JPH08502242A

JPH08502242A - 多重付着分子に対する特異性を有する抗体

Info

Publication number: JPH08502242A
Application number: JP6500741A
Authority: JP
Inventors: エイ．ジュティラ，マーク
Original assignee: ザリサーチアンドディベラップメントインスチチュート，インコーポレイテッド
Priority date: 1992-05-22
Filing date: 1993-05-21
Publication date: 1996-03-12
Anticipated expiration: 2019-03-29
Also published as: DK0642577T3; DE69333447D1; ATE261493T1; JP3512111B2; CA2134966C; EP1340811A3; US5756095A; AU4523293A; CA2134966A1; AU682824B2; EP0642577A1; DE69333447T2; PT642577E; WO1993024614A1; ES2213141T3; EP0642577B1; EP0642577A4; KR950701681A; EP1340811A2

Abstract

(57)【要約】本発明は、離れている別の分子上で見られる共通の決定基を認識するモノクローナル抗体に関する。これらのモノクローナル抗体は、細胞付着のブロッキングに用いられる。離れている別のセレクチン上で発現した共通の決定基に結合することができるモノクローナル抗体、特にＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１としても知られている）およびＬ−セレクチン（ＬＡＭ−１、ＬＥＣＡＭ−１、Ｌｅｕ−８、ＴＱ−１、ｇｐ９０ＭＥＬ１４、および末梢リンパ節ホーミングレセプターとしても知られている）の両方に結合する抗体も記載される。これらのモノクローナル抗体は、炎症に関与する疾患の診断、治療および予防に有用である。モノクローナル抗体は、セレクチンを有する細胞を検出するのに用いられる。前記の抗体を産生することができる細胞系も記載する。

Description

【発明の詳細な説明】多重付着分子に対する特異性を有する抗体関連出願についてのクロスリファレンス本出願は、１９９２年５月２２日出願の係属米国出願連続番号第０７／８８７，６９５号の一部継属出願である。発明の分野本発明は、多重付着分子に結合する抗体および疾患の治療法に関する。本発明のもう一つの特徴は、付着分子を検出するためのイムノアッセイに関する。発明の背景ヒトおよび哺乳類の循環器系における末梢血は、主として赤色血液細胞、すなわち赤血球と、白色血液細胞、すなわち白血球とからなっている。白血球の群は、単球、好中球、好酸球、好塩基球および各種のリンパ球からなっている。好中球、好酸球および好塩基球は、細胞質顆粒の貧量が高いため、「顆粒細胞」として知られている。好中球、単球、好酸球および好塩基球は、ヒト免疫系におけるそれらの主要な機能が細菌、微生物および他の種類の異物を貧食しまたは消化するので、食細胞として知られている。これらの細胞はヒトまたは動物の骨髄中の通常の前駆細胞から産生され、末梢血中を循環し、最後に感染を抑制するのに必要な組織に入り、または炎症反応に関与することが知られている。しかしながら、それぞれの食細胞は機能が異なり、関連してはいるが別個の系として機能する。好中球は、ヒトおよび動物の末梢血における最も一般的に見られる白血球である。正常なヒトの全血１マイクロリットルは、平均して５，０００個の白血球を含み、その３，０７５個が好中球であり、１５０個が好酸球であり、２５個が好塩基球であり、２５０個が単球であり、１，５００個がリンパ球である。感染または炎症に応答して、白血球は活性化されて、最初にある種の細菌の産生物、補体成分、サイトカインおよび他の因子などの走化性因子に応じて適当な場所に移動する。白血球の他に、これらのシグナルは内皮細胞を活性化することもできる。活性化の結果として、白血球および内皮細胞は付着性になる。この誘引工程は「走化性」と呼ばれている。ある部位に炎症または感染が生じると、ほとんどの白血球はその標的に堅く結合しなければならない。細胞付着は、様々なリガンド−レセプター相互作用を介して行われる。例としては、補体用の細胞レセプター、抗体のＦｃまたは細胞結合性部分の細胞レセプター、フィプロネクチンレセプター、および他の付着分子が挙げられる。付着に関与するレセプターの大半は、糖タンパク質である。好中球は、後毛細管小静脈の内皮を通って動脈−静脈系と相互作用し、この系から出て行く（すなわち、溢出する）。急性の炎症性反応の際には、好中球はリンパ球溢出の主要部位であるリンパ球節内に見られる高内皮性小静脈（ＨＥＶ）から出ることができる。二種類の好中球表面抗原が、この相互作用に関与していることが示されている−ＬＦＡ−１／Ｍａｃ−１／ｐ１５０．９５（ＣＤ１１ａ −ｃ／ＣＤ１８）複合体およびＬ−セレクチン。セレクチンは以前はＬＥＣ−ＣＡＭｓと呼ばれていたものであり、新規な種類の付着タンパク質を表しリンパ系組織および炎症部位へ白血球が入るのを制御する（ローゼン（Rosen）、１９９０年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｌｏｌ．，３：３９７−４０２）。この群の３個が同定されている。これらのうち、２個のＥ−セレクチンおよびＰ−セレクチン（最初は、それぞれＥＬＡＭ−１およびＧＭＰ−１４０／ＰＡＤＧＥＭと呼ばれていた）は、内皮細胞によって発現される。第三のＬ−セレクチン（ＬＡＭ−１、ＬＥＣＡＭ−１、Ｌｅｕ−８、ＴＱ−１、または末梢リンパ節ホーミングレセプター）は、実質的に総ての末梢血白血球によって発現される。Ｐ−セレクチンは、内皮細胞および血小板中の細胞質性タンパク質であり、トロンビンで活性化して速やか（数分以内）にトランスロケーションすることができる（ラルセン（Larsen）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，５６：１０３３−１０４４；ジェング（Geng）ら、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４３：７５７−７６０）。Ｅ−セレクチンも誘導内皮細胞表面糖タンパク質であるが、発現には２〜４時間かかり、ｄｅｎｏｖｏＲＮＡおよびタンパク質合成の要件を反映している（ベビラッカ（Bevi lacqua）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．）２４３：１１６−１１１２）。Ｐ−セレクチンおよびＥ−セレクチンは両方とも好中球および単球に対する付着タンパク質である（ラルセン（Larsen）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，５９：３０５−３１２；ジョンストン（Johnston）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，５６：１０３３−１０４４：ベビラッカ（Bevilacqua）ら、１９８７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４：９２３８−９２４２；ベビラッカ（Bevilacq ua）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．）２４３：１１６０ −１１１２）。記憶Ｔ−細胞のサブ集団も、Ｅ−セレクチンと結合することが示されている（ピッカー（Picker）ら、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４９：７９６−７９９）；（シミズ（Shimizu）ら、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４９：７９９）。血管系セレクチンとは対照的に、Ｌ−セレクチンは白血球によって構造的に発現され、末梢血管アドレッシングに結合することによって末梢リンパ節の高内皮性小静脈へのリンパ球の付着（ベルグ（Berg）ら、１９８９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１０８：５−１８；ベルグ（Berg）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３４３−３４９）、およびサイトカインによって活性化された内皮細胞への好中球の付着を媒介する（ホールマン（Hallman）ら、１９９１年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１７４：２３６−２４３；スミス（Smith）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７：６０９−６１８；スペルチニ（Spertini）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２５６５−２５７３）。最近になり、好中球のＬ−セレクチンはＥ−セレクチンの潜在的な逆レセプターであることが示された（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｂｌｏｏｄ．７８：８０５−８１１；ピッカー（Picker）ら、１９９１年、Ｃｅｌｌ，６６：９２１−９３３）。Ｌ−セレクチンは、見かけは機能的な形態の残りの好中球上で構造的に発現する。新たに単離した好中球は、イン・ビトロで低温（４〜７℃）で剌激した内皮に結合することができる（ホールマン（Hallmann）ら、１９９１年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７４，２３６：スペルチニ（Spertini）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２５６５）。しかしながら、好中球を低濃度の走化性因子に数分間暴露するだけで、Ｌ−セレクチンは細胞表面から速やかにダウンレギュレーションする（キシモト（Kishimoto）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４５：１２３８）。Ｌ−セレクチンのほぼ完全なダウンレギュレーションは、イン・ビトロでは数分以内に検出することができる。この形態の逆レギュレーションは、細胞表面上のＬ−セレクチンのタンパク質分解性分解によって行われる。Ｌ−セレクチンの大きなフラグメントは、活性化した細胞の上清から回収することができ、Ｌ−セレクチンはトランスメンブランドメインの近傍にタンパク質分解的にクリップされることを示唆している（キシモト（Kishimoto）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５：１２３８）。イン・ビボで炎症を起こしたマウスの腹膜から回収される好中球を分析し、炎症を起こした皮膚部位における好中球を免疫組織学的に分析することにより、この付着分子の逆レギュレーションがイン・ビボでも起こることが示唆されている。リンパ球および単球も、イン・ビボでは活性化することによりＬ−セレクチンを脱落することができるが、速度は著しく遅い（ジュング（Jung）ら、１９８８年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４１：４１１０；ジュチラ（Jutila）ら、１９９０年、Ｂｌｏｏｄ，７６：１７８；キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４）。Ｅ−セレクチンは、通常は内皮細胞には存在しない。しかしながら、炎症性サイトカインで剌激することにより、内皮細胞は数時間以内にＥ−セレクチンを発現する。Ｅ−セレクチンは、テ・ノボで合成され、タンパク質合成阻害剤によってブロックされる（ベビラッカ（Bevilacqua）ら、１９８７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：９２３８）。Ｅ−セレクチンのこのアップ・レギュレーションは、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１などの他の内皮付着分子で見られるものと同じである。しかしながら、２４時間に亙って高度に発現され続けるこれらの他の付着分子とは対照的に、Ｅ−セレクチンの発現はイン・ビトロでは３〜４時間で最大になった後、８〜２４時間までに低下する（ベビラッカ（Bevilacqua）ら、１９８７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，３４：９２３８；ポバート（Pobert）ら、１９８６年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３７：１８９３）。Ｅ−セレクチンの発現の時間経過は、イン・ビボでの急性の炎症部位への好中球の浸潤の時間経過と同様である。これらの結果から、Ｅ−セレクチンは主として急性の炎症反応に関与していることが示唆される。Ｅ−セレクチンの発現もイン・ビボで速やかに誘導することができ、好中球の流入と一致する（ノリス（Norris）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，９６：７６３；コトラン（Cotran）ら、１９８６年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６４：６６１；ムンロ（Munro）ら、１９９１年、ＬａｂＩｎｖｅｓｔ．，６４：２９５：レドル（Redl）ら、１９９１年、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１３９：４６１；ムンロ（Munro）ら、１９８９年、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１３５：１２１；ロイング（Leung）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７：１８０５）。しかしながら、幾つかの慢性の炎症性病変、特に幾つかの炎症を起こした皮膚および滑膜部位では、Ｅ−セレクチンの発現が極めて顕著である（コトラン（Cotran）ら、１９８６年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６４：６６１；コッホ（Koch）ら、１９９１年、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓ．，６４：３１３；ピッカー（Picker）ら、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ，３４９：７４６；ノリス（Norris）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，９６：７６３）。Ｌ−セレクチンとは異なり、Ｅ−セレクチンが内皮から脱落することを示唆するイン・ビトロでの証拠はない。分子レベルでは、これらの３種類のセレクチンは総て、Ｎ−末端のＣ型レクチンドメイン、表皮成長因子（ＥＧＦ）様ドメイン、および補体調節タンパク質中に見られるものに対応する多重短コンセンサス反復（ＳＣＲ）ドメインからなる特異的なモザイク構造を示す（ジョンストン（Johnston）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，５６：１０３３−１０４４；ベビラッカ（Bevilacqua）ら、１９８７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：９２３８−９２４２；ラスケイ（Laskey）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，５６：１０４５−１０５５；シーゲルマン（Siegelman）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．）２４３：１１６５−１１７２；カメリニ（Camerini）ら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３４２：７８−８０；テッダー（Tedder）ら、１９８９年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７０：１２３−１３３）。これらのタンパク質はヌクレオチドおよびアミノ酸レベルで４０〜６０％同じものを共有しており、初期の祖先遺伝子の遺伝子複製によって生じることがある。それぞれのセレクチンのレクチンドメインはタンパク質の付着機能にとって重要であると考えられており、これら３種類のセレクチンの炭水化物結合特異性は部分的に画定されている。Ｐ−およびＥ−セレクチンは、それらの結合特性には差があるが、ミエロイド細胞によって発現した糖タンパク質および糖脂質を修飾するシアリル化したルイスｘ（ｓＬｅｘ）を認識する（フィリップス（Phillips）ら、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．），２５０：１１３０−１１３２；ロウエ（Lowe）ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ，６３：４７５−４８４；ゲルツ（Goelz）ら、Ｃｅｌｌ．６３：１３４９−１３５６；ワルツ（Walz）ら、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５０：１１３２；ポーレイ（Polley）ら、１９９０年、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８：６２２４−６２２８）。Ｌ−セレクチンの機能は、マンノース−６−ＰＯ₄などのある種の単純な糖、および酵母（Ｈａｎｓｅｎｕｌａｈｏｌｓｔｉｉ、イェドノック（Yednock）ら、１９８７年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１１：１２２５−１２３２、ローゼン（Rosen）、１９９０年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．の総説）由来のマンノース−６−ＰＯ₄含量の高いホスホマンナン（ホスホマンナンモノエステルコア、すなわちＰＰＭＥ）などのある種の複雑な多糖類によってブロックされる。更に、Ｌ−セレクチンの機能をブロックする多くの抗体がレクチンドメインによってコードされたエピトープを認識する（ボウエン（Bowen）ら、１９９０年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１０：１４７−１５３；カンサス（Kansas）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８）。セレクチンの他の空間的に離れた別の機能ドメインも存在することができる。マウスまたはヒトＬ−セレクチンＥＧＦドメインに対する抗体は、ＨＥＶに対するリンパ球の付着をブロックするが、炭水化物の結合に関してはほとんど効果がない（カンサス（Kansas）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８：シーゲルマン（Siegelman）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，６１：６１１−６２２）。キメラＬ−セレクチン／免疫グロブリン構造体の研究から、ＳＣＲドメインもセレクチンに対して重要な機能上の役割を有することが示されているが、レクチンおよびＥＧＦドメインとは対照的に、機能をブロックする抗体がこの領域を認識することは示されていない。また、ＳＣＲの機能上の役割は適正な分子のコンホーメーションの保持に限定されており、このコンホーメーションはそれぞれのセレクチンについて異なっている（ワトソン（Watson）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１５：２３５−２４３）。多くの抗−セレクチンｍＡｂｓが開発されているが、２種類の異なるセレクチンに対する決定基を認識する能力を有することは示されていない。ヒトＥ−セレクチンを認識するＣＬ２はイヌＬ−セレクチンと反応するが、同じ動物ではいずれとも反応しない（アバッシ（Abbassi）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２１０７−２１１５）。スペルチニ（Spertini）ら（１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：９４２）は、Ｌ−セレクチンに関して少なくとも１１種類の異なるエピトープの機能上の特徴と分子での局在化を示しているが、これらのいずれも２種類の異なるセレクチン上では発現しない。Ｌ−セレクチンを認識するＴＱ−１およびＬｅｕ−８も極めて限定された染色パターンを示すが、他のセレクチンを染色しない。公表された抗−Ｅ−セレクチンまたはＰ−セレクチンｍＡｂｓのいずれも、他のセレクチンと反応することが示されてはいない。様々なセレクチンはアミノ酸レベルではかなりの程度同一であり、多数の抗 −セレクチンｍＡｂｓが産生されているが、本発明の以前には２種類の異なるセレクチンによって共有されるエピトープを認識する抗体は全く報告されていなかったことは興味深いことである。急性の炎症反応の主要なメディエイターとして、好中球は免疫系の本質的成分を表している。好中球は骨髄で生成するが、この骨髄には多量の容易に移動性になる成熟した顆粒細胞が含まれている。好中球は、血中に放出された後は、半減期が比較的短く（ヒトでは４〜１０時間）、内皮と可逆的に相互作用する細胞の自由に血中を運ばれるプールとマージネイティイグ（ｍａｒｇｉｎａｔｉｎｇ）プールとの間で動的平衡になっている。好中球は急性の炎症性剌激に応じて、血管内皮に堅く付着し、血管壁を通って移動した後、走化性グラディエントに沿って炎症性剌激へと移動して、そこで食細胞作用を行う。従って、好中球と血管内皮細胞との相互作用は、急性の炎症性反応における本質的な初期段階である。白血球の炎症反応は微生物の侵襲を撲滅する上で極めて重要であるが、実質的で納得できる証拠によれば、炎症性食細胞は剌激的病因によって生じる可溶性炎症因子によってイン・ビボでこれらの細胞が活性化されると、各種の器官および組織に損傷を与えるのである（ハーラン（Harlan）、１９８５年、Ｂｌｏｏｄ，６５：５１３−５２５）。活性化された好中球および単核食細胞が管内皮細胞に付着して広がった後、毒性を有する酸化性代謝物およびプロテアーゼを放出すると、成人の呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ；ショック肺症候群）、糸球体腎炎、急性および慢性の同種移植片拒絶反応、炎症性皮膚疾患、リューマチ性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、全身性エリテマトーデス、結合組織疾患、脈管炎、および虚血−再潅流症候群（すなわち、四肢再移植（ｌｉｍｂｒｅｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、心筋梗塞、挫傷、ショック、発作および臓器移植）などの疾患に見られる臓器の損傷が引き起こされた（ハーラン（Harlan）の総説、同上）。「抗−付着（ａｎｔｉ−Ａｄｈｅｓｉｏｎ）」療法は、白血球の内皮への付着が管および組織の障害／損傷に大きく関与する炎症性および免疫疾患の治療に対する新規な方法である。本発明は付着工程と特異的に相互作用してこれをブロックするので、これらの疾患に用いられる可能性がある。「抗−付着」療法は、炎症反応に対して極めて大きな効果を有する。皮膚障害を減少させることができ（Arfors）ら、１９８７年、Ｂｌｏｏｄ，６９：３３８）、細菌性髄膜炎により引起こされる脳水腫および死を減少させることができ（ツォマネン（Tuomanen）ら、１９８９年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７０：９５９）、遅延型過敏反応に伴う組織浮腫を減少させることができ（リンドボム（Li ndbom）ら、１９９０年、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ．，５７：１０５）、アレルギー性喘息の気管過敏症を減少させることができ（ウェグナー（Wegner）ら、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４７：４５６）、吸引後の遠隔肺損傷を減少させることができ（ゴールドマン（Goldman）ら、１９９１年、ＦＡＳＥＢＪ．，５：Ａ５０９）、抗原が作用した後の後期気管支収縮を減少させることができ（グンデル（Gundel）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８８：１４０７）、急性肺炎の透過性水腫を減少させることができ（ムリガン（Mulligan）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８８：１３９６）、自己免疫性糖尿病の進行を抑制することができる（ハッチングス（Hutchings）ら、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ，３４６、６８９）。「抗−付着」療法はまた、管の同種移植片の生存期間を引き延ばすことができ（フラビン（Flavin）ら、１９９１年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．，２３：５３３）、酸素の毒性に伴う肺の損傷および機能障害を減少させ（ウェグナー（Wegner）ら、１９９１年、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４３：Ａ５４４）、腎臓の同種移植片の拒絶反応を減少させ（コシミ（Cosimi）ら、１９９０年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：４６０４）、抗原によって誘発される関節炎を改善し（ジャシン（Jasin）ら、１９９０年、ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．，３３：Ｓ３４）、内毒素ショックでの脈管を損傷および死から保護し、２度火傷が３度火傷になるのを防止することもできる（バッキー（Bucky）ら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．ＢｕｒｎＡｓｓｏｃ．，２３：１３３）。このような「抗−付着」療法は、虚血および再潅流による損傷にも有効である。このような療法を用いて、小腸の虚血−再潅流に伴う透過性水腫を減少させ（ヘルナンデツ（Hernandez）ら、１９８７年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２５３：Ｈ６９９）、心筋梗塞に伴う心筋の損傷を減少させ（ウィンキスト（Winq uist）ら、１９９０年、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８２：ＩＩＩ；マー（Ma）ら、１９９０年、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．，８２：ＩＩＩ）、出血性ショックに伴う脈管および臓器の損傷を減少させ（ミレスキー（Mileski）ら、１９９０年、Ｓｕｒｇｅｒｙ，１０８：２０６）、脊髄のＩ／Ｒに伴う中枢神経系の損傷を減少させ（クラーク（Clark）ら、１９９１年、Ｓｔｒｏｋｅ，２２：８７７）、凍傷および復温に伴う水腫および臓器の損傷を減少させ（ミレスキー（Mileski）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．ＢｕｒｎＡｓｓｏｃ．，２２：１６４）、心筋層のＩ／Ｒに伴う梗塞の大きさを減少させることができる（シンプソン（Simpso n）ら、１９９０年、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８１：２２６）。Ｌ−セレクチンに対するモノクロナル抗体は、好中球が炎症を起こした皮膚へ移出するのを防止し（レビンゾーン（Lewinsohn）ら、１９８７年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８：４３１３）、好中球および単球が炎症によって生じた腹水中に移出するのを防止し（ジュティラ（Jutila）ら、１９８９年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８）、好中球が炎症を起こした腹膜中へ移出するのを抑制する。Ｅ−セレクチンに対するモノクロナル抗体は、好中球が肺へ移行するのを抑制することにより、それらを喘息の予防または治療に使用する基礎となっている（グンデル（Gundel）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．；ムリガン（Mulligan）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８８：１３９６）。ジャシン（Jasin）らは、他の特異的な細胞効果の中でも炎症を起こした滑膜に好中球が蓄積するのを抑制するのに抗体を用いることを支持している（ジャシン（Jasin）ら、１９９０年、ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．，３３：Ｓ３４；コッホ（Koch）ら、１９９１年、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，６４：３１３）。様々なセレクチン分子によって共有されているエピトープまたは抗原決定基と反応するモノクロナル抗体またはその活性フラグメントであって、これにより炎症および免疫反応に関係した多くの疾患を効果的に診断し、予防し、治療することができるようにするものを製造することが長年にわたり必要とされている。複数のこの群の細胞付着分子を認識することにより前記のような疾病および損傷に更に広範に適用することができるｍＡｂｓを入手できれば有益である。発明の要約本発明は、様々な付着分子上に存在するドメインと反応する抗体、抗体の抗原に結合するフラグメント、およびそれらと生物学的に同等なもの、およびこれらの抗体を産生する細胞に関する。本発明は、様々なセレクチン上に存在するドメインと反応する抗体、抗体の抗原に結合するフラグメント、およびそれらと生物学的に同等なもの、およびこれらの抗体を産生する細胞にも関する。本発明の抗体は様々なセレクチンと反応し、様々なセレクチンを運びまたは発現する細胞を含んでいる。これらの抗体、抗体の抗原に結合するフラグメントおよびそれらの生物学的に同等なものは、様々なセレクチンを運びまたは発現する細胞に結合し、様々なセレクチンの機能を抑制する。本発明は、セレクチンが役割を果たす疾患を予防しまたは治療する治療薬としてこれらの抗体を使用することにも関する。これらの疾患には、炎症性疾患、アレルギー、自己免疫疾患、喘息、関節炎および虚血−再潅流による損傷が挙げられるが、これらに限定されるものではない。特に興味深いのは、これらの抗体またはそれらの機能的に同等なものを有効量で使用して、肺の虚血−再潅流による損傷を防止しまたは抑制することである。このような治療は、前記のような疾患に罹っている哺乳類の死亡率を減少させるのにも有効である。本発明は、様々なセレクチンを運びまたは発現する細胞を検出する方法も包含する。このような方法は、セレクチンおよびセレクチンを運ぶ細胞が役割を果たす疾患の診断、およびこのような疾患の進行状態を観察するのにも用いられる。このような方法は、セレクチンおよびセレクチンを運ぶ細胞が役割を果たす疾患の治療経過中における治療薬の有効性を観察するのにも用いられる。本発明は、Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチン上の共通の抗原決定基を認識する抗体、抗原に結合するフラグメントおよびキメラ抗体を包含する。本発明の抗体およびそれらと機能的に同等なものは、Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチンによって媒介される細胞−細胞相互作用を抑制することができる。本発明は、好中球がＥ−セレクチンを発現することができる細胞に結合するのを抑制することができしかもＥ−セレクチンを発現する内皮細胞層上で好中球がローリングするのを防止しまたは抑制することができる抗体およびそれらの機能的に同等なものである。本発明は、末梢リンパ球様組織にリンパ球が戻るのを防止し、抑制しまたは調節することができる抗体またはそれらと機能的に同等なものである。図面の簡単な説明本発明の上記および他の目的、特徴および付随する利点は、添付の図面に就いて考察するとき、下記の詳細な説明を読むことによって一層よく理解されるであろう。図１：ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたＬ１−２細胞のＥＬ−２４６染色を示す。矢印は棒グラフを示しており、（１）Ｌ１−２ＥＬＡＭのＥＬ−２４６染色、（２）Ｌ１−２トランスフェクタントコントロール、および（３）Ｌ１−２ＥＬＡＭトランスフェクタントのバックグラウンド染色（第二段階コントロール）である。図２：Ｌ１−２ＥＬＡＭ細胞によって発現される１１０ｋＤ抗原のＥＬ−２４６認識を示す。各プロットはＥＬ−８１（抗−Ｅ−セレクチン、レーン３）、ＥＬ−２４６（レーン２）およびネガティプコントロール抗体（レーン１）でプロープした。図３：ヒト扁桃の凍結切片における炎症を起こした小静脈のＥＬ−２４６による認識を示す。図４：ヒト末梢血白血球の表面抗原のＥＬ−２４６による認識を示す。図５：ＥＬ−２４６と抗−Ｌ−セレクチン抗体との同時染色を示す。図６：ＥＬ−２４６がウェスターンプロットでのアフィニティークロマトグラフィにより精製したＬ−セレクチンを認識することを示す。Ｌ−セレクチンは、ＤＲＥＧ５６抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂを用いて非還元条件下で８％ＳＤＳゲル上でアフィニティークロマトグラフィによって精製し、ニトロセルロースに移し、ＥＬ−２４６（レーン２）、ｍＡｂ（ＤＲＥＧ１５２）中のもう一つの抗−Ｌ −セレクチン（レーン３）または第二段階の抗体コントロール（レーン１）でプローブした。図７：ＥＬ−２４６がＬ−セレクチン（Ａ）およびＥ−セレクチン（Ｂ）の機能をブロックすることを示す。図８：ＥＬ−２４６エピトープの位置がＬ−セレクチンのＳＣＲドメイン中にあるかまたはこのドメインを必要とすることを示している。図９：好中球のＥＬ−２４６治療により、好中球がＥ−セレクチントランスフェクタント（ＴＦ）に結合するのを防止する。図１０：ＥＬ−２４６は、結合分析の際に好中球からＥ−セレクチントランスフェクタントへ移行する。図１０Ａは、ＥＬ−２４６で治療した好中球は分析前にＦＩＴＣ−第二段階で明るく染色されることを示している。図１０Ｂは、分析後に同じ細胞のＦＩＴＣ−第二段階の抗体の染色が見られないことを示している。図１０ｃは、１０Ｂで分析した細胞が第二の抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂ（ＤＲＥＧ５６）で染色されることを示している。図１０Ｄは、分析前にＦＩＴＣ−第二段階によりＥ−セレクチントランスフェクタントの染色がみられないことを示しており、図１０Ｅは、分析後の染色を示している。図１０Ｆは、Ｅ−セレクチンに対するトランスフェクタントの通常の間接染色の結果を示している。それぞれの棒グラフの点線はネガティブコントロール抗体で染色した後のバックグラウンド蛍光を示している。図１１：ＥＬ−２４６は、剪断条件下で活性化した内皮細胞上で好中球がローリングするのをブロックする。１１Ａは、好中球のローリングに対するＥＬ−２４６の効果を示している。１１Ｂは、好中球のローリングに対するイソタイプのネガティプコントロールｍＡｂの効果を示している。図１２：ＥＬ−２４６は、末梢リンパ節ＨＥＶに対するＥ−セレクチントランスフェクタントの結合をブロックする。図１２ＡはＰＬＮＨＥＶに対するこのトランスフエクタントの結合を示し、図１２Ｂは連続切片での同じ血管への結合に対するＥＬ−２４６の効果を示している。矢印は、連続切片倍率２００×での同一血管を示している。図１３：ＥＬ−２４６は、ウシリンパ球がマウスの末梢リンパ節へ戻る能力を特異的にブロックする。輪郭プロットは、ＥＬ−２４６、ＤＲＥＧ５５または媒質のみ（コントロール）で処理した（ｔｒｔｄ．）後に脾臓および末梢リンパ節（ＰＬＮ）に戻ったＦＩＴＣで標識したウシリンパ球の割合を分析したものを表している。図１４：ヒツジをＥＬ−２４６で処理すると、イン・ビボで虚血／再潅流による損傷によって引き起こされる死亡が防止される。ヒツジは、抗−Ｅ／Ｌ−セレクチン（ＥＬ−２４６）モノクローナル抗体、抗−ヒトＬ−セレクチンモノクローナル抗体（ＤＲＥＧ５６）で処理したか、または全く処理を行わなかった（虚血コントロール）。生存率を時間（時）に対してプロットした。図１５：抗−Ｅ−／Ｌ−セレクチンモノクローナル抗体（ＥＬ−２４６）で処理した８尾のマウスで再潅流を開始した後、３０、９０および３６０分後に採取した血清試料の希釈物で処理したＬ−セレクチンｃＤＮＡをトランスフェクションしたマウスの最大蛍光染色の割合を示す。発明の詳細な説明本発明は、離れており且つ別種の付着分子上に見られる共通の抗原決定基またはエピトープに結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）、抗原に結合するフラグメントおよびそれらと機能的に同等のものを包含している。本発明は、離れており且つ別種の付着分子上に存在する共通の抗原決定基を認識することができるｍＡｂｓを産生することができる細胞も包含する。本発明は、セレクチン上に見られる共通の決定基、好ましくはＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンおよび前記抗体を発現することができる細胞上の共通の決定基に結合することができるｍＡｂｓを包含する。本発明は、新規なモノクローナル抗体であるＥＬ−２４６、および新規なｍＡｂを産生することができる細胞も包含する。モノクローナル抗体ＥＬ−２４６を産生する細胞は、ブダペスト条約により１９９２年５月２２日にアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、１２３０１、パークローン・ドライブ、ロックビル、メリーランド、２０８５２、アメリカ合衆国に受理番号ＨＢ１１０４９で寄託した。本発明は、Ｌ−セレクチンおよびＥ−セレクチンのショートコンセンサス反復（ＳＣＲ）ドメイン上に存在する１種類以上のエピトープおよびｍＡｂｓを産生することができる細胞と結合するモノクローナル抗体およびそれらと機能が同等のものを包含する。本発明は、これらの抗体、およびＦａｂおよびＦ（ａｂ′）２フラグメントのような総ての生物学的活性を有するこれらの抗体のフラグメントを包含する。本発明にとって特に興味深いのは、離れている別個の付着分子に結合することができる抗体、好ましくは離れている別個のセレクチンに結合することができる抗体、最も好ましくはヒトで産生されまたは組換え技術または他の技術により「ヒューマナイズド（humanized）」（すなわち、ヒトでは免疫原性を持たない）Ｅ−およびＬ−セレクチンに結合することができる抗体である。ヒューマナイズド抗体は、例えば抗体の免疫原性部分を、対応はするが免疫原性を持たない部分（すなわち、キメラ抗体）で置換することによって産生させることができる。このようなキメラ抗体は、ある種のもの由来の抗体の反応性または抗原結合性部分および別の品種由来の抗体（免疫原性を持たないもの）のＦｃ部分を含むことができる。キメラ抗体の例としては、非ヒト哺乳類−ヒトキメラ、齧歯類−ヒトキメラ、ネズミ−ヒトおよびラット−ヒトキメラが挙げられるが、これらに限定されるものではない（ロビンソン（Robinson）ら、国際特許出願第１８４，１８７号明細書；タニグチ、エム）（Taniguchi M.）、欧州特許出願第１，７１７，４９６号明細書；モリソン（Morrison）ら、欧州特許出願第１７３，４９４号明細書、ノイベルガー（Neuberger）ら、ＰＣＴ出願ＷＯ８６／０１５３３号明細書；カビリー（Cabilly）ら、欧州特許出願第１２５，０２３号明細書；ベター（Better ）ら、１９８８年Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１；リウ（Liu）ら、１９８７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：３４３９；ニシムラ（Nishimura）、１９８７年、Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．，４７：９９９；ウッド（Wood）ら、１９８５年、Ｎａｔｕｒｅ，３１４：４４６；ショウ（Shaw）ら、１９８８年、Ｊ．Ｎａｔｌ．ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ．，８０：１５５３、これらの文献は総て参考として本明細書に引用したものである）。「ヒューマナイズド（humanized）」キメラ抗体の総説としては、モリソン・エス（Morrison S.）、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：１２０２およびオイ（Oi）ら、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４がある。好適な「ヒューマナイズド」抗体は、ＣＤＲまたはＣＥＡ置換によって産生させることもできる（ジョーンズ（Jones）ら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５５２；ベルヘヤン（Verhoeyan）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４；バイドラー（Beidler）ら、１９８９年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４１：４０５３、これらの文献は総て参考として本明細書に引用したものである）。本発明はまた、炎症性および免疫反応、ＡＲＤＳ、糸球体腎炎、急性および慢性同種移植片拒絶反応、炎症性皮膚疾患、リウマチ性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、全身性エリテマトーデス、結合組織疾患、静脈炎、虚血−再潅流による損傷、および癌などに関与する疾患の診断、予防および治療にこれらの化合物を用いる方法を提供するが、これらに限定されるものではない。本発明は、白血球−内皮相互作用および疾患の機構における付着分子の役割を検討するための新規な研究手段も提供する。哺乳類のリンパ球は、イン・ビボで動物を免疫するかまたはイン・ビトロで全細胞、付着分子を発現する細胞または単離された付着分子若しくはそのフラグメントと接触させることにより免疫される。Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチンを両方とも認識する本発明のモノクローナル抗体は、適当な抗原性剌激または免疫原に応答して生成する。本発明の抗体を産生させるには、セレクチンを発現する天然に存在する細胞の形態の免疫原、Ｌ−および／またはＥ−セレクチンでトランスフェクションしたまたは形質転換した細胞、またはセレクチンタンパク質およびペプチド単独または包合した他のタンパク質、リポソームなど。この免疫原はＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンに共通なタンパク質領域を含み、更に好ましくはこの免疫原はＳＣＲドメインまたはそのフラグメントを含む。一つの態様では、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡおよびＬ−セレクチンｃＤＮＡを安定に発現する単細胞タイプをＥ−およびＬ−セレクチンと反応する抗体を生成する免疫原として用いる。もう一つの態様では、ヒトＬ−セレクチンを安定に発現する細胞を免疫原として用いる。本発明のもう一つの態様では、ヒトＳＣＲドメインまたはその部分を安定に発現する細胞を免疫原として用いる。もう一つの態様では、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡを安定に発現するマウスリンパ球細胞をＥ−セレクチンおよびＬ −セレクチンと反応する抗体を生成する免疫原として用いる。もう一つの態様では、サイトカインでの剌激の後にＥ−セレクチンを発現する内皮細胞またはＬ− セレクチンを発現する末梢血白血球を免疫原として用いる。イン・ビボで免疫感作するには、数週間（例えば、２〜４時間）までの間隔で必要なだけ免疫感作を繰り返して、十分な力価の抗体を得るようにする。細胞、細胞抽出物または抗原付着タンパク質、ペプチドまたはフラグメントを、適当な溶液またはアジュバントに運ぶのである。最後の抗原を増加した後、動物を屠殺して、脾臓細胞を取り出す。ハイブリドーマの形成およびモノクローナル抗体の産生は、当業界で公知の多数の様々な手法によって行うことができる。基本的には、本発明の方法は、最初にイン・ビボまたはイン・ビトロで抗原または免疫原で予め剌激しておいた哺乳類の脾臓からの免疫細胞などの免疫細胞を得ることからなっている。次に、これらの細胞を、細胞培養において無限に複製し、したがって永久に免疫グロプリンを分泌する細胞系を産生することができるミエローマ細胞または形質転換細胞のような細胞と融合させる。好ましくはネズミであるが、他の哺乳類の細胞から誘導することもでき、ラットおよびヒトを包含するがこれらに限定されない永久細胞またはミエローマ細胞であって、ある種の栄養を利用することが必要な酵素を欠き、速やかに成長することができ、良好な融合能を有する細胞を選択する。多くのこのような細胞系またはミエローマは、当業者に知られており、また他のものは普通に記載されている。酵素の欠失としては、例えばチミジンキナーゼ（ＴＫ）またはヒポキサンチン−グアニンホスホリボキシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）を挙げることができる。これらを欠いていることにより、例えばヒポキサンチンアミノプテリンチミジン培地（ＨＡＴ）上で成長する能力により融合細胞を選択することができる。好ましくは、用いられる永久融合パートナーは、免疫グロプリンを分泌しない細胞系から誘導される。得られる融合細胞またはハイブリドーマを融合細胞は生き続けるが融合しない細胞は生き続けない条件下で培養し、生成するコロニーをスクリーニングして所望なモノクローナル抗体を産生させるのである。このような抗体を産生するコロニーをクローニングし、膨脹させて、イン・ビボまたはイン・ビトロで成長させて、多量の抗体を産生させる（これらの細胞を融合する理論的基礎および実際的方法の説明については、ケーラー（Koehler）およびミルシュタイン（Milstein）、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５を参照されたい。この文献の開示内容は参考として本明細書に引用したものである）。これらの方法を以下において更に詳細に説明するが、当業者であれば、これらの手法の改質および付加は本発明の範囲から離反することなく行うことができることを理解されるであろう。個々の融合細胞は、個々の組織培養ウェルで成長させることができる。放射線を照射した胸腺リンパ球または他の細胞のような支持細胞を用いて、細胞の生存率を増加させることができる。個々のウェルを形成するハイブリドーマ培養上清を分析し、酵素結合イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびイムノドットアッセイなどの当業界で知られている好適な検出法を用いて、ヒト細胞付着分子ｃＤＮＡでトランスフェクションした哺乳類細胞または白血球、または精製した付着分子またはそのフラグメントに結合する抗体を得る。前者については、培養上清を、抗体が結合する特異細胞付着分子（ＣＡＭ）でコーティングした反応細胞に入れる。インキュベーションの後、反応ウェルを洗浄し、抗原に結合した残っている抗体を、抗−ＣＡＭ抗体と反応する標識抗体によって検出する。好適な標識には、放射性同位元素、蛍光剤のような発光基質および酵素標識の成分が挙げられる。イムノドット法を用いて、抗−ＣＡＭ抗体を発現するクローニングをスクリーニングすることもできる（トゥビン（Towbin）ら、１９８４年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄ，７２：３１３、この文献の開示内容は参考として本明細書に引用した）。精製したＣＡＭを硝酸セルロース膜に「ドット」として適用して乾燥させる。非特異的結合部位をゼラチン溶液でブロックした後、膜を培養液上清、抗マウス免疫グロプリン−ペルオキシダーゼ包合溶液および４−クロロ−１−ナフトール溶液に順次浸漬し、浸漬の間にリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）で洗浄する。反応性免疫グロプリンを発現するクローンが、着色ドットとして現れる。当業界で知られている他のスクリーニング法を用いることもできる。分泌ハイブリドーマからの多量のモノクローナル抗体は、マウスの腹腔内にクローンを注射し、そこから腹水を回収することによって産生させることができる。好ましくはプリスチンまたは他の腫瘍プロモーターを与えて、化学的または放射線照射によって免疫を抑制したマウスは、様々な株のものでよく、好ましくはニュージーランド・ブラックまたはＢａｌｂ／ｃ株である。腹水をマウスから採取し、モノクローナル抗体を例えばＣＭセファロースカラムまたは他のクロマトグラフィ法により精製する。高力価の抗体をこのようにして回収することができる。あるいは、ハイブリドーマを回分または連続培養法でイン・ビトロまたは懸濁培養物として培養し、モノクローナル抗体を培地または上清から回収することもできる。抗体または抗原に結合するフラグメントを、遺伝子工学によって産生させることもできる。この手法では、標準的なハイブリドーマ法の場合と同様に、抗体産生細胞を所望な抗原または免疫原に対して感作する。免疫脾臓細胞またはハイブリドーマから単離されたメッセンジャーＲＮＡを鋳型として用いて、ＰＣＲ増幅を利用してｃＤＮＡを作成する。バクテリオファージのライブラリーであって、それぞれ初期の抗原の特異性を保持している１本の重鎖遺伝子と１本の軽鎖遺伝子とを含むものをｃＤＮＡを用いて産生させる。組合せライブラリーは、重鎖遺伝子ライブラリーを軽鎖遺伝子ライブラリーと結合することによって構築される。これにより重鎖と軽鎖を同時に発現するクローンのライブラリー（Ｆａｂフラグメントまたは抗体分子の抗原に結合するフラグメントに似ている）が得られる。これらの遺伝子を運ぶファージを、細菌にトランスフェクションする。抗体遺伝子合成をトランスフェクションした細胞で誘発させると、重鎖および軽鎖タンパク質は自己集合して、抗原または免疫原でスクリーニングすることによって検出することができる活性な抗体を産生する。 E.coliで重鎖および軽鎖を両方とも発現する技術は、ＰＣＴ特許出願明細書、公開番号ＷＯ９０１４４３、ＷＯ９０１４４３およびＷＯ９０１４４２４、およびヒュース（Huse）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５〜１２８１の主題であり、これらの文献は参考として本明細書に引用した。Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチンを認識しまたはこれらと結合することの外に、本発明のモノクローナル抗体はこれらの分子の付着機能をブロックする。一つの態様では、本発明は、ヒトＥ−およびＬ−セレクチンで発現する共通のエピトープを認識する新規なｍＡＢ（ＥＬ−２４６）である。ＥＬ−２４６は両タンパク質の機能をブロックし、様々な異なる動物由来のセレクチンを認識し、そのエピトープはＥ−およびＬ−セレクチンのＳＣＲドメイン内にあるか、またはＳＣＲドメインを必要とする。このＳＣＲドメインと反応する本発明の新規な抗体は、これら２種類の異なるセレクチンの付着機能を抑制する。末梢リンパ説ＨＥＶ（Ｅ−セレクチン依存性）に対するリンパ球付着（Ｌ−セレクチン依存性）は、ＥＬ−２４６で＞９５％までブロックされた。この抑制は、Ｌ−セレクチンとだけ反応して、Ｅ−セレクチンとは反応しない抗体であるＤＲＥＧ５６抗−Ｌ−セレクチンプロッキングｍＡｂの抑制（８８％）よりも大きい（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４−２２４８）。Ｌ−セレクチンの炭水化物（ＰＰＭＥ）結合活性はＥＬ−２４６によって余り抑制されず、ＥＬ−２４６はＳＣＲドメインに特異的であることを示していた。ＥＬ−２４６は付着性Ｌ−細胞で発現されるＥ−セレクチンの容量は効果的にブロックし（＞９０％）、ヒト好中球に結合する。本発明は、心筋梗塞、抗原によって剌激される喘息性反応またはショックなどの急性環境、または同種移植片の拒絶反応のような亜急性環境で、治療薬として特に有用であることがある。このｍＡｂは、リウマチ性関節炎のような慢性疾患の治療に有効であることもできる。本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、哺乳類における喘息の予防または治療の有用な方法である。抗−セレクチン抗体を用いる喘息の予防または治療法は、１９９１年７月３１日出願の米国特許出願連続番号７３８，６３３号明細書およびグンデル（Gundel）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８８：１４０７−１４１１に詳細に記載されており、これらの文献は参考として本明細書に引用したものである。これらの抗体または抗原結合性フラグメントは、抗原によって誘発される喘息性反応を伴うことがある後期気道障害を抑制する。付着分子、Ｅ−セレクチンは、この相の反応を媒介する。本発明によるこの相のブロックは、肺気道の障害を予防するための治療法として働く。抗体または抗原に結合するフラグメントを、抗原に暴露する前または暴露中にボーラス静脈注射によって１ｐｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の治療投与量で投与する。多くの病原体または病気を引き起こす微生物は、哺乳類細胞に付着する手段として細胞表面付着分子を用いる。本発明の抗体または抗原に結合するフラグメントおよびそれらと生物学的に同等のものは、病原体の哺乳類細胞への付着分子によって媒介される結合をブロックまたは抑制するのに効果的であることがある。更に、本発明の抗体、抗原と結合するフラグメントおよびそれらと生物学的に同等のものは、病原体の哺乳類細胞へのＥ−およびＬ−セレクチンによって媒介される結合をブロックまたは抑制するのに効果的であることがある。このような病気を引き起こす微生物には、ウイルス、寄生中、細菌および真菌性病原体などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明のモノクローナル抗体は、セレクチンの多様な機能活性の決定における検討または研究手段として有用である。Ｅ−およびＬ−セレクチンの多様な機能活性およびこれらのタンパク質の潜在的な「ホモタイプ」の相互作用は、ＥＬ−２４６エピトープを更に分析することによって理解することができる。サイトカインで活性化された内皮細胞への好中球の付着は、抗−Ｅ−セレクチン並びに抗−Ｌ−セレクチンによってブロックすることができる（ベビラッカ（Bevilacqua）ら、１９８７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：９２３９−９２４１；ベビラッカ（Bevi lacqua）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．）２４３：１１６０−１１１２；ホールマン（Hallman）ら、１９９１年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１７４：２３６−２４３；スミス（Smit h）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７：６０９−６１８；スペルチニ（Spertini）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２５６５−２５７３）。キシモト（Kishimoto）ら（１９９０年、Ｂｌｏｏｄ，７８：８０５−８１１）は、ある種の抗−Ｅ−およびＬ−セレクチンｍＡｂｓは好中球で活性化した内皮細胞の付着に対するそれらのブロック効果において加算的ではなく、これら２種類のタンパク質は同じ付着経路においてレセプター逆レセプター対として関与していることを示唆している。この仮定は、Ｅ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたＬ−細胞への好中球の結合は白血球の抗−Ｌ −セレクチンｍＡｂ処理によってブロックされるという観察によって支持される（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｂｌｏｏｄ，７８８：８０５−８１１）。ピッカ（Picker）ら（１９９１年、Ｃｅｌｌ，６６：９２１−９３３）は、好中球上のＬ−セレクチンがｓＬｅｘ炭水化物によって修飾され、Ｅ−セレクチンに対してこれらの構造を優先的に有することを示すことによってこれらの知見を拡張した。対照的に、スペルチニ（Spertini）ら（１９９１年．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２５６５−２５７３）は、好中球によって活性化された内皮細胞付着はＥ−およびＬ−セレクチンを伴うことも示したが、これらのタンパク質に対するｍＡｂｓは加算的ブロッキング効果を有し、別の付着経路を示唆していることを見出した。ＥＬ−２４６はＥ−およびＬ−セレクチンの効果的なブロッカーであり、前記の検討において用いたブロッキングｍＡｂｓとは異なる分子領域（下記参照）を認識するので、これは別の報告における不一致のいくつかについての基礎を決定するのに有用であることがある。Ｌ−セレクチン／Ｐ−セレクチンキメラタンパク質を用いるドメインマッピングの検討により、Ｌ−セレクチンのＳＣＲドメインに対するＥＬ−２４６エピトープが局在化された。ＥＬ−２４６によって認識されたＥ−セレクチン上のエピトープは、このセレクチンのＳＣＲドメイン内に存在することもできる。ＳＣＲにおけるＥＬ−２４６エピトープの位置は、ＥＬ−２４６の炭水化物ＰＰＭＥ結合をブロックすることが不可能であることと一致し、且つＬ−およびＥ−セレクチンのＳＣＲドメインが最適付着機能に本質的であることを示している最近の報告と一致している（ワトソン（Watson）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１５：２３５−２４３；ピゴット（Pigott）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：１３０）。背景の説明で述べたように、セレクチンのレクチンドメインが機能には必要であり、多くのブロッキング抗−セレクチンｍＡｂｓはこの領域によってコードされたエピトープを認識する（ボウエン（Bowen ）ら、１９９０年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１０：１４７−１５３；カンサス（Kansas）ら、１９９１年、Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８；キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４−２２４８）。ＥＧＦドメインで局在化されたエピトープに対するＭＡｂは、Ｌ−セレクチンによって媒介される付着を抑制することを示している（ポーレイ（Polley）ら、１９９１年、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：６２２４−６２２８；ボウエン（Bowen）ら、１９９０年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１０：１４７−１５３；カンサス（Kansas ）ら、１９９１年、Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８；シーゲルマン（Siegelman）ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ．，６１：６１１）。ここに示されたデーターはこれらの観察を拡大するものであり、セレクチンのそれぞれの細胞外ドメイン内の適当なエピトープに対するｍＡｂｓが付着機能を抑制することができることを説明している。理論によって拘束されるものではないが、ｍＡｂｓはリガンド結合による直接的干渉の結果として付着を抑制し、またはｍＡｂの結合、特にレクチンドメインの外側のエピトープを画定するｍＡｂｓはタンパク質のコンホーメーションに摂動を与え、レクチンドメインの機能的一体性を間接的に損なうことになることが可能である。ＥＬ−２４６がセレクチンの機能的コンホーメーションを変更することによって付着をブロッキングすれば、これは付着におけるＳＣＲの役割はＥ −およびＬ−セレクチンに対するものと同じであることを示唆することになる。これは、ＳＣＲの役割がそれぞれのセレクチンについて特異的であると予言したワトソン（Watson）ら（１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１５：２３４−２４３）と対照的なものである。ＥＬ−２４６はＥ−およびＬ−セレクチンのみを認識するので、この後者の予言はＰ−セレクチンについては真実である可能性がある。従って、多数のＳＣＲドメイン（それぞれ、Ｅ−およびＬ−セレクチンにおいて９対６および２）を有することに加えて、トロンビンによって活性化される血小板の付着のようなこの分子の特異的機能に寄与するＰ−セレクチンＳＣＲには分子の差があることがある。ＥＬ−２４６によって認識されたエピトープについて更に分子および機能の特徴を決定することにより、セレクチンの機能およびこの群の付着タンパク質の進化論的保存が理解される。処理の標的を設計して、ＥＬ−２４６によって認識されるエピトープを制御またはブロックし、これによりイン・ビボでのセレクチンの活性を制御することができる。重要なことは、この部位を抑制する新規な治療薬は、白血球および内皮細胞付着タンパク質を同時に抑制することにより白血球 −内皮細胞の付着の活性をブロックするというもう一つの利点を有することである。このようにして産生されるモノクローナル抗体は、多数の診断および治療用途を有する。これらは、イン・ビトロでは診断薬に用いて、不溶性の形態で存在しまたは生物学的資料または組織または他のヒトに由来する物質を標準的なイムノアッセイプロトコールに付すことによって哺類の細胞と会合している付着分子、好ましくはセレクチンの存在について試験することができる。これらの抗体または抗原に結合するフラグメントは、高内皮性後毛細管小静脈、肺組織または任意の炎症部位のような組織生験材料の分析に用いて、反応性エピトープを有する細胞の存在を検出することもできる。このようなアッセイとしては、ラジオイムノアッセイ、ＥＩＡ、蛍光または化学発光の形式などを挙げることができる。一つのこのようなアッセイでは、生物学的試料を、本発明の抗体および抗体が結合しているセレクチンの存在を検出するのに用いられる標識した第二の抗体に接触させる。更に、多くの組織化学的方法を用いることができ、当業界で公知である。一つの特定のアッセイは、当業界で知られている標準的手法ではモノクローナル抗体ＥＬ−２４６を用いて、参考として本明細書に引用した「免疫診断の方法（Methods in Immunodiagnosis）」、第２版、ローズ（Rose）およびビガッツィ（Bigazzi）監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（John Wiley and Sons）、１９８０年、およびキャンベル（Cambell）ら、「免疫学の方法（Methods of Immunology）」、ダブリュ・エイ・ベンジャミン、インコーポレーテド（W.A.Be njamin,Inc.）、１９６４年に記載の酵素結合イムノアッセイを行うのである。このようなアッセイは例えば、直接的形式（標識した第一の抗体が抗原と反応する）、間接的形式（標識した第二の抗体が第一の抗体と反応する）、競合形式（標識した抗原の添加）またはサンドイッチ形式（標識した抗体および未標識の抗体を両方とも用いる）並びに当業界に記載の他の形式であることができる。一つの態様では、哺乳類からの生物学的試料を不溶性マトリックスまたは固形基質に適用して、このマトリックスにセレクチンを有する細胞上のセレクチンを結合させる。このマトリックスをリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）のような生理緩衝液を用いて洗浄して、未結合材料を除く。固形の抗原に結合したマトリックスを、モノクローナル抗体ＥＬ−２４６のような本発明の抗体を含む溶液に暴露する。この抗体を固形マトリックス上の抗原と反応させて、マトリックスを再度洗浄して、未結合抗体を除く。次に、この複合体を第一の抗体と反応するヤギ抗−マウスＩｇＧのような標識した第二の抗体を含む溶液に暴露させる。この抗体は、好ましくはペルオキシダーゼのような酵素反応の１成分、¹²⁵Ｉのような放射性同位元素、または化学発光または蛍光基質で標識する。この複合体を再度洗浄して、未結合抗体を除く。反応は、シンチレーションカウンターまたは分光光度計のような選択した標識にとって適当な手段によって監視する。このような検出法に適する生物学的試料としては、組織生験抽出物、全血、血漿、結成、脳脊髄液、滑液、複数液、尿などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。もう一つの態様では、本発明の抗体を不溶性マトリックスまたは固形基質に適用して、これらの抗体をマトリックスに結合させる。Ｌ−および／またはＥ−セレクチンを含むものと思われる生物学的試料またはその細胞溶解物をマトリックスに加え、マトリックス上の抗体と反応させて、セレクチン−抗体複合体を形成させる。複合体は、標識した第二の抗体を用いて検出される。標識した第二の抗体はＥＬ−２４６または生物学的に同等な抗体である。この方法により、Ｌ−およびＥ−セレクチン、および生物学的試料に含まれているときにはＬ−およびＥ −セレクチンを有する細胞を検出する。このアッセイは定性的または定量的である。このアッセイを修飾して、目的とする個々のセレクチンに特異的なモノクローナル抗体を用いることによってＬ−セレクチンおよびＥ−セレクチンを識別することができる。このようなモノクローナル抗体は、キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．８７：２２４４−２２４８に記載のようなＤＲＥＧｍＡｂｓである。生物学的試料中のＬ−および／またはＥ−セレクチンを有する細胞を検出し、定量する方法は、炎症性疾患、自己免疫疾患、癌、喘息、虚血−再潅流損傷などの疾患状態を診断する上で特に有用である。これらの方法は、これらの疾患状態の進行状況を監視するのにも有用である。更に、この方法は、抗炎症剤、化学療法剤、付着防止剤などの治療薬の治療経過中の効力を監視するのにも有用である。これらのすべての治療、予防および診断に使用するため、モノクロナル抗体および他の必要な試薬および適当な装置および備品をキットの形態で提供し、容易に入手でき、容易に使用されるようにすることができる。本発明抗体は、哺乳類で治療、診断などの用途に用いられる医薬製剤に処方することができる。本発明の抗体または高原に結合するフラグメントは、冠状動脈疾患または高血圧、糖尿病、高コレステロールまたは喫煙に伴う心臓発作または卒中の高度の危険性を有する種類の疾患を有する哺乳類の予防および／または治療に特に有用である。本発明の抗体または抗原に結合するフラグメントは、外科手術中または後、特に冠状動脈バイパス手術後に起こる虚血−再潅流による損傷の防止または治療にも有用である。これらの抗体、抗原と結合するフラグメントおよびそれらと機能的に同等のものは、肺の虚血／再潅流による損傷の防止または抑制に特に有用である。本発明は、肺機能の喪失を予防または抑制し且つＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンに結合することができる抗体で処理した哺乳類の死亡を防止する効果的な治療薬であることが示されている。肺移植の場合などの肺虚血／再潅流による損傷の治療を必要とする哺乳類は、肺機能の喪失を防止しまたは抑制し且つ死亡を防止するのに効果的な量の抗体またはそれと機能が同等のものを投与される。このような哺乳類の治療により、罹患部位での炎症反応を防止し、抑制しまたは減少させる。本発明の抗体または抗原と結合するフラグメントは、アレルギー性鼻炎、喘息およびアナフィラキシーの予防または治療にも有用である。本発明の抗体は、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、若年型糖尿病、シェーグレン症候群、結合組織疾患などの炎症性疾患および自己免疫疾患の予防または治療にも有用である。本発明の抗体、抗原と結合するフラグメントおよびそれらと機能的に同等のものは、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチンによって媒介される細胞− 細胞相互作用を防止しまたは抑制するのに有効である。これらの抗体は、活性化した内皮細胞層を含むＥ−セレクチンを発現する細胞、Ｅ−セレクチンｃＤＮＡトランスフェクタントなどと好中球のＬ−セレクチンとの相互作用を抑制する。本発明の抗体は、動脈、静脈、毛細管、リンパ管などの存在する内皮細胞層状のＥ−セレクチンにより媒介される好中球のローリングを防止または抑制する。これらの抗体およびそれらと機能的に同等なものによって産生される抑制効果は、炎症反応を防止し、抑制しまたは調節するのに有用である。本発明の抗体またはそれらと機能的に同等なものは、末梢リンパ節に含まれる高内皮性後毛細管小静脈細胞（ＨＥＶ）へのＥ−セレクチンを発現する細胞の結合を防止しまたは抑制することができる。異種移植片のイン・ビボでのホーミング（homing）モデルを用いると、ヒト、ヤギ、ヒツジおよびウシ由来のリンパ球は、静脈内注射の後には組織特異的にマウスのリンパ球組織へと戻ることを見出した。これらの結果は、初期の観察からホーミング機構は哺乳類間で高度に保存されることが判っているので驚くべきことではない（スペルチニ・オー（Spertini,O.）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：９４２；ヴゥ、エヌ・ダブリュ（Wu,N.W.）ら、１９８８年、Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，１０７：１８４５；ウォルチェック、ビー（Walc heck,B.）ら、１９９２年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：４６９）。本発明の一つの態様は、哺乳類におけるリンパ組織へのリンパ球のホーミングを防止または抑制する方法である。本発明の抗体は、リンパ球がリンパ組織へ戻る能力を抑制する。白血球は、Ｅ−セレクチンを特異的に発現する部位へＥＬ−２４６を運ぶことができる。好中球をＥＬ−２４６でプレコーティングし、洗浄し、Ｅ−セレクチンｃＤＮＡトランスフェクタントまたはサイトカインで活性化したＨＵＶＥＣｓへ加えたアッセイでは、ｍＡｂは白血球からＥ−セレクチンへ移った。ＦＩＴＣ −抗−マウス第二段階で染色し、白血球から移行した後にフローサイトメトリーによって測定したところ、Ｅ−セレクチントランスフェクタント上のＥＬ−２４６の量は、飽和量のＥＬ−２４６でトランスフェクタントを直接染色した後の量より大きかった。表面Ｌ−セレクチンに結合したＥＬ−２４６のシェディング（ shedding）はこれらの結果と合わなかったが、これはＥＬ−２４６を喪失した好中球が抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂＤＲＥＧ５６で明瞭に染色されるためである。ＤＲＥＧ５６はアッセイの経過中に細胞表面にトランスロケーションした新たなＬ−セレクチンと反応したとは思われず、これは（１）アッセイ時間が比較的短く（１５分間）、（２）以前に形成されたＬ−セレクチンの有意な細胞内プールが好中球の以前の分析では検出されなかったためである（ジュティラ（Jutila,M .A.）ら、１９８９年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８；キシモト、ティーケイ（Kishimoto.TK）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４；ジュティラ（Jutila,M.A.ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３２：２０１；キシモト、ティーケイ（Kishim oto.TK）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４５：１２３８）。好中球がイン・ビトロでＬ−セレクチンを喪失してしまうと、それらは新たな発現がみられる前に死滅するのが普通である。ＥＬ−２４６がＬ−セレクチンからＥ−セレクチンへ移行し、これらの分子が緊密に会合すると、白血球はイン・ビボでｍＡｂに対する効果的な伝達系となることができる。本発明の抗体および抗原と結合するフラグメントは、病原体または潜在的に病原性を有する微生物によって引き起こされる感染症および疾患の予防および治療に有用である。抗体、これらの抗体の抗原と結合するフラグメント、またはそれらと生物学的に同等なものを含んでなる医薬組成物を、付着分子を有する宿主哺乳類細胞、好ましくはセレクチン、最も好ましくはＬ−またはＥ−セレクチンに投与する。患者に、受容哺乳類、好ましくはヒトに対する本発明の抗体または抗原と結合するフラグメントを供給する場合に、投与される抗体または抗原に結合するフラグメントの投与量は、哺乳類の年齢、体重、身長、性別、総合的医学的条件、病歴などによって著しく変化する。通常は、受容哺乳類には（哺乳類の体重の）約１ｐｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の抗体または抗原に結合するフラグメントの投与量を供給することが望ましいが、これより多量または少量を投与することもできる。前記の抗体または抗原と結合するフラグメントの組合せを用いることによって、治療状有効量を低くすることができる。本明細書で用いられるように、一方の化合物を、第二の化合物と共に更に投与し、これら２種類の化合物は、両化合物が同時に患者血清中に検出することができるような時間内に投与するのである。本発明の抗体または抗原と結合するフラグメントは、これを受容する被験者に、炎症症状の重さ、程度または期間を少なくしまたは減少させるのに十分な量で供給されるこを意図したものである。本発明の抗体またはそれらのフラグメントは単独で投与することができ、または１種類以上の追加の抗炎症薬または抗喘息薬（例えば、カテコールアミン、レゾルシノール、サリンゲニンおよびエフェドリン）、糖質コルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン）、染色体（例えば、クロモリンナトリウム）および抗コリン作動薬（例えば、アトロピン）と組合せて投与し、炎症または喘息症状を治療するのに要するこれらの薬剤の量を減少させることができる。本発明の薬剤は、「予防」または「治療」の目的で投与することができる。予防的に投与するときには、これらの薬剤は症状が起こる前に投与される。これらの薬剤を予防的に投与することにより、引き続いて起こる炎症反応を防止しまたは弱めることができる。治療目的で投与するときには、これらの薬剤を炎症症状の開始時（または直後）に投与する。これらの薬剤を治療的に投与することにより、実際の炎症症状を弱めることができる。従って、本発明の薬剤は、予想される炎症症状の開始前に投与し（予想される症状の重さを軽減し、症状の期間または範囲を短縮する）、または症状が見られた後に投与することもできる。これらの抗体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、経口、経鼻などの治療条件に適する経路によって投与することができる。抗体は、治療する哺乳類の血流中に注射するのが好ましい。当業者であれば、好ましい経路は治療を行う条件と共に変化することを容易に理解されるであろう。抗体は純粋なまたは実質的に純粋な形態で投与することが可能であるが、医薬処方または製剤として存在することが好ましい。本発明の処方は、獣医用でもヒト用でも、前記の抗体を１種類以上の製薬上許容可能なキャリヤーおよび場合によっては他の治療成分と共に含む。（複数の）キャリヤーは、処方の他の成分と相溶性であり且つそれを受容するものにとって有害ではないという意味において「許容可能」でなければならない。これらの処方は、単位投与形態で提供されるのが好都合であり、製薬業界に公知の任意の方法によって製造することができる。総ての方法は、活性成分を１種類以上の補助成分から成るキャリヤーと会合させる段階を含んでいる。通常は、活性成分を液体キャリヤーまたは微細に分割された固形キャリヤーまたは両方と均一且つ緊密に会合させた後、必要に応じて生成物を所望な処方に成形することによって、処方を得ることができる。静脈内、皮下または腹腔内投与に好適な処方は、活性成分と好ましくは受容するものの血液と等張の溶液との無菌水溶液から成るのが好都合である。このような処方は、固形活性成分を、塩化ナトリウム（例えば、０．１〜２．０Ｍ）、グリシンなどの生理学的に適合する物質を含み、水溶液をを生成するのに生理条件で適合する緩衝ｐＨを有する水に溶解し、この溶液を殺菌することによって好都合に調整することができる。これらは、単位または複数投与容器、例えば密封アンプルまたはバイアルに入れて提供することができる。本発明の処方は、安定剤を配合することができる。安定剤の例としては、ポリエチレングリコール、タンパク質、糖、アミノ酸、無機酸、および有機酸であって、それら自体でもまたは混合物としても用いることができるものがある。これらの安定剤は、抗体１重量部当たり０．１１〜１０，０００重量部の量で配合するのが好ましい。２種類以上の安定剤を用いる場合には、それらの総量が前記の範囲内になるのが好ましい。これらの安定剤は適当な濃度およびｐＨで水溶液で用いられる。このような水溶液の比浸透圧は０．１〜３．０オスモルの範囲内にあるのが普通であり、好ましくは０．８〜１．２の範囲にある。水溶液のｐＨは５．０〜９．０の範囲内に調整され、好ましくは６〜８の範囲内に調整される。本発明の治療薬の処方では、付着防止剤を用いることができる。もう一つの製薬法を用いて作用の期間を調節することができる。徐放性製剤は、ポリマーを用いて、本発明の抗体、抗原に結合するフラグメントまたはそれらの機能的誘導体を複合体形成させまたは吸収させることによって得ることができる。徐放は、適当な高分子（例えば、ポリエステル、ポリアミン酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレン−酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはプロタミン、硫酸塩）、および高分子の濃度並びに徐放を行うための配合法を選択することによって行うことができる。徐放性製剤によって作用期間を制御するためのもう一つの可能な方法は、抗体、抗原と結合するフラグメントまたはそれらの機能的誘導体を、ポリエステル、ポリアミン酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）またはエチレン−酢酸ビニルコポリマーなどのポリマー材料の粒子中に配合することである。あるいは、これらの薬剤をポリマー性粒子中に配合する代わりに、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどのコアセルベーション手法または界面重合によって、またはコロイド状薬剤伝達系、例えば、リポソーム、アルブミン微小球体、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル、またはマクロエマルジョン中で、調整したマイクロカプセルにこれらの材料を取り込むことが可能である。このような手法は、レミントンズ・ファーマスューティカル・サイエンシズ（Remington's Pharmaceutical Science s）（１９８０年）に開示されている。経口製剤が所望なときには、組成物を特にラクトース、スクロース、澱粉、タルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶性セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウムまたはアラビアゴムなどの典型的なキャリヤーと組合せることができる。実施例１ハイプリドーマの産生および抗体の特性決定法免疫感作およびモノクローナル抗体の生成ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡを安定に発現するマウスＬ１−２リンパ腫細胞（Ｌ１−２ＥＬＡＭ）（ピッカー（Picker）ら、１９９１年、Ｃｅｌｌ，６６：９２１−９３３、参考として本明細書に引用した）を、本発明の抗体を生成するための免疫原として用いた。簡単に説明すれば、Ｌ１−２ＥＬＡＭ細胞（２×１０⁷ ）を、アジュバントの非存在下で２週間の間隔でＣ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内投与した（全部で３回投与）。最後の投与は融合の４日前に行った。ＳＰ２／０ミエローマ細胞系を融合パートナーとして用い、前記の手続きを行ってハイプリドーマを生成させた（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．・ＵＳＡ，８７：２４４−２２４８、参考として本明細書に引用）。ＳＰ２／０−Ａｇ１４ミエローマ細胞系をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、１２３０１パークローン・ドライブ、ロックビル、メリーランド、２０８５２、アメリカ合衆国から寄託番号１５８１のものを入手する。融合物を１０日目に、Ｅ−セレクチンをトランスフェクションし、モック・トランスフェクションした（mock transfected）Ｌ１−２細胞を用いてフローサイトメトリーによってスクリーニングした。総数で２７９個のウェルをスクリーニング化、１５個を選択して更に分析を行った。第二のスクリーニングは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスターンブロット分析、免疫組織学、および末梢血白血球の染色を含んでいた。以下に説明するように、マウスＩｇＧ１であるＥＬ−２４６は、Ｅ−セレクチントランスフェクタントとヒト白血球の両方を染色することが判った。動物血液供給源として用いた動物は、モンタナ州立大学の大型動物施設から無作為に選択した。Ｂａｌｂ／ＣおよびＣ５７ＢＬ／６マウスの両株を用いた。マウスは週齢を６〜１２週とし、主としてモノクローナル抗体の生成またはリンパ様組織源として用いた。マウスを、ＡＡＡＬＡＣが認定したモンタナ州立大学の小型動物施設に収容した。ＭＳＵ大型動物施設に収容された生後１か月の子牛を、幾つかの実験での末梢血源として用いた。利用したモノクローナル抗体ヒトＬ−セレクチンを認識することが示されている（カメリニ（Camerini）ら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４２：７８−８０；キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４−２２４８、参考として本明細書に引用）マウスＩｇＧｓであるＬｅｕ−８（ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー（Becton D ickinson & Co.）、マウンティンビュー（Mountainview）、カリフォルニアより購入）ｍＡｂのＤＲＥＧ系列（ＤＲＥＧ５６、ＤＲＥＧ２００）およびＤＲＥＧ１５２）を、下記のフローサイトメトリーおよびウェスターンプロット分析で用いた。Ｌｅｕ−８をフィコエリスリン（ＰＥ）包合体として用い、ＤＲＥＧｍＡｂは未包合ｍＡｂの後に適当な第二段階を行ったものとしてまたは蛍光イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）包合体として用いた。ＤＲＥＧｍＡｂｓは、硫酸アンモニウム沈殿により部分的に精製した。他のｍＡｂｓであるＤＲＥＧ５５（マウス抗−Ｌ−セレクチンＩｇＧ１）、ＳＨ４３（マウスＩｇＧ１抗−ヒツジ血小板、ジュティナ、エム・エイ（Jutina,M.A.）、未公表）およびＥＬ− ８１（マウスＩｇＧ１抗−ＥＬＡＭ−１）を、下記の実験の多くにおけるネガティブコントロールとして用いた。フローサイトメトリー分析は、ＦＡＣＳｃａｎ^R上で（ベクトン・アンド・ディッキンソン、マウンティンビュー、カリフォルニア）文献記載の方法で行った（ジュティナ（Jutina）ら、１９８９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８ −３３２４；キシモト（Kishimoto）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．）２４５：１２３８−１２４１；ジュティナ（Jutina）ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３２：２０１−２１４、参考として本明細書に引用）。フローサイトメトリー分析はＥ−またはＬ−セレクチンを発現する細胞の蛍光およびＥＬ−２４６で処理した後Ｅ−またはＬ−セレクチンを発現しない細胞のネガティブ蛍光によって示されるＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンについてのＥＬ−２４６モノクローナル抗体の特異性を証明するために行った。２種類のカラー分析について、ＰＥ−包合したＬｅｕ−８（ベクトン・ディッキンソン）またはＦＩＴＣ包合したＤＲＥＧＭａｂをＥＬ−２４６と組合せて用いた。第二段階で染色した細胞を１０％マウス結成で処理し、利用可能な抗 −マウスＩｇ結合部位をブロックし、ネガティブコントロールマウスｍＡｂｓを用いてバックグラウンド染色のレベルを評価した。データーは１０，０００〜５０，０００個の細胞から集め、棒グラフまたは輪郭プロットとして表した。ウェスターンブロットＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析ウェスターンブロット分析を行った、Ｅ−セレクチンまたはＬ−セレクチンあるいは免疫アフィニティーによって精製したＥ−セレクチンまたはＬ−セレクチンを発現する細胞からの細胞溶解物を用いてＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンに対するＥＬ−２４６モノクローナル抗体の特異性を証明した。Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチンについての適当な分子量に対応するタンパク質バンドのＥＬ−２４６抗体による陽性染色が見られたことから、両セレクチンに対して特異的であることを示していた。ヒト末梢血リンパ球の溶解物またはＬ１−２ＥＬＡＭ細胞懸濁液を、３×１０⁷ 個の細胞をＮＰ−０４０リーシス緩衝液（３％ＮＰ−４０、１５０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＭｇＣｌ₂、５ｍＭＥＤＴＡＮ０．０２％ＮａＮ₃、およびプロテアーゼインヒビターであるペプスタチンＡ、アンチパイン、ロイペプチン、キモスタチン、ベンズアミジン、およびＰＭＳＦを１０μｇ／ｍｌ、総ては５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中）１．０ｍｌ中で氷上で３０分間インキュベーションすることによって調整した。溶解物を１０，０００ｇで１０分間遠心分離することによって透明にし、アフィニティー精製に用いるか、または直接ＳＤＳ／ＰＡＧＥ−ウェスターンプロット分析に用いた。アフィニティーにより単離するには、ポリ分離用クロマトグラフィカラム（バイオ−ラッド・ラボラトリーズ（Bio-Rad Laboratories）、リッチモンド、カリフォルニア）を用いて製造業者指示に従って（フォルマシア・ファイン・ケミカルズ（Pharmacia Fine Chemicals））適当なｍＡｂ（ビーズ１ｍｌ当たりｍＡｂ４ｍｇ）にカップリングした。目的とする抗原を含む溶解物１ｍｌを洗浄緩衝液（１５０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＭｇＣｌ₂、０１％ＮＰ４０、５ｍＭＮａＮ、２０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ７．５）と混合し、ローテーター上で前記のビーズと４℃で２時間組合せた。インキュベーションの後、ビーズを洗浄緩衝液１０ｍｌで洗浄して、未結合抗原を除いた。結合した抗原を溶出緩衝液（５００ｍＭＮａＣｌ、０．１％ＮＰ４０、５ｍＭＮａＮ₃、２００ｍＭ酢酸）３ｍｌで溶解し、溶出液を０．５ｍｌずつ回収し、１Ｍトリス緩衝液、ｐＨ８．０１００μｌで中和した。目的とするタンパク質を含む画分を、ドット・プロット分析によって測定した。ＳＤＳ／ＰＡＧＥ−ウェスターンブロット分析のため、粗製溶解物またはアフィニティーによって精製した抗原を等容の非還元性ＳＤＳ−可溶化緩衝液（２× ）と混合して８％ＳＤＳ／ＰＡＧＥゲル上で行い、製造業者の指示によりＢｉｏＲａｄトランスプロット装置でニトロセルロースへ移した（バイオ・ラッド・ラボラトリーズ）。温和な末変性条件を用いた（沸騰は行わず、ほとんどの処置は４℃で行った）。フィルターを、トリス・バランスド・ソルト・ツィーンＴＢＳＴ（１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌおよび０．０５％ツィーン２０）中５０％ウマ結成を用いて３０分間インキュベーションした。２５レーンのミニプロット装置（イムノネティックス（Immunonetics）、ケンプリッジ、マサチューセッツ）を用いて、次にフィルターを５０μｇ／ｍｌの濃度または培養上清液としての特異的またはネガティブコントロールマウスｍＡｂと共に３０分間インキュベーションした。次に、ニトロセルロースフィルターＴＢＳＴで洗浄し、ヤギ抗−マウスＩｇ−アルカリホスファターゼ包合体（シグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemical Company）、Ａ−９６５４）と共にインキュベーションし、１：２００に希釈した後、再度洗浄した。ブロットは、基質溶液（プロメガ・バイオテク（Promega Biotech）、マジソン、ウィスコンシン）を添加することによって展開した。白血球細胞懸濁液白血球を、ヒト、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、ラットおよびニワトリの末梢血から採取した。通常の免疫蛍光染色のため、ＲＢＣｓ（ニワトリＲＢＣｓを除く）を低張液で溶解した。ヒト血液を白血球源として用いて、下記の機能分析を行った。前記の方法を用いて、単核細胞および好中球を単離した（キシモト（Kishimoto））ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２４４−２２４８；ジュティナ（Jutina）ら、１９８９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８−３３２４；キシモト（Kishimoto）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ．Ｄ．Ｃ．），２４５：１２３８−１２４１；ジュティナ（Jutina）ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３２：２０１−２１４、参考として本明細書に引用）。簡単に説明すれば、血液をクエン酸塩凝固防止剤管に収集し、温和なハンクス・バランスド・ソルト・ソリューション（ＨＢＳＳ）で１：２二希釈し、ヒストパック（Histopaque）１０７７を下層に敷き、２，３００ｒｐｍで３０分間温室で遠心分離した。単核細胞をヒストパック／血漿海綿から回収した。ＲＢＣｓおよび好中球を含むペレットを最初の容積のＨＢＳＳに再懸濁し、好中球をデキストラン沈降によって単離した。単核細胞および好中球製剤中の残部のＲＢＣｓを低張処理によって溶解した。免疫蛍光染色白血球の免疫蛍光染色は、文献記載の方法によって行った（ジュティラ（Juti la）ら、１９８９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８−３３２４；キシモト（Kishimoto）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｗａｓｈ，Ｄ．Ｃ．），２４５：１２３８−１２４１；ジュティラ（Jutila）ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３２：２０１−２１４スタンパー（Stamper）ら、１９７６年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１４４：８２８）。簡単に説明すれば、１×１０⁶ 個の細胞を、最初に氷上で２％ウサギ血清中で１０分間インキュベーションしてＦｃレセプターをブロックした。細胞を洗浄した後、氷上で第一の抗体５０μｇ／ｍｌ（または末希釈培養上清）と共に２０分間インキュベーションした。洗浄した後、結合した抗体をＤＭＥＭ中５％ＦＢＳで１：８０に希釈したＰＥまたはＦＩＴＣと包合したＦ（ａｂ）′２ヤギ抗−マウスＩｇと共にインキュベーションすることによって結合した抗体を表した（タゴ・インコーポレーテド（Tago I nc.）、バーリンガム、カリフォルニア）。免疫ペルオキシターゼ染色アセトンで固定した６μｍの凍結した扁桃腺の切片を、加湿した室内で室温にて３０分間リン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）（５０μｇ／ｍｌ）中で抗体と共にインキュベーションした後、ＰＢＳで洗浄した。ＴＡＧＯ組織化学キット（ヒストプローブ）（Histoprobe）、ＴＡＧＯ、バーリンガム、カリフォルニア）を用いて、アビジン−ビオチン系を用いる３段階免疫ペルオキシダーゼ染色を製造業者の指示によって行った。切片は、ヘマトキシリンにより薄く逆染色された。末梢血白血球のイン・ビトロにおけるＰＭＡ処理前記の動物から単離した末梢血の単核細胞を、ホルポールミリステートアセテート（ＰＭＡ）（１０ｎｇ／ｍｌ、シグマ、セントルイス、ミズーリー）と共に３７℃でＨＢＳＳ中で２０分間インキュベーションした。インキュベーションの後、細胞を洗浄し、次いで染色を行い、フローサイトメトリー分析を行った。実施例２ヒトＥ−セレクチンのＥＬ−２４６認識Ｅ−２４６を、最初にフローサイトメトリーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスターンプロットによって、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたマウスＬ１−２細胞上でスクリーニングした。第１図に示されるように、トランスフェクションしたＥ−セレクチンはフローサイトメトリー分析でＥＬ−２４６で明るく染色されたが、モックトランスフェクションしたＬ１−２細胞は染色されず、Ｅ−セレクチンに対して抗体が特異的であることを示していた。矢印はヒストグラムを示し、（１）Ｌ１−２ＥＬＡＭのＥＬ−２４６染色（２）Ｌ１ −２トランスフェクタントネガティブコントロール、および（３）Ｌ１−２ＥＬＡＭトランスフェクタントのバックグラウンド染色（第二段階コントロール）を表している。ＥＬ−２４６によって認識されたトランスフェクタントによって発現される抗原の分子量は、非還元性ＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスターンプロット下では約１１０ｋＤ（図２）であり、これはＥ−セレクチンについての適当な分子量である。Ｌ１−２ＥＬＡＭＮＰ４０溶解物は、非還元性８％ＳＤＳ／ＰＡＧＥ上で実験し、ニトロセルロースに移した。ブロットをＥＬ−８１（抗−Ｅ −セレクチン、レーン３）、ＥＬ−２４６（レーン２）およびネガティブコントロール抗体（レーン１）でプローブした。分子量マーカーの移動距離は、示した通りである。フローサイトメトリーおよびウェスターンプロットによって示されるように、ＥＬ−２４６はＥ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたＬ−細胞を認識したが、Ｐ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションした細胞は認識しなかった。ＥＬ−２４６とＥ−セレクチンとの反応性を示す追加的手段として、炎症を起こした扁桃腺の切片を染色して免疫組織学的分析を行った。図３に示されるように、ＥＬ−２４６は炎症を起こしたヒト扁桃腺中で小静脈（Ｅ−セレクチン）を染色した。ヒト扁桃腺の凍結切片を実施例１に記載したのと同様に調製して、ＥＬ−２４６を用いて免疫ペルオキシダーゼによって染色した（倍率４００×）。従って、許容可能な性化学的および分子基準を用いると、ＥＬ−２４６はヒトＥ−セレクチンを明瞭に認識した。実施例３ヒトＬ−セレクチンのＥＬ−２４６認識フローサイトメトリー分析を行ったところ、ＥＬ−２４６はヒト末梢血白血球も染色することを示していた。白血球表面抗原を、ＰＭＡで処理した後、ダウンレギュレーションする。ヒト末梢血白血球を実施例１と同様の方法で単離し、ＥＬ−２４６で染色してフローサイトメトリー分析を行った。明確な前方および側方光散乱像によって同定される好中球およびリンパ球上のＥＬ−２４６抗原の発現は、代表的なヒストグラムで示される。ＰＭＡ活性化の前（未処理、図４Ａ）、ＰＭＡ活性化の２０分後（ＰＭＡ処理、４Ｂ図）の染色の比較を示す。イソタイプコントロールまたは第二段階のみのバックグラウンド蛍光は、それぞれの分析において＜１０のモード蛍光値を示した。総ての循環するヒト好中球はＥＬ−２４６を発現したが、陽性のリンパ球の数は変動し、これはＬ−セレクチンについて記載したものと同じ分布パターンである（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２４４− ２２４８；カンサス（Kansas）ら、１９８５年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３４：２９９５）。２種類のカラーフローサイトメトリーでは、総てのＥＬ−２４６陽性細胞はＤＲＥＧ５６（抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂ（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２４４−２２４８）陽性であることが示され、２種類の抗体の染色パターンは同様であった（図５）。２種類のカラーフローサイトメトリー染色は、ＦＩＴＣ標識したＤＲＥＧ５６（抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂ（２９）および実施例１に記載したのと同じＥＬ−２４６を用いて行った。総てのＥＬ−２４６細胞がＬ−セレクチンにも陽性であることを示している輪郭プロットが示される。ヒト白血球ＥＬ− ２４６抗原はＰＭＡで好中球およびリンパ球を活性化した後は細胞表面から失われ（それぞれ、図４Ｂおよび４Ｄ）、これもＬ−セレクチンに特徴的なものであった。細胞はヒトＬ−セレクチンｃＤＮＡトランスフェクションしたがトランスフェクタントコントロールではトランスフェクションせず、ＥＬ−２４６で特異的に染色された（下記参照）。最後に、免疫アフィニティーで精製したＬ−セレクチンはウェスターンブロットでＥＬ−２４６ｍＡｂによって認識されるので、ＥＬ−２４６の反応性タンパク質レベルでも確認した（図６、レーン２）。従って、許容可能な性化学的および分子基準により、ＥＬ−２４６はＬ−セレクチンとも反応した。実施例４ＥＬ−２４６エピトープは多種多様な動物由来のセレクチン上で発現するＥＬ−２４６エピトープの進化論的保存のレベルを評価するため、多種多様な動物由来の末梢血細胞をスクリーニングして、フローサイトメトリーによりＥＬ −２４６染色を行った。表１に示されるように、ＥＬ−２４６は、ヒト、ヤギ、ヒツジ、ウシおよびブタから単離された白血球を染色した。ニワトリおよびラット白血球は、フローサイトメトリーではＥＬ−２４６ネガティブであり、このことはサイトスピン製剤が染色されないことによっても確認された。これらの他の動物でＥＬ−２４６によって認識された抗原はＬ−セレクチンの特徴的な分布を有しており、リンパ球はに二相分布を示し、細胞をＰＭＡで処理した血はその表面発現は失われた。実施例５ＥＬ−２４６はＬ−セレクチンおよびＥ−セレクチンの機能をブロックするＥＬ−２４６のＥ−およびＬ−セレクチンの機能をブロックする機能を試験した。Ｌ−セレクチンに普遍的に寄与する機能は、末梢リンパ節の高内皮性毛細管小静脈（ＨＥＶ）細胞へのリンパ球の付着である（ローゼン（Rosen）、１９９０年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３：３９７−４０２；ベルグ（Berg）ら、１９８９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１０８：５ −１８）。スタンパー−ウッドラフ（Stamper-Woodruff）アッセイは、イン・ビボではリンパ球様器官のリンパ球および内皮の間の付着相互作用の複製物であると当業者によって認められているエックス・ビボアッセイである（ラスキー、エル・エイ（Lasky,L.A.）、１９９２年、「付着。炎症性疾患における役割（Adhe sion. Its Role In Inflammatory Diseases）」の第３章、ジエイ・エム・ハールラム（J.M.Harlam）およびディ・リゥ（DY Liu）（監修）、ダブリュ・エイチ・フリーマン・アンド・カンパニー、ニューヨーク、ｐｐ．４３〜６３）。この分析法では、各種のリンパ球様器官の凍結切片をリンパ球と共にインキュベーションし、切片を洗浄し、添加したリンパ球とこれらの器官の後毛細管小静脈の特殊化した高壁内皮との間の特異的結合の程度を測定した。スタンパー・アンド・ウッドラフのエッスク・ビボ凍結切片結合アッセイを用いて（スタンパー(Sramper）ら、１９７６年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１４４；８２８）、ＥＬ−２４６はリンパ球の末梢リンパ節高内皮性毛細管小静脈への付着も、本発明者らの前記の抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂ、ＤＲＥＧ５６と同様にまたはより良好にブロックしたことを見出だした（それぞれ、９５．６±４．８％対８８±５．１％）（図７）。ヒトリンパ球をＥＬ−２４６、ＤＲＥＧ５６またはイソタイプで合わせたネガティブコントロール（ＥＬ−８１）で氷上で２０分間処理し、末梢リンパ節ＨＥＶへの結合に対する効果を測定した。ＥＬ−２４６を生じる同じ融合物に生成したものを含むコントロールｍＡｂは、リンパ球−ＨＥＶ結合については効果はなかった。（図７）。ＥＬ−２４６は、ＦＩＴＣ−ＰＰＭＥのヒトリンパ球への結合を余りブロックせず、他の機能はＬ−セレクチンによって媒介された（ローゼン（Rosen）、１９９０年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３：３９７−４０２）。これらの結果は、Ｌ−セレクチンのＥＧＦドメインに関するｍＡｂのブロッキング活性と同じであった（カンサス（Kansas）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８；シーゲルマン（Siegelman）ら、１９８９年、Ｃｅｌｌ，６１：６１１−６２２）。ＥＬ−２４６のＥ−セレクチンに対する効果を検討するため、好中球のＥ−セレクチンを安定に発現するＬ−細胞に結合する能力を試験した。この結合分析では、好中球のトランスフェクタントに対する付着は、明らかにＥ−セレクチン依存性である（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｂｌｏｏｄ，７８，８０５−８１１）。トランスフェクタントをＥＬ−２４６で３０分間処理し、洗浄した後、精製したヒト好中球を添加した。Ｆｃレセプターを、１０％ＲＢＳで２０分間好中球を前処理して飽和した後、分析を行った。図７Ｂに示されるように、ＥＬ−２４６は、好中球のトランスフェクタントへの結合をほぼ完全にブロックしたが（９０％）、Ｅ−セレクチンを認識するもう一つのｍＡｂ（ＥＬ−８１）（イソタイプネガティブコントロール）は結合に関してはほとんど効果はなかった。同様に、Ｅ−セレクチントランスフェクタントを抗−Ｌ−セレクチン特異的ｍＡｂ（ＤＲＥＧ５６）で処理しても、結合に対しては全く効果はなかった（図７）。値はコントロール細胞結合の百分率として記録し、コントロール細胞は分析媒質のみでインキュベーションした。実験を３回繰り返し行い、平均値±ｓｅｍを示す。従って、ＥＬ−２４６はＥ−セレクチン機能の有効なブロッカーである。好中球−Ｅ−セレクチントランスフェクタント結合分析キシモト（Kishimoto）ら、１９００年、Ｂｌｏｏｄ，７８：８０５−８１１に記載された安定にヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡを発現するＬ−細胞（フローサイトメトリーにより陽性と測定された８０％ＥＬＡＭ−１）を、プラスチック製の８ウェルラブ・テク・スライド(Lab Tek slides）（マイルス・サイエンティフィク）上で成長させた。ヒト末梢血から単離した好中球をｃＲＰＭＩ１ｍｌ当たり１×１０⁶個の細胞で再懸濁させ、４００μｌをトランスフェクションしたＬ−細胞培養物のウェルに加えた。好中球を、前記の方法（キシモト（Kishimot o）ら、１９９０年、Ｂｌｏｏｄ，７８：８０５−８１１）により一定回転条件下で１５分間室温で付着させた。インキュベーションの後、それぞれのウェルの媒質を吸引し、スライドチャンバーを除き、スライドをＨＢＳＳ中に１．０％グルタルアルデヒドを含むコプリン・ジャー（coplin jar）に入れた。好中球／Ｌ −細胞の数を計数することによって、付着を測定した。Ｌ−細胞のｍＡｂ処理の効果は、次のようにして測定した。総ての実験において、好中球を１０％ウサギ血清でプレコーティングして、利用可能なＦｃ結合部位をブロックした。Ｅ−セレクチントランスフェクタントをＥＬ−２４６（培養上清または５０μｇ／ｍｌ精製抗体）、ＤＲＥＧ５６またはイソタイプのネガティブコントロールｍＡｂで氷上で２０分間処理し、洗浄した後、付着分析に用いた。末梢リンパ節ＨＥＶ分析凍結切片でのＨＥＶへ結合するリンパ球のイン・ビトロでのアッセイ（スタンパー（Stamper）ら、１９７６年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１４４：８２８）は広汎に記載されている（最近では、ベルグ（Berg）ら、１９８９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１０８：５に総説が記載されている）。マウス末梢リンパ節におけるＨＥＶはヒトリンパ球に良好に結合し、この結合はＬ−セレクチンによって変化することが以前に示されている（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４−２２４８）。精製したヒトリンパ球をＥＬ−２４６、ブロッキング用抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂ（ＤＲＥＧ５６）、または様々なイソタイプコントロールと共にインキュベーションし、末梢リンパ節ＨＥＶへの付着に対する効果を測定した。細胞結合を、最初にその特徴的な自己蛍光または特異的な群形態学（plump morphology）によってそれぞれの分野におけるＨＥＶを同定した後、文献記載の方法によりＨＥＶＩ結合した細胞を計数した（キシモト（Kishimoto）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２４４−２２４８、参考として本明細書に引用）。データーは、個々に記載したＨＥＶ当たりに結合した細胞の数として計算した。それぞれのデーターについは、＞３の切片での１５０ＨＥＶを計数し、４回の独立な実験を表す。数値は、媒質コントロールの百分率として表す。実施例６ＳＣＲドメインに対するＥＬ−２４６エピトープのマッピングＥＬ−２４６エピトープのドメインマッピングＥＬ−２４６によって画定されたエピトープを、文献記載の方法により、Ｌ− セレクチン／Ｐ−セレクチンキメラを用いて局在化した（カンサス（Kansas）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８、参考として本明細書に引用）。天然のＬ−セレクチンを発現する３００．１９マウスｐｒｅ−Ｂ細胞系の安定なトランスフェクタント（アルト（Alt）ら、１９８１年、Ｃｅｌｌ，２７−３８１）であるＬ２ｐであって、Ｌ−セレクチン由来のレクチンドメインおよびＰセレクチン由来のタンパク質の残りを含むもの、またはＬ２Ｐ３Ｌであって、Ｐ−セレクチンのＥＧＦドメインのみがＬ−セレクチンのＥＧＦドメインの代わりに用いられているものを、文献記載の方法によって産生した（カンサス（Kansas）ら、作成中）。それぞれのタイプの５×１０⁶個の細胞を、培養上清または前記ｍＡｂの希釈した腹水を含むＰＢＳ／１％ＦＣＳ１００μｌ中で氷上で１５分間インキュベーションし、洗浄して、ＦＩＴＣと包合したヤギ抗−マウスＩｇ（ＴＡＧＯ、バーリンガム、カリフォルニア）とインキュベーションした。次いで、この細胞を洗浄して、ＥＰＩＣＳプロフィール（EPIC S Profile）（コールター・イムノロジー（Coulter Immunology）、ハイアリー、フロリダ）上でフローサイトメトリーにより分析した。ＥＬ−２４６ｍＡｂのＬ−セレクチン／Ｐ−セレクチンキメラに対する結合のパターンを用いて、ＥＬ−２４６エピトープが存在するＬ−セレクチンのドメインを決定した。コントロールとして、ＬＡＭ１−３（コールター）、ＬＡＭ１− １およびＬＡＭ１−１４ｍＡｂ、であってそれぞれレクチン、Ｌ−セレクチンのＥＧＦおよびＳＣＲドメイン内のエピトープを画定するもの（カンサス（Kansas ）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１４：３５１−３５８；スペルチニ（Spertini）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：９４２）およびＡＣ１．２ｍＡｂ（スー−リン（Hsu-Lin）ら、１９８４年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９：９１２１）であって、Ｐ−セレクチンのＳＣＲドメインにおけるエピトープを同定するもの（ローゼン（Rosen）、１９９０年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３：３９７−４０２）を用いた。ＥＬ−２４６は特異的に天然のＬ−セレクチンを認識したが、Ｌ−セレクチン由来のレクチンドメインのみを含むＬ２Ｐは認識しなかった（図８）。分析は、実施例１に記載の方法により、フローサイトメトリーによって行った。従って、ＥＬ−２４６エピトープはＬ−セレクチンのレクチンドメイン内にはなかった。更に、ＥＬ−２４６は、Ｌ−セレクチンのＥＧＦドメインのみがＰ−セレクチンのＥＧＦドメインで置換されたＬ２Ｐ３Ｌを認識した。従って、ＥＬ−２４６は、Ｌ−セレクチンのＳＣＲドメインを含むセレクチンのみを認識する。これらのデーターは、ＥＬ−２４６エピトープの少なくとも一部がＬ−セレクチンのＳＣＲドメイン内部にあるかまたはこのドメインを必要とすることを示している。これらの結果を支持する追加のデーターは、ＥＬ−２４６はＬ−セレクチンのレクチン活性をブロックせず、またはＬ−セレクチンドメインを認識する４種のｍＡｂｓ（ＤＲＥＧ２００、ＤＲＥＧ５５、ＤＲＥＧ５６およびＬｅｕ−８）の結合を交差ブロックすることである。実施例７Ｌ−セレクチン依存性の白血球移動を抑制する方法Ｌ−セレクチンに依存する白血球の移動を抑制するための本発明の抗体または抗原に結合するフラグメントを使用する方法は、文献に記載されている（ジュティラ（Jutila）ら、１９８９年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８、参考として本明細書に引用）。イン・ビボでの炎症性好中球のホーミングの抑制における抗体を実証するため、２つの方法を用いることができる。第一のものは、ローゼン（Rosen）とゴードン（Gordon）の方法（１９８７年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６６：１６８５）の改良法である。マウスに、腹腔内にチオグリコレートブロス１ｍｌで炎症を誘発する１時間前に各種の抗体または塩溶液のみ５００μｇを静脈内注射した。３時間後にマウスの腹腔をＨＢＳＳ１０ｍｌで洗浄し、各動物について新たに到達した腹膜好中球の数を評価する。末梢血も各動物から採取し、ＲＢＣｓを溶解し、循環する好中球の抗体処理の効果を定量する。各動物の腹膜および末梢血中の好中球の割合を、好中球抗体ＲＢ６−８Ｃ５で染色後ＦＭＦ分析によりおよびライトの染色差（Wright's stain differentials）によって決定する。ＦＭＦ分析は、ジュティラ（Jutila）ら、１９８８年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：１８１９に記載の方法によりＨＡＣＳＳｔａｒ^RまたはＦＡＣＳｃａｎ^R （ベクトン・ディッキンソン（Becton Dickison）、マウンティン・ビュー、カリフォルニア）上で行った。抗体ブロッキングデーターを、媒質コントロールの百分率として表している。第二の方法は、レビゾーン（Lewisohn）らによって用いられた方法である（１９８７年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８：４３１３）骨髄好中球を文献記載の方法によりＦＩＴＣ（シグマ（Sigma））で標識し（ブッチャー（Butcher）ら、ＨａｎｄｂｏｏｋｉｎＥｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５７．１−５７．３）、次に２〜５×１０⁷個の細胞を、３時間前にチオグリコレートブロス１〜２ｍｌを腹腔内に投与したマウスに静脈内注射する。ＦＩＴＣ標識した骨髄好中球は、イン・ビボで炎症の部位に効果的に局存化する（レビンゾーン（Lewinsohn）ら、１９８７年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８：４３１３）。炎症を起こした腹腔内に蓄積した細胞は、ＦＭＦで分析したところ、５０，０００個であった。データーは、ＦＩＴＣで標識したドナー好中球対炎症を起こした腹腔内の未標識宿主好中球の割合として記録される。未標識宿主好中球は、所定の動物における炎症の程度についての基準として働く。通常は、炎症を起こした腹膜に蓄積するＦＩＴＣで標識した好中球の割合は２〜８％の範囲である。ブロッキングの検討には、ＦＩＴＣで標識した好中球に飽和濃度の本発明の抗体を氷上で２０〜３０分間プレコートする。細胞を洗浄し、３時間前にチオグリコレートを投与した動物に注射する。それぞれのマウスの腹腔から単離した５０，０００個の細胞を、ＦＭＦにより分析する。抗体をコーティングした細胞のクリアランスを、各試験動物からの末梢血濃度を検討することによって評価する。各動物の腹膜および血中におけるＦＩＴＣを標識した好中球対未標識の宿主好中球の割合を測定する。抗体処理後のデーターは、媒質コントロールの百分率として表される。抗体ブロッキングの特異性は、腹膜におけるＦＩＴＣで標識した好中球のパーセントを末梢血中のＦＩＴＣで標識した好中球のパーセントで破ることによって各動物についてＳＥＲを計算することによって測定する。（ＳＥＲ＝ＦＩＴＣ好中球／腹膜内宿主好中球／（ＦＩＴＣ好中球／宿主好中球）血液。炎症部位の好中球の局在化が循環からの抗体をコーティングした細胞のクリアランスによってブロックされると、ＳＥＲ値は塩溶液コントロールに近くなる。実施例８肺胞炎および皮膚炎の予防および治療に有用な抗体のスクリーニング法肺胞炎および皮膚塩の予防または治療における本発明の抗体または抗原と結合するフラグメントの有効性を示す方法は、ムリガン（Mulligan）らの文献に記載されている（１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８８：１３９６−１４０６、参考として本明細書に引用）。モノクローナル抗体Ｌ−セレクチンおよびＥ−セレクチンに対する抗体は、実施例１に記載の方法によって生成させる。コントロール（非セレクチン結合性）モノクローナル抗体は、ペプシン消化により誘導されるＦ（ａｂ′）₂フラグメントからなっている。肺および皮膚の血管の損傷の免疫複合体の検討には、本発明の抗体またはコントロールＦ（ａｂ′ ）₂を総量で１３５μｇを３個の等量に分割した投与量でウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および抗−ＢＳＡ（ウシ血清アルブミンに対する抗体の濃度が高いウサギポリクローン性ＩｇＧからなる）の気管内点滴または皮内注射の２．５、３．０および３．５時間後に静脈内投与する。ネガティブコントロール動物は、ＢＳＡを投与していない。免疫複合体による肺胞炎および皮膚脈管炎の動物モデル抗−ＢＳＡ濃度が高いウサギのポリクローン性ＩｇＧを用いて、肺および皮膚の脈管の損傷を誘発させる（ジョンソン（Johnson）およびワード（Ward）、１９８１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６：２３６５）。ＩｇＧはオルガノン・テクニカ（Organon Tekniga）、ウェスト・チェスター、ペンシルバニアから購入した。ラットに投与するのに用いるＩｇＧ抗−ＢＳＡおよびＢＳＡ（シグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemical Co.）、セントルイス、ミズーリー）製剤は、リムルス・アメボサイト・リゼート・アッセイ（Ｅ−ｔｏｘａｔｅ、シグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemical Co.））によって測定したところ、それぞれ内毒素活性は２０ｐｇ／ｍｌおよび１２ｐｇ／ｍｌであった。総ての検討には、３００〜３５０ｇの雄ロング−エバンス（Long-Evans）特異性無菌ラット（チャールズ・リバー・ブリーディング・ラボラトリーズ、インコーポレーテド（Chrles River Breeding Laboratorles，Inc.）、ウィルミングトン、マサチューセッツ）を用いた。鎮静および麻酔には、ケタミン（２５〜５０ｍｇ／１００ｇ体重）およびペントバルビタールナトリウム（５ｍｇ／１００ｇ体重）を腹腔内に投与する。免疫複合体による肺損傷は、１００ｍｇＢＳＡ（１．０ｍｌ塩溶液中）を静脈内投与し、抗−ＢＳＡを３００μｌ中で気管内に点滴することによって誘発させる。下記の気管内投与量の抗−ＢＳＡを用いた。０．７５ｍｇ、１．５０ｍｇ、２．５０ｍｇ、または３．３３ｍｇ。損傷を生じてから４時間後にラットを屠殺し、１０ｍｌの塩溶液を肺動脈に注入して肺循環を洗浄した。肺損傷の尺度としての透過係数は¹²⁵Ｉで標識したアルブミンを実質中への漏れを１．０ｍｌの血液中に残っている量と比較することによって測定する。逆の受動性の皮膚アルツス反応は、０．１０ｍｌの容積中に含まれる抗−ＢＳＡを０．１０〜０．８４ｍｇを皮内注射した後、１０ｍｇＢＳＡを１．０ｍｌ塩溶液に溶解したものを静脈内投与することによって誘発させる。ラットを４時間後に屠殺し、透過係数は血液１．０ｍｌ中に含まれる放射能と比較した全厚みの皮膚生験に含まれる放射能の比率を測定することによって計算した。ネガティブコントロールには、抗−ＢＳＡを注射したが、ＢＳＡＫ静脈内投与は省いた皮内部位を有する動物を含む。肺または皮膚出血を評価するため、赤色血液細胞（ＲＢＣ）を正常な成熟したロング−エバンスラットから得たヘパリン処理した血液から採取する。９ｍｌの血液を１：１，０００（重量／重量）のヘパリンを含む塩溶液４０ｍｌで希釈する。これに１００μＣｉの⁵¹Ｃｒを加えた後、連続振盪により３７℃で１時間インキュベーションする。１，０００ｒｐｍ（４℃）６分間遠心分離した後、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次いで使用する準備をする。動物にＢＳＡおよび抗−ＢＳＡを投与してから半時間後、⁵¹Ｃｒで標識したＲＢＣ（８０，０００ＣＣｉＤを含む４５μｌ）を投与する。屠殺時に、皮膚部位および塩溶液を灌流させた肺の⁵¹Ｃｒ放射能を測定し、血液１．０ｍｌ中に含まれるカウント数と比較した。それぞれの実験の終了時には、各動物からの血液試料を遠心分離し、細胞および血清中の放射能を測定した。免疫複合体により誘発された肺および皮膚の損傷については、上記と同じ損傷および治療プロトコールを用いる。グリコーゲンによって誘発される腹膜浸出物ラットの屠殺４時間前に、０．１％（重量／容量）カキグリコーゲン２５ｍｌを腹腔内に投与すると、好中球濃度の高い浸出物が生じる。本発明のＦ（ａｂ′ ）₂フラグメント１３５μｇを３つの等しい投与量に分けて治療群に静脈内投与し（２．５、３．０および３．５時間後）、腹腔内への好中球の補充についての効果を評価する。組織ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）含量既知数の好中球を投与した肺および皮膚部位のＭＰＯを測定することによって最初に標準的なリファレンス曲線を得る。肺および皮膚部位を、既報のホモゲナイゼーションおよび音波処理によって抽出する（ウォーレン（Warren）ら、１９８９年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８４：１８７３）。上清のＭＰＯ活性を、ｏ−ジアニシジンの存在下でＨ₂Ｏ₂で分解することによって生じる吸光度（４６０ｎｍ）の変化によって測定する。細胞および肺組織の免疫組織学的分析プラスチックスライド上のラット肺動脈内皮細胞（ＲＰＡＥＣ）の単層を、５０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦαで４時間刺激し、ＰＢＳで洗浄し、アセトンで固定する。剌激された細胞および未剌激細胞の単層を含むスライドを、次に本発明の抗体（１．０ｎｇ／ｍｌ）と共に４５分間インキュベーションする。次いで、スライドをＰＢＳで洗浄した後、マウスＩｇＧに対するビオチン／アビジン −ペルオキシダーゼ系を用いて結合したｍＡｂについて染色を行う（ベクタスタイン（Vectastain）、ベクトル・ラボラトリーズ、インコーポレーテド（Vector Laboratories，Inc.）、バリンガム、カリフォルニア）。ヘマトキシリンで逆染色した後、切片をアクア−マウント（aqua-mount）（レーナー・ラボラトリーズ、ピッツバーグ、ペンシルバニア）でコーティングし、ペルオキシダーゼの反応生成物の存在について光学顕微鏡によって検討する。免疫複合体によって誘発される肺の損傷は、前記で定義した通りと同じプロトコールを用いて得た。動物は、０、１、２、３および４時間後に屠殺する。肺を、最適切断温度（ＯＣＴ）化合物（マイルス・ラボラトリーズ、インコーポレーテド（Miles Laboratories ．Inc.）、エルカート、インディアナ）８〜９ｍｌで膨脹させ、凍結切片を正常なラットの肺および免疫複合体の肺胞内付着が行われている肺から得た。ポリ− Ｌ−リシンをコーティング化たスライド上に設置し、アセトンで固定した後、組織切片を本発明の抗体と前記と同様な方法で反応させる。ＴＮＦαで剌激したＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯静脈内皮細胞）が抗体の反応性を除くかどうかを評価するために、同じ染色手続きを用いて、４時間の面積複合体反応から得られた肺を用いて、追加実験を行う。使用の前に、本発明のｍＡｂ製剤（１．０ｎｇ／ｍｌ）を、ＴＮＦα（５０ｎｇ／ｍｌ）で刺激したまたは未剌激のＨＵＶＥＣの単層（５×１０⁶個の細胞）の共に２７℃で１時間インキュベーションした後、抗体を肺切片へ適用する。肺および皮膚の形態学的評価肺を、１０％リン酸緩衡ホルマリンで固定した後、ヘマトキシリンおよびエオシン染色を行い、光学顕微鏡で観察する。皮膚試料も同様に処理する。内皮細胞の好中球によって媒介される細胞毒性好中球によって媒介されるＲＰＡＥＣの細胞毒性を、標準的な⁵¹Ｃｒリリース・アッセイによって測定する（バラニ（Varani）ら、１９８５年、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，５３：６５６）。ＲＰＡＥＣを、２４ウェルの培養皿のウェルに１ｍｌの培養基中にウェル当たり５×１０⁴個の細胞で加える。それぞれのウェルに２μＣｉのＮａ⁵¹ＣｒＯ₄（ニュー・イングランド・ニュークレア（New Engla nd Nuclear）、ボストン、マサチューセッツ）を加えた後、単層を１４時間インキュベーションする。次いで、ＴＮＦαを５０ｎｇ／ｍｌの濃度で加え、単層を更に４時間インキュベーションする。次に、プレートを０．０２％ＢＳＡを含むＨＢＳＳ（ハンクス・バランスド・ソルト・ソリューション（Hank's balanced salt solution））で２回洗浄して、取り込まれなかった放射能を除去する。次いで内皮細胞の単層を、使用のために準備する。抗体を用いるときには、これらを単層に加え、３０分間インキュベーションする。ヒト血中好中球を単離して、０．０２％ＢＳＡを添加したＨＢＳＳに懸濁する。Ａｂと共にインキュベーションした後、好中球を対のウェルに加えて、最終容積１．０ｍｌ中のエフェクター対標的細胞の比率を３０：１とする。好中球を内皮細胞の単層上に３０分間沈澱させた後、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）（５０ｎｇ／ｍｌ）をウェル当たり１．０ｍｌの容積で加える。更に、３７℃で６時間インキュベーションした後、０．９ｍｌの上清を各ウェルから採取し、懸濁液中の細胞を遠心分離によって除去する。上清液（０．５ｍｌ）を吸引し、γ−シンチレーションカウンターで分析を行い、⁵¹Ｃｒ放出を測定する。実施例９喘息の予防および治療法喘息の治療における本発明の抗体または抗原に結合するフラグメントの有効性を示す方法は、米国特許出願連続番号７３８，６３３号明細書およびグンデル（ Gundel）ら、１９９１年，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８８：１４０７−１４１１に記載されている。これらの文献は参考として本明細書に引用したものである。動物動物は、体重が約４〜８ｋｇの野生の成熟した雄性カニクイザル（Macacafasc icularis）である（チャールズ・リバー・ブリーティング・ラボラトリーズ、インコーポレーテド、プライメート・インポーツ（Charles River Breeding Labor atories，Inc.，Primate Imports）、ポート・ワシントン、ニューヨーク）。モノクローナル抗体抗体の保存溶液を塩溶液で希釈した後（最終濃度２ｍｇ／ｍｌ）、直ちに脚部末梢静脈に静脈内投与する。抗体又は抗原と結合するフラグメント治療薬は、抗原の吸入試験の１時間前に投与する。ＥＬＡＭ−１のみに特異的な抗体を、陽性コントロールとして用いることができる。ＥＬＡＭ−１に対する抗体（ＣＬ２）は、ピッカー（Picker）ら、Ｎａｔｕｒｅ，３４９：７９６（１９９１）に記載されているによって生成させた。Ｒｒｓ測定呼吸器系インピーダンス（Ｒｒｓ）は、ウェグナー（Wegner）ら、１９８４年、Ｒｅｓｐｉｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，５５：４７に記載されている方法により、呼吸に不連続な振動数（１１個の等しい対数段階で４〜４０Ｈｚ）のシヌソイド強制振動（sinusoidal forced oscillation）を重ね合わせることによって測定する。全振動数に亙るＲｒｓの真のまたは同相の成分の平均を算出して、Ｒｒｓの単一代表値を得る。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）ＢＡＬは、ファイバー気管支内視鏡（オリンパス・オプティカル（Olympus Op tical）、３Ｃ−１０型、レイク・サクセス、ニューヨーク）を気管竜骨を通過させ、第５〜第７世代の気管支に挿入する。重炭酸塩で緩衡した塩溶液（ｐＨ７．４、２３℃）１５ｍｌを注入し、気管支内視鏡の導管を通って緩やかに吸引する。収集した試料を２，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、生成する細胞ペレットをＣａ⁺⁺およびＭｇ⁺⁺を含まないハンクス・バランスド・ソルト・ソリューションに再懸濁させる。ＢＡＬ処置により軽度の炎症反応を生じることが示されている。従って、肺細胞組成に対するＢＡＬが引き起こすと思われる影響を回避するため、抗原試験の前後でＢＡＬを左右の肺を交替して行う。注入した緩衝液の回収容積は試験を通じて極めて一定しており、この処置は動物には十分耐えられるものである。総白色細胞数をコールターカウンター（コールター・エレクトロニクス（Coulter Electronics）、１０型、ハイアリー、フロリダ）を用いて測定する。抗原吸入試験抗原吸入試験物を、バード（Bird）７Ａレスピレーターおよびマイクロネブライザー（バード・コーポレーション（Bird Corporation）、８１５８型）を用いて、断続的な陽圧呼吸により投与する。それぞれの試験は、１５回／分（最大吸入圧２０ｃｍＨ₂Ｏ）で２分間からなっていた。Ascaris summエスキ（グリーア・ラボラトリーズ、ルノーア、ノース・カロライナ）をリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）でそれぞれの動物に適当な濃度まで希釈する（直後の反応の際にＲｒｓを２００〜５００％増加させるのに要する投与量）。抗原試験は、それぞれの動物について１４日間の間隔を置いた。各動物は試験日の前１８時間絶食させる。組織化学ＢＡＬ細胞をＤｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ染色（フィッシャー・サイエンティフィック（Fisher Scientific）、セントルイス、ミズーリー）で染色した細胞遠心分離調製物を用いて評価する。細胞数の差を２００個の細胞を計数することによって測定し、それぞれの細胞の種類の割合を記録する。組織学抗原試験の前および生験のピンセットおよび気管支内視鏡による最大後期反応中に、肺の生験試料を採取する。肺脈管内皮および気道内皮上のＥ−またはＬ− セレクチンを同定するため免疫組織化学的染色を、ウェグナー（Wegner）ら、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７：４５６に記載の方法で行う。統計分析データーを、分散およびフリードマンの多重範囲試験の２方向分析を用いて統計学的に分析する。試験プロトコールそれぞれの動物を、ケタミン（４ｍｇ／ｋｇ：ケタセット（Ketaset）、ミオダーム・メディカル・サプライ（Myoderm Medical Supply）、モーリスタウン、ペンシルバニア）およびキシラジン（１ｍｇ／ｋｇ、ロンパン（Rompum）、マイルス・ラボラトリーズ、インコーポレーテド（Miles Laboratories，Inc.）、ナパービル、イリノイ）で麻酔し、カフ付き気管内チューブを挿管し、仰臥位にする。ケタミン（４ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）を、必要に応じて補助麻酔として用いる。次に、それぞれの動物にモノクローナル抗体またはビヒクル（塩溶液）を静脈内にポーラス投与する。次に、気道細胞組成を、小児用気管支内視鏡を用いて気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行った後、動物を特別に設計した支持椅子に直立位に座らせる。ベースライン呼吸器系抵抗（Ｒｒｓ）を約１５分管監視した後、抗原試験物を吸入した（静脈内投与から１時間後）。Ｒｒｓを連続的に１時間監視した後、動物を麻酔から回復させ、ケージに戻す。Ｒｒｓを、抗原の吸入から４、６、８および１０時間後に１５分間に亙って監視する。回復期の後の、後期反応をＢＡＬを行うことによって評価する（抗原試験前とは反対の肺を洗浄）。ブラケッティング・コントロー（bracketing control）実験（ビヒクル投与）をそれぞれの動物について行い、各動物がそれ自身のコントロールとなるように試験を設計する。各試験は、１４日間の間隔を置いた。抗原を吸入する１時間前に本発明の抗体または抗原と結合するフラグメントを前投与することにより、総ての動物において総白血球浸潤および浸潤好中球数が著しく減少する。本発明の抗体または抗原と結合するフラグメントを投与すると、後期気管支収縮が著しく減少するが、急性反応に対しては明確な効果はない。実施例１０生物学的試料中のＬ−およびＥ−セレクチンを有する細胞の検出法生物学膜に結合した付着分子は、ヌクレオチド配列に基づいて当業者により遺伝子操作を行うことができる（マーリン（Marlin）ら、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ，３４４：７０−７２、参考として本明細書に引用）。Ｅ−セレクチンに対する完全なヌクレオチド配列（ベビラッカ（Bevilacqua）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４３：１１６０−１１６５、参考として本明細書に引用）およびＬ−セレクチンに対する完全なヌクレオチド配列（ボウエン（Bowen）ら、１９８９年、Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，１０９：４２１−４２７；シーゲルマン（Siegelman ）ら、１９８９年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：５５６２−５５６６；テッダー（Tedder）ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７０：１２３−１３３、参考として本明細書に引用）は、文献に記載されている。コード配列とトランスメンブランおよび細胞質ドメインとを含む配列は、ムリス（Mull is）の米国特許第４，６８３，１９５号明細書に記載の方法によりＰＣＲによって増幅することができる。Ｅ−またはＬ−セレクチンに対する遺伝子を、多数の利用可能な真核または原核発現ベクターの一つにサブクローニングし、適当な宿主細胞系で発現させる。ＥＬＩＳＡ、ウェスターンブロットおよびドット−ブロットなどのイムノアッセイで標準として使用するには、既知量のＬ−セレクチンおよびＥ−セレクチンを有する細胞または細胞溶解物を、１％ＢＳＡを含むダルベッコのリン酸緩衝塩溶液（ＤＰＢＳ）（ＢＳＡ−ＤＰＢＳ）で連続希釈する。モノクローナル抗体調製物マウス抗−Ｌ／Ｅ−セレクチン抗体は、実施例１に前記した方法により調製する。試験試料の調製試験動物からのヒト末梢血をヘパリン処理したバイアル瓶に採取し、フィコール−パック（Ficoll-Paque）（ファルマシア（Pharmacia）、ウプサラ、スェーデン）を用いることによって単離する。次に、３回洗浄したＰＢＭＣを完全培地中に際懸濁して、５％細胞懸濁液とする。細胞懸濁液２ｍｌを２４ウェルの平底プレートの適当な数のウェルに加える。適当な時間に、各ドナーからのウェルを回収する。細胞上清を５，６００×ｇで５分間遠心分離し、粒状物を除去し、ＥＬＩＳＡによる分析用の総ての試料が採取されるまで２０℃で凍結する。上清を解凍し、１０，０００×ｇで５分間遠心分離することによって透明にした後、セントリコン（Centricon）３０装置で、製造業者の指示にしたがって（アミコン（Amicon）、ベバーレイ、マサチューセッツ）８倍に濃縮する。次に、濃縮した試料を、ＥＬＩＳＡによりＥ−またはＬ−セレクチンについて直ちに分析する。Ｌ−セレクチンおよびＥ−セレクチンを有する細胞についてのＥＬＩＳＡ本発明の抗体をＤＰＢＳに溶解したものを、９６ウェルの平底ＥＩＡマイクロタイタープレート（リンブロ（Linbro））に５μｌ／ウェルで室温で１時間加える。ウェルをＤＰＢＳで３回洗浄した後、２％ＢＳＡ−ＤＰＢＳ２００μｌで３７℃で１時間ブロックする。ウェルを空にして、Ｌ−セレクチンおよびＥ−セレクチン標準（２倍連続希釈物８〜１０２４ｎｇ／ｍｌ）およびＬ−および／またはＥ−セレクチンを有する細胞を含んでいると思われる試験試料（１％ＢＳＡ− ＤＰＢＳで希釈したもの）を３回、３７℃で１時間加える。ウェルをＤＰＢＳで３回洗浄する。ビオチニル化した抗−Ｌ／Ｅ−セレクチン（ＥＬ−２４６）ｍＡｂを２μ／ｍｌ（５０μβ／ウェル）で３７℃で３０分間加える。ウェルをＤＰＢＳで３回洗浄する。西洋カラシペルオキシダーゼストレプトアビジン（１：４０００）（ジムド（Zymed）、サンフランシスコ、カリフォルニア）を、５０μ ｌ／ウエルの量で、３７℃で３０分間加える。ウェルをＤＰＢＳで３回洗浄し、ＡＢＴＳ基質緩衝液で１回洗浄する。ＡＢＴＳ基質緩衝液を加え（５０μｌ／ウェル）、ダイナテク・マイクロタイターＥＬＩＳＡリーダー（Dynatech Microti ter ELISA reader）（４１０ｎｍ）上でプレートを読み、最大ＯＤを得る。平均ＯＤの読みを計算する。実施例１１Ｌ−およびＥ−セレクチンを有する細胞の免疫アフィニティーによる精製本発明は、遺伝病であるＣＤ１１／ＣＤ１８欠損の治療に当業界で知られている遺伝子治療技術と組合せて用いることができる。機能的なＣＤ１１およびＣＤ１８遺伝子を欠く白血球は、細胞表面レセプター、Ｌ−セレクチンおよび／またはＥ−セレクチンを有する。本発明のｍＡｂｓを、アフィニティーカラムとして用いられる固形指示体に結合させる。アフィニティーカラムは、患者の血液などの供給源からＬ−セレクチンおよび／またはＥ−セレクチンを有する細胞を特異的に結合するので、これらの細胞を他の細胞から精製しまたは分離することができる。これらの細胞を一旦精製したならば、ＣＤ１１およびＣＤ１８遺伝子を有するＤＮＡベクターと共に遺伝子治療を行った後、患者に再潅流されるので、機能的な付着経路が確立されている。実施例１２好中球のみをＥＬ−２４６で処理するとＥ−セレクチンｃＤＮＡトランスフェクタントを結合する能力がブロックされる。Ｅ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションした線維芽細胞をＥＬ−２４６で前処理すると、好中球と結合するトランスフェクタントの能力がブロックされる。内皮細胞Ｅ−セレクチンおよび好中球Ｌ−セレクチンはレセプター−カウンター−レセプター対として働く能力を有するので（キシモトティーケイ（Kish imoto．TK）ら、１９９０年、Ｂｌｏｏｄ，７８：８０５；ピッカー、エルジェイ（Picker,LJ）、１９９０年、Ｃｅｌｌ，６６：９２１）、好中球のＥ−セレクチンへの結合の抑制を好中球を処理することだけで検討した。末梢血好中球を飽和濃度のＥ−２４６と共に氷上で２０分間インキュベーションし、洗浄した後、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたマウスＬ−細胞の培養物に加えた。結合に対するＥＬ−２４６の効果を評価し、それぞれ抗−Ｌ−セレクチンｍＡｓ（ＤＲＥＧ５６）および２種類のイソタイプのネガティブコントロールｍＡｂａ、抗−Ｔ２００およびＥＬ−８１であって白血球およびＥ−セレクチンを染色するものと比較した。好中球を、５０マイクロモルｇ／ｍｌの濃度の所定の抗体で氷上で２０分間処理し、洗浄した後、Ｅ−セレクチントランスフェクタクトに加えた。結合分析は、文献記載の方法に従って行った。抗体処理の効果を定量し、コントロール（未処理）細胞の結合の百分率として記録した。数値は２つの別個な実験からの８つの値の平均値±標準偏差である。図９に示されるように、ＥＬ−２４６は付着を６４％までブロックし、ＤＲＥＧ５６は５３％まで抑制し、ネガティブコントロールｍＡｂはほとんど効果がなかった。これらの結果は、好中球のＥＬ−２４６による処理により、Ｅ−セレクチントランスフェクタントに結合する能力をブロックすることを示している。試験を行って、ＦＩＴＣで標識した抗−マウスの第二段階抗体を細胞へ加えることによって結合分析を行い、フローサイトメトリー分析を行った後、ＥＬ−２４６がＥ−セレクチントランスフェクタントの表面に見られるかどうかを測定した。実験に用いた好中球はＥＬ−２４６で前処理し、洗浄した後、ＦＩＴＣを標識した抗−マウスＩｇの第二段階の抗体を添加した後フローサイトメトリーを行う前後の細胞表面におけるＥＬ−２４６の存在について分析を行った。Ｅ−セレクチントランスフェクタントも同様に分析した。分析の前後における好中球の表面上のＥＬ−２４６の濃度を比較した。好中球を分析の開始時にＥＬ−２４６で飽和したが（図１０Ａ）、Ｅ−セレクチントランスフェクタントと同時インキュベーションを１５分間行ったところ、その細胞表面上には抗体は全く検出されなかった（図１０Ｂ）。Ｌ−セレクチンは白血球の表面から留出することができるので（キシモト、ティー・ケイ（Kishimoto．T.K.）ら、１９８９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４５：１２３８）、試験は、結合分析中の好中球上のＥＬ−２４６抗体の損失は分子の流出によるものであるかどうかを測定した。分析後に細胞表面上にＥＬ−２４６を持たなくなっている好中球（１０Ｂ）は、ＥＬ−２４６によって結合されているものとは別のエピトーブを認識する第二の抗−Ｌ−セレクチンｍＡｂ（ＤＲＥＧ５６）で明るく染色された（図１０Ｃ）。このことは、ＥＬ −２４６で処理した好中球上ではＬ−セレクチンの流出は起きなかったことを示している。分析後に好中球上にＥＬ−２４６がなくなっていることと対照的に、高濃度のＥＬ−２４６がＥ−セレクチントランスフェクタントの表面上に検出された（図１０Ｅ）。ＥＬ−２４６で処理した好中球を受け取らないトランスフェクタントは、第二段階では反応しなかったのである（図１０Ｄ）。ＥＬ−２４６で処理した好中球に暴露した後、第二段階の抗体に暴露したトランスフェクタントの蛍光強度のレベル（図１０Ｅ）は、ＥＬ−２４６を用いてＥ−セレクチンを通常の方法で間接的に染色することによって得られる蛍光のレベル（図１０Ｆ）と同じであるかまたは若干高かった。これらの結果は、好中球をＥＬ−２４６で前処理すると、ｍＡｂは明らかに好中球からＬ−細胞トランスフェクタント上のＥ−セレクチンへと移行する能力を有することを示している。内皮細胞Ｅ−セレクチンでも同様な結果が得られた。例えば、ヒト臍帯内皮細胞を１０単位／ｍｌのＴＮＦで４時間処理したところ、Ｅ−セレクチンの発現が誘発された。ＥＬ−２４６で前処理した好中球は、前記と同様にして内皮細胞に加えた。１５分以内に、総ての好中球からＥＬ−２４６が見られなくなり、これは次にサイトカインで活性化した内皮細胞の表面に見出だされた。この好中球のＥ−セレクチンへの結合のＥＬ−２４６によるブロッキングはＬ−セレクチンではなくＥ−セレクチンのレベルで行われたものと思われる。更に、これらの結果は、好中球はＥＬ−２４６をＥ−セレクチン発現の部位へ効率的に運ぶことができることを示唆している。実施例１３ＥＬ−２４６は活性化されたヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）上での好中球の「ローリング」をブッロクするセレクチンは、炎症の部位への好中球および他の白血球を補充することに関与している。好中球の炎症部位への補充は、３段階に分けることができる。（１）細胞の後毛細管小静脈の活性化された内皮への最初の付着および「ローリング」、（２）好中球の活性化および内皮への強固な付着、および（３）細胞の周囲の組織への溢出（ポールソン、ジェイ・シー（Paulson，J.C.）、１９９２年、「付着、炎症性疾患でのその役割（Adhesion Its Role In Inflammatory Disease ）、第２章、ジェイ・エム・ハーラン（J.M．Harlan）およびディー・ワイ・リュー（D.Y．Liu）監修、ダブリュ・エイチ・フリーマン・アンド・カンパニー（ W.H．Freeman and Company）、ニューヨーク、ニューヨーク、ｐｐ１９−４２）。セレクチンは、活性化した内皮上での好中球の最初の付着または「ローリング」に関与している。抗−付着治療により、この損傷が予防されまたは抑制される。血管壁を通って管外の脈管組織への白血球の輸送は、微生物や異種抗原から宿主を防御し、組織の損傷を修復する上で必要である。しかしながら、ある種の環境下では、白血球−内皮相互作用により、宿主に有害な結果が生じることがある。付着および内皮横断移行（transendothclial migration）の経過中に、白血球が内皮を直接損傷させる生成物を放出し、内皮機能不全および組織の損傷を引き起こすことがある。（ハーラン、ジェイ・エム（Harlan．J.M.）ら、１９９２年、「付着、炎症性疾患でのその役割（Adhesion Its Role In Inflammatory Dise ase）、第６章、同上、ｐｐ．１１７−１５０）。付着防止治療は、この損傷を防止しまたは抑制する。後毛細管小静脈中の血流のイン・ビボでの剪断力および好中球のローリングを模したイン・ビトロでのフローセル系を用いて、活性化した内皮細胞層上での好中球のローリングを抑制するＥＬ−２４６の能力を測定した。新たに単離したヒト臍帯内皮細胞であって、第ＶＩＩＩ因子およびＬＤＬ−レセプター陽性であるものを、滅菌したガラス製の１．３６ｍｍ毛細管（ドラモンド・サイエンティフィック（Drummond Scientific）、ブルーモール、ペンシルバニア）の内部表面で成長させて合一させた。分析の４時間前に、内皮細胞を、最大のＥ−セレクチンを発現する１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡまたは１ｕｇＩＬ−１（ＩＬ−１ベーター、イムネックス（Immunex）、シアトル、ワシントン）で処理した。チューブを毛細管の両端に取り付け、可変蠕動ポンプを用いて流体および細胞が再循環できるようにした。毛細管を、ビデオ顕微鏡用に改良した倒立顕微鏡の採物台の上に固定した。精製したヒト好中球を、ＤＭＥＮに２％ＦＢＳを加えたものの中で１×１０⁷個の細胞／ｍｌの濃度で系の投与した。活性化されていない内皮細胞では起きない再現性のあるローリング相互作用が、１０．１ｍｍ／秒の流速で検出された。ローリング相互作用を５分間起こさせておきながらビデオテープに収録し、次にＥＬ−２４６またはイソタイプのネガティブコントロール抗体５０μｇ／ｍｌを、または両者を順次系に投与した。次に、白血球内皮細胞相互作用を１０分間までビデオテープに収録した。ｍＡｂの投与前後の１０〜３０秒の間隔で活性化した内皮細胞上でローリングする好中球の数をビデオテープ録音のそれぞれのフレームを分析することによって測定した。データーを視野対時間（秒）内のローリングする細胞の数として記録した。ＥＬ−２４６を試験して、これが好中球のローリングを支持する活性化された内皮細胞の能力を抑制することができるかどうかを測定した。ＨＵＶＥＣｓを滅菌したガラス製毛細管の内部表面上で成長させ、前記と同様の方法でＥ−セレクチンを発現するように誘導した（ＥＬ−２４６染色によって確認）。毛細管を剪断条件下での白血球のリガンドとの相互作用を測定する系に設定した。イン・ビトロでのループアッセイを用いて、前記と同様に活性化された内皮細胞上でローリングする好中球の能力についてのＥＬ−２４６の抗かを分析した。ローリング相互作用を確認した後、ＥＬ−２４６を系に投与した。顕微鏡視野でのローリングする好中球の数を、相互作用のビデオテープ記録から個々のフレームを解析することによって経時的に定量した。制御された剪断条件下では、活性化されたＨＵＶＥＣｓはヒトおよびマウスの好中球のローリングの支持では極めて有効であった（データーは示していない）。ＥＬ−２４６の効果を試験するため、単離したヒト好中球間のローリング相互作用を確認した後、ＥＬ−２４６（最終濃度、５０μｇ／ｍｌ）を閉じたループ系に投与し、好中球のローリングに対する効果をビデオ顕微鏡で１０分間記録した。好中球細胞上でローリングする好中球の数を、ビデオテープの個々のフレームを解析することによってＥＬ−２４６の投与の前後で測定した。図１１Ａは、活性化された内皮細胞上でローリングする細胞の数を時間に対してプロットしたものを示している。ＥＬ−２４６の投与後９０秒以内に、７５％を上回るローリング相互作用がブロックされ、４分後までにブロッキングは１００％となった。媒質のみを投与したチューブでは、好中球のローリングに対する抑制効果は認められなかった。更に、ＣＤ４４およびＰ−セレクチンに対する抗体は、このアッセイでは抑制効果を示さなかった（データーは示していない）。第二のタイプの実験を行い、最終的にＥＬ−２４６を投与した同じチューブ内での好中球ローリングに対するｍＡｂの非特異的効果を制御した。前記のようにしてローリング相互作用を確認した後、イソタイプのネガティブコントロールｍＡｂ（１２．２、これは好中球または内皮を認識しない）を系に投与し（５０μ ｇ／ｍｌ）、その効果を１５０秒間監視した。図１１Ｂに示されるように、１２．２はローリング相互作用を変更しなかった。１８０秒後に、ＥＬ−２４６を系に投与したところ、これはローリングを完全にブロックした（図１１Ｂ）。幾つかのチューブでは、ネガティブコントロールｍＡｂの効果の欠如が２０分間に渡って見られた（データーは示さなかった）。これらの実験の結果は、ＥＬ−２４６モノクローナル抗体は活性化された内皮上での好中球のローリングを抑制するその能力が独特のものであり、これをイン・ビボで好中球のローリングを抑制するのに用いて、白血球の移行と炎症を防止または抑制することを支持している。実施例１４ＥＬ−２４６はＥ−セレクチンｃＤＮＡトランスフェクタントが末梢リンパ節ＨＥＶに結合する能力をブロックする。末梢リンパ節ＨＥＶ結合分析凍結切片でのＨＥＶｓおよびＥ−セレクチンｃＤＮＡまたはベクターｃＤＮＡでトランスフェクションしたマウスプレーＢＬ１／２細胞へのリンパ球の結合のイン・ビトロでの分析は、実施例５で用いたものと同じであった。機能的なヒトＥ−セレクチンを発現するマウスＬ１／２細胞およびトランスフェクションされていないコントロール親細胞系を１×１０７個の細胞／ｍｌでｃＲＰＭＩに再懸濁し、１００μｌをマウス末梢リンパ節の１０μｍ切片に加え、ＨＥＶ結合を評価した。細胞結合は、実施例５に記載したのと同様な方法で、最初にその特徴的な自己蛍光または特異的な群形態学（plump morphology）によってそれぞれの分野におけるＨＥＶを同定した後、ＨＥＶに結合した細胞を計数した。分析の後、切片を結合性細胞を暗青色に優先的に標識するチオニンで染色した。データーは、個々に記録したＨＥＶ当たりに結合した細胞の数として計算した。トランスフェクタントに対する抗体処理の効果を、媒質のみと比較した。ベルグ、イー・エル（Berg,E.L.）、ロビンソン、エム（Robinson,M.）らは、Ｌ−およびＥ−セレクチンの間には結合特異性が重複していることを示した（ベルグ、イー・エル（Berg,E.L.）ら、１９９２年、Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１８４：１０４８）。これらの分子は同じ炭水化物と結合し、また興味深いことには、Ｅ−セレクチントランスフェクタントは末梢リンパ節ＨＥＶに強く付着する（ベルグ（Berg）ら、同上）。分子相互作用は、最初のうちは、Ｌ−セレクチンに対して独特なものであると考えられていたものである（ブッチャー、イー・シー（Butcher,E.C.）、１９９１年、Ｃｅｌｌ．６７：１０３３）。ＥＬ−２４６を試験して、これがＥ−セレクチントランスフェクタントとＰＬＮＨＥＶとの相互作用をブロックするかどうかを測定した。図１２の顕微鏡写真に示されているように、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたマウスＬ１／２リンパ腫細胞系は、マウスＰＬＮＨＥＶへ強く結合した。このトランスフェクタントをＥＬ−２４６で処理したところ、この相互作用は完全にブロックされた（図１２）。この実験は４回繰り返したが、それぞれの実験でのＥＬ−２４６のブロッキングは１００％であった。実施例１５ＥＬ−２４６はイン・ビボでの末梢リンパ節へのリンパ球のホーミング（homing ）をブロックする。異種移植でのリンパ球のイン・ビボでのホーミングアッセイウシリンパ球を末梢血から単離し、洗浄して、ＨＢ１０１（ＮＥＮ）に１×１０⁷個の細胞数で懸濁し、文献に記載の方法でＦＩＴＣで標識した（ジュティラ、エム・エイ（Jutila.M.A.）ら、１９８９年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：３３１８；ジュティラ、エム・エイ（Jutila.M.A.）ら、１９９０年、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３２：２０１、参考として本明細書に引用）。これらの処置により、総てのリンパ球は１００％の効率で均質に標識され、モード蛍光値は１００〜５００であった。ＦＩＴＣ標識したリンパ球をＨＢＳＳで洗浄し、１×１０⁸個の細胞／ｍｌで再懸濁し、この細胞調製物を６〜１２週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの外側尾静脈に投与した。４時間後に、動物を屠殺し、パイアー班（ＰＰ）、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、末梢リンパ節（ＰＬＮ）、脾臓、および末梢血を採取した。それぞれの組織から単細胞調製物を作成した。末梢血中のＲＢＣｓを低張リーシスによって溶解した後、フローサイトメトリー分析を行い、前記の方法で形質転換したリンパ球がマウスのリンパ様組織に入る能力を定量した（ジュティラ、エム・エイ（Jutila.M.A.）、１９９０年、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３２：２０１）。それぞれの組織について、形成転換したリンパ球対宿主リンパ球の百分率を測定した。抗体のリンパ球のホーミングに対する効果を、媒質コントロールと比較した。このアッセイでの追加のコントロールは、（１）抗体で処理した細胞のクリアランスが起きないことを示すため血中濃度を測定すること、および（２）ＥＬ−２４６の組織に特異的な効果であった。Ｌ−セレクチンは、優先的に末梢リンパ節を通るリンパ球のホーミングを媒介する。最適の結果を得るには、ドナー動物は健康であり且つ生後１か月未満（最大比率の循環リンパ球上でＬ−セレクチンが最高水準に発現される年齢）でなければならない。更に、細胞の分離および標識技術には２時間以上かけることはできず、そうしなければ細胞の成長能力が低下してしまうからであった。コントロール動物で異種移植でのリンパ球のホーミング（例えば、宿主の末梢リンパ節のリンパ球の少なくとも０．２％）が起きなければ、アッセイは分析には含まれなかった。異種移植のホーミングモデルを用いて、ＥＬ−２４６がイン・ビボでリンパ球が末梢リンパ節へホーミングするのをブロッキングするのに有効であるかどうかを試験した（別のセレクチンによって媒介される機能）。短期ホーミングアッセイでは、異種移植でのリンパ球は適当な特異性でマウスのリンパ様組織へホーミングする（バルガッツェ、アール（Bargatze,R.）および（ジュティラ、エム・エイ（Jutila.M.A.）、未公表知見）。これは、ホーミングに要する主要な付着経路は哺乳類では高度に保存されていることから、驚くべきことではない（ジュティラ、エム・エイ（Jutila.M.A.）、１９９２年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：１５６５：スペルチニ、オー（Spertini,O.）ら、１９９１年Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：９４２；ウー、エヌ・ダブリュ（Wu,N.W.）、１９８８年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１０７：１８４５；ウォルチェック、ビー（Walc heck,B.）ら、１９９２年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：４６９）。このアッセイは４時間以内に完了するので、異種移植反応に関する合併症はほとんど見られない。この方法は、多数の細胞が必要であるため相同のホーミング実験が困難な大型動物からのリンパ球のホーミング能力を測定するための強力な系を提供するものである。マウスでのウシリンパ球のホーミングを検討したが、これは（１）ＥＬ−２４６はウシＬ−セレクチンを認識し、（２）多数の細胞を容易に得ることができる、（３）健康な若い動物（１か月）であって、実質的に総ての循環リンパ球がＬ−セレクチン陽性である（動物が成熟すると、Ｌ−セレクチン陽性のリンパ球の割合は減少する）動物を容易に用いることができるからである。ＭＥＬ−２４６または媒質のみで処理したＦＩＴＣを標識したウシリンパ球を同一のマウスに投与し、４時間ホーミングさせた。インキュベーションの後、動物を屠殺して、血液および各種のリンパ様器官を回収した。未標識の宿主細胞と比較したＴＩＴＣで標識した細胞の割合をそれぞれの組織について測定し、各種の処理の間で比較した。表２は、７種類の異なる実験からの組合せたデーターを示している（３回分析を行ったパイアー班を除く）。表２ウシリンパ球をＥＬ−２４６で前処理すると、マウスの末梢リンパ節へのそれらのホーミングの能力がブロックされる組織宿主細胞の割合^a ブロッキング率^b コントロールＥＬ−２４６ＰＬＮ 0.4 ±0.14 0.14±0.05（P，0.10） 65％(n=7) ＭＬＮ 0.48±0.22 0.24±0.08 50％(n=7) ＰＰ 0.45±0.24 0.34±0.08 25％(n=3) 脾臓 1.54±0.63 1.80±0.50 15％(n=7) 血液 0.66±0.32 1.10±0.55 減少なし(n=7)^a 数値は、各組織からの分析した５０，０００個の細胞中のＦＩＴＣで標識した細胞の割合を表しており、表示した実験の回数から平均±ＳＥＭである。^b 下記の様にして算出したＥＬ−２４６によるブロッキング率：１００（１００ ×ＥＬ−２４６処理の後の組織中の細胞の百分率／コントロールの組織中の細胞の百分率）。コントロールは、媒質のみで処理した後、マウスに投与した細胞であった。末梢リンパ節に見られるＦＩＴＣで標識したコントロールリンパ球の百分率は、０．２％〜１．６％であった。予想されたように、実験毎にホーミングの水準には変動性（高ＳＥＭによって示される）が見られ、これは細胞調製物、動物、および／または他の要因における変動性によるものと思われた。この変動にも拘らず、コントロールおよびＥＬ−２４６末梢リンパ節からプールされたデーターは著しく異なっていた（６５％抑制、Ｐ値０．１０）。それぞれの実験内で抑制率を計算して、平均すれば、変動はずっと小さくなった（６４％±１０ＳＥＭ、Ｐ値＜０．０１で有意）。他の試験した組織の総てにおいてもブロッキングが見られたが、腸間膜リンパ節で若干有意なだけであった（Ｐ値０．３０）。血液レベルは２種類の処理群では同じであったので、ＥＬ−２４６処理の後のホーミングの減少は循環からの処理された細胞のクリアランスが増加したことによるものではなかった（表２）。ネガティブコントロール抗体（ＤＲＥＧ５５）の効果を検討した。この抗体は同じイソタイプであり、ＥＬ２４６と同じ方法で調製したが、ウシリンパ球を認識しなかった。イン・ビボの異種移植でのリンパ球のホーミングアッセイは、表２に記載したように行い、ＥＬ−２４６およびネガティブコントロール抗体（ＤＲＥＧ５５：ＥＬ−２４６と同じイソタイプであるが、ウシリンパ球を認識しない）の効果をフローサイトメトリーによって評価した。図１３に示された輪郭プロットは、この実験の分析値を表しており、ＥＬ−２４６、ＤＲＥＧ５５または媒質のみ（コントロール）で処理した後脾臓およびＰＬＮへホーミングしたＦＥＴＣで標識したウシリンパ球の割合を表している。それぞれの時点で５０，０００個の細胞を分析し、輪郭レベルの閾値はそれぞれのプロットで同じであった。四分儀は、バックグラウンド蛍光の上限に基づいていた。図１３は、媒質のみ、ＤＲＥＧ５５、およびＥＬ−２４６で処理しＦＩＴＣで標識した細胞を投与した動物から集めたデーターの代表的なサイトメトリーによる輪郭プロットを表している。また、ＥＬ−２４６は末梢リンパ節へのホーミングをブロックし、脾臓での蓄積が若干減少した。ＤＲＥＧ５５はＰＬＮでの細胞の蓄積には効果がなかったが、脾臓への蓄積にはＥＬ−２４６と同程度まで影響した。重要なことは、試験動物での循環するＥＬ−２４６で処理した細胞対ＤＲＥＧ５５で処理した細胞のレベルは２倍であるにも拘らず、ＥＬ−２４６はＤＲＥＧ５５の効果と比較してＰＬＮへのホーミングを７０％までブロックしたことである。これらの結果は、ＥＬ−２４６がこのイン・ビボモデルではＬ−セレクチンの有効なインヒビターであることを示している。実施例１６虚血／再潅流の処理ＥＬ−２４６はイン・ビボでの虚血／再潅流による損傷を改善または抑制する。体重が約２４〜３０ｋｇのヒツジを用いて実験を行った。許容される肺虚血／再潅流モデルは、カペランスキイ、ディー・ピー（Kapelanski,D.P.）ら、１９９３年、Ｊ．ＨｅａｒｔＬｕｎｇＴｒａｎｓｐｌａｎｔ．，１２：２９４− ３０６に記載の方法に従って作成し、この文献は参考として本明細書に引用するものである。簡単に説明すれば、ヒツジをこのペンタルナトリウムで麻酔し、フェンタニルシトレートを連続投与することによって維持した。完全な麻痺は、ペンクロニウムブロミドの連続投与により維持された。容量を調節した通気（換気容量、６００ｍｌ；吸入酸素の分画、０．５３；吸気：呼気の比率、１：１；正の末端呼気圧、５．０ｃｍＨ₂Ｏ）（６０８通気装置；ハーバード・アパラタス・シンコーポレーテド（Harvard Apparatus Inc.）、エス・ナティック、マサチューセッツ；空気−酸素ミキサー；ゼクリスト・インダストリーズ・インコーポレーテド（Sechrist Industries Inc.）、アナハイム、カリフォルニア；正の末端呼気圧弁；ベーリンガー・ラボラトリーズ、インコーポレーテド（Boehringer Laboratories,Inc.）、ノリスタウン、ペンシルバニア）は８ｍｍのカフ付き気管内チューブを通って送った。ドナーの通気装置速度（１０〜１５／分）を調節して、動脈二酸化炭素圧（ＰａＣＯ₂）を約３０ｍｍＨｇとした。これらの通気装置の設定条件を、実験の終わりまで維持した。血中およびガス中の酸素および二酸化炭素圧を、較正したマイクロ−クラーク・アンド・セベリングハウス電極（micro-Clark and Severinghaus electrodes ）（ノバ・バイオメディカル・コーポレーション（NOVA Biomedical Corporatio n））を用いて３７℃で測定した。血液ｐＨは、較正したサンズ（Sanz）電極（ノバ・バイオメディカル・コーポレーション（NOVA Biomedical Corporation））を用いて３７℃で測定した。血中ガス圧およびｐＨは体温、圧、飽和にまでトーマス、エル・ジェイ（Thomas,L.J.）、１９７２年のアルゴリズムを用いて補正した（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３３：１５４−８）。酸素消費（ＶＯ₂）は、動脈および混合静脈酸素含量の差および心拍出量から計算した。二酸化炭素放出（ＶＣＯ₂）は、二酸化炭素が吸気には含まれていないものと仮定して混合呼気および呼息した微生換気における二酸化炭素圧から計算した。ＶＯ₂ およびＶＣＯ₂は体重によって補正し、ＳＴＰＤに変換した。連続換気；潅流（ＶＡ／Ｑ）分布は、ワグナー、ピーディー（Wagner,PD）ら、１９７４年（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３６：５８８−９９）およびワグナー、ピーディー（Wagner,PD）ら、１９７４年（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３６：６００−５）に記載の複合不活性ガス放出法を用いて計算した。不活性ガスは、３７℃で窒素で平衡にすることによって血液から抽出した。気相における不活性ガス濃度は、メガボルク（megaborc）カラム（ＤＢ１、ジェイ・アンド・ダブリュ・サイエンティフィック（J & W Seientific）、フォルソム、カリフォルニア；ポラ・プロット・ユー（Pora Plot U）、クロムパック（Chrompack）、ミドルバーグ、オランダ）および炎イオン化および電子捕獲検出器を供えた装置（ヒューレット−パッカード・カンパニー、メディカル・プロダクツ・グループ（Hewlett-Packard Co.，Modical Produets Group）、アンドオーバー、マサチューセッツ）を用いてガスクロマトグラフィによって測定した。３時間の左肺虚血は、１９匹の動物で左主肺動脈を閉塞することによって開始した。ヒツジＬ−およびＥ−セレクチンを認識するＥＬ−２４６およびヒトＬ− セレクチンのレクチンドメインを認識するＤＲＥＧ５６をそれぞれ８匹および３匹の動物に左肺を再潅流する１０分前に投与した。それぞれの動物に、１ｍｇ抗体／ｋｇ体重の投与量の０．９％塩溶液を静脈内にボーラス投与した。８匹の動物には、抗体投与を行わなかった。総ての被験動物について、生理学的パラメーターを、再潅流の開始後６時間まで様々な間隔で記録した。８匹の未処理動物の内の５匹は、図１４に示すように、６時間以内に死亡した（死亡率６２．５％）。未処理動物（虚血コントロール）は総て、再潅流の開始後３０分以内に肺機能の喪失を示し、肺機能は再潅流の進行と共に低下した。肺機能の喪失は、動脈の二酸化炭素圧（Ｐ_aＣＯ₂）の増加を伴う動脈酸素圧（Ｐ_a Ｏ₂）の低下によって示された。３匹のＤＲＥＧ５６を投与した動物の内２匹は、図１４に示すように６時間以内に死亡した（死亡率６６．７％）。ＤＲＥＧ５６を投与した動物は総て、実験において肺機能の喪失を示した。これらの結果は、未処理コントロールと統計的には差がなかった。従って、ヒトおよびウシのＬ−セレクチンのレクチンドメインを認識するがヒツジのＬ−セレクチンを認識しないＤＲＥＧ５６は、ヒツジを虚血／再潅流による損傷から保護することができなかった。ＥＬ−２４６を投与した動物は８匹総てが、実験の完了まで生き残った（死亡率０）（図１４）。ＥＬ−２４６を投与した動物は総て再潅流の開始後に直ちに肺機能を喪失した（３０分以内）。しかしながら、２時間以内に、総てのＥＬ− ２４６を投与した動物の肺機能は著しく改善され、正常な動物の血中にみられるＰ_aＯ₂およびＰ_aＣＯ₂のレベルとなった。従って、ＥＬ−２４６は、これを投与した動物が１００％生き残り、肺機能も改善されたので、イン・ビボでの有効な治療薬である。実施例１７処理動物の血清中の抗体の飽和濃度の測定処理を行った動物から得た血清（実施例１５参照）を、ＥＬ−２４６又はＤＲＥＧ５６を投与した後３０分間、抗体の飽和濃度について試験した。フローサイトメトリーによるＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンｃＤＮＡでトランスフェクションしたマウスＬ１／２細胞の染色を、これらの分析に用いた。血清試料の連続２倍希釈を用いて、トランスフェクタントを染色した後、ＦＩＴＣ−第二段階で染色し、蛍光を飽和濃度の精製したＥＬ−２４６またはＤＲＥＧ５６抗体によって生じる蛍光と比較した。トランスフェクタントの最大染色は、１：８（ＨＬ−２４６およびＤＲＥＧ５６）に希釈した総ての血清試料で検出され、抗体が動物中で飽和濃度に達していることを示していた。実施例１８循環しているＥＬ−２４６の半減期８匹の処理を行った動物の血清中のＥＬ−２４６のタイターを６時間の実験中測定した（実施例１５）。ＥＬ−２４６の濃度に、有意な低下は認められなかった。図１５は再潅流の開始後３０，９０および３６０分後に８匹の動物から採取した血清試料の様々な希釈物で処理したＬ−セレクチントランスフェクタントの最大染色の百分率を示している。６時間後の力価の変動性は記載していないが（図１５）、ＥＬ−２４６を１ｍｇ／ｋｇ投与した後の飽和濃度は、６時間維持された。従って、ＥＬ−２４６は循環から速やかに除かれなかった。本明細書記載の実施例および態様は単に例示のためのものであり、これを考慮した各種の改良または変更は本出願の精神および範囲および請求の範囲内に包含されるものであることが理解される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 ＡＢＮＡＢＸＡＣＤＣ１２Ｎ 5/10 15/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 9358−4ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ 33/564 Ｚ 8310−2Ｊ 33/577 Ｂ 8310−2Ｊ //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】１．Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチンに見られる共通の抗原決定基を認識することができるモノクローナル抗体またはその抗原と結合するフラグメント。２．ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ１１０４９号を有するハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体ＥＬ−２４６またはその抗原と結合するフラグメント。３．第一のセレクチン分子を有する第一の細胞が第二のセレクチン分子を有する第二の細胞に付着するのを抑制する方法であって、前記セレクチン分子は異なるものであり、第一の細胞が第二の細胞へ結合するのを防止するのに十分な量で抗体が細胞に結合する条件下で、前記細胞を請求の範囲第１項に記載の抗体または抗原と結合するフラグメントと接触させることを含む、方法。４．セレクチンがＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンである、請求の範囲第３項に記載の方法。５．モノクローナル抗体がＡＴＣＣ登録番号ＨＢ１１０４９号を有するハイブリドーマによって分泌されるＥＬ−２４６である、請求の範囲第３項に記載の方法。６．請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体を分泌する細胞系。７．請求の範囲第２項に記載のモノクローナル抗体を分泌するＡＴＣＣ登録番号ＨＢ１１０４９号を有する細胞系。８．Ｅ−セレクチン及びＬ−セレクチンを有する細胞を含むことが考えられる生物学的試料中で該セレクチンを有する細胞を検出する方法であって、 (a) 試料を請求の範囲第１項に記載の抗体または抗原と結合するフラグメントと接触させて、Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチンを有する細胞との免疫複合体を形成させ、 (b) 免疫複合体の存在を検出する、ことを含む、方法。９．請求の範囲第８項に記載の方法を含む、炎症性疾患の診断法。１０．白血球によって媒介される炎症状態にある哺乳類の体の任意の部分における炎症部位で起こる組織の損傷を減少させることを目的とする哺乳類の治療法であって、白血球および内皮細胞の表面で発現したセレクチン分子に特異的に結合するのに十分な量のモノクローナル抗体をイン・ビボで投与して、前記細胞の付着を抑制することを、含む方法。１１．前記炎症部位が身体の脈管内皮細胞界面または細胞下マトリックスにある、請求の範囲第１０項に記載の方法。１２．前記炎症部位が身体の内皮組織を含んでいる、請求の範囲第１０項に記載の方法。１３．前記炎症部位が身体の関節にある、請求の範囲第１０項に記載の方法。１４．前記炎症部位が心筋梗塞により生じたものである、請求の範囲第１０項に記載の方法。１５．モノクローナル抗体を、炎症性条件にまたはその期間中選択された時間に静脈内投与する、請求の範囲第１０項に記載の方法。１６．前記モノクローナル抗体がＬ−セレクチンおよびＥ−セレクチンを発現する細胞に結合するがＰ−セレクチンには結合しない、請求の範囲第１０項に記載の方法。１７．炎症条件にある哺乳類の体の炎症部位で起こる組織の損傷を減少させることを目的とする哺乳類の治療法であって、前記炎症条件の前または中に白血球の表面上で表現するショートコンセンサス領域上で発現したエピトープに特異的に結合するのに十分な量であり且つ前記の損傷に関与する免疫学的反応の機能を反映している白血球の付着依存性の細胞間反応を抑制するモノクローナル抗体を身体に投与することを含む方法。１８．請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体または抗原と結合するフラグメント、および製薬上許容可能なキャリヤーを含んでなる、医薬粗製物。１９．抗体または抗原と結合するフラグメントがＰ−セレクチンに結合しない、請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体または抗原と結合するフラグメント。２０．抗体または抗原と結合するフラグメントが、ヒト、ヒツジ、ヤギ、ウシ、およびブタのＬ−セレクチンに選択的に結合する、請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体または抗原と結合するフラグメント。２１．抗体または抗原と結合するフラグメントが、内皮細胞層上の白血球のローリングを抑制することができる、請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原と結合するフラグメント。２２．抗体または抗原と結合するフラグメントが、末梢組織上への白血球のホーミングを抑制することができる、請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原と結合するフラグメント。２３．抗体または抗原と結合するフラグメントが、ヒト、ヒツジ、ヤギ、ウシ、およびブタの炎症性反応を抑制することができる、請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原と結合するフラグメント。２４．(a) 哺乳類をＥ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、またはＥ−セレクチンとＬ−セレクチンとの組合せからなる免疫原で感作させ、 (b) 感作した哺乳類から得られるリンパ球をミエローマ細胞と融合させ、 (c) Ｌ−セレクチンおよびＥ−セレクチン上で共通の抗原決定基を認識する抗体を分泌するハイブリッド細胞を選択し、 (d) この抗体を単離する、ことを含む工程によって産生されるＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンに見られる共通の抗原決定基を認識することができるモノクローナル抗体。２５．(a) 哺乳類をＥ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、またはＥ−セレクチンとＬ−セレクチンとの組合せからなる免疫原で感作させ、 (b) 感作した哺乳類から得られるリンパ球をミエローマ細胞と融合させ、 (c) Ｌ−セレクチンおよびＥ−セレクチン上で共通の抗原決定基を認識する抗体を分泌するハイブリッド細胞を選択し、 (d) この抗体を単離する、ことを含むＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチン上の共通の抗原決定基に結合することができるモノクローナル抗体の産生法。２６．哺乳類の部位で炎症性反応を防止しまたは抑制する方法であり、モノクローナル抗体または抗原と結合するそのフラグメントの有効量を投与することを含み、前記抗体または抗原と結合するフラグメントはＬ−セレクチンおよびＥ− セレクチンと結合することができ、前記の量が部位の炎症性反応を防止しまたは抑制する上記方法。２７．部位を、心臓、肺、関節、脳、四肢、血管、リンパ節、脾臓、坐傷部位、脊髄、または移植部位からなる群から選択される、請求の範囲第２６項に記載の方法。２８．炎症性反応が心筋梗塞、ショック、発作、臓器移植、坐傷、四肢再移植、凍傷または肺虚血／再潅流による損傷によって引き起こされる、請求の範囲第２６項に記載の方法。２９．モノクローナル抗体が、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ１１０４９号を有する細胞系によって分泌されるＥＬ−２４６と同様な反応性パターンを有する、請求の範囲第２６項に記載の方法。３０．内皮細胞層上の白血球ローリングを防止しまたは抑制する方法であって、白血球または内皮細胞層を所定量の請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体または抗原と結合するフラグメントで処理することを含み、前記の量が白血球のローリングを防止しまたは抑制するのに有効である上記方法。３１．内皮細胞層が、リンパ管、動脈、静脈または後毛細管小静脈中にある、請求の範囲第３０項に記載の方法。３２．哺乳類の末梢組織へのリンパ球のホーミングを防止しまたは抑制する方法であって、請求の範囲第１項に記載のモノクローナル抗体または抗原と結合するフラグメントの有効量を投与することを含み、この量により、リンパ球が血液から末梢組織へホーミングするのを防止しまたは抑制する、上記方法。３３．末梢組織がパイアー班、腸間膜リンパ節、末梢リンパ節または脾臓である、請求の範囲第３２項に記載の方法。