JPH08503924A - 造影および治療用途の放射性標識ソマトスタチン誘導ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、治療試薬および治療ペプチド、放射線診断試薬および放射線診断ペプチド、ならびに標識された放射線診断剤を製造するための方法に関する。詳細には、本発明は、ソマトスタチンのペプチド誘導体およびアナログ、およびテクネチウム-９９ｍ（Ｔｃ-９９ｍ）で標識されたかかるペプチドの具体例、ならびに哺乳動物体内部位を造影するためのかかるペプチドを製造し、放射線標識し、かつ使用するための方法およびキットに関する。また、本発明は、レニウム-１８６（¹⁸⁶Ｒｅ）およびレニウム-１８８（¹⁸⁸Ｒｅ）で標識されたソマトスタチンのペプチド誘導体およびアナログ、ならびにかかるペプチドを製造し、放射線標識し、および哺乳動物体内で治療的に使用するための方法およびキットに関する。

Description

【発明の詳細な説明】 造影および治療用途の放射性標識ソマトスタチン誘導ペプチド 発明の背景 １．発明の分野 本発明は、治療用試薬および治療用ペプチド、放射線診断試薬および放射線診 断ペプチド、ならびに標識された放射線診断剤および放射線治療剤を製造するた めの方法に関する。詳細には、本発明は、ソマトスタチンのペプチド誘導体およ びアナログ、およびテクネチウム-９９ｍ（Ｔｃ-９９ｍ）で標識されたかかるペ プチドの具体例、ならびに哺乳動物体内部位を造影するためのかかるペプチドを 製造し、放射線標識し、かつ使用する方法およびキットに関する。また、本発明 は、レニウム-１８６（¹⁸⁶Ｒｅ）およびレニウム-１８８（¹⁸⁸Ｒｅ）で標識され たソマトスタチンのペプチド誘導体およびアナログ、ならびにかかるペプチドを 製造し、放射線標識し、哺乳動物体内で治療的に使用する方法およびキットに関 する。 ２．先行技術の記載 ソマトスタチンは、ヒトおよび他の哺乳動物の視床下部および膵臓で内生的に 産生されるテトラデカペプチドである。該ペプチドは、式： ［アミノ酸の一字略号は、ジー・ツベイ（Ｇ．Zubay）、バイオケミストリー（B iochemistry ）（第２版）、１９８８年、（マクミラン・パブリッシング：ニュ ー・ヨーク（MacMillan Publishing：NewYork）、３３頁に見い出すことができ る］を有する。このペプチドは、イン・ビボ（in vivo）において広範な種々の 生物学的作用を示す。それは、中枢神経系、視床下部、膵臓および胃腸管に生理 学的に作用することが知られている。 ソマトスタチンは、膵臓からのインスリンおよびグルカゴンの放出を阻害し、 視床下部からの成長ホルモンの放出を阻害し、かつ胃液の分泌を減じる。従って 、 ソマトスタチンは他の動物への臨床的および治療的適用を有する。天然のソマト スタチンは、ペプチダーゼにより急速に分解されてイン・ビボでの半減期が短い ため、有用性が限定されている。このような理由のため、改善されたイン・ビボ 安定性を有するソマトスタチンアナログが先行技術で開発されてきた。 フライディンガー（Ｆreidinger）、米国特許第４，２３５，８８６号は、ヒ トにおける数多くの疾病の治療に有用な環状ヘキサペプチドソマトスタチンアナ ログを開示している。 フライディンガー（Ｆreidinger）、米国特許第４，６１１，０５４号は、ヒ トにおける数多くの疾病の治療に有用な環状ヘキサペプチドソマトスタチンアナ ログを開示している。 ナット（Ｎutt）、米国特許第４，６１２，３６６号は、ヒトにおける数多く の疾病の治療に有用な環状ヘキサペプチドソマトスタチンアナログを開示してい る。 コイ（Ｃoy）ら、米国特許第４，８５３，３７１号は、合成オクタペプチドソ マトスタチンアナログを開示している。 コイ（Ｃoy）およびマーフィー（Ｍurphy）、米国特許第４，８７１，７１７ 号は、合成ヘプタペプチドソマトスタチンアナログを開示している。 コイ（Ｃoy）およびマーフィー（Ｍurphy）、米国特許第４，４８５，１０１ 号は、合成ドデカペプチドソマトスタチンアナログを開示している。 コイ（Ｃoy）ら、米国特許第４，９０４，６４２号は、合成オクタペプチドソ マトスタチンアナログを開示している。 ブラディー（Ｂrady）、欧州特許出願第８３１１１７４７．８号は、数多くの ヒト疾病の治療に有用な二環式ヘキサペプチドソマトスタチンアナログを開示し ている。 バウアー（Ｂauer）ら、欧州特許出願第８５８１０６１７．２号は、数多くの ヒト疾病の治療に有用なソマトスタチン誘導体を開示している。 エック（Ｅck）およびモロー（Ｍoreau）、欧州特許出願第９０３０２７６０ ．５号は、治療用オクタペプチドソマトスタチンアナログを開示している。 コックス（Ｃox）、国際特許出願ＰＣＴ/ＵＳ９２/０４５５９号は、２つのシ ステイン残基を含有する放射線標識ソマトスタチン誘導体を開示している。 中枢神経系、視床下部、膵臓および胃腸管を構成する細胞の細胞表面に発現し ている特異的受容体に結合することによりソマトスタチンはその作用を示す。こ れらの高親和性のソマトスタチン結合部位は、これらの組織より発生するほとん どの内分泌腺に活性な腫瘍の細胞表面に豊富に発現されているのが見い出されて いる。ソマトスタチンについての高親和性結合部位の発現は、これらの腫瘍細胞 のマーカーであり、ソマトスタチンとの特異的な結合は、イン・ビボの腫瘍細胞 を位置付け同定するのを開拓しうる。 チロシンアミノ酸（ＴyrまたはＹ）を含有するよう修飾されたソマトスタチン アナログを放射線標識する方法は、先行技術で公知である。 アルバート（Ａlbert）ら、英国特許出願第８９２７２５５．３号は、¹²³Ｉで 標識されたオクトレオタイド（octreotide）のごときソマトスタチン誘導体を用 いた放射線造影を開示している。 バッカー（Ｂakker）ら、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・メディシン（J．Ｎ ucl.Ｍed.）、第３１巻：１５０１-１５０９号（１９９０年）は、ソマトスタチ ンアナログの放射性ヨウ素化およびイン・ビボで腫瘍を検出するその有用性を開 示している。 バッカー（Ｂakker）ら、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・メディシン（J．Ｎ ucl.Ｍed.）、第３２巻：１１８４-１１８９（１９９１年）は、放射線標識ソマ トスタチンのイン・ビボでの放射線造影への有用性を教示している。 また、放射線核種キレート用基を含有するようペプチドを共有的に修飾するこ とによりソマトスタチンを放射線標識する方法が先行技術に開示されている。 アルバート（Ａlbert）ら、英国特許出願第８９２７２５５．３号は、アミノ 末端に結合したキレート用基を介して¹¹¹Ｉｎで標識されたオクトレオタイドの ごときソマトスタチン誘導体を用いた放射線造影を開示している。 アルバート（Ａlbert）ら、欧州特許出願ＷＯ ９１/０１１４４号は、成長因 子、ホルモン、インターフェロンおよびサイトカインに関連し、放射線標識キレ ート用基に共有結合した特異的認識ペプチドよりなる放射線標識ペプチドを用い た放 射線造影を開示している。 アルバート（Ａlbert）ら、欧州特許出願第９２８１０３８１．１号は、アミ ノ末端で結合したキレーターを有するソマトスタチンペプチドを開示している。 ボドゲン（Ｂodgen）およびモロー（Ｍoreau）、国際特許出願番号ＰＣＴ/Ｕ Ｓ９２/０１０２７号は、増殖性皮膚疾病を治療するための組成物および方法を 開示している。 ファグリア（Ｆaglia）ら、１９９１年、ジャーナル・オブ・クリニカル・エ ンドクライノロジー・アンド・メタボリズム（J．Ｃlin.Ｅndocrinol.Ｍetab.） 、第７３巻：８５０-８５６頁は、患者におけるソマトスタチン受容体の検出を 記載している。 ウェッケブーム（Ｋwekkeboom）ら、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・メディ シン（J．Ｎucl.Ｍed.）第３２巻：９８１頁（１９９１年）アブストラクト＃３ ０５は、¹¹¹Ｉｎでソマトスタチンアナログを放射線標識することに関する。 アルバート（Ａlbert）ら、第１２回アメリカン・ペプチド・シンポジウム（ １２th Ａmerican Ｐeptide Ｓymposium）:１９９１年、アブストラクトＬＭ１ ０は、¹¹¹Ｉｎ標識されたジエチレン-トリアミノペンタ酢酸誘導のソマトスタチ ンアナログの使用を記載している。 レニンニグ（Ｋrenning）ら、１９９２年、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・ メディシン（J．Ｎucl．Ｍed.）第３３巻：６５２-６５８頁は、［¹¹¹Ｉｎ］［ ＤＴＰＡ］オクタレオタイドを用いた臨床シンチグラフィーを記載している。 これらの方法は、腫瘍細胞上のソマトスタチンに対する高親和性結合部位の発 現に基づく放射線造影によって、イン・ビボの腫瘍細胞の検出を可能とするのに 容易に適用できる。高エネルギーガンマ放射線を放出する放射線核種は、ヒトま たは動物に注射した後のシンチグラフィーによって容易に検出できる。放射線造 影に有用であることが知られている種々の放射線核種としては、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ 、^99mＴｃ（Ｔｃ-９９ｍ）、¹¹¹Ｉｎ、¹²³Ｉまたは¹²⁵Ｉを包含する。放射性標 識ペプチドを用いた造影法の感度は、当該分野で公知の他の技術よりはるかに高 い。それは、放射性ペプチドの該特異的結合が、目的の細胞、例えば腫瘍細胞に わたっ て放射性シグナルを濃縮するからである。これは、通常小さく、成長が遅く通常 の方法によって検出が困難な内分泌性胃腸腫瘍に特に重要である。テクネチウム -９９ｍ（Ｔｃ-９９ｍ）で標識することは、このアイソトープの核特性および放 射性特性がそれを理想的なシンチグラフィー造影剤とするため有利である。Ｔｃ -９９ｍは、１４０ｋｅＶの単一光子エネルギーおよび約６時間の放射性半減期 を有し、⁹⁹Ｍｏ-^99mＴｃ発生機より容易に入手可能である。他の放射線核種は、 さらに長い（例えば、６０-７０時間の半減期を有する¹¹¹Ｉｎ）または毒性（例 えば、¹²⁵Ｉ）の有効半減期を有する。Ｔｃ-９９ｍは理想的な放射線標識試薬で あるにもかかわらず、本発明の先行技術では広範には使用されていない［例えば 、ランバーツ（Ｌamberts）、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・メディシン（Ｊ．Ｎ ucl.Ｍed.）、第３２巻：１１８９-１１９１頁（１９９１年）参照］。 また、ソマトスタチンおよび放射線標識ソマトスタチンアナログは、治療的に も用いらるうる。これらの適用には、レニウム・アイソトープ¹⁸⁶Ｒｅおよび¹⁸⁸ Ｒｅが特に有利である。 テイラー（Ｔaylor）ら、米国特許第５，０７３，５４１号は小細胞肺ガンを 治療する方法を開示している。 コイ（Ｃoy）およびマーフィー（Ｍurphy）、国際特許出願番号ＰＣＴ/ＵＳ９ ０/０７０７４号は、治療用途のソマトスタチンアナログを開示している。 スカリー（Ｓchally）ら、欧州特許出願番号ＥＰＡ９１１０４８４４５.２号 は、治療用途の環状ペプチドを開示している。 ボーマンジ（Ｂomanji）ら、１９９２年、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・メデ ィシン（J．Ｎucl.Ｍed.）第３３巻：１１２１-１１２４頁は、転移性ガン腫瘍 を造影するためのヨウ素化（Ｔyr-３）オクタレオタイドの使用を記載している 。 放射線標識蛋白にキレート剤を使用することは、先行技術で公知であって、ペ プチドをＴｃ-９９ｍで標識する方法は、（出典明示して本明細書の一部とみな す）同時係属出願米国特許出願０７/６５３，０１２号、０７/７５７，４７０号 、０７/８０７，０６２号、０７/８５１，０７４、０７/８７１，２８２号、０ ７/８８６，７５２号、０７/８９３，９８１号、０７/９５５，４６６号、０７/ ９７７，６２８ 号、０８/０１９，８６４号、０８/０４４，８２５号および０８/ 号、 ならびにＰＣＴ国際出願 ＰＣＴ/ＵＳ９２/００７５７号、ＰＣＴ/ＵＳ９２/１ ０７１６号、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０２３２０号、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０３６８７号、 ＰＣＴ/ＵＳ９３/０４７９４号、およびＰＣＴ/ＵＳ９３/ 号に開示さ れている。 フリッツバーグ（Ｆritzberg）、米国特許第４,４４４,６９０号は、２,３-ビ ス（メルカプトアセトアミド）プロパンノエートに基づく一連のテクネチウム- キレート用剤を記載している。 ガンソー（Ｇansow）ら、米国特許第４,４７２,５０９号は、Ｔｃ-９９ｍキレ ート-結合モノクローナル抗体の商品化法および精製法を教示している。 レノ（Ｒeno）およびボッチーノ（Ｂottino）、欧州特許出願第８７３００４ ２６.１号は、抗体をＴｃ-９９ｍで標識することを開示している。 パク（Ｐak）ら、欧州特許出願ＷＯ ８８/０７３８２号は、抗体をＴｃ-９９ ｍで標識するための方法を開示している。 ローデス（Ｒhodes）、セミナーズ・イン・ヌクレアー・メディシン（Ｓem.Ｎ ucl.Ｍed.）、第４巻：２８１-２９３頁（１９７４年）は、テクネチウム-９９ ｍでのヒト血清アルブミンの標識を教示している。 ホー（Ｋhaw）ら、ジャーナル・オブ・ヌクレアー・メディシン（Ｊ．Ｎucl. Ｍed.）、第２３巻：１０１１-１０１９頁（１９８２年）は、生物学的に活性な 巨大分子をＴｃ-９９ｍで標識する方法を開示している。 ビルネ（Ｂyrne）およびトールマン（Ｔolman）の上記刊行物は、Ｔｃ-９９ｍ を生物分子にカップリングさせる二官能性チオラクトンキレート剤を開示してい る。 コックス（Ｃox）ら、１９９１年、第７回インターナショナル・シンポジウム ・オン・ラジオファーマコロジー（７th Ｉnternational Ｓymposium on Ｒadio pharmacology）、アブストラクト、１６頁は、シンチグラフィーによるイン・ビ ボでの内分泌性腫瘍の放射線位置付けに、Ｔｃ-９９ｍ、¹³¹Ｉ-および¹¹¹Ｉｎ- 標識ソマトスタチンアナログを使用することを開示している。 ソマトスタチン受容体に結合し、ジスルフィド、またはジスルフィドがスルフ ヒドリル型に還元されたジスルフィドを形成する少なくとも２つのシステイン残 基を含有するソマトスタチン、ソマトスタチン誘導体、ソマトスタチンアナログ またはペプチドを直接標識する方法は、（出典明示して本明細書の一部とみなす ）同時係属米国特許出願０７/８０７，０６２号、１９９３年７月６日出願の現 在の米国特許第５，２２５，１８０号に開示されている。 治療的に用いられ、イン・ビボの腫瘍の造影に用いるための、Ｔｃ-９９ｍで 放射線標識した場合にはシンチグラフィー剤として向上したイン・ビボの安定性 を有する（ルーチン的に産業実施が可能で、通常に受け入れられるような）合成 ソマトスタチンアナログの要望が未だある。本発明により提供される小合成ソマ トスタチンアナログは、特にこの要望を満たす。 発明の概要 本発明は、治療およびシンチグラフィー造影適用のためのペプチド試薬である ソマトスタチンアナログを提供する。詳細には、本発明はテクネチウム-９９ｍ （Ｔｃ-９９ｍ）標識されたシンチグラフィー造影剤を製造するためのペプチド 試薬を提供する。本発明の該シンチグラフィー造影剤は、Ｔｃ-９９ｍ結合部位 に共有結合し、かつＴｃ-９９ｍで標識されたソマトスタチンアナログであるペ プチドよりなる。加えて、本発明は、治療的に有用なソマトスタチンアナログを 提供し、かかるアナログは¹⁸⁶Ｒｅおよび¹⁸⁸Ｒｅで放射線標識されている。 本発明により提供されるソマトスタチンアナログは、以下の式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈ、低級アルキルまたは置換アルキル、ア リールまたは置換アリール；Ｒ³およびＲ⁴は、各々独立して、Ｈ、低級アルキル または置換アルキル、アリールまたは置換アリール、あるいは、Ｒ³またはＲ⁴の いずれか一方はＮ（Ｒ¹⁰）₂で、ここに、各Ｒ¹⁰は、独立して、Ｈ、低級アルキ ルまたは１０個以下のアミノ酸のペプチド配列であって、ｍは０ないし３の整数 ；Ｘ¹およびＸ²は、各々独立して、Ｄ-またはＬ-アミノ酸であって、ｎおよびｑ は、 独立して、０もしくは１のいずれか；Ａ¹はＤ-もしくはＬ-ＰheまたはＤ-もしく はＬ-Ｔyrまたは２-ナフチルアラニン（Ｎal）あるいはそれらの置換誘導体；Ａ² はＤ-もしくはＬ-Ｔrpまたはそれらの置換誘導体；Ａ³はＤ-もしくはＬ-Ｌysま たはホモリジン（Ｈly)）４-アミノ-シクロヘキシルアラニン（Ａchxa）、４-ア ミノメチルフェニルアラニン（Ａmf）、Ｓ-（２-アミノエチル）システイン（Ａ ec）、Ｓ-（３-アミノプロピル）システイン（Ａpc）、Ｏ-（２-アミノエチル） セリン（Ａes）、Ｏ-（３-アミノプロピル）セリン（Ａsp）あるいはそれらの置 換誘導体；Ａ⁴はＴhr、Ｓer、Ｖal、Ｐhe、Ｌeu、Ｉleまたは２-アミノーイソ酪酸（ Ａib）、２-アミノ酪酸（Ａbu）、ノルバリン（Ｎva）またはノルロイシン（Ｎl e）、最も好ましくはＴhrまたはＶal；Ｘ³はＨ、-ＣＯＯＲ⁹、-ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ ＣＯＯＲ⁹、または-ＣＯＮ（Ｒ⁹）₂、ここに、各Ｒ⁹は、独立して、Ｈ、低級の 線状もしくは環状アルキルまたはそれらの置換誘導体、あるいは１０個以下の残 基のアミノ酸配列を有するペプチド；Ｒ⁵およびＲ⁵は、各々独立して、Ｈもしく は低級アルキルであって、ｐは０、１または２のいずれかであって；Ｒ⁷および Ｒ⁸は、独立して、Ｈ、低級アルキルまたは置換低級アルキル、あるいはＲ⁷およ びＲ⁸のいずれか一方は-ＣＯＯＨまたはその誘導体である］を有するソマトスタ チン受容体結合ペプチドである。好ましい具体例において、Ａ¹はＰheまたはＴy r、Ａ²はＴrp、あるいは最も好ましくはＤ-Ｔrp、Ａ³はＬysであってＡ⁴はＴhr またはＶalである。 本発明の第一の態様において、天然ソマトスタチンに比して向上したイン・ビ ボ安定性を有し、ヒトまたは他の動物における疾病または他の病気の緩和に治療 的に有用な本明細書記載のソマトスタチンアナログであるペプチド試薬が提供さ れる。 また、本発明は、医薬的上許容される担体中の本発明のソマトスタチン受容体 結合ペプチドよりなる医薬組成物も提供する。 また、本発明は、治療的に有効量の本発明のソマトスタチンを動物に投与する ことよりなる、動物、好ましくはヒトにおけるソマトスタチン関連疾病を緩和す る方法も提供する。好ましい具体例において、投与する該ソマトスタチンアナロ グの量は、約０.１ないし約５０ｍｇ/ｋｇ体重/日である。 本発明のもう一つの態様は、シンチグラフィー造影剤を製造するための試薬を 提供し、各試薬は、ソマトスタチンアナログであってＴｃ-９９ｍ結合部位に共 有結合されたペプチドよりなる。 共有結合されたＴｃ-９９ｍ結合部位へのＴｃ-９９ｍ連結の条件下にて、そこ に含まれるチオエーテル結合が安定であることは、本発明により提供されるソマ トスタチンアナログの有利な点である。対照的に、天然ソマトスタチンに共有結 合されたＴｃ-９９ｍ結合部位への、またはジスルフィド結合を有するソマトス タチンアナログへのＴｃ-９９ｍの連結は、生物学的活性の喪失を伴う該ジスル フィドの減少となりうる。また、かかる生物活性の喪失は、天然ソマトスタチン を用いたイン・ビボでも、ジスルフィド結合を有するいずれのソマトスタチンア ナログにも起こり得る。本発明の各ソマトスタチンアナログ中のチオエーテル架 橋は安定な共有結合であるため、本発明はイン・ビボにおける生物活性の同様な 失活を主題としない。 アミノ末端とシステイン保護用基との間の共有結合がエキソペプチダーゼによ る分解から該ペプチドを保護するように作用することは、本発明により提供され るソマトスタチンアナログのもう一つの利点である。 本発明のシンチグラフィー造影剤を製造するための本発明により提供される試 薬の第一の態様は、各試薬が式： Ｃ（ｐｇｐ）^s-（ａａ）-（ｐｇｐ）^s ［式中、（ｐｇｐ）^sはＨまたはチオール保護用基であって、（ａａ）はアミノ 酸である］ を有するＴｃ-９９ｍ結合部位に共有結合されたソマトスタチンアナログである ペプチドよりなる試薬である。好ましい具体例において、該アミノ酸はグリシン である。 第二の態様において、本発明は、各ペプチド試薬が、式： II． Ａ-ＣＺ（Ｂ）-［Ｃ（Ｒ'Ｒ''）］ｎ-Ｘ ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）-ＮＨＯＣ、（peptide）- ＯＯＣ またはＲ''''；ＢはＨ、ＳＨまたは-ＮＨＲ'''、-Ｎ（Ｒ'''）-）またはＲ'''' ；ＸはＳＨまたは-ＮＨＲ'''、-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）またはＲ''''；Ｒ'、 Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、独立して、Ｈまたは直線状もしくは分岐状鎖また は環状の低級アルキル；ｎは０、１または２であって；（１）Ｂが-ＮＨＲ'''ま たは-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）である場合、ＸはＳＨであってｎは１または２； （２）Ｘが-ＮＨＲ'''または-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）である場合、ＢはＳＨで あってｎは１または２；（３）ＢがＨまたはＲ''''である場合、ＡはＨＯＯＣ、 Ｈ₂ＮＯＣ、（peptid）-ＮＨＯＣ、（peptide）-ＯＯＣ、ＸはＳＨであってｎは ０または１；（４）ＡがＨまたはＲ''''である場合、ＢがＳＨであると、Ｘは- ＮＨＲ'''または-Ｎ（Ｒ'''）-（pepide）であって、ＸがＳＨであると、Ｂは- ＮＨＲ'''または-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）；（５）ＸがＨまたはＲ''''である 場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）-ＮＨＯＣ、（peptide）-ＯＯＣ であってＢはＳＨ；（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、 Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）-ＮＨＯＣ、（peptide）-ＯＯＣであってＢはＳＨであ ってｎは０であって；（７）ＺがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０では ない；ここに、該チオール基は還元型を意味する］ のＴｃ-９９ｍ結合部位に共有結合されたソマトスタチンアナログよりなる、哺 乳動物体内部位を造影するためにＴｃ-９９ｍ標識されうるペプチド試薬を提供 する。 もう一つの具体例において、本発明は、各ペプチド試薬が、式： ［本発明の目的には、この構造を有する放射線標識結合部位は、ピコリン酸（Ｐ ic）に基づく部位という］ または ［式中、ＸはＨまたは保護用基；（amino acid）はいずれかのアミノ酸であって 、該放射線標識結合部位は該ペプチドに共有結合されている］ のＴｃ-９９ｍ結合部位に共有結合されたソマトスタチンアナログよりなる、哺 乳動物体内部位を造影するためにＴｃ-９９ｍで標識されうるペプチド試薬を提 供する。本発明の目的には、この構造を有する放射線標識結合部位はピコリルア ミン（Ｐica）-に基づく部位という。好ましい具体例において、該アミノ酸はグ リシンであってＸはアセトアミドメチル保護用基である。 さらにもう一つの本発明の具体例は、各ペプチド試薬がビスアミノビスチオー ルＴｃ-９９ｍ結合部位であるＴｃ-９９ｍ結合部位に共有結合されたソマトスタ チンアナログよりなる、哺乳動物体内部位を造影するためにＴｃ-９９ｍで標識 されうるペプチド試薬を提供する。本発明の本具体例おける該ビスアミノビスチ オールＴｃ-９９ｍ結合部位は、式： ［式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅であり得；各（ｐｇｐ）^sは 、独立して、チオール保護用基またはＨであり得；ｍ、ｎおよびｐは、独立して 、２または３；Ａは線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それら の組合せまたは置換誘導体であって；Ｘはペプチド］；または ［式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；ｍ、ｎおよびｐは、独立 して、２または３；Ａは線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、そ れらの組合せまたは置換誘導体；ＶはＨまたはＣＯ-ペプチド；Ｒ'はＨまたはペ プチド；但し、ＶがＨである場合、Ｒ'はペプチドであって、Ｒ'がＨである場合 、 Ｖはペプチドを意味する］を有する。本発明の目的には、これらの構造を有する 放射線標識結合部位は、「ＢＡＴ」部位という。 また、本発明は、本発明のペプチド試薬とＴｃ-９９ｍとの錯体であるシンチ グラフィー造影剤、ならびに本発明の該ペプチド試薬をＴｃ-９９ｍで放射線標 識する方法も提供する。本発明により提供される放射線標識錯体は、還元剤の存 在下に本発明のペプチド試薬をＴｃ-９９ｍと反応させることにより形成される 。好ましい還元剤は、限定されるものでないが、亜ジチオン酸イオン、第一スズ イオンおよび第一鉄イオンを包含する。また、本発明の錯体は、本明細書に提供 したごとき予め還元したＴｃ-９９ｍ錯体のリガンド交換により本発明の該ペプ チド試薬をＴｃ-９９ｍで標識することによっても形成される。 また、本発明は、Ｔｃ-９９ｍで放射線標識された本発明の該ペプチド試薬で あるシンチグラフィー造影剤を製造するためのキットも提供する。本発明の該ペ プチド試薬をＴｃ-９９ｍで標識するためのキットは、予め定めた量の本発明の ペプチド試薬と、該試薬をＴｃ-９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とを含 有する密閉バイアルよりなる。 本発明は、イン・ビトロで化学合成することにより本発明のペプチド試薬を製 造する方法を提供する。好ましい具体例において、固相ペプチド合成法によって ペプチドが合成される。 本発明は、イン・ビボのガンマシンチグラフィー造影を得ることにより哺乳動 物体内部位を造影するためのＴｃ-９９ｍ標識ペプチド試薬であるシンチグラフ ィー造影剤を用いる方法を提供する。これらの方法は、有効診断量の本発明のＴ ｃ-９９ｍ標識ペプチド試薬を投与し、次いで、哺乳動物体内部位に局在した該 Ｔｃ-９９ｍ標識により放出されるガンマ線を検出することよりなる。 本発明は、放射線標識結合部位に共有結合した本発明の該ソマトスタチン受容 体結合ペプチドよりなる放射線標識ソマトスタチン受容体結合剤を製造するため の試薬を提供する。好ましい具体例において、該試薬はＴｃ-９９ｍで放射線標 識される。もう一つの好ましい具体例において、該試薬は¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅ で放射線的標識される。 また、本発明は、治療的に有効な量の本発明の放射線標識ソマトスタチン結合 ペプチド試薬を動物に投与することよりなる、動物、好ましくはヒトにおけるソ マトスタチン-関連疾病を緩和させる方法も提供する。好ましい具体例において 、該試薬は¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅで放射線標識される。 また、本発明の試薬は、多価結合部位よりなっていてもよい。本発明の多価結 合部位は、ソマトスタチンアナログペプチドまたはＴｃ-９９ｍ結合部位に共有 結合しうる少なくとも２つの同一リンカー官能基よりなる。好ましいリンカー官 能基は、第一級もしくは第二級アミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基またはチ オール反応性基である。好ましい具体例において、該多価結合部位は、ビス-ス クシンイミジルメチルエーテル（ＢＳＭＥ）、４-（２，２-ジメチルアセチル） 安息香酸（ＤＭＢＡ）、Ｎ-［２-（Ｎ’，Ｎ’-ビス（２-スクシンイミドエチル ）アミノエチル）］-Ｎ⁶，Ｎ⁹-ビス（２-メチル-２-メルカプトプロピル）-６， ９-ジアザノナンアミド（ＢＡＴ-ＢＳ）、トリス（シクシンイミジルエチル）ア ミン（ＴＳＥＡ）、ビス-スクシンイミドヘキサン（ＢＳＨ）、４-（Ｏ-ＣＨ₂- ＣＯ-Ｇly-Ｇly-Ｃys.amide）アセトフェノン（ＥＴＡＣ）またはその誘導体よ りなる。 本発明の特に好ましい具体例は、以下のある種の好ましい具体例および請求の 範囲のさらに詳細な記載から明らかとなるであろう。 発明の詳細な説明 本発明は、哺乳動物体内部位を造影するための放射線標識造影剤を製造するた めのペプチド試薬を提供する。本発明の該ペプチド試薬は、各々が、Ｔｃ-９９ ｍ結合部位に共有結合されたソマトスタチンアナログよりなる。また、本発明は 、向上したイン・ビボ安定性を有し、かつヒトまたは他の動物における疾病また は他の病気を緩和させるのに有用であるソマトスタチンアナログも提供する。 本発明は、動物、好ましくはヒトにおける疾病または他の病気を緩和させるた めに本発明のソマトスタチンアナログを用いる方法を提供する。これらの疾病お よび病気は、限定されるものではないが、糖尿病および糖尿病性網膜障害、肝硬 変および肝炎ウイルス感染、出血性潰瘍および他の胃腸出血、膵炎、中枢神経系 不全、内分泌不全、アルツハイマー病、先端巨大症、および不適当なレベルの成 長ホルモンのイン・ビボにおける産生に関連する疾病ならびに他の病気、ならび にガン、特にその成長が成長ホルモン産生に依存または影響されるそのようなガ ンを包含する。本発明により提供されるソマトスタチンアナログの用量は、前記 または他の疾病の治療にルーチン的に用いられる天然ソマトスタチン用量と同一 であってもよく、あるいはイン・ビボ半減期がさらに長いためより少ない量の本 発明の化合物を投与してもよい。 そのアイソトープの核特性および放射性特性がそれを理想的なシンチグラフィ ー造影剤とするため、Ｔｃ-９９ｍで標識することは本発明の利点である。この アイソトープは、１４０ｋｅＶの単一光子エネルギーおよび約６時間の放射能半 減期を有し、⁹⁹Ｍｏ-^99mＴｃ発生機から容易に入手できる。先行技術にて公知の 他の放射性核種は、（例えば、６７．４時間の半減期を有する¹¹¹Ｉｎのように ）かなり長い有効半減期を有するか、あるいは（例えば、¹²⁵Ｉのように）毒性 である。 一方、本発明の放射線治療の具体例は、有利には、¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅで標 識される。かかる具体例は、限定されるものではないが、当該腫瘍を構成する細 胞の細胞表面上のソマトスタチン受容体の発現を介してソマトスタチンまたはソ マトスタチンアナログに結合しうる悪性または良性の腫瘍の成長により特徴付け られるガンおよび他の疾病を含めた、動物、好ましくはヒトにおけるソマトスタ チン関連疾病または他の病気の治療に有用である。 該Ｔｃ-９９ｍ結合部位と、本発明により提供されるチオール保護用基［（ｐ ｇｐ）^s］に共有結合されたチオールを含有するかかる部位に共有結合されたペ プチドとにおいて、該チオール-保護用基は同一または異なっていてもよく、限 定されるものではないが： -ＣＨ₂-アリール（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオ キシ置換フェニル）； -ＣＨ-（アリール）₂、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアル キルオキシ置換フェニル）； -Ｃ-（アリール）₃、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキ ルオ キシ置換フェニル）； -ＣＨ₂-（４-メトキシフェニル）； -ＣＨ-（４-ピリジル）（フェニル）₂； -Ｃ（ＣＨ₃）₃ -９-フェニルフルオレニル； -ＣＨ₂ＮＨＣＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルもしくはアリール）； -ＣＨ₂-ＮＨＣＯＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルもしくはアリール）； -ＣＨ₂-Ｓ-ＣＨ₂-フェニル でもよい。 好ましい保護用基は、式-ＣＨ₂-ＮＨＣＯＲを有し、ここにＲは、１ないし８ 個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニルあるいは低級アルキル、ヒドロキ シル、低級アルコキシ、カルボキシもしくは低級アルコキシカルボニルで置換さ れたフェニルである。最も好ましい保護用基はアセトアミドメチル基である。 各ソマトスタチン受容体結合ペプチドを包含する本発明の具体例は、アミノ酸 配列よりなる。本発明で用いるごときアミノ酸なる語は、天然に生じるまたは他 の全てのＬ-およびＤ-アミノ酸を包含させることを意図する。本発明により提供 されるソマトスタチン受容体結合ペプチドよりなる試薬は、限定されるものでは ないが、以下の本発明のペプチド具体例の例示的な例を包含する： 本明細書中に用いるごとく、以下のアミノ酸およびアミノ酸アナログは以下の 略号により示されることとする：ＨcyはＬ-ホモシステイン ラクトンのアルカリ 加水分解により製造されるホモシステイン；Ｈhcはホモホモシステイン；Ｐenは ペニシルアミン；Ｍobはスルフヒドリル保護用基４-メトキシベンジル；Ａcmは スルフヒドリル保護用基アセトアミドメチル；［ＢＡＭ］は（Ｎ¹，Ｎ⁴-ビス（ ２-メルカプト-２-メチルプロピル）-１，４，１０-トリアザデカン；Ａibはア ミノイソ酪酸；Ｎalは２-ナフチルアラニン；Ａinは２-アミノインダン酸；Ｈly はホモリジン；Ａchxaは４-アミノ-シクロヘキシルアラニン；Ａmfは４-アミノ メチルフェニルアラニン；ＡecはＳ-（２-アミノエチル）システイン；ＡpcはＳ -（３-アミノプロピル）システイン；ＡesはＯ-（２-アミノエチル）セリン；Ａ psはＯ-（３-アミノプロピル）セリン；Ａbuは２-アミノ酪酸；Ｎvaはノルバリ ン；Ａcaは６-アミノカプロン酸であって；Ｎleはノルロイシンである。全ての 天然に生ずるアミノ酸は、（ジー・ツベイ（Ｇ．Ｚubay）、バイオケミストリー （Ｂiochemistry）、（第２版）、１９８８年）（マクミラン・パブリッシィン グ：ニュー・ヨーク （ＭacＭillan Ｐublishing：Ｎew Ｙork）３３頁に見い出される）標準的な略 号を用いて省略した。Ｔ（ＣＨ₂ＯＨ）は、ノイゲバウアー（Ｎeugebauer）らの 工程（１９９０年、ペプチズ：プロシーディングズ・オブ・ジ・１１th・アメリ カン・ペプチド・シンポジウム（Ｐeptides；Ｐroceedings of the １１th Ａme ricanＰeptide Ｓymposium）１０２０-２１頁）を用いて該ペプチドに導入され たスレオニノール残基を示し、ここに該アミノ酸の該カルボキシル基は第一級ア ルコールに還元されている。 また、システイン残基またはその誘導体の側鎖硫黄原子と保護用基または他の 残基との間の共有結合に下線を引くことによる表示の慣用を本明細書に用いるこ とも当業者により理解されよう。 本発明のソマトスタチンアナログペプチドは、イン・ビトロ（in vitro）で化 学的に合成できる。本発明のペプチドは、一般的にペプチドシンセサイザー上で 有利に製造できる。本発明の該ペプチドは、当業者によく知られた技術を用いて 、イン・ビトロの化学合成の間に該放射線結合部位が共有結合させて合成できる 。共有架橋の特定部位を決定できるため、合成の間に該放射線標識結合部位に共 有結合されているかかるペプチドが有利である。 本発明の放射線標識結合部位は、ペプチド合成の間に標的ソマトスタチンアナ ログペプチドに導入することもできる。ピコリン酸よりなる具体例［（Ｐic-） ；例えば、Ｐic-Ｇly-Ｃys（保護用基）-］については、合成における最後の（ すなわち、アミノ-末端）残基として該放射線標識結合部位を合成できる。加え て、ピコリン酸を含有する放射線標識結合部位を、リジンのε-アミノ基に共有 結合させて、例えば、αＮ（Ｆmoc）-Ｌys-εＮ［Ｐic-Ｇly-Ｃys（保護用基） ］を得ることができ、これは該ペプチド鎖のいずれかの適当な位置に導入するこ とができる。この配列は、該標的ソマトスタチンアナログペプチドに簡単な様式 にて導入できるため特に有利である。 同様に、該ピコリルアミン（Ｐica）を含有する放射線標識結合部位［-Ｃys（ 保護用基）-Ｇly-Ｐica］は、該ペプチド鎖のカルボキシル末端に配列［-Ｃｙｓ （保護用基）-Ｇly-］を含有させることによってペプチド合成の間に製造で きる。該樹脂からの該ペプチドの切断の後に、該ペプチドのカルボキシル末端を 活性化させ、ピコリルアミンにカップリングされる。この合成経路は、反応性側 鎖官能基がマスクされた（保護された）ままであって、しかも該ピコリルアミン の連結の間に反応しないことを要する。 また、本発明は、ソマトスタチンアナログであって、Ｔｃ-９９ｍで標識され うるビスアミンビスチオール（ＢＡＴ）キレーターを導入する小合成ペプチドも 提供する。 本発明は、本発明の該キレート基がアミノ酸Ａ¹、Ａ²、Ａ³またはＡ⁴のアミノ 酸側鎖からなる官能基に共有結合させない点を除いては、ペプチドのいずれかの 適当な官能基への共有結合を介して、実質的にいずれのペプチド中の位置へもこ れらのキレーターを導入することを提供する。 本発明の試薬と放射性テクネチウムとの錯体形成においては、該テクネチウム 錯体、好ましくはＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸の塩を還元剤の存在下で該試薬 と反応させる。好ましい還元剤としては、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオン および第一鉄イオンが挙げられ；最も好ましい還元剤は塩化第一スズである。か かる錯体を製造する手段は、都合良くは、予め定めた量の標識させるべき本発明 の試薬と、該試薬をＴｃ-９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とを含有する 密閉バイアルよりなるキット形態で提供される。別法として、該錯体は、本発明 の試薬と、テクネチウムおよびトランスファーリガンドとして公知の他の化合物 の予め形成させたラービル錯体とを反応させることによっても形成させうる。こ のプロセスは、リガンド交換として公知であって、当業者によく知られている。 該ラービル錯体は、例えばタルトラート、シトラート、グルコナートまたはマン ニトールのようなトランスファーリガンドを用いて形成させうる。本発明に有用 なＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸塩の中には、ナトリウム塩のごときアルカリ金 属塩、またはアンモニウム塩もしくは低級アルキルアンモニウム塩が包含される 。 本発明の好ましい具体例において、テクネチウム標識ペプチドを製造するため のキットが提供される。Ｔｃ-９９ｍで該ペプチドを標識するのに十分な量の、 塩化第一スズのごとき還元剤を含有するバイアルに、適量の該ペプチド試薬を導 入する。（例えば、タルトラート、シトラート、グルコナートまたはマンニトー ルのごとき）記載した適量のトランスファーリガンドも含有してもよい。また、 該キットは、例えば、浸透圧を調整するための医薬上許容される塩、緩衝液、保 存料等のごとき通常の医薬調整物質も含有しうる。該キットの成分は、液状、凍 結または乾燥形態としうる。好ましい具体例においては、凍結乾燥形態にてキッ ト成分が提供される。 本発明による放射線標識造影剤は、適量のＴｃ-９９ｍまたはＴｃ-９９ｍ錯体 を該バイアルに添加して、後記する実施例２記載の条件下に反応させることによ って製造しうる。 本発明により提供される放射性標識シンチグラフィー造影剤は、適量の放射能 を有して提供される。Ｔｃ-９９ｍ放射性錯体の形成においては、ｍＬ当たり約 ０．０１ミリキュリー（ｍＣｉ）ないし１００ｍＣｉの濃度の放射線能を含有す る溶液中で放射性錯体を形成させるのが一般的に好ましい。 本発明により提供される該造影剤は、当該器官における障害を診断するために 腎臓のごとき器官を視覚化するのに用いることができ、また、腫瘍、特に胃腸の 腫瘍、骨髄腫、小細胞肺癌腫および他のアプドーマ（ＡＰＵＤoma）、甲状腺髄 質癌腫および下垂体腫瘍のごとき内分泌系腫瘍、髄膜腫および星細胞腫のごとき 脳腫瘍、ならびに前立腺、乳房、結腸および卵巣の腫瘍を造影することもできる 。本発明においては、該Ｔｃ-９９ｍ標識ペプチド試薬は単一ユニット注射用量 にて投与する。本発明により提供される該Ｔｃ-９９ｍ標識ペプチド試薬は、水 性セーライン媒質のごとき静脈内注射用のいずれの通常の媒質、または血液血漿 媒質にても静脈内投与しうる。一般的に、投与すべき該ユニット用量は、約０． ０１ｍＣｉないし約１００ｍＣｉ、好ましくは１ｍＣｉないし２０ｍＣｉの放射 能を有する。ユニット投与量で注射すべき該溶液は、約０．０１ｍＬないし約１ ０ｍＬである。静脈内投与後に、数分以内にイン・ビボでの造影を起こすことが できる。しかしながら、所望により、該放射線標識ペプチドを患者に注射した後 数時間またはそれより長い時間においてさえ、造影を起こすことができる。ほと んどの場合においては、投与された量の十分な量が約０．１時間以内に造影すべ き領域に 蓄積し、シンチフォトを行うことが可能となろう。診断目的のシンチグラフィー 造影のいずれの常法も、本発明において利用できる。 本発明の該ソマトスタチン受容体結合ペプチドを臨床的に用いて、ある種の型 の腫瘍、特にソマトスタチン受容体を発現する腫瘍の退行を促進しうる。また、 本発明の該ソマトスタチンアナログペプチドを用いて、アプドーマのごとき、あ る種のガンをしばしば伴うホルモン過分泌を減じることもできる。治療剤として 用いる本発明のペプチドは、約０．１ないし約４９ｍｇ/ｋｇ体重/日の用量範囲 にて、医薬上許容される担体中にて静脈内、筋肉内または経口、およびを包含す るいずれの適当な経路でも投与することもできる。 また、本発明は、前記したある種の腫瘍の放射線治療に用いられうるレニウム -１８６またはレニウム-１８８で放射線標識したペプチドも提供する。この目的 には、約１０ｍＣｉないし約２００ｍＣｉの放射性アイソトープの量をいずれの 適当な臨床経路、好ましくは静脈内注射を介しても投与しうる。 これらの化合物を製造し標識する方法は、以下の実施例でさらに十分に説明す る。これらの実施例は、前記した方法のある種の態様および有利な結果を説明し 、例示的なものであって限定するものではない。 実施例１ 固相ペプチド合成法 固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ）は、ジシクロヘキシルカルボジイミド/ヒド ロキシベンゾトリアゾールまたは２-（１Ｈ-ベンゾ-トリアゾール-１-イル）-１ ，１，３，３-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート/ヒドロキシ ベンゾトリアゾール（ＨＢＴＵ/ＨＯＢＴ）でカップリングした９-フルオレニル メチルオキシカルボニル（Ｆmoc）アミノ末端保護と、カルボキシル末端酸には ｐ-ヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン（ＨＭＰ）樹脂、あるいは カルボキシル末端アミドにはリンク（Ｒink）アミド樹脂とを用いて、アプライ ド・バイオシステムズ（Ａpplied Ｂiosystems）・モデル４３１Ａペプチドシン セサイザーを用いた０．２５ミリモルスケールで行った。樹脂結合生成物は、ト リフルオロ酢酸、所望により１００：５：５：２．５：２の比の水、チオアニソ ール、エタンジチオール、 およびトリエチルシランよりなる溶液を用いて室温にて１．５ないし３時間ルー チン的に切断した。 適当には、樹脂に結合した遊離Ｎ-末端アミノペプチドをＮＭＰ（Ｎ-メチルピ ロリジノン）中の２０％v/v無水酢酸で３０分間処理することにより、Ｎ-末端ア セチル基を導入した。適当には、適当な２-ハロ-酢酸をＳＰＰＳの間にカップリ ングさせるべき最後の残基として用いるか、樹脂に結合したＮ-末端遊離アミノ ペプチドを、ＮＭＰ中の２-ハロ-酢酸/ジイソプロピルカルボジイミド/Ｎ-ヒド ロキシスクシンイミドまたはＮＭＰ中の２-ハロ-無水酢酸/ジイソプロピルエチ ルアミンの一方で処理するかのいずれかにより、２-クロロアセチルおよび２-ブ ロモアセチル基を導入した。適当には、０．５-１．０ｍＭのＥＤＴＡを含有す るリン酸または重炭酸緩衝液（ｐＨ８）中の０．１-１．０ｍｇ/ｍＬ溶液を撹拌 し、続いて酢酸で酸性化し、凍結乾燥してＨＰＬＣ精製することにより２-ハロ アセチル化ペプチドを環化させた。適当には、Ｃys-Ｃysジスルフィド結合の環 化は、０．００６ＭのＫ₃Ｆｅ（ＣＮ）₆のアリコート含有するｐＨ７の緩衝液中 の０．１ｍｇ/ｍＬの前駆体無システインチオールペプチドで、安定な黄色が消 えなくなるまで処理することによりＣys-Ｃysジスルフィド結合の環化を行った 。過剰量のオキシダントを過剰量のシステインで還元し、その混合物を凍結乾燥 し、次いでＨＰＬＣにより精製した。 適当には、ペプチド合成の最後における残基としてピコリン酸を用いることに より「Ｐic」基を導入した。適当には、ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ -ヒドロキシスクシンイミドを用いて、ピコリルアミンを前駆体ペプチドに結合 させることにより「Ｐica」基を導入した。適当には、ＳＰＰＳの間にカップリ ングさせるべき最後の残基として適当なＢＡＴ酸を用いるか、該樹脂に結合した Ｎ-末端遊離アミノペプチドをＮＭＰ中のＢＡＴ酸/ジイソプロピルカルボジイミ ド/Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドで処理するかのいずれかによりＢＡＴリガンド を導入した。適当には、ＤＭＦ、ＮＭＰもしくはＣＨ₂Ｃｌ₂中のジイソプロピル カルボジイミド/Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの混合物またはＨＢＴＵ/ＨＯＢ ｔの混合物でペプチドカルボキシレートを最初に活性化させ、続いてジイソプロ ピ ルエチルアミンの存在下にカップリングさせることにより［ＢＡＭ］を該ペプチ ドに結合させ；カップリングさせた後に、該結合物を前記のごとく脱保護化した 。 適当には、単一のチオール含有ペプチド（５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中 の５ないし５０ｍｇ/ｍＬ）ｐＨ８）を、予めアセトニトリルに溶解した０．５ モル当量のＢＭＭＥ（ビス-マレイミドメチルエーテル）と室温にて約１-１８時 間反応させることによりＢＳＭＥ付加物を製造した。その溶液を濃縮し、その生 成物をＨＰＬＣにより精製した。適当には、ＢＭＭＥの代わりにビス-マレイミ ドヘキサンを用いてＢＳＨ付加物を製造した。 適当には、（ＤＭＦ中の１０ないし１００ｍｇ/ｍＬのペプチド濃度、あるい は５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８）/アセトニトリルまたはＴＨＦ 中の５ないし５０ｍｇ/ｍＬのペプチド濃度の）単一のチオール含有ペプチドを 、予めアセトニトリルまたはＤＭＦに溶解した０．３３モル当量のＴＭＥＡ（ト リス（２-マレイミドメチル）アミン；（出典明示して本明細書の一部とみなす ）同時係属出願米国特許出願第０７/９５５，４６６号参照）と、１モル当量の トリエタノールアミンの存在または不存在下、室温にて約１-１８時間反応させ ることによりＢＳＭＥ付加物を製造した。付加物を含有するかかる反応混合物を 濃縮し、次いで、該付加物をＨＰＬＣを用いて精製した。 適当には、（５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ８）/アセトニトリルまたは ＴＨＦ中の２ないし５０ｍｇ/ｍＬペプチドの濃度の）単一のチオール含有ペプ チドを、予めアセトニトリルまたはＴＨＦに溶解した０．５モル当量のＢＡＴ- ＢＭ（Ｎ-［２-（Ｎ'，Ｎ-ビス（２-マレイミドエチル）アミノエチル）］-Ｎ⁹- （ｔ-ブトキシカルボニル）-Ｎ⁶，Ｎ⁹-ビス（２-メチル-２-トリフェニルメチル チオプロピル）-６，９-ジアザノナンアミド；（（出典明示して本明細書の一部 とみなす）同時係属出願米国特許出願第０８/０４４，８２５号参照）と室温に て約１-１８時間反応させることにより製造した。次いで、その溶液を蒸発乾固 させ、１０ｍＬのＴＦＡおよび０．２ｍＬのトリエチルシランで１時間処理する ことにより［ＢＡＴ-ＢＳ］-ペプチド結合物を脱保護した。その溶液を濃縮し、 エーテルでその生成付加物を沈殿させ、次いでＨＰＬＣにより精製した。 適当には、（ＤＭＦ中の１０ないし１００ｍｇ/ｍＬの）単一のチオール含有 ペプチドを、０．５モル当量のＴＭＥＢ（実施例２に記載）および１モル当量の トリエタノールアミンと室温にて約１２-１８時間反応させることによりＤＭＡ Ｂ付加物を製造した。次いで、ＤＭＦを真空中にて留去し、その生成物をＨＰＬ Ｃにより精製した。 後記の表Ｉの脚注に記載した条件下における分取用高圧液体クロマトグラフィ ー（ＨＰＬＣ）により粗ペプチドを精製した。次いで、溶出画分を凍結乾燥し、 各生成物の同定を高速原子衝撃質量分析（ＦＡＢＭＳ）または電子スプレー質量 分析（ＥＳＭＳ）により確認した。 以下のソマトスタチンアナログは、本発明に提供したごとく合成し、かかる合 成生成物はＦＡＢＭＳ（括弧内のＭＨ⁺値）により同定した： 実施例２ Ｔｃ-９９ｍで放射線標識する一般的方法 実施例２のごとく製造した０．１ｍｇのペプチドを、０．１ｍＬの水、もしく は５０/５０のエタノール/水、あるいはリン酸緩衝セーライン（ＰＢＳ）または ５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝５、６または７．４）に溶解した。２ ００ｍＣｉまで含有するＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウム１．０ｍＬで グルコスカン・バイアル（Ｇlucoscan vial）（イー・アイ・デュポン・ドゥ・ ヌムール社（Ｅ．Ｉ．ＤuＰont de Ｎemours，Ｉnc．）製）を復元することによ りＴｃ-９９ｍグリセプテートを製造し、室温にて１５分間放置した。次いで、 ２５μｌのＴｃ-９９ｍグリセプテートを該試薬に添加し、室温または１００℃ にて１５-３０分間反応を進行させ、次いで０．２μｍのフィルターを通して濾 過した。 該Ｔｃ-９９ｍ標識ペプチド試薬の純度は、表Ｉの脚注に記載した条件を用い たＨＰＬＣにより測定した：各放射線標識ペプチドをウォーターズ・デルタ・パ ック（Ｗaters Ｄelta Ｐak）ＲＰ-１８．５μ、４．６ｍｍ×２２０ｍｍ分析用 カラムに付し、１ｍＬ/分に等しい溶媒流速で該ペプチドを溶出した。グラジエ ント溶出は、１０-２０分間の過程にわたり、１００％の溶媒Ａ（０．１％のＣ Ｆ₃ＣＯＯＨ/Ｈ₂Ｏ）で始め、１００５溶媒Ｂ₉₀（０．１％のＣＦ₃ＣＯＯＨ/９ ０％のＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏ）で終了して行った。放射性成分は、積算レコーダーに つなげた放射線検出機により検出した。これらの条件下にては、下記の表Ｉに示 すごとく、Ｔｃ-９９ｍグリセプテートおよびＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸ナト リウムが１ないし４分の間に溶出する一方、Ｔｃ-９９ｍ標識ペプチドははるか に後の時間に溶出する。 実施例３ ［¹²⁵Ｉ-Ｔyr¹¹］ソマトスタチン-１４の ＡＲ４２Ｊラット膵臓腫瘍細胞膜への結合阻害 放射線標識ソマトトロピンアナログのソマトトロピン受容体含有細胞膜への結 合を阻害するソマトトロピンアナロクの能力をアッセイすることにより、本発明 の種々のかかるアナログのイン・ビトロでのソマトトロピン受容体への結合能力 を明らかにした。ソマトトロピン受容体を発現するラット膵臓腫瘍細胞系ＡＲ４ ２Ｊを、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）および８ｍＭのグルタミンを補給したダ ルベッコ最小必須培地（ＤＭＥＭ）中、５％ＣＯ₂加湿下、３７℃にてＴ-フラス コ中で培養した。収集した細胞を、冷却した５０ｍＭのトリス-ＨＣＩ緩衝液（ ｐＨ７．４）中でホモジナイズし、次いでそのホモジネートを３９，０００ｇ、 ４℃にて１０分間遠心した。ペレットを緩衝液で１回洗浄し、次いで、氷冷した １０ｍＭのトリス-ＨＣＩ（ｐＨ７．４）の溶液中に懸濁した。この細胞膜調製 物の等量を、［¹²⁵Ｉ-−Ｔyr¹¹］ソマトスタチン-１４（最終濃度０．５ｎＭお よび７５０，０００cpm/ｍＬ、２０００Ｃｉ/mmolの特異活性、アマシャム社（ Ａmersham）製、アーリントン、ハイツ、イリノイ州（Ａelington，Ｈeights， ＩＬ））および、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）５ｍＭのＭｇＣｌ₂、トラシ ロール（Ｔrasylol）（２００，０００国際単位）、バシトラシン（bacitracin ）（０．０２ｍｇ/ｍＬ）およびフッ化 フェノルメチルスルホニル（０．０２ｍｇ/ｍＬ）を含有する５０ｍＭのＨＥＰ ＥＳ（ｐＨ７．４）溶液中に最終濃度１０^-11ないし１０^-6Ｍのペプチドと共に ３０℃にて２５分間インキュベートした。濾過マニホルドを用いて、ポリエチレ ンイミン洗浄したＧＣ/Ｆフィルター（ワットマン社（Ｗhatman）製、メイドス トーン、英国（Ｍaidstone，Ｅngland））を通してこの混合物を濾過し、該フィ ルター上に残った残渣を５ｍＬの冷ＨＥＰＥＳ緩衝液で３回洗浄した。次いで、 該フィルターおよびフィルター洗浄の試料を、ガンマカウンターでカウントした 。非特異的結合を測定するためには、２００ｎＭの非標識ソマトスタチン-１４ の存在下に該アッセイを行った。データ解析は、阻害定数で提供されるデータの ヒル・プロット（Ｈill plot）（ビルンド（Ｂylund）およびヤマムラ（Ｙamamu ra）、メソッズ・イン・ノイロトランスミッター・レセプター・アナリシス（Ｍ ethods in Ｎeurotrans-mitter Ｒeceptor Ａnalysis）、ヤマムラ（Ｙamamura ）ら編、ラーベン・プレス：ニユー・ヨーク（Ｒaven Ｐress：Ｎew Ｙork）、 １９９０年中の「メソッズ・オブ・レセプター・バインディング（Ｍethods of receptor binding）」参照）を包含する。 これらの結果を以下の表に示す。該データは、ソマトトロピン受容体に対して 本発明のペプチドが高親和性を有することを示している。 前記の開示は本発明のある種の特定の具体例を強調するものであって、それら の全ての修飾または別の同等物は、請求の範囲に示したごとく本発明の精神およ び請求の範囲の範囲内であることは理解されるべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 5/083 7/06 // Ｃ０７Ｋ 14/655 Ｃ０７Ｍ 5:00 Ｃ０７Ｆ 13/00 Ｚ 9155−4Ｈ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈ、低級アルキルまたは置換アルキル、ア リールまたは置換アリール； Ｒ³およびＲ⁴は、各々独立して、Ｈ、低級アルキルもしくは置換アルキル、ア リールもしくは置換アリール、あるいはここに、Ｒ³またはＲ⁴のいずれかはＮ（ Ｒ¹⁰）₂であり、ここに各Ｒ¹⁰は、独立してＨ、低級アルキルまたは１０個以下 のアミノ酸のペプチド配列であって、ｍは０なしい３の整数； Ｘ¹およびＸ²は、各々独立して、Ｄ-またはＬ-アミノ酸であって、ｎおよびｑは 、独立して、０もしくは１のいずれかの整数； Ａ¹はＤ-もしくはＬ-ＰheまたはＤ-もしくはＬ-ＴyrまたはＮal、あるいはそ れらの置換誘導体； Ａ²はＤ-もしくはＬ-Ｔrpまたはそれらの置換誘導体； Ａ³はＤ-もしくはＬ-ＬysまたはＨly、Ａchxa、Ａmf、Ａec、Ａpc、Ａes、Ａps またはそれらの置換誘導体； Ａ⁴はＴhr、Ｓer、Ｖal、Ｐhe、Ｉle、Ａbu、Ｎle、Ｌeu、ＮvaまたはＡib； Ｘ³はＨ、-ＣＯＯＲ⁹、-ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ＣＯＯＲ⁹または-ＣＯＮ（Ｒ⁹）₂、こ こに各Ｒ⁹は、独立して、Ｈ、低級の線状もしくは環状のアルキル、またはそれ らの置換誘導体、あるいは１０個以下の残基のアミノ酸配列を有するペプチド； Ｒ⁵およびＲ⁶は、各々独立して、Ｈもしくは低級アルキルであって、ｐは０、１ または２のいずれか；であって Ｒ⁷およびＲ⁸は、独立して、Ｈ、低級アルキルもしくは置換低級アルキル、ある いはＲ⁷またはＲ⁸のいずれかは-ＣＯＯＨ、あるいはそれらの誘導体を意味する ］を有するソマトスタチン受容体結合ペプチド。 ２．医薬上許容される担体中の請求項１記載の該ソマトスタチン受容体結合ペ プチドよりなる医薬組成物。 ３．請求項１記載のソマトスタチン受容体結合ペプチドと、それに共有結合し たテクネチウム-９９ｍ結合部位よりなり、該テクネチウム-９９ｍ結合部位が式 ： Ｉ． Ｃ（ｐｇｐ）^s-（ａａ）-Ｃ（ｐｇｐ）^s ［式中、（ｐｇｐ）^sはＨまたはチオール保護用基であって（ａａ）はアミノ酸 ］； II． Ａ-ＣＺ（Ｂ）-［Ｃ（Ｒ’Ｒ''）］ｎ-Ｘ ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）-ＮＨＯＣ、（peptide）- ＯＯＣまたはＲ''''； ＢはＨ、ＳＨ、-ＮＨＲ'''、-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）、またはＲ''''； ＸはＨ、ＳＨ、-ＮＨＲ'''、-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）、またはＲ''''； ＺはＨまたはＲ''''； Ｒ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、独立して、Ｈまたは低級の直鎖もしくは分岐 鎖または環状のアルキル； ｎは０、１または２；であって Ｂが-ＮＨＲ'''または-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）である場合、ＸはＳＨであって ｎは１または２； Ｘが-ＮＨＲ'''または-Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）である場合、ＢはＳＨであって ｎは１または２； ＢがＨまたはＲ''''である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）-ＮＨ ＯＣ、（peptide）-ＯＯＣ、ＸはＳＨであってｎは０または１； ＡがＨまたはＲ''''である場合、ＢがＳＨであると、Ｘは-ＮＨＲ'''または -Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）であって、ＸがＳＨであると、Ｂは-ＮＨＲ'''または -Ｎ（Ｒ'''）-（peptide）； ＸがＨまたはＲ''''である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）-ＮＨ ＯＣ、（peptide）-ＯＯＣであってＢはＳＨ； Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（peptide）- ＮＨＯＣ、（peptide）-ＯＯＣ、ＢはＳＨであってｎは０；ＢがＳＨであってｘ がＳＨである場合、ｎは０ではない； ここに、該チオール部位は還元型を意味する］； ［式中、Ｘ＝Ｈまたは保護用基； （amino acid）＝いずれかのアミン酸］； ［式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅； 各（ｐｇｐ）^sは、独立して、チオール保護用基またはＨ； ｍ、ｎおよびｐは、独立して、２または３； Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは 置換誘導体］；または ［式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅； ｍ、ｎおよびｐは、独立して、２または３； Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは 置換誘導体； Ｖ＝Ｈまたは-ＣＯ-peptide； Ｒ'＝Ｈまたはpeptide；であって ここに、Ｖ＝Ｈである場合、Ｒ'＝peptideであって、Ｒ'＝Ｈである場合、Ｖ＝- ＣＯ-peptide； ここに、各Ｒは、独立して、Ｈ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル 、フェニル、または低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニル であって、ここに各ｎは、独立して、１または２； ここに、該テクネチウム-９９ｍ結合部位はテクネチウム-９９ｍと錯体を形成す る］を有する哺乳動物他居合部位を造影するためのシンチグラフィー造影剤製造 用試薬。 ４．テクネチウム-９９ｍで放射線標識された請求項３記載の試薬。 ５．式Ｉを有する該テクネチウム-９９ｍ結合部位の該システインが、式： -ＣＨ₂-ＮＨ-ＣＯ-Ｒ ［式中、Ｒは１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、２-、３-、４-ピ リジル、フェニル、または低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボ キシ、もしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニルを意味する］ の保護用基を有する請求項３記載の試薬。 ６．該テクネチウム-９９ｍ結合部位Ｃ（ｐｇｐ）^s-（ａａ）-Ｃ（ｐｇｐ）^s が式： を有する請求項３記載の試薬。 ７．還元剤存在下にて、請求項３記載の試薬をテクネチウム-９９ｍと反応さ せることにより形成された錯体。 ８．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよ りなる群から選択される請求項７記載の錯体。 ９．予め還元したテクネチウム-９９ｍ錯体のリガンド交換により、請求項３ 記載の試薬をテクネチウム-９９ｍで標識することにより形成された錯体。 １０．放射線医薬製剤調製物を製造するためのキットであって、予め定めた量 の請求項３記載の試薬と該試薬をテクネチウム-９９ｍで標識するのに十分な量 の還元剤とを含有する密閉バイアルよりなる該キット。 １１．還元剤の存在下にて、請求項３記載の試薬をテクネチウム-９９ｍと反 応させることを特徴とする請求項３記載の試薬を標識するための方法。 １２．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオン よりなる群から選択される請求項１１記載の方法。 １３．診断有効量の請求項４記載の試薬を投与し、次いで哺乳動物体内部位に 局在した該テクネチウム-９９ｍを検出することを特徴とする、哺乳動物体内部 位を造影する方法。 １４．該ソマトスタチン受容体結合ペプチドが、イン・ビトロで化学的に合成 された請求項３記載の試薬。 １５．該ソマトスタチン受容体結合ペプチドが、固相ペプチド合成法により合 成された請求項１４記載の試薬。 １６．イン・ビトロ化学合成の間に、該放射線標識結合部位が該ソマトスタチ ン受容体結合ペプチドに共有結合される請求項１４記載の試薬。 １７．固相ペプチド合成の間に、該放射線標識結合部位が該ソマトスタチン受 容体結合ペプチドに共有結合される請求項１６記載の試薬。 １８．Ａ¹がフェニルアラニンまたはチロシン、Ａ²がトリプトファン、Ａ³が リジンであってＡ⁴がスレオニンまたはバリンである請求項１記載のソマトスタ チン受容体結合ペプチド。 １９．請求項１の該ソマトスタチン受容体結合ペプチドが、式： を有するペプチドよりなる群から選択されることを特徴とする組成物。 ２０．請求項３の試薬が式： を有する試薬よりなる群から選択されることを特徴とする組成物。 ２１．治療的に有効な量の請求項２記載の組成物を動物に投与することを特徴 とする、動物におけるソマトスタチン関連疾病を緩和させるための方法。 ２２．該動物がヒトである請求項２１記載の方法。 ２３．該動物に投与すべき組成物の治療的に有効な量が、約０．１ないし約４ ９ｍｇ/ｋｇ体重/日である請求項２１記載の方法。 ２４．請求項１記載のソマトスタチン受容体結合ペプチドと、それに共有結合 した放射線標識結合部位とよりなる放射線標識ソマトスタチン受容体結合剤を製 造するための試薬。 ２５．¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅで放射線標識された請求項２４記載の試薬。 ２６．還元剤の存在下に、請求項２４の試薬を¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅと反応さ せることにより形成された錯体。 ２７．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオン よりなる群から選択される請求項２６記載の錯体。 ２８．放射線医薬製剤調製物を製造するためのキットであって、予め定めた量 の請求項２４記載の試薬と該試薬を¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅで標識するのに十分な 量の還元剤とを含有する密閉バイアルよりなる該キット。 ２９．該ソマトスタチン受容体結合ペプチドが、イン・ビトロで化学的に合成 された請求項２４記載の試薬。 ３０．該ソマトスタチン受容体結合ペプチドが、固相ペプチド合成により合成 された請求項２９記載の試薬。 ３１．イン・ビトロ化学合成の間に、該放射線標識結合部位が該ソマトスタチ ン受容体結合ペプチドに共有結合される請求項２９記載の試薬。 ３２．固相ペプチド合成の間に、該放射線標識結合部位が該ソマトスタチン受 容体結合ペプチドに共有結合される請求項３１記載の試薬。 ３３．医薬上許容される担体中の請求項２５記載の放射線標識ソマトスタチン 受容体結合ペプチドよりなる医薬組成物。 ３４．治療的に有効な量の請求項３３記載の組成物を動物に投与することを特 徴とする、動物におけるソマトスタチン関連疾病を緩和させるための方法。 ３５．該動物がヒトである請求項３４記載の方法。 ３６．動物に投与する該組成物の治療的に有効な量が、約１０ないし２００ミ リキュリーの放射線標識組成物である請求項３４記載の方法。 ３７．テクネチウム-９９ｍで放射線標識された請求項２４記載の試薬。 ３８．医薬上許容される担体中の請求項３７記載の該放射線標識ソマトスタチ ン受容体結合ペプチドよりなる医薬組成物。 ３９．還元剤の存在下に、請求項２４記載の試薬とテクネチウム-９９ｍとを 反応させることにより形成された錯体。 ４０．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオン よりなる群から選択される請求項３９記載の錯体。 ４１．放射線医薬調製物を製造するためのキットであって、予め定めた量の請 求項２４の試薬と該試薬をテクネチウム-９９ｍで標識するのに十分な量の還元 剤とを含有する密閉バイアルよりなる該キット。 ４２．診断有効量の請求項３７記載の試薬を投与し、次いで哺乳動物体内部位 に局在したテクネチウム-９９ｍを検出することを特徴とする、哺乳動物体内部 位を造影する方法。 ４３．該試薬が、さらに、複数の特異的結合化合物に共有結合され、かつ複数 の放射線標識部位にも共有結合されて、多重多価シンチグラフィー造影剤を製造 するための試薬を構成する多価結合部位よるなり、ここに、該多重多価シンチグ ラフィー造影剤の分子量は、約２０，０００ダルトン未満である請求項１記載の ソマトスタチン需要体結合ペプチド。 ４４．該多価結合部位が、ビス-スクシンイミジルメチルエーテル、４-（２,２ -ジメチルアセチル）安息香酸、Ｎ-［２-（Ｎ',Ｎ'-ビス（２-スクシンイミドエ チル）アミノエチル）］-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス（２-メチル-２-メルカプトプロピル）- ６,９-ジアザノナンアミド、トリス（スクシンイミジルエチル）アミンまたはそ れらの誘導体である請求項４３記載のソマトスタチン受容体結合ペプチド。 ４５．該試薬が、さらに、複数の特異的結合化合物に共有結合され、かつ複数 の放射線標識部位にも共有結合されて、多重多価シンチグラフィー造影剤を製造 するための試薬を構成する多価結合部位よるなり、ここに、該多重多価シンチグ ラフィー造影剤の分子量は、約２０，０００ダルトン未満である哺乳動物体内部 位を造影するためのシンチグラフィー造影剤を製造するための請求項３記載の試 薬。 ４６．該多価結合部位が、ビススクシンイミジルメチルエーテル、４-(２,２- ジメチルアセチル)安息香酸、Ｎ-［２-（Ｎ',Ｎ'-ビス（２-スクシンイミドエチ ル）アミノエチル）］-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス（２-メチル-２-メルカプトプロピル）-６, ９-ジアザノナンアミド、トリス（スクシンイミジルエチル）アミンまたはそれ らの誘導体である請求項４５記載の試薬。 ４７．該放射線標識結合部位とテクネチウム-９９ｍとの錯体が電気的に中性 である請求項３９記載の試薬。 ４８．テクネチウム-９９ｍで放射線標識された請求項２０記載の組成物。 ４９．¹⁸⁶Ｒｅまたは¹⁸⁸Ｒｅで放射線標識された請求項２０記載の組成物。