JPH08510745A

JPH08510745A - 骨髄前駆体細胞増殖および敗血症ショックの処置のためのペプチド

Info

Publication number: JPH08510745A
Application number: JP7500866A
Authority: JP
Inventors: ブロックスマイヤー、ハル・イー; クーパー、スコット; ル、リー; ムーア、ロバート・エヌ; クライスバーグ、ロバート; クライスバーグ、メリンダ・デトリック
Original assignee: リサーチ・コーポレイション・テクノロジーズ・インコーポレイテッド
Priority date: 1993-05-20
Filing date: 1994-05-18
Publication date: 1996-11-12
Also published as: WO1994028013A1; EP0698039A1; CA2162610A1

Abstract

(57)【要約】配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有するペプチドは、広範囲の骨髄造血前駆体細胞の増殖に対して抑制効果を有する。好ましい実施態様では、ペプチドは配列Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する。本発明のペプチドは、骨髄造血過増殖障害の処置に、また、化学療法および放射線照射により誘発される障害から骨髄細胞を保護するのに有用である。配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドも、エンドトキシン誘発敗血症性ショックの処置に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】骨髄前駆体細胞増殖および敗血症ショックの処置のためのペプチド造血前駆体細胞の増殖および分化は、促進性および阻害性分子の相互作用ネットワークにより制御される。生体分子は前駆体細胞の増殖および／または分化を直接促進するかまたは他のサイトカインの生成または作用を増強または抑制することにより間接的に作用する能力を有する。多くのサイトカインは、多官能であり、標的細胞またはアッセイ系に依存する促進または抑制活性を示しうる。骨髄造血に対する促進効果を有する、多くのよく特徴付けられたサイトカインが確認されて来た。エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、顆粒球−コロニー促進因子（Ｇ−ＣＳＦ）、および顆粒球マクロファージ−コロニー促進因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、骨髄細胞の生成を促進することが知られており、又、化学療法誘発骨髄抑制の処置において臨床上の有用性を有する。又、骨髄造血を抑制するのに作用する分子も知られており、ブロックスマイヤー（1992）アメリカン・ジャーナル・オブ・ペディアトリック・ヘマトロジーオンコロジィ、１４：２２に概括されている。精製された天然および組替え分子は、いずれも生理的に活性なサプレッサー分子として関係づけられて来た。これらの分子のあるものは、前駆体細胞レベルで直接に作用して、そのような細胞の増殖能力を減少させ、一方、他のものは、間接的に作用して促進性サイトカインの生成および／または放出を減少させる。例えば、精製および組替え形のＨフェリチンはインビトロで骨髄前駆体の成長因子誘発クローン増殖を抑制し、Ｈフェリチンは、マウスに投与すると、抑制活性を有する。未成熟およびより成熟した前駆体細胞は、いずれもＨフェリチンによる阻害に対して反応する。マクロファージ炎症蛋白（ＭＩＰ）−１αは、ヒトおよびマウスコロニー形成単位の顆粒球、赤血球、マクロファージおよび巨核球（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）並びにマウスＣＦＵ−Ａを含む、より未成熟な前駆体細胞に対し抑制活性を有する。また、インターフェロン（ＩＦＮs）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦs）、プロスタグランジンＰＧＥ₁およびＰＧＥ₂、インヒビン、および形質転換成長因子（ＴＧＦ）−βも、骨髄前駆体細胞に関する制御因子として関係づけられて来た。鉄結合蛋白ラクトフェリンは、単核球およびマクロファージからコロニー促進因子またはＩＬ−１の生成または放出を減少させることにより間接的抑制活性を発揮する。ラクトフェリン、ＨフェリチンまたはＰＧＥで処理したマウス由来の骨髄および脾臓細胞は、いずれもインビトロで初期骨髄前駆体に対し抑制活性を有する分子を放出する（ジェンタイル等、1989、ブラッド７４：２２８ａ；ジェンタイル等に対する米国特許第５,１４９,５４４号）。サプレッサー分子は、８kbの見かけ分子量を有し、それはＭＩＰ−Ｉαと似ているが、ＭＩＰ−Ｉαとは生化学的ならびに免疫学的に明らかに異なる。骨髄造血のペプチドサプレッサーも報告されている。米国特許第４,３８４,９９１号は、顆粒球から精製された、正常および白血病の骨髄細胞の増殖を阻害するインヒビターを記載する。インヒビターは、アミノ酸組成、Ｔau₁Ａsx₁Ser₂Ｔ hr₁Ｇlx₃Ｇly₂Ａla₁（ＰＯ₄）^-を有すると報告されている。ル等（1989）エクスペリメンタル・ヘマトロジィ，１７：９３５は、合成ペンタペプチドＧlu−Ｇlu −Ａsp−Ｃys−Ｌysの抑制活性を報告している。ムーア等（1988）ジャーナル・オブ・イムノロジィ，１４１：2699は、タフトシンアナログ、（ＡＬＡ¹）−タフトシンがマクロファージコロニー促進因子（Ｍ−ＣＳＦまたはＣＳＦ−１）およびリポポリサッカリド（ＬＰＳ）に反応性の前駆体細胞の限られた群に対し阻害効果を有すると報告している。骨髄造血に対し促進効果を有するサイトカインは、化学療法誘発骨髄抑制の処置において臨床的有用性を有する。負の調節剤（regulator）は、過増殖状態での血液細胞生成を鈍らせることによる造血障害の処置に、また、サイクル外、従ってＳ−相特異的化学療法薬物の影響から可逆的に保護された状態に、正常な前駆体を選択的に配置するために、潜在的に有用である。従って、骨髄造血の臨床上有用なサプレッサーがこの分野で必要とされる。グラム陰性敗血症は、細菌エンドトキシンが重大な合併症、例えばショック、成人呼吸性困難症候群および播種性血管内凝固などをもたらす生化学的現象を誘発する感染に反応する進行性の有害全身性炎症である。敗血症および敗血症性ショックに対する新しい治療法の継続的な開発にもかかわらず、死亡率は依然として容認できないほど高い。従って、この分野では敗血症および敗血症性ショックの処置および予防に関する有効な治療法が依然として必要である。本発明によって、骨髄前駆体細胞の増殖を抑制することが可能である新規なペプチドが判明した。本発明のペプチドは、骨髄増殖障害、例えば白血病の処置に、また、骨髄造血を抑制することによる化学療法に先立ち造血細胞を保護するのに有用である。また、本発明のペプチドは、敗血症性ショックの処置および予防に有用である。本発明は、一実施態様において少なくとも５つのアミノ酸を含み、さらに配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む生物学的に活性なペプチドに関する。好ましい実施態様では、ペプチドは配列Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む。他の実施態様では、ペプチドは配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａlaを含む。好ましい実施態様では、生物学的に活性なペプチドはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａ la−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroである。さらに他の実施態様では、ペプチドはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg である。もっと別の実施態様では、ペプチドはＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla− Ａsn−Ｐhe−Ｐroである。また、本発明は、配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドを含む医薬組成物、および配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドの、骨髄前駆体細胞の増殖抑制および敗血症性ショックの予防および処置における使用を包含する。他の実施態様では、本発明は骨髄造血過増殖障害の処置方法を提供する。さらに本発明は、化学療法誘発骨髄抑制の緩解方法を提供する。本発明のさらに別の態様は、エンドトキシン誘発敗血症性ショックの予防方法を提供する。図１は抗−ペプチドＩgＧと固定化ペプチド抗原との結合を妨げる可溶性フェリチンと１４−量体ペプチドの能力を比較する競合的ＥＬＩＳＡの結果を示すグラフである。本発明は、骨髄前駆体細胞の増殖を抑制する生物学的に活性なペプチドに関する。本発明のペプチドは、５ないし２０またはそれ以上のアミノ酸を含み、隣接のアミノ酸Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg（配列番号：１）を含む。残基Ａla−Ｌys− Ｐro−Ａrgは本明細書ではテトラマーと称する。当業者にとっては明らかであるように、テトラマーはペプチドが骨髄抑制活性を維持するようにペプチドの如何なる位置であってもよい。同様に、ペプチドの付加的残基は、骨髄抑制活性を維持する限り如何なるアミノ酸でもよい。本発明のペプチドの骨髄抑制活性は、以下に記載のように測定できる。好ましい実施態様では、ペプチドは配列Ｌys-Ａl a−Ｌys−Ｐro−Ａrg（配列番号：２）を含む。他の実施態様では、ペプチドは配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla（配列番号：３）を含む。さらに他の実施態様では、ペプチドは配列Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐ ro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro（配列番号：４）を含む。好ましい実施態様では、生物学的に活性なペプチドはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla −Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroである。他の好ましい実施態様では、ペプチドは、Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａ rg（配列番号：５）である。さらに他の好ましい実施態様では、ペプチドはＡla −Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro（配列番号：６）である。本発明のペプチドは、この分野で既知の方法により合成しうる。例えば、ペプチドは課題のペプチドを含む蛋白またはポリペプチドから化学的または酵素的切断により誘導しうる。好ましくは、ペプチドは、メリフィールド合成のような溶液または固相合成手段を含む既知方法により化学的に合成され、そこで保護アミノ酸はエステル結合として樹脂粒子に結合する。固相合成は、通常、長いペプチドの合成に好ましく、短いペプチドは、溶液合成により効果的に作ることができる。合成後、ペプチドは、ゲル電気泳動、シリカゲルまたはアルミナクロマトグラフィー、および高圧液体クロマトグラフィーのような技術的に知られた方法によって精製できる。本発明のペプチドの骨髄抑制活性は、骨髄前駆体細胞の増殖を測定する標準的アッセイによって測定できる。そのようなアッセイは当業者にとって既知である。本発明のペプチドは、顆粒球−マクロファージ前駆体細胞（ＣＦＵ−ＧＭ）マクロファージ前駆体（ＣＦＵ−Ｍ）、および顆粒球前駆体（ＣＦＵ−Ｇ）の成熟サブセット、並びにＣＦＵ−ＧＭ、赤芽球（ＢＦＵ−Ｅ）および多能性（ＣＦＵ −ＧＥＭＭ）前駆体の初期サブセットを含む、広範囲の前駆体細胞サブセットの増殖を抑制する。従って、かかる前駆体細胞の増殖を測定する種々の既知アッセイの如何なるものも、本ペプチドの抑制活性を測定するのに適する。さらに、このペプチドの活性は種特異性ではなく、従って、活性は、例えば、ヒトまたはマウス骨髄前駆体細胞を含む哺乳動物細胞を用いるアッセイで測定できる。典型的アッセイは、顆粒球−マクロファージコロニーおよびクラスター形成を測定し、米国特許第５,１４９,５４４号に記載されている。簡単に述べると、正常なエンドトキシン耐性マウス由来の骨髄細胞の単一細胞懸濁液を調製して軟寒天培地に培養する。アッセイ当りの細胞の濃度は、典型的には１×１０⁵細胞／m lである。ＣＦＵ−ＧＭの増殖は、各培養物へのマウスＧＭ−ＣＳＦの添加によって促進される。各培養物は、さらに本発明のペプチドまたはコントロール培地を含む。培養物を十分に湿ったＣＯ₂環境でインキュベートし、全コロニー（５０細胞以上）およびクラスター（４ないし５０細胞）を５ないし８日後に計数する。ペプチドの阻害活性は、ＣＳＦ−促進コロニーおよびクラスター形成がコントロール培地によるアッセイに比べて減少している量として測定する。上記アッセイの適当な変法としては、適当な成長因子または興奮剤により剌激されたマウスまたはヒト前駆体細胞の他のサブセットのコロニー形成の抑制の測定を含む。かかる変更は、組換えマウスＧＭ−ＣＳＦ単独または組換えマウスＧＭ−ＣＳＦと組換えマウススチール因子（肥満細胞成長因子および幹細胞成長因子としても知られている）との組合せにより刺激されたマウスＣＦＵ−ＧＭの未成熟サブセットによるコロニー形成の抑制の測定を含む。マウスＣＳＦ−１によって刺激された成熟マクロファージ前駆体（ＣＦＵ−Ｍ）、或は組換えヒトＥＰＯにより剌激された未成熟赤芽球（ＢＦＵ−Ｅ）または多能性（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）前駆体のコロニー形成の抑制の測定も、本発明のペプチドの活性を測定するのに用いることができる。他の適切なアッセイは、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦと組換えヒトスチール因子の組合せにより刺激されたヒトＣＦＵ−ＧＭ、または組換えヒトＧＭ−ＣＳＦにより刺激された成熟ＣＦＵ−ＧＭ、または組換えヒトＧ− ＣＳＦにより剌激された成熟顆粒球前駆体細胞（ＣＦＵ−Ｇ）、または組換えヒトＥＰＯと組換えヒトＩＬ−３または組換えヒトスチール因子のいずれかとの組合せで剌激された未成熟ＢＦＵ−Ｅ、または組換えヒトＥＰＯと組換えヒトスチール因子により剌激された未成熟ＣＦＵ−ＧＥＭＭの未成熟サブセットによるコロニー形成の抑制の測定を含むが、これに限定されない。以上で検討したように、ペプチドの阻害活性は、サイトカイン−促進コロニーおよびクラスター形成が減少する量として測定され、そしてコントロール培地からコロニー形成のパーセント変化として表すことができる。本発明によれば、ペプチドは、それが上記の、または類似のアッセイのいずれかでコントロール培地に比べてコロニー形成を有意に阻害する（ｐ＜０.０５）ことができるならば、サプレッサー活性を有すると考えられる。また、本発明のペプチドの骨髄抑制活性は、実験動物、例えばマウスにペプチドを注射すること、そして大腿骨および脾臓の前駆体細胞の増殖および絶対数に対する、並びに骨髄、脾臓および血液の有核細胞性に対する影響を測定することによって評価することもできる。例えば、骨髄造血前駆体細胞の増殖に対する本発明のペプチドの影響は、メイズ等（1992）、ジャーナル・オブ・イムノロジィ，１４９：1004に記載されるようにして測定できる。簡単に述べると、マウスに無菌のパイロジェン−フリーの食塩水または無菌のパイロジェン−フリーの食塩水に希釈した本発明のペプチドのいずれかを静脈注射（i.v.）する。単一用量i.v.注射の２４時間後に、マウスは大腿骨骨髄および脾臓ＣＦＵ−ＧＭ、ＢＦＵ−Ｅ並びにＣＦＵ−ＧＥＭＭの環流速度（細胞周期のＳ−期中の細胞のパーセント）に対するペプチドの作用、そして、また、骨髄および脾臓の前駆体細胞および有核細胞の絶対数に対するペプチドの作用を評価する。前駆体細胞の絶対数および環流状態を評価する方法は、当業者にとって既知であり、例えばブロックスマイヤー等、（1987）ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲイション７９：７２１に記載されている。本発明によれば、ペプチドが上記の、または類似のアッセイで、食塩水対照に対してＳ−期の前駆体の絶対数または前駆体のパーセントを有意に阻害する（ｐ＜０.０５）ことができるならば、ペプチドは前駆体細胞増殖の抑制効果を有するとみなされる。さらに本発明は、このペプチドの製薬上許容されうる塩に関する。塩は、製薬上許容されうる無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸および硫酸、並びに製薬上許容されうる有機酸、例えばクエン酸、酒石酸、フマール酸、メタンスルホン酸およびエタンスルホン酸を用いる標準的方法により調製されるものを含む。好ましい塩は塩酸塩である。本発明によって、配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドが、骨髄抑制を誘導すること、即ち、インビトロおよびインビボのいずれにおいても、骨髄前駆体細胞の増殖を抑制することができることが判明した。従って、本発明は、増殖過程が制御を消失した過増殖疾患状態、例えば真性白血病および赤血球増加症において骨髄細胞の増殖を減少させるのに有効である。従って、本発明の他の態様は、治療有効量の配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む少なくとも一つのペプチドを患者に投与することを特徴とする治療有効量の本発明のペプチドに応答する骨髄造血過増殖障害の処置方法を提供する。処置方法の好ましい実施態様では、ペプチドは式Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有する。他の好ましい実施態様では、ペプチドは式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａ la−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する。他の実施態様では、ペプチドは配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−ＡlaまたはＬys−Ａla−Ｌys−Ｐro− Ａrgを含む。さらに他の実施態様では、ペプチドは配列Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle −Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを含む。他の実施態様では、ペプチドは式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−Ａrgを有する。さらに他の実施態様では、ペプチドは式Ａla−Ｌys−Ｐ ro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する。本発明によれば、治療有効量は、骨髄前駆体細胞の増殖の抑制もたらす量と定義される。処置の有効性は、末梢血液数の、または骨髄の造血前駆体（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ、ＢＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−ＧＭ）の頻度（コロニー／プレートされた細胞）の分析、或は処置の前後における末梢血液の上記細胞の絶対数（コロニー／血液のml）により評価され得る。増殖に対する影響は、又、骨髄吸引でのＳ−期の細胞（即ち環流前駆体）の細胞のパーセントを測定することにより評価することもできる。前駆体細胞の絶対数またはＳ−期の細胞のパーセントの減少は処置の効果と相関関係にある。好ましい実施態様では、過増殖障害は白血病である。さらに好ましい実施態様では、白血病は急性または慢性骨髄白血病である。他の好ましい実施態様では、過増殖障害は真性赤血球増加症である。化学療法剤および放射線照射は、急速に増殖している細胞に対する作用により重篤な骨髄抑制（myelosuppression）を起こすことが知られている。化学療法誘発骨髄抑制は、癌処置の最も一般的な投与量制限および死に致る可能性のある合併症である。現在、ＥＰＯ、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦを含む造血成長因子は、化学療法誘発骨髄抑制を伴う患者の骨髄造血を促進するのに用いられている。化学療法または放射線照射前、および治療中の本発明のペプチドによる患者への処置は、骨髄前駆体の細胞周期速度を逆に抑制し、従って化学療法誘発障害にさらされる細胞数を減少させることができる。本発明のペプチドによる処置は、細胞周期の非Ｓ−期部分に前駆体を置くことにより化学療法および放射線の影響から骨髄細胞を保護する。好ましい実施態様では、化学療法前、少なくとも一つの、配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドによる処置が、化学療法に続くコロニー剌激因子による処置と組合せて用いられる。従って、本発明の他の局面は、治療有効量の配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む少なくとも一つのペプチドを、化学療法前、患者に投与することを含む化学療法誘発骨髄抑制の減少方法を提供する。処置方法の好ましい実施態様では、ペプチドは式Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有する。他の好ましい実施態様では、ペプチドは式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla− Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する。式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌ ys−Ｐro−ＡrgおよびＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有するペプチドも考慮される。他の実施態様では、ペプチドは配列Ａla−Ｌys−Ｐro −Ａrg−ＡlaまたはＬys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む。さらに他の実施態様では、ペプチドは、配列Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐ ro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを含む。本発明によれば、治療有効量は、結果として骨髄前駆体細胞の増殖の抑制をもたらす量と定義される。処置の有効性は、末梢血液数の、または骨髄の造血前駆体（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ、ＢＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−ＧＭ）の頻度（コロニー／プレートされた細胞）の分析、或は主題のペプチドによる処置の前後の末梢血液中のかかる細胞の絶対数（コロニー／血液の ml）により評価できる。また、増殖に対する作用も骨髄吸引液でのＳ−期の前駆体細胞のパーセントを測定することにより評価できる。また、本ペプチドはエンドトキシン誘発敗血症性ショックの処置および予防に有用である。エンドトキシン誘発敗血症性ショックは、循環器系変化、例えば低血症および多重器管不全となる播種性血管内凝固を伴うグラム陰性菌血症および敗血症によって特徴づけられる障害である。敗血症性ショックは、低血症および血管収縮剤抵抗性をもたらす生理学的障害のカスケードにより特徴づけられる。エンドトキシンおよびサイトカインによる血管壁酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）の誘発は、強い血管拡張神経状態と内皮障害を伝達する。開発中の最近の治療剤は、カスケードの特定の現象を標的とし、抗エンドトキシン生成物、酸化窒素インヒビターおよびサイトカインインヒビターを含む。本発明によれば、配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドが、敗血症性ショックの危険にさらされている哺乳動物のエンドトキシン誘発敗血症性ショックに対する羅病性を減少させ得ることが判明した。ペプチドは、５ないし２０のアミノ酸を含み、上記したように、この分野で知られた方法により合成できる。当業者にとって明らかなように、テトラマーは、ペプチドが毒素ショックに対する羅病性を減少する活性を有するよう、ペプチドの如何なる位置にあってもよい。同様に、ペプチドの付加的残基は、生物学的活性（即ち、敗血症性ショックに対する羅病性の減少）を維持する限り、如何なるアミノ酸であってもよい。好ましい実施態様では、ペプチドは配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａlaを含む。他の実施態様では、ペプチドは配列Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む。さらに他の実施態様では、ペプチドは配列Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを含む。好ましい実施態様では、ペプチドは式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla− Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する。式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌ ys−Ｐro−ＡrgおよびＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有するペプチドも考慮され得る。本発明のペプチドの敗血症性ショックに対する羅病性減少効果は、致命的エンドトキシン誘発敗血症性ショックの危険にさらされている患者に似せたインビボモデルで評価できる。簡単に述べると、実験動物、例えばマウスはグラム陰性細菌エンドトキシンの主要毒素成分である、Ｅ．コリリポポリサッカリド（ＬＰＳ）の腹腔内（i.p.）注射の直前に本発明のペプチドを静脈内に（i.v.）投与する。このモデルで、ＬＰＳの投与量は、約２ＬＤ₅₀である、８００μg／マウス（４０mg／kg）であり、大多数の死亡はＬＰＳの注射後、２４と４８時間の間に起きる。本発明のペプチドの好ましい投与量は、本モデルでは約１０μgである。食塩水対照に対する、本モデルでの死亡率を統計的に有意に減少するペプチドは、本発明による、敗血症性ショックの予防方法に有効であると考えられる。従って、本発明は、治療有効量の配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドの少なくとも一つを敗血症性ショックの危険にさらされている患者に投与することを含む、エンドトキシン誘発敗血症性ショックの予防方法を提供する。敗血症性ショックの予防の好ましい実施態様では、ペプチドは式Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａ rgを有する。他の好ましい実施態様では、ペプチドは式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle −Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する。他の実施態様では、ペプチドは配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−ＡlaまたはＬys−Ａ la−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む。さらに他の実施態様では、ペプチドは配列Ｇlu− Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe− Ｐroを含む。式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−ＡrgおよびＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有するペプチドも考慮され得る。敗血症では、エンドトキシンおよびサイトカインが内皮および血管平滑筋に、および他の細胞並びに組織で酸化窒素（ＮＯ）シンターゼの誘発を起こす。増強されたＮＯ合成は、血管拡張、内皮障害および他の細胞に対する障害の増加により特徴づけられる細胞毒効果を有し（例えばポーマー（1993）アーカイブス・オブ・サージェリィ，１２８：３９６参照）、従って、敗血症性ショックの致死段階と関連している心血管崩壊の原因となる。上記したように、本発明のペプチドはエンドトキシン誘発敗血症性ショックに対する羅病性を減少することができる。特に、表６、７および８に示すように、本発明のペプチドはＬＰＳの作用を妨害し、細菌エンドトキシンＬＰＳの主要毒素成分は、強力な硝酸シンターゼ（ＮＯＳ）誘導可能な刺激剤である、ＮＯの合成を触媒する酵素であることが知られている。従って、本発明のペプチドは、細胞傷害性ショックのＮＯ−誘発病理学的作用、即ちＮＯ−誘発低血圧を減少させる。本ペプチドは、医薬組成物として治療有効量を宿主に投与しうる。医薬組成物は、治療有効用量の本発明によるペプチドを、製薬上許容されうる基剤とともに含みうる。当業者は、本治療用ペプチドの用量および最も適切であろう組成物を決定することができ、そしてそれは投与の形態および選択した特定のペプチドによって変わるであろうし、さらにまた、それは処置される特定の患者によって変わるであろう。一般に、処置は、少用量で、次いで化合物の至適用量以下で開始し、そして用量は、現状で至適効果に達するまで少しづつ増加させて行く。組成物を経口投与する場合、より少量の非経口的に与えられる量と同じ効果を生じさせるために、大量の活性物質を要することが一般的に理解される。ペプチドは、比較され得る治療剤と同様に有効であり、投与量は、一般に他の治療剤に用いられる量と同じオーダーである。経口投与される場合、本発明のペプチドの治療用量は、たとえナノモル範囲でも一般に有効であり、これらの化合物は、マイクロモル量で、処置哺乳動物の約１０ないし約５００mg／kg体重の範囲のマイクロモル当量で有効である。非経口的に投与される場合、化合物は、宿主および所望する効果にもよるが、一般に、例えば０.０１mg／kg〜約２００mg／kgの用量で投与される。好ましい用量は０. ５〜１０mg／kg処置哺乳動物の体重の範囲である。組成物は、経口、静脈内（溶解性なら）、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、皮下、非経口、腸管経由などを含むよく知られた経路により投与できる。投与の経路によって、医薬組成物は保護コーチングを必要としうる。注射用に適した医薬形態は、無菌の水性溶液または分散液並びに無菌の注射用溶液または分散液用の用時（extemporaneous）調製製剤用の無菌粉末を含む。全ての場合に、最終溶液形は無菌且つ液状でなければならない。典型的な基剤は、例えば、緩衝化水性溶液水（即ち、生体適合性緩衝液）、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールのようなポリオール、それらの適当な混合物、界面活性剤または植物油を含む溶媒または分散媒体を含む。滅菌は、抗菌または抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸またはチメロサールの添加を含む当分野で知られた技術により行い得るが、これに限定されない。さらに、等張剤、例えば糖または塩化ナトリウムを当該組成物に取り込みうる。当該のペプチドを含む無菌の注射用溶液の製造は、これらのペプチドの必要量を適当な溶媒に上記の種々の成分と共に処方し、必要ならば、次いで滅菌、好ましくは滅菌濾過により行う。無菌粉末を得るために、上記溶液は、必要な場合、真空乾燥または凍結乾燥する。ペプチドを経口投与する場合、有効用量のペプチドを含むその医薬組成物は、不活性希釈剤、吸収されうる可食性基剤等を含み得、硬または軟殻ゼラチンカプセルであり得、錠剤に打錠し得、またはエリキシル、懸濁液、シッロップ等であり得る。以下の実施例は本発明をさらに詳細に説明するものである。実施例１抗−フェリチンと抗−１４−量体ペプチド間の交差反応性の欠如１４−量体ペプチドＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａ1a−Ｌys−Ｐro −Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroは、ザ・デパートメント・オブ・メディシン、ベテランズ・アドミニストレイション・メディカル・センター、ユニバーシティー・オブ・テネシー、メンフィス、ＴＮのペプチド機関で固相合成により合成した。ペプチドはＧ−１０セファデックスクロマトグラフィにより精製し、ザ・モレキュラー・バイオロジィ・リソース・ファシリティ、ユニバーシティー・オブ・テネシー、ノックスビルによって実施されたアミノ酸分析は、ペプチドのモル比が一致した。これはインディアナ・ユニバーシティー・スクール・オブ・メディシンで確認した。１４−量体ペプチドおよびラット肝臓フェリチンに対する抗体は、マートルス・ラビトリィ、トンプソン・ステイション、ＴＮから購入した雌ニュージーランド白ウサギを用いて産生させた。０.０１Ｍリン酸緩衝食塩水、pＨ７.２（ＰＢＳ）中１mgの抗原を等容量のフロインド完全アジュバンドに乳化した。４つの皮下（s.c.）注射（各０.２５ml）を上記各付属体に与え、そしてその後各３０日間隔で、続く、ＰＢＳ中の同一抗原注射を行った。第二および続く注射後７日目に血清を得た。１８％Ｎa₂ＳＯ₄による二回沈殿により免疫グロブリンＧを調製した。固定化１４−量体ペプチドについてのアフィニティ精製によりペプチド特異的ＩgＧを調製した。無水シトラコン酸でブロックした遊離アミノ基を有する７mgのペプチドを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を用い、ジアミノジプロピルアミンゲル２mlと結合させた。ペプチドーゲルを０.５Ｍ酢酸アンモニウム、pＨ４.０で処理して結合ペプチドのアミン基から無水物を分離させた。０.５Ｍ酢酸アンモニウムpＨ４.０でペプチドーゲルから溶出したペプチド特異的ＩgＧをＰＢＳに対して透析し、滅菌濾過して −２０℃で貯蔵した。２つのＩgＧ調製物についての交差反応性を検定するための競合ＥＬＩＳＡを９６−ウエルイムロン２プレートで実施した。０.０１Ｍ炭酸緩衝液、pＨ９.６中フェリチンまたはペプチド１.０μg／５０μlを各ウエルに加えて、５℃で一夜、吸着させた。０.０５％トウーン２０を含む５０μlのＰＢＳ中の抗体を、可溶性フェリチンまたはペプチドの存在または不存在下に洗浄したウエルに加え、シェーカー上で３７℃、６０分間インキュベートした。ＰＢＳ−トウーンで洗浄後、結合ＩgＧを、基質として２,２’−アジノ−ジ［３−エチル−ベンズチアゾリン−６−スルホン酸］を用い、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−結合組換えプロテインＧで検出した。個々のウエルの吸光度を、自動ミクロプレート読取器を用い４０３nmで測定した。ウエスタンイムノブロットを、ミニ・プロテアンIIゲル装置を用い、プレカスト４−１５％勾配ゲルでフェリチンのＳＤＳ− ＰＡＧＥから作成した。試料を１４mＡの一定アンペア数で９０分間、電気泳動した。バイオトランス半乾燥電気泳動トラスファーユニットを用い、０.１９Ｍグリシンおよび０.１ＭＳＤＳを含む０.０２５Ｍトリス緩衝液、pＨ８.５で蛋白をイムノグロブリン−ＰＰＶＤＦ膜に移した。トリス緩衝化食塩水（ＴＢＳ）、pＨ７.５中、１５分間洗浄後、膜はＴＢＳ中３％脱脂乾燥ミルクで３７℃、３０分間ブロックし、０.０５トウィーン２０を含むＴＢＳ（ＴＢＳ−トウーン）で再び洗浄した。膜をＴＢＳ−トウィーン中、適当な抗体と室温で一晩インキュベートし、洗浄し、そしてＨＲＰ−プロテインＧと室温で３時間インキュベートした。結合プロテインＧをＩＢＩエンザイグラフィック・ウェブで検出した。すべてのアッセイは、容易に再現でき、アッセイは３回実施した。得られた値は平均±標準誤差の平均である。統計的分析をスチューデントＴ検定試験により行った。フェリチンおよび１４−量体ペプチドで免疫したウサギの血清から免疫グロブリンＧ抗体を調製した。抗−ペプチドＩgＧは固定化ペプチドを用いるアフィニティ精製によりさらに精製した。抗体は、ＥＬＩＳＡで評価すると、フェリチンと１４−量体ペプチド間で最小交差反応性を示し、従って、１４−量体とフェリチンの免疫関連性の欠如を示した。図１に示されるように、可溶性ペプチドは抗体に有効に競合するけれども、可溶性フェリチンは、ＥＬＩＳＡのウエルに固定されたペプチドへの抗−ペプチドの結合を減少させない。同様の結果が、フェリチンと１４−量体ペプチドをフェリチン／抗フェリチンＥＬＩＳＡで競合体（co mpetition）として用いた場合に得られた。即ち、ペプチドは競合しなかったが、一方、フェリチンは固定抗原への抗体結合を著しく減じた。図１に示したＥＬＩＳＡについては、抗ペプチドを６００mg／ml最終濃度で、所与の濃度の可溶性フェリチンおよびペプチドと同時にペプチド被覆ウエルに添加した。示した値は、ＨＲＰ結合プロテインＧとの結合ウサギＩgＧ検出後の４０３nmでの吸光度である。実施例２本実施例は、マウスＣＦＵ−ＧＭの増殖に対する１４−量体ペプチドの抑制効果を示す。マウスＣＦＵ−ＧＭによるコロニー形成に対する１４−量体ペプチドとコントロール寄せ集め（scrambled）ペプチドの効果を評価した。７.５×１０⁴マウスＢＤＦ₂骨髄細胞／プレート／mlを、１００μ／ml rmuＧＭ−ＣＳＦプラス５０n g／ml rmuスチール因子および１４−量体ペプチド、寄せ集めペプチドまたはコントロール媒体のいずれかの存在下で塗布した。５％ＣＯ₂および５％Ｏ₂でインキュベーションの７日後、コロニーを計数した。表１および２に示すように、１４−量体ペプチドは、実施例１に記載と同様に合成し、また、ジ・インディアナ・ユニバーシティー・スクール・オブ・メディシンでも合成し、組換え（ｒ）マウス（mu）顆粒球−マクロファージコロニー剌激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（イムネックス・コーポレイション）とrmuスチール因子（ＳＬＦ、イムネックス・コーポレイション；ｃ−キットリガンド、幹細胞因子および肥満細胞成長因子とも呼ばれる）の組合せにより剌激されたマウスＢＤＦ₁骨髄顆粒球−マクロファージ前駆体細胞（ＣＦＵ−ＧＭ）の未成熟サブセットによるコロニー形成を抑制した。１４−量体ペプチドの抑制活性の特異性は表１に示したように立証されており、抑制ペプチドと同一のアミノ酸を含む混合（ランダム）配列：ＮＨ₂−Ｇlu(Ｅ)−Ａla(Ａ)−Ｔhr(Ｔ)−Ｌys(Ｋ)−Ｖal(Ｖ)− Ｐro(Ｐ)−Ｉle(Ｉ)−Ａrg(Ｒ)−Ｍet(Ｍ)−Ｌys(Ｋ)−Ｐhe(Ｆ)−Ａla(Ａ)−Ａ sn(Ｎ)−Ｐro(Ｐ)−ＣＯＯＨ（ジ・インディアナ・ユニバーシティー・スクール・オブ・メディシンで合成された）の１４−量体ペプチドは抑制しなかった。実施例３表２および３に示すように、１４−量体ペプチド（ＮＨ₂−ＥＴＶＩＭＫＡＫＰＲＡＮＦＰ−ＣＯＯＨ）は骨髄前駆体細胞の異なるサブセットに対し広範囲の活性を有し、本活性はマウス（表２）およびヒト（表３）両前駆体について明らかである。表２に見られるように、１４−量体ペプチド（１４マーペプチド）は rmuＧＭ−ＣＳＦで剌激されたマウス骨髄未成熟ＣＦＵ−ＧＭ、muＣＳＦ−１で剌激された成熟マクロファージ前駆体（ＣＦＵ−Ｍ）並びにＩＵ／ml rhuエリスロポイエチン（アムゲン）で刺激された未成熟赤芽球（ＢＦＵ−Ｅ）および多能性（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）前駆体の増殖を抑制した。興味あることに、未成熟ＣＦＵ−ＧＭ、ＢＦＵ−ＥおよびＣＦＵ−ＧＥＭＭに対し抑制活性を有するrmuマクロファージ炎症蛋白（ＭＩＰ）−１０α（ＲアンドＤシステムズ）（ブロックスマイヤー等、ブラッド７６：1100，1990；ジャーナル・オブ・イムノロジィ，１４７：2586，1990；マンテル等、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミィ・オブ・サイエンシズＵＳＡ，９０： 2232，1993）は、成熟ＣＦＵ−Ｍに対し活性を有しない、即ち、１４−量体ペプチドはＭＩＰ−１０αとは区別される（表２）。表３に見られるように、１４−量体ペプチド（１４マーペプチド）は、rhuＧＭ−ＣＳＦ（イムネックス・コーポレイション）とrhuＧＭ−ＣＳＦで刺激されたrhuＳＬＦ（イムネックス・コーポレイション）成熟ＣＦＵ−ＧＭで剌激されたヒト骨髄未成熟ＣＦＵ−ＧＭ、rhu顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ、イムネックス・コーポレイション）により刺激された成熟顆粒球前駆体細胞（ＣＦＵ−Ｇ）、rhuＥpoとrhuインターロイキン（ＩＬ）−３（イムネックス・コーポレイション）またはrhuＳＬＦのいずれかとで剌激された未成熟ＢＦＵ−ＥおよびrhuＥＰＯとrhuＳＬＦにより剌激された未成熟ＣＦＵ−ＧＥＭＭに対する抑制活性を有する。実施例４高精製正常ヒト骨髄前駆体細胞に対する１４−量体ペプチドの影響を試験した。５００非粘着性低密度Ｔ−リンパ球減少ＣＤ³⁴⁺⁺⁺区分骨髄細胞／ml／プレートを、５％ＣＯ₂に調製し、低（５％）Ｏ₂張力の湿潤大気中、ＩＵ／ml rhuＥＰＯ、５０ng／ml rhuスチール因子、２００Ｕ／ml rhu ＧＭ−ＣＳＦおよび２００Ｕ／ml rhuＩＬ−３の存在下に１４日間インキュベートした。表４の結果は、個体数の５０％以上の細胞が前駆体細胞であるので、１４−量体ペプチドは抑制的に働き、骨髄前駆体細胞に直接作用することを示す。本抑制は、個体数の１／１０００以下の細胞が前駆体細胞である場合に見られたものと同じである（例えば表３および４参照）。実施例５マウスに０.２mlの無菌パイロージェン−フリーの食塩水、或は０.２ml（２ng 含有）の１４−量体ペプチドまたは寄せ集め１４−量体ペプチドを静脈内注射した。マウスを２４時間後に屠殺した。rmuＭＩＰ−１αのインビボ作用について報告された通りにこれらの研究を行った（メイズ等、ジャーナル・オブ・イムノロジィ，１４９：1004，1992）。示される結果は、１群当りの４匹のマウス全部を個々に評価一つの代表的実験についての平均±ＩＳＥＭである。１４−量体ペプチドの配列は、ＮＨ₂−Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys− Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro−ＣＯＯＨである。寄せ集めの１４−量体ペプチドの配列は、ＮＨ₂−Ｇlu−Ａla−Ｔhr−Ｌys−Ｖal−Ｐro−Ｉle−Ａrg −Ｍet−Ｌys−Ｐhe−Ａla−Ａsn−Ｐro−ＣＯＯＨ（配列番号７）である。１４−量体ペプチド（１４−マーペプチド）のインビボ活性は表５の結果により示され、それは、２ng１４−量体ペプチドの静脈内注射後２４時間で、大腿部骨髄並びに脾臓顆粒球−マクロファージ（ＣＦＵ−ＧＭ）、赤芽球（ＢＦＵ−Ｅ）および多機能（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）前駆体細胞の絶対数に、並びにこれらの細胞の循環速度（細胞サイクルのＳ−相での前駆体のパーセント）に、有意な減少があることを示す。１４−量体ペプチドの特異性は、寄せ集めの１４−量体ペプチドのインビボで骨髄前駆体を抑制する無能力（インビトロでも不活性、表１参照）により示される（表５）。実施例６５週令雌Balb／cマウスに、８００μgＥ.コリＬＰＳ（フェノール−水抽出、シグマ）の腹腔内注射直前に、０.１mlのｐＨ７.０ＰＢＳ中、１μg〜１.０mg／マウスに及ぶ用量で、１４−量体ペプチドＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys −Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroの単一用量を静脈内注射した。生存に対するペプチドの影響は表６に示される。致死率は、７２時間以内に起きる死亡を示す。有効用量（１０μg）は、コントロールの８０〜１００％を殺すのに十分なＬＰＳを与えたマウスの５０％を救った。実施例７５過令Balb／c雌マウスに、１００〜８００μgＥ.コリＬＰＳの腹腔内注射直前、１４−量体ペプチドの１０μg単一用量または担体緩衝液を静脈内注射した。生存に対するペプチドの影響を表７に示す。致死率は７２時間以内に起きる死亡を示す。表７のデータにより示されるように、１４−量体ペプチドは致死エンドトキシンショックに対する耐性を増強する。実施例８１４−量体ペプチド（Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐ ro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro）、１０−量体ペプチド（Ｇlu−Ｔhr−Ｖal −Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg）および８−量体ペプチド（Ａla −Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro）の、マウス骨髄前駆体によるコロニー形成に対する影響を試験した。５×１０⁴粘着性細胞減少有核骨髄細胞を含む軟寒天培養を、７５０Ｕ／mlのＭ−ＣＳＦおよび０.１ng／ml ＬＰＳまたは０.６mＭニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ）のいずれかの添加により促進して、Ｓ−期陽性転換（transitional）前駆体による付加的コロニー形成を促進した。５％ＣＯ₂中３７℃でインキュベーション６日後、形成したコロニーを数えた。表８の結果は、８−量体、１０−量体および１４−量体ペプチドがＳ−期陽性転換前駆体によるコロニー形成を同等に阻害することを示した。ペプチドはＭ− ＣＳＦによってのみ剌激された基本コロニー反応を阻害しなかった。表８に示される結果により示されるように、水性溶液中のＮＯのジェネレーター、ニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ）は、転換細胞刺激剤としてＬＰＳと同じ性質を有する。本発明のペプチドは、ＬＰＳまたはＳＮＰにより刺激された転換前駆体によるコロニー形成の剌激を阻止し、ＬＰＳに反応して生成したＮＯがＳ−期陽性転換前駆体の剌激に反応性があること、および本ペプチドがＮＯの効果を妨害することを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者クーパー、スコットアメリカ合衆国46240インディアナ州、インディアナポリス、ノース・チェスター・アベニュー7536番 (72)発明者ル、リーアメリカ合衆国46260インディアナ州、インディアナポリス、バジャー・コート7359 番 (72)発明者ムーア、ロバート・エヌアメリカ合衆国37931テネシー州、ノックスビル、フォークストーン・プレイス1200 番 (72)発明者クライスバーグ、ロバートアメリカ合衆国33024フロリダ州、ハリウッド、ブライアーウッド・サークル488番 (72)発明者クライスバーグ、メリンダ・デトリックアメリカ合衆国45506オハイオ州、スプリングフィールド、アバーディーン・ドライブ2710番

Claims

【特許請求の範囲】１．少なくとも５つのアミノ酸を含むペプチドであって、上記ペプチドが配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むことを特徴とするペプチド。２．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla、Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg、またはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａ sn−Ｐhe−Ｐroを含む、請求項１記載のペプチド。３．式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla −Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有するペプチド。４．式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有するペプチド。５．式Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有するペプチド。６．骨髄前駆体細胞の増殖を抑制し得るペプチドであって、上記ペプチドが少なくとも５つのアミノ酸を含み、かつ、上記ペプチドが配列Ａla−Ｌys−Ｐro− Ａrgを含むことを特徴とするペプチド。７．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla、Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−ＡrgまたはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn −Ｐhe−Ｐroを含む、請求項６記載のペプチド。８．敗血症性ショックに対する哺乳動物の羅病性を減少させ得るペプチドであって、上記ペプチドが少なくとも５つのアミノ酸を含み、かつ、上記ペプチドが配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むことを特徴とするペプチド。９．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla、Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg、またはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａ sn−Ｐhe−Ｐroを含む、請求項８記載のペプチド。１０．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含むペプチドおよび医薬上許容されうる担体を含む医薬組成物。１１．請求項１〜１０のいずれか１項に記載のペプチドを含む医薬組成物。１２．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む治療的有効量のペプチドを投与することを含む、骨髄造血過増殖障害の処置方法。１３．上記骨髄造血過増殖障害が急性または慢性の骨髄性白血病または赤血球増加症である請求項１２記載の方法。１４．上記ペプチドが配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla、Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−Ａrg、またはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｃys−Ａla−Ｌys−Ｐro −Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを有する、請求項１２または１３記載の方法。１５．上記ペプチドが式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｃys−Ａla−Ｌys− Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro、Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys− Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg、Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−ＰroまたはＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有する、請求項１２または１３記載の方法。１６．上記治療的有効量が０．０１mg／kg〜約２００mg／kg体重である、請求項１２または１３記載の方法。１７．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む治療的有効量のペプチドを化学療法または放射線照射前に投与することを含む、化学療法誘発または放射線照射誘発骨髄抑制の減少方法。１８．上記ペプチドが配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla、Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−Ａrg、またはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro −Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを含む、請求項１７記載の方法。１９．上記ペプチドが式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉlｅ−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro、Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys −Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg、Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro またはＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有する、請求項１７記載の方法。２０．上記治療的有効量が約０.０１mg／kg〜約２００mg／kg体重である、請求項１７〜１９のいずれか１項記載の方法。２１．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む治療的有効量のペプチドを、敗血症性ショックの危険にさらされている患者に投与することを含む、敗血症性ショックの予防方法。２２．上記ペプチドが配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla、Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−ＡrgまたはＧlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys−Ｐro− Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐroを含む、請求項２１記載の方法２３．上記ペプチドが、式Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys−Ａla−Ｌys −Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro、Ｇlu−Ｔhr−Ｖal−Ｉle−Ｍet−Ｌys −Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg、Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrg−Ａla−Ａsn−Ｐhe−Ｐro またはＡla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを有する、請求項２１記載の方法。２４．上記治療的有効量が約０.０１mg／kg〜約２００mg／kg体重である、請求項２１〜２３のいずれか１項記載の方法。２５．配列Ａla−Ｌys−Ｐro−Ａrgを含む治療的有効量のペプチドを、敗血症性ショックの危険にさらされている患者に投与することを含む、酸化窒素誘発低血症の減少方法。