JPH08511536A - 複数の血清型のボツリヌス毒素により、神経筋疾患および症状を処置する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 疾患または症状のある患者を処置する方法は、処置有効量の、ある選択した血清型のボツリヌス毒素を、その投与に対する臨床的応答の低下を患者が経験するまで投与し、その後、別の血清型のボツリヌス毒素を、処置有効量で患者に投与することを含んで成る。

Description

【発明の詳細な説明】 複数の血清型のボツリヌス毒素により、神経筋疾患および症状を処置する方法 発明の分野 本発明は、神経系疾患、例えば神経筋疾患および症状をボツリヌス毒素で処置 するための新規方法を提供する。更に、本発明は、神経伝達物質（とりわけ、ア セチルコリン）の放出を伴う組織および器官系のいずれにも有用な方法を提供す る。そのようなコリン作動性伝達系は、神経筋接合部（筋肉）、平滑筋（消化管 、括約筋など）、および分泌（唾液分泌および粘液）を包含する。 発明の背景 細菌毒素であるボツリヌス毒素（とりわけ、Ａ型ボツリヌス毒素）は、筋肉の 痙縮を伴う多くの神経筋疾患および症状、例えば斜視、眼瞼痙彎、痙性斜頚（頸 部ジストニー）、口下顎骨ジストニーおよび痙性音声障害（喉頭ジストニー）の 処置に用いられてきた。この毒素は、シナプス前コリン作動性神経末端に短時間 で強力に結合し、アセチルコリン放出頻度の低下によってアセチルコリンのエキ ソサイトーシスを阻害する。その結果、痙縮した筋肉の局所的麻痺、すなわち弛 緩が起こる。 神経筋疾患処置の一例は、ボロディック（Ｂorodic）の米国特許第５０５３０ ０５号に記載されている。該特許には、若年の脊椎彎曲（すなわち、側彎）を、 アセチルコリン放出阻害剤、好ましくはボツリヌス毒素Ａで処置することが提案 されている。 Ａ型ボツリヌス毒素による斜視の処置は、エルストン，ジェイ・エス（Elston ，J．S.）らのブリティッシュ・ジャーナル・オブ・オフサルモロジー（British Journal of Ophthalmology）、１９８５、６９、７１８−７２４および８９１ −８９６に記載されている。Ａ型ボツリヌス毒素による眼瞼痙攣の処置は、アデ ニス，ジェイ・ピー（Adenis，J．P．）らのジュルナール・フランセ・ド・オフ タルモロジー（J．Fr．Ophthalmol．）、１９９０、１３（５）、２５９−２６ ４に記載されている。エルストン，ジェイ・エスのアイ（Eye）、１９９０、４ （４）：VIIには、斜視の処置が記載されている。痙性斜頸および口下顎骨ジス トニ ーの処置は、ジャンコビック（Jankovic）らのニューロロジー（Neurology）、 １９８７、３７、６１６−６２３に記載されている。 痙性音声障害のＡ型ボツリヌス毒素による処置は、ブリッツァー（Blitzer） らのアナルス・オブ・オトロジー，ライノロジー・アンド・ラリンゴロジー（An n．Otol．Rhino．Laryngol）、１９８５、９４、５９１−５９４に記載されてい る。舌ジストニーのＡ型ボツリヌス毒素による処置は、ブリン（Brin）らのアド ブ・ニューロル（Adv．Neurol．）（１９８７）、５０、５９９−６０８に記載 されている。コーヘン（Cohen）らのニューロロジー（１９８７）、３７（補遺 １）、１２３−４には、Ａ型ボツリヌス毒素による書痙の処置が記載されている 。 ボツリヌス毒素という用語は、嫌気性細菌のボツリヌス菌が産生する毒素群を 包括する総称的な名称である。今日までに、免疫学的に異なる７種類の神経毒血 清型が見出されている。それらには、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧの名称が 与えられている。種々のボツリヌス毒素の性質に関する更なる情報は、下記文献 から得ることができる：ジャンコビックおよびブリンのザ・ニュー・イングラン ド・ジャーナル・オブ・メディシン（The New England Journa1 of Medicine） 、第１７号、１９９０、１１８６−１１９４、並びにチャールズ・エル・ハザウ ェイ（Charles L.Ｈatheway）のボツリヌム・ニューロトキシン・アンド・テタ ナス・トキシン（Botulinum Neurotoxin and Tetanus Toxin）［エル・エル・シ ンプソン（L．L．Simpson）編、カルフォルニア州サンディエゴのアカデミック ・プレス社（Academic Press Inc．）、１９８９］の第１章。それらの開示を引 用により本明細書の一部とする。 ボツリヌス毒素の神経毒成分は、分子量が約１５０キロダルトンであり、約５ ０kＤの短いポリペプチド鎖（毒素の毒性、すなわち、アセチルコリン放出頻度 の低下による、アセチルコリンのエキソサイトーシスの阻害に関与すると考えら れている）と、約１００kＤのより長いポリペプチド鎖（毒素がシナプス前膜に 結合するのに必要と考えられている）とから成ると考えられている。この「短」 鎖および「長」鎖は、単純なジスルフィド架橋によって結合している。（注：あ る血清型のボツリヌス毒素、例えばＥ型は、二重鎖に対して、一重鎖のニックの 無いタン パク質の形態で存在し得る。一重鎖形態のものは、活性はより小さいが、プロテ アーゼ（例えばトリプシン）でニックを形成することにより、対応する二重鎖に 変換し得る。本発明の方法においては、一重鎖および二重鎖のいずれも有用であ る。） 欧州特許明細書第０１２９４３４号には、リシンおよび抗体の免疫毒素複合体 （細胞表面親和性の改善により、細胞毒性が高められていることによって特徴付 けられる）が開示されている。該特許の発明者らは、リシンの代わりにボツリヌ ス毒素を使用し得ると記載している。 ボツリヌス毒素は、既知の方法で、ボツリヌス菌を発酵槽内で増殖させ、次い で発酵混合物を採り、精製することによって、工業的に得ることができる。 神経筋症状の処置に通例用いられるＡ型のボツリヌス毒素は、現在複数の会社 から市販されている。例えば、英国のポート・プロダクツ社（Port Products Lt d．）から商品名「ディスポート（ＤＹＳＰＯＲＴ）」として、およびカルフォ ルニア州アーヴィン（Irvine）のアラーガン社（Allergan，Inc．）から商品名 「ボトックス（ＢＯＴＯＸ）商標）」として市販されている。 しかし、ボツリヌス毒素の注射に対する臨床的応答の低下を経験する患者があ るということがわかった。その一つの理由は、患者に、例えばＡ型ボツリヌス毒 素に対する中和抗体または免疫応答が生じているということである。また、免疫 応答の種類は、単なる中和抗体とは異なり得る。免疫応答は、以下のものを包含 する：（１）即時型局所的腫脹、発赤および痒疹の見られるアレルギー反応。全 身的インフルエンザ様症状をも伴い得る。（２）注射部位に、注射から４８〜７ ２時間後に腫脹および発赤の見られる遅延型過敏症。（３）患者がインフルエン ザ様症状を起こす血清病様応答。Ａ型に対するこれらのような免疫系反応の故に 、臨床的効果を持続するための複数の血清型による処置方法が必要である。 ボツリヌス毒素注射に対する臨床的応答低下を説明するのに、もう一つの仮説 を立てることができる。これは、ボツリヌス毒素の作用を妨害する他の剤（すな わち、アンギオテンシン転換酵素抑制剤である血圧降下剤、および他のエンドペ プチダーゼ抑制剤、アミノピリジン、アセチルコリンエステラーゼ抑制剤など） の相互作用を包含しない。応答低下の理由として考えられるのは、シナプス前コ リン作動性神経末端への毒素の神経結合における変化である。ガングリオシドの 変化により、毒素の結合力が低下し、取り込まれる毒素の量が減少し得る。また 、プロテアーゼの誘導によっても、細胞外環境またはニューロン内において毒素 分解が促進され得る。更に、ニューロンは、毒素のエキソサイトーシスに対する 作用を低下または排除するために、毒素の軽鎖の標的タンパク質のアミノ酸組成 を変化し得る。 本発明の目的は、Ａ型ボツリヌス毒素に次いで、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ 型ボツリヌス毒素を投与することによる、神経筋疾患および症状の新規処置方法 を提供することである。 発明の概要 本発明は、以下例示するような神経筋疾患または症状の患者を処置する方法を 提供する：斜視および他の眼運動の疾患、例えば、共同斜視、上下斜視、外直筋 麻痺、眼振、内分泌性ミオパシーなど；ジストニー、例えば限局性ジストニー（ 例えば痙性斜頸、書痙、眼瞼痙攣、口下顎骨ジストニーおよびその症状（例えば 歯ぎしり）、ウィルソン病、晩発性ジストニー、喉頭ジストニーなど）；他のジ ストニー、例えば振せん、チック、節状ミオクロヌス；痙縮、例えば慢性多発硬 化による痙性、異常膀胱調節をもたらす痙性（例えば、脊髄損傷患者におけるも の）、アニムス、背部痙攣、筋肉硬直など；緊張性頭痛；骨盤挙筋症候群；二分 脊椎、晩発性ジスキニジー；パーキンソンおよび四肢（限局性）ジストニー、お よび吃。本発明の方法は、前記疾患または症状の患者に、処置有効量のＡ型ボツ リヌス毒素に次いで、異なる血清型の神経毒、すなわち、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆお よびＧ型ボツリヌス毒素から成る群から選択する神経毒を投与することを含んで 成る。 前記神経筋疾患および症状の臨床的特徴は、ジャンコビックおよびブリンの前 掲書、並びにクイン（Quinn）のディスオーダーズ・オブ・ムーブメント（Disor ders of Movement）、アカデミック・プレス、１９８９に記載されている。これ らの文献を引用により本明細書の一部とする。 本発明は更に、前記ボツリヌス毒素の組成物であって、処置する患者の適当な 部位にボツリヌス毒素を注射するのに適した賦形剤中の組成物をも提供する。賦 形剤は、注射した毒素を局部に保持するための剤をも包含し得る。 本発明は更に、神経筋疾患または症状を処置する方法であって、ボツリヌス毒 素による最初の処置に対して臨床的応答の低下を経験している患者を処置する方 法をも提供する。 とりわけ、本発明の方法は、処置有効量の、ある血清型のボツリヌス毒素を、 それに対する臨床的応答の低下を患者が経験するまで投与し、その後、別の選択 した血清型のボツリヌス毒素を、処置有効量で患者に投与することを含んで成る 。 とりわけ、本発明の方法は、Ａ型ボツリヌス毒素による最初の処置と、その後 の、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ型から成る群から選択する別のボツリヌス毒素によ る処置とを含んで成る。 最初にＢ型ボツリヌス毒素で処置し、次いで、Ａ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ型から 成る群から選択する別の血清型のボツリヌス毒素で処置してもよい。 本発明の他の態様は、処置有効量の、ある選択した血清型のボツリヌス毒素を 、患者が中和抗体を産生するまで投与し、その後、別の血清型のボツリヌス毒素 を、処置有効量で患者に投与することを含んで成る。 詳細な説明 本発明に従って使用するボツリヌス毒素は、血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆお よびＧのボツリヌス毒素である。 ボツリヌス毒素の各血清型は、特異的な抗体を用い、免疫学的に異なるタンパ ク質として分類されている。例えば、ある抗体（抗毒素）が、Ａ型を認識（すな わち、Ａ型の生物学的活性を中和）するならば、その抗体はＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ またはＧ型を認識しないであろう。 ボツリヌス毒素はいずれも、亜鉛エンドペプチダーゼであると考えられるが、 ニューロン内での各血清型（例えばＡおよびＥ型と、Ｂ型と）の作用機序は異な ると考えられる。更に、毒素に対する神経表面「レセプター」は、血清型によっ て異なると考えられる。 ボツリヌス菌の生理学的分類を、第Ｉ表に示す。 前記毒素型は、ボツリヌス菌の適当な生理学的分類群からの選択によって調製 し得る。第Ｉ群の菌は通例、タンパク質分解性とされ、Ａ、ＢおよびＦ型のボツ リヌス毒素を産生する。第II群の菌は糖分解性で、Ｂ、ＥおよびＦ型のボツリヌ ス毒素を産生する。第III群の菌は、ＣおよびＤ型のボツリヌス毒素しか産生せ ず、多量のプロピオン酸を産生する点で、第Ｉ群および第II群の菌と区別される 。第IV群の菌は、Ｇ型神経毒しか産生しない。 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ型のいずれのボツリヌス毒素の調製も、前掲 のボツリヌム・ニューロトキシン・アンド・テタナス・トキシンの第１章、およ び／または該文献中に引用された文献に記載されている。また、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ 、ＦおよびＧ型のボツリヌス毒素は、クロストリジウム属の種々の菌からも得ら れる。現在、１４種のクロストリジウム属の菌が、病原性とみなされている。 病原性株の多くが、種々の病理学的徴候および症状に関与する毒素を産生する 。ボツリヌス毒素を産生する菌は、ヒト（Ａ）Ｂ、ＥおよびＦ型および動物（Ｃ およびＤ型のボツリヌス中毒から分離されている。それらは、より古い毒素に対 して生じた特異的な抗毒素（抗体）を用いて特徴付けられた。Ｇ型毒素は、土壌 中 に見出され、毒素産生性は低い。Ｇ型毒素は剖検片からも検出されているが、Ｇ 型ボツリヌス中毒がヒトに起こったという充分な証拠は無い。 概ね、ボツリヌス菌は、４つの生理学的分類群（Ｉ、II、III、IV）が認識さ れている。血清学的に特定の毒素を産生し得る菌が、複類の生理学的分類群に属 し得る。例えば、ＢおよびＦ型の毒素は、第Ｉ群または第II群の株が産生し得る 。更に、ボツリヌス神経毒を産生し得る他のクロストリジウム属の株［クロスト リジウム・バラティ（C．baratii）、Ｆ型；クロストリジウム・ブチリカム（C ．butyricum）、Ｅ型；クロストリジウム・ノビイ、Ｃ₁またはＤ型］が特定され ている。 好ましくは、毒素を筋肉内注射によって、痙縮筋の神経筋接合部の部分に直接 投与する。しかし、毒素を筋肉患部に直接投与し得る他の投与方法（例えば、皮 下注射）を、適宜採用し得る。毒素は、発熱物質不含有の滅菌水溶液または分散 液として、および滅菌溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末として供し 得る。 要すれば、浸透圧調整剤、例えば塩化ナトリウム、グリセロールおよび種々の 糖を加え得る。安定剤、例えばヒト血清アルブミンも加え得る。適当な薬学的に 許容し得る防腐剤、例えばパラベンで、製剤を防腐し得るが、製剤は防腐剤不含 有であることが好ましい。 毒素を、単位用量形態に調剤することが好ましい。例えば、毒素を、バイアル 内の滅菌溶液として、または適当な賦形剤（例えば注射用水）で再構成するため の凍結乾燥粉末の入ったバイアルもしくはサシェとして供し得る。 一態様においては、ボツリヌス毒素を、食塩および殺菌ヒト血清アルブミン（ 毒素を安定化し、非特異的吸着による損失を最小限にする）を含有する溶液に調 剤する。この溶液を滅菌濾過（０．２μフィルター）し、個々のバイアルに充填 し、減圧乾燥により滅菌凍結乾燥粉末とする。この粉末は、用時に防腐剤不含有 滅菌生理食塩液（塩化ナトリウム０．９％、注射用）を加えることによって再構 成し得る。 患者に投与する毒素の用量は、症状の重さ（例えば処置を要する筋肉群の数） 、 患者の年齢および体格、並びに毒素の効力によって異なる。毒素の効力は、マウ スに対するＬＤ₅₀値の倍数として表される。１単位（Ｕ）の毒素は、体重２０g の雌のスイス−ウェブスター（Swiss−Webster）マウス１８〜２０匹から成るマ ウス群の５０％を殺す毒素と当価であると定義される。 ヒトの処置に使用する用量は、注射する筋肉の量にほぼ比例する。通例、患者 に投与する用量は、患者１人当り１回の処置につき約１０００単位まで、例えば 約５００単位まで、好ましくは約８０〜４６０単位であるが、場合によってはよ り少ない用量またはより多い用量で投与してもよい。 本発明の製剤の使用に関して当業者には明らかなように、用量は変化し得る。 ポートン（Porton）から市販のＡ型ボツリヌス毒素であるディスポートは、１ng が４０Ｕを含有する。アラーガン社から市販のＡ型ボツリヌス毒素であるボトッ クスは、１ngが４Ｕを含有する。ボツリヌス毒素の効力、および作用の持続性の 故に、投与は頻繁には行われないであろう。 しかしながら結局は、毒素の投与量も投与頻度も、処置に携わる医師の判断で 決められ、毒素による効果と安全性との問題に帰することになるであろう。 本発明を以下の実施例によって更に説明するが、実施例は本発明を制限するも のではない。 各実施例において、ボツリヌス毒素を含有する滅菌溶液を、患者の適当な筋肉 に注射する。患者に対する総用量は、８０〜４６０Ｕの範囲である。筋肉群への 注射の前に、該筋肉群の解剖学的考慮を充分に行う。その目的は、神経筋接合部 が最も集合している部分がわかれば、そこに注射を行うということである。筋肉 をその動く範囲で動かしてみた時の針先の動きを観察することによって、筋肉注 射前に筋肉内での針の位置を確認する。患者の年齢、注射部位の数、および患者 により必要に応じて、全身麻酔、局所麻酔および鎮静を行う。本発明によると、 患者は最初の処置に対して臨床的応答の低下を経験するので、所望の結果を達成 するために、複数回の注射が必要である。また、注射する筋肉によっては、筋電 図法により導いた、微細な中空テフロンコーティング針を使用する必要があり得 る。 注射後、全身的または局所的副作用は無く、どの患者にも大きな局所的緊張低 下は見られないことがわかる。大部分の患者において、主観的にも、客観的に測 定しても、機能の改善が見られる。 実施例１ 晩発性ジスキニジーの処置における血清型Ａ、ＢおよびＦのボツリヌス毒素の 使用 抗精神病薬（例えばハロペリドール）による処置の結果起こった晩発性ジスキ ニジーの患者を、有効量のＡ型ボツリヌス毒素を医者の特定した筋肉に直接注射 することによって処置する。２〜４日後、晩発性ジスキニジーの症状、すなわち 口顔面ジスキニジー、アテトーゼ、ジストニー、舞踏病、チックおよび歪顔など は、顕著に軽減する。Ａ型ボツリヌス毒素の投与を続けると、臨床的応答の低下 が見られる。その後、有効量のＢ型ボツリヌス毒素を注射すると、晩発性ジスキ ニジーの症状の顕著な軽減が持続する。 実施例１（a） 実施例１の方法に従い、晩発性ジスキニジーの患者に、有効量のＡ型ボツリヌ ス毒素、次いで有効量のＣ型ボツリヌス毒素を注射する。同様の結果を得る。 実施例１（b） 実施例１の方法に従い、晩発性ジスキニジーの患者に、有効量のＡ型ボツリヌ ス毒素、次いで有効量のＤ型ボツリヌス毒素を注射する。同様の結果を得る。 実施例１（c） 実施例１の方法に従い、晩発性ジスキニジーの患者に、有効量のＡ型ボツリヌ ス毒素、次いで有効量のＥ型ボツリヌス毒素を注射する。同様の結果を得る。 実施例１（d） 実施例１の方法に従い、晩発性ジスキニジーの患者に、有効量のＡ型ボツリヌ ス毒素、次いで有効量のＦ型ボツリヌス毒素を注射する。同様の結果を得る。 実施例２ 痙性斜頸の処置におけるボツリヌス毒素の使用 痙性斜頸の男性患者（頸部筋組織に痙性または強直性の収縮が見られ、頭部の 常同異常彎曲があり、顎は一方向に回り、肩は頭の回る方に向かって上がってい る）を、約３００単位まで、またはそれ以上のＥ型ボツリヌス毒素（１〜４日間 活性を有する）を、ジストニーの頸部筋肉に注射することによって処置する。症 状が実質的に軽減し、患者が頭および肩を正常な位置に保つことが可能となった 後、患者は抗体を産生する。その後、患者にＢ型ボツリヌス毒素を注射すると、 症状の実質的な軽減が持続する。 本発明を有効に適用する様式を説明する目的で、神経筋疾患および症状を処置 するための本発明によるボツリヌス毒素血清型の使用を以上説明したが、多くの 変更が明らかに可能であるので、本発明は上記態様に制限されるものではなく、 本発明は請求の範囲に包含されるいずれの変更をも含むと理解すべきである。す なわち、当業者が行い得る変更はいずれも、請求の範囲に示される本発明の範囲 に包含されると理解すべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＢＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 カールソン、スティーブン・アール アメリカ合衆国92677カリフォルニア州ラ グナ・ニゲル、ハッピー・スパロー・レー ン29991番 (72)発明者 レオン、ジュディス・エム アメリカ合衆国92677カリフォルニア州ラ グナ・ニゲル、ランニング・ディアー・レ ーン29992番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．神経筋疾患または症状の患者を処置する方法であって、処置有効量の、あ る選択した血清型のボツリヌス毒素を、その投与に対する臨床的応答の低下を患 者が経験するまで投与し、その後、別の血清型のボツリヌス毒素を、処置有効量 で患者に投与することを含んで成る方法。 ２．最初に投与するボツリヌス毒素はＡ型であり、後に投与するボツリヌス毒 素は、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＦ型から成る群から選択するボツリヌス毒素である請求 項１記載の方法。 ３．最初に投与するボツリヌス毒素はＥ型であり、後に投与するボツリヌス毒 素は、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＦ型から成る群から選択するボツリヌス毒素である 請求項１記載の方法。 ４．神経筋疾患または症状の患者を処置する方法であって、処置有効量の、あ る選択した血清型のボツリヌス毒素を、患者が中和抗体を産生するまで投与し、 その後、別の血清型のボツリヌス毒素を、処置有効量で患者に投与することを含 んで成る方法。 ５．最初に投与するボツリヌス毒素はＡ型であり、後に投与するボツリヌス毒 素は、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ型から成る群から選択するボツリヌス毒素である 請求項４記載の方法。 ６．最初に投与するボツリヌス毒素はＢ型であり、後に投与するボツリヌス毒 素は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ型から成る群から選択するボツリヌス毒素で ある請求項４記載の方法。 ７．神経筋疾患または症状の患者を処置する方法であって、処置有効量のＡ型 ボツリヌス毒素を、患者が中和抗体を産生するまで投与し、その後、別の血清型 のボツリヌス毒素を、処置有効量で患者に投与することを含んで成る方法。 ８．別の血清型は、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ型のボツリヌス毒素を包含する請 求項７記載の方法。 ９．神経筋疾患または症状の患者を処置する方法であって、処置有効量のＢ型 ボツリヌス毒素を、患者が中和抗体を産生するまで投与し、その後、Ｂ型以外の 血清型のボツリヌス毒素を、処置有効量で患者に投与することを含んで成る方法 。 １０．Ｂ型以外の血清型は、Ａ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ型のボツリヌス毒素を包 含する請求項９記載の方法。