JPH08510260A

JPH08510260A - Ｌｈｒｈ拮抗剤

Info

Publication number: JPH08510260A
Application number: JP7500011A
Authority: JP
Inventors: ラッセル−ジョーンズ，グレゴリー・ジョン
Original assignee: バイオテック・オーストラリア・プロプライエタリー・リミテッド
Priority date: 1993-05-20
Filing date: 1994-05-20
Publication date: 1996-10-29
Also published as: EP0698040A1; EP0698040A4; US5863900A; WO1994028015A1; SG50426A1; CA2163225A1; KR960702476A; RU2130464C1

Abstract

(57)【要約】本発明は、新規なＬＨＲＨ拮抗剤並びにこれらの拮抗剤とＶＢ12との間の複合体を提供する。本発明は、ＬＨＲＨ拮抗剤の経口投与に特に有効である。本発明の拮抗剤は、ＡＮＴＩＤＥ−１、ＡＮＴＩＤＥ−２及びＡＮＴＩＤＥ−３からなる群から選択される。

Description

【発明の詳細な説明】ＬＨＲＨ拮抗剤発明の分野本発明は、ＬＨＲＨ拮抗剤、及び前記拮抗剤をビタミンＢ12（ＶＢ12）又はその類似体に結合して含んでなる前記拮抗剤の全身性及び口腔デリバリーに関する。より詳細には、本発明は、これらの複合体の合成方法に関する。発明の背景視床下ゴナドトロピン放出性ホルモン（ＧｎＲＨ；黄体化ホルモン放出ホルモン「ＬＨＲＨ」としても知られている）は、下垂体ゴナドトロピン合成及び分泌を介在する。Ｓｃｈａｌｌｙ等（１９７１）によりＬＨＲＨが最初に単離されて以来、数多くの類似体が合成された。これらの類似体は、作用薬（放出の増強）又は拮抗剤（放出の抑制）としてのゴナドトロピン放出に対する急性作用によって分類できる。作用薬は、下垂体ＬＨＲＨレセプターに対する結合親和性の増加（Ｌｏｕｍａｙ等、１９８２、Ｐｅｒｒｉｎ等、１９８０）及び未変性ＬＨＲＨを迅速に除去するタンパク質分解に対する耐性の増加により特徴付けられる。これらの効能のある類似体が可逆性の可能性がある医学的去勢を誘発できるとの考察により、種々のゴナドトロピン依存疾患、特にホルモン依存性前立腺癌及び乳癌の治療に新しい方法が提供された。去勢の誘発では２つの別個の段階が生じる。最初に、類似体が下垂体生殖腺軸を刺激して、最初の２週間ぐらいでゴナドトロピン及び性ステロイド分泌の一過性増加を生じる。この期間後、下垂体ＬＨＲＨレセプターのダウンレギュレーションがあり、続いてゴナドトロピン及び性ステロイド分泌が減少する。初期刺激は、前立腺悪性の治療に作用薬を使用することの実質的な欠点である。即ち、テストステロンの初期刺激により疾病の痛みを伴う発赤を生じ、その結果有害な臨床作用が生じることがある（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇｅｒ及びＡｂｒａｍｓ、１９８８、Ｃｒａｗｆｏｒｄ及びＤａｖｉｓ、１９８８）。これに対して、ＬＨＲＨ拮抗剤の合成において第一に満足すべきことは、初期発赤を回避するのに有利でなければならないことである。拮抗剤の製造での最初の試みでは、望ましくないヒスタミン放出により特徴付けられる化合物が得られた（Ｋａｒｔｅｎ及びＲｉｖｉｅｒ、１９８６、Ｓｃｈｍｉｄｔ等、１９８４、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ等、１９８８）。しかしながら、向上した効力とヒスタミン放出の可能性がはるかに小さいことを特徴とする新しい拮抗剤が開発された（例えば、Ｋａｒｔｅｎ及びＲｉｖｉｅｒ、１９８６）。現在までに記載された最も効力のある拮抗剤は、Ｆｏｌｋｅｒｓ及びＢｏｗｅｒｓにより合成された類似体Ｎ−Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｄ−Ｌｙｓ（ＮｉＣ）、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ２（ＡＮＴＩＤＥ）である。この拮抗剤は、ラットにおいて排卵を抑制するのに非常に効力があり（Ｌｊｕｎｄｇｕｉｓｔ等；、１９８８）、単一投与量で、去勢雌シナモロガスモンキーにおいて血清ＬＨ濃度に対して顕著な長期持続抑制作用を示す（Ｌｅａｌ等、１９８８）。また、無傷成熟雄ラット及びシナモロガスモンキーにおける長期化学去勢を誘発できること並びに去勢と類似のＤｕｎｎｉｎｇＲ３３２７前立腺癌モデルにおける腫瘍成長に対する抑制作用を有することも示された（Ｈａｂｅｎｉｃｈｔ等、１９９０）。したがって、新規な拮抗剤は、特に前立腺癌の処置及び種々の婦人病において医学的去勢が望ましい全ての状態において実質的な臨床上の利点がなければならない（ＭｃＬａｃｈｌａｎ等、１９８６）。現在の投与は、非経口経路に限定される。しかしながら、この経路によりデリバリーできる類似体の投与量は、拮抗剤の溶解度が低いために制限される。したがって、ＡＮＴＩＤＥの長期間作用の臨床試験では、投与量は、２．５ｍｇ以下まで減少した。全身状態の治療における医薬品としてのＬＨＲＨ及びその類似体等のペプチドの投与を経口経路で行った場合、ほとんどうまくいかなかった。一般的に、満足できる経口投与に必要とするペプチドの量は、非経口デリバリーに必要とする投与量の１００〜１０００倍であり、したがって、この経路を介したこれらの薬剤の投与が非常に高価なものとなる。うまくいかない理由は基本的に２つある。第一に、腸の環境が高度のタンパク質分解活性があり、ほとんどのペプチドが迅速に分解する。第二に、個々のアミノ酸及びジペプチドに関しては十分に分かった吸収機構があるが、ポリペプチドが粘膜上皮膜を介して輸送され循環されることに関しての一般的な機構がない。むしろ、この膜は、この環境で遭遇する数多くの外来タンパク質の吸収を妨害する一般的なバリヤーとして設計される。したがって、ペプチドを変更して腸で遭遇する酵素的バラージに耐えるようにすることがあるが、もしペプチドは続いて粘膜バリヤーを横断し体循環に入ることができないならば、このような変更はほとんど価値がない。本発明者による最近の研究（ＰＣＴ／ＡＵ８６／００２９９）では、粘膜バリヤーを克服する方法が提供された。この方法は、ビタミンＢ12（ＶＢ12）に関して天然内因子（ＩＦ）介在吸収機構を利用する。ＶＢ12は、腸から積極的に吸収される天然食物分子である。このプロセス中、ＶＢ12はまず上小腸においてＩＦに結合する。次に、ＶＢ12−ＩＦ複合体は、小腸を下り、回腸上皮の表面に位置するＩＦレセプターに結合する。次に、〔ＶＢ12−ＩＦ−レセプター〕複合体全体が、レセプター介在エンドサイトーシスにより内在化し、しばらく後ＶＢ12が血清に現れる。ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＡＵ８６／００２９９（ＷＯ８７／０２２５１）は、化学的にＶＢ12を変更して、ＶＢ12を種々の薬剤及びペプチド／タンパク質医薬品への接合に適当な官能基を提供する方法が記載されている。〔ＶＢ12 −医薬品〕複合体を経口投与する時、天然ＩＦ介在ＶＢ12吸収系を利用して医薬を循環に排出することができる。経口投与経路は、薬学的に活性な薬剤を排出する最も好ましい手段であるので、ＬＨＲＨ拮抗剤をヒトに経口デリバリーできるプロセスについて大きく且つ価値のある市場である。このようなプロセスは、ＶＢ12又はその類似体とＬＨＲＨ拮抗剤との間の複合体の形成により得られる。発明の概要第一の態様によれば、本発明は、ＡＮＴＩＤＥの類似体にある。ＡＮＴＩＤＥは、極めて少数の天然アミノ酸を含み、それ自体がペプシン、トリプシン又はキモトリプシンに対して非常に耐性があるので経口投与に特に適当な分子である。しかしながら、ＡＮＴＩＤＥそれ自体をわずかに変更して、ＶＢ 12への接合に適当な部位を提供する必要がある。本発明者は、ＶＢ12への接合に適当であるＡＮＴＩＤＥの３つの類似体、即ち、Ｎ−Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂（Ｄ−Ｌｙｓ₆ ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−１）、Ｎ−Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂（Ｌｙｓ₅ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−２）及びＮ−Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂（Ｌｙｓ₈ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−３）を合成することが可能であることが分かった。本発明の第二の態様によれば、ＶＢ12又はＶＢ12の類似体と第一の態様のＬＨＲＨ拮抗剤との間の複合体であって、ＶＢ12又はＶＢ12の類似体が、脊椎動物宿主にＶＢ12の吸収及び輸送並びにＬＨＲＨ拮抗剤の活性に必要な結合反応を受ける能力が実質的に維持され複合体が提供される。ＶＢ12類似体には、内因子に対する結合活性を有するＶＢ12の変種又は誘導体などがある。ＶＢ12の好ましい類似体には、シアノコバラミン（ＣＮ−Ｃｂｌ）、アココバラミン、アデノシルコバラミン、メチルコバラミン、ヒドロキシコバラミン、シアノコバラミンカルバナリド、５−メトキシベンジルコバラミン〔（５−ＭｅＯＢｚ）ＣＮ−Ｃｂｌ〕だけでなく、上記の全てのデスジメチル、モノエチルアミド及びメチルアミド類似体などがある。他の類似体には、補酵素Ｂ12 、５’−デオキシアデノシルコバラミン、クロロコバラミン、スルフィトコバラミン、ニトコバラミン、チオシアナトバコバラミン、５，６−ジクロロベンゾイミダゾール、５−ヒドロキシベンゾイミダゾール、トリメチルベンゾイミダゾール等のベンゾイミダゾール誘導体だけでなく、アデノシルシアノコバラミン〔（Ａｄｅ）ＣＮ−Ｃｂｌ〕、コバラミンラクトン、コバラミンラクタム、並びにＶＢ12又はその誘導体のアニリド、エチルアミド、モノカルボン酸並びにジカルボ酸誘導体などがある。またＶＢ12の好ましい誘導体には、ＶＢ12のプロピオンアミド誘導体のモノ− 、ジ−及びトリカルボン酸誘導体などがある。他の誘導体には、コバルトが亜鉛又はニッケルで置換されたＶＢ12の類似体がある。また、ＶＢ12又はその類似体のコリン環は、ＩＦへの結合に影響を及ぼさないいずれの置換基と置換してもよく、このようなＶＢ12又はその類似体は、本発明の一部分である。ＶＢ12の他の誘導体及び類似体は、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｚ及びＳｔｒｏｉｎｓｋｉ，Ａ．：（ＷａｌｔｅｒＤｅＧｒｕｙｔｅｒ）ニューヨーク、ベルリン；１９８７）に開示されており、ここに開示されている内容は、引用することにより本明細書の開示の一部とされる。接合に適当な延長スペーサーには、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳＳ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシネート）（スルホ−ＥＧＳ）、ｐ−アミノフェニル酢酸、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ＤＳＰ）、３，３’ −ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルタータレート（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジルタータレート（スルホ−ＤＳＴ）、ビス〔２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ） −エチレン〕スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、ビス〔２−（スルホスクシンイミドオキシカルボニルオキシ）−エチレン〕スルホン（スルホ−ＢＳＯＣＯＥＳ）、ジメチルアジポイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＡ）、ジメチルピメルイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＰ）、ジメチルスベルイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＳ）などがある。チオール開裂性生分解性リンカーの調製に使用するのに適当な架橋剤には、Ｎ −スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン、スルホスクシンイミジル６−〔３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド〕ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル６−〔３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド〕ヘキサノエート（ＬＣ −ＳＰＤＰ）、スルホスクシンイミジル６−〔α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド〕ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＭＰＴ）、１，４−ジ〔３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド〕ブタン（ＤＰＤＰＢ）、４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）、ジメチル３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート・２ＨＣｌ（ＤＴＢＰ）などがある。本発明のさらなる態様によれば、ＶＢ12と、第一の態様のＡＮＴＩＤＥ類似体等のＬＨＲＨ拮抗剤との間の生分解性複合体であって、ＶＢ12が生体内でＬＨＲＨ拮抗剤から開裂されるような生分解性複合体の製造方法が提供される。さらに別の態様では、本発明は、第一の態様のＡＮＴＩＤＥ類似体をＶＢ12キャリア又はその類似体に結合して含んでなる複合体であって、複数のＡＮＴＩＤＥ類似体が前記キャリアに結合している複合体を提供する。本発明のさらに別の態様では、本発明は、ＬＨＲＨ拮抗剤が腸から脊椎動物宿主の循環へ上皮経由輸送されるＬＨＲＨ拮抗剤の経口デリバリーの方法を提供する。別の態様では、本発明は、生理溶媒への溶解度がより大きい新規な種類のＡＮＴＩＤＥ類似体を開示する。これらの類似体は、全身投与できる。図面の簡単な説明本発明の性質がより明確に理解できるように、以下の実施例及び図面を参照しながら説明する。第１図は、ＡＮＴＩＤＥ、その類似体及びＶＢ12接合体によるラット下垂体細胞からＬＨのＬＨＲＨ刺激放出の遮断に関する生体外バイオアッセイにより測定される中央阻害濃度（ＩＣ５０）を示すグラフである。４時間の間のラット下垂体前葉細胞培養からＬＨのＬＨＲＨ刺激放出を拮抗するためのＡＮＴＩＤＥ、その類似体及びＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体の中央阻害濃度。接合体に関する結果を、取り込まれた類似体ｎｇ／ｍｌ（培養ウエルでの最終濃度）で表す。互いに異ならない結果（即ち、ｐ＞０．０５）を、共通の文字のグループとしてまとめる。第２図は、ＡＮＴＩＤＥ、ＡＮＴＩＤＥ−３、そのＶＢ12接合体によるラット下垂体細胞からのＬＨのＬＨＲＨ刺激放出の遮断に関する生体外バイオアッセイを示すグラフである。アッセイ条件は、第１図に示した通りである。第３図は、ＡＮＴＩＤＥ、ＡＮＴＩＤＥ−１又はＡＮＴＩＤＥ−１−ＶＢ12− 接合体の注射後の去勢ラットの血清ＬＨレベルの減少を示すグラフである。ＡＮＴＩＤＥ又はＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥの皮下注射の生体内作用は、６週齢去勢ラットで試験した。種々のＡＮＴＩＤＥ類似体を１００μｇ皮下注射投与して２４時間後、ラットを殺し、血管幹血液を採取して、ＲＩＡにより血清ＬＨレベルを分析した（Ｐｕｅｎｔｅ＆Ｃａｔｔ、１９８６参照）。第４図は、ＡＮＴＩＤＥ、ＡＮＴＩＤＥ−３又はＡＮＴＩＤＥ−３−ＶＢ12− 接合体を１００μｇ皮下注射投与後の去勢ラットの血清ＬＨレベルの減少を示すグラフである。材料：ＬＨ放出用下垂体細胞アッセイ細胞培養を、４月齢Ｓｐｒａｎｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの前下垂体から調製した。細胞を、１０％胎児ウシ血清＋抗生物質を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏ’ ｓ変更Ｅａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍにおいて１ｍｌ当たり２５０，０００生存細胞の単一細胞懸濁液として分散した。０．５ｍｌアリコットを、マルチウエル組織培養プレートに分散し、空気中５％ＣＯ₂の密閉加湿空気中に３０℃で維持した。細胞を５日間培養し、培地を除去した。培地を、一連の投与量でＡＮＴＩＤＥ、ＡＮＴＩＤＥ類似体又はＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体を含有する新鮮な培地で置換した。４時間後、１０ｎＭＬＨＲＨを、各ウエルに添加した。細胞をさらに４時間インキュベーションした後、培地を除去して培地に放出されたＦＳＨ及びＬＨの量をラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定した。去勢ラットモデル成熟ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットを去勢し、動物小屋に１週間保持してから、試験物質を投与した。ＡＮＴＩＤＥ又は類似体を、去勢ラットに皮下注射して試験した。５ラットからなるグループを、対照、及び２４時間後投与での外頚静脈からの血液試料の採取に使用した。ＬＨを、標準ラジオイムノアッセイにより測定した。ＩＦアッセイＩＦに対する種々のＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体の親和性を、競争的結合アッセイで測定した（Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓ、１９９４）。未標識ＶＢ12又はＶＢ12類似体若しくは接合体の希釈物を、⁵⁷ＣｏＶＢ12 ｌｎｇ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）と混合した。次に、ＩＦの１ＩＵ（ＩＦの１単位は、ＶＢ12 ｌｎｇを結合するのに必要とするＩＦの量である）を混合物に添加し、混合物を、室温（ＲＴ）で２０分間インキュベーションした後、０．１％ＢＳＡ（ＩＦ及びＶＢ12非含有、Ｓｉｇｍａ）に５％活性炭を添加した溶液を添加した。試料を延伸分離し、上清（ＩＦ結合）におけるカウント及びペレット（遊離⁵⁷ＣｏＶＢ12）を使用して、試験物質に対するＩＦの相対親和性を求めた。ＡＮＴＩＤＥ類似体の合成単一、未変更リシン、即ち、Ｄ−Ｌｙｓ⁶ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−１；Ｌｙｓ⁵ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−２及びＬｙｓ⁸ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−３（表１参照）を含有する３種のＡＮＴＩＤＥ類似体を、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒで合成した。ペプチドを樹脂から開裂し、０．１％ＴＦＡ中アセトニトリル５％〜１００％勾配を用いた逆相ＨＰＬＣにより精製した。類似体の２つ（ＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３）はかなりの生体外効力を有し、ＡＮＴＩＤＥ−３は生体内で未変性ＡＮＴＩＤＥに匹敵する活性を有している。ＶＢ12（ｅＶＢ12）の「ｅ」異性体カルボキシレートをＡＮＴＩＤＥ −１、ＡＮＴＩＤＥ−２又はＡＮＴＩＤＥ−３に直接共有接合すると、ＡＮＴＩＤＥ類似体の生物活性が、類似体を生体外又は生体内で試験したかとは無関係にＡＮＴＩＤＥ自体よりも実質的に低いレベルに減少することが分かつた。ＡＮＴＩＤＥ類似体のモノカルボキシＶＢ12への直接接合ＶＢ12をＡＮＴＩＤＥへ接合するのに適当な官能基を得るために、シアノコバラミン（ＶＢ12）を、まず０．４ＭＨＣｌ中７２時間加水分解した。３種の異性体のＩＦに対する最高親和性を有することが予め分かっているモノカルボキシビタミンＢ12のｅ異性体（ｅＶＢ12、ｅ異性体）を、Ｄｏｗｅｘ１Ｘ２クロマトグラフィーと、０．１％ＴＦＡ中５〜１００％アセトニトリル勾配を用いて展開する半分取Ｃ−１８ＲＰ−ＨＰＬＣとの組み合わせにより、ｂ異性体及びｄ異性体から分離した（シアノコバラミンの酸加水分解中にも形成される）。アミノエチル−ｅＶＢ12を、ｅＶＢ12異性体と１，２−ジアミノエタンとを、ｐＨ６．５でｅ異性体に対して２０倍モル過剰のジアミンと２０倍モノ過剰の１ −エチル−３−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ；Ｂｉｏｒａｄ、カリフォルニア州リッチモンド）を使用して反応させることにより調製した。アミノエチル誘導体を、０．１％ＴＦＡ中５〜１００％アセトニトリル勾配を用いた半分取Ｃ−４カラムによるＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。溶出した物質を、さらにＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーで精製した。アミノ誘導体を０．１ＭＨＣｌで溶離した後、フェノールへの抽出及びジクロロメタンのフェノール相への添加後の水への逆抽出を行った。次に、アミノエチル− ｅＶＢ12を、凍結乾燥により水相から回収した。３種のＡＮＴＩＤＥ類似体を、カルボジイミド、ＥＤＡＣを用いてｅＶＢ12に接合し、生成物（Ｂ12−ＡＮＴ１、Ｂ12−ＡＮＴ２及びＢ12−ＡＮＴ３；複合体がＡＮＴＩＤＥ−１、ＡＮＴＩＤＥ−２又はＡＮＴＩＤＥ−３との間で形成したかどうかによって決まる）を、１０％酢酸、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５を用いたクロマトグラフィーにより精製してから、上記したようにして半分取Ｃ−４カラムを用いたＲＰ−ＨＰＬＣに附した。ヒンダードチオールを含有するクロスリンカーを用いたＶＢ12のＡＮＴＩＤＥへの接合アミノエチル−ｅＶＢ12を、４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ；Ｐｉｅｒｃｅ）と反応させた。イミノチオール化ＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３を、上記で概要を述べたようにして調製した。次に、アミノエチル−ｅＶＢ12のＳＭＰＴ誘導体を、上記したようにしてチオール化ＡＮＴＩＤＥ−１及び−３誘導体と反応後、続いて通常の方法によりＢ12−ＴＳＳ−ＡＮＴ１及びＢ12−ＴＳＳ−ＡＮＴ３により精製した（表２）。ＶＢ12とＡＮＴＩＤＥとの間の非開裂性チオエーテル結合の形成６−（ヨードアセタミド）ヘキシルアミド−ｅＶＢ12をジイソプロピルエチルアミド／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ／ＤＩＥＡ容積比＝１：２０）に添加したものを、アルゴンで１０分間脱酸素化し、次に、イミノチオール化ＡＮＴＩＤＥ−１又は−３をＤＭＦに添加した溶液を、攪拌溶液に滴下した。各反応混合物を、室温で３０分間攪拌後、水で希釈し、濾過し、生成物Ｂ12−ＳＣ−ＡＮＴ１及びＢ12−ＳＣ−ＡＮＴ−３を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した（表２）。トランスグルタミナーゼ開裂性結合を用いたＶＢ12のＡＮＴＩＤＥへの接合ＡＮＴＩＤＥ−１及び−３を５％ＤＩＥＡ／ＤＭＦに吸収させ、ｅＶＢ₁₂−ＧＧＥＡ−ＯＭｅ（ｅＶＢ₁₂−ＧｌｙＧｌｙＧｌｕＡｌａ）のＮ−スクシンイミジルエステル誘導体をＤＭＦ（１００μｌ）に添加したものを添加した。各反応混合物を室温で３０分間攪拌後、２％酢酸で希釈し、濾過した。生成物Ｂ12−ＴＰ −ＡＮＴ１及びＢ12−ＴＰ−ＡＮＴ３を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥し、乾燥剤下で保存しておいた後に使用した（表２）。反復個体（生体内試験）及び反復実験（生体外試験）から得たデータを、ワンウエイ分散解析に附し、ＴｕｋｅｙＨＳＤポストホック試験を、手段の対様比較に適用した（Ｐ＜０．０５の確率レベルで有意に異なると思われた）。内因子に対するＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体の親和性試験した全てのＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体は、内因子（表２）に対して良好な親和性を示した。実際に、ほとんどの接合体は、接合体を作製するのに使用したｅＶＢ12よりも高い相対親和性を示した（通常約３５％）。実施例１非開裂性ホモ二官能性架橋剤を用いたＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ類似体接合体の形成ＶＢ12とＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３との間の直接接合により、ＡＮＴＩＤＥと比較して生物活性が大きく減少した接合体が生成した。この接合ストラテジーを用いたＶＢ12のＡＮＴＩＤＥに対する近接により、ＡＮＴＩＤＥのＬＨＲＨレセプターへの結合が立体障害を受ける。直接接合を用いた場合に起きる可能性がある立体効果を減少させるために、非開裂性リンカーを使用してアミノエチル「ｅ」ＶＢ12とＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３との間に共有結合複合体を生成した。簡単に述べれば、ＡＮＴＩＤＥ −１及びＡＮＴＩＤＥ−３を、１．５モル過剰のジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）又はエチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）と、室温（ＲＴ）で１０分間反応させた。次に、アミノエチル「ｅ」ＶＢ 12を添加し、反応を一晩進行させた。接合した物質を、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ− ２５、１０％酢酸によるクロマトグラフィーに附した後、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ− ＨＰＬＣ）により精製した。ＶＢ12−アニリド−ＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３接合体が、ＥＤＡＣ／ＮＨＳを用いたアミノエチル「ｅ」ＶＢ12とｐ− アミノフェニル酢酸との反応により形成された。次に、ＶＢ12−アニリドを、ＥＤＡＣ／ＮＨＳを用いてＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３に接合した。接合物質を、１０％酢酸でのＧ−２５クロマトグラフィー後ＲＰ−ＨＰＬＣを行い精製した。実施例２スペーサーを用いたＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ類似体接合体の形成ＥＧＳ（１６．１Å）等の親水性スペーサーか、ＤＳＳ（１１．４Å）等の疎水性スペーサーか、より短い大きなアニリド基を用いたＶＢ₁₂とＡＮＴＩＤＥ− １及びＡＮＴＩＤＥ−３との間の接合体の調製により、接合体の生体外生物活性が、親類似体の生体外生物活性に匹敵するレベルまで大きく増加した（第１図及び第２図）。即ち、Ｂ12−ＰＡ−ＡＮＴ１、Ｂ12−ＥＧＳ−ＡＮＴ３及びＢ12− ＤＳＳ−ＡＮＴ３全てが、未変性ＡＮＴＩＤＥの生物活性に匹敵する生物活性を有していた（第１及び２図）。これに対して、これらの接合体の生体内生物活性は、ｓｃをラットに投与した時、これらの接合体が去勢ラットの血清ＬＨレベルを、類似体１００μｇの投与量でさえ顕著には低下しないことから明らかなように極めて低かった。一方、ＡＮＴＩＤＥ及びＡＮＴＩＤＥ−３は、１２．５μｇと低投与量であっても活性であった（第３及び４図）。したがって、立体障害以外の何らかの要因がこれらのＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ複合体の生体内活性に影響を及ぼしているものと思われた（第１図と第３図及び第２図と第４図の比較）。実施例３チオール開裂性架橋剤を用いたＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥの形成延長した親水性又は疎水性スペーサーを用いてＶＢ12をＡＮＴＩＤＥに結合することにより生体外活性が未変性ＡＮＴＩＤＥに類似している接合体が生成した。しかしながら、これらの接合体の非経口投与は、試験した投与量範囲では、去勢ラットの血清ＬＨレベルを低下する効果がほとんどなかった。これらの結果は、延長スペーサーを導入してＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥの生物活性を増加する一般的なストラテジーは正しいが、その結果形成された接合体は、接合体にＶＢ12分子が存在するためと思われるが生体内活性が減少することを示唆している。したがって、共有結合リンカーが血清中のグルタチオンによると思われるが生体内では減少するであろう生物分解性ジスルフィド結合を含有する接合体を得た。簡単に述べれば、アミノエチル「ｅ」ＶＢ12を、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）と反応させた。ジチオピリジル−アミノエチル「ｅ」ＶＢ12（ＤＴＰ「ｅ」ＶＢ12）生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。遊離チオールを、ＡＮＴＩＤＥ−１に、ＳＰＤＰとの反応により導入した。次に、ジチオピリジル基を、メルカプトエタノールで還元し、生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。同様に、遊離チオールを、イミノチオランとの反応によりＡＮＴＩＤＥ−３に導入した。チオール化生成物（ＳＨ−ＨＮ⁺ＡＮＴＩＤＥ−３）をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。ジスルフィド結合ＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−１及びＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−２接合体は、チオール化ＡＮＴＩＤＥ誘導体とＤＴＰ「ｅ」ＶＢ12とを２．５％酢酸中２４時間反応させることにより得られた。接合物質を、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５クロマトグラフィーに附した後ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。実施例４生分解性リンカーを用いたＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ類似体接合体の形成注射後の循環からＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体が除去される可能性を減少させるために、チオール開裂性ジスルフィド含有スペーサーを用いてＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体を調製した。このスペーサーは、血清中のグルタチオンレベルが低く減少することによりＡＮＴＩＤＥをＶＢ12から開裂できる可能性がある。したがって、チオール開裂性スペーサー（ＳＳ）及びヒンダードチオール基（ＴＳＳ）を用いて、ＡＮＴＩＤＥ−１とＡＮＴＩＤＥ−３との間の接合体を調製した。後者のスペーサーにヒンダードチオールが存在することは、血清グルタチオンに暴露するとよりゆっくりと開裂するであろうことを意味している。同様の長さ（ＳＣ）の非開裂性チオエーテルリンカーを含有する接合体を調製した。チオール開裂性Ｂ12−ＳＳ−ＡＮＴ１及びＢ12−ＳＳ−ＮＨ⁺ＡＮＴ３接合体は、生体外生分解性が上記した延長スペーサー接合体と類似していることが分かった（第１図及び第２図、表５及び表６）。Ｂ12−ＳＳ−ＮＨ⁺ＡＮＴ３を去勢ラットに非経口投与したところ未変性ＡＮＴＩＤＥ−３で見られたのと類似の血清ＬＨでの減少が生じ、一方、Ｂ12−ＳＳ−ＡＮＴ１は未変性ＡＮＴＩＤＥと類似の生体内生分解性を有していた（表６）。このように、ＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体の調製において非開裂性スペーサーではなくチオール開裂性スペーサー（生体外アッセイでＶＢ12−スペーサー−ＡＮＴＩＤＥ接合体のＩＣ５０にほとんど影響しない）を使用することにより、これらの生体内での効力がＡＮＴＩＤＥ（第３図及び第４図、表５及び表６）に類似のレベルまで増加した。トリル基又はヒンダードチオールを取り込んだところ、それぞれの未ヒンダードチオール類似体に対する類似体の生体外又は生体内活性が顕著には変化しなかった。チオエーテル結合を用いて形成した非開裂性接合体は、生体外で試験した時にチオール類似体と類似した活性を有するが、この類似体は、生体内で試験した時に活性が大きく減少した。４時間のラット下垂体前葉細胞培養からのＬＨのＬＨＲＨ刺激放出を拮抗するためのＡＮＴＩＤＥ、ＡＮＴＩＤＥ類似体及びＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体の中央阻害濃度（ＩＣ５０）。接合体（平均＋／−Ｓ．Ｅ．）に関する結果を、独立したトライアルからの組み込まれたＡｎｔｉｄｅ類似体／ｍｌ（培養ウエル中の最終濃度）のｎｇで示す。互いに有意な差がない結果（即ち、Ｐ＞０．０５）は、共通の添字で分類した。実施例５トランスグルタミナーゼ開裂性リンカーを用いたＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ類似体接合体の形成トランスグルタミナーゼ開裂性γ−グルタミル−ε−リシン結合を用いたＶＢ 12とＡＮＴＩＤＥ−１とＡＮＴＩＤＥ−３との間で形成した接合体（Ｂ12−ＴＰ −ＡＮＴ１及びＢ12−ＴＰ−ＡＮＴ３）は、生体外での活性が低く且つ試験投与量では生体内での活性が無視できる程度であり、この結合が生体外又は生体内で開裂されないことを示している。立体特異性によりＡＮＴＩＤＥ−１接合体の開裂が阻害されたのかもしれないし（Ｄ−リシン基の存在による）、立体障害によりトランスグルタミナーゼ酵素によるＡＮＴＩＤＥ−１とＡＮＴＩＤＥ−３接合体の両方の開裂が防止されたのかもしれない。実施例６チオール開裂性架橋剤を用いたＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−類似体リシル−ポリグルタメート接合体の形成一つ以上のＶＢ12分子が接合した高分子主鎖への薬剤の複数コピーを結合することによりＶＢ12輸送系により吸収されることのできる薬剤又はその類似体の量を増加することが望ましい。このようなＶＢ12−薬剤−ポリマー複合体形成方法を説明する。ａ）ＤＴＰ−リシル−ポリグルタメートの形成ポリグルタメート（１００ｍｇ）（分子量６４，６００〜７０，０００、Ｓｉｇｍａ社製）を、ＥＤＡＣ（１００ｍｇ）及びＮＨＳ（アセトン中５０ｍｇ）と、室温で１０分反応させた。リシン（１％ＮａＨＣＯ₃４ｍｌ中４００ｍｇ）を添加し、一晩（Ｏ／Ｎ）反応させた。生成物リシル−ポリグルタメート（ＬＰＧ）を、ＤＷに対してエクステンシブ透析して精製した後、凍結乾燥した。ジチオピリジル−プロピオン酸（５０ｍｇ）をＯ−（Ｎ−スクシンイミジル） −Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボーレート（ＴＳＴＵ）（１００ｍｇ）及びＮ−エチルジイソロピルアミン（１００ｍｇ；ＤＩＥＡ）とＤＭＦ中１時間反応させることにより、ＬＰＴのジチオピリジル誘導体を得た。このように形成したスクシンイミジルエステルを、ＬＰＧ１００ｍｇを２％ＮａＨＣＯ₃４ｍｌに溶解した溶液に直接添加した。反応を一晩進行させた後、生成物（ＤＴＰ−ＬＰＧ）を、ＤＷに対する消耗透析により精製した後、凍結乾燥した。ｂ）イミノチオール化ＡＮＴＩＤＥ−１の調製ＡＮＴＩＤＥ−１（２０ｍｇ）を、ＥＤＴＡ５ｍｇ＋ＤＴＴ５ｍｇ含有ＤＭＦに５％ＤＩＥＡ３００μｌを添加したものに溶解し、アルゴン下で脱気した。イミノチオラン（ＤＩＥＡ／ＤＭＦ５０μｌ＋ホウ酸緩衝液５０μｌ中２０ｍｇ、１００ｍＭｐＨ８．２）を添加し、６０分間反応させてから、ＲＰ−ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥した。ｃ）イミノチオール化アミノエチル−ＶＢ₁₂の調製アミノエチル「ｅ」ＶＢ12（２０ｍｇ）を、ＥＤＴＡ５ｍｇ＋ＤＴＴ５ｍｇ含有ＤＭＦに５％ＤＩＥＡ３００μｌを添加したものに溶解し、アルゴン下で脱気した。イミノチオラン（ＤＩＥＡ／ＤＭＦ５０μｌ＋ホウ酸緩衝液５０μｌ中２０ｍｇ、１００ｍＭｐＨ８．２）を添加し、６０分間反応させてから、ＲＰ− ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥した。ｄ）ＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−リシル−ポリグルタメートの形成ＤＴＰ−ＬＰＧを、ＤＷに２０ｍｇ／ｍｌで溶解した。イミノチオール化−アミノエチル−ＶＢ12をＤＷに５ｍｇ／ｍｌで溶解し、ＤＴＰ−：ＰＧ（容積比：１：２）に添加し、室温で２０分間反応させた後、攪拌しながらイミノチオール化−ＡＮＴＩＤＥ−１（ＤＷ中５０ｍｇ／ｍｌ）を滴下して添加した。反応混合物を、トリス−ＨＣＬｐＨ７．０及びＮａＡｃｅｔａｔｅｐＨ５．５を添加してｐＨ６．５〜７．０に保持した。反応を一晩進行させた後、生成物を透析にて精製後凍結乾燥した。生成物組成をアミノ酸分析で測定したところ、ＡＮＴＩＤＥ−１：リシン：グルタメート＝１：５：２１、即ち、ほぼＡＮＴＩＤＥ２５重量％を含有することが分かつた。ホルモン依存性乳癌及び前立腺癌の治療用にヒトに使用するのに適当なＬＨＲＨ拮抗剤の開発は、従来これらの分子の低効力、生理的緩衝液への低溶解度及び低口腔生物学的利用能により制限されていた。これらの問題を解決する試みとして、本発明者は、効力のあるＬＨＲＨ拮抗剤ＡＮＴＩＤＥの比較的高い生物学的利用能とビタミンＢ12の高生物学的利用能との組み合わせの可能性を検討した。ＡＮＴＩＤＥは、数多くの非天然アミノ酸から構成され且つトリプシン又はキモトリプシンの作用に対して耐性があるので、口腔デリバリーに特に適当である。しかしながら、ＡＮＴＩＤＥは、ＶＢ12への接合に適当な部位を提供するだけでなく、十分な生物学的効力を保持するように変更しなければならない。ＡＮＴＩＤＥは、通常５位、６位及び８位に変更リシン残基、即ち、−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）及びＬｙｓ（ｉＰｒ）を有している。３つの位置のいずれかでこれらの変更を除去すると、ＶＢ12への接合に適当な遊離アミンが提供される。ＶＢ12への接合に適当なＡＮＴＩＤＥの２種の誘導体、Ｄ−Ｌｙｓ⁶−ＡＮＴＩＤＥ（ＡＮＴＩＤＥ−１）及びＬｙｓ⁸−ＡＮＴＩＤＥ（ＡＮＴＩＤＥ− ３）が合成され、生体外下垂体細胞アッセイに高効力を有することが分かった。また、ＡＮＴＩＤＥ−３は、ｓ．ｃ．をラットに投与した時に非常に効力があることも判明した。但し、ＡＮＴＩＤＥ−１は、血清からのクリアランス率の変化によるものと思われるが、拮抗剤活性が無視できる程度であることが分かった。しかしながら、いずれの類似体の生体外及び生体内効力も、ＶＢ12（表３及び表４）への直接接合により大きく減少した。これは、おそらくＡＮＴＩＤＥに近接する大きなＶＢ12分子によるＬＨＲＨ用下垂体レセプターへの接合体の結合での立体干渉によるものと思われる。ＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３へのＶＢ12の直接接合に見られる立体効果を減少させるために、非開裂性リンカーを使用して、アミノエチル−ｅＶＢ 12とＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３の間の共有結合複合体を生成することにより、大きなＶＢ12基をＡＮＴＩＤＥ類似体から分離した。アニリド（ＰＡ）かＥＧＳスペーサーを用いて形成したＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−１接合体、アニリド、ＥＧＳ−若しくはＤＳＳ誘導スペーサーを用いて形成したＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−３接合体は、全て未変性ＡＮＴＩＤＥ（第１図）に類似の生体外活性を有する接合体であり、ＶＢ12基をＡＮＴＩＤＥから多少離れた位置に配置することによりＡＮＴＩＤＥのそのレセプターに対する親和性が回復したことを示している。これらの接合体は生体内で極めて低活性であるが（第２図）、これは生体内効力を大きく減少するであろうトランスコバラミンＩ又はトランスコバラミンＩＩ等のＶＢ12結合タンパク質による循環からの複合体の除去によるものと思われる。接合体におけるＶＢ12の存在又はＶＢ12結合タンパク質によるクリアランスの結果としての接合体の全身性生物学的利用能の減少により生じる立体障害の可能性を減少させる試みとして、ＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ接合体を、生体内で生分解できる可能性のあるリンカーを用いて調製した。生体内で最も容易に開裂され、且つＡ−ＳＳ−Ｂサブユニットトキシン、破傷風トキシン及びジフテリトキシン（Ｓａｎｄｖｉｇ及びＯｌｓｅｎｓ、１９８１；松田及び米田、１９７４）等の生物学的接合体において見出されることから、ジスルフィド結合を最初に選択した。ジスルフィド結合は、血清に見出される低レベルのグルタチオンによるか、細胞の細胞質において開裂されることが分かった（Ａｎｄｅｒｓｏｎ及びＭｅｉｓｔｅｒ、１９８０）。ジスルフィド結合ＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−１及びＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−３接合体は、ＡＮＴＩＤＥや、アニリド−及びＥＧＳ結合ＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−１及びＡＮＴＩＤＥ−３接合体と比較して、生体外効力がわずかに減少した。一方、ジスルフィド結合接合体は、非開裂性延長スペーサー接合体と比較して、生体内効力が大きく増加した（第３図及び第４図、表５及び表６）。Ｂ 12−ＳＳ−ＮＨ⁺−ＡＮＴ３接合体に関しては、生体内生物活性は、ＨＳ−ＮＨ⁺ −ＡＮＴ３類似体の生体内生物活性をわずかに超えた。ジスルフィド結合ではなくむしろ非開裂性チオエーテル結合を含有する同様な長さのスペーサーは、生体内活性が大きく減少し、ジスルフィド結合接合体の活性の増加が生体内開裂能によるものであることを示している。ＶＢ12に直接結合したか、開裂性又は非開裂性スペーサーにより結合されているかにはかかわらず、上記した全ての接合体は、ＰＢＳ又は生理食塩水等の生理緩衝液に対する溶解性が、親ＡＮＴＩＤＥ分子よりも顕著に高いことが分かった（結果は図示してい）。ＶＢ12とＡＮＴＩＤＥ−１及び−３との間の接合体を、血清トランスグルタミナーゼにより開裂できる可能性のあるγ−グルタミル−ε−リシン結合を含有するスペーサーを用いて形成した。これらの接合体が高生体外活性を有するにもかかわらず、生体内活性は極めて低く、スペーサーが生体内では開裂されなかったことを示している。ＩＦに対するＶＢ12−ＡＮＴＩＤＥ−１及び−３接合体の親和性は、接合体の原料物質であるｅＶＢ12異性体の親和性と同等か、それよりも大きかった。他のｃＶＢ12異性体接合体についても、同様のことが観察された（Ｒｕｓｓｅｌｌ− Ｊｏｎｅｓ、１９９４）。これらの検討から、異なる生物活性を有する２つの分子を一緒に結合し且つ各個々の成分の生物活性を実質的に維持することが可能であることが明らかである。このような接合中、両方の分子のレセプター−リガンド結合活性を維持するだけでなく、生薬の生物学的利用能を保持するように注意しなければならない。したがって、スペーサーを用いて、下垂体細胞アッセイで高生体外活性を示し且つＩＦに対して高相対親和性を有するＶＢ12とＡＮＴＩＤＥとの間の複合体を数種調製できたが、これら接合体の生体内生物活性は大きく減少した。この場合、２種の分子を接合するのに生分解性スペーサーを用いた別法では、うまく行くことが分かった。数多くの変更及び／又は修正が、具体的実施態様に示した本発明に対して、大まかに説明した本発明の精神又は範囲から逸脱することなく行うことができることは、当業者には理解されるところであろう。従って、本実施態様は、全ての点において、説明の目的で記載したものであり、本発明を限定するものではないと考えるべきである。文献：１．Ｓｃｈａｌｌｙ，Ａ．Ｂ．、Ａｒｉｕｍａｒａ，Ａ．、Ｋａｓｔｉｎ，Ａ．Ｊ．等、１９７１Ｓｃｉｅｎｃｅ１７３、１０３６２．Ｌｏｕｍａｙ，Ｅ．、Ｎａｏｒ，Ｚ．及びＣａｔｔ，Ｋ．Ｊ．１９８２Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１１１、７３０３．Ｐｅｒｒｉｎ，Ｍ．Ｈ、Ｒｉｖｉｅｒ，Ｊ．Ｅ．及びＶａｌｅ，Ｗ．Ｗ．１９８０Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１０２、１２８９４．Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．及びＡｂｒａｍｓ，Ｊ．、１９８８、ＤｒｕｇｓＴｏｄａｙ、２４、２４１５．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｄ．Ｄ．及びＤａｖｉｓ，Ｍ．Ａ．、「ＥｎｄｏｃｒｉｎｅＴｈｅｒａｐｉｅｓｉｎＢｒｅａｓｔａｎｄＰｒｏｓｔａｔｅＣａｎｃｅｒ」Ｃ．Ｋ．Ｏｓｂｏｒｎｅ編集、Ｂｏｓｔｏｎ、第２５頁６．Ｋａｒｔｅｎ，Ｍ．Ｊ．及びＲｉｖｉｅｒ，Ｊ．Ｅ．１９８６Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｒｅｖ．、７、４４７．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｆ．等、１９８４Ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ、２９、２８３８．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ａ．等、１９８８ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ４３、８８３９．Ｌｊｕｎｄｇｇｕｉｓｔ，Ａ．等、１９８８Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８５、８２３６１０．Ｌｅａｌ，Ｊ．Ａ．等、１９８８Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、６７、１３２５１１．Ｈａｂｅｎｉｃｈｔ，Ｕ．−Ｆ．、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｍ．Ｒ．、ＦａｔｈｙＥｌＥｔｒｅｂｙ，Ｍ．１９９０Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、３７、３９７１２．ＭｃＬａｃｈｌａｎ，Ｔ．Ｉ．、Ｈｅａｌｙ，Ｄ．Ｌ．、Ｂｕｒｇｅｒ，Ｈ．Ｇ．、１９８６Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎａｅｃ．、９３、４３１１３．Ｆａｒｎｗｏｒｔｈ，Ｐ．Ｇ．、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｄ．Ｍ．、ｄｅＫｒｅｔｓｅｒ，Ｄ．Ｍ．及びＢｕｒｇｅｒ，Ｈ．Ｇ．１９８８Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ３１ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎｂｏｖｉｎｅｉｎｈｉｂｉｎｏｎｆｏｌｌｉｃｌｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅａｎｄｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｉｎｒａｔｐｉｔｕｉｔａｒｙｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ：ａｃｔｉｏｎｓｕｎｄｅｒｂａｓａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１２２、２０７〜３１３１４．Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓ，Ｇ．Ｊ．（１９９４）ＯｒａｌｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｐｅｐｔｉｄｅｓｂｙｔｈｅｖｉｔａｍｉｎＢ12 ｕｐｔａｋｅｓｙｓｔｅｍ．「Ｐｅｐｔｉｄｅ−ｂａｓｅｄＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ：ＣｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇＴｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ」Ｍ．Ｔａｙｌｏｒ及びＧ．Ａｍｉｄｏｎ編集、ＡＣＳＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ１５．Ｓａｎｄｖｉｇ，Ｋ．及びＯｌｓｅｎｓ，Ｓ．（１９８１）ＲａｐｉｄｅｎｔｒｙｏｆｎｉｃｋｅｄＤｉｐｔｈｅｒｉａｔｏｘｉｎｉｎｔｏｃｅｌｌｓａｔｌｏｗｐＨ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｎｔｒｙｐｒｏｃｅｓｓａｎｄｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｏｗｐＨｏｎｔｈｅｔｏｘｉｎｍｏｌｅｃｕｌｅ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５６、９０６８〜９０７６１６．Ｍａｔｓｕｄａ，Ｍ．及びＹｏｎｅｄａ，Ｍ．（１９７４）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｔｅｔａｎｕｓｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｉｎｔｏｔｗｏｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｆｒａｇｍｅｎｔｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．、５７、１２５７〜１２６２１７．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．及びＭｅｉｓｔｅｒ，Ａ．（１９８０）Ｄｙｎａｍｉｃｓｔａｔｅｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｉｎｂｌｏｏｄｐｌａｓｍａ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５５、９５３０〜９５３３

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．Ｎ−Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂（Ｄ−Ｌｙｓ₆ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−１）；Ｎ− Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂（Ｌｙｓ₅ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−２）及びＮ−Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）、Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂（Ｌｙｓ₈ＡＮＴＩＤＥ又はＡＮＴＩＤＥ−３）からなる群から選択されるＬＨＲＨ拮抗剤。２．被検者の化学的去勢及び／又はゴナドトロピン依存疾患治療用複合体であって、前記複合体がリンカー基を介してビタミンＢ12又はその類似体であるキャリアに結合したＬＨＲＨ拮抗剤を含んでなり、前記リンカー基はＬＨＲＨ拮抗剤が生体内でキャリアから開裂したものであることを特徴とする複合体。３．前記ＬＨＲＨ拮抗剤が、ＡＮＴＩＤＥ−１、ＡＮＴＩＤＥ−２及びＡＮＴＩＤＥ−３からなる群から選択される請求の範囲第２項に記載の複合体。４．前記ＬＨＲＨ拮抗剤が、ＡＮＴＩＤＥ−３である請求の範囲第３項に記載の複合体。５．複数のＬＨＲＨ拮抗剤が前記キャリアに結合している請求の範囲第２〜４項のいずれか１項に記載の複合体。６．前記キャリアが、シアノコバラミン、アココバラミン、アデノシルコバラミン、メチルコバラミン、ヒドロキシコバラミン、シアノコバラミン、カルバナリド、５−ｏ−メチルベンジルコバルミン、前記キャリア全てのデスジメチル、モノエチルアミド及びメチルアミド類似体、コバマミドの類似体及び同族体、補酵素Ｂ12、５’−デオキシアデノシルコバラミン、クロロコバラミン、スルフィトコバラミン、ニトロコバラミン、チオシアナトコバラミン、ベンゾイミダゾール誘導体、アデノシルシアノコバラミン、コバラミンラクトン、コバラミンラクタム及びアニリド、エチルアミド、プロピオンアミド、ビタミンＢ12のモノカルボン酸及びジカルボン酸誘導体又はその類似体からなる群から選択される請求の範囲第２〜５項のいずれか１項に記載の複合体。７．前記ＬＨＲＨ拮抗剤が前記キャリアにチオール開裂性架橋剤を介して結合している請求の範囲第２〜６項のいずれか１項に記載の複合体。８．前記ＬＨＲＨ拮抗剤が前記キャリアにジスルフィド結合により結合している請求の範囲第６項に記載の複合体。９．請求の範囲第２〜８項のいずれか一項に記載の複合体の有効量を被検者に投与することを含んでなる化学的去勢及び／又はゴナドトロピン依存疾患治療方法。