JPH02157231A

JPH02157231A - 細胞増殖抑制剤

Info

Publication number: JPH02157231A
Application number: JP63310631A
Authority: JP
Inventors: Hiroyoshi Hoshi; 宏良星
Original assignee: BIO KAGAKU KENKYUSHO KK
Current assignee: BIO KAGAKU KENKYUSHO KK
Priority date: 1988-12-07
Filing date: 1988-12-07
Publication date: 1990-06-18

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〈産業上の利用分野〉本発明は細胞増殖抑制剤に関する。さらに詳細には、イ
ンターロイキン１（以下、ＩＬ−１と称する）を有効成
分とする肝癌細胞に対する細胞増殖抑制剤に関する。

〈従来の技術及び発明が解決しようとする課題〉ＩＬ−
１はマクロファージ系の細胞が産生ずるモノ力インの一
種で、胸腺細胞増殖の誘発、Ｔ細胞やＢ細胞の活性化、
特にインターロイキン２産生Ｔ細胞に働きインターロイ
キン２の産生を誘発する作用を有し、抗体産生や免疫応
答の調節因子として重要な役割を果たしていると共に急
性及び慢性の炎症反応にも深く関与していることが明ら
かにされている。さらに、最近、ＩＬ−１には抗腫瘍作
用があることも知られ、例えば、黒色腫細胞の阻害（Ｊ
、　Ｉｌｌｌｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ、１３５．　
ｐｐ、３９［１２−３９８８、１９８５，同書Ｖｏ１．
１３Ｂ、　ｐｐ、３０９８−３１０２．１９８［ｉ）、
乳癌細胞の阻害（ＣＡＮＣＥＲＲＥＳＥＡＲＣＩｌ、　
Ｖｏｌ、４Ｇ、　ｐｐ３８３４−３８３７．１９８６　
）等が報告されている。

一方、本発明の対象とする肝癌の化学療法としては、ア
ドリアマイシン、エトポシド、マイトマイシンＣ等の抗
癌剤を用いる方法が知られているが、これらの抗癌剤は
副作用が強いという問題がある。また、肝癌細胞の増殖
抑制に腫瘍壊死因子（Ｔｕａ＋ｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ
　Ｆａｃｔｏｒ）が有効であることも報告されているが
、腫瘍壊死因子は、臨床上その安全性に懸念があるとさ
れる。

本発明は上記のような従来技術の欠点を解消するために
創案されたもので、本発明者らが鋭意研究を重ねた結果
、ヒ）ＩＬ−１が肝癌細胞の増殖を著しく抑制すること
を見出し、この知見に基づいて本発明を完成した。

く課題を解決するための手段〉上記の課題を解決すべくなされた本発明は、ヒ）ＩＬ−
１を有効成分とする肝癌細胞に対する細胞増殖抑制剤で
ある。

前記のように、ＩＬ−１がある種の腫瘍細胞に対して増
殖阻害効果を有することは知られているが、ヒトＩＬ−
１が肝癌細胞の増殖を抑制することは、従来まったく予
期し得なかった新規な知見である。

本発明で使用されるヒトＩＬ−１としては、医薬として
用いられる程度に精製されたものであれば特に限定され
ず、例えば、ヒトＩＬ−１α型、ヒトＩＬ−１β型等が
挙げられる。これらのヒトＩＬ−１は、天然型のもので
もよく、また遺伝子組換え技術を応用して得られた組換
え型ヒトＩＬ〜１でもよい。エンドトキシンによる副作
用を極力さけること及び量産性の面から組換え型ヒトＩ
Ｌ−１を用いるのがよい。天然型ヒトＩＬ−１は慣用の
方法で得ることができ、例えば、ヒト単核球細胞由来白
血病細胞株であるＴＩＰ−１細胞を、リポ多糖体等の適
当な刺激剤の存在下に培養し、その培養液中より単離す
ることにより得られる（ＣＡＮＣＥＲＲＥＳＥＡＲＣＩ
Ｉ、　Ｖｏｌ、４Ｂ、　ｐｐ、１４７１．　１９８６参
照）。また組換え型ヒトＩＬ−１も公知の方法で得るこ
とができ、例えば、ヒトＩＬ−１をコードするｃＤＮＡ
をクローニングし、このクローン化ｃＤＮＡに由来する
ＤＮＡを組み込んだプラスミドを用いて微生物を形質転
換させ、該形質転換体を培養することにより組換え型ヒ
トＩＬ−１を得ることができる（Ｎａｔｕｒｅ、　Ｖｏ
ｌ、３１２．　ｐｐ、４５８゜１９８４、特開昭６１−
２７１２２２号公報等参照）。

また、本発明において、ヒトＩＬ−１にはその同効物も
包含され、このような同効物としては、ヒトＩＬ−１の
アミノ酸配列中の１又は２以上のアミノ酸が欠失及び／
又は他のアミノ酸に置換されたポリペプチド、ヒトＩＬ
−１のアミノ酸配列のＣ末端及び／又はＮ末端に少なく
とも１つのアミノ酸が結合したポリペプチド等が挙げら
れる。

これらの同効物は、遺伝子組換え技術等を用いることに
より得ることができる。

本発明の対象とする癌細胞は、哺乳動物の肝癌細胞、特
にヒトの肝癌細胞であり、さらにはヒト肝癌細胞Ｈｅｐ
Ｇ２及びＨｅｐ３Ｂである。

本発明の細胞増殖抑制剤において、ヒトＩＬ−１は単独
で又は他の医薬との合剤して用いられ、さらに必要に応
じて薬理的に許容される担体と複合して用いられる。ヒ
トＩＬ−１の投与量は、患者の年齢、体重、症状等によ
り適宜決定されるが、一般に０，０１〜６００μｇ　／
　ｋｇ体重・日、好ましくは０，１〜２００μｇ　／　
ｋｇ体重・日である。

水剤の製剤形態としては、溶液又は凍結乾燥剤とするの
が好ましく、これら製剤は慣用の方法で得ることができ
る。なお、その製剤化に際しては、安定化剤を添加する
のが好ましい。安定化剤としては、例えば、アルブミン
、グロブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、
デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、エチレング
リコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル等が挙げられる。液状製剤においては、滅菌水、生理
食塩水等を溶剤として用い、通常、０．５〜２０　（Ｗ
／Ｖ）％、好ましくは１〜１０　（Ｗ／Ｖ）　９６程度
の有効成分を含むように調製するのがよい。凍結乾燥製
剤は、用時、注射用蒸溜水等で適宜溶解して用いられる
。

〈発明の効果〉本発明にかかる細胞増殖抑制剤は、肝癌細胞に対して強
い細胞増殖抑制作用を示すので、肝癌の予防及び治療に
有用である。

〈実施例〉以下、試験例及び実施例に基づいて、本発明をより詳細
に説明する。

試験例以下の試験例において、使用した物質及び材料は下記の
通りである。

（１）ヒトＩＬ−１α及びヒトＩＬ−１β：何れも大塚
製薬■製組換え型ヒ１−ＩＬ−１α及びヒトＩＬ−１β
、純度９９％以上（ＩＬ１含ユ２Ｘ１０７単位／ｆｆ１
ｇ蛋白質、内毒素含量０．ｌｏｇ／ｍｇ蛋白質以下）（２）ＭＣＤＢ１０７培地：極東製薬工業■製ＭＣＤＢ１０７培地（３）肝癌細胞：ヒト肝芽腫由来ＨｅｐＧ２（ＮＡＴＵＲＥ、　Ｖｏｌ、２ｇ２．　ｐＩ）、８１５
．１９７９参照）ヒト細胞肝癌由来Ｈｅｐ３ＢＳＨｕＨ
−７及びＰＬＣ／ＰＲＦ１５（夫々５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏｌ、２０９．　［）、４
９７．１９８０、ＣＡＮＣＥＲＲＥＳＥＡＲＣＩＩ、　
Ｖｏｌ、４２．　ｐＩ）、３８５８．１９８２及びＢｒ
、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、　Ｖｏｌ、３４．　ｐｐ、５
０９，１９７６参照）（４）ウサギ抗ヒトＩＬ−１α抗血清及びウサギ抗ヒト
ＩＬ−１β抗血清：何れも大塚製薬■製つサギ抗ヒトＩＬ−１α抗血清及び
ウサギ抗ヒトＩ　Ｌ−１β抗血清試験例１コラーゲンで表面処理した２４−ウェル・カルチュアー
・プレートに、ＨｅｐＧ２細胞を１０４個／ウェル播種
し、ヒトＩＬ−１α及びβを各々別個に１　ｎｇ／　ｘ
ｉ金含有る培養液（２％牛脂児血清を含有するＭＣＤＢ
１０７培地）を用い、３７℃で培養した。なお、培養液
は１．３及び５日日に交換した。所定日数培養後、トリ
プシン（シグマ社製、２　、　５　ｒｎｇ　／　１１　
）及びＥＤＴＡ　（１００μｇ／１１）を用いて細胞を
分散させ、コールタ−カウンター法により細胞数を求め
た。なお、ヒトＩＬ−１を含有しない培養液での培養を
コントロールとした。

その結果を第１図に示す。第１図中、・−・はコントロ
ール、ムーム゛はヒトＩＬ−１α（１ｎｇ／ｌりを含有
する培養液、■−■はヒトＩＬ−１β（ｌｏｇ／Ｉｎを
含有する培養液を示し、何れも３回の試験の平均値であ
る。

第１図から明らかなように、培養７日後の細胞数は、コ
ントロールの細胞数に対して、ヒトＩＬ−１αの場合が
２８％、ヒトＩＬ−１βの場合が２９％であり、ヒトＩ
Ｌ−１α及びβはＨｅ　ｐＧ２細胞の増殖を強く抑制し
た。

試験例２コラーゲンで表面処理した２４−ウェル・カルチュアー
・プレートに、ＨｅｐＧ２細胞を５×１０３個／ウェル
播種し、２％牛脂児血清を含有するＭＣＤＢ１０７培地
で２４時間培養した。その後、培養液を除去し、ヒトＩ
Ｌ−１α及びβを各々別個にｌｎｇ／Ｉｆ含有する培養
液（２％牛脂児血清を含有するＭＣＤＢ１０７培地）並
びに上記培養液にウサギ抗ヒトＩＬ−１α抗血清及びウ
サギ抗ヒトＩＬ−１β抗血清を夫々０．２％（ｖｏｌ。

／ｖｏ１．　）添加した培養液を用いて、３７℃で５日
間培養した。次いで、トリプシン（シグマ社製、２　、
　５　ｍｇ　／　１１　）及びＥＤＴＡ　（１００μｇ
／１１）を用いて細胞を分散させ、コールタ−カウンタ
ー法により細胞数を求めた。なお、ヒトＩＬ−１及びウ
サギ抗ヒトＩＬ−１抗血清を含有しない培養液での培養
をコントロールとした。

その結果を第１表に示す。何れも３回の試験の平均値で
ある。第１表から明らかなように、抗血清が存在しない
場合にはヒトＩＬ−１α（１ｎｇ／１１）及びヒトＩＬ
−１β（ｌ　ｎｇ／　ｉｌ　）の添加によりＨｅｐＧ２
細胞の増殖が抑制されて、いるのに対し、この系にさら
に抗ヒトＩＬ−１抗血清を添加するとヒトＩＬ−１の細
胞増殖抑制効果が阻害された。このことから、ヒトＩＬ
−１α及びヒトＩＬ−１βがＨｅ　ｐＧ２細胞に対して
細胞増殖抑制作用を示すことが判明した。

（以下余白）試験例３コラーゲンで表面処理した２４−ウェル・カルチュアー
・プレートに、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕ
Ｈ−７細胞及びＰＬＣ／ＰＲＦ１５細胞を５Ｘ１０３個
／ウェル播刺し、ヒトＩＬ−１α及びβを各々別個に１
ｎｇ／１１含有する培養液（２％牛脂児血清を含有する
ＭＣＤＢ１０７培地）を用い、３７℃で５日間培養した
。次いで、トリプシン（シグマ社製、２　、　５　ｍｇ
　／　１１１　）及びＥＤＴＡ　（１００μｇ　／　ｘ
ｌ　）を用いて細胞を分散させ、コールタ−カウンター
法により細胞数を求めた。なお、ヒトＩＬ−１を含有し
ない培養液での培養をコントロールとした。

その結果を第２表に示す。何れも３回の試験の平均値で
あり、表中の括弧内は下記式より求めた増殖抑制率（％
）を意味する。

増殖抑制率（％）− 第２表に示されるように、ヒトＩＬ−１α及びβはＨｅ
　ｐＧ２細胞及びＨｅｐ３Ｂ細胞に特異的に作用しその
増殖を抑制する。特に、Ｈｅ　ｐＧ２細胞に対してはそ
の増殖を強く抑制した。

（以下余白）実施例組換え型ヒ）ＩＬ−１を適当量の生理食塩水（１０％ヒ
ト血〆Ｉ＃アルブミン及び２０％マンニトール含有）に
溶解し、ｐＨ調整を行った後、滅菌したミリポアフィル
タ−で除菌濾過し、バイアル瓶に充填して凍結乾燥する
ことにより注射用粉末製剤を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ヒトＩＬ−１α及びβのヒト肝癌細胞Ｈｅｐ
Ｇ２に対する細胞増殖抑制効果を示す図である。同図中
、・−・はコントロール、ムームはヒトＩ　Ｌ　−１ａ
　（ｌｎｇ／１ｆｆ）を含有する培養液、■−■はヒト
ＩＬ−１β（１０ｇ／ｘｉ）を含有する培養液を用いた
場合を示す。特許出願人　株式会社バイオ科学研究所第図

Claims

【特許請求の範囲】１、ヒトインターロイキン１を有効成分とする肝癌細胞
に対する細胞増殖抑制剤。２、ヒトインターロイキン１が、組換え型ヒトインター
ロイキン１である請求項１記載の細胞増殖抑制剤。