JPH08502519A

JPH08502519A - 生物学的に活性な化合物

Info

Publication number: JPH08502519A
Application number: JP6524851A
Authority: JP
Inventors: アンジエルツチ，フランチエスコ; グランデイ，マリア; スアラート，アントニーノ
Original assignee: フアルミタリア・カルロ・エルバ・エツセ・エルレ・エルレ
Priority date: 1993-05-11
Filing date: 1994-04-08
Publication date: 1996-03-19
Also published as: KR100330635B1; WO1994026311A1; ES2161764T3; HUT70509A; CN1108454A; GR3036978T3; TW268015B; FI946128A0; EP0649312A1; NZ265266A; PT649312E; IL109528A0; RU2145965C1; UA42695C2; DE69427799T2; HU211538A9; US5571785A; ZA943212B; FI112602B; DE69427799D1

Abstract

(57)【要約】本発明は、本質的に一般式１、２および３により表される三つの単位から成る一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリン類を提供する：（ここで、Ｇｌｙは、グリシンを表し；ｎは、０または１であり；ｘは、７０から９８モル％であり；ｙは、１から２９モル％であり；ｚは、１から２９モル％であり；Ｒ₁は、１つ以上のヒドロキシル基によって置換されるＣ₁−Ｃ₆のアルキル基であり；Ｙは、アミノ酸残基またはぺプチドスペーサーであり；［ＮＨ−Ｄ］は、アントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂−Ｄ］の残基であり；Ｚは、ヒドロキシル基または、Ｒ₁が上記で定義した通りの一般式−ＮＨＲ₁の残基である）。また、これらの製造法およびこれらを含有する医薬組成物も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】生物学的に活性な化合物本発明は、可溶性合成ポリマー結合アントラサイクリン類、その製造法および、それらを含有する医薬組成物に関する。ドキソルビシン、４′−エピドキソルビシンおよび４−デメトキシダウノルビシンは、従来技術で公知であり悪性腫瘍の臨床治療に最近用いられているアントラサイクリン類の例である（例えば、F．Arcamone：“Doxorubicin″Medicinal Chemistry monograph，vol 17，Academic Press 1981参照）。抗腫瘍活性を有するドキソルビシンの多数のポリマー誘導体が製造されてきた。これらの中で、特に臨床的展開が有望なものは、親水部分ならびに、ドキソルビシンおよび２−ヒドロキシプロピルアミンが結合したペプチド鎖から成る可溶性ポリマー結合ドキソルビシンである。このポリマー結合ドキソルビシン誘導体は、トリエチルアミンの存在下、ジメチルスルホキシド中で、ドキソルビシン塩酸塩と、ｐ−ニトロフェニルエステルとして活性化されたペプチジル鎖を含有するメタクリルポリマー前駆体とを縮合し、続いて１−アミノ−２−ヒドロキシプロパンで残ったエステル基をアミノリシスすることにより調製する。この物質のラットのリソソーム酵素（トリトソーム）を用いてのインキュベーションは、末端アミノ酸とドキソルビシン間のアミド結合を切断する［J．K opecek等，Biomaterials 10，335（1989）：R．Duncan等，Biochem．Pharmacol ．，391125（1990）：R．Duncan等，J．Controlled Release 10，51（1989）；18 123（1992）および19 331（1992）］。例えば上記のような従来の方法が抱える問題点は、ドキソルビシンポリマー複合物からドキソルビシンを取り出すことが困難であることである。これは、透析、分子濾過およびゲルクロマトグラフィーにおいて１つの構成要素として行動することを示している、結合ドキソルビシンおよび遊離のドキソルビシン間のπ− 複合体の形成が原因である［J．Feijen等，J．Controlled Release 1，301（1 985）］。本発明のポリマー結合アントラサイクリンシステムは、遊離の酸の形態またはアミド誘導体の形態のいずれかで、親水部分、アントラサイクリンのアミノ基のみに結合したペプチジルペンダント鎖およびグリシンの残基を有するメタクリルポリマーに基づく。本システムは、従来技術に対し、アントラサイクリンが、結合しているポリマーから容易に放出されるという有利性を有する。更に、本発明のポリマー結合アントラサイクリン類は、相当する遊離のアントラサイクリンに比し、広い腫瘍活性をもち、一般毒性が低い。よって、本発明は、一般式１、２および３により表される三つの単位から本質的に成る一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリンを提供する：（ここで、Ｇｌｙは、グリシンを表し；ｎは、０または１であり；ｘは、７０から９８モル％であり；ｙは、１から２９モル％であり；ｚは、１から２９モル％であり；Ｒ₁は、１つ以上のヒドロキシル基によって置換されるＣ₁−Ｃ₆のアルキル基であり；Ｙは、アミノ酸残基またはペプチドスペーサーであり；［ＮＨ−Ｄ］は、アミノグリコシドアントラサイクリン［ＮＨ₂−Ｄ］の残基であり；Ｚは、ヒドロキシルまたは上記で定義した通りの一般式−ＮＨＲ₁の残基である）。［ＮＨ−Ｄ］が残基であるアミノグリコシドアントラサイクリンは、本明細書で［ＮＨ₂−Ｄ］として表す（ここで、Ｄは、アントラサイクリンアミノグリコシドから糖部分のアミノ基を除いた構造を表す）。ポリマー結合アントラサイクリンは、好ましくは、単位１を９０から９８モル％の範囲で、一般式２の単位を１から１０モル％、一般式３の単位を１から１０モル％含有する。酵素によるペプチジル鎖のインビボでの加水分解は、単位３がそのまま残っている間に活性薬物Ｄ−ＮＨ₂のみを放出する。Ｒ₁が表すアルキル基の好適なものは、例としてヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピルおよび３−ヒドロキシプロピル基が挙げられる一つ以上のヒドロキシル基により置換されるＣ₁−Ｃ₄アルキル基である。ペプチドスペーサーＹは、細胞内加水分解を受け易くなければならない。このスペーサーは、細胞外加水分解に抵抗性であってもよい。ペプチドスペーサーは、１個から１０個、例えば２個から４個のアミノ酸残基の長さであってもよい。代表的には、ペプチドスペーサーは、トリペプチドまたはテトラペプチドである。キラルであるペプチドスペーサーＹの構成成分アミノ酸残基の各々は、ＤもしくはＬ光学異性体のいずれかとして存在してもよいし又はＤ／Ｌ混合物として存在してもよい。アミノ酸を表す従来の三文字表記を本明細書で用いる（ここで、記号は、特に断わらない限り、キラルアミノ酸のＬ配置を表す）。ペプチドスペーサーＹは、ラセミ混合物として存在してもよいし又は光学的に純粋な異性体として存在してもよい。好ましくは、Ｙは、各ケースにおいてグリシル残基がアミノグリコシドアントラサイクリンに結合している、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙから選ばれる。アミノグリコシドアントラサイクリン残基［ＮＨ−Ｄ］は、好適には下記一般式Ｑのアントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂−Ｄ］の残基である：（ここで、Ｒ^IおよびＲ^IIの一方は水素で、他方はヒドロキシル基または沃素であり；Ｒ^IIIは、水素またはＯＣＨ₃であり、Ｒ^IVは、水素またはヒドロキシル基である）。アントラサイクリンアミノグルコシド［ＮＨ₂−Ｄ］の好ましい例は、ドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４−デメトキシダウノルビシン、イダルビシンならびに４′−ヨード４ ′−デオキシドキソルビシンである。また、本発明は、本質的に上記で定義した通りの単位１、２および３から成るポリマー結合アントラサイクリンＡの製造法を提供する。この方法は、ｉ）ポリマー中間体Ｂ（ここで、Ｂは、本質的に下記一般式１および４の単位：から必須として成り、一般式１におけるｘ、ｎおよびＲ₁は、上記で定義した通りであり、ｗは、３０から２モル％であり、Ｒ₂は、ヒドロキシル基または離脱基である）と一般式５のアントラサイクリン誘導体（ここで、［ＮＨ−Ｄ］およびＹは、上記で定義した通りである）とを反応させ、ｉｉ）一般式３の単位におけるＺがＮＨＲ₁であるポリマー結合アントラサイクリンを製造することを所望する場合、工程（ｉ）の生成物（ここで、Ｒ₂は離脱基である）と一般式ＮＨ₂Ｒ₁の化合物（ここで、Ｒ₁は上記で定義した通りである）とを反応させることを含む。Ｒ₂が表す離脱基は、好ましくは、フェニル環上で１つ以上の電子吸引基により置換されるフェニルオキシ基である。好適な電子吸引基の例としては、ニトロ（−ＮＯ₂）およびハロゲンが挙げられる。Ｒ₂は、好ましくは、離脱基：（ここで、Ｌは、電子吸引基、例えば−ＮＯ₂または、フッ素もしくは塩素のようなハロゲンであり、ｍは、１から５、代表的には１から３、好ましくは１または２の整数である）である。好ましくは、Ｒ₂は、ｐ−ニトロフェノキシ基または２，４−ジクロロフェノキシ基である。一般式５の化合物は、その高い親油性のため、一般式Ａのポリマー複合物から容易に分離する。従って、上記で考察したように、本発明のポリマー結合アントラサイクリン類の製造方法は、アントラサイクリン類とポリマー類との従来の縮合の主たる欠点、即ち、ポリマー複合物からの遊離のアントラサイクリンの分離における困難性を克服する。本質的に単位１および４（上記で定義した通りである）から成るポリマー中間体Ｂは、下記一般式６および７のメタクリロイル化合物：（ここで、ｎ、Ｒ₁およびＲ₂は、上記で定義した通りである）のラジカル共重合により調製する。本質的に単位１および４から成るいくつかのポリマーは、文献で公知であり、例えば、Ｒ₁が−ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₃を表しｎ＝０である単位１および、Ｒ₂ がｐ−ニトロフェノール残基を表す単位４から成るポリマーＢ１は、J．Kopecek ，Makromol．Chem 178，2159（1977）に記載のように、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド［６ａ：Ｒ₁＝ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₃、ｎ＝０］とＮ−メタクリロイルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル［７ａ：Ｒ₂＝Ｏ−Ｃ₆Ｈ₄ｐＮＯ₂］とのラジカル沈殿共重合により製造される。Ｒ₂がヒドロキシルを表す単位１および４から成るポリマー中間体は、ラジカル均質重合により調製することができる。一般式６および７のモノマーのいくつかは公知である。ｎ＝０でＲ₁がアルキル基を有する二級ヒドロキシル基である一般式６の化合物は、通常、メタクリロイルクロライドと、二級ヒドロキシル基を有する脂肪族アミンとを反応させることにより製造する。他方、ｎ＝０でＲ₁がアルキル基を有する一級ヒドロキシル基の残基である一般式６の化合物は、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ− １，２−ジヒドロキノリンのような縮合剤の存在下、メタクリル酸およびアミノ化合物から製造することができる。一般式５のペプチジル−アントラサイクリン誘導体は、本発明の更なる態様である。その製造法は、公知である。例えば、適切な、Ｎが保護されたペプチドとアントラサイクリンとを反応させることが重要であることから、Ｎを保護するペプチジル基は、アントラサイクリンに対し安定性を賦与することのできる条件で除かれるものから選ぶ必要がある。例としては、トリフェニルメチル基がある。一般式５のペプチジルアントラサイクリン誘導体は、（ｉ）一般式８または９のＮが保護されたペプチド：（ここで、Ｒ₃は、酸感受性保護アミノ基であり、Ｐは離脱基であり、Ｙは上記で定義した通りのアミノ酸残基またはペプチドスペーサーである）とアントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂−Ｄ］（上記で定義した通りである）とを反応させて一般式１０の中間体：（ここで、［ＮＨ−Ｄ］、ＹおよびＲ₃は、上記で定義した通りである）を生成させ；（ｉｉ）保護基Ｒ₃を取り除いて遊離塩基の形態でペプチジル＝アントラサイクリン５を得ることを含む方法により調製することができる。Ｐは、上記でＲ₂として定義した通りの離脱基であってもよく、上記でＲ₂に関して示したものを例示することができる。更に、Ｐは、ペンタフルオロフェニルオキシまたはＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド基であってもよい。酸感受性保護基Ｒ₃の例としては、トリチルおよびジフェニルアミノ基が挙げられる。一般式８および９のペプチジル誘導体は、ペプチドについての文献により公知である標準合成手法に従って製造する。トリフェニルメチルのような酸感受性基でのアミノ官能基の保護は、典型的には、Theodoropoulos等，［J．Org．Chem．47 ，1324（1982）］により行う。化合物８、９および１０の製造に伴う反応条件は、ラセミ化を避けるために設計されており、その結果できたペプチジル誘導体は、従って、出発アミノ酸の配置と同じである。一般式５のアントラサイクリン誘導体を製造するために、当量のトリエチルアミンのような有機塩基の存在下、ジメチルホルムアミドのような無水極性溶媒中で、例えば室温で１５時間、化合物９をアントラサイクリン塩酸塩と反応させて一般式１０の中間体を得、これをクロマトグラフィーにより精製し、次いで、例えば７５％酢酸水溶液中で室温で一般式５の誘導体に脱保護することができる。アントラサイクリン類の３′−アミノ基を脱保護するのに必要とする有機塩基の存在下、極性溶媒中で、塩酸塩の形態のドキソルビシンおよび４′−エピドキソルビシンのようなＣ−１４位にヒドロキシル基を有するアントラサイクリン類と一般式９の活性化ペプチジル誘導体との反応により、誘導体１０と、糖部分のアミノ基およびＣ−１４位の両方が置換されたアントラサイクリンとの混合物を得ることに注目されたい。ビス（３′−Ｎ、１４−Ｏ−ペプチジル）誘導体は、クロマトグラフィーにより混合物から取り出すことができる。また、一般式１０の化合物は、１−エトキシ−カルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンのような当量の縮合剤の存在下、ジメチルスルホキシドのような乾燥極性溶媒中で、一般式８のＮが保護されたペプチドと塩酸塩の形態のアントラサイクリンとを縮合することにより製造することもできる。この手法では、Ｃ−１４ヒドロキシ基を有するアントラサイクリン類のビス−ペプチジル誘導体が生じない。中間体Ｂと一般式５のペプチジルアントラサイクリン誘導体との縮合、任意ではあるが続いて、残った離脱基の置換により、本質的に単位１、２および３から成るポリマー結合アントラサイクリン類を得る。この手法は、一級ヒドロキシル基およびペンダントグリシル活性化エステル類間のエステル結合の形成を回避することを強調しておく。単位３の残基Ｚが既に定義した通りの一般式ＮＨＲ₁の基を表すところの一般式Ａのポリマー結合薬物は、好ましくは、Ｒ₂が上記で定義した通りの離脱基である中間体Ｂと一般式５のアントラサイクリン誘導体とを、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドのような無水極性有機溶媒中で反応させることにより製造する。反応は、代表的には、８から２４時間行う。反応は、代表的には、１５℃から３０℃の温度、好ましくは室温で１５時間行い、次いで、残った離脱基を、複合物と上記で定義した通りの一般式ＮＨ₂Ｒ₁の化合物とを０．５から３時間室温で反応させることにより置換する。単位２の残基Ｚがヒドロキシル基を表す一般式Ａのポリマー結合薬物は、好ましくは、Ｒ₂がヒドロキシである中間体Ｂと一般式５のアントラサイクリン誘導体とを、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドのような無水極性有機溶媒中で反応させることにより製造する。反応は、代表的には、８から２４時間行う。反応は、代表的には、１５℃から３０℃の温度、好ましくは室温で１５時間行う。例えば、Ｚが上記で定義した通りの残基ＮＨＲ₁であるポリマー結合アントラサイクリンを製造するために、Ｒ₂がｐ−ニトロフェノキシのような離脱基である中間体Ｂを、ペプチジルアントラサイクリン５を用い室温で１５時間処理する。Ｂは、適切には１４％ｗ／ｖで、５は２．３％ｗ／ｖで用いる。上記で定義した通りの一般式ＮＨ₂Ｒ₁の化合物を、次いで、代表的には０．１％ｗ／ｖで加え、反応混合物を室温で３時間保持する。複合物をアセトンで沈澱させ、無水エタノールを用いて代表的には８％（ｗ／ｗ）濃度で溶解し、再度アセトンで沈澱させて所望のポリマー結合アントラサイクリンを得る。上記の方法においては、Ｃ−１４−ヒドロキシル化アントラサイクリンとペンダントグリシル活性化エステル間のエステル結合の形成は、縮合過程において有機塩基が存在しないため回避される。別の例では、Ｚがヒドロキシルであるポリマー結合アントラサイクリンＡを製造するために、Ｒ₂がヒドロキシルである上記で定義した通りの中間体Ｂを、無水ジメチルスルホキシド中で、ペプチジルアントラサイクリン５を用い室温で１５時間処理する。Ｂは、適切には１４％ｗ／ｖで、５は２．３％ｗ／ｖで用いる。次いで、複合物をアセトンで沈澱させ、無水エタノールを用いて代表的には８％（ｗ／ｗ）濃度で溶解し、再度アセトンで沈澱させて上記で定義した通りの一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリンを得る。複合物Ａのアントラサイクリン含量は、アドリアマイシノンがドキソルビシンおよび４′−エピルビシンのアグリコン部分であり、４−デメトキシダウノマイシノンが４−デメトキシダウノルビシンのそれであることから、酸加水分解により結合アントラサイクリンから放出されるアグリコンの分析により測定される。本発明のポリマー結合アントラサイクリン類は、良好な水溶性、生体適合性、生理学的ｐＨにおける安定性およびリソソーム酵素とのインキュベーション後の遊離の活性薬物、即ちＤ−ＮＨ₂の放出を示す。一般式Ａの化合物は、遊離のアントラサイクリンと比較した場合、実験モデルにおいて増強した抗腫瘍活性および低下した一般毒性を示す。一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリン類は、抗腫瘍活性を有する。従って、ヒトまたは動物は、それらに治療的に効果的な量の一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリンを投与することから成る方法により治療することができる。従って、ヒトまたは動物の患者の症状を改善することができる。適用される投与量の範囲は、投与経路ならびに、治療を受ける患者の年齢、体重および症状に依存する。一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリン類は、代表的には、非経口経路、例えば筋肉内、静脈内またはボーラス注入により投与する。適切な投与量の範囲は、５ｍｇ／ｍ²から８００ｍｇ／ｍ²のアントラサイクリン相当量、例えば２０ｍｇ／ｍ²から５００ｍｇ／ｍ²である。適切な投与計画では、２５ｍｇのアントラサイクリン相当量／ｍ²の溶液を１０ｍｌ／ｋｇ体重の容量で静脈により２週間にわたり５、９および１５日目に投与することが必要である。一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリン類は、薬学的に許される担体または希釈剤と共に医薬組成物の形に処方することができる。代表的には、ポリマー結合アントラサイクリン類は、非経口投与用に、例えば、滅菌水または注射用の水に溶解することにより処方する。以下の実施例により本発明を更に具体的に説明する。実施例１−６は、一般式６および７のモノマーならびに一般式Ｂのポリマー中間体の製造用合成手法に関する。実施例１［Ｎ−（メタクリロイルグリシル）］２−ヒドロキシプロピルアミド（６ｂ） Makromol，Chem． 178，2159（1977）に記載の通りに製造したメタクリロイルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル（７ａ：５．２８ｇ、２０ミリモル）を無水テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）に溶解し、１−アミノ−２−ヒドロキシプロパン（３．２ｍｌ、４０ミリモル）で処理した。室温で２０分後、減圧下で溶媒を除去し、アセトン／エチルエーテルを用いた結晶化後、標記化合物６ｂ（３．３ｇ、収率８２．５％）を回収した。溶出系としてメチレンクロライド／アセトン（容量で９０：１０）を用いた、Kieselgel プレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．４７であった。実施例２［Ｎ−（メタクリロイルグリシル）］−ヒドロキシエチルアミド（６ｃ）無水トルエン（１５０ｍｌ）中１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（３７ｇ）０．１５モル）およびアミノエタノール（９．７５ｇ、０．１５モル）の撹拌混合物に、無水トルエン（３００ｍｌ）に溶解したメタクリル酸（１４ｍｌ、０．１６５モル）を１５分かけて滴下した。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ｎ−ヘキサンを用いての沈澱後、標記化合物６ｃを回収した。溶出系としてメチレンクロライド／アセトン（容量で９０：１０）を用いた、Kieselgel プレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．３５であった。実施例３［Ｎ−（メタクリロイルグリシル）］−２，３−ジクロロフェニルエステル（７ｂ）ＤＣＣ（４．２ｇ、２１ミリモル）の存在下、無水テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中で、Makromol．Chem． 178，2159（1977）に記載の通りに製造したメタクリロイルグリシン（２．６６ｇ、２０ミリモル）および２，４−ジクロロフェノール（３．２６ｇ、２０ミリモル）から標記化合物７ｂを製造した。化合物７ｂ（４．７ｇ、収率８２％）をエチルアセテートおよびｎ−ヘキサンから結晶化した。溶出系としてエチルエーテルを用いた、Kieselgel プレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．４７であった。実施例４Ｎ−メタクリロイルアミド−２−ヒドロキシプロパンとＮ−メタクリロイルグリシンとのコポリマー（Ｂ２）Ｎ−メタクリロイルアミド−２−ヒドロキシプロパン（２５．２ｇ、０．１８モル）、メタクリロイルグリシン（２．８６ｇ、２０ミリモル）およびα，α′ −アゾイソブチロニトリル（５．９ｇ）を無水メタノール（１６４ｍｌ）に溶解した。混合液を、窒素下、６０℃で２０時間保持し、次いで、撹拌しながら反応混合液をアセトン（２０００ｍｌ）に加えた。沈澱物を集め、アセトンで洗浄し、恒量になるまで乾燥して標記ポリマーＢ２（２６ｇ）を得た。カルボキシル基含量（ｗ）：１０モル％。実施例５［Ｎ−（メタクリロイルグリシル）］２−ヒドロキシプロパノールアミドとＮ− （メタクリロイルグリシル）２，４−ジクロロフェニルエステルとのコポリマー（Ｂ３）化合物６ｂ（１４．４ｇ、７２ミリモル）および化合物７ｂ（５．１９ｇ、１８ミリモル）を、Makromol，Chem，178 2159（1977）に記載の通りにα，α’−アゾイソブチロニトリル（１ｇ、６ミリモル）の存在下、無水アセトン（３００ｍｌ）中で、標記化合物Ｂ３に重合化した。ポリマー物質を濾過により反応混合物から回収し、無水エタノールに溶解し、アセトンで再沈澱させた。塩素含量：計算値６．８９モル％、測定値２．８４モル％（ｗ）。実施例６［Ｎ−（メタクリロイルグリシル）］−ヒドロキシエチルアミドとＮ−メタクリロイルグリシンとのコポリマー（Ｂ４）標記ポリマー中間体Ｂ４を、実施例２に記載の通りに無水メタノール（１６４ｍｌ）中でＮ−メタクリロイルアミド−２−ヒドロキシエタン（６ｃ：２３．２ｇ）０．１８モル）、メタクリロイルグリシン（２．８６ｇ、２０ミリモル）およびα，α′−アゾイソブチロニトリル（５．９ｇ）から製造した。カルボキシル基の含量（ｗ）：１０％。実施例７−１２は、一般式５のペプチジル−アントラサイクリン類の製造法に関する。実施例７Ｎ−トリチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル４−ニトロフェニルエステル（C₆H₅）₃C-L-Phe-L-Leu-Gly-OC₆H₄pNO₂（9a） J．Org．Chem．47，1324（1982）に記載の通りに製造したＮ−トリチル−Ｌ− フェニルアラニン（２０．３ｇ、５０ミリモル）を無水テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ）に溶解し、無水Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８ｇ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１．７ｇ、５０ミリモル）で処理し、１０分後、無水テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）とＮ−メチルモルホリン（７ｍｌ）との混合液に溶解したＬ−ロイシルグリシンエチルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩（２０ｇ、５０ミリモル）を滴下した。反応混合物を０℃で１時間、室温で一晩保持し、次いで、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。エチルアセテートに溶解した粗物質を、冷却した５％クエン酸（３×１００ｍｌ）水溶液、冷却した５％重炭酸ナトリウム水溶液および水で連続して洗浄し、次いで、濃縮し、メチレンクロライドとメタノールとの混合物（容量で９９：１）で溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけてＮ−トリチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシンエチルエステル（１８ｇ、３０ミリモル）を得、これを、エチルアルコール９５％（４００ｍｌ）中で１Ｎ水酸化ナトリウム（３０ｍｌ）を用い室温で２時間処理することにより相当する酸８ａ（１７ｇ）に変換した。溶出系としてメチレンクロライド／メタノール（容量で８０：２０）を用いた、Kieselgel プレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．５３であった。 ¹H - NMR（200MHz，CDCl₃） 0,88（d，J = 5,9Hz，6H，δ + δ′Leu）：1.2 - 1.6（m，3H，β + Leu）：2. 00（dd，J = 5.7Hz，J = 13,4Hz，1H，βPhe）：2,83（dd，J = 5,2Hz，j = 13. 4Hz，1H，β′Phe）；3.51（t，J = 5.4，1H，αPhe）：3.99（d，J = 4.4Hz，2 H，α+α′Gly）： 4.55（m，1H，αLeu）：6.8 - 7.4（m，22H，NHgly，NHLeu ，4 - C₆H₅）．化合物８ａを無水テトラヒドロフラン（４５０ｍｌ）に溶解し、ｐ−ニトロフェノール（５．５ｇ、４０ミリモル）を加えた。混合物を０℃ に冷却し、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（８．２４ｇ、４０ミリモル）溶液を滴下し、４℃で一晩保持した。この後、反応混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。残渣をエチルアセテートに溶解し、０℃に冷却した。１時間後、混合物を濾過し、溶媒を除去し、エチルエーテルからの結晶後、標記化合物９ａ（２０ｇ，収率９７％）を得た。溶出系としてエチルエーテルを用いた、Ki eselgel プレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲｆ＝０．８０であった。FD - MS：m/z 699［M + H］⁺ ¹H - NMR（200MHz，CDCl₃） 0.86（d，J = 6.2Hz，3H，δLeu）：0.88（d，J = 6.4Hz，3H，δ′Leu）：1,2- 1,8（m，3H，β + Leu）：1.90（dd，J = 5.9Hz，J = 13,5Hz，1H，βPhe）：2. 89（dd，J = 4,6Hz，J = 13.5Hz，1H，β′Phe）：3.52（dd，J = 4.6Hz，J = 5 .9Hz，1H，αPhe）：4.0-4.4（m，3H，αLeu，α + α′Gly）：6.78（t，J = 5 ,7Hz，1H，NHGly）：7.04（d，J = 7.7Hz，1H，NHLeu）；6.8-7.4 実施例８Ｎ−トリチル−グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル（C₆H₅）₃C−Gly−L−Phe−L−Leu−Gly−OC₆ H₄ pNO₂ （9b）実施例７に記載の通りに製造した中間体Ｎ−トリチル−Ｌ−フェニルアラニル −Ｌ−ロイシルグリシルエチルエステル（６ｇ、１０ミリモル）を、７５％酢酸水溶液を用い室温で１時間処理してＬ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシルエチルエステルを得、これを、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下、Ｎ−トリチル−グリシン（３ｇ，１０ミリモル）と縮合させ、実施例７に記載のようなエチルエステルの加水分解およびｐ−ニトロフェノールを用いた活性化後、標記化合物９ｂ（３．８ｇ）収率５０％）を得た。溶出系としてエチルエーテルを用いた、Kieselgel プレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．６３であった。 FD - MS：m/z 755［M + H］⁺ 実施例９３′−Ｎ−（グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ａ）無水ジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）およびトリエチルアミン（０．５ｍｌ）に溶解したドキソルビシン塩酸塩（２．９ｇ、５ミリモル）を、実施例７に記載の通りに製造したＮ−トリチル−フェニルアラニルロイシルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル（９ａ：３．５ｇ、５ミリモル）と反応させた。反応混合物を室温で一晩保持し、次いで、エチルエーテルとｎ−ヘキサンとの１：１の混合物を用いて沈澱させた。固形物を、メチレンクロライドとメタノールとの混合物（容量で９８：２）で溶出するシリカゲルカラムを介して精製して、Ｎが保護されたペプチジルドキソルビシン１０ａ（４．６ｇ）を得た。この化合物は、溶出系としてメチレンクロライド／メタノール（容量で９５：５）を用いた、Kiesel gelプレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．３５であった。 FD - MS：m/z 1103［M + H］化合物１０ａを室温で１時間７５％酢酸水溶液（２５０ｍｌ）に溶解し、次いで、水とメチレンクロライドとの１：１の混液（２５００ｍｌ）で希釈し、固形重炭酸ナトリウムでｐＨ７にした。有機相を分離し、溶媒を減圧下で除去して標記化合物５ａ（３．４５ｇ、収率８０％）を得た。溶出系としてメチレンクロライド／メタノール／酢酸／水（容量で８０：２０：７：３）を用いた、Kieselge lプレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．５であった。 FD - MS：m/z 861［M + H］⁺ ¹H - NMR（400MHz，DMSO） 0.80（d，J = 6.4Hz，3H，δLeu）：0.83（d，J = 6.4Hz，3H，δ′Leu）：1.10 （d，J = 6.8Hz，3H，6′CH ₃）：1.3 - 1,6（m，4H，β + Leuおよび2′eqH）：1.83（ddd，J = 2.8Hz，J = 13.2Hz，J = 13.2Hz，1H，2′ax H）；2.09（dd ，J = 6.0Hz，J = 14.5Hz，1H，8ax H）：2.18（d，J = 14.5Hz，1H，8 - eq）：2.8 - 3.2（m，4H，10CH ₂およびβ Phe）：3.36（m，1H，4′）：3.64（m，2 H，αGly）：3.95（s，3H，OCH ₃）：3.9 - 4.1（m，2H，3′およびαPhe）：4.1 5（q，J = 6.4Hz，1H，5′H）： 4.29（q，J = 7.7Hz，1H，αLeu）：4.55（s，2H，14CH ₂）：4.7 - 5.0（m，3H ，7Hおよび4’OHおよび14OH）：5.20（d，J = 3.4Hz，1H，1′H）：5.46（s，1H ，9OH）：7.1 - 7.3（m，5H，Ar - Phe）：7.54（d，J = 8.5Hz，1H，3′NH）： 7.63（m，1H，3H）：7.88（m，2H，1Hおよび2H）：8.17（m，4H，NH₃ ⁺およびNHG ly）；8.70（d，J = 8.1Hz，1H，NHLeu）：13.23（s，1H，11OH）：14.00（s，1 H，6OH）．実施例１０３′−Ｎ−（グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニルグリシル）ドキソルビシン（５ｂ）ドキソルビシン塩酸塩（２．９ｇ、５ミリモル）を、実施例８に記載の通りに製造したＮ−トリチル−グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル（９ｂ：３．８ｇ、５ミリモル）と反応させ、次いで、実施例９に記載したように７５％酢酸水溶液で処理して標記化合物５ｂ（４ｇ、収率９０％）を得た。溶出系としてメチレンクロライド／メタノール／酢酸／水（容量で８０：２０：７：３）を用いた、KieselgelプレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．４４であった。 FD - MS：m/z 938［M + H］実施例１１４−デメトキシ−３′−Ｎ−（グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ダウノルビシン（５ｃ）実施例９に記載の手法に従い４−デメトキシダウノルビシン塩酸塩（２．９ｇ、５ミリモル）およびＮ−トリチル−フェニルアラニルロイシルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル（９ａ：３．５ｇ、５ミリモル）から標記化合物５ｃ（３ｇ、収率７５％）を製造した。溶出系としてメチレンクロライド／メタノール／酢酸／水（容量で８０：２０：７：３）を用いた、Kieselge lプレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．５１であった。 FD - MS：m/z 815［M + H］ ¹H - NMR（200MHz，CDCl₃） 0.84（d，J = 6.0Hz，3H，δLeu）：0.88（d，J = 6.0Hz，3H，δ′Leu）：1.27 （d，J = 6.4Hz，3H，6′CH ₃）；1.4 - 1.7（m，3H，β + Leu）：1.7 - 2.0（m ，2H，2’CH ₂）；2,06（dd，J = 4.2H，J = 14.9Hz，1H，8ax H）：2.32（d，J = 14,9Hz，1H，8eqH）：2.40（S，3H，COCH ₃）：2.70（dd，J = 8.6Hz，J = 13 Hz，1H，βPhe）：3.12（dd，J = 4.2Hz，J = 13,7Hz，1H，β′Phe）：2.94，3 .23（２つのd，J = 19.2Hz，2H，10CH ₂）：3.5 - 3.8（m，3H，4′H，αPheおよびαGly）：3.9 - 4.3（m，4H，α′Gly，αLeu，5′H，3′H）；5.19（m，1H， 7H）：5.45（d，J = 2.7Hz，1H，1′H）：6.9 - 8.4（m，12H，1H，2H，3H，4H ，ArPhe，3′NH，NHGly，NHLeu）．実施例１２４′−エピ−３′−Ｎ−（グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ｄ）実施例９に記載の手法に従い４′−エピドキソルビシン塩酸塩（２．９ｇ、５ミリモル）およびＮ−トリチル−フェニルアラニルロイシルグリシルｐ−ニトロフェニルエステル（９ａ：３．５ｇ、５ミリモル）から標記化合物５ｄ（３．２５ｇ、収率８６％）を製造した。溶出系としてメチレンクロライド／メタノール／酢酸／水（容量で８０：２０：７：３）を用いた、KieselgelプレートＦ₂₅₄（メルク社）上におけるＴＬＣのＲ_f＝０．４６であった。 FD - MS：m/z 861［M + H］⁺ ¹H - NMR（400MHz，DMSO） 0.79（d，J = 6.3Hz，3H，δLeu）：0.81（d，J = 6.3Hz，3H，δ′Leu）；1.19 （d，J = 5.9Hz，3H，6′CH ₃）：1.3-1.6（m，4H，2′Hax，β，β′Leu， Leu ）：1.82（dd，J = 4.7Hz， J = 12．5Hz，1H，2′H e q）; 2．1 - 2．3（m， 2H，8 - CH ₂）;2．59（dd，J = 8．2Hz，J = 13．7Hz，1H，βPhe）; 2．9 - 3．1（m，4H，β′Phe， 10 - CH ₂ ，h′H）; 3．41（dd，4．7Hz，J=8．2Hz，αPhe）; 3．54（dd，J = 5． 5Hz，J = 16，4Hz，1H，αGly）; 3．67（dd，J = 6．2Hz，J = 16．4Hz，1H， α′Gly）;3．80（m，1H， 3′H）; 3．90（m，1H，5′H）; 3．95（s，3H，OCH ₃ ）; 4．18（m，1H，αLeu）; 4．55（m，2H，14 - CH ₂）;4．3 - 5．0（m，3 H，14 - OH，7H，4′- OH）; 5．17（d，J= 3．1Hz，1H， 1′H）; 5，46（s，1 H，9 - OH）; 7．1 - 7．3（m，5H，Ar - Phe）; 7．53（d，J = 8．2Hz，1H， NH - Gly）; 7．60（m，1H，3 H）; 7，86（m，2H， 1H，2H）; 8．05（d，J =6 ．4Hz，1H，NH - Leu）; 8．11（t，J = 5．9Hz，1H，NH-Gly）．実施例１４３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンと３−-Ｎ− （メタクリロイルグリシル− Ｌ−フェニルアラニル-ロイシルグリシル）ドキソルビシンと（Ｎ-メタクリロイルグリシル）２−ヒドロキシプロパノールアミドとのコポリマー（Ａ２） Makromal．Chem．178，2159（1977）に記載の通りに製造したポリマー前駆物質Ｂ１（１０ｇ、２．７ｘ１０^-3 当量のｐ−ニトロフェニルエステル）を乾燥ジメチルホルムアミド（６０ｍｌ）に溶解し、３′−Ｎ−（グリシル-ロイシル- Ｌ-フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ａ：１．５３ｇ）１．７２ミリモ
ル）を加えた。混合物を室温で撹拌しながら２４時間保持し、次いで、１−アミノ −プロパノール（０．１３ｍｌ）を加えた。１時間後、反応混合物を、アセトン／エチルエーテル混液（１．２リットル、容量で３／１）に撹拌しながら加え、濾過した。沈澱物をエタノール（１５０ｍｌ）に溶解し、アセトン／エチルエーテル（１．２リットル、容量で４／１）で沈澱させて一般式Ａ２（１０ｇ）のポリマー化合物を得た。ドキソルビシン・ＨＣＩ含量：９％（ｗ／ｗ）。実施例１３−１８は、一般式Ａのポリマー −結合− アントラサイクリン類の製造法を具体的に説明する。実施例１３３−メタクリロイルアミノ− ２−ヒドロキシプロパンと３′−Ｎ−（メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ドキソルビシンとＮ−メタクリロイルグリシンとのコポリマー（Ａ１）実施例４に記載の通りに製造したポリマー前駆物質Ｂ２（７．１５ｇ、５ミリモルの−ＣＯＯＨ）および３′−Ｎ−（グリシル−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ａ：２．３６ｇ、２．５ミリモル）を無水ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）に溶解し、次いで、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（０．７ｇ、２．５ミリモル）を加えた。混合物を室温で撹拌しながら２４時間保持し、次いで、エチルエーテル（８００ｍｌ）に注いだ。沈澱物をエタノール（１００ｍｌ）に溶解し、アセトン（８００ｍｌ）で沈澱させ、恒量になるまで乾燥して標記化合物Ａ１（７ｇ）を得た。ドキソルビシン・ＨＣＩ含量：９％（ｗ／ｗ）。実施例１５３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンと４−デメトキシ−３′− Ｎ−（メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ダウノルビシンとＮ−メタクリロイルグリシンとのコポリマー（Ａ３）実施例１３に記載のように、無水ジメチルホルムアミド中、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（０．４８ｇ）の存在下、４ −デメトキシ−３′−Ｎ−（グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ダウノルビシン（５ｄ：１．４８ｇ、１．７２ミリモル）をポリマー前駆物質Ｂ２（１０ｇ）と反応させて標記化合物Ａ３を得た。４−デメトキシダウノルビシン・ＨＣＩ含量：９％（ｗ／ｗ）。実施例１６３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンと４′−エピ−３′−Ｎ− （メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ドキソルビシンと１−Ｎ−（メタクリロイルグリシル）−２−ヒドロキシプロパンとのコポリマー（Ａ４）実施例１３に記載のように、４′−エピ−３′-Ｎ−（グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ｅ：１．４８ｇ、１．７２ミリモル）をポリマー前駆物質Ｂ１、続いて１−アミノプロパノール（０．１３ｍｌ）と反応させて一般式Ａ４の４′−エピ−ドキソルビシンポリマー複合体（１０ｇ）を得た。４′−エピドキソルビシン・ＨＣＩ含量：９％（ｗ／ｗ）。実施例１７３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンと４′−エピ−３′-Ｎ− （メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ドキソルビシンとＮ−メタクリロイルグリシンとのコポリマー（Ａ５）標記化合物を、無水ジメチルホルムアミド中、ポリマー中間体Ｂ２、４′−エピ−３′−Ｎ−（グリシルロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ｅ）およびＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンから実施例１３に記載の通りに製造した。実施例１８［Ｎ−（メタクリロイルグリシル）］−ヒドロキシエチルアミドと３′-Ｎ−（メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ドキソルビシンとＮ−メタクリロイルグリシンとのコポリマー（Ａ６）標記ドキソルビシンポリマープロドラッグＡ６を、実施例１３に記載の通りに、無水ジメチルホルムアミド中で、ポリマー中間体Ｂ４と３′−Ｎ−（グリシルロイシル−Ｌ−フェニルアラニル）ドキソルビシン（５ｅ）とＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンとを縮合させることにより製造した。実施例１９：化合物Ａ１のＭ５０７６に対する抗腫瘍活性実施例１３に記載のＡ１の抗腫瘍活性を以下の通りに検査した。材料および方法１．薬物投与すべての薬液は、使用直前に製造した。処置は、５、９および１５日目に１０ｍｌ／ｋｇ体重の容量で静脈注射により投与することによって行った。アントラサイクリン類を滅菌水に溶解し、濃度を分光光度計によりチェックした。凍結乾燥したポリマー類を水に溶解して、２５ｍｇアントラサイクリン相当量／ｍｌの出発溶液を得、報告した濃度にしたがって、更なる希釈を水で行った。２．充実性腫瘍Ｍ５０７６マウス細網肉腫を、筋肉内注射による一連の継代接種により得、Ｃ７５Ｂ１／６マウスの皮下に移植（５×１０⁵細胞／マウス）して原発腫瘍に対する活性を評価した。３．抗腫瘍活性および毒性の評価腫瘍の増殖をカリパス測定により評価し、腫瘍重量を Geran等（Cancer Chem other，Rep． 3，1（1972）参照）により算定した。抗腫瘍活性を、１ｇの腫瘍重量に達する時間（日）で測定し、腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）として報告した。５０％生存時間（Ｔ／Ｃ％）の増加を、下記一般式：した。毒性を、体重減少および、脾臓および肝臓全体の縮小の総合所見に基づいて評価した。神経毒性を、運動機能が欠如したマウス数として測定した。結果を表１に示す：５×１０⁵細胞／マウスを皮下注射した。ｎｄ＝測定せず^* 神経毒性１処置は、５、９、１５日目に行った２ＴＤＧ＝腫瘍増殖遅延３（処置したマウスの５０％生存時間／対照郡の５０％生存時間）×１００４中毒死数／全マウス数５長期生存数６実験終了時点で、腫瘍のないマウス数実施例２０化合物Ａ３のＭ５０７６に対する抗腫瘍活性実施例１５に記載のＡ３の抗腫瘍活性を、実施例１９の方法および材料を用いて検査した。結果を表２に示す。５×１０⁵細胞／マウスを皮下注射した。^* 神経毒性１処置は、５、９、１５日目に行った２ＴＤＧ＝腫瘍増殖遅延３（処置したマウスの５０％生存時間／対照郡の５０％生存時間）×１００４中毒死数／全マウス数５長期生存数６実験終了時点で、腫瘍のないマウス数化合物Ａ４（３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンと４′-エピ−３′−Ｎ−（メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ドキソルビシンと１−Ｎ−（メタクリロイルグリシル）−２−ヒドロキシプロパンとのコポリマー）の、４′−エピドキソルビシン・ＨＣＩと比較した抗腫瘍活性同じ処置計画により４′−エピドキソルビシン・ＨＣＩおよび化合物Ａ４の抗腫瘍活性を検査した。初期のＭ５０７６マウス細網肉腫に対し、化合物Ａ４は、検査した全投与量において、遊離の薬物に比しより高い活性を示した（表３）。５×１０⁵細胞／マウスを皮下注射した１処置は、５、９、１５日目に行った２ＴＤＧ＝腫瘍増殖遅延３（処置したマウスの５０％生存時間／対照郡の５０％生存時間）×１００４中毒死数／全マウス数化合物Ａ４（３−メタクリロイルアミノ−２−ヒドロキシプロパンと４′−エピ−３′-Ｎ−（メタクリロイルグリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシルグリシル）ドキソルビシンと１−Ｎ−（メタクリロイルグリシル）−２−ヒドロキシプロパンとのコポリマー）の、４′−エピドキソルビシン・ＨＣＩと比較した毒性４′−エピドキソルビシン・ＨＣＩ（１３．２−１６．１５−１９−２０．６ −２５．２および３３．２ｍｇ／ｋｇ）ならびに化合物Ａ４（５０−６３−７９ −１００−１２０−１４０ｍｇ／ｋｇ）の１回量で静脈注射により処置した健康なＣ５７Ｂ１Ｆマウスにおける毒性を評価した。健康なＣ５７Ｂ１ＦマウスにおけるＬＤ₁₀およびＬＤ₅₀を決定するために、３週間回復改善後、プロビット（Probit）分析を用いた。下記式を用いて治療指数を算定した：有効量５０は、５０％の腫瘍増殖の減少を引き起こす量である。動物における安全性を９０日間観察した。Ｃ５７Ｂ１／ＦマウスにおけるＬＤ₁₀およびＬＤ₅₀値は、以下のとおりである：化合物Ａ４は低い毒性により、高用量の生成物投与が可能になり、ひいては４ ′−エピドキソルビシン・ＨＣｌと同等もしくは更に良好な結果に到達し、より良好な治療指数を得ることができる。４′−エピドキソルビシン・ＨＣｌおよび化合物Ａ４の治療指数は、各々３と４０である。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項【提出日】１９９４年１０月３日【補正内容】請求の範囲１．本質的に一般式１、２および３により表される三つの単位から必須として成る一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリン：（ここで、Ｇｌｙは、グリシンを表し；ｎは、０または１であり；ｘは、７０から９８モル％であり；ｙは、１から２９モル％であり；ｚは、１から２９モル％であり；Ｒ₁は、１つ以上のヒドロキシル基によって置換されるＣ₁−Ｃ₆のアルキル基であり；Ｙは、アミノ酸残基またはぺプチドスペーサーであり；［ＮＨ−Ｄ］は、アントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂−Ｄ］の残基であり；Ｚは、ヒドロキシル基または、Ｒ₁が上記で定義した通りの一般式−ＮＨＲ₁の残基である）。２．［ＮＨ−Ｄ］が下記一般式Ｑ：（ここで、Ｒ^IおよびＲ^IIの一方は水素で、他方はヒドロキシル基または沃素であり；Ｒ^IIIは、水素またはＯＣＨ₃であり、Ｒ^IVは、水素またはヒドロキシル基である）のアントラサイクリンアミノグリコシドの残基である請求の範囲１に記載のポリマー結合アントラサイクリン。３．ｘが９０から９８モル％、ｙが１から１０モル％、ｚが１から１０モル％である請求の範囲１または２に記載のポリマー結合アントラサイクリン。４．Ｒ₁が、ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピルまたは３−ヒドロキシプロピル基である請求の範囲１、２または３に記載のポリマー結合アントラサイクリン。５．Ｙが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙである請求の範囲１〜４のいずれか一つに記載のポリマー結合アントラサイクリン。６．［ＮＨ−Ｄ］が、ドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４−デメトキシダウノルビシン、イダルビシンまたは４′−ヨード，４′−デオキシドキソルビシンの残基である請求の範囲１〜５のいずれかに記載のポリマー結合アントラサイクリン。７．請求の範囲１において定義した通りの一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリンの製造法であって、ｉ）ポリマー中間体Ｂ（ここで、Ｂは、本質的に下記一般式１および４の単位：から成り、一般式１におけるｘ、ｎおよびＲ₁は、請求の範囲１で定義した通りであり、ｗは、３０から２モル％であり、Ｒ₂は、ヒドロキシル基または離脱基である）と一般式５のアントラサイクリン誘導体（ここで、［ＮＨ−Ｄ］およびＹは、請求の範囲１で定義した通りである）とを反応させ、ｉｉ）一般式３の単位におけるｚがＮＨＲ₁であるポリマー結合アントラサイクリンを製造することを所望する場合、工程（ｉ）の生成物（ここで、Ｒ₂は離脱基である）と一般式ＮＨ₂Ｒ₁の化合物（ここで、Ｒ₁は上記で定義した通りである）とを反応させることを含む前記方法。８．一般式５のアントラサイクリン誘導体（ここで、［ＮＨ−Ｄ］およびＹは、請求の範囲１または２で定義した通りである）。９．請求の範囲８において定義した通りの一般式５のアントラサイクリン誘導体の製造法であって、（ｉ）一般式８または９のＮが保護されたペプチド：（ここで、Ｒ₃は、酸感受性アミノ保護基であり、Ｐは離脱基であり、Ｙは請求の範囲７で定義した通りである）とアントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂ −Ｄ］とを反応させて一般式１０の中間体：（ここで、［ＮＨ−Ｄ］は請求の範囲１または２で定義した通りであり、ＹおよびＲ₃は、上記で定義した通りである）を生成させ；（ｉｉ）保護基Ｒ₃を取り除いて遊離塩基の形態でぺプチジル−アントラサイクリン５を得ることを含む前記方法。１０．薬学的に許される希釈剤または担体および、有効成分として、請求の範囲１から６のいずれかーつに記載のポリマー結合アントラサイクリンまたは、請求の範囲８に記載の一般式５のアントラサイクリン誘導体を含むことを特徴とする医薬組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者スアラート，アントニーノイタリー国，20158・ミランビア・デジリ・インブリアーニ、39 【要約の続き】り；Ｒ₁は、１つ以上のヒドロキシル基によって置換されるＣ₁−Ｃ₆のアルキル基であり；Ｙは、アミノ酸残基またはぺプチドスペーサーであり；［ＮＨ−Ｄ］は、アントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂−Ｄ］の残基であり；Ｚは、ヒドロキシル基または、Ｒ₁が上記で定義した通りの一般式−ＮＨＲ₁の残基である）。また、これらの製造法およびこれらを含有する医薬組成物も提供する。

Claims

【特許請求の範囲】１．本質的に一般式１、２および３により表される三つの単位から必須として成る一般式Ａのポリマー結合アントラサイクリン：（ここで、Ｇｌｙは、グリシンを表し；ｎは、０または１であり；ｘは、７０から９８モル％であり；ｙは、１から２９モル％であり；ｚは、１から２９モル％であり；Ｒ₁は、１つ以上のヒドロキシル基によって置換されるＣ₁−Ｃ₆のアルキル基であり；Ｙは、アミノ酸残基またはペプチドスペーサーであり；［ＮＨ−Ｄ］は、アントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂−Ｄ］の残基であり；ｚは、ヒドロキシル基または、Ｒ₁が上記で定義した通りの一般式−ＮＨＲ₁の残基である）。２．［ＮＨ−Ｄ］が下記一般式Ｑ：（ここで、Ｒ^IおよびＲ^IIの一方は水素で、他方はヒドロキシル基または沃素であり；Ｒ^IIIは、水素またはＯＣＨ₃であり、Ｒ^IVは、水素またはヒドロキシル基である）のアントラサイクリンアミノグリコシドの残基である請求の範囲１に記載のポリマー結合アントラサイクリン。３．ｘが９０から９８モル％、ｙが１から１０モル％、ｚが１から１０モル％である請求の範囲１または２に記載のポリマー結合アントラサイクリン。４．Ｒ₁が、ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピルまたは３−ヒドロキシプロピル基である請求の範囲１、２または３に記載のポリマー結合アントラサイクリン。５．Ｙが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙである請求の範囲１〜４のいずれか一つに記載のポリマー結合アントラサイクリン。６．［ＮＨ−Ｄ］が、ドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４−デメトキシダウノルビシン、イダルビシンまたは４′−ヨード，４′−デオキシドキソルビシンの残基である請求の範囲１〜５のいずれかに記載のポリマー結合アントラサイクリン。７．請求の範囲１において定義した通りの一般式Ａのポリマ−結合アントラサイクリンの製造法であって、ｉ）ポリマー中間体Ｂ（ここで、Ｂは、本質的に下記一般式１および４の単位：から成り、一般式１におけるｘ，ｎおよびＲ₁は、請求の範囲１で定義した通りであり、ｗは、３０から２モル％であり、Ｒ₂は、ヒドロキシル基または離脱基である）と一般式５のアントラサイクリン誘導体（ここで、［ＮＨ−Ｄ］およびＹは、請求の範囲１で定義した通りである）とを反応させ、ｉｉ）一般式３の単位におけるＺがＮＨＲ₁であるポリマー結合アントラサイクリンを製造することを所望する場合、工程（ｉ）の生成物（ここで、Ｒ₂は離脱基である）と一般式ＮＨ₂Ｒ₁の化合物（ここで、Ｒ₁は上記で定義した通りである）とを反応させることを含む前記方法。８．一般式５のアントラサイクリン誘導体（ここで、［ＮＨ−Ｄ］およびＹは、請求の範囲１または２で定義した通りである）。９．請求の範囲８において定義した通りの一般式５のアントラサイクリン誘導体の製造法であって、（ｉ）一般式８または９のＮが保護されたペプチド：（ここで、Ｒ₃は、酸感受性アミノ保護基であり、Ｐは離脱基であり、Ｙは請求の範囲７で定義した通りである）とアントラサイクリンアミノグリコシド［ＮＨ₂ −Ｄ］とを反応させて一般式１０の中間体：（ここで、［ＮＨ−Ｄ］は請求の範囲１または２で定義した通りであり、ＹおよびＲ₃は、上記で定義した通りである）を生成させ；（ｉｉ）保護基Ｒ₃を取り除いて遊離塩基の形態でペプチジル−アントラサイクリン５を得ることを含む前記方法。１０．薬学的に許される希釈剤または担体および、有効成分として、請求の範囲１から６のいずれか一つに記載のポリマー結合アントラサイクリンまたは、請求の範囲８に記載の一般式５のアントラサイクリン誘導体を含むことを特徴とする医薬組成物。