JPH08511170A - 多発性硬化症に関与するｍｓｒｖ１ウイルスおよびｍｓｒｖ２病因性及び／又は感染性の作因、核酸成分およびその応用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 多発性硬化症に関与する二つの病因性及び／又は感染性の作因、すなわち逆転写酵素活性を備え、内在性レトロウイルス成分のファミリーに関連するヒトウイルス、またはこのウイルスの変異体を含む第一作因、および第二作因またはこの変異体を有する組成物であって、これら二つの病因性及び／又は感染性の作因が、それぞれ１９９２年７月２２日にＶ９２０７２２０２の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託されたＰＯＬ−２および１９９３年１月８日にＶ９３０１０８１６の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託されたＭＳ７ＰＧと称される株、またはこれらの変異株から選択された同一のウイルス株に由来する組成物。

Description

【発明の詳細な説明】 多発性硬化症に関与するＭＳＲＶ１ウイルスおよびＭＳＲＶ２病因性及び／又は 感染性の作因、核酸成分およびその応用 多発性硬化症（ＭＳ）は、原因不明の中枢神経系（ＣＮＳ）の脱髄疾患 である。 多くの研究が、ウイルス性疾患であるという説を支持しているが、調べ られた既知のウイルスは、いずれも求める原因ではかった。ＭＳに関して数年間 探されたウイルスの評価が、Ｅ．Ｎｏｒｒｂｙ（１）とＲ．Ｔ．Ｊｏｈｎｓｏｎ （２）によってまとめられている。 付随的に、１９４３〜１９６０年のフェロー（Faro）諸島（３）、サル ジニア（４）、ノルウェー（５）、および移住民における研究（６）に見られる ように、外因性及び／又は感染性のファクターである可能性が、ＭＳの局地的流 行もしくは“クラスター（群）”の存在から示唆されている。示唆された外因性 ファクターの中でもウイルスは最もよく研究され、ウイルスが病因であることは 、慣例的に想到される。 ＭＳに自己免疫反応に例えることのできる現象が観察されることから、 “本質的に”自己免疫を病因とする仮説（７および８）が導かれる。しかしなが ら、ＣＮＳ中のある成分に対するこの自己免疫は、ＭＳに特異的でなく、かつ感 染に関わるか否かは別にしてＣＮＳの炎症に共通であることが判明した（９、１ ０、１１および１２）。さらに、免疫抑制療法では、ＭＳに対して決定的な結果 を得ることができない（１３）。“自己免疫”の症状は、ウイルスに由来する機 構、すなわち細胞に由来する分子に結合したウイルスの決定基に対する共感作（ cosensitization）、分子模倣現象（１４）、あるいはレトロウイルスの超抗原 の発現によって（１５）促進されるらしい。 レトロウイルスが本疾患の起源であるということに基づいた説が、ある 研究によって支持されている。元来は成人Ｔ細胞白血病の作因（agent）として 知られたＨＴＬＶ−Ｉウイルスに係る神経学的症状の最近の発見（１６）が、多 く の著者（１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３）をして、このヒトレトロ ウイルスのＭＳにおける関与を期待させたが、成功しないか、交差反応を示唆す る結果となった。 最近、既知のヒトレトロウイルスとは異なるレトロウイルスが、ＭＳ患 者から単離された（２４、２５および２６）。また、これらの著者は、このレト ロウイルスが、in vitroで伝染（トランスミット）し得たこと、ＭＳ患者がこの レトロウイルスによって軟髄細胞の感染に係るタンパク質を認識できる抗体を作 り出したこと、およびその抗体の発現が、あるヘルペスウイルスのイメディエー トアーリー遺伝子によって強烈に刺激され得たことを示すことができた（２７） 。 上記結果の全てが、少なくとも一つの未知のレトロウイルス、もしくは Ｈ．Ｐｅｒｒｏｎ（２４）によって公開された方法に基づいて検出され“ＬＭ７ 様ＲＴ”活性として定性分析される逆転写酵素活性を備えたウイルスの、ＭＳに おける役割を示している。（２４）によって特定された刊行物の内容を、参照と して本明細書に取り込む。 最近、本出願人の研究により、二人の異なるＭＳ患者に由来する天然の 単離物で感染された二つの連続する細胞系統が、国際特許公開第９３２０１８８ 号公報に記載された培養方法から得られるようになった。この文献の内容を、参 照として本明細書中に取り込む。これらの二つの系統は、ヒト脈絡叢細胞から誘 導され、ＬＭ７ＰＣおよびＰＬＩ−２と称され、ブダペスト条約の規定により、 それぞれ９２０７２２０１および９３０１０８１７の番号で、１９９２年７月２ ２日および１９９３年１月８日にＥＣＡＣＣに寄託された。さらに、ＬＭ７様Ｒ Ｔ活性を備えたウイルス単離物も、“株”の総称でＥＣＡＣＣに寄託された。Ｐ ＯＬ−２と称される、ＰＬＩ−２系統にかくまわれた“株”もしくは単離物は、 １９９２年７月２２日にＶ９２０７２２０２の番号で寄託された。ＭＳ７ＰＧと 称される、ＬＭ７ＰＣ系統によってかくまわれた“株”または単離物は、１９９ ３年１月８日にＶ９３０１０８１６の番号で寄託された。 生物学的および形態学的基準によって特徴づけられた上述の培養物およ び単離物から出発すると、次の段階は、これらの培養物中に生成されたウイルス 粒子に関連する核酸物質を特徴づける努力を行うことである。 しかして、本発明の主題は、以下の通りである。 （i） 生物学的な物質として、単離または精製された状態で、多発性 硬化症に関与する二つの病因性及び／又は感染性の作因、すなわち逆転写酵素活 性を備え、内在性レトロウイルス成分のファミリーに関連するヒトウイルス、ま たは前記ウイルスの変異体を含む第一作因、および第二作因または第二作因の変 異体を有する組成物であって、これら二つの病因性及び／又は感染性の作因が、 それぞれ１９９２年７月２２日にＶ９２０７２２０２の受付番号でＥＣＡＣＣに 寄託されたＰＯＬ−２および１９９３年１月８日にＶ９３０１０８１６の受付番 号でＥＣＡＣＣに寄託されたＭＳ７ＰＧと称される株、およびこれらの変異株か ら選択された同一のウイルス株に由来する組成物、 （ii） 生物学的な物質として、単離または精製された状態で、多発性 硬化症に係る二つの病因性及び／又は感染性の作因、すなわち逆転写酵素活性を 備え、内在性レトロウイルス成分のファミリーに関連するヒトウイルス、または 前記ウイルスの変異体を含む第一作因、および第二作因または第二作因の変異体 を有する組成物であって、これら二つの病因性及び／又は感染性の作因が、それ ぞれ１９９２年７月２２日に９２０７２２０１の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託さ れたＰＬＩ−２および１９９３年１月８日に９３０１０８１７の受付番号でＥＣ ＡＣＣに寄託されたＬＭ７ＰＣと称される系統から選択された同一の細胞系統、 および少なくとも一つの病因性及び／又は感染性の作因を生産することのできる 全ての感染細胞の培養物、及び／又はこれらの変異体によって生産される組成物 、 （iii） 単離または精製された状態で、二つの病因性及び／又は感染 性の作因、すなわち、ゲノムが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これら の相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマ ーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６ 、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相 補配列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なく とも７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を 含むウイルスまたは前記ウイルスの変異体を含む第一作因、およびゲノムが、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これ らの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノ マーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列 と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド 配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第二の病因性及び／又は感染性の作 因を含む組成物、 （iv） 少なくとも一つの核酸断片、すなわち、ヌクレオチド配列が、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相補配列、およびこれらと等価 の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配列から選択されたヌク レオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％の相同性を示す ヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第一断片、及び／又は 、ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に 、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択さ れたヌクレオチド配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同 性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第二断片を、 特にプローブとして用いることを特徴とする、多発性硬化症に係る第一の病因性 及び／又は感染性の作因、及び／又は第二の病因性及び／又は感染性の作因を検 出する方 法、 （v） 少なくとも一つの核酸断片、すなわち、ヌクレオチド配列が、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相補配列、およびこれらと等価 の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配列から選択されたヌク レオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％の相同性を示す ヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第一核酸断片、及び／ 又は、ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、 特に、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選 択されたヌクレオチド配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の 相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第二核酸 断片を含むことを特徴とする、診断、予防または治療用組成物、 （vi） 少なくとも一つの前記病因性及び／又は感染性の作因に属する と推定されるＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はそれらの相補ＲＮＡ及び／又 はＤＮＡを、第一ヌクレオチド断片および第二ヌクレオチド断片を含む組成物と 接触させ、前記第一断片のヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ９、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１ ００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ９およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列と少なくと も５０％、 好ましくは少なくとも７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌ クレオチド配列を含み、かつ前記第二断片のヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、 およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの配 列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ１２およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも７ ０％、好ましくは少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択さ れたヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、生物試料において、多発性硬化 症に係る病因性及び／又は感染性の作因の組み合わせを検出及び／又は同定する ための方法、 （vii） （vi）に記載した第一ヌクレオチド断片によって部分的また は完全にコードされた第一ポリペプチド、及び／又は、（vi）に記載した第二ヌ クレオチド断片によって部分的または完全にコードされた第二ポリペプチドを含 む組成物を用いることを特徴とする、生物学的試料における多発性硬化症に係る 第一の病因性及び／又は感染性の作因、及び／又は第二の病因性及び／又は感染 性の作因を検出する方法、 （viii） （vii）に記載した第一ポリペプチド及び／又は第二ポリペ プチドを含むことを特徴とする、及び／又は前記第一ポリペプチドに特異的な抗 体等の第一リガンド、及び／又は前記第二ポリペプチドに特異的な抗体等の第二 リガンドを含むことを特徴とする診断、予防または治療用組成物、 （ix） １９９２年７月２２日に９２０７２２０１の受付番号でＥＣＡ ＣＣに寄託されたＰＬＩ−２と称される細胞系統、または、前記ＰＬＩ−２から 得られた抗体もしくはこの抗体と免疫学的交差反応を示す他の抗体を産生するこ とが可能である、誘導された全ての細胞系統もしくはこの細胞系統の全ての子孫 、 （x） １９９２年７月２２日にＶ９２０７２２０２の受付番号でＥＣ ＡＣＣに寄託されたＰＯＬ−２と称されるウイルス株、または、前記ＰＯＬ−２ 株から得られた抗原もしくは該抗原と免疫学的交差反応を示す他の抗原を産生す ることが可能である、誘導された全ての株もしくはこの株の全ての子孫、 （xi） １９９３年１月８日に９３０１０８１７の受付番号でＥＣＡＣ Ｃに寄託されたＬＭ７ＰＣと称される細胞系統、または、前記ＬＭ７ＰＣから得 られた抗体もしくは該抗体と免疫学的交差反応を示す他の抗体を産生することが 可能である、誘導された全ての細胞系統もしくはこの細胞系統の全ての子孫、 （xii） １９９３年１月８日にＶ９３０１０８１６の受付番号でＥＣ ＡＣＣに寄託されたＭＳ７ＰＧと称されるウイルス株、または、前記ＭＳ７ＰＧ 株から得られた抗原もしくは該抗原と免疫学的交差反応を示す他の抗原を産生す ることが可能である、誘導された全ての株もしくはこの株の全ての子孫、 （xiii） 生物学的な物質として、ウイルス株ＰＯＬ−２およびＭＳ７ ＰＧのいずれかの株、およびこれらの株の一方または他方のウイルスの抗原に相 当する少なくとも一つの抗原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される、 少なくとも一つの抗原を有するウイルスからなる種々の株から選択された逆転写 酵素活性を有するウイルス株を起源とする、内在性レトロウイルスの要素のファ ミリーおよび多発性硬化症に関する、逆転写酵素活性を有する精製または単離さ れたウイルス性物質、 （xiv） 生物学的な物質として、ウイルス株ＰＬＩ−２およびＬＭ７ ＰＣのいずれかの細胞系統、もしくは前記ＰＬＩ−２細胞系統によって作られた 一方または他方のウイルスの抗原に相当する少なくとも一つの抗原向けの少なく とも一つの抗体によって認識される、少なくとも一つの抗原を有するウイルスを 作ることのできる感染した細胞培養物によって作られる、内在性レトロウイルス の要素のファミリーおよび多発性硬化症に関する、逆転写酵素活性を有する精製 または単離されたウイルス性物質、 （xv） ゲノムが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相 補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーの どこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの 相補 配列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくと も７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含 むことを特徴とするウイルス性物質、 （xvi） ゲノムのｐｏｌ遺伝子が、ＥＲＶ−９またはＨＳＥＲＶ−９ レトロウイルスゲノムのｐｏｌ遺伝子に属するヌクレオチド配列と、特に少なく とも５０％、好ましくは少なくとも６５％の相同性を示す等価のヌクレオチド配 列を有することを特徴とする、多発性硬化症に係るレトロウイルス性物質、 （xvii） ゲノムのｐｏｌ遺伝子が、ＥＲＶ−９またはＨＳＥＲＶ−９ レトロウイルスゲノムのｐｏｌ遺伝子にコードされたペプチド配列と少なくとも ５０％、好ましくは７０％の相同性を示すペプチド配列をコードすることを特徴 とする、多発性硬化症に係るレトロウイルス性物質、 （xviii） ゲノムのｐｏｌ遺伝子が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列にコードされる ペプチド配列と、少なくとも３０個連なるアミノ酸のどこの配列に対しても、少 なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％の相同性を示すペプチド配列をコ ードすることを特徴とする、多発性硬化症に係るレトロウイルス性物質、 （xix） ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９ 、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連な るモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９お よびこれらの相補配列から選択された配列と少なくとも５０％、好ましくは少な くとも７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列 を含むヌクレオチド断片、 （xx） （xix）に記載された断片のヌクレオチド配列の少なくとも一 部 と同じまたは等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配 列に対しても、前記断片の少なくとも一部と少なくとも７０％の相同性を示すヌ クレオチド配列を含むことを特徴とする、上述のウイルス性物質のＲＮＡまたは ＤＮＡの合成による増幅のための特定のプライマー；本発明の好ましいプライマ ーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３ ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３３およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド 配列を有する、 （xxi） （xix）に記載された断片のヌクレオチド配列の少なくとも一 部と同じまたは等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの 配列に対しても、前記断片の少なくとも一部と少なくとも７０％の相同性を示す ヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、上述のウイルス性物質のＲＮＡまた はＤＮＡと特異的にハイブリダイズすることができるプローブ；本発明の好まし いプローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２ ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２６、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３３およびこれ らの相補配列から選択されたヌクレオチド配列を有する、 （xxii） 生物学的試料において、上述のウイルス性物質を検出、分離 または同定するための、（xxi）記載のプローブもしくは（xx）記載のプライマ ーの使用、 （xxiii） 生物学的試料において、上記ウイルス性物質を検出、分離 または同定する方法であって、前記ウイルスに属すると推定されるＲＮＡ及び／ 又はＤＮＡ、及び／又はこれらに相補的なＤＮＡ及び／又はＲＮＡを、（xxi） 記載の少なくとも一つのプローブと接触させることを特徴とする方法；有利な実 施態 様としては、ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、またはこれらに相補的なＤＮＡ及び／又 はＲＮＡをプローブと接触させる前に、このＲＮＡ及び／又はＤＮＡを（xx）に 記載の少なくとも一つの増幅プライマーとハイブリダイズさせ、このＲＮＡ及び ／又はＤＮＡを増幅する、 （xxiv） 生物学的試料において、多発性硬化症に係るウイルス性物質 の発現を定量する方法であって、前記ウイルスに特異的なＲＮＡ及び／又はＤＮ Ａ、及び／又はこれらに相補的なＤＮＡ及び／又はＲＮＡを（xxi）に記載の少 なくとも一つのプローブと接触させ、適切な条件で増幅を行い、このＲＮＡ及び ／又はＤＮＡを検出することを特徴とする定量方法、 （xxv） 生物学的な物質として、（xiii）、（xiv）、（xv）、（xvi ）、（xvii）または（xiv）記載のウイルス性物質とは異なる、多発性硬化症に 係る精製または単離された病原性及び／又は感染性の作因であって、上記ウイル ス株ＰＯＬ−２およびＭＳ７ＰＧのいずれかを起源とし、この種々の株は前記ウ イルス株の一つまたは他の病原性及び／又は感染性の作因の抗原に対応する少な くとも一つの抗原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される少なくとも一 つの抗原を含む病原性及び／又は感染性の作因を有し、前記株の各ウイルス性物 質とは異なる作因、 （xxvi） 生物学的な物質として、（xiii）、（xiv）、（xv）、（xvi ）、（xvii）または（xix）に記載のウイルス性物質とは異なる、精製または単 離された多発性硬化症に係る病原性及び／又は感染性の作因であって、上記細胞 系統ＰＬＩ−２およびＬＭ７ＰＣ、および前記細胞系統ＰＬＩ−２およびＬＭ７ ＰＣによって作られた一つまたは他の病原性及び／又は感染性の作因の抗原に対 応する少なくとも一つの抗原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される少 なくとも一つの抗原を含む病原性及び／又は感染性の作因を作ることのできる感 染した細胞培養物によって作られ、前記株の各ウイルス性物質とは異なる作因、 （xxvii） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこ れらの相補配列から選択された配列を有するヌクレオチド配列と少なくとも７０ ％ 、好ましくは少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択された ヌクレオチド配列を含む核酸を有することを特徴とする病原性及び／又は感染性 の作因、 （xxviii） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に 、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択さ れた配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同性を示すヌク レオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含むことを特徴とするヌクレオ チド断片、 （xxix） （xxv）、（xxvi）または（xxvii）に記載の病原性及び／又 は感染性の作因のＲＮＡまたはＤＮＡの合成による増幅のための特異的プライマ ーであって、（xxviii）に記載の断片のヌクレオチド配列の少なくとも一部と同 じまたは等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配列に 対しても、前記断片の少なくとも一部と少なくとも９０％の相同性を示すヌクレ オチド配列を含むことを特徴とするプライマー；本発明に係る好ましいプライマ ーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３７およびこれらの相補配列から選択されたヌクレ オチド配列を有する、 （xxx） （xxv）、（xxvi）または（xxvii）に記載の病原性及び／又 は感染性の作因のＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリダイズし得るプローブ であって、（xxviii）に記載の断片のヌクレオチド配列の少なくとも一部と同じ または等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配列に対 しても、前記断片の少なくとも一部と少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオ チド配列を含むことを特徴とするプローブ；本発明に係る好ましいプローブは、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３７およびこ れらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列を有する、 （xxxi） 生物学的試料において、（xxv）、（xxvi）または（xxvii） に記載の病原性及び／又は感染性の作因を検出及び／又は同定するための、（xx x）記載のプローブ及び／又は（xxix）記載のプライマーの使用、 （xxxii） 生物学的試料において、（xxv）、（xxvi）または（xxvii ）に記載の病原性及び／又は感染性の作因を検出、分離または同定する方法であ って、前記作因に属すると推定されるＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はこれ らに相補的なＤＮＡ及び／又はＲＮＡを、（xxx）記載の少なくとも一つのプロ ーブと接触させることを特徴とする方法；有利な実施態様では、ＲＮＡ及び／又 はＤＮＡ、またはこれらに相補的なＤＮＡ及び／又はＲＮＡをプローブと接触さ せる前に、このＲＮＡ及び／又はＤＮＡを（xxxi）記載の少なくとも一つの増幅 プライマーとハイブリダイズさせ、このＲＮＡ及び／又はＤＮＡを増幅する、 （xxxiii） 生物学的試料において、（xxv）、（xxvi）または（xxvii ）に記載の、多発性硬化症に係る病原性及び／又は感染性の作因の発現を定量す る方法であって、前記作因に特異的なＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はこれ らに相補的なＤＮＡ及び／又はＲＮＡを（xxx）に記載の少なくとも一つのプロ ーブと接触させ、前記ＲＮＡ及び／又はＤＮＡを増幅することを特徴とする定量 方法、 （xxxiv） （xxi）記載の少なくとも一つのプローブもしくは（xxx） 記載の少なくとも一つのプローブ、及び／又は（xx）記載の少なくとも一つのプ ライマーもしくは（xxix）記載の少なくとも一つのプライマーを含むことを特徴 とする、多発性硬化症に係る少なくとも一つの病原性及び／又は感染性の作因の 発現を阻害するための、診断、予防または治療用組成物、 （xxxv） （xix）記載の断片及び／又は（xxviii）記載の断片を含む ＲＮＡまたはＤＮＡ、および特に複製ベクター、 （xxxvi） （xix）記載のヌクレオチド断片又は（xxviii）記載の断片 の少なくとも一部によってコードされたことを特徴とする、多発性硬化症に係る ウイルスのゲノムのヌクレオチド配列によってコードされた少なくとも５、好ま しくは１０個のアミノ酸を有するポリペプチド、 （xxxvii） （xxxvi）記載の少なくとも一つのポリペプチドを含むこ と、あるいは前記ポリペプチドの少なくとも一つに特異的な抗体等のリガンドを 含むことを特徴とする診断及び／又は治療及び／又は予防用組成物、 本発明を詳細に記載する前に、明細書および請求の範囲で使用した種々 の用語について定義する： −株または単離物とは、例えば、ウイルス及び／又はバクテリア及び／ 又は寄生虫等を含み、病原性及び／又は抗原性能を作りだし、培養物または生き た宿主によってかくまわれた、感染性及び／又は病原性の生物学的画分を意味す るもので、例えば上記の定義に係るウイルス株は、病原性の原生生物等の共感染 作因を含むことができる、 −本明細書中で使用される“ＭＳＲＶ”という用語は、多発性硬化症に 係る病原性及び／又は感染性の作因を示し、特にウイルス種、前記ウイルス種の 弱毒性の株、もしくはこの種から誘導された欠陥干渉粒子を示す。ウイルス、特 にＲＮＡを有するウイルスは、特に比較的高い割合で自然変異（２８）による多 様性を有することが知られており、これは以下の等価物の観念を定義する上で考 慮すべきことである、 −ヒトウイルスは、ヒトに感染することができるウイルスを意味する、 −本発明を実施する際に遭遇する天然あるいは誘導された変形物に鑑み 、上記および請求の範囲に定義された発明の主題は、特に相同のヌクレオチドま たはペプチド配列の、以下に定義された異なる生物学的物質の均等物または誘導 物を含むとされる、 −本発明に係るウイルスまたは病原性及び／又は感染性の作因の変異体 は、前記ウイルス及び／又は前記病原生及び／又は感染性の作因の少なくとも一 つの対応する抗原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される少なくとも一 つの抗原、及び／又は、例えば、当業者によく知られた特定のハイブリダイゼー ション条件下で、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３ないしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３８から選択さ れたヌクレオチド配列およびこれらの相補配列を有するプライマー等の、前記ウ イルス及び／又は病原性及び／又は感染性の作因に特異的な少なくとも一つのハ イブリダイゼーションプローブ及び／又は少なくとも一つのヌクレオチド増幅プ ライマーによって検出されるゲノムを含む。 −本発明によれば、ヌクレオチド断片またはオリゴヌクレオチドまたは ポリヌクレオチドは、モノマーが並んだものもしくは生体高分子であって、天然 の核酸の情報の配列によって特徴づけられ、予め決められた条件下でいかなる他 のヌクレオチド断片ともハイブリダイズすることができ、この配列は、種々の化 学構造のモノマーを含むとともに、天然の核酸の分子から得ることができ、及び ／又は遺伝子組換え及び／又は化学的合成によって得ることができる、 −しかして、モノマーは、構成要素が、糖、リン酸基および窒素塩基と された、普通の核酸のヌクレオチドとすることができる；ＲＮＡでは糖がリボー スであり、ＤＮＡでは糖が２−デオキソリボースである；核酸がＤＮＡかＲＮＡ かによって窒素塩基はアデニン、グアニン、ウラシル、シトシンおよびチミンか ら選択される；またヌクレオチドは、三つの構成要素の少なくとも一つを修飾す ることができ、例えば、塩基では、イノシン、５−メチルデオキシシチジン、デ オキシウリジン、５−（ジメチルアミノ）デオキソウリジン、２，６−ジアミノ プリン、５−ブロモデオキシウリジンおよびハイブリダイゼーションを促進する 他の修飾された塩基等の修飾塩基を生じる修飾を起こすことができる；糖では、 修飾は、少なくとも一つのデオキシリボースをポリアミドで置換したもの（２９ ）、かつリン酸基では、修飾は、ジホスファート、アルキルーおよびアリルホス ホナートおよびホスホロチオアートエステル等から選択されたエステルによって 置換することからなる、 −“情報の配列”は、モノマーが並んだ一連のものを意味し、その化学 的特性および参照方向への並びは、天然の核酸と同質の機能情報の項目を構成す ると否とに関わらない、 −ハイブリダイゼーションは、適切な作用条件下で、十分相補的な配列 を有する二つのヌクレオチド断片が対になって複合体構造、好ましくはヘリック スの形態で、特にダブルまたはトリプルの複合体構造を形成する間の工程を意味 する、 −プローブは、化学的に合成されたヌクレオチド断片、あるいは長いヌ クレオチド断片を分解または酵素的に切断することによって得られたヌクレオチ ド断片を含み、少なくとも６個のモノマー、有利的には１０〜１００個のモノマ ー、そして好ましくは１０〜３０個のモノマーを含み、特定の条件下でハイブリ ダイゼーションの特異性を有するもので；好ましくは、１０個より少ないモノマ ーを有するプローブは単独で使用せずに、他の同じくらい短いプローブ等の存在 下で用いられる；ある特定の条件下では、１００個のモノマーより大きいサイズ のプローブを使用することもできる；プローブは、特に診断の目的で使用するこ ともでき、このようなプローブとしては、例えば捕捉及び／又は検出プローブと される、 −捕捉プローブは、適切な手段、すなわち直接または間接的に、例えば 共有結合または受動的な吸着によって固体状の支持体に固定することができる、 −検出プローブは、特に放射性同位元素、特にペルオキシダーゼおよび アルカリホスファターゼから選択された酵素、および発色性、蛍光性または発光 性の基質を加水分解することができる酵素、発色性の化学化合物、発色性、蛍光 性または発光性化合物、ヌクレオチド塩基の類似体およびビオチンから選択され た標識手段によって標識することができる、 −本発明の診断目的に使用されるプローブは、特に、“ドットブロット ”（３０）、“サザンブロット”（３１）、標的にＲＮＡを用いる以外は“サザ ンブロット”技術と同様の“ノーザンブロット”、およびサンドウィッチ技術（ ３２）と称される技術等の、既知のあらゆるハイブリダイゼーション技術に用い ることができる；本発明では、捕捉プローブおよび検出プローブが少なくとも部 分的に異なるヌクレオチド配列を持たなければならないという理解の上で、特異 的な捕捉プローブ及び／又は特異的な検出プローブを含むサンドウィッチ技術を 用いることが有利である、 −また、本発明は、特に翻訳及び／又は転写等の複製現象、及び／又は 前記ＤＮＡ及び／又はＲＮＡの分解を妨げるために、in vivoまたはin vitroで ＲＮＡ及び／又はＤＮＡとハイブリダイズし得るプローブを含む、 −プライマーは、少なくとも６個のモノマー、有利的には１０〜３０個 のモノマーを有し、例えばＰＣＲ（ポリメラーゼチェーン反応）等の増幅技術、 シークエンシング等の延長工程、逆転写方法等において、酵素による重合反応の 開始用に特定の条件下でハイブリダイゼーションの特異性を有するプローブであ る、 −関係する技術における適用または使用に関して、機能的に対応する生 体高分子が、同一ではなくても、実質的に同じ役割を果たことができるならば、 二つのヌクレオチド配列またはペプチド配列は、互いにまたは基準の配列に対し て等価もしくは誘導されたものと称される；自然の可変性、特に変異が同定され る種の自然変異、もしくは相同な配列であるような誘導された可変性の結果とし て得られた場合には、二つの配列は等価物とされる。相同性に関しては以下に記 載する。 −変異性は、配列の自然または誘導された修飾を意味し、特にヌクレオ チド及び／又はヌクレオチド断片の置換及び／又は挿入及び／又は欠失、及び／ 又は一端または両端における配列の伸長または短縮を意味するものである：不自 然な変異性は、遺伝子工学技術によるもので、例えば、核酸の増幅用に選択され た合成プライマーの選択、変性（デジェネレート）等である；この多様性は、参 照と見なされるあらゆる出発配列の修飾に明らかにすることができ、前記参照配 列に対する相同性の度合いで表すことができる。 −相同性は、比較される二つのヌクレオチドまたはペプチド断片が同一 である度合いを特徴づける；参照のヌクレオチドまたはペプチド配列と、ヌクレ オチドまたはペプチド配列を直接比較することによって決定される同一部の割合 によって測定される。 −この同一の割合は、一方でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９ （ＭＳＲＶ−１）に同定された断片、および他方でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０〜ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ１２（ＭＳＲＶ−２）に同定された断片と相同である本発明で扱わ れたヌクレオチド断片、さらに一方でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３１〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３３に同定されたプローブ およびプライマーと相同なプローブおよびプライマー、および他方でＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ１３〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７〜ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ３ ０およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３７に同定されたプローブお よびプライマーと相同なプローブおよびプライマーに特に決定されており、例え ば、以下に詳細に説明するプロトコルに基づいてＬＭ７ＰＣおよびＰＬＩ−２系 を起源とするＭＳＲＶ−１ウイルスＲＮＡの断片から得られた核酸の異なる遺伝 的共通配列の間に観察される最小の同一の割合は、図２に記載された領域では６ ７％とされる。 −参照配列に等価のヌクレオチド配列を所有するものであれば、どんな ヌクレオチド断片も、等価もしくは参照配列から誘導されたものと称される；こ の定義に基づいて、以下のものが参照のヌクレオチド断片に等価である： ａ）参照断片に相補的なものと部分的にハイブリダイズすることができ る断片 ｂ）他の分類学上のグループを起源とする他の断片を用いたものより、 参照断片を用いた整列が、より大なる数の同一の連続塩基の証明となる断片 ｃ）種の天然の変異体から得られる、または得ることができる断片 ｄ）参照断片に適用された遺伝子工学技術から得ることのできる断片 ｅ）参照断片にコードされたペプチドに相同または同一であるペプチド をコードする少なくとも８個の連続したヌクレオチドを含む断片、 ｆ）少なくとも一つのモノマーの挿入、欠失または置換、もしくはその 一方または両方の端における伸長または減縮による参照断片とは異なる断片；例 えば、ポリペプチドをコードしないヌクレオチド配列が、その一方または両方の 端に位置する参照断片に対応した断片、 −ポリペプチドは、特に少なくとも二つのアミノ酸のペプチド、特に人 の介入によって、抽出され、分離され、本質的に単離され、合成されたオリゴヌ クレオチドまたはタンパク質、特に化学的合成によって、または組換え生物体で 発現することによって得られたものを意味すると解する、 −ヌクレオチド断片に部分的にコードされたポリペプチドは、前記ヌク レオチド断片に含まれた少なくとも９個の連続したモノマーによってコードされ た少なくとも３個のアミノ酸を有するポリペプチドを意味する、 −極性、疎水性及び／又は塩基度及び／又は酸度及び／又は中性度等の 各物理化学的特性が実質的に同一であれば、アミノ酸は他方のアミノ酸の類似体 （アナログ）と称する；しかして、ロイシンは、イソロイソンの類似体である。 −比較されるポリペプチドが、特に同じ抗原性、免疫学的、酵素学的及 び／又は分子認識特性等の同じ特性を本質的に有するならば、等価または参照の ポリペプチドから誘導されたものと称する；特に以下に挙げるものは、参照のポ リペプチドに等価である： ａ）少なくとも一つのアミノ酸が、類似のアミノ酸によって置換された 配列を有するポリペプチド、 ｂ）前記参照ポリペプチド及び／又は前記ポリペプチドをコードするヌ クレオチド断片の、自然または誘導された変異によって得られた等価のペプチド 配列を有するポリペプチド ｃ）前記参照ポリペプチドのミモトープ（mimotope）、 ｄ）一つ以上のアミノ酸が、Ｌ型から、逆のＤ型に置換されたポリペプ チド、 ｅ）配列に、例えば、アミン基のアセチル化、チオール基のカルボキシ ル化、カルボキシル基のエステル化等のアミノ酸の側鎖の修飾が導入されたポリ ペプチド、 ｆ）配列内の一つ以上のペプチド結合が、例えばｃａｒｂａ、ｒｅｔｒ ｏ、ｉｎｖｅｒｓｏ、ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ、還元されたおよびメチレン オキシ結合等で修飾されたポリペプチド、 ｇ）その少なくとも一つの抗原が、参照のポリペプチドの抗原で認識さ れるポリペプチド。 −本発明では、比較された二つのペプチド断片の相同性を特徴づける同 一の割合が、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％である。 逆転写酵素活性を有するウイルスは、遺伝的にＲＮＡおよびＤＮＡの形 態で同様に特徴づけられることから、ウイルスのＤＮＡおよびＲＮＡの両方を、 逆転写酵素活性（ＭＳＲＶ−１）等を有するウイルスに係る配列を決めるために 調べる。 病原性及び／又は感染性の作因（ＭＳＲＶ）−２が、感染した細胞のＤ ＮＡとＲＮＡの両方に検出されることから、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態にも特徴 づけられる。 “第一ヌクレオチド配列”等の、本明細書および請求の範囲に用いられ た順序表現は、特別な順序を表すためのものではなく、本発明をより明確に記載 するためのものである。 添付された図面を参照して記載された以下の詳細な説明により、本発明 をよりよく理解することができる。 −図１は、Ｓｈｉｈ（３３）のプロトコルに従ってＬＭ７培養物から得 られたＭＳＲＶ−２Ａ型の配列を示す；この配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０に同 定されている。 −図２は、ＬＭ７ＰＣおよびＰＬＩ−２系統を起源とするウイルスＤＮ Ａから、“ｐｏｌ”領域においてＰＣＲ技術で増幅されたＭＳＲＶ−１Ｂ配列の 一般的な核酸の共通配列を示し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、S ＥＱ ＩＤ ＮＯ５およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６に同定され、増幅プライマーと共通 に一致するものはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７を有する。 −図３は、Ｓｈｉｈ（３３）によって記載された“ｐｏｌ”領域におけ るＰＣＲによって得られたＭＳＲＶ−１Ｂ型の配列の系統樹を示す。 −図４は、各ＭＳＲＶ−１Ｂ／“ＰＣＲ ｐｏｌ”型のファミリーに対 する機能的な読み枠の定義を与えるもので、前記ファミリーＡ〜Ｄは、それぞれ 図２記載のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５及び ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６のヌクレオチド配列によって与えられたものである。 −図５は、ＭＳＲＶ−２Ｂ配列の共通配列の例を与えるもので、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１に同定されている。 −図６は、ＭＳ患者から得た培養物中のＢリンパ球にから作られたビリ オンの精製勾配から得たスクロース画分中の逆転写酵素（ＲＴ）活性を、ｄｐｍ （１分当たりの崩壊）で示したものである。 −図７は、図６と同じ条件下における、多発性硬化症ではない対照から 得たＢリンパ球系統の培養物中の逆転写酵素活性の分析を示す。 −図８は、クローンＰＳＪ１７のヌクレオチド配列を示す（ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ９）。 −図９は、Ｍ００３−Ｐ００４と称されるクローンのヌクレオチド配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８を示す。 −図１０は、クローンＦ１１−１のヌクレオチド配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ２を示し、プライマー領域の二つの矢印の間に位置する部分は、Ｆ１１−１のク ローニングに用いられたプライマーの選択によって負わされた可変性に対応して いる；同図には、アミノ酸への翻訳が示されている。 −図１１は、ヌクレオチド配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、およびＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ１の可能な機能的読み枠をアミノ酸で示しており、同図には、レトロウ イルスの逆転写酵素の共通配列に下線が施されている。 −図１２は、ＭＳＲＶ２ＥＬ１と称されるクローンのヌクレオチド配列 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２を示す。 −図１３は、連続した３つの図１３／１８〜１５／１８に分けられてお り、６つの可能な読み枠による、プライマーＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３を含むＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２のアミノ酸への翻訳を示す。 −図１４は、ＭＳＲＶ２−ＥＬ１配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２）を有す るＭＳＲＶ２−Ａ配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０）の並びを示し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ１３（クローニングの尾から分離されたもの）に同定されたプライマーのハイ ブリダイゼーション領域が四角で囲まれており、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４に同定さ れたプライマーのハイブリダイゼーション領域が、［］の間に示されている。 −図１５は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５によっ て同定されたプライマーから得られた増幅生成物のＰＣＲの結果を、エチジウム ブロミドに浸したアガロースゲルの紫外線照射写真の形態で与えるものである。 −図１６および１７は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９によって同定されたプライ マーから得られた増幅生成物のＰＣＲの結果を、エチジウムブロミドに浸したア ガロースゲルの紫外線照射写真の形態で与えるものである。 図１８は、ＭＳＲＶ−１のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１とＨＳＥＲＶ９と称され る内在性レトロウイルスのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１との間の相同性のマトリックス形 態での表示を与えるもので、相同性が、少なくとも６５％の箇所は連続した線で 示され、線が欠けている箇所は６５％より低い相同性を意味する。 実施例１：ＬＭ７系統の細胞培養から精製された感染性の作因の調製に おけるＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼの遺伝子の保存領域を増幅することによ るＭＳＲＶ−２Ａと称されるＭＳＲＶ−２クローンの調製 分子的な試みは、外因性および内在性のレトロウイルス、またはＢ型肝 炎ウイルス等の逆転写酵素（ＲＴ）活性を有する酵素をコードするウイルスのｐ ｏｌ遺伝子、そして疑うまでもなく、ＲＮＡ依存ＤＮＡポリメラーゼの遺伝子、 もしくは使用された増幅プライマーによって定義された領域に十分な配列の相同 性を示す酵素の遺伝子の比較的保存された領域を増幅することが可能なＰＣＲ技 術（３３）を用いることに本領がある。このＰＣＲ技術は、それまで−８０℃に 冷凍されていた原型のＬＭ７培養物（２４）の上清から、プロトコル（３４）に 基づいて得られた感染性の作因の精製された調製物から抽出された核酸に対して 使用された。ＬＭ７様のＲＴ活性のピークを含む画分を、グアニジンチオシアナ ートを含む一定体積のバッファーに取り込み（３５）、核酸をＰ．Ｃｈｏｍｚｙ ｎｓｋｉによって記載された技術に基づいて抽出するまで−８０℃に保存した（ ３５）。 ＰＣＲ反応の前に、製造者の説明に従って、最も近いログファクターに 対する、試料中のＲＮＡの量の近似値に基づいて、“ｃＤＮＡ合成システムプラ ス”キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いた、いわゆる“ランダム”プライマー（ 混合されたヘキサヌクレオチド）で、試料のＲＮＡを相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ） に翻訳した。 ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅後に得られたＤＮＡを、ＴＡクローニング（商標 ）キット（British Biotechnology）を用いてプラスミドに挿入した。２μｌの ＤＮＡ溶液を、５μｌの無菌蒸留水、１μｌの１０倍濃縮されたリゲーションバ ッファー“１０ｘ リゲーションバッファー”、２μｌの“ｐＣＲ^TMベクター” （２５ｎｇ／ｍｌ）および１μｌの“ＴＡ ＤＮＡリガーゼ”と混合した。この 混合物を、１２℃で一晩インキュベートした。以下の工程は、ＴＡクローニング （商標 ）キットの説明に従って行った。操作の最後に、培養し、かついわゆる“ミニプ レップ（miniprep）”操作（３６）によって取り込まれたプラスミドの抽出を行 うために、組換えられたバクテリアの白色のコロニーを取り出した。各組換えコ ロニーから抽出されたプラスミドを、適当な制限酵素で切断し、アガロースゲル で分析した。“ＴＡクローニングキット”のクローニングプラスミドに存在する Ｓｐ６プロモーターに相補的なプライマーとハイブリダイゼーションさせた後に 、ゲルをエチジウムブロミドに浸して紫外線照射下で検出された挿入物を所有す るプラスミドを、挿入物の配列決定のために選択した。次いで、配列決定の前の 反応を、シークエンシングキット“プリズム・レディー・リアクション・キット ・ダイ・デオキシターミネーター・サイクル・シークエンシング・キット”（Ap plied Biosystemsの照合番号４０１３８４）の使用に推奨された方法によって行 い、自動配列決定をApplied Biosystemsのモデル３７３Ａ“オートマティック・ シークエンサー”装置で、製造者の説明に従って行った。 得られた配列を、核酸配列のコンピューター化されたデータバンク、ジ ーンバンク（商標）で、マックベクター（商標）およびジーンワークス（商標） といったソフトウエアを用いて分析し、核酸配列の読み枠から推定されるアミノ 酸配列をスイスプロット（Swiss Prot）（商標）で分析した。溶解されたＬＭ７ の上清を起源とするウイルス試料から得られたスクロース勾配で逆転写酵素活性 のピークで精製された配列の分析は、予想される“ｐｏｌ”領域において既知の レトロウイルスと部分的に相同性を示す他の配列の個々が表現する範囲（常に５ ％より小さいか、希に１０％）と比べて、クローンの大半を示した（約４２％の クローン）。このクローンは、ＭＳＲＶ２−Ａと称され、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０ に同定された（図１参照）。ＰＣＲプライマーの間の増幅された領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１（図５参照）に同定された、対応する配列ＭＳＲＶ２−Ｂと相同 であり、実施例２に記載されている。ＰＣＲプライマーに位置する配列に見られ る違いは、別の技術的な条件下で用いられた、混合物の形態の退化プライマーの 使用によって説明される。完全に最新のジーンバンク（商標）データバンクの疑 問は、同じ配列または十分な相同性を表す配列を示すことができなかった。 この配列は、図１に示されている。この配列は、末端に二つのＰＣＲプ ライマーを有する枠に読み取り枠を有するが、これらのプライマー間の予想され た領域における既知のレトロウイルスの配列のセットより短い。下流プライマー に先行する配列があるが、上流プライマーの配列の後に、４５塩基対の欠如（１ ５アミノ酸）が観察された。しかしながら、読み枠はオープンであって、プライ マーを含む全体の配列を妨害するものではなく、推定されるアミノ酸配列は、既 知のレトロウイルスの対応する領域と十分な相同性を示す。ＰＣＲプライマーの 内側の配列において、レトロウイルスおよび逆転写酵素活性（３３）を有する既 知のウイルスのこのｐｏｌ領域に通常かなりよく保存されたアミノ酸、Ｇｌｕ、 Ａｒｇ、Ｇｌｎ、ＰｒｏおよびＡｓｐは、新規配列の読み枠に正しい配置で保存 されていることがわかる。 最後に、この配列が、データバンクに既に記載されたレトロウイルスの 配列と十分に異なることから、ＭＳＲＶ−２Ａと称される新規の感染性及び／又 は病原性の作因に属するものであると提唱することができる。この作因は、原則 としては、得られた配列の分析に基づいて、レトロウイルスに係るものであるが 、この配列を得るために用いた技術から、例えばＢ型肝炎ウイルス、ＨＢＶ（３ ３）のように、逆転写酵素活性を付随的に備えた酵素をコードするゲノムを備え たＲＮＡウイルスであるかもしれない。さらに、このＰＣＲ増幅技術に用いられ た退化プライマーのランダムな性質は、予期せぬ配列の相同性または関連する酵 素の遺伝子に保存された部位により、原核または真核の病原性及び／又は共感染 性の作因（原生生物）を起源とする核酸の増幅を非常によく行うことができる。 実施例２：ＬＭ７ＰＣおよびＰＬＩ−２系統を起源とするビリオン調製 物のレトロウイルスの保存されたｐｏｌ領域の“重ね合わせ（NESTED）”ＰＣＲ 増幅による、レトロウイルスＭＳＲＶ−１および共感染性の作因ＭＳＲＶ２をそ れぞれ定義づける、ＭＳＲＶ−１ＢおよびＭＳＲＶ−２Ｂと称されるクローンの 調製 Ｓｈｉｈ（３３）によって公開された技術から誘導されたＰＣＲ技術を 使用した。この技術は、ＤＮアーゼで反応媒体の全ての構成要素を処理すること によりわずかな混入ＤＮＡの全てを除去することができる。付随的に、異なるが オーバーラップするプライマーを二つの連続したＰＣＲ増幅サイクルに用いるこ とにより、始めに少量であるとともに、ＲＮＡに対するＤＮアーゼの偽の作用が 働くことによって試料中でさらに減少したＲＮＡ量から合成されたｃＤＮＡを増 幅する機会を増すことができる。実際に、ＤＮアーゼは、８５℃で１０分間熱し て、試料中に残ったこの酵素が不活性化する前に全ての少量の混入ＤＮＡを除去 することができるような過剰な活性の条件下で用いられる。Ｓｈｉｈ（３３）に よって記載されたＰＣＲ技術のこの変形を、一方でＰＬＩ−２系統（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．９２０７２２０１）で生成された“ＰＯＬ−２”単離物（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．Ｖ９２０７２２０２）、および一方でＭＳ７ＰＣ系統（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ ．９３０１０８１７）で生成されたＭＳ７ＰＧ単離物（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．Ｖ９ ３０１０８１６）からＨ．Ｐｅｒｒｏｎ（３４）によって記載された技術に基づ いてスクロース勾配で精製された感染性粒子の画分の核酸から合成されたｃＤＮ Ａに用いた。これらの培養物は、国際特許公開ＷＯ９３／２０１８８およびＷＯ ９３／２０１８９の主題をなす方法に基づいて得られた。 ＴＡクローニングキット（商標）を用いた上記技術によって増幅された 生成物をクローニングし、実施例１に記載したオートマティック・シークエンサ ーを用いた配列の分析を行った後に、最新の利用可能なバージョンのジーンバン ク（商標）データバンクでジーンワークス（商標）ソフトウエアを用いて配列を 分析した。 上記の試料からクローン化され、配列決定された配列は、特に二つの型 の配列に対応する：クローンの大半（ＰＬＩ−２培養物のＰＯＬ−２単離物を起 源とするクローンの５５％、およびＬＭ７ＰＣ培養物のＭＳ７ＰＧ単離物を起源 とするクローンの６７％）に見られる第一の型の配列は、ＥＲＶ−９またはＨＳ ＥＲＶ−９と称される内在性ヒトレトロウイルスに似ているが別の“ｐｏｌ”配 列のファミリーに対応しており、第二の型の配列は、前にＭＳＲＶ−２と称され た感染性及び／又は病原性の作因に帰する配列に非常に強い相同性を有する配列 に対応する。 クローンの大半を示す第一の型の配列は、配列の可変性が、配列の４つ のサブファミリーを定義することができる配列からなる。ＨＩＶ−１レトロウイ ルス（３７）でよく知られているように、同じレトロウイルスを起源とする類似 の種である、あるいは生産細胞内で共制御されたいくつかの内在性プロウイルス への障害となった結果であると見なすことができるため、これらのサブファミリ ーは互いに十分に似ている。これらの多かれ少なかれ不完全な内在性の構成要素 は、内在性レトロウイルスの同一のファミリーに属することから（３８）、複製 し得るプロウイルスによって生成される同一の制御シグナルに敏感である。内在 性レトロウイルスのこの新規のファミリー、もしくは、類似の種の世代を培養物 中に得ることができ、以下の共通配列を含むレトロウイルスのこの新規の種は、 ＭＳＲＶ−１Ｂと称される。 図２は、この実験で配列決定された種々のＭＳＲＶ−１Ｂの配列の一般 的な共通配列を示しており、これらの配列は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６に同定されて いる。これらの配列はジーンバンク（商標）データベースにＸ５７１４７および Ｍ３７６３８に示されたＨＳＥＲＶ９配列と７０％〜８８％の範囲の核酸の相同 性を示す。これらの配列の系統樹は、図３に示されている。この図において、サ ブファミリーＡ、Ｂ、ＣおよびＤは、ＭＳ７ＰＧおよびＰＯＬ−２単離物から精 製されたビリオンの純粋なＲＮＡ試料において、繰り返し行われた類似の実験で 優勢になった配列を示している。これらのファミリーの配列から、おそらくは外 因性のレトロウイルスＭＳＲＶ−１Ｂの種々の類似の種、もしくは外因性のレト ロウイルスＭＳＲＶ−１Ｂの異なるサブファミリーを表す４つの“共通”核酸配 列が定義される。これらの代表的な共通配列は、アミノ酸への翻訳とともに図４ に示されている。機能的な読み枠は、これらのＭＳＲＶ−１Ｂ配列の各サブファ ミリーに対して存在し、機能的な読み取り枠が、それぞれの場合において、核酸 配列の下の二行目に示されたアミノ酸配列に対応しているのがわかる。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７に同定され、“ｐｏｌ”領域におけるＰＣＲ技術によって得られた ＭＳＲＶ−ＩＢ配列の一般的な共通部分は、図２に示されている。 配列決定されたクローンの大半を示す第二の型の配列は、図５に図示さ れた配列ＭＳＲＶ−２Ｂに示され、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１に同定されている。Ｐ ＣＲプライマー間の増幅された領域は、実施例１に記載された、ＰＣＲプライマ ー間のＭＳＲＶ２−Ａ配列（図１のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０）と、一つの塩基を除 いて相同である。ＰＣＲプライマーに対応する配列に観察される違いは、異なる 技術条件下で用いられた混合形態における退化プライマーの使用により説明され る。 配列ＭＳＲＶ−２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０）とＭＳＲＶ−２Ｂ（ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ１１）とは、明らかに相同、または等価でさえあり、同じ生物体か ら誘導されたものであると共に、データバンクに既に記載されたレトロウイルス の配列とは十分に異なるため、この配列領域は、ＭＳＲＶ−２と称される新規の 感染性の作因に属すると考えられる。この感染性の作因は、原則としては、得ら れた第一の配列の分析に基づいて、レトロウイルスに係るものであるが、この配 列を得るために用いた技術から、例えばＢ型肝炎ウイルス、ＨＢＶ（３３）のよ うに、逆転写酵素活性を付随的に備えた酵素をコードするゲノムを備えたＤＮＡ ウイルスであるかもしれない。さらに、このＰＣＲ増幅技術に用いられた退化プ ライマーのランダムな性質は、予期せぬ配列の相同性または関連する酵素の遺伝 子に保存された部位により、原核または真核の病原性及び／又は共感染性の作因 （原生生物）を起源とする核酸の増幅を非常によく行うことができる。 実施例３：新規のＭＳからＢリンパ球の調製物のレトロウイルスの保存 されたｐｏｌ領域の“重ね合わせ”ＰＣＲ増幅による、ファミリーＭＳＲＶ−１ およびＭＳＲＶ２を定義づける、ＭＳＲＶ−１ＢおよびＭＳＲＶ−２Ｂと称され るクローンの調製 シクロスポリンＡの適切な濃度を有する適切な培養液に血液のリンパ系 細胞を培養した後に、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）にセロポジ ティブなＭＳ患者のＢリンパ球の培養における自己不朽化によって得られた自発 的リンパ芽球系からＨ．Ｐｅｒｒｏｎ（３４）によって記載された技術、および 実施例２に記載のプロトコルに基づいて、スクロース勾配の“ＬＭ７様”逆転写 酵素活性のピークにおけるビリオンの精製された画分に存在するＲＮＡ核酸物質 を増幅かつ配列決定するために、Ｓｈｉｈ（３３）の技術に基づいて修飾された 同じＰＣＲ技術を使用した。この系で生産されたビリオンの精製勾配から得られ たスクロース画分中の逆転写酵素活性を図６に示す。同様に、多発性硬化症では ない対照から同じ条件下で得られたＢ系統の培養液の上清を同じ条件下で処理し 、スクロース勾配の画分中の逆転写酵素活性の検定は、一貫して否定的（バック グラウンド）であって、図７に示されている。ＭＳ Ｂ系の勾配の３番目の画分 と非ＭＳ対照の勾配の逆転写酵素活性のない３番目の画分を、Ｓｈｉｈ（３３） によって導かれた上記と同じＲＴ−ＰＣＲ技術により分析し、実施例１および２ に記載したものと同じクローニングおよび配列決定を行った。 ＭＳＲＶ−１およびＭＳＲＶ−２型の配列が、ＭＳ Ｂリンパ芽球系を 起源とする“ＬＭ７様”逆転写酵素活性のピークに係る物質のみに見られるとい うことは、特に注目するべきことである。これらの配列は、ランダムに選択され た２６個の組換えクローンの対照の（非ＭＳ）Ｂリンパ芽球系の物質には見られ ない。ｃＤＮＡ合成段階に用いられた商業的な逆転写酵素を起源とするＭｏ−Ｍ ｕＬＶ型混入配列、および特定のレトロウイルスの相似性が全くない配列のみが 、このＰＣＲ技術によって生産された相同のポリメラーゼ配列の“共通の”増幅 の結果として、この対照に見られた。さらに、対照試料中の増幅反応に競合する 濃縮された標的が欠如しているために、わずかな混入物が増幅される。この結果 の違いが、明らかに高い重要性を有する（カイ自乗、ｐ＜０．００１）。 実施例４：ＰＬＩ−２系を起源とするビリオン調製物と内在性逆転写酵 素を反応させることによる、レトロウイルスＭＳＲＶ−１を定義するクローンＰ ＳＪ１７の調製 この試みは、これと同じ単離物に存在する逆転写酵素活性を用いて、単 離物中のおそらくはレトロウイルスＲＮＡから逆転写されたＤＮＡ配列を得るこ とを意図したものである。この逆転写酵素活性は、理論的には、プライマーｔＲ ＮＡに結合したレトロウイルスＲＮＡの存在下、もしくはレトロウイルス粒子（ ３９）で既に逆転写された短い鎖のＤＮＡとハイブリダイズしたときのみに機能 することができる。しかして、細胞性核酸が混入した物質中の特定のレトロウイ ルス配列の調製は、ウイルスの逆転写酵素活性でウイルスＲＮＡを特定の酵素的 増幅することにより、作者らによって最適化された。最後に、作者らは、ウイル スに含まれるＲＮＡの逆転写のこの酵素活性が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで効果的にな る、特別な物理化学的条件を決定した。これらの条件は、以下に示したプロトコ ルの技術的記載に対応する（内在性ＲＴ反応、精製、クローニングおよび配列決 定）。 分子的な試みは、ＰＬＩ−２系統の培養物の上清から得られた濃縮され てはいるが未精製のビリオンの調製物を用いることに本領があり、調製は以下の 方法に基づくものである：培養物の上清を毎週２度回収し、細胞の破片を除くた めに１００００ｒｐｍで３０分間予備遠心し、−８０℃で冷凍するか、以下の工 程に用いる。新鮮もしくは解凍された上清を、４℃、２時間、１０００００ｇ（ またはタイプ４５Ｔ ＬＫＢ−ＨＩＴＡＣＨＩローターで３００００ｒｐｍ）で ３０％グリセロール−ＰＢＳの緩衝剤に遠心する。上清を除去した後、沈澱物を 少量のＰＢＳにとり、濃縮されてはいるが未精製のビリオンの画分を構成する。 濃縮されてはいるが未精製のウイルス試料を、以下に記載するように、いわゆる 内在性逆転写酵素反応を行うために使用した。上記のプロトコルに基づいて精製 され、約１−５百万ｄｐｍの逆転写酵素活性を含む２００μｌのビリオンを、液 相が現れるまで３７℃で溶解し、氷上に移した。５倍に濃縮されたバッファーを 以下の組成で調製した：５００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８．２；７５ｍＭ ＮａＣｌ；２５ｍＭ ＭｇＣｌ₂；７５ｍＭ ＤＴＴおよび０．１０％のＮＰ４０ 。１００μｌの５Ｘバッファー＋２５μｌのｄＡＴＰの１００ｍＭ溶液＋２５μ ｌのｄＴＴＰの１００ｍＭ溶液＋２５μｌのｄＧＴＰの１００ｍＭ溶液＋２５μ ｌのｄＣＴＰの１００ｍＭ溶液＋１００μｌの滅菌蒸留水＋２００μｌのＰＢＳ 中のビリオンの懸濁液（ＲＴ活性は５百万ＤＰＭ）を混合し、４２℃で３時間イ ンキュベートした。インキュベーション後、反応混合物を、バッファー化された フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール混合物（Ｓｉｇｍａ）照合番 号Ｐ３８０３）に直接添加し；水相を回収し、一定量の滅菌蒸留水を有機相に加 えて残留した核酸物質を再抽出する。回収された水相を合わせて、３Ｍの酢酸ナ トリウムｐＨ５．２を１／１０体積＋２体積のエタノール＋１μｌのグリコーゲ ン（Boehringer-Mannheim 参照番号９０１３９３）を添加して、含まれている核 酸を沈降させ、この試料を−２０℃で４時間または＋４℃で一晩放置する。遠心 後に得 られた沈澱物を、７０％エタノールで洗浄し、６０ｍｌの蒸留水に再懸濁した。 この反応生成物を、以下に記載したプロトコルに基づいて精製、クローン化およ び配列決定した：端部に対を形成していないアデニンを備えた平滑末端ＤＮＡを 生成した：“埋立”反応を最初に行った：予め精製された２５μｌのＤＮＡ溶液 を、等モルのｄＡＴＰ＋ｄＧＴＰ＋ｄＴＴＰ＋ｄＣＴＰを含有する２μｌの２． ５ｍＭ溶液／１μｌのＴ４ＤＮＡポリメラーゼ（Boehringer-Mannheim 参照番号 １００４７８６）／５μｌの１０Ｘ“制限酵素用インキュベーションバッファー ”（Boehringer-Mannheim 参照番号１４１７９７５）／１μｌの１％ウシ血漿ア ルブミン溶液／１６μｌの滅菌蒸留水と混合した。この混合物を、１１℃で２０ 分間インキュベートした。この混合物に５０μｌのＴＥバッファーと１μｌのグ リコーゲン（Boehringer-Mannheim 参照番号９０１３９３）を添加し、核酸をフ ェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール（Ｓｉｇｍａ、照合番号Ｐ３８ ０３）で抽出し、上述のように酢酸ナトリウムで沈澱させた。遠心後のＤＮＡ沈 澱物を、１０μｌの１０ｍＭ ＴｒｉｓバッファーｐＨ７．５に再懸濁した。５ μｌのこの懸濁物を、２０μｌの５Ｘ Ｔａｑ ＤＮＡバッファー、２０μｌの５ ｍＭ ｄＡＴＰ、１μｌ（５Ｕ）のＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｍｐｌｉｔａ ｑ^TM）および５４μｌの滅菌蒸留水と混合した。この混合物を、溶液の表面上に 油膜を張った状態で７５℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後 に油膜下の水溶液に懸濁されているＤＮＡを、上述のようにして沈澱させ、２μ ｌの滅菌蒸留水に再懸濁した。得られたＤＮＡを、ＴＡクローニングキット^TMを 用いてプラスミドに挿入した。２μｌのＤＮＡ溶液を、５μｌの滅菌蒸留水、１ μｌの１０倍に濃縮されたリゲーンョンバッファー“１０Ｘリゲーンョンバッフ ァー”、２μｌの“ｐＣＲ^TM ベクター”（２５ｎｇ／ｍｌ）および１μ１の“ ＴＡ ＤＮＡリガーゼ”と混合した。この混合物を、１２℃で一晩インキュベー トした。以下の段階を、ＴＡクローニングキット（商標）（British Biotechnol ogy）の説明に従って行った。操作の終わりに、培養し、かついわゆる“ミニプ レップ（miniprep）”操作（３６）に基づいて取り込まれたプラスミドの抽出を 行うために、組換えられた（白色）バクテリアの白色のコロニーを回収した。各 組換えコロニーから抽出されたプラスミドを、適当な制限酵素で切断し、アガロ ースゲ ルで分析した。ＴＡクローニングキットのクローニングプラスミドに存在するＳ ｐ６プロモーターに相補的なプライマーとハイブリダイゼーションさせた後に、 ゲルをエチジウムブロミドに浸して紫外線照射下で検出された挿入物を所有する プラスミドを、挿入物の配列決定のために選択した。次いで、配列決定の前の反 応を、シークエンシングキット“プリズム・レディー・リアクション・キット・ ダイ・デオキシターミネーター・サイクル・シークエンシング・キット”（Appl ied Biosystems、照合番号４０１３８４）の使用に推奨された方法によって行い 、自動配列決定をApplied Biosystemsの“モデル３７３Ａオートマティック・シ ークエンサー”装置で、製造者の説明に従って行った。 反応混合物中に存在するＤＮＡ断片からクローン化された配列のコンピ ューター化されたデータバンクにおける識別により、レトロウイルス型の配列が 示された。対応するクローンＰＳＪ１７が、完全に配列決定され、図８に示すＳ ＥＱ ＩＤ ＮＯ９に同定され、得られた配列をデータバンク、最新の“ジーンバ ンク”（商標）で“ジーンワークス”（商標）ソフトウエアを用いて分析した。 上述の配列は、データバンクの分析からは見いだすことができなかった。ある既 知のレトロウイルスの構成要素と、部分的のみの相同性が見いだされた。最も使 用できる比較的相同性は、参考文献（４０）に基づいて、ＥＲＶ−９、またはＨ ＳＥＲＶ−９と称される内在性レトロウイルスと関連している。 実施例５：クローン“ＰＯＬ ＭＳＲＶ−１Ｂ”によって定義された５ ’領域とクローンＰＳＪ１７によって定義された３’領域との間に含まれる核酸 配列のＰＣＲ増幅 ５種のオリゴヌクレオチド、Ｍ００１、Ｍ００２−Ａ、Ｍ００３−ＢＣ Ｄ、Ｐ００４およびＰ００５を、精製されたＰＯＬ−２ウイルスを起源とするＲ ＮＡを増幅するために定義した。基準対照反応を、混入物の存在をチェックする ために行った（水での反応）。増幅は、実施例２に記載したプロトコルに従うＲ Ｔ−ＰＣＲ段階からなり、次いで欧州特許公開第０５６９２７２号公報に記載の ＰＣＲプロトコルに基づく“重ね合わせ”ＰＣＲを行う。最初のＲＴ−ＰＣＲサ イクルにおいて、プライマーＭ００１およびＰ００４またはＰ００５を用いた。 第二のＰＣＲサイクルにおいて、プライマーＭ００２−ＡまたはＭ００３−ＢＣ ＤおよびプライマーＰ００４を用いた。プライマーは、以下のように配置する。 得られた、Ｍ００３−Ｐ００４と称される“重ね合わせ”増幅産物は図 ９に示され、これはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８に対応する。 実施例６：逆転写酵素活性のピークで精製されたウイルス試料における 、既に同定された配列を用いたＭＳＲＶ−１レトロウイルスゲノムの一部の増幅 およびクローニング Ｆｒｏｈｍａｎ（４１）によって公開された技術から導かれたＰＣＲ技 術を用いた。この誘導された技術は、増幅されるゲノムの３’末端における特定 のプライマーを用いて、分析されるゲノムの５’領域への配列の伸長を可能にす る。この変形した技術は、上記のように精製されたビリオンの画分に使用される 製品“５’−ＡｍｐｌｉＦＩＮＤＥＲ^TMＲＡＣＥ Ｋｉｔ”を提供する会社“Ｃ ｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，（Ｐａｌｏ−ＡｌｔｏＣ ａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）の文献に記載されている。 ｃＤＮＡの合成およびＰＣＲ増幅用のキットプロトコルで用いられた特 定の３’プライマーは、それぞれ以下のＭＳＲＶ−１配列に相補的である： ＰＣＲに由来する生成物は、従来の方法（３６）に基づくアガロースゲ ルで精製した後に、１０ｍｌの蒸留水に再懸濁した。Ｔａｑポリメラーゼの特徴 の一つは、二つのＤＮＡ鎖のそれぞれの３’末端にアデニンを添加することであ るため、得られたＤＮＡをＴＡクローニングキット^TM（British Biotechnology ）を用いてプラスミドに直接挿入した。２μｌのＤＮＡ溶液を、５μｌの滅菌蒸 留水、１μｌの１０倍に濃縮されたリゲーションバッファー“１０Ｘリゲーショ ンバッファー”、２μｌの“ｐＣＲ^TM ベクター”（２５ｎｇ／ｍｌ）および１ μｌの“ＴＡ ＤＮＡリガーゼ”と混合した。この混合物を、１２℃で一晩イン キュベートした。以下の段階を、ＴＡクローニングキット（商標）（British Bi otechnology）の説明に従って行った。操作の終わりに、培養し、かついわゆる “ミニプレップ”操作（３６）に基づいて取り込まれたプラスミドの抽出を行う ために、組換えられた（白色）バクテリアの白色のコロニーを選択した。各組換 えコロニーからのプラスミド調製物を、適当な制限酵素で切断し、アガロースゲ ルで分析した。ＴＡクローニングキット（商標）のクローニングプラスミドに存 在するＳｐ６プロモーターに相補的なプライマーとハイブリダイゼーションさせ た後に、挿入物の配列決定用に、ゲルをエチジウムブロミドに浸して紫外線照射 下で検出された挿入物を所有するプラスミドを選択した。次いで、配列決定の前 の反応を、シークエンシングキット“プリズム・レディー・リアクション・キッ ト・ダイ・デオキシターミネーター・サイクル・シークエンシング・キット”（ Applied Biosystems、照合番号４０１３８４）の使用に推奨された方法によって 行い、自動配列決定をApplied Biosystemsの“モデル３７３Ａオートマティック ・ソークエンサー”装置で、製造者の説明に従って行った。 この技術を、一方のＰＬＩ−２系統によって生成された“ＰＯＬ−２” 単離物、および一方のＬＭ７ＰＣ系統によって生成されたＭＳ７ＰＧ単離物から 、スクロースで以下に記載するように精製されたビリオンの二つの画分に最初に 適用した：培養物の上清を毎週２度回収し、細胞の破片を除くために１００００ ｒｐｍで３０分間予備遠心し、−８０℃で冷凍するか、以下の工程に用いる。新 鮮もしくは解凍された上清を、４℃、２時間、１０００００ｇ（またはタイプ４ ５Ｔ ＬＫＢ−ＨＩＴＡＣＨＩローターで３００００ｒｐｍ）で３０％グリセロ ール−ＰＢＳの緩衝剤に遠心する。上清を除去した後、沈澱物を少量のＰＢＳに とり、濃縮されてはいるが未精製のビリオンの画分を構成する。濃縮されたウイ ルスを、滅菌されたＰＢＳバッファー（１５〜５０％重量／重量）におけるスク ロース勾配に適用し、スウィングアウトローターで＋４℃、１２時間３５０００ ｒｐｍ（１０００００ｇ）で超遠心した。１０個の画分を回収し、Ｈ．Ｐｅｒｒ ｏｎ（２４）に記載された技術に基づいて逆転写酵素活性を検定するために、ホ モジェナイゼーション後に各画分から２０μｌを取り出した。“ＬＭ７様”ＲＴ 活性のピークを含む画分を滅菌したＰＢＳに希釈し、ウイルス粒子を沈澱させる ために３５０００ｒｐｍ（１０００００ｇ）で１時間超遠心した。得られた精製 されたビリオンの沈澱物を、ＲＮＡの抽出に適した少量のバッファーに取り込む 。上述のｃＤＮＡ合成反応を、精製された細胞外のビリオンから抽出されたこの ＲＮＡに対して行った。上述の技術に係るＰＣＲ増幅は、クローンＦ１−１１を 得ることを可能にし、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２に同定されたこのクローンの配列が、 図１０に示されている。 このクローンは、図１１に示したように、以前に配列決定された別のク ローンと、ＭＳＲＶ−１レトロウイルスの“ｐｏｌ”遺伝子を表す領域を定義す ることができる。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１と称されるこの配列は、その端部が互いに 重複する種々のクローンから再構成され、プライマー、および全体の読み枠を人 為的に妨げる増幅またはクローニング技術に係る人為産物を調整する。 図１１では、アミノ酸への翻訳と共に、可能な読み枠が核酸配列の下に 示されている。 実施例７：ＭＳＲＶ−２で感染した培養物における、既に同定された配 列を用いた一部のＭＳＲＶ−２ゲノムの捕捉、増幅およびクローニング Ｈ．Ｐｅｒｒｏｎ（２４）によって記載されたものと類似する“ＬＭ７ 様”逆転写酵素活性を発現する細胞培養物の上清を、数週間定期的に回収し、１ ０％のグリセロールを添加して−８０℃に冷凍保存した。上清のセットを、超遠 心で感染粒子を濃縮し、かつスクロース勾配で平衡化するまで遠心して精製する ために解凍した；次いで逆転写酵素活性を、Ｈ．Ｐｅｒｒｏｎ（３４）によって 記載された方法に基づき、勾配で回収された異なる画分で測定した。 ＲＮＡの精製を意図したプロトコル（３５）に基づいて核酸を抽出する ために、逆転写酵素活性のピークを示す異なる画分を集めたが、抽出された核酸 は、ＤＮアーゼで処理しなかった。Ｓｈｉｈ（３３）によって記載された技術か ら誘導されたＰＣＲ増幅を、欧州特許公開第０５６９２７２号公報記載のＲＮＡ 増幅方法に基づいてＤＮアーゼ非処理の核酸試料に直接行った。その全体量は、 １００μｌで、２００ｎｇのＲＮＡ、１μｌのＲＮＡガード、およびＳｈｉｈ（ ３３）によって記載された直接（ＤＮＡ）のＰＣＲに使用されるものと同じ３３ μｍｏｌのプライマーの混合物（ＭＯＰ）を含有し、０．２５ｍＭの各ｄＮＴＰ 、１０μｌの１０Ｘバッファー、２．５ｕのＴａｑ酵素および０．４μｌのＲＴ 酵素（ＲＴ−ＡＭＶ；１０ｕ）を試料に添加する。増幅サイクルは、以下のよう にして行われる：ＲＮＡの変性６５℃／１０分、ｃＤＮＡの合成５０℃／８分、 次いでサイクルは、Ｓｈｉｈ（３３）によって記載されたＰＣＲと同じである。 対照基準の反応を、混入物が入っていないことをチェックするために行った（水 との反応）。精製物を１０％アクリルアミドゲルで分析した。 次いで、ＲＴ−ＰＣＲによって増幅された試料を、実施例１記載の技術 に基づいてクローン化および配列決定した。 ＲＴ−ＰＣＲ生成物から配列決定されたクローンの大半は、実施例１な いし３に記載したようにＭＳＲＶ−２Ａ配列およびその等価物のＭＳＲＶ−２Ｂ に相当する。 少なくとも一部が逆転写酵素活性に関わる、感染性粒子を含むこれらの 精製された画分を起源とするこの核酸物質に存在する配列を確認した後、残りの 核酸物質を、実施例１ないし３に同定および記載したＭＳＲＶ２配列を有する核 酸の特定の取り込みを行うために使用した。 前の段階において、ＭＳＲＶ２配列を有する遺伝的物質を、単一のプラ イマーを用いて５０サイクルの一方向ＰＣＲ技術によって増幅した。このプライ マーは、３’末端でビオチン分子と結合し、３’から５’への一方向増幅を行う ことができ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３８に同定された以下の配列に対応する。 その後、アビジンと結合したマグネチックビーズ［Ｄｙｎａｂｅａｄｓ （商標）］を含む溶液で、製品（Ｄｙｎａｌ）の説明書に従って捕捉し、ビオチ ンに結合していない核酸を除去できるような温度で一連の洗浄を行い、３’にお ける特定のプライマーと、不規則な配列を有する１０塩基（１０ｍｅｒ）のオリ ゴヌクレオチドの溶液によって与えられる５’末端におけるプライマーを用いて ＰＣＲをこれらの洗浄されたビーズに直接行った。 ３’から５’の向きに配向された特定の増幅プライマーは、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ１３に同定された配列に相当する。 これらのプライマーを用いて３５℃で４０サイクル以上行ったＰＣＲは 、第一のＰＣＲ段階で特別にビオチン化され、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）のビ ーズに捕捉された遺伝物質を増幅することができた。実施例１記載の技術に基づ いて、前記第二のＰＣＲ段階によって増幅されたＤＮＡの“ＴＡクローニング” キット用いたクローニングおよび組換えクローニングの配列決定を行い、７４８ 塩基対の配列が得られた。この核酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２は、図１２に示さ れている。この伸長された配列を、後にＭＳＲＶ−２ＥＬ１と称する。 プライマーＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３に相補的な逆の配列が３’端に存在し 、図１２において四角で囲まれている。このプライマーの上流に、ＭＳＲＶ−２ ＡおよびＭＳＲＶ−２Ｂクローンに既に同定された配列が見られる。 ６つの可能な読み枠に基づいたこの配列のアミノ酸への翻訳は、図１３ に示されている。 ＭＳＲＶ−２ＥＬ１配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２）を用いたＭＳＲＶ２ −Ａ配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０）の整列を図１４に示す。ＭＳＲＶ−２Ａを得 るために用いられた退化プライマーに対応する領域にいくつかの差異が見られる こと以外は、ＭＳＲＶ−２Ａ配列は、伸長された配列と厳密に同じであることに 注意すべきである。この領域は、この図では下線が施されており、さらにプライ マーＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３（クローニングの尾部とは別）のハイブリダイゼーシ ョン領域は四角で囲んであり、プライマーＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４のハイブリダイ ゼーション領域は［］の中に示されている。この領域のＭＳＲＶ−２ゲノムの真 の配列は、ＭＳＲＶ−２Ａ（およびＭＳＲＶ−２Ｂも同様）の場合のように、厳 密性の低いハイブリダイズされたプライマーによらない、ＭＳＲＶ−２ＥＬ１の ものであろう。 従って、ＭＳＲＶ−２ＥＬ１配列は、ＭＳＲＶ−２ゲノムの新規に配列 決定された領域に対応する。これは、本実施例に記載されたクローニングに使用 された核酸における特定の増幅を行う、ＭＳＲＶ−２ＥＬ１およびＭＳＲＶ−２ Ａに定義された新規のＰＣＲプライマーを用いて確認された。 以下の実施例は、記載された細胞培養物、またｉｎ ｖｉｖｏ、ＭＳ患 者において、ＬＭ７型ウイルスの単離（２４）をさせる、対応する感染性の作因 の存在との関連性を確証する特定のＭＳＲＶ２増幅の種々の結果を与える。 ＭＳＲＶ−２ＥＬ１配列に係る、１９９４年８月に改訂されたジーンバ ンク（商標）データバンクの疑問の結果は、既知の遺伝子配列との重要な相同性 を全く示さなかった。しかしながら、このＭＳＲＶ−２ＥＬ１配列の６つの可能 な読み枠に基づくアミノ酸への可能性のある翻訳の疑問は、バクテリア、ウイル スもしくは細胞の配列と部分的な相同性を示した。 正常のヒトＤＮＡへの特定のプライマーでのＰＣＲ増幅の欠如は、この 配列が細胞由来のものではないことを示している。このため、ＭＳＲＶ−２は、 ヒトにとって外的な感染性の作因である。しかしながら、ＭＳＲＶ−２Ａおよび ＭＳＲＶ−２Ｂと称される第一の配列の要素を同定することを可能にした、Ｓｈ ｉｈ（３３）によって記載された技術の多用性に基づいて用いられたプライマー の混合物の退化した特徴が、レトロウイルスまたはＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラ ーゼをコードする遺伝子に属さないゲノムを予期せず増幅する。ＭＳ患者を起源 とする培養物におけるＭＳＲＶ−１のほとんど変化のない共検出および逆転写酵 素活性の発現は、少なくとも一方がレトロウイルス（ＭＳＲＶ−１）である、異 なる二つの作因の間の病原性の関連によって説明される。 以下の実施例に記載されたこれら二つのタイプの配列の患者における検 出が、病原性の関連性を支持する。しかしながら、これらの要素の一つだけが、 ＭＳに引き起こされる病原性を説明するのに十分である。 実施例８：ＭＳ患者または基準対照を起源とするヒトの細胞の異なる試 料における特定のＭＳＲＶ−２配列の検出 ＭＳＲＶ−２ＥＬ１配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２）は、ＰＣＲ技術によ って特定のＤＮＡまたはＲＮＡを増幅するために用いられるオリゴヌクレオチド プライマーのいくつかの対を検出することを可能にした。 以下に同定されたプライマーは、異なるヒトの細胞におけるＭＳＲＶ− ２ゲノムの特定の検出を、欧州特許公開第０５６９２７２号公報記載のＲＮＡ増 幅方法に基づいたＲＴ−ＰＣＲ段階によって行うことを可能にした。 使用されたプライマーは以下のものである： − ５’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４に同定されたもの − ３’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５に同定されたもの ＰＣＲを、互いにつながった一連の３５サイクル、ｃＤＮＡ合成段階後 、１分間９４℃、１分間５４℃および１分間７２℃で行う。 異なる細胞型（３５）から抽出された全ＲＮＡを、ＤＮアーゼで処理し ないで、このＲＴ−ＰＣＲ反応に使用した。 図１５は、異なるウェルに別々に適用されたＰＣＲ増幅生成物の電気泳 動を行ったエチジウムブロミドに浸したアガロースゲルの紫外線照射下における 写真を用いたＰＣＲの結果を表している。 １番のウェルは、ＤＮＡ分子量マーカーの混合物を含み、２〜９番のウ ェルは、それぞれ以下の細胞の全体のＲＮＡから増幅された生成物を示している ： ２− ＬＭ７ＰＣ（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．９３０１０８１７）； ３− ＰＬＩ２（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．９２０７２２０１）； ４− ヒトの髄芽細胞； ５− ＭＣＲ-５（ヒト胚肺繊維芽細胞）； ６− 健康的な提供者を起源とするヒトの血液の単核細胞； ７− 種々のＭＳ患者の末梢血液から取られたＢリンパ芽球系の混合物 を起源とする細胞 ８− ＭＳ患者の末梢血液から取られたＢリンパ芽球系を起源とする細 胞 ９− 核酸を含まない基準対照（“水”の対照）。 ＭＳ患者を起源とする試料で増幅され（ＬＭ７ＰＣ、ＰＬＩ２、Ｂリン パ球系統）、ＭＳではない対照を起源とする試験の細胞では増幅されない（ＭＲ Ｃ５、血液単核細胞および髄芽）、予想の大きさに対応する約７００塩基対の特 定のＤＮＡのバンドの存在が観察された。 実施例９：ＭＳ患者もしくは基準対照を起源とする血漿の種々の試料に おける特定のＭＳＲＶ−１およびＭＳＲＶ−２配列の検出 実施例８に記載されたものと類似するＰＣＲ技術を、ＥＤＴＡ上にＭＳ 患者またはＭＳではない対照から血液試料を取って得られた血漿中のＭＳＲＶ− １およびＭＳＲＶ−２ゲノムを検出するために使用した。 血漿からのＲＮＡの抽出は、グアニジニウムチオシアナートを含む一定 量のバッファーを、採取後−８０℃で冷凍保存された１ｍｌの血漿に添加した後 に、Ｐ．Ｃｈｏｍｚｙｎｓｋｉ（３５）によって記載された技術に基づいて行っ た。 ＭＳＲＶ−２に対して、実施例８に記載されたものと同じ条件下かつ同 じプライマーを用いて、ＰＣＲを行った。 しかしながら、ＤＮアーゼで処理していない核酸の試料に対する“重ね 合わせ”ＰＣＲによる二つの連続した増幅における以下のＰＣＲプライマーを用 いて類似の結果が得られた。 ハイブリダイゼーション温度４８℃の４０サイクルの第一段階に使用さ れたプライマーは、以下のものである。 − ５’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７に同定されたもの 患者の試料における第一のＰＣＲ用であって、５’ＭＳＲＶ−２ ＰＣＲプライ マーに対応する、 − ３’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２８に同定されたもの 患者の試料における第一のＰＣＲ用であって、３’ＭＳＲＶ−２ ＰＣＲプライ マーに対応する。 この段階の後に、１０μｌの増幅生成物を得て、既に増幅された領域内 に位置したプライマーで、第二のいわゆる“重ね合わせ”ＰＣＲ増幅を行う。こ の第二の段階を、プライマーハイブリダイゼーンョン（“アニーリング”）温度 ５０℃で、３５サイクル以上行う。反応液の体積は、１００μｌである。 この第二の段階に用いたプライマーは、以下のものである。 − ５’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２９に同定されたもの 患者の試料における重ね合わせＰＣＲ用であって、５’ＭＳＲＶ−２ ＰＣＲプ ライマーに対応する、 − ３’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３０に同定されたもの 患者の試料における重ね合わせＰＣＲ用であって、３’ＭＳＲＶ−２ ＰＣＲプ ライマーに対応する。 ＭＳＲＶ−１に対して、二段階で増幅を行った。さらに、核酸試料を、 ＤＮアーゼで予め処理して、ＲＴ−ＰＣＲ増幅がＭＳＲＶ−１ＲＮＡから独占的 に起こることを確かめるために、ＲＴを用いない対照のＰＣＲ（ＡＭＶ逆転写酵 素）を二つの増幅段階に行った。ＲＴを用いない陽性（ポジティブ）の対照の場 合には、ＲＮＡの最初の試料を再度ＤＮアーゼで処理し、再度増幅する。 ＲＮアーゼ活性のないＤＮアーゼで処理するプロトコルは、以下に示す 通りである：抽出されたＲＮＡを、“ＲＮアーゼ阻害剤”（Boehringer-Mannhei m）の存在下で、１０μｌ中に１μｇの終濃度となるようにＤＥＰＣで処理した 水に分注する：これらの１０μｌに、１μｌの“ＲＮアーゼのないＤＮアーゼ” （ Boehringer-Mannheim）と、０．１Ｍ／ｌの酢酸ナトリウムおよび５ｍＭ／ｌの ＭｇＳＯ⁴を含む１．２μｌのｐＨ５バッファーを添加する；この混合物を２０ ℃で１５分間インキュベートし、９５℃で１５分間“サーモサイクラー”中に移 す。 第一のＭＳＲＶ−１ ＲＴ−ＰＣＲ段階を、欧州特許公開第０５６９２ ７２号公報に記載されたＲＮＡ増幅方法の変形に基づいて行う。特に、ｃＤＮＡ 合成段階は、４２℃で１時間行い、ＰＣＲ増幅を５３℃のプライマーハイブリダ イゼーション（“アニーリング”）温度で４０サイクル以上行う。反応液の体積 は、１００μｌである。 この第一段階に使用されたプライマーは、以下のものである。 − ５’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６に同定されたもの − ３’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７に同定されたもの この段階の後に、１０μｌの増幅生成物を得て、既に増幅された領域内 に位置したプライマーで第二のいわゆる“重ね合わせ”ＰＣＲ増幅を行う。この 第二の段階を、プライマーハイブリダイゼーション（“アニーリング”）温度５ ３℃で、３５サイクル以上行う。反応液の体積は、１００μｌである。 この第二の段階に用いたプライマーは、以下のものである。 − ５’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８に同定されたもの − ３’プライマー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９に同定されたもの 図１６は、異なるウェルに別々に適用されたＰＣＲ増幅生成物の電気泳 動を行ったエチジウムブロミドに浸したアガロースゲルの紫外線照射下における 写真の形態のＰＣＲの結果を表している。 上の写真は、特定のＭＳＲＶ−２増幅の結果を示している。 ８番のウェルは、ＤＮＡ分子量マーカーの混合物を含み、１〜７番のウ ェルは、４人のＭＳではない健康的な対照（１〜４番のウェル）および病状が異 なる段階の３人のＭＳ患者（５〜７番のウェル）を起源とする血漿の全体のＲＮ Ａから増幅された生成物をそれぞれ示す。 この一連において、ＭＳＲＶ−２核酸物質が、試験された３人の内の一 人のＭＳの血漿に検出され、４人の対照の血漿には一人も検出されなかった。よ り広い範囲で得られた別の結果が、これらの結果を確証した。 下の写真は、ＭＳＲＶ−１“重ね合わせ”ＲＴ−ＰＣＲによる特定の増 幅の結果を示す。 １番のウェルは、ＡＭＶ逆転写酵素を添加せずに水だけで生成されたＰ ＣＲ生成物を含み；２番のウェルは、ＡＭＶ逆転写酵素を添加して水だけで生成 されたＰＣＲ生成物を含み、３番のウェルは、ＤＮＡ分子量マーカーの混合物を 含み；４〜１３のウェルは、Ｐｅｒｒｏｎ（３４）によって記載されたプロトコ ルに基づいて、ＭＳＲＶ−１およびＭＳＲＶ−２で感染した培養物の上清を起源 とするビリオンの小球を遠心して平衡化したスクロース勾配画分（下方向へ向け て回収）から抽出された全体のＲＮＡから増幅された生成物を含み、１４番のウ ェルには何も添加せず、１５〜１７番のウェルには、異なる段階の病状の３人の ＭＳ患者を起源とする血漿から抽出されたＲＮＡの増幅された生成物を添加した 。 ＭＳＲＶ−１レトロウイルスゲノムは、Ｈ．Ｐｅｒｒｏｎ（２４）によ って記載された技術に基づいて測定された逆転写酵素活性のピークを含むスクロ ース勾配画分に、非常に強い強度を伴って確かに見られる（勾配の画分５、８番 のウェルに添加されたもの）。第一の画分（４番のウェル）には、勾配の表面に 浮いた溶解された粒子から放出されたＲＮＡに対応すると思われるわずかな増幅 が起こり、同様に、低い強度の増幅を起こすＭＳＲＶ−１ゲノムのいくつかのコ ピーを有する最後の画分（チューブの底）に沈澱した集合破片でも同じことが起 こった。 この一連の試験における３人のＭＳ血漿の一つのＭＳＲＶ−１ＲＮＡが 、非常に強力な増幅を起こすことがわかった（１７番のウェル）。 この一連の試験において、極端に小さい数で血漿中に存在する細胞外ウ イルスの粒子に対応すると思われるＭＳＲＶ−１レトロウイルスＲＮＡゲノムが 、試験された３人の内の一人のＭＳにおける“重ね合わせ”ＲＴ−ＰＣＲによっ て検出された。より広い範囲で得られた他の結果は、これらの結果を確証するも のである。 さらに、これらのＰＣＲ技術によって増幅された配列の特異性を確認し 、Ｆ．Ｍａｌｌｅｔ（４２）によって記載され、かつ仏国特許文献ＦＲ２６６３ ０４０に記載された“ＥＬＯＳＡ”技術によって評価した。 ＭＳＲＶ−１に関して、上述の重ね合わせＰＣＲの生成物を、実施例２ および図２、３および４に記載のサブファミリーに対応する、ＭＳＲＶ−１の共 通配列Ａと共通配列Ｂ＋Ｃ＋Ｄを分けて検出することができる二つのＥＬＯＳＡ システムにおいて試験してもよい。実際に、共通配列Ｂ＋Ｃ＋Ｄによく似た配列 は、培養物から精製、あるいはＭＳ患者の細胞外の生物学的流体において増幅さ れたＭＳＲＶ−１ビリオンを起源とするＲＮＡ試料に必須に観察されるが、共通 配列Ａによく似た配列は、正常なヒトの細胞性ＤＮＡに必須に観察される。 サブファミリーＡのＰＣＲ生成物の捕捉および特定のハイブリダイゼー ション用のＥＬＯＳＡ／ＭＳＲＶ−１システムは、５’末端にアミン結合を有す るキャプチャーオリゴヌクレオチドｃｐＶ１Ａと、ビオチニル化された検出オリ ゴヌクレオチドｄｐＶ１Ａを使用し、これらは、それぞれ以下の配列を有する。 − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３１に同定されたｃｐＶ１Ａ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７によって同定されたプライマ ーを用いて行われたＭＳＲＶ−１重ね合わせＰＣＲの生成物用のＥＬＯＳＡ捕捉 オリゴヌクレオチドに対応し、任意に、患者の試料におけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１ ８およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９によって同定されたプライマーとの増幅を行って もよい。 − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３２に同定されたｄｐＶ１Ａ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７によって同定されたプライマ ーを用いて行われたＭＳＲＶ−１重ね合わせＰＣＲの生成物のサブファミリーＡ 用のＥＬＯＳＡ捕捉オリゴヌクレオチドに対応し、任意に、患者の試料における ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９によって同定されたプライマ ーとの増幅を行ってもよい。 サブファミリーＢ＋Ｃ＋ＤのＰＣＲ生成物の捕捉および特定のハイブリ ダイゼーション用のＥＬＯＳＡ／ＭＳＲＶ−１システムは、ビオチニル化された 同じ検出オリゴヌクレオチドｄｐＶ１Ａと、５’末端にアミン結合を有し、以下 の配列を有するキャプチャーオリゴヌクレオチドｃｐＶ１Ｂを使用する。 − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３３に同定されたｄｐＶ１Ｂ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７によって同定されたプライマ ーを用いて行われたＭＳＲＶ−１重ね合わせＰＣＲの生成物のサブファミリーＢ ＋Ｃ＋Ｄ用のＥＬＯＳＡ捕捉オリゴヌクレオチドに対応し、任意に、患者の試料 におけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９によって同定された プライマーとの増幅を行ってもよい。 このＥＬＯＳＡ検出システムにより、ＭＳ患者のＤＮアーゼ処理された 血漿から増幅されたＰＣＲ生成物が、一つもサブファミリーＡの配列を含有しな いこと、および全てがサブファミリーＢ、ＣおよびＤの共通配列に陽性であるこ とを確認することができる。 ＭＳＲＶ−２に関して、以下のＰＣＲ増幅プライマーを用いて、感染し た細胞培養物を起源とする単離物において類似のＥＬＯＳＡ技術を行った。 − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４に同定された５’プライマー、 培養物からの試料のＰＣＲ用の５’ＭＳＲＶ−２ＰＣＲプライマーに対応する、 − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５に同定された３’プライマー、 培養物からの試料のＰＣＲ用の３’ＭＳＲＶ−２ＰＣＲプライマーに対応する、 そして、５’末端にアミン結合を備えた捕捉オリゴヌクレオチドｃｐＶ ２およびビオチニル化された検出オリゴヌクレオチドｄｐＶ２は、それぞれ以下 の配列を有する： − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３６に同定されたｃｐＶ２ プライマーＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５、または任意にＳ ｈｉｈ（３３）によって記載された退化プライマーを用いて行われたＭＳＲＶ− ２ ＰＣＲの生成物用のＥＬＯＳＡ捕捉オリゴヌクレオチドに対応する。 − ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３７に同定されたｄｐＶ２ プライマーＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５、または任意にＳ ｈｉｈ（３３）によって記載された退化プライマーを用いて行われたＭＳＲＶ− ２ ＰＣＲの生成物用のＥＬＯＳＡ検出オリゴヌクレオチドに対応する。 患者からの試料における増幅用に前述したものと異なる一組のプライマ ーを用いたこのＰＣＲ増幅システムは、ｉｎ ｖｉｔｒｏの培養物および分子生 物学の研究用に用いられた核酸の試料のＭＳＲＶ−２との感染を確かめることが できる。 病原性及び／又は感染性の作因のゲノムのＰＣＲ検出の第一の結果を考 慮して、自由な“ウイルス”が、神経系の外側を、適切な毒性の段階で、患者の 血流中を循環することができる。これは、ＭＳの活性段階の患者の血液脳関門に おける“ギャップ”のほとんど変化しない存在に適合する。 しかして、成された発見および本発明者によって開発された方法の結果 として、ＭＳＲＶ−１及び／又はＭＳＲＶ−２の感染及び／又は再活性化の診断 を行うこと、および患者の生物学的流体中の上記作因の検出を“ネガティブにす る”効能に基づいてＭＳの治療法を検討することが考えられる。さらに、ＭＳの 神経学的な症状を未だ示していない患者における早期検出が、神経学的な疾患の 始まりに対応する病変段階に先立つことに関する連続した臨床経過に関してより 効果的な処置をすることができる。現在、神経学的な病変の症状が始まる前にＭ Ｓの診断を行うことができず、このため既に重大となった中枢神経系の病変を示 唆する病状が現れる前に処理を行うことができない。このため、ヒトにおけるＭ ＳＲＶ−１及び／又はＭＳＲＶ−２の感染及び／又は再活性化の診断は、決定的 に重要で、本発明はこれを行う手段を提供する。 しかして、ＭＳＲＶ−１及び／又はＭＳＲＶ−２の感染及び／又は再活 性化の診断を行うこととは別に、患者の生物学的流体における上記作因の検出を “ネガティブにする”効能に基づいてＭＳにおける治療法を検討することができ る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｈ 21/04 8517−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 14/005 Ｃ０７Ｋ 14/005 9453−4Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｎ 5/10 8310−2Ｊ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｈ Ｃ１２Ｑ 1/68 9281−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/569 9455−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＢ (31)優先権主張番号 ９４／０１５３１ (32)優先日 1994年２月４日 (33)優先権主張国 フランス（ＦＲ） (31)優先権主張番号 ９４／０１５３２ (32)優先日 1994年２月４日 (33)優先権主張国 フランス（ＦＲ） (31)優先権主張番号 ９４／１４３２２ (32)優先日 1994年11月24日 (33)優先権主張国 フランス（ＦＲ） (31)優先権主張番号 ９４／１５８１０ (32)優先日 1994年12月23日 (33)優先権主張国 フランス（ＦＲ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ベダン，フレイデリク フランス国 69002 リヨン リュ ガス パール―アンドレ ６ (72)発明者 ベゼム，フレイデリク フランス国 38090 ヴィルフォンテン リュ ドゥ ラ ヌワラ 39

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 単離または精製された状態で、多発性硬化症に関与する二つの病因性及び ／又は感染性の作因、すなわち逆転写酵素活性を備え、内在性レトロウイルス成 分のファミリーに関連するヒトウイルス、または前記ウイルスの変異体を含む第 一作因、および第二作因または第二作因の変異体を有する組成物であって、これ ら二つの病因性及び／又は感染性の作因が、それぞれ１９９２年７月２２日にＶ ９２０７２２０２の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託されたＰＯＬ−２および１９９ ３年１月８日にＶ９３０１０８１６の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託されたＭＳ７ ＰＧと称される株、およびこれらの変異株から選択された同一のウイルス株に由 来する組成物。 ２． 単離または精製された状態で、多発性硬化症に関与する二つの病因性及び ／又は感染性の作因、すなわち逆転写酵素活性を備え、内在性レトロウイルス成 分のファミリーに関連するヒトウイルス、または前記ウイルスの変異体を含む第 一作因、および第二作因または第二作因の変異体を有する組成物であって、これ ら二つの病因性及び／又は感染性の作因が、それぞれ１９９２年７月２２日に９ ２０７２２０１の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託されたＰＬＩ−２および１９９３ 年１月８日に９３０１０８１７の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託されたＬＭ７ＰＣ と称される系統から選択された同一の細胞系統、および少なくとも一つの病因性 及び／又は感染性の作因を生産することのできる全ての感染細胞の培養物、及び ／又はこれらの変異体によって生成される組成物。 ３． 単離または精製された状態で、二つの病因性及び／又は感染性の作因、す なわち、ゲノムが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相補配列、 およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの配 列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配列 から 選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％ の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含むウイル スまたは前記ウイルスの変異体を含む第一作因、およびゲノムが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配 列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこ の配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ Ｉ ＤＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列と少なくと も７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選 択されたヌクレオチド配列を含む第二の病因性及び／又は感染性の作因を含む組 成物。 ４． 少なくとも一つの核酸断片、すなわち、 ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相補配列 、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの 配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配 列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも ７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む 第一断片、及び／又は、 ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に 、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択さ れたヌクレオチド配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同 性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第二断片を、 特にプローブとして用いることを特徴とする、多発性硬化症に係る第一の病因性 及び／又は感染性の作因、及び／又は第二の病因性及び／又は感染性の作因を検 出する方法。 ５． 少なくとも一つの核酸断片、すなわち、 ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相補配列 、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの 配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配 列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも ７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む 第一核酸断片、及び／又は、 ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に 、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択さ れたヌクレオチド配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同 性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む第二核酸断片 を含むことを特徴とする、診断、予防または治療用組成物。 ６． 少なくとも一つの前記病因性及び／又は感染性の作因に属すると推定され るＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はそれらの相補ＲＮＡ及び／又はＤＮＡを 、第一ヌクレオチド断片および第二ヌクレオチド断片を含む組成物と接触させ、 前記第一断片のヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、 これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なる モノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９および これ らの相補配列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは 少なくとも７０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド 配列を含み、かつ 前記第二断片のヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ １１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列で あって、特に、１００個連なるモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配 列から選択されたヌクレオチド配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも ９０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含む ことを特徴とする、生物試料において、多発性硬化症に係る病因性及び／又は感 染性の作因の組み合わせを検出及び／又は同定するための方法。 ７． 請求項４に記載した第一ヌクレオチド断片によって部分的または完全にコ ードされた第一ポリペプチド、及び／又は、請求項４に記載した第二ヌクレオチ ド断片によって部分的または完全にコードされた第二ポリペプチドを含む組成物 を用いることを特徴とする、生物学的試料における多発性硬化症に係る第一の病 因性及び／又は感染性の作因、及び／又は第二の病因性及び／又は感染性の作因 を検出する方法。 ８． 請求項７に記載した第一ポリペプチド及び／又は第二ポリペプチドを含む ことを特徴とする診断、予防または治療用組成物。 ９． 請求項７に記載した第一ポリペプチドに特異的な抗体等の第一リガンド、 及び／又は、請求項７に記載した第二ポリペプチドに特異的な抗体等の第二リガ ンドを含むことを特徴とする診断、予防または治療用組成物。 １０． １９９２年７月２２日に９２０７２２０１の受付番号でＥＣＡＣＣに寄 託されたＰＬＩ−２と称される細胞系統、または、前記ＰＬＩ−２から得られた 抗体もしくは該抗体と免疫学的交差反応を示す他の抗体を産生することが可能で ある、誘導された全ての細胞系統もしくはこの細胞系統の全ての子孫。 １１． １９９２年７月２２日にＶ９２０７２２０２の受付番号でＥＣＡＣＣに 寄託されたＰＯＬ−２と称されるウイルス株、または、前記ＰＯＬ−２株から得 られた抗原もしくは該抗原と免疫学的交差反応を示す他の抗原を産生することが 可能である、誘導された全ての株もしくはこの株の全ての子孫。 １２． １９９３年１月８日に９３０１０８１７の受付番号でＥＣＡＣＣに寄託 されたＬＭ７ＰＣと称される細胞系統、または、前記ＬＭ７ＰＣから得られた抗 体もしくは該抗体と免疫学的交差反応を示す他の抗体を産生することが可能であ る、誘導された全ての細胞系統もしくはこの細胞系統の全ての子孫。 １３． １９９３年１月８日にＶ９３０１０８１６の受付番号でＥＣＡＣＣに寄 託されたＭＳ７ＰＧと称されるウイルス株、または、前記ＭＳ７ＰＧ株から得ら れた抗原もしくは該抗原と免疫学的交差反応を示す他の抗原を産生することが可 能である、誘導された全ての株もしくはこの株の全ての子孫。 １４． 請求項１１および１３のいずれかの株、および前記ウイルス株ＰＯＬ− ２およびＭＳ７ＰＧの一方または他方のウイルスの抗原に相当する少なくとも一 つの抗原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される、少なくとも一つの抗 原を有するウイルスからなる種々の株から選択された逆転写酵素活性を有するウ イルス株を起源とする、内在性レトロウイルスの要素のファミリーおよび多発性 硬化症に関する、逆転写酵素活性を有する精製または単離されたウイルス性物質 。 １５． 請求項１０および１２のいずれかの細胞系統、もしくは前記細胞系統Ｐ ＬＩ−２およびＬＭ７ＰＣによって作られた一方または他方のウイルスの抗原に 相当する少なくとも一つの抗原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される 、少なくとも一つの抗原を有するウイルスを作ることのできる感染した細胞培養 物によって作られる、内在性レトロウイルスの要素のファミリーおよび多発性硬 化症に関する、逆転写酵素活性を有する精製または単離されたウイルス性物質。 １６． ゲノムが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの相補配列、 およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマーのどこの配 列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれらの相補配列 から 選択されたヌクレオチド配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％ の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含むことを 特徴とするウイルス性物質。 １７． ゲノムのｐｏｌ遺伝子が、ＥＲＶ−９またはＨＳＥＲＶ−９レトロウイ ルスゲノムのｐｏｌ遺伝子に属するヌクレオチド配列と、特に少なくとも５０％ 、好ましくは少なくとも６５％の相同性を示す等価のヌクレオチド配列を有する ことを特徴とする、多発性硬化症に係るレトロウイルス性物質。 １８． ゲノムのｐｏｌ遺伝子が、ＥＲＶ−９またはＨＳＥＲＶ−９レトロウイ ルスゲノムのｐｏｌ遺伝子にコードされたペプチド配列と少なくとも５０％、好 ましくは７０％の相同性を示すペプチド配列をコードすることを特徴とする、多 発性硬化症に係るレトロウイルス性物質。 １９． ゲノムのｐｏｌ遺伝子が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９および これらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列にコードされるペプチド配列 と、少なくとも３０個連なるアミノ酸のどこの配列に対しても、少なくとも５０ ％、好ましくは少なくとも７０％の相同性を示すペプチド配列をコードすること を特徴とする、多発性硬化症に係るレトロウイルス性物質。 ２０． ヌクレオチド配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、これらの 相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連なるモノマー のどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９およびこれら の相補配列から選択された配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０ ％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチド配列を含むヌク レオチド断片。 ２１． 請求項２０に係る断片のヌクレオチド配列の少なくとも一部と同じまた は等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配列に対して も、前記断片の少なくとも一部と少なくとも７０％の相同性を示すヌクレオチド 配列を含むことを特徴とする、請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載のウ イルス性物質のＲＮＡまたはＤＮＡの合成による増幅のための特定のプライマー 。 ２２． ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２１、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２４、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３３およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオ チド配列を有することを特徴とする請求項２１記載のプライマー。 ２３． 請求項２０に係る断片のヌクレオチド配列の少なくとも一部と同じまた は等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配列に対して も、前記断片の少なくとも一部と少なくとも７０％の相同性を示すヌクレオチド 配列を含むことを特徴とする、請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載のウ イルス性物質のＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリダイズすることができる プローブ。 ２４． ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１６、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２０ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２３、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２６、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３３およびこれらの相 補配列から選択されたヌクレオチド配列を有することを特徴とする請求項２３記 載のプローブ。 ２５． 生物学的試料において、請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載の ウイルス性物質を検出、分離または同定するための、請求項２３または２４に係 るプローブもしくは請求項２１または２２に係るプライマーの使用。 ２６． 生物学的試料において、請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載の ウイルス性物質を検出、分離または同定する方法であって、前記ウイルスに属す ると推定されるＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はこれらに相補的なＤＮＡ及 び／又はＲＮＡを、請求項２４記載の少なくとも一つのプローブと接触させるこ とを特徴とする方法。 ２７． ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、またはこれらに相補的なＤＮＡ及び／又はＲ ＮＡをプローブと接触させる前に、該ＲＮＡ及び／又はＤＮＡを請求項２２に記 載の少なくとも一つの増幅プライマーとハイブリダイズさせ、該ＲＮＡ及び／又 はＤＮＡを増幅することを特徴とする請求項２６記載の方法。 ２８． 生物学的試料において、請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載の 多発性硬化症に係るウイルス性物質の発現を定量する方法であって、前記ウイル スに特異的なＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、これらに相補的なＤＮＡ及び／又はＲＮ Ａを請求項２４に記載の少なくとも一つのプローブと接触させ、適切な条件で増 幅を行い、該ＲＮＡ及び／又はＤＮＡを検出することを特徴とする定量方法。 ２９． 請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載のウイルス性物質とは異な る、多発性硬化症に係る精製または単離された病原性及び／又は感染性の作因で あって、請求項１１および１３のいずれかに記載の株から選択されたウイルス株 を起源とし、この種々の株は前記ウイルス株ＰＯＬ−２およびＭＳ７ＰＧの一つ または他の病原性及び／又は感染性の作因の抗原に対応する少なくとも一つの抗 原向けの少なくとも一つの抗体によって認識される少なくとも一つの抗原を含む 病原性及び／又は感染性の作因を有し、前記株の各ウイルス性物質とは異なる作 因。 ３０． 請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載のウイルス性物質とは異な る、精製または単離された多発性硬化症に係る病原性及び／又は感染性の作因で あって、請求項１０および１２のいずれかに記載の細胞系統、および前記細胞系 統ＰＬＩ−２およびＬＭ７ＰＣによって作られた一つまたは他の病原性及び／又 は感染性の作因の抗原に対応する少なくとも一つの抗原向けの少なくとも一つの 抗体によって認識される少なくとも一つの抗原を含む病原性及び／又は感染性の 作因を作ることのできる感染した細胞培養物によって作られ、前記株の各ウイル ス性物質とは異なる作因。 ３１． ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２ 、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配 列から選択された配列を有するヌクレオチド配列と少なくとも７０％、好ましく は少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配列から選択されたヌクレオチ ド配列を含む核酸を有することを特徴とする病原性及び／又は感染性の作因。 ３２． ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２ 、これらの相補配列、およびこれらと等価の配列であって、特に、１００個連な るモノマーのどこの配列に対しても、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ １１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１２およびこれらの相補配列から選択された配列と少な くとも７０％、好ましくは少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配列か ら選択されたヌクレオチド配列を含むことを特徴とするヌクレオチド断片。 ３３． 請求項２９ないし３１のいずれか１項に記載の病原性及び／又は感染性 の作因のＲＮＡまたはＤＮＡの合成による増幅のための特異的プライマーであっ て、請求項３２に記載の断片のヌクレオチド配列の少なくとも一部と同じまたは 等価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配列に対しても 、前記断片の少なくとも一部と少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配 列を含むことを特徴とするプライマー。 ３４． ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２９、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ３０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３７およびこれらの相補配列から選択されたヌ クレオチド配列を有することを特徴とする請求項３３記載のプライマー。 ３５． 請求項２９ないし３１のいずれか１項に記載の病原性及び／又は感染性 の作因のＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリダイズし得るプローブであって 、請求項３２に記載の断片のヌクレオチド配列の少なくとも一部と同じまたは等 価のヌクレオチド配列、特に、１０個連なるモノマーのどこの配列に対しても、 前記断片の少なくとも一部と少なくとも９０％の相同性を示すヌクレオチド配列 を含むことを特徴とするプローブ。 ３６． ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１３ 、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２７、ＳＥ Ｑ ＩＤ ＮＯ２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３０、ＳＥＱ Ｉ Ｄ ＮＯ３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ３６、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ３７およびこれらの相補配列から選択されたヌクレオチド配列を有することを 特徴とする請求項３５記載のプローブ。 ３７． 生物学的試料において、請求項２９ないし３１のいずれか１項に記載の 病原性及び／又は感染性の作因を検出及び／又は同定するための、請求項３５ま たは３６記載のプローブ及び／又は請求項３３または３４記載のプライマーの使 用。 ３８． 生物学的試料において、請求項２９ないし３１のいずれか１項に記載の 病原性及び／又は感染性の作因を検出、分離または同定する方法であって、前記 作因に属すると推定されるＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はこれらに相補的 なＤＮＡ及び／又はＲＮＡを、請求項３６記載の少なくとも一つのプローブと接 触させることを特徴とする方法。 ３９． ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、またはこれらに相補的なＤＮＡ及び／又はＲ ＮＡをプローブと接触させる前に、該ＲＮＡ及び／又はＤＮＡを請求項３４に記 載の少なくとも一つの増幅プライマーとハイブリダイズさせ、該ＲＮＡ及び／又 はＤＮＡを増幅することを特徴とする請求項３８記載の方法。 ４０． 生物学的試料において、請求項２９ないし３１のいずれか１項に記載の 多発性硬化症に係る病原性及び／又は感染性の作因の発現を定量する方法であっ て、前記作因に特異的なＲＮＡ及び／又はＤＮＡ、及び／又はこれらに相補的な ＤＮＡ及び／又はＲＮＡを請求項３６に記載の少なくとも一つのプローブと接触 させ、該ＲＮＡ及び／又はＤＮＡを増幅することを特徴とする定量方法。 ４１． 請求項２３または２４記載の少なくとも一つのプローブもしくは請求項 ３５または３６記載の少なくとも一つのプローブ、及び／又は請求項２１または ２２記載の少なくとも一つのプライマーもしくは請求項３３または３４記載の少 なくとも一つのプライマーを含むことを特徴とする、多発性硬化症に係る少なく とも一つの病原性及び／又は感染性の作因の発現を阻害するための、診断、予防 または治療用組成物。 ４２． 請求項２０記載の断片及び／又は請求項３２記載の断片を含むＲＮＡま たはＤＮＡ、および特に複製ベクター。 ４３． 請求項２０記載のヌクレオチド断片または請求項３２記載のヌクレオチ ド断片の少なくとも一部によってコードされたことを特徴とする、多発性硬化症 に係る病原性及び／又は感染性の作因のゲノムのヌクレオチド配列によってコー ドされた少なくとも５、好ましくは１０個のアミノ酸を有するポリペプチド。 ４４． 請求項４３記載の少なくとも一つのポリペプチドを含むことを特徴とす る診断及び／又は治療及び／又は予防用組成物。 ４５． 請求項４３に記載した少なくとも一つのポリペプチドに特異的な抗体等 のリガンドを含むことを特徴とする診断及び／又は治療及び／又は予防用組成物 。