスをイソタイプ対照ＩｇＧ２ａまたはＭ１７のいずれかにより直ちに、または細胞の注射の１もしくは２日後開始で処置した。４日目に右および左のＰＬＮを摘出し、左ＰＬＮおよび右ＰＬＮの間の重量の差の平均を各処置群について決定した。Ｍ１７処置群および対照群のＰＬＮ重量の差の統計学的有意性のレベルを、マンーフィットニーＵ試験（小サイズの試料用に補正）を用いて算出した。図７に示されるようなＩｇＧ２ａ処置対照マウスにおける同種抗原刺激後の左ＰＬＮ重量の増加は、細胞増殖および細胞移動の変化に起因するリンパ系細胞のＰＬＮへの補充により引き起こされる。Ｍ１７による処置は、処置が０日目にまたは２日目に開始されたかに拘らず、ＰＬＮ重量の増加を有意に抑制した。この阻害は、同種抗原に対する増殖的反応に及ぼすＭ１７の作用、またはリンパ球の移動に及ぼすＭ１７の作用、またはその両者によりもたらされている可能性がある。他の研究者が、抗ＣＤ１１ａＭＡｂによる処置がマウスにおいてリンパ球の末梢リンパ節へのホーミングを阻害することを示している［ハマン等、J.Ｉmm unol．、１４０巻６９３頁（１９８８）］ことから、この作用は、心臓同種移植片の生着がＭ１７処置マウスにおいて延長される機作の１つであるかも知れないが、これは１つの理論に過ぎず、本発明はこれに限定されない。要約すると、同種抗原刺激の時点で高い初期用量の抗体、そして引続きより低い用量を用いて抗ＣＤ１１ａ抗体の投与を行なうと、困難なマウス異所性耳−心臓モデルにおいてリンパ系細胞の涸渇無しに長期間の同種移植片生着を産み、且つ同種抗原に対する感作が防止される。選択的非応答性の状態が顕出する：初期移植片を拒絶しなかったマウスが第三者移植片を拒絶する。Ｍ１７が抗ＩＣＡＭ −１ＭＡｂの同時投与が無くとも長期の移植片生着をもたらした事から、抗接着分子ＭＡｂによる免疫系の抑制は、ＩＣＡＭ−１とその他のレセプターＭａｃ −１およびＣＤ４３との相互作用の防止よりはＬＦＡ−１とＩＣＡＭ−１との間の相互作用の遮断に、より依存しているのかも知れない。単独もしくは全リンパ照射と組み合わせて使用される抗ＣＤ４による処置［トレージャー等、上記］、または、単独もしくは抗ＣＤ−２ＭＡｂと組み合わせて使用される抗ＣＤ３ＭＡｂによる処置は、実質的なＴ細胞の涸渇またはこれらの処置がもたらす完全に近いＣＤ３細胞表面発現の低下にも拘らず、このモデルにおいてＭ１７処置より同種移植片の延長ではるかに有効性が低い。さらに、Ｍ１７による処置は、ＣｓＡよりもはるかに有効で、ずっと強力であり、そしてより大きな治療指数を有する。耳−心臓モデルは他の新規な生体異物の免疫抑制剤の評価に盛んに用いられ、そのデータの分析により、拒絶の防止のためのＭ１７による処置は、マイコフェノラート・モフェティル（ＲＳ−６１４４３）［モリス等、Transplant. Proc．、２２巻１６５９頁（１９９０）］、ブレキナー［マーフィーおよびモリス、Med．Sci．Res．、１９巻８３５頁（１９９１）］、またはＦＫ５０６［モリス等、Transplant．Proc．、２２巻１６３８頁（１９９０）］より有効であり且つより高い治療指数を有することが示されている。実施例２抗ＣＤ１１ａ抗体を用いる脳脊髄炎モデル実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症と類似点を有する中枢神経系の炎症状態である。どちらの疾患においても、循環するリンパ球が血液脳関門を通過してミエリンを損傷し、その結果神経伝達を損ない麻痺をもたらす。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）に入れたモルモット塩基性蛋白（ＧＰＢＰ）５０μｇ［ヴァンデンバーク等、Nature、３４１巻５４１頁（１９８９）］＋マイコバクテリア４００μｇを皮下注射することにより、ルイスラットにＥＡＥを誘発する。ラットの１つの群は非処置とし、ラットの一つの群はＣＦＡおよびマイコバクテリア１００μｇと混合した１−１０mg／kg／日のＭ１７を毎日、−４日目、−３日目、−２日目、−１日目、０日目、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、または１３日目（０日目とはＧＰＢＰが投与された日である）のいずれかに皮下注射する。この投与を２１日目まで続ける。次に、２８日目および３５日目に、各ラットに、ＣＦＡと混合した０．２５−２．５mg／kg／日のＭ１７および１００μｇマイコバクテリアを皮下注射する。このモデルにおける平均のＥＡＥ発症は１４日であり、平均の麻痺の長さは６日間であった。この実験的ラットモデルにおけるＥＡＥの重篤度は、抗ＬＦＡ−１抗体Ｍ１７の投与によって低下する。別の実験においては、プールしておいたＢ１０．ＰＬマウスの群を、ＣＦＡに入れた脳炎誘発性ＭＢＰ１−９ＮＡｃペプチド［アーバン等、Ｃｅｌｌ、５４巻５７７−５９２頁（１９８８）］１２０μｇで尾基部の皮下にチャレンジする。注射の２４および７４時間後、ザンヴィル等、Ｎａｔｕｒｅ、３２４巻２５８− ２６０頁（１９８６）に従って、このマウスに熱で死滅させたボーデテラ・パートゥシス６ｘ１０⁹を静脈内注射する。マウスの１つの群は非処置とし、マウスの一つの群は正常食塩水に入れた１．５−１３mg／kg／日のＭ１７を毎日、−４日目、−３日目、−２日目、−１日目、０日目、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、または１３日目（０日目とはＭＢＰペプチドが投与された日である）のいずれかに皮下注射する。この投与を２１日目まで続ける。次に、２８日目および３５日目に、各ラットに、０．３−４mg／kg／日のＭ１７を皮下注射する。マウスはＥＡＥの臨床徴候について毎日観察する。このモデルにおいて非処置マウスがＥＡＥを顕出する発症の日の平均は８−１２日間である。この実験的マウスモデルにおけるＥＡＥの重篤度は、抗ＬＦＡ−１抗体Ｍ１７の投与により低下する。実施例３抗ＣＤ１８抗体を用いるインビトロ混合リンパ球培養モデル移植のインビトロモデルである、この混合リンパ球培養モデル［Ａ．Ｊ．カニングハム、「免疫学の理解」、Transplantation Immunology、１５７−１５９頁（１９７８）］は、人間の混合リンパ球反応の増殖およびエフェクター面の両方における、様々なα−ＩＣＡＭＮα−ＬＦＡ−１抗体、および可溶性ＩＣＡＭの作用を調べるものである。Ｉ．プロトコル：Ａ．混合リンパ球反応第１部：細胞の単離：末梢血由来の単核球（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーから採取したヘパリン処理した全血から分離した。血液を食塩水で１：１に希釈し、積層し、そしてＬＳＭ（１００mlにつきフィコール６．２gおよびジアトリゾアートナトリウム９．４g ）（オルガノン・テクニカ、ＮＪ）上で２５００ｘgで３０分間遠心した。細胞を、５％の熱不活性化したプールしておいたヒトＡＢ血清（ペニンシュラ・メモリアル・ブラッド・バンク、バーリンガム、ＣＡ）、１mＭピルビン酸ナトリウム、３mＭＬ−グルタミン、１mＭ非必須アミノ酸、５００μｇ／mlペニシリン、５０μｇ／mlストレプトマイシン、５０μｇ／mlゲンタマイシン（ジブコ）、および５ｘ１０^-5Ｍ２−メルカプトエタノール（シグマ、セントルイス、ＭＯ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（ジブコ、グランド・アイランド、ＮＹ）に再懸濁した。第２部：混合リンパ球反応（ＭＬＲ）：９６ウェル平底微量定量プレート中で一方向ヒト混合リンパ球培養を確立した。簡潔に述べると、完全培地２００μｌ中の応答ＰＢＭＣ１．５ｘ１０⁵を、同数の同種照射（３０００ｒａｄ）刺激ＰＢＭＣと同時培養した。可溶性ＩＣＡＭ− １または抗インテグリン抗体［ＭＨＭ２４（抗ＣＤ１１ａ）およびＨ５２（抗ＣＤ１８）。上に開示される文献に記載されている。］を培養開始時に加えた。培養を５％ＣＯ₂中３７℃で５日間インキュベートし、次いで１μＣｉ／ウェルの³ Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／mmol、ＮＥＮ、ボストン、ＭＡ）で１６時間パルスした。培養をＰＨＤ細胞収穫器（ケンブリッジ・テクノロジー・ Inc．、ウォータータウン、ＭＡ）で収穫した。［³Ｈ］ＴｄＲの取り込みをベックマンシンチレーションカウンター（ＬＳ６８００）で測定し、三重の測定値を平均した。データは正味のｃｐｍとして表わす。対照培養によって取り込まれた平均［³ Ｈ］−ＴｄＲは＜１０００ｃｐｍであった。Ｂ．細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）検定：第１部：ＣＴＬの作製：（ＣＴＬは、培養を大規模にして多数の細胞を作製する外は７日間の混合リンパ球培養において作製した。）血縁の無い二人のドナー由来の末梢血リンパ球を常法によりＬＳＭで単離した。細胞を、上記のヒトＭＬＲ培地で３ｘ１０⁶細胞／mlに調節した。一方のドナーからのリンパ球をセシウム線源から３０００ｒａｄで照射し、「刺激」細胞と定めた。第二のドナーのリンパ球は「応答」細胞と名付けた。応答および刺激細胞各々５mlをコーニングＴ−２５ｃｍ²組織培養フラスコ中で合し、空気中５％ＣＯ₂の下で３７℃で７日間インキュベートした。第２部：標的細胞の作製：ＣＴＬの収穫の３日前に、リンパ球が第１部で刺激細胞として使用されたドナーからリンパ球を単離した。これらの細胞をヒトＭＬＲ培地中１ｘ１０⁶細胞／m lに調節した。次に、細胞１０mlおよび１：５００希釈のディフコＰＨＡ−ＰをコーニングＴ−２５ｃｍ²組織培養フラスコ中で合し、空気中５％ＣＯ₂の下で３７℃で３日間インキュベートした。第３部：ＣＴＬ細胞障害検定（４時間の⁵¹ＣＲ放出検定）：７日間培養した後、ＣＴＬ（エフェクター細胞）を集め、３回洗浄し、次いで１ｘ１０⁷細胞／mlに調節した。標的細胞を集め、２回洗浄した。標的細胞は、１５０μＣｉのＮａ⁵¹ＣｒＯ₄（５ｍＣｉ／ml：アマーシャム・Ｃｏｒｐ．、アーリングトン・ハイツ、ＩＬ）によって、空気中５％ＣＯ₂の下で３７℃でおよそ１時間ラベルした。細胞を４回洗浄し、計数し、そして２ｘ１０⁵細胞／mlに調節した。ＣＴＬ細胞障害検定はコーニング９６ウェル丸底プレートに準備した。１ウェルにつき合計２００μlの細胞を加えた。標的細胞５０μlおよび種々の濃度のエフェクター細胞１００μl、ならびに５００ng／mlの抗体［Ｈ５２、抗ＣＤ１１ｂ、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、および抗ｇｐ１２０（７Ｆ１１）。これらはすべて一般に入手可能である。］５０μlをこのプレートに３ずつ加えた。空気中５％ＣＯ₂の下で３７℃で４時間インキュベートした後、上清を収穫し（スカットロン、ロックヴィル、ＭＤ）、それらの放射活性を自動ガンマカウンター（マイクロメディック・システムズ、ホーシャム、ＰＡ）で測定した。特異的細胞毒性パーセントを、１００Ｘ［合してインキュベートされた標的細胞およびエフェクター細胞の試験上清のｃｐｍ（実験的放出）］−［単独でインキュベートされた標的細胞の上清のｃｐｍ（自然放出）］／｛［標的細胞が２％ＮＰ− ４０により溶解した後のｃｐｍ（最大放出）］−［自然放出］｝において算出した。決定された結果は、３つの培養の平均十／−ＳＤとした。標的細胞のみの自然放出は全ての実験について最大値の＜１０％であった。１１．結果：Ａ．混合リンパ球反応混合リンパ球反応の結果を図８に示す。抗ＣＤ１８抗体が、抗ＣＤ１１ａ反応のそれと同様に、ヒト混合リンパ球反応に対して阻害作用を有することは明らかである。Ｂ．ＣＴＬ検定ＣＴＬ標的細胞の死滅に及ぼす種々の抗体の作用の結果を図９に示す。これらは、Ｈ５２、抗ＣＤ１１ａ、および抗ＣＤ１８のみが細胞の溶解を阻害することを示している。上のインビトロデータから、ＬＦＡ−１アンタゴニストがインビボの設定、即ち移植において機能するであろう事が無理なく予想される。実施例４抗ＣＤ１１ａ抗体を用いる接触感受性モデル。下に述べる接触感受性モデルは乾癬の処置のためのモデルである。プロトコル：第０日：感作チャールス・リヴァーから入手したＢＡＬＢ／ｃマウス（４−６週齢）を、１群につき６−８匹のマウスを含む４つの処置群に分けた。このマウスをケタミン／キシラゼン／アセプロマジンによるｉ．ｐ．で麻酔した。全てのマウスの腹部をおよそ３ｘ３ｃｍ²だけ剃毛した。１０mg／mlジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）計５０μlを、２−１４群のマウスの無毛腹部に局所適用した。ピペットマンを使用してこの用量を適用し、先端の幅広い端がＤＮＦＢを皮膚全体に広がらせるような使用ができるようにした。第０−５日：抗体の投与計２０μｇのＭ１７抗体を、以下に指定した日にｉ．ｐ．注射した：第１群− 第０日および第１日；第２群−第４日および第５日；第３群−第０−５日；および第４群−ラットＩｇＧ２ａイソタイプ対照。第０−５日：チャレンジマウスをメタファンで麻酔した。２−１４群のマウスの左耳介のいずれかの側に、ピペットマンでＤＮＦＢ５μlを局所適用した（５μl／片側）。ピペット先端の幅広い端を用いてＤＮＦＢを耳全体に広げた。２−１４群のマウスの右耳介のいずれかの側に、ＤＮＦＢの希釈液５μlを局所適用した。チャレンジの８ないし１０時間後。全てのマウスの尾静脈に、計０．１mlの２μＣｉ¹²⁵Ｉ−ＵｄＲをｉ．ｖ．注射した。 ¹²⁵−ＵｄＲ注射の１６ないし１８時間後。マウスをＣＯ₂で殺した。全てのマウスの両耳介を毛の生え際で切り落とした。左および右の耳介を別々の管に入れた。各々の耳介を適当なラベルを付した１２ｘ７５のスナップキャップ付きポリエチレン管に入れた。耳介は−２０℃で保存した。結果：結果を図１０に示す。Ｍ１７で処置されたマウスは全て、対照と比較してＤＮＦＢに対する感受性の低下を表わした。０日および１日ならびに０−５日に処置されたマウスは最も大きな感受性の低下を示した。初期投与後間欠的にこの実験で使用された２０μｇより低く維持用量を低下させるならば、免疫原に対するマウスの感受性がさらに低下するであろう事が予想される。さらに、上記のインビボのマウスのデータは、容認されている獣医学および臨床的手法に従って当該哺乳動物の体重について補正して、馬、牛、およびその他の哺乳動物に外挿できるという事が無理なく予想され得る。人間もまた同様にこの様式で応答すると信ぜられる。したがって、人間において、本明細書に記載の投与法は、全ての患者におけるＬＦＡ−１により仲介される免疫機能に有益な回復効果を有するであろう事が、無理なく予想され得る。本明細書に記載の処置は、腎臓（特に、腎臓が最も影響を受け易い移植後最初の数週間）、肝臓、膵臓、骨、骨髄、ならびに中枢神経および免疫系を包含する身体の様々な部分に対する毒性を最小限にすることによって、常套的且つ現行の治療より高い治療指数を供する事が期待される。急性および慢性拒絶の両方の出現を少なくすることもまた予想される。さらに、この薬物は、再移植を受け、移植片の１年生着率の低い危険度の高い患者において有用であると予想される。最後に、この薬物は患者の罹患率を低下させ、したがって移植の通算コストを軽減させることが予想される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物にＬＦＡ−１アンタゴニストの治療的有効量である初期用量を投与し、続いて１日を基準に計算して該アンタゴニストの初期用量の１００％未満であるＬＦＡ−１アンタゴニストの治療的有効量であるその後の間欠的用量を投与することからなる、哺乳動物においてＬＦＡ−１仲介疾患を処置する方法。２．その後の用量が該アンタゴニストの初期用量の約５０％未満である、請求項１に記載の方法。３．その後の用量が該アンタゴニストの初期用量の約２５％未満である、請求項１に記載の方法。４．その後の用量が該アンタゴニストの初期用量の約１０％未満である、請求項１に記載の方法。５．その後の用量が該アンタゴニストの初期用量の約２％未満である、請求項１に記載の方法。６．該疾患が、移植された移植片のまたは移植された移植片による拒絶である、請求項１に記載の方法。７．初期投与が移植の実施の前、最中、および後に行なわれる、請求項６に記載の方法。８．該哺乳動物に有効量の免疫抑制剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。９．該哺乳動物に有効量のシクロスポリンＡを投与することをさらに含む、請求項６に記載の方法。１０．該哺乳動物が人間である、請求項１に記載の方法。１１．該疾患が移植された移植片の拒絶であり、そして移植片のドナーおよび受容者でＨＬＡクラス１１抗原が適合している、請求項１０に記載の方法。１２．その後の投与が初期投与より長い時間実施される、請求項１に記載の方法。１３．初期投与が毎日の投与から成り、その後の投与が大体週に１回以下で投与される用量である、請求項６に記載の方法。１４．初期投与が移植片の移植後少なくとも１週間毎日のアンタゴニストの投与からなり、その後の投与が、初期投与の終了後少なくとも約５週間隔週１回以下のアンタゴニストの投与からなる、請求項１３に記載の方法。１５．該アンタゴニストが抗ＣＤ１１ａまたは抗ＣＤ１８抗体であり、初期投与が移植実施後約１日ないし４週間で終了し、移植実施前約１週間から移植とほぼ同時までに開始される、請求項６に記載の方法。１６．投与が静脈内または皮下注射によりなされる、請求項６に記載の方法。１７．該アンタゴニストが抗ＬＦＡ−１抗体または抗ＩＣＡＭ−１抗体である、請求項１に記載の方法。１８．該抗体が抗ＣＤ１１ａまたは抗ＣＤ１８抗体である、請求項１７に記載の方法。１９．該抗体が抗ＣＤ１１ａ抗体である、請求項１７に記載の方法。２０．宿主に抗ＬＦＡ−１抗体の治療的有効量である初期用量を投与し、続いて１日を基準に計算して抗ＬＦＡ−１抗体の初期用量の１００％未満である抗ＬＦＡ−１抗体の治療的有効量であるその後の用量を投与することからなる、哺乳動物宿主による移植された移植片のまたは移植された移植片による該宿主の寛容を増強するための方法。