JPH08502979A - 表面活性剤で安定化された微小気泡混合物、その製造方法およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、溶剤と第１表面活性剤と第１表面活性剤とは異なる分散性の第２表面活性剤とを含む混合物であって、この混合物は音波処理により内部に形成された安定化ガス微小気泡を有する。ガス微小気泡は超音波診断に有用である。好ましくは第１表面活性剤は溶剤に対し実質的に可溶性であり、第２表面活性剤は溶剤に対し実質的に不溶性である。さらに本発明は、安定化したガス微小気泡の製造方法およびコントラスト剤として微小気泡を用いる超音波画像のコントラストの変化方法をも包含する。

Description

【発明の詳細な説明】 表面活性剤で安定化された微小気泡混合物、 その製造方法およびその使用方法 発明の技術分野 本発明は、音波処理により内部に形成された安定化ガス微小気泡を有する混合 物、並びにその作成方法および使用方法に関するものである。より詳細には本発 明は、超音波診断にコントラスト剤として使用するための安定化したガス微小気 泡の形成に向けられる。 発明の背景 安定化した気液エマルジョンはたとえば食品工学、海洋生物学、水力および海 洋工学、並びに超音波心臓検査法など僅かではあるが各種の分野に有用である。 ガス微小気泡は、液体が満たされた人間および動物の体内キャビティおよび器官 の超音波診断につきコントラスト剤として特に有用である。超音波診断において コントラスト剤は正常なキャビティと発病キャビティとの間のコントラスト解像 を一層良好にし；血管を概見させ；組織を特性化し；血流測定におけるドップラ ー信号を増大させ；さらにたとえば身体の特定箇所における薬剤の吸収および／ または清浄の割合を測定するための動的研究に有用である。コントラスト剤は、 注入された空気微小気泡が赤血球と同様な心臓内速度で移動するため超音波心臓 検 査法に特に有用である。この種の微小気泡は、腹部に隣接する器官の腫瘍新血管 形成および正常血管形成の両パターンにおける変化を示す血流の監視を可能にす る。これは、これら腹部の早期診断を可能にする。 超音波画像を向上させるには３種の有力な理論的メカニズムが存在し、すなわ ち音波の後方散乱を増大させ、音響エネルギーの減衰速度を増大させ、さらに超 音波の伝達速度を変化させる。慣用の超音波装置は、後方分散した超音波からの 画像の発生に依存する。「エコゼニシティ」という用語は、後方分散の向上程度 を意味する。超音波コントラスト剤のエコゼニシティは実験条件に依存し、分散 器と懸濁媒体との物理的性質の差に依存する。音波後方分散は、懸濁媒体中に遊 離ガス気泡を含ませて増大させることができる。しかしながら、この種の遊離気 泡は単寿命であって、肺により急速かつ完全に除去される。 典型的な従来技術のコントラスト媒体は、遊離気泡よりも良好な安定性を示す 包封された気泡を含む。しかしながら、この種の従来技術の包封気泡は一般に１ ０μｍより大きい平均直径を有し、肺の毛管べッドに捕らえられる。慣用の微小 気泡はゼラチンおよびアルブミン、たとえばモレキュラ・バイオシステムス・イ ンコーポレーション社、サンジエゴ、カリホルニア州により開発されたアルブネ ックス（登録商標）に包封されており、０．５〜１０μｍの範囲の寸法を有する 安定なミクロカプセ ル化された気泡の懸濁物である。気泡は、５％ヒト血清アルブミン溶液の音波処 理により生成される。気泡は、凝集した蛋白シエルに包封される。微小カブセル はかなり脆い性質になる傾向を有し、心臓の各室における高圧環境にて諸問題に 遭遇する。 微小気泡を発生させるべく使用されている１種の薬剤は糖モレキュラマトリッ クス（ＳＨＵ−４５４およびＳＨＵ−５０８）であって、シエアリングＡＧ社（ 西ドイッ国）により結晶固体として供給される。微小気泡は投与の直前に無菌緩 衝溶液の添加によってマトリックスから遊離され、１〜５μｍの寸法範囲である 。 米国特許第４，６８４，４７９号は安定な気液エマルジョンを作成するための 表面活性剤混合物を開示しており、これは（ａ）約１０〜約１８個の炭素原子を 有する飽和カルボン酸または約１０〜約１８個の炭素原子を有する脂肪族アルコ ールのグリセリンモノエステルと；（ｂ）ステロール−芳香族酸エステルと； （ｃ）ステロール、テルペン、胆汁酸または胆汁酸のアルカリ金属塩とからなっ ている。必要に応じ、混合物は各種のステロールエステル、糖酸と脂肪族アルコ ールとのエステル、糖酸、サポニン、サポゲニンおよびグリセリンをも含むこと ができる。 米国特許第４，４６６，４４２号は、少なくとも１種の表面活性剤と少なくと も１種の粘度上昇化合物との溶液を含有するガス微小気泡を製造するための溶液 を開示 している。適する非イオン型表面活性剤の例はポリオキシェチレン脂肪酸エステ ルおよびポリオキシエチル化ソルビタン脂肪酸エステルを包含する。粘度上昇化 合物の例は単糖類もしくは多糖類、デキストラン、シクロデキストリン、ヒドロ キシエチル アミロース、ポリオール、蛋白質、蛋白含有物質、アミノ酸および 血液代用物を包含する。 望ましいコントラスト剤は心臓、密実器官および脈管解剖導管の画像形成（た とえばマクロファージ活性に基づく薬剤位置を含む）；密実器官の潅流；並びに 実時間の画像形成に際し血液速度および血流方向のドップラー信号につき解像を 向上させる。超音波コントラスト剤を効果的にするには、これを安定かつ生物適 合性にせねばならず、しかも組織からの改善された聴覚反響を比較的低い毒性と 共に与えねばならない。 貯蔵の際に安定であるだけでなく人間もしくは動物の検体内部に少なくとも１ 回通過させる場合にも安定であり、全ゆる医学超音波画像形成のモードにて高度 のエコゼニシティを示すような１０μｍ未満の平均直径を有する微小気泡からな る超音波コントラスト剤を提供することが望ましい。 発明の要点 本発明によれば、音波処理により内部に形成された安定化ガス微小気泡を有す る混合物が提供される。このガス微小気泡は超音波診断に使用される。この混合 物は溶 剤と第１表面活性剤と分散性の第２表面活性剤とで構成される。 他面において本発明は、超音波診断に使用するための安定化したガス微小気泡 の製造方法である。この方法は溶剤と第１表面活性剤と分散性の第２表面活性剤 とを混合することからなっている。微小気泡は、混合物を超音波処理にかけるこ とにより混合物内に発生する。超音波処理により発生した微小気泡は、溶剤の少 なくとも１部を微小気泡から分離して集められる。 他面において本発明は、超音波画像のコントラストを変化させる方法である。 この方法は溶剤と第１表面活性剤と分散性の第２表面活性剤との混合物を形成さ せることからなっている。この混合物は、音波処理により内部に形成された安定 化ガス微小気泡を有する。微小気泡は、溶剤の少なくとも１部を微小気泡から分 離して集められる。この微小気泡は体内に静脈注射されて、微小気泡を有する身 体の部分における超音波画像のコントラストを実質的に変化させる。 図面の簡単な説明 本発明の上記要点、並びに好適具体例に関する以下の詳細な説明は、添付図面 を参照して一層よく理解されるであろう。本発明を例示する目的で本発明の実施 例にっき図面に示したが、本発明は開示する特定の方法および具体例のみに限定 されないことが了解されよう。 第１図は平均気泡直径（μｍ）の関数として混合物の 集められた微小気泡相１ｍＬ当りの微小気泡の個数（１０⁶）のグラフであり； 第２図は微小気泡混合物の注射量（ｍＬ）の関数としてのドップラースペクト ル画像の振幅（ｄＢ）のグラフである。 好適具体例の説明 本発明の安定化したガス微小気泡は、溶剤と第１表面活性剤と分散性の第２表 面活性剤とからなる混合物を音波処理して形成される。 この混合物はたとえば水溶液のような溶剤を含む。適する溶剤は水、塩水また は本発明にしたがう任意適する塩溶液を包含する。好ましくは溶剤は燐酸塩緩衝 塩水溶液であって約７．０〜約７．５、より好ましくは約７．２〜約７．４の範 囲のｐＨを有する。好適な燐酸塩緩衝塩水溶液は約８６％の塩化ナトリウムと約 １０％の燐酸ナトリウムと約２％の塩化カリウムと約２％の燐酸二水素カリウム との溶解固形分を有する。好適具体例においては、追加の塩化ナトリウムを塩水 溶液に添加して表面活性剤の分散を容易化させると共に、得られる微小気泡調製 物の安定性を向上させる。 溶剤と可溶性表面活性剤との比は重量で約１００・１〜約２０：１である。溶 剤と不溶性表面活性剤との比は重量で約１００：１〜約２５：１である。 好ましくは第１表面活性剤は溶剤に対し実質的に可溶性であるが、当業者は部 分溶解性もしくは不溶性の表面 活性剤も第１表面活性剤として本発明に有用であることを了解するであろう。第 １表面活性剤は非イオン型であることがさらに好ましい。適する第１表面活性剤 はポリオキシエチレン脂肪酸エステル、たとえばポリオキシエチレン ソルビタ ン モノラウレート、ポリオキシエチレン ソルビタン モノパルミテート、ポ リオキシエチレン ソルビタン モノステアレート、ポリオキシエチレン ソル ビタン トリステアレート、ポリオキシエチレン ソルビタン モノオレエート およびその混合物を包含する。 適するポリオキシエチレン脂肪酸エステルはツイーン２０）ツイーン４０）ツ イーン６０）ツイーン６５およびツイーン８０を包含し、そのそれぞれはＩＣＩ アメリカス・インコーポレーション社、ウィルミントン、デラウェアーから市販 されている。ツイーン表面活性剤は、液状における種々のポリオキシエチレン脂 肪酸エステルの混合物である。たとえばツイーン２０は約６０重量％のラウリン 酸（ドデカン酸）；約１８％のミリスチン酸（テトラデカン酸）；約７％のカプ リル酸（オクタン酸）；および約６％のカプリン酸（デカン酸）のポリオキシエ チレン（ＰＯＥ）エステルである。ツイーン４０は一般に約９０％のパルミチン 酸（ヘキサデカン酸）のＰＯＥエステルからなっている。ツイーン６０は一般に 約４９％のステアリン酸（オクタデカン酸）と約４４％のパルミチン酸とのＰＯ Ｅエステルで構成される。ツイ ーン８０は一般に約６９％のオレイン酸（ｃｉｓ−９−オクタデカン酸）と約３ ％のリノール酸と約３％のリノレン酸（９，１２，１５−オクタデカトリエン酸 ）と約１％のステアリン酸と約１％のパルミチン酸とのＰＯＥエステルで構成さ れる。 分散性の第２表面活性剤は第１表面活性剤とは異なる。好ましくは分散性の第 ２表面活性剤は不溶性であるが、当業者は第２表面活性剤が溶剤に対し部分的ま たは完全に可溶性であることも了解するであろう。さらに第２表面活性剤は非イ オン型であることが好ましい。適する第２表面活性剤はソルビタン脂肪酸エステ ル、たとえばソルビタン モノステアレート、ソルビタン モノパルミテートお よびその混合物を包含する。ソルビタン脂肪酸の好適混合物はスパン４０および スパン６０を包含し、そのそれぞれはＩＣＩアメリカス・インコーポレーション 社から市販入手しうる乾燥粉末である。スパン４０は約９３％のパルミチン酸と 約２．５％のミリスチン酸と約１％未満のペンタデカン酸とのソルビタンエステ ルで構成される。スパン６０は約５０％のステアリン酸と約４５％のパルミチン 酸と約２％のミリスチン酸とのソルビタンエステルで構成される。 好ましくは、第１表面活性剤と第２表面活性剤とのモル比は約１：１．７であ る。当業者は、第１表面活性剤と第２表面活性剤との比がたとえば特定の選択さ れる第１表面活性剤および第２表面活性剤のような因子に基づ いて変化しうることを了解するであろう。例として混合物ツイーン２０、ツイー ン４０、ツイーン６０、ツイーン６５もしくはツイーン８０、およびスパン４０ もしくはスパン６０に関する第１表面活性剤と分散性第２表面活性剤との比は重 量で約１：０．５〜約１：１．５である。 安定化したガス微小気泡は各種の方法により混合物から作成することができる 。一般に微小気泡は、第１表面活性剤と分散性第２表面活性剤とを溶剤と混合し て混合物を形成し、次いでこの混合物を超音波処理にかけて微小気泡を発生させ ることにより形成される。 第１表面活性剤と第２表面活性剤と溶剤とは当業者に周知された各種の方法に より混合することができる。これら各成分を混合する方法の例を以下の実施例１ および２に示す。これら実施例のそれぞれは単に例示の目的であって、本発明を 限定することを意図しない。 実施例１ 表面活性剤で安定化された微小気泡を作成する好適方法においては、約４．０ ｇの塩化ナトリウムを５０ｍＬの燐酸塩緩衝塩水溶液に溶解して約７．２のｐＨ を有する希釈剤を生成させる。約１．０ｇのスパン６０を希釈剤に添加すると共 に、得られた混合物を約１．５〜約２時間にわたり室温（約２５℃）で撹拌する 。約１ｍＬのツイーン８０をこの混合物に添加し、約１０〜約１５分間撹拌する 。 実施例２ 代案実施例においては、約１ｇの塩化ナトリウムを１ｇのスパーン４０粉末と この混合物の破砕により緊密混合し、約１０ｍＬの燐酸塩緩衝塩水溶液に分散さ せる。この溶液を約４０ｍＬの燐酸塩緩衝塩水溶液で希釈する。約１ｍＬのツイ ーン４０を希釈された溶液に添加し、室温（約２５℃）にて約１５分間にわたり 激しく撹拌する。 一般に、微小気泡は混合物を超音波処理に約１〜約３分間かけて発生する。微 小気泡を発生させるのに適する超音波装置はヒート・システムス・ウルトラソニ ックス・インコーポレーション社、ファーミングデール、ニューヨークからモデ ルＷ３８５として市販入手され、１／４インチの直径の音波発生プローブを備え る。他の適する超音波装置はブランソン・ウルトラソニックス・コーポレーショ ン社、ダンベリー、コネチカットおよびクレスト・ウルトラソニックス社、トレ ントン、ニュージャージーから市販入手しうる。微小気泡を発生するのに適する 超音波出力レベルは約１４０〜２００ワットである。好ましくは、混合物を１４ ０ワットの出力レベルにて３分間にわたり音波処理する。微小気泡は、混合物に おける溶解空気から混合物の超音波処理で生ずるキャビティションにより発生す る。当業者が了解するように、微小気泡はたとえば窒素のような混合物に含まれ うる他のガスから形成することもできる。 微小気泡を音波処理された混合物から分離するには、 混合物を別の装置（たとえば分離漏斗）に入れることができる。混合物を緻密な 溶剤層（すなわち水性の下相）と中間層（すなわち約１０μｍ未満の平均直径を 有する微小気泡のほぼ全部を含む緻密性が低い相）と約１０μｍより大の平均直 径を有するほぼ全部の気泡を含む上層とに分離させる。中間層はほぼ全部の上層 および下層から分離される。微小気泡相における微小気泡の濃度は、微小気泡相 から分離された溶剤もしくは下層の量に基づいて調整することができる。微小気 泡相における微小気泡の分離および回収後の濃度は一般に、微小気泡相１ｍＬ当 り約１×１０⁷〜約１×１０¹⁰個気泡の範囲である。 これら微小気泡をたとえば上記燐酸塩緩衝塩水溶液のような塩水溶液で洗浄す る。好ましくは微小気泡は、約１０〜約１５ｍＬの燐酸塩緩衝塩水溶液で洗浄さ れる。微小気泡と洗浄混合物とを再び重力により分離して、溶剤もしくは下層の 上方における表面活性剤安定化した微小気泡の層を集める。本発明により作成さ れた微小気泡は一般に約３日間にわたり室温（約２５℃）にて燐酸塩緩衝塩水溶 液中で安定に留まる。或いは、混合物を約４℃まで冷却して微小気泡の安定性を 長期化することもできる。 安定化した発生微小気泡の平均粒径は好ましくは約１０μｍ未満である。第１ 図に示すように、実施例２に示した方法によりスパン６０とツイーン８０との１ ：１混合物から発生した微小気泡の９９．４９％は約１０μｍ 未満の平均粒径を有し、微小気泡の約８０．８２％は約４μｍ未満の平均直径を 有した。平均粒径は３．５９μｍであった。 他面において本発明は、本発明の表面活性剤安定化した微小気泡を用いる超音 波画像コントラストを向上させる方法である。微小気泡はたとえば人間もしくは 動物の体内に静脈もしくは動脈注射して、たとえば微小気泡を含んだ身体の１部 における超音波画像のコントラストを実質的に変化させることができる。これら 微小気泡は、たとえば燐酸塩緩衝塩水溶液のような塩水溶液にほぼ均一分布させ た後、微小気泡を体内に注射することができる。 以下、限定はしないが特定実施例により本発明を一層詳細に説明する。 実施例Ａ 鎮静させたウッドチャックの頚静脈にカテーテルを挿入して、微小気泡混合物 の注入を可能にした。微小気泡を、燐酸塩緩衝塩水溶液と１．０ｇのスパーン６ ０と１．０ｍＬのツイーン８０との混合物から実施例２の方法にしたがって発生 させた。混合物における微小気泡の濃度は１．５８×１０⁸粒子／ｍＬであり、 混合物における微小気泡は３．５９μｍの平均粒子寸法を有した。注入前の微小 気泡混合物の温度は約２５℃（室温）とした。微小気泡混合物を含有する小壜を 緩和に撹拌して気泡の均一懸濁を確保した後、混合物を１８Ｇ注射針を介し注 射器に吸入した。比較の目的で、ウッドチャックに１ｍＬの燐酸塩緩衝塩水溶液 を比較として注射した。一連の微小気泡混合物の注入量、すなわち０．１ｍＬ、 ０．２ｍＬ）１．５ｍＬおよび２．０ｍＬをウッドチャックに注射し、次いでそ れぞれ１ｍＬの塩水溶液を注入して微小気泡混合物を注射器からフラッシュさせ た。ドップラー・スペクトル画像を、ウッドチャックの実験に際しウッドチャッ クのシーリアック（ceiliac）動脈の周囲に置かれたカフ・トランスジューサを 用いて記録した。記録されたドップラー・スペクトル画像は明かに、微小気泡が 肺の毛管床を通過しただけでなく心臓左心室の高圧環境にも耐えて投与量に応じ 強力に音波発生性であったことを示した。第２図に示すように、微小気泡混合物 の注入量を増加させるにつれ、トップラー ・スペクトル画像の振幅もしくは強 度も増大した。これに対し、比較の振幅は比較の注入量が増大してもほぼ同一に 留まった。 実施例Ｂ 微小気泡を燐酸塩緩衝塩水溶液と１．０ｇのスパン４０と１．０ｍＬのツイー ン４０との混合物から実施例２の方法により発生させた。５．４μｍの平均気泡 直径を有する集めた微小気泡を、実施例Ａに上記したと同様にしてニ−ジーラン ド産シロウサギに注射した。ウサギの大動脈を、ウサギの皮膚にわたり走査する ５ＭＨｚトランスジューサにより画像形成させた。ジアソニック・スペクトラ・ プラス超音波システムを用いて、信号をテー プ上に記録した。この信号強度は、本発明の表面活性剤安定化した微小気泡の注 入後に増大した。 実施例Ｃ 燐酸塩緩衝塩水溶液と１．０ｇのスパン４０と１．０ｍＬのツイーン４０との 混合物を実施例２の方法により作成した。６．４μｍの平均気泡直径を有する微 小気泡を発生させ、回収し、次いで実施例Ａに上記したようにウサギに注射した 。薬剤を注射する前および注射後のウサギ腎臓の着色ドップラー画像は、信号の 強度を増大させる本発明による表面活性剤安定化した微小気泡コントラスト剤の 有利な作用を明かに示す。 実施例Ｄ 肝臓腫瘍を引き起こす非ヒト肝炎ウィルスが自然感染したフィラデルフィア動 物園のコロニーからウッドチャックを入手した。肝臓腫瘍を有するウッドチャッ クを鎮静させ、頚静脈にカテーテルを入して本発明によるコントラスト剤の注射 を可能にした。ウッドチャックに燐酸塩緩衝塩水溶液と１．０ｇのスパーン６０ と１．０ｍＬのツイーン８０との実施例２の方法により混合された混合物から作 成した微小気泡を注入した。肝臓を、ウッドチャックの皮膚にわたり走査する７ ．５ＭＨｚトランスジューサにより画像形成した。ウッドチャックの注射前およ び注射後における肝臓の着色ドップラー画像は、本発明のコントラスト剤が脈管 肝臓腫瘍の画像を向上させたことを明かに示す。 本発明の表面活性剤安定化したガス微小気泡は、典型的な従来技術の手動撹拌 によるガス微小気泡の溶液よりも貯蔵および検体への注射後の両者にて一層安定 である。本発明の安定化したガス微小気泡はＢ−モード走査、正常ドップラーお よび着色ドップラーにて高度のエコジェニシティを示す。本発明の微小気泡はコ ントラスト剤として有用であり、超音波心臓検査法を含む超音波診断のための一 層良好なコントラスト解像を与える。 以上、本発明を詳細に説明したが、本発明はこれらのみに限定されず、その範 囲を逸脱することなく多くの改変をなしうることが当業者には了解されよう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (72)発明者 シェン，ペン アメリカ合衆国 カリホルニア州 94542 ヘイワード ヘミングウェイ コート 26967 (72)発明者 シンガル，シュルティ アメリカ合衆国 ペンシルバニア州 19072 ペン バリー ライタース ミル ロード 239 (72)発明者 ゴールドバーグ，バリー ビー アメリカ合衆国 ペンシルバニア州 19075 オールランド ランターン レー ン 1904

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 音波処理により内部に形成された安定化ガス微小気泡を有し、ガス微小気 泡が約１０μｍ未満の平均直径を有する超音波診断に使用するための混合物であ って、実質的に水性の溶剤と； 第１表面活性剤と； 第１表面活性剤とは異なる実質的に水分散性の第２表面活性剤と を含むことを特徴とする混合物。 ２． 前記第１表面活性剤が前記溶剤に対し実質的に可溶性である請求の範囲第 １項に記載の混合物。 ３． 前記第１表面活性剤が非イオン型である請求の範囲第１項に記載の混合物 。 ４． 前記第１表面活性剤がポリオキシエチレン脂肪酸エステルを含む請求の範 囲第１項に記載の混合物。 ５． 前記ポリオキシエチレン脂肪酸エステルがポリオキシエチレン ソルビタ ン モノラウレート、ポリオキシエチレン ソルビタン モノパルミテート、ポ リオキシエチレン ソルビタン モノステアレート、ポリオキシエチレン ソル ビタン トリステアレート、ポリオキシェチレン ソルビタン モノオレエート とおよびその混合物よりなる群から選択される請求の範囲第４項に記載の混合物 。 ６． 前記第２表面活性剤が前記溶剤に対し実質的に不 溶性である請求の範囲第１項に記載の混合物。 ７． 前記第２表面活性剤が非イオン型である請求の範囲第１項に記載の混合物 。 ８． 前記第２表面活性剤がソルビタン脂肪酸エステルを含む請求の範囲第１項 に記載の混合物。 ９． 前記ソルビタン脂肪酸エステルがソルビタン モノステアレート、ソルビ タン モノパルミテートおよびその混合物よりなる群から選択される請求の範囲 第８項に記載の混合物。 １０． 第１表面活性剤と第２表面活性剤との比が重量で約１：０．５〜約１： １．５の範囲である請求の範囲第１項に記載の混合物。 １１． 第１表面活性剤と第２表面活性剤とのモル比が約１：１．７である請求 の範囲第１項に記載の混合物。 １２． 前記微小気泡の濃度が約１×１０⁷ 〜約１×１０¹⁰粒子／混合物１ｍＬ である請求の範囲第１項に記載の混合物。 １３． 前記溶剤が塩水溶液を含む請求の範囲第１項に記載の混合物。 １４． 前記塩水溶液が約７．０〜約７．５の範囲のｐＨを有する燐酸塩塩水溶 液である請求の範囲第１３項に記載の混合物。 １５． 約１０μｍ未満の平均直径粒子を有する超音波診断に使用するための安 定化されたガス微小気泡を製造する方法であって： （ａ）溶剤と、第１表面活性剤と、前記第１表面活性剤とは異なる、分散性の第 ２表面活性剤とを混合して混合物を形成する工程； （ｂ）前記混合物を超音波処理にかけて前記混合物中に約１０μｍ未満の平均直 径を有する微小気泡を発生させる工程； （ｃ）前記微小気泡から前記溶剤の少なくとも１部を分離して前記微小気泡を集 める工程； を有することを特徴とする安定化したガス微小気泡の製造方法。 １６． 前記溶剤が前記混合物を形成するための塩水溶液を含む請求の範囲第１ ５項に記載の方法。 １７． 前記第１表面活性剤が前記溶剤に対し実質的に可溶性である請求の範囲 第１５項に記載の方法。 １８． 前記第２表面活性剤が前記溶剤に対し実質的に不溶性である請求の範囲 第１５項に記載の方法。 １９． 前記混合物を約１〜約３分間にわたり前記超音波処理にかける請求の範 囲第１５項に記載の方法。 ２０． 微小気泡を発生させる工程が前記微小気泡によりそれぞれ約１０μｍ未 満の直径を有する微小気泡からなる中間層を形成させることをさらに含み、前記 中間層は実質的に前記溶剤からなる下層と実質的に約１０μｍより大きい直径を 有する気泡からなる上層との間に位置する請求の範囲第１５項に記載の方法。 ２１． 前記微小気泡を集める工程が前記中間層を前記下層および前記上層から 分離することを含む請求の範囲第２０項に記載の方法。 ２２． 前記微小気泡を溶剤で洗浄する追加工程をさらに含む請求の範囲第１５ 項に記載の方法。 ２３． 前記混合物を第１温度まで冷却する追加工程をさらに含む請求の範囲第 １５項に記載の方法。 ２４． 前記第１温度が約４℃である請求の範囲第１５項に記載の方法。 ２５．溶剤と、第１表面活性剤と、前記第１表面活性剤とは異なる、分散性の第 ２表面活性剤との混合物であって、音波処理により内部に約１０μｍ未満の平均 直径を有する安定化したガス微小気泡が形成された混合物を形成する工程； 前記微小気泡から前記溶剤の少なくとも１部を分離して前記微小気泡を集める 工程； 前記微小気泡を体内に注射する工程； を有し、前記微小気泡は、内部に微小気泡を有する身体の１部における超音波画 像のコントラストを実質的に変化させるのに有効であることを特徴とする超音波 画像のコントラストを変化させる方法。 ２６． 前記微小気泡を体中に注射する前に、塩水溶液内に前記微小気泡を実質 的に均一分布させる工程をさらに含む請求の範囲第２５項に記載の方法。