JPH08512019A

JPH08512019A - 免疫反応剤およびキレート化された放射性核種からなるｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド複合体を用いる腫瘍ターゲッティング

Info

Publication number: JPH08512019A
Application number: JP6520313A
Authority: JP
Inventors: スノー、ロバート・アレン; ブラック、クリストファー・ダグラス・バリアント
Original assignee: ザ・ウエルカム・ファウンデーション・リミテッド
Priority date: 1993-03-10
Filing date: 1994-03-10
Publication date: 1996-12-17
Also published as: WO1994020523A1; EP0691981A1; AU6402594A; CA2157902A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、非放射性ターゲッティング免疫試薬であって、免疫反応性基、１以上の非自己会合性Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列、および１以上の結合基を含有するもの、並びに放射性ターゲッティング免疫試薬であって、非自己会合性のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の１以上のフラグメントと配列において相補的であり、該フラグメントとハイブリダイズすることができるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列、１以上のキレート剤、１以上の結合基、および１以上の放射性核種を含有したもの向けられる。本発明はまた、１以上の上記免疫試薬および薬学的に許容しうる担体を含有する薬学的組成物に向けられる。本発明は更に、患者の疾患部位の治療およびイメージングのための方法に向けられる。

Description

【発明の詳細な説明】免疫反応剤およびキレート化された放射性核種からなるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド複合体を用いる腫瘍ターゲッティング本発明の分野本発明は、逐次ターゲッティングおよび免疫試薬組成物の輸送であって、第一の非放射性ターゲッティング免疫試薬および第二の放射性輸送薬を具備した腫瘍をターゲットにした逐次輸送システムによる癌の治療および診断用のイメージングにおける利用が特に見出されるものに関する。本発明はまた、腫瘍の治療および診断用のイメージングのための分岐された腫瘍ターゲッティング（bifurcated tumor targeting）ベクターおよび輸送ベクターに、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、相補的Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、およびキレート体を結合する新規な方法に関する。本発明の背景診断用のイメージングおよびターゲッティングによる治療的な応用に使用される現在利用しうる種々の放射性標識された免疫反応性タンパクおよび方法は、幾つかの不利益を有している。例えば、放射性同位体を含有する免疫反応性タンパクを含めた、現在利用しうる種々の放射性医薬を用いる放射性免疫療法および診断用のイメージングは、これらの放射性医薬が、標的でない正常組織に結合しうるので決して最適とはなり得ない。この結合は、治療的な応用の間に正常組織に対して望まない毒性を生じさせ、診断用のイメージングへの応用においては高いバックグラウンドシグナルを生じさせうる。複合製剤（conjugate preparation）内のタンパクと放射性成分の非能率的な共有結合は、放射活性な成分が放出され、この後該成分が健康な組織に分布されうるので、他の問題となりうる。現在利用しうる放射性同位体を含有する免疫反応性タンパクの血漿半減期が長く、体内からの放射性同位体の排出がゆっくりであるため正常細胞の被爆が長引き、放射線の影響によるダメージを引き起こし得、他の正常な疾患にかかっていない体内の組織、特にこれらの組織および放射線のダメージに最も敏感な細胞、例えば骨髄の幹細胞および胃腸管において受け入れらない毒性効果をもたらしうる。免疫反応性タンパクと結合しうるイオン性の放射性同位体の数は、キレーションに利用しうる部位の数によって制限されるが、該タンパクと複合体を形成したキレート剤の数を増加することによって達成されうる数の増加は、該タンパクの免疫反応性の減少をもたらす。これは、該タンパクに結合しうるこのようなキレート剤の数を制限しうる。免疫反応性タンパクに結合しうるキレート剤の数は、例えばキレート剤を結合する場合の使用に適したアミノ基のような利用しうる基の数、および該タンパクを高度に派生させた場合に、ハプテン化された宿主免疫系によって認識されうるこのように修飾されたタンパクの潜在的な免疫原性によっても制限される。本発明の目的は、現在利用しうる放射性標識された免疫反応性タンパクの上記不利益の幾つかを克服することにある。デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）の形態での核酸は、タンパクと酵素を細胞合成するための遺伝情報をコードし、転写する。天然に存在する核酸は、ＤＮＡでは、２’−デオキシアデノシン（ｄＡ）、２’−デオキシグアノシン（ｄＧ）、２’−デオキシシチジン（ｄＣ）、およびチミジン（Ｔ）より構成され、ＲＮＡでは、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、およびウリジン（Ｕ）より構成される。２’−Ｏ−メチルリボシル基を含有する核酸、並びにＮ⁴，Ｎ⁴−ジメチルアデニンおよびＮ⁷−メチルグアニジンを含有する核酸のような天然に存在する修飾された核酸は、メッセンジャーＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ、およびリボソームＲＮＡないに見出される。ヌクレオシド内ホスホジエステル結合は、ＲＮＡおよびＤＮＡ内において、それぞれ、一方のヌクレオシドのＤ−リボースまたはＤ−デオキシリボースの糖部分の３’ −ヒドロキシル基の酸素位置で、他方のヌクレオシドのＤ−リボースまたはＤ− デオキシリボースの糖部分の５’−ヒドロキシル基の酸素にヌクレオチドを結合する。核酸の別々の鎖は、ヌクレオシドプリンおよびピリミジン塩基の相補対間、即ちＤＮＡではアデニンとチミジンおよびグアニンとシトシン、並びにＲＮＡではアデニンとウラシルおよびグアニンとシトシンで形成される水素結合を介してお互いに相互作用する。２つの別々のオリゴヌクレオチド鎖（strands）または一本鎖の２つの領域における塩基の配列が、お互いに相補的である場合、該相補的配列は、相補的な塩基対間の水素結合を介してお互いにハイブリダイズすることができ、Ｂ−タイプのコンホーメーションを有する右巻きの二重螺旋（right- handed double he-lix）を形成する。この螺旋の２つのホスフェート−リボースエステルバックボーンは逆平行である。天然に存在するＤＮＡでは、各ヌクレオシドユニットは、Ｄ−エナンチオマーである。この構造は、Ｒ₁がＨであり、「塩基」がアデニン、グアニン、チミン若しくはシトシン部分を表す構造Ｉで概略図として表される１’−（ｂ）、３’ −（ａ）、および４’−（ｂ）位置で置換基を有するＤ−デオキシリボース環のキラリティーで定義される。天然に存在するＲＮＡでも、各ヌクレオシドユニットはＤ−エナンチオマーであり、その構造は、Ｒ₁がＯＨであり、「塩基」がアデニン、グアニン、ウラシル若しくはシトシン部分を表す構造Ｉで概略図として表される１’−（ｂ）、２’−（ａ）、３’−（ａ）、および４’−（ｂ）位置で置換基を有するＤ−リボース環のキラリティーで定義される。天然に存在するＤＮＡおよびＲＮＡの両方とも、リン酸ジエステルと塩基はキラル中心を含有しない。 P．S．Miller，Bioconjugate Chem．1990，1，187-191に記載されているように、天然型に合わせて形成されたＤ−エナンチオマーで構成された、合成によって調製されたオリゴヌクレオチドは、核酸を重合する酵素のプライマーとして、組換えＤＮＡ技術によってタンパクを調製するための人工遺伝子を構築する場合のシントンとして、および細胞性核酸配列を検出し、特徴づけるための診断用プローブとして使用されている。加えて、合成によって調製されたオリゴヌクレオチドは、生きた細胞内での遺伝子発現の制御に使用するため、およびウイルスの複製の阻害および癌の治療における治療薬として研究されている。これらの応用は、合成オリゴヌクレオチドと天然のＤ−エナンチオマーオリゴヌクレオチドの標的配列との特異的な相補的結合特性に負っている。天然のように配列されたＤ−エナンチオマーにより構成された合成で調製されたオリゴヌクレオチドは、種々の方法で得られ、これらのうち、現在最も有効な方法には、E.Uhlmann and A．PeymanによりChemical Reviews，1990，90，544で開示されたような、ホスホルアミダイト中間体を経る固相合成、およびＨ−ホスホネート中間体を経る固相合成が含まれる。ホスホルアミダイト法では、Ｄ−エナンチオマーの伸長されるＤＮＡオリゴマー鎖であって、これらの塩基のエキソ環アミン基がアミド保護基を有しており、且つ該オリゴマー鎖が固相支持体に結合されているものの５’−ヒドロキシ基が、触媒としての１Ｈ−テトラゾールの存在下で、活性化されたＤ−ヌクレオシド５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’ −（２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイトと反応する。一般に使用される保護基には、アデニンおよびシトシンのエキソ環アミノ基の保護基としてベンゾイル基、並びにグアニンのエキソ環アミノ基のの保護基としてイソブチル基がある。反応されない何れの５’−ヒドロキシル基は、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンの存在下で無水酢酸と反応することによってアセテート基で塞がれる。次に得られたホスファイトをヨウ素で酸化し、リン酸トリエステルを形成する。５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基をジクロロ酢酸を用いる酸性条件下で除去し、この一連の反応を、他の活性化されたＤ−ヌクレオチド５ ’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３−（２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイトを用いて繰り返す。この一連の反応の終点で、オリゴヌクレオチドのアミド保護基を除去し、水酸化アンモニウムで処理することによって支持体からオリゴヌクレオチドを開裂する。次にオリゴヌクレオチドを、沈殿、電気泳動、またはクロマトグラフィーのような方法で精製または単離する。合成によるＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドのin vivoでの適用の多くは、細胞外および細胞内の両方で遭遇するヌクレアーゼによってオリゴマーが破壊されることにより制限される。J.Goodchildによって、Bioconjugate Chem.1990，1，165において概説されているように、ヌクレアーゼの活性に対して耐性をを導入するための戦略には、ヌクレオシド塩基の修飾、並びにポリマーバックボーンのホスフェートおよびリボース成分の修飾が含まれる。これらは全て、修飾されたオリゴヌクレオチドの活性を維持し、天然に存在するＤ−エナンチオマーのＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズし、あるいはＤ−エナンチオマーを唯一認識する酵素と結合するように行われる必要がある。構造IIで示されるα−アノマーを形成するように１’−リボース部位での変換を通して達成されうるようなオリゴヌクレオシドキラリティー単一の修飾によるＤ−オリゴヌクレオチドの特性の影響が、Bloch et alによってGene，1988,72,3 49で研究されている。彼らは、α−アノマーのＤＮＡが、相補的なベーターアノマーのＲＮＡ、即ち天然に存在するエナンチオメリックオリゴマーとハイブリダイズし、ａ：ｂＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを形成し、該ハイブリッドがヌクレアーゼに耐性であることを見出した。 ThuongおよびChassingolは、Tetrahedron Letters，1988，29，5905において、２−メトキシ−６−クロロ−９−（５−ヒドロキシペンチルアミノ）アクリジンに５’−ホスフェートで共有結合的に結合したａ−ｄ−Ｔ、ａ−ｄ−Ｃ、およびａ−ｄ−Ａを含有するオリゴ−ａ−デオキシヌクレオチドのシアノエチルホスホルアミダイトシントンを用いる固相合成を報告した。アクリジン部分を持たない類似のオリゴ−ａ−デオキシヌクレオチドが、ヌクレアーゼに耐性であること、およびｂ−デオキシヌクレオチドとのハイブリッドよりも安定である天然のＤ −ＲＮＡとのハイブリッドを形成することが報告されている。Morvan et alは、 Nucleic Acid Research，1988，16，833において、ａ−ｄ−Ｔ、ａ−ｄ−Ｃ、ａ −ｄ−Ｇ、およびａ−ｄ−Ａを含有するオリゴ−ａ−デオキシヌクレオチド（これらは、二重螺旋のハイブリッド、またはパラレルおよびアンチパラレルな方向性をそれぞれ持った相補的なａおよびｂとの二本鎖を形成する。）の製造を報告した。これらの二本鎖は、特異的なWatson-Crick型塩基対の特異性を保持しており、この異種二本鎖はＢ −ＤＮＡファミリーに属することが示される。これらはまた、対応する天然に存在するｂｂ−ＤＮＡ二重螺旋と比較した場合、より高い熱安定性を示した。しかし、再度繰り返すが、標的のオリゴマーは天然に存在するＤ−オリゴマーであった。構造ＩにおいてＤ−エナンチオマーの全てのキラル部位の完全な反転は、鏡像、即ち構造IIIで表される天然に存在しないＬ−エナンチオマーを提供する。キラルなエナンチオマーまたはＤ−とＬ−エナンチオマーを識別しうる酵素のようなキラルな試薬が存在しない場合は、Ｌ−エナンチオマーは、化学的な反応性においてＤ−エナンチオマーと同一である。Urata et alは、J．Am．Chem．Soc．1 991，113，8174において、（２−シアノエチルホスホルアミダイト法を経る）合成と、自己相補的なＬ−ＤＮＡオリゴマーの二本鎖、Ｌ−ｄ（ＣＧＣＧＣＧ）の特性を報告し、この特性をこれらの鏡像体、即ち天然のＤ−ｄ（ＣＧＣＧＣＧ）オリゴマーの特性と比較した。非天然の全てＬ−体の二本鎖は、ヌクレアーゼｐ −１による消化に耐性を有するが、天然の全てＤ−体の二本鎖は、その成分であるＤ−ヌクレオチドと５’−末端デオキシシチジンに迅速に分解される。予想されるように、ＤＤ−およびＬＬ−二本鎖は両方とも、同一のＨＰＬＣ保持時間を示し、これらの円偏光二色性（ＣＤ）スペクトルは、お互いに鏡像となる。０．１ＭＮａＣｌ中では、Ｄ−エナンチオマーは、標準のＢ型のＣＤプロフィールを示すが、Ｌ−エナンチオマーは、全波長で同じ大きさであるが反対の符号を示した。これは、左巻き（left-handed）二重螺旋コンホーメーションを有する鏡像のＢ型螺旋が存在することを示す。４ＭＮａＣｌ中では、Ｄ−エナンチオマーは左巻きＺ型のプロフィールを示すが、Ｌ−エナンチオマーは、全波長で同じ大きさであるが反対の符号を示した。これは、右巻き二重螺旋コンホーメーションを持った鏡像のＺ型が存在することを示す。全てのＤ−二本鎖および全てのＬ−二本鎖型の両方のスペクトルは、塩濃度の関数として同じＢからＺへの配座遷移（反対の符号を有する。）を示し、更に低い塩濃度および高い塩濃度の両方で、同じ温度依存性を示す。Ｄ−およびＬ−ＤＮＡは、同じタイプで同じ強さの水素結合と塩基の積み重ね相互作用を有すること、およびＬ−ＤＮＡの構造がＤ−ＤＮＡの構造の正確な鏡像となることが結論づけられる。この全てのＬ−エナンチオメリックオリゴマー（これは自己相補的である）は、異なった天然のＤ−または非天然のＬ−エナンチオマーの何れかをターゲッティングするために使用することはできない。 Fujimori et alは、Nucleic Acid Research，1990，22，97において、９−（２−デオキシ−ｂ−Ｌ−エリスロ−ペンタフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミン、Ｌ−ｄＡ、および６量体Ｌ−ＤＮＡ、Ｌ−ｄ（ＡＡＡＡＡＡ）の合成を報告した。彼らは、Ｌ−ｄ（ＡＡＡＡＡＡ）が、ウシ脾臓ホスホジエステラーゼに耐性であるが、Ｄ−ｄ（ＡＡＡＡＡＡ）は完全に分解されることを観測した。彼らはまた、Ｌ−ｄ（ＡＡＡＡＡＡ）が、天然のＤ−ＲＮＡエナンチオマー、Ｄ− ポリ（Ｕ）と複合体を形成し、この複合体は、エナンチオメリックな天然のＤ− ｄ（ＡＡＡＡＡＡ）およびＤ−ポリ（Ｕ）間で形成されたものよりも相対的に弱いことを示した。非天然のＬ−ｄ（ＡＡＡＡＡＡ）と天然のＤＮＡエナンチオマーＤ−ポリ（Ｔ）との間では複合体は全く形成されなかった。これらの結果は、Ｌ−エナンチオメリックＤＮＡは、ＤＮＡから相補的なＲＮＡを識別する能力を有するが、非天然のＬ −ＤＮＡ：Ｄ−ＲＮＡ複合体は、対応する天然のＤ−ＤＮＡ：Ｄ−ＲＮＡ複合体とほぼ同程度の強さを有しないことを示唆した。Ｌ−ＤＮＡは、in Vitroで天然のエナンチオメリックＤ−ＲＮＡとハイブリダイズでき、安定なヌクレアーゼ耐性を有していることが示されるが、実際には、このような標的Ｄ−ＲＮＡとの二本鎖形成は、Ｌ−ＤＮＡが完全なＤ−ＲＮＡを見出すために少なくとも１つの細胞膜に交差する必要があるのでin vivoでは容易に達成できない。更に、天然のＤ−ＲＮＡは、天然に存在するヌクレアーゼ酵素の存在下では相対的に寿命が短い。本発明の概要本発明は、非放射性ターゲッティング免疫試薬であって、腫瘍抗原認識部位、非自己会合性のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を含有する１以上のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、および１以上の結合基（link lng groups）を含有するものに向けられる。本発明はまた、放射性ターゲッティング免疫試薬であって、非自己会合性のＬ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の１以上のフラグメントと配列において相補的であり、且つ該１以上のフラグメントとハイブリダイズできるＬ− エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を具備したＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、１以上のキレート剤、１以上の結合基および１以上の放射性核種を具備したもの二向けられる。本発明はまた、上記１以上の免疫試薬および薬学的に許容しうる担体を含有する薬学的組成物に向けられる。更に本発明は、患者の、腫瘍部位のような疾患部位を治療およびイメージングするための方法に向けられる。前記方法は、効果的な量の上記非放射性ターゲッティング免疫試薬を患者に投与し、続いて効果的な時間間隔を置いて効果的な量の上記放射性ターゲッティング免疫試薬を投与することを具する。本発明は、従来のターゲッティング免疫試薬に比べて多くの利点を有する。例えば、非放射性ターゲッティング免疫試薬はin vivoで腫瘍部位に蓄積され得るが、正常組織部位には蓄積されない。非放射性ターゲッティング免疫試薬のin vivoでの残存半減期は、腫瘍部位でのその蓄積を可能にする程度に十分長い。放射性ターゲッティング試薬のin vivoでの残存半減期は、非放射性ターゲッティング免疫試薬の残存半減期よりも短い。非放射性ターゲッティング試薬が蓄積した腫瘍にハイブリダイズしない一部の放射性ターゲッティング試薬は、患者から容易に排出される。放射性核種によって直接に標識することによって、または放射性核種を含有するキレート剤によってターゲッティング免疫試薬を同程度に修飾することに関しては、ターゲッティング免疫試薬あたりの修飾部位あたりの放射性核種の数の増加が観測されうる。非放射性ターゲッティング免疫試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの断片および放射性ターゲッティング試薬のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの断片がin vitroおよびin vivoでハイブリダイズされうる。非放射性ターゲッティング免疫試薬および放射性免疫試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、異性体の相補的に配列された天然に存在するＤ−エナンチオメリックオリゴマーとハイブリダイズしないであろう。非放射性ターゲッティング免疫試薬および放射性ターゲッティング試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ活性に対して安定である。非放射性ターゲッティング免疫試薬および放射性ターゲッティング試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、並びに該相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド間で形成されるハイブリッドは、異性体のＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドへの結合に特異的である酵素と結合しないであろう。非放射性ターゲッティング免疫試薬および放射性ターゲッティング試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド間で形成されたハイブリッドは、ヌクレアーゼ活性に対して安定である。非放射性ターゲッティング免疫試薬および放射性ターゲッティング試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、自己ハイブリダイズしない。非放射性ターゲッティング免疫試薬および放射性ターゲッティング試薬は、広範囲のスペーシング基（spacing groups）、結合基、およびキレート基、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列並びに放射性核種を含有しうる。非放射性ターゲッティング免疫試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、スペーシング基によってタンデムに結合されうるＬ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を包含しうる。ここで、各々のＬ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、放射性ターゲッティング試薬の断片とハイブリダイズしうる。非放射性ターゲッティング免疫試薬の相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは５’−アミンまたは３ ’−アミンのような５’−若しくは３’−置換基の何れかによって抗体と結合されうる。これらの試薬は、腫瘍に特異的であり、本発明に従って、広範囲の組成物が調製されうる。本発明の特に有利な点は、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の長さとスペーシング基が、相補的な２つの放射性ターゲッティング試薬のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を、隣接したタンデムに結合された非放射性ターゲッティング免疫試薬のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を包含する一本のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを含む鎖にハイブリダイズする場合に、このような２つの放射性ターゲッティング部分の配列の最も近い末端基がお互いに直行するように（これは、二重鎖の螺旋でこれらの相対的な空間配置がこのように形成されるためである。）選択されうることである。本発明の他の有利な特徴は、以下の好ましい態様の説明を参照することでより容易に明らかになるであろう。好ましい態様の説明本発明は、治療用および診断のイメージング用の組成物および方法に有用性を有する生体複合体を開示する。本発明は更に、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を、キレート剤、好ましくはキレート剤を含有するターピリジン（terpyridine）に結合することによって、および該配列をタンパク、抗体、および受容体のような免疫反応試薬と結合することによって、生体複合体を製造する新規な方法を開示する。特に、本発明は、治療用および診断のイメージング用の組成物および方法に特に有効性が見出される逐次ターゲッティングに有用であり、新規な放射性免疫試薬組成物の輸送性を増幅させた新規な生体複合体を開示する。より特別には、本発明は、腫瘍抗原認識部位、非自己会合性のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を含有する１以上のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、および１以上の結合基を含有するターゲッティング免疫試薬の製造および使用を開示する。これらのターゲッティング免疫試薬は、前記非会合性のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの１以上のフラグメントに配列において相補的であり、該１以上のフラグメントとハイブリダイズできるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、１以上の結合基、およびこれらと結合した１以上の放射性核種を含有する放射性逐次ターゲッティング試薬と反応する。最も好ましくは、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、天然のＤ−デオキシリボヌクレオチドのＬ−エナンチオマーである。好ましい態様では、上記ターゲッティング免疫試薬は、構造IVによって表される部分を含有する化合物を形成する。但し、Ｚは、免疫反応性タンパクの残基である；Ｌ_zおよびＬ_Qは、独立に化学結合若しくは結合基である；Ｉは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドであって、前記隣接した配列が、１以上の同一の隣接した配列のファミリーのメンバーを含み、前記ファミリーの個々の同一物が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するものであるが、前記Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの６以上の隣接した配列が、構造IV内の何れの位置の六以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのいずれの他の隣接した配列ともハイブリダイズしないという条件がある；Ｑ_Iは、スペーシング基である；ａは、０または１から約６までの整数である；Ｉ_iは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドであり、その内の隣接した配列がＩの一部分を含有するものである；Ｅは、末端キャッピング基（end capping group）である；ｐは、１から約１０までの整数である。他の好ましい態様では、上記ターゲッティング試薬は、構造Ｖで表される部分を含有する。但し、ｃＩは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列であって、前記隣接した配列が、同一の隣接した配列のファミリーの１以上のメンバーを含み、前記ファミリーの個々の同一物が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するものであり、前記同一物のＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列が、共に投与されうるターゲッティング免疫試薬内の一連のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドのメンバーのヌクレオチド配列に相補的であり、前記相補的なＬ− エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの６以上のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列が、構造Ｖ内の何れの位置の六以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのいずれの他の隣接した配列ともハイブリダイズしないものである；Ｑ_cIは、スペーシング基である；Ｌ₁、Ｌ₂、およびＬ₃は独立に化学結合若しくは結合基である；Ｗ₁、Ｗ₂、およびＷ₃は、各々キレート基の残基である；Ｍ₁、Ｍ₂、およびＭ₃は、＋１と等しいか、またはこれより大きい酸化状態を有する元素を包含し、Ｍ₁、Ｍ₂、およびＭ₃の少なくとも１つが放射性核種である；ｘ、ｙ、およびｚは、独立にゼロまたは１であるが、ｘ、ｙ、およびｚの少なくとも１つが１であるという条件が付く；およびｗおよびｂは独立にゼロまたは１から約４の整数である。ここで使用されるＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットは、天然に存在する異性体であるＤ−エナンチオマーヌクレオチドユニットの鏡像として定義される。Ｌ−エナンチオメリックヌクレオシドは、天然に存在する異性体であるＤ−エナンチオメリックヌクレオシドの鏡像として定義される。更に、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、天然に存在する異性体であるＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の鏡像として定義される。Ｌ−エナンチオメリックヌクレオシドの例を以下に説明するが、この例には限られない。Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチド中間体からＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを合成する方法は、異性体であるＤ−エナンチオメリックヌクレオチド中間体から鏡像であるＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを合成する場合に使用される方法と同一である。このような方法の例には、Leroy B.To wnsendによって編集された"Chemistry of Nucleosides and Nucleotldes"，Plen um Press，N．Y.，1988に開示された方法が含まれる。このような方法によるＬ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの合成は、Ｌ−エナンチオメリックヌクレオシドおよびヌクレオチド誘導体のようなＬ−エナンチオメリック試薬の使用を必要とする。種々のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドの調製は、Robins，M．et al(1970)，J.Org.Chem.，35，p636-639；Holy，A.(1972 )，Coll．Czechoslov．Chem．Commun.，37，p4072-4087；Visser，G．et al(199 6)，Rec．Travaux Chim．Pay-Bas，105/12p528-537；Anderson，D．et al(1984) ，Nucleos1des and Nucletides，3/5，p499-512；Uhlmann，E.et al(1990)，Che m．Review,(1990)，90/4 p543-584；Smejkal，I．et al(1964)，Coll．Czechosl ov．Chem．Commun.，29，p2809-2813などに詳述されている。オリゴヌクレオチドの合成で当分野で公知の方法のうち、本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを合成する好ましい方法には、Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチドホスホルアミダイト中間体（これは、この中間体内の水酸基に保護基を含有している。）を用いる固相合成が含有される。リボヌクレオシド部分およびデオキシリボヌクレオシド部分の５’−ヒドロキシル基の保護は、好ましくは、例えばものメトキシトリチル基（これ以後しばしばＭＭＴ基と称する。）またはジメトキシトリチル基（これ以後しばしばＤＭＴ基と称する。）のような酸で遊離しうるトリチル基を用い、相当するトリチルクロライドを使用して行われる。このようなトリチル保護された５’−ヒドロキシル基の脱保護は、例えば水中の酢酸、ジクロロメタンのような溶媒中のクロロ酢酸、またはクロロホルム若しくはメタノールのような溶媒中のベンゼンスルホン酸のような酸を試薬として用いて行われることが好ましい。リボ核酸部分の２’−ヒドロキシル基の保護は、例えばｔ−ブチルジメチルシリルクロロシラン（これは、リボシル２’−ヒドロキシル基と反応し、ｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを形成する。）ようなシリルクロライドで行われることが好ましい。このようなｔ−ブチルジメチルシリルエーテルの脱保護は、例えばメタノールのような溶媒に溶解された、例えば水酸化ナトリウムで処理することによって達成しうる。好ましいＬ−エナンチオメリックヌクレオチドは、Ｌ−２−デオキシリボヌクレオチドであり、好ましいＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、オリゴ−Ｌ−２−デオキシリボヌクレオチドである。本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴ−Ｌ−デオキシリボヌクレオチドの合成に有用なＬ−エナンチオメリックデオキシリボヌクレオチドの誘導体は、例えば化合物１から５の誘導体のようなＬ−エナンチオメリックデオキシリボヌクレオシドであって、各々が、例えばジメトキシトリチル（ＤＴＭ）基で保護された５’−ＯＨを有しており、該Ｌ− エナンチオメリックデオキシリボヌクレオシドの各々が、例えば２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホリルクロライドと処理され、相当する３’− （２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイトを生じることによって、オリゴヌクレオチドのホスフェート結合形成に対して３’−ＯＨで活性化されているものである。これらは、例えば固相自動ＤＮＡ合成機でオリゴ −Ｌ −デオキシリボヌクレオチド部分を合成するために利用される。本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシド部分の合成に使用するのに適した、保護された２’−デオキシ−Ｌ−アデノシン３’ −Ｏ−ホスホルアミダイト誘導体Ａ１０を調製する好ましい方法を、スキーム１に概説した。１−Ｏ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルイル−２−デオキシ− Ｌ−エリスロ−ペントフラノース（スキーム１のＡ２）は、Smejkal，I．et al( 1964)，Coll．Czechoslov．Chem．Commun.，29，p2809-2813に開示された方法に従って、ｐ−トルオイルクロライドとメタノールと処理することによってＬ−アラビナール（Ａ１）から調製される。Ａ２と２，６−ジクロロプリン（Ａ３）の縮合によって、２，６−ジクロロ−９−（３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２ −デオキシ−アルフア−Ｌ−エリスロ−ペンタフラノシル）プリン（４Ａ）を得る。Ａ４をメタノールとアンモニアで処理し、６位でプリンを選択的にアミノ化し、同時に３’−および５’−位でアセチル化されたヒドロキシル基を脱保護する。残りの塩素を水素化分解によって除去し、所望のＬ−ヌクレオシド、Ｌ−ｄＡ（Ａ６）を得る。次に、Ａ６のエキソサイクリックなアミンをベンゾイルクロライドを用いるジアシル化によって保護し、Ａ７（これは、保護されたアミンに加えて、２つのベンゾエートエステルを含んでいる。）を得る。ベンゾエートエステルを、水酸化ナトリウム水溶液でケン化することによって除去し、Ａ８を得る。次に、このジオールをジメトキシトリチルクロライド（アルドリッチケミカルカンパニーより入手可能である。）で処理し、５’−位がＤＭＴエーテル化されたＡ９を得る。次に、Ａ９を２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト（アルドリッチケミカルカンパニーより入手可能である。）で処理し、Ａ１０、即ち所望の２つの位置が保護された５’−ジメトキシトリチル−２’−デオキシ−Ｌ−アデノシン３’−Ｏ−２−シアノエチルホスホルアミダイトを得る。Ａ１０は、本発明の構造IVおよび構造Ｖの構成要素であるＬ−オリゴヌクレオチド配列の合成の中間体として使用される。このような配列の製造は、異性体であるＤ−オリゴヌクレオチドを合成および精製するために、製造者によって示された手順を用いて、例えば自動化されたオリゴヌクレオチド合成機を用いて行われうる。スキーム１保護されたＬ−デオキシアデノシンホスホルアミダイトの製造本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴ−Ｌ−デオキシリボヌクレオチド材料に使用するのに適した、保護された２’−デオキシ−Ｌ−グアノシン３’−Ｏ− ホスホルアミダイト誘導体、Ｇ８を調製する好ましい方法を、スキーム２に概説した。１−Ｏ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルイル−２−デオキシ−Ｌ−エリスロ−ペントフラノース（スキーム１のＡ２）を、Smejkal，I．et al(1964) ，Coll．Czechoslov．Chem．Commun.，29，p2809-2813に開示された方法に従って、ｐ−トルオイルクロライドとメタノールと処理することによってＬ−アラビナール（Ａ１）から調製する。メチルアセタール（Ａ２）を希塩酸で加水分解し、ヘミアセタール（Ｇ２）を得る。これを無水酢酸でアセチル化し、１−アセチル３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルイル−ベータ−Ｌ−エリスロ−ペントフラノース（Ｇ３）を得る。Ｇ３と２−フルオロ−６−ベンジルオキシプリン（Ｇ４）を縮合することによって、Ｇ５を得、次いでこれをアルコール性アンモニアで処理し、所望の生成物（Ｇ６）（これはクロマトグラフィーで精製される。）を得る。Ｇ６の６−ベンジル保護基を、水酸化アンモニウム中で、パラジウム −炭で水素化分解することによって除去し、２−アミノ−９−（２−デオキシ− Ｌ−エリスロ−ペントフラノシル）プリン−６−オン（Ｇ７；Ｌ−ｄＧ）を得る。次に、Ｇ７のエキソサイクリックな２−アミノ基をイソブチリルクロライドでアセチル化することによって保護し、５’−ヒドロキシル基を、ジメトキシトリチルクロライドを用いてＤＭＴエーテルとして保護し、３’−ヒドロキシル基を２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイトで処理し、Ｇ８、即ち所望の２つの位置で保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’ −デオキシ−Ｌ−グアノシン３’−Ｏ−２−シアノエチルホスホルアミダイトを得る。Ｇ８は、本発明の構造IVおよび構造Ｖの構成要素であるＬ−オリゴヌクレオチド配列の合成の中間体として使用される。このような配列の製造は、異性体であるＤ−オリゴヌクレオチドを合成および精製するために、製造者によって示された手順を用いて、例えば自動化されたオリゴヌクレオチド合成機を用いて行われうる。スキーム２保護されたＬ−デオキシグアノシンホスホルアミダイトの製造本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴ−Ｌ−デオキシリボヌクレオチド材料に使用するのに適した、保護された２’−デオキシ−Ｌ−ウリジン３’−Ｏ− ホスホルアミダイト誘導体、Ｕ７を製造する好ましい方法を、スキーム３に概説した。Ｌ−アラビノース（Ｕ１）をシアナミドと反応し、２’−アミノ−１，２ −オキサゾリン（Ｕ２）を得、これをメチルプロピオレート（Ｕ３）で処理してアンヒドロ−Ｌ−ウリジン（Ｕ４）を得る。アンヒドロ誘導体Ｕ４を、ＨＢｒで開環し、２’−ブロモ−ヌクレオシド（Ｕ５）を得、これを触媒水素添加し、２−デオキシ−Ｌ−ウリジン（Ｕ６）を得る。Ｕ６の５’−ヒドロキシル基を、ジメトキシトリチルクロライドを用いてＤＭＴエーテルとして保護し、３’−ヒドロキシルを２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイトと処理し、Ｕ７、即ち所望の、保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシ−Ｌ−ウリジン３’−Ｏ− ２−シアノエチルホスホルアミダイトを得る。Ｕ７は、本発明の構造IVおよび構造Ｖの構成要素であるＬ−オリゴヌクレオチド配列の合成の中間体として使用される。このような配列の製造は、異性体であるＤ−オリゴヌクレオチドを合成および精製するために、製造者によって示された手順を用いて、例えば自動化されたオリゴヌクレオチド合成機を用いて行われうる。スキーム３保護されたＬ−デオキシウリジンホスホルアミダイトの製造本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴ−Ｌ−デオキシリボヌクレオチド材料に使用するのに適した、保護されたＬ−チミジン３’−Ｏ−ホスホルアミダイト誘導体、Ｔ７を製造する好ましい方法を、スキーム４に概説した。この合成方法は、キラルな出発物質としてＬ−アラビノースを用いる、スキーム３に開示された２’−デオキシ−Ｌ−ウリジン３’−Ｏ−ホスホルアミダイト誘導体、Ｕ７の製造に類似している。従って、Ｌ−アラビノースをシアナミドと処理し、２’ −アミノ−１，２−オキサゾリン（Ｕ２）を得る。次いで、これを加熱しながらメチルメタアクリレートと反応し、無水ヌクレオシド（Ｔ４）を得る。Ｔ４を無水ＨＢｒで開環し、２−ブロモ−Ｌ−チミジン（Ｔ５）を得る。Ｔ５を接触水素添加してＬ−チミジン（Ｔ６）を得る。Ｔ６の５’−ヒドロキシル基を、ジメトキシトリチルクロライドを用いてＤＭＴエステルとして保護し、３’−ヒドロキシル基を２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイトで処理し、Ｔ７、即ち所望の保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｌ−チミジン３’−Ｏ−２−シアノエチルホスホルアミダイトを得る。Ｔ７は、本発明の構造IVおよび構造Ｖの構成要素であるＬ−オリゴヌクレオチド配列の合成の中間体として使用される。このような配列の製造は、異性体であるＤ−オリゴヌクレオチドを合成および精製するために、製造者によって示された手順を用いて、例えば自動化されたオリゴヌクレオチド合成機を用いて行われうる。スキーム４保護されたＬ−チミジンホスホルアミダイトの製造本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴ−Ｌ−デオキシリボヌクレオチド材料に使用するのに適した、保護された２’−デオキシ−Ｌ−シチジン３’−Ｏ− ホスホルアミダイト誘導体、Ｃ７の好ましい製造方法をスキーム５に概説した。従って、Ｌ−アラビノース、Ａ１をＨＣｌおよびトルオイルクロライドで処理し、３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−Ｌ−リボフラノシルクロライド（Ｃ２）を得る。（Ｃ２）と４−クロロ−２−トリメチルシロキシピリミジン（Ｃ３）を縮合し、１−（３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ− Ｌ−リボフラノシル）−４−クロロピリミジン−２−オン（Ｃ４）を得る。これをメタノール中でアンモニアと処理し、２ −デオキシ−Ｌ−シチジン（Ｃ５）を得る。Ｃ５のエキソサイクリックなアミンをベンゾイルクロライドで処理することによって保護し、３’−および５’−位のエステルをケン化して、３’−および５’−ヒドロキシル基が遊離したＣ６を得る。Ｃ６の５’−ヒドロキシル基をジメトキシトリチルクロライドを用いてＤＭＴエーテルとして保護し、３’−ヒドロキシル基を２−シアノエチルＮ，Ｎ −ジイソプロピルクロロホスホルアミダイトで処理し、Ｃ７、即ち所望の保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシ−Ｌ−シチジン３’−Ｏ −２−シアノエチルホスホルアミダイトを得る。Ｃ７は、本発明の構造IVおよび構造Ｖの構成要素であるＬ−オリゴヌクレオチド配列の合成の中間体として使用される。このような配列の製造は、異性体であるＤ−オリゴヌクレオチドを合成および精製するために、製造者によって示された手順を用いて、例えば自動化されたオリゴヌクレオチド合成機を用いて行われうる。スキーム５保護されたＬ−デオキシシチジンホスホルアミダイトの製造２’−デオキシ−Ｌ−アデノシン（Ａ６）をこれ以後しばしばＬ−ｄＡと称し、２’−デオキシ−Ｌ−グアニジン（Ｇ７）をこれ以後しばしばＬ−ｄＧと称し、２’−デオキシ−Ｌ−ウリジン（Ｕ６）をこれ以後しばしばＬ−ｄＵと称し、Ｌ−チミジン（Ｔ６）をこれ以後しばしばＬ−Ｔと称し、２’−デオキシ−Ｌ− シチジン（Ｃ５）をこれ以後しばしばＬｄＣと称する。本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの略称命名法として、例えば、２’−デオキシ−Ｌ −アデニン、Ｌ−ｄＡがリン酸ジエステル基で２’−デオキシ−Ｌ−グアノシン、Ｌ−ｄＧに結合され、次いで該Ｌ−ｄＧがリン酸ジエステル基で２’−デオキシ−Ｌ−ウリジン、Ｌ −ｄＵに結合され、該Ｌ−ｄＵが次にリン酸ジエステル基でＬ−チミジンＬ−Ｔと結合され、次に、該Ｌ−Ｔがリン酸ジエステル基で２’−デオキシ−Ｌ−シチジン、Ｌ−ｄＣに結合されているものを含有する配列を有する無関連なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドが定義され、しばしばＬ−ｄ（ＡＧＵＴＣ）と称されるであろう。このオリゴマーの５’−末端にＲ₁基が結合し、このオリゴマーの３’−末端にＲ₂が結した場合、該オリゴマーは、しばしばＲ₁−５’− Ｌ−ｄ（ＡＧＵＴＣ）−３’−Ｒ₂または５’−Ｒ₁−Ｌ−ｄ（ＡＧＵＴＣ）−Ｒ₂ −３’のように表示される。逆に、このオリゴマーの３’−末端にＲ₁基が結合し、このオリゴマーのＲ５’−末端にＲ₂基が結合した場合、該オリゴマーは、Ｒ₁−３’−Ｌ−ｄ（ＡＧＵＴＣ）−５’−Ｒ₂または３’−Ｒ₁−Ｌ−ｄ（ＡＧＵＴＣ）−Ｒ₂−５’のように表示される。関連物は、本発明のＬ−オリゴヌクレオチド、特にこの命名法を用いて以下に開示されるような配列を有する現在好ましいオリゴヌクレオチドを構成する。ここで「残基」の語は、化学的単位（chemical entity）との関連で使用される。前記化学的単位は、例えばキレート剤、若しくは結合基、若しくはタンパク反応性基、若しくは免疫反応性基、若しくは免疫反応性基、若しくは免疫反応性タンパク、若しくは抗体、若しくは抗体フラグメント、若しくは異種二官能性(h eterobifunctional)交差結合剤のような交差結合剤、若しくはＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、若しくはスペーシング基、若しくは末端キャッピング基を包含する。「残基」の語は、前記化学的単位の一部分であって、前記化学的な単位の一部が独立の化学的単位として考慮された場合、化学的単位内の１以上の化学結合が、１以上の他の化学的単位と１以上の共有結合を具備するように変化され、修飾され、または置換されたとき、もっぱらそのまま残る前記化学単位として定義される。従って、例えば一態様では、例えば構造IVのＩおよびＩｉ、または構造ＶのｃＩに関連して、「Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの残基」には、他の化学的単位の残基に少なくとも二価で結合するために修飾されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドが包含される。即ち、前記Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドには、少なくとも二価のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列が含有される。他の態様では、例えば、構造ＶのＷ₁、Ｗ₂またはＷ₃に関連して、「キレート基の残基」には、例えば結合基の残基のような他の化学的単位の残基への結合を介して少なくとも１価に修飾されたキレート基が包含される。前記構造IVにおいて、Ｚは、好ましくは、腫瘍関連抗原を認識し、且つこれに特異的である抗体若しくは抗体フラグメントである。幾つかの態様では、上記タンパクには、化学結合またはタンパク反応性基の残基若しくはタンパク上の反応性基の残基から誘導される結合基を介してこれらに共有結合で結合された免疫反応性基が含まれうる。ここで使用される「ＩＲＰ」と略称されうる「免疫反応性タンパク」の語は、タンパク共有結合で結合されうる有機化合物、および生きた微生物に見出されるか、または診断、治療、あるいは細胞性物質若しくは生きた微生物の遺伝子工学に有用な有機化合物、並びに生物学的液体中に見出されうるか、あるいは腫瘍細胞のような治療されうる細胞に関連した他の成分と相互作用する能力を有する有機化合物である。免疫反応性基は、広範囲の天然に存在する材料または合成によって調製された材料から選択される。これらの材料には、酵素、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク、リポタンパク、糖タンパク、脂質、リン脂質、ホルモン、成長因子、ステロイド、ビタミン、多糖、ウイルス、原生動物、菌類、寄生生物、リケッチア、カビ、およびこれらの成分、血液成分、組織および器官成分、医薬、ハプテン、レクチン、トキシン、核酸（オリゴヌクレオチドを含む）、抗体（モノクローナルおよびポリクローナル）、抗−抗体、抗体フラグメント、抗原性物質（タンパクおよび糖鎖（carbohydrate）を含む）、アビジンおよびこれらの誘導体、ビオチンおよびこれらの誘導体、並びに当業者に周知の他のものが含まれるが、これらに限定されない。加えて、免疫反応性基は、何れかの基質であって、免疫適格を有するホストに提供された場合に、その基質と結合することができる特異的な抗体、または抗原−抗体反応に関与するそのように形成された抗体を産生するものでありうる。好ましい免疫反応性基は、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの残基上のここで説明されたタンパク反応性基と反応するための、またはここで説明されたような結合基と反応するための少なくとも１つの反応部位を含有する限り、抗体およびこれらの種々の免疫反応性フラグメントである。この部位は、免疫反応性種に固有であるか、または、免疫反応性種の適切な化学修飾を介して導入されうる。先に概説した技術によって産生される抗体に加えて、分子生物学の技術によって産生される他の抗体およびタンパクを特に含有しうる。好ましくは、免疫反応性基は、構造IV内のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドとは結合せず、従って、該Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの、構造Ｖの相補的に配列されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドとの結合が阻害される。ここで使用される「抗体フラグメント」の語は、抗体の残基であって、抗体が抗原との結合に対して特徴的に親和性を示すものを具備した免疫反応性物質を言う。ここで使用される抗原との結合に対する親和性の語は、抗原結合部と抗原決定基との間の相互作用の強さ若しくは結合の強さ、従ってこれらの間の立体化学的な適合性の熱力学的表現を言う。それ自体では、これは、抗体−抗原相互作用に対する平衡または結合定数の表現である。ここで使用される「親和性」の語も、リガンドと受容体の間の相互作用の強さまたはこれらの間の結合の強さ、従ってこれらの間の立体化学的な適合性の熱力学的表現を意味する。それ自体では、これはリガンド−受容体相互作用に対する平衡または結合定数の表現である。抗原と抗体との結合の親和性に関して、抗体フラグメントは、少なくとも前記抗原への結合に対する前記親和性のパーセンテージを示し、このパーセンテージは、前記抗原への結合に対する前記抗体の相対的親和性の０．００１パーセントから１，０００パーセント、好ましくは０．０１パーセントから１，０００パーセント、より好ましくは０．１から１，０００パーセント、もっとも好ましくは１．０パーセントから１００パーセントの範囲である。抗体フラグメントは、１以上の化学結合の開裂反応を具備した化学反応によって、即ちアミノ酸、ペプチド、炭水化物、ここで説明した結合基、ここで説明したスペーシング基、ここで説明したタンパク反応性基、およびここで説明したように生成される抗体フラグメントを包含した群から選択される１以上の化学成分を反応剤として使用する１以上の化学結合形成反応を具備した化学反応によって、および分子生物学的プロセス、細菌によるプロセス、若しくは抗体遺伝子の遺伝子工学を包含するプロセスおよび抗体遺伝子の遺伝子工学により生じるプロセスによって抗体から産生されうる。抗体フラグメントは１以上の以下の反応を具備する化学反応によって抗体から誘導されうる。（ａ）抗体が含有する１以上の化学結合の開裂。前記結合は、例えば炭素− 窒素結合、イオウ−イオウ結合、炭素−炭素結合、炭素−イオウ結合、および炭素−酸素結合から選択され、この場合に前記開裂の方法は、以下の反応から選択される。（ｉ）酵素、例えばパパイン若しくはペプシン（これらは、当業者にとって、ＦａｂおよびＦａｂ’２と一般に呼ばれる抗体フラグメントをそれぞれ生じさせることが知られている。）のような、生化学的触媒の作用を包含する触媒化学反応。（ii）例えば、７に等しいかまたはこれより小さいｐＨで有利に起こるヒドロニウムイオンのような求電子的化学触媒の作用を包含する触媒化学反応。（iii）例えば、７に等しいかまたはこれより大きいｐＨで有利に起こる水酸イオンのような求核的触媒の作用を包含する触媒化学反応。（iv）例えば、スルフヒドリル基（−ＳＨ基を含有する。）またはアニオン性スルフィド基−Ｓ^-Ｎａ⁺基のような塩の形態で−Ｓ^-基を含有する。）を包含する試薬によるジスルフィド結合のイオウ原子での置換反応のような化学量論的な形式で消費される試薬を使用する置換反応を具備した化学反応。（ｖ）例えば、ジスルフィド結合の還元のような還元反応を具備した化学反応。（vi）ヒドロキシル基の炭素−酸素結合の酸化、若しくは糖鎖部分で起こるような隣接したジオールの炭素−炭素結合の酸化のような酸化反応を具備した化学反応。または、（ｂ）例えば、炭素−窒素結合（例えば、アミド結合、アミン結合、ヒドラゾン結合、イミン結合、およびチオ尿素結合）、ジスルフィド結合のようなイオウ−イオウ結合、炭素−炭素結合、炭素−イオウ結合、および炭素−酸素結合から選択される１以上の共有結合の形成のような１以上の試薬の間での１以上の化学結合の形成、および前記化学結合形成の試薬として、アミノ酸、ペプチド、糖鎖、ここで定義されたような結合基、ここで定義されたようなスペーシング基、ここで定義されたようなタンパク反応性基、および上記（ａ）で説明したように生成される抗体フラグメントを使用すること。または、（ｃ）抗体フラグメントは、１以上の反応剤の間で１以上の非共有結合の形成によって誘導されうる。このような非共有結合は、水性媒体中において、脂肪族基および炭素環基を含む領域のような相互に接近しうる低極性領域を独立に具備する化学種間で起こるような疎水性相互作用、およびオリゴヌクレオチドと相補的なオリゴヌクレオチドとの結合を起こすような水素結合相互作用を包含する。または、（ｄ）抗体フラグメントは、分子生物学の手法の結果として、または例えば単鎖免疫反応性基またはＦｖフラグメントの遺伝子工学における抗体遺伝子の遺伝子工学によって製造されうる。抗体フラグメントは、１以上の上記方法を組み合わせて、結果として製造されうる。幾つかの態様では、免疫反応性基は、結合基Ｌ_zによってＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、Ｉ、の残基に結合するための反応性基を有する酵素であり得る。相当する酵素には、アスパルテートアミノトランスアミナーゼ、アラニンアミノトランスアミナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ、クレアチンホスホキナーゼ、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ、アルカリ性酸ホスファターゼ、プロスタチック酸ホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、および種々のエステラーゼが含まれるが、これらに限定されない。所望であれば、免疫反応性基は、修飾、若しくは化学的に変化され得、当業者に公知の技術によって、以下に説明する結合基を介してＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの残基への結合に使用するための反応性基を提供する。このような技術には、オリゴヌクレオチドの修飾に向けられた、ＷＯ−Ａ−８９／０２９３１およびＷＯ−Ａ−８９／２９３２、および米国特許第４，７１９，１８２に開示された結合部分の使用および化学修飾が含まれる。本発明の組成物の非常に好ましい２種類の使用は、腫瘍の診断用のイメージングおよび腫瘍の放射線治療である。従って、好ましい免疫学的基には腫瘍関連抗原に対する抗体が含まれる。抗体は、これ以後しばしばＡｂと記す。特別な、制限を受けない抗体の例には、結腸直腸腫瘍を認識するＢ７２．３および関連抗体（米国特許第４，５２２，９１８および４，６１２，２８２に開示されている。）；９．２．２７および関連抗メラノーマ抗体；結腸直腸腫瘍を認識するＤ６１２関連抗体；小細胞肺癌を認識するＵＪ１３Ａおよび関連抗体；ＮＲＬＵ−１０、ＮＲＣＯ−０２および関連抗体であって小細胞肺カルチノーマおよび結腸直腸腫瘍（パン−カルチノーマ(Pan-carclnoma)を認識するＮＲＬＵ−１０、ＮＲＣＯ−０２および関連抗体；前立腺腫瘍を認識する７Ｅ１１Ｃ５および関連抗体；結腸直腸腫瘍を認識するＣＣ４９および関連抗体；壊死組織を認識するＴＮＴおよび関連抗体；結腸カルチノーマを認識するＰＲ１Ａ３および関連抗体；国際特許出願ＷＯ−Ａ−９０／０２５６９に開示されたＩＮＧ１および関連抗体；扁平上皮癌を認識するＢ１７４、Ｃ１７４および関連抗体；幾つかのリンパ腫および白血病と反応的であるＢ４３および関連抗体；および抗−ＨＬＢおよび関連モノクローナル抗体が含まれる。特に好ましい抗体はＩＮＧ−１である。再度構造IVを参照すれば、Ｌ_zおよびＬ_Qは、独立に化学結合であるか、または結合基の残基である。ここで使用される「結合基の残基」の語句は、タンパク反応性基とタンパク上の反応性部位との反応で残った部分、生じた部分、または誘導された部分をいう。ここで使用される「タンパク反応性基」の語句は、タンパクで典型的に見出される官能基と反応しうる何れかの基をいう。しかし、タンパク反応性基は、関連したタンパク以外の生物分子で典型的に見出される官能基とも反応することが特に考慮される。従って、本発明の実施に有効な結合基は、免疫反応性基を含有する生物学的分子の何れかと反応し、該生物学的な分子がタンパクであるか否かに関わらず、免疫反応性基と以下に開示される種を含有するＬ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチドとの間に結合基を形成しうる基から誘導される。好ましい結合基は以下から選択されるタンパク反応性基から誘導されるが、これらに限定されない。（１）タンパクまたは生物学的分子上のアミン、アルコール、またはスルフヒドリル基と直接反応できる基であって、前記タンパクまたは生物学的分子が、免疫反応性基、例えばハロゲン含有基（これには例えば、クロロメチルフェニル基およびクロロアセチル［ＣｌＣＨ₂（Ｃ＝Ｏ）−］基が含まれる）、２−クロロエチルスルホニルおよび２−クロロエチルカルボニルのような活性化された２−（脱離基置換された）−エチルスルホニルおよびエチルカルボニル基；ビニルスルホニル；ビニルカルボニル；エポキシ；イソシアナト；イソチオシアナト；アルデヒド；アジリジン；スクシンイミドオキシカルボニル；カルボン酸ハライドのような活性化されたアシル基；混合酸無水物等；並びに従来の写真用のゼラチン硬化剤に使用しうる公知の他の基を含むもの；（２）免疫反応性基を含有する修飾されたタンパクまたは生物学的分子、即ち上記（１）で説明したような反応性基を含有するように、例えばアルデヒド若しくはカルボン酸へタンパクのヒドロキシル基のような基を酸化することによって、修飾された免疫反応性基を含有するタンパクまたは生物学的分子と容易に反応できる基。この場合に、「結合基」は、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、アリールヒドラジノ、カルバジド、セミカルバジド、チオカルバジド、チオセミカルバジド、スルフヒドリル、スルフヒドリルアルキル、スルフヒドリルアリール、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキシアルキルおよびカルボキシアリールから選択されるタンパク反応性基から誘導されうる。前記結合基のアルキル部分は、１から約２０の炭素原子を含有しうる。前記結合基のアリール部分は、約６から約２０の炭素原子を含有しうる。（３）免疫反応性基を含有するタンパク若しくは生物学的分子、または上記（１）および（２）に記載されたような修飾されたタンパクに、交差結合剤を用いることによって結合することができる基。例えば、同種二感応性（homobifunction al）および異種二感応性ゼラチン硬化剤、ビスエポキシド、およびビスイソシアネートのような幾つかの有効な交差結合剤の残基は、該交差結合反応の間にタンパク−（Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを含有した種）複合体の一部、即ち該複合体中の結合基となりうる。しかし、他の有用な交差結合剤は、例えば消費されうる触媒として交差結合を促進し得、最終複合体には存在しない。このような交差結合剤の例には、米国特許第４，４２１，８４７に開示されたカルボジイミドおよびカルバモイルオニウム交差結合剤、並びに米国特許第４，８７７，７２４のエーテルがある。これらの交差結合剤では、免疫反応性基のように、反応剤の１つは、カルボキシル基を有していなければならず、その他のものは、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド含有種のように、反応性のアミン、アルコール、またはスルフヒドリル基を有していなければならない。アミド結合の形成において、交差結合剤は、最初にカルボキシル基と選択的に反応し、次いで、アミンとこのように「活性化された」カルボキシル基との反応の間に開裂除去され、タンパクとＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド含有種との間にアミド結合を形成し、これによって２つの部分が共有結合的に結合される。このアプローチの利点は、同じような分子、例えばタンパクとタンパクまたはＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド含有種同士の交差結合を防げることである。これに対して、例えば同種二感応性交差結合剤の反応は非選択的であり、望まない交差反応をした分子が得られる。好ましい、有用な結合基は、Pierce Chemical Company Immunotechnology Cat alog‐Protein Modification Section，（1991および1992）に示されているような種々の異種二感応性交差結合反応剤から誘導される。有効なこのような反応剤の例には、以下のようなものが含まれるが、これに限定されない。スルホ−ＳＭＣＣスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１− カルボキシレート；スルホ−ＳＩＡＢスルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート；スルホ−ＳＭＰＢスルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート；２−ＩＴ２−イミノチオラン；およびＳＡＴＡＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート。先の説明に加えて、結合基はまた、全体でもまたは部分的にもヌクレオチドおよびヌクレオチド残基（両方とも天然に存在し、修飾されている。）から誘導されうる。本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列への、アミンおよびスルフヒドリル基のような反応性の官能基を含有する修飾されたヌクレオチド部分の取込に対して特に有用な試薬（これは特に制限されない）は、例えば Clonetech Labo-ratories Inc.（Palo Alto California）から商業的に入手可能であり、これらの試薬には、単結合アミノ修飾剤（Uni-Link AminoModifier）（カタログ＃５１９０）、ビオチン−オンホスホルアミダイト（Biotin-ON Phosph oramidite）（カタログ＃５１９１）、Ｎ−ＭＮＴ−Ｃ６−アミノ修飾剤（N-MNT -C6AmlnoModifier）（カタログ＃５２０２）、アミノ修飾剤II（AmlnoModifier ）（カタログ＃５２０３）、ＤＭＴ−Ｃ６−３’−アミン−オン（DTM-C6-3'-Am ine-ON）（カタログ＃５２２２）、Ｃ６−チオール修飾剤（C6-ThiolModifier）（カタログ＃５２１１）等が含まれる。一側面においては、本発明の結合基は、上記のClontechの試薬として利用できるアミンまたはスルフヒドリル基のような反応性の官能基の反応から誘導される。これらのうちの１以上は、例えば上記の異種二感応性タンパク反応性基のような先に説明したタンパク反応性基の１以上と共に、本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列に組み込まれ、これらの１以上は、例えば本発明の免疫反応剤に取り込まれる。再度構造IVを参照すれば、ＩおよびＩ_iは、独立に、１２から約５０の隣接した配列のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドであって、前記隣接した配列が、同族の隣接した配列のファミリーの１以上のメンバーをこれらに含有し、前記ファミリーの個々の同族体が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットからなり（配列の前記ファミリーの同族体は、両方とも独立に、または同族の配列の組合せとして、これ以後しばしば、「配列(the Sequense) 」と称する）、６以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの配列が、構造IV内の何れの位置の６以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの任意の他の隣接した配列とハイブリダイズしないものを具備する。「配列」を具備する同族に隣接した配列の組のメンバーは、配列Ｉおよび配列Ｉ_iの両方に見出され得、少なくとも１つのこのような配列は、ＩおよびＩ_iに共通である。構造IVにおけるＩおよびＩ_iのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、以下に示される構造Ｖの放射性ターゲッティング部分に取り込まれる相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列が、前記Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列とハイブリダイズし、約３７℃以上の融解温度（ Melting temperature）Ｔｍを示すハイブリッドを形成する限り、Ｌ−ＤＮＡ、Ｌ−ＲＮＡ、または、プリンおよびピリミジン塩基で修飾されたＬ−ＤＮＡおよびＬ−ＲＮＡ、またはメチルホスホネート若しくはチオホスホネート或いは糖鎖で修飾されたＬ−ＤＮＡ若しくはＬ−ＲＮＡ類似体のような骨格（backbone）が修飾されたＬ−ＤＮＡ若しくはＬ−ＲＮＡ（完全に若しくは部分的に修飾されたもの）、またはこれらの組合せよりなりうる。好ましいＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、塩基以外が修飾されたＬ−ＤＮＡおよびＬ−ＲＮＡ並びに骨格以外が修飾されたＬ−ＤＮＡおよびＬ−ＲＮＡであり、より好ましくは、Ｌ−ｄＡ、Ｌ−Ｔ、Ｌ−ｄＧ、Ｌ−ｄＵおよびＬ−ｄＣＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するＬ−ＤＮＡである。現在、最も好ましいＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、Ｌ−ｄＡ、Ｌ−Ｔ、Ｌ−ｄＧおよびＬ−ｄＣＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するＬ−ＤＮＡである。好ましい態様においては、該Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列ＩおよびＩ_iは、二本鎖Ｌ−ＤＮＡ若しくはＬ−ＲＮＡを含有しうる。即ち、該Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、二重螺旋分子を形成する相補的Ｌ−ＤＮＡ若しくはＬ−ＲＮＡを含有しうる。Ｌ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡから構成される放射性ターゲッティング部分に取り込まれる相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、次ぎにＩおよびＩ_iを含有する二本鎖Ｌ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡの一方または他方の鎖にハイブリダイズする。この方法では、放射性ターゲッティング部分に取り込まれる相補的Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、三重（三重螺旋）のＬ−ＤＮＡハイブリッド、三重のＬ−ＲＮＡハイブリッドまたは三重のＬ−ＤＮＡ：Ｌ−ＲＮＡハイブリッドを形成するようにＩおよびＩ_iの二重のＬ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡと相互作用する。「配列」を包含するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の好ましい例（これに限定されない）は以下に示される。以下の配列は、個別にまたは何れかの組合せを考慮した場合、「配列」としてここで定義された組を包含する同族のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の組を包含する。もちろん、配列（viii）は、配列（vii）を含有し、配列（vii）は配列（vi）を含有し、配列（vi）は配列（ｖ）を含有する等々である。従って、構造IVにおいて、Ｉが例えば配列（iii）を含有し、Ｉ_iが、例えば配列（ｖ）を含有する場合は、ＩおよびＩ_iは両方とも少なくとも配列（iii）を含有する。構造IVで他のＩ_iは（viii）を含有しうる。この場合、Ｉ_iは、（ｉ）から（vii）並びに（vii i）も含有しうる。この場合、３つの配列は全て、少なくとも（iii）［並びに（ｉ）および（ii）］を含有し、２つのＩ_iは少なくとも（ｖ）［並びに（ｉ）から（ｖ）］を含有するであろう。この点については、Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチドの隣接した配列（この配列は、少なくとも配列（ｉ）に相補的である）を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、配列（ｉ）から（viii）までの全てにハイブリダイズし、このことは、隣接した相補的配列の組の何れのメンバー（この組の個々のメンバーは（ｉ）から（viii）の何れかに相補的な配列よりなる）でも同様である。このような隣接した相補的な配列の組は、以下に説明されるようなｃＩを包含する。「配列」を含有する好ましい同族のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の他の組は、以下のものである。特に好ましい配列は、L-d(TTATGGACGGAGAAGCTAA)（配列番号８）である。本発明の２以上のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、化学結合によって、上記のような結合基によって、または下記のようなスペーシング基によってタンデムに結合されうる。本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列におけるＬ−エナンチオメリックヌクレオチドの配列順序は、５’末端から３’末端または３’末端から５’末端でありうる。上記の結合基を介した本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の、上記の免疫反応性基への結合は、３’部位若しくは５’部位を介して、またはＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの３’若しくは５’部位に結合した誘導体を介して達成されうる。先に議諭したように、「配列」はまた、二本鎖Ｌ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡからなりうる。即ち、「配列」は、非共有結合的に相互作用し、二本鎖Ｌ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡを形成する相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドからなりうる。上記のような免疫反応性基へのこの二本鎖核酸の結合は、３’ 部位若しくは５’部位を介して、またはＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの３’または５’部位に結合した誘導体を介して達成されうる。構造IVを再度参照すれば、Ｑ_Iは、本発明の２以上のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を分離し結合するスペーシング基である。Ｑ_Iは、上記のような結合基を単独で、またはＬ−エナンチオメリックヌクレオチド若しくは２から約２０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドと組み合わせて包含し、その配列は、自己会合しないか、またはこれらの中の６以上のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列が構造IV内の何れの場所でも６以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの任意の他の隣接した配列とハイブリダイズしないものである。Ｑ_Iはまた、アミノ酸基、ペプチド基、またはポリエチレンオキシド基のようなポリ（アルキレンオキシド）基の残基を含有しうる。各スペーシング基は、２から約６のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列であって、該配列の少なくとも２つが本発明の配列（Sequence）を含有するものと結合しうることが予期される。好ましくは、該スペーシング基は、２つのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の各々が本発明の配列（Sequence）を含有するものと結合する。好ましくは該スペーシング基はＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列である。好ましいスペーシング基の例（これに限定されない）は、以下の配列よりなる。 L-d(ACT)； L-d(ACTC)； L-d(ACTCT)； L-d(CTC)； L-d(TCTC)；および L-d(CTCTC)。特に好ましいスペーシング基は、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド：L-d(ACTCTC)である。もちろん、上記の条件、即ち本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドが自己会合性の配列を包含しないということは、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列基（origonucleotide Sequence group s）と組み合わせて結合されるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドスペーシング基の選択を考慮する場合にもまだ適用される。構造IVにおいて、ａは０から約６であり、好ましくは１から約６であり、より好ましくは１から約４であり、最も好ましくは１または２である。構造IVにおいて、ｐは１から１０まで、好ましくは１から約６まで、より好ましくは１から３までの整数である。構造IVで定義されたように修飾されたＺの混合物を、このように修飾されていないＺと共に含有する免疫反応性タンパクが、本発明で有効であることも予期される。この場合、「ｐ」個のこのような混合物のバルク混合物の特性は、約０から約１０の機能性値を具備する。好ましくは、バルクｐの値は、約０．１から約１０．０、好ましくは約０．２から約５．０、より好ましくは約０．４から約３である。構造IVにおいて、Ｅは末端キャッピング基である。Ｅは、Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチド基であるか、またはこれらの中のＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列に関してエキソヌクレアーゼ酵素活性の作用を低下するか若しくは阻害するように修飾された１以上のＤ−オリゴヌクレオチド基であることが好ましい。Ｅは、１から約１０の炭素原子よりなるアルキル基のような１以上の置換基を含有した３’−若しくは５’−ホスフェート結合したリボースであり得る。Ｅは、アルキルエーテル、アリールエーテル、アラルキルエーテル、置換アリールエーテルまたは置換アラルキルエーテルのようなエーテル基のような５ ’−若しくは３’−エーテル基であって、該アルキル基が１から１０の炭素原子を含有し、該アリール基が６から１０の炭素原子を含有するものであり、更に、該アルキル若しくはアリール基が酸素、窒素またはイオウ原子を含有するか、酸素、窒素または硫黄原子を含有するアルキル若しくはアリール基で置換されうるものである。Ｅは、アルキルエステル、アリールエステル、アラルキルエステル、置換アリールエステル若しくは置換アラルキルエステルのような５’−Ｏ−または３’−Ｏ−ホスフェートエステル基であって、該アルキル基が１から１０の炭素原子を含有し、該アリール基が６から１０の炭素原子を含有するものであり、更に、該アルキル若しくはアリール基が、酸素、窒素若しくは硫黄原子を含有するか、または酸素、窒素若しくは硫黄原子を含有するアルキル若しくはアリール基で置換されうるものである。Ｅは、好ましくは５’−若しくは３’−位で、エーテル基としてリボシル部分上のポリ（アルキレンオキシジル）基であるか、若しくはＬ−リボシル基の５’−若しくは３’−酸素にエーテル基若しくはホスフェートエステルで結合されたポリ（アルキレンオキシジル）基でありうる。ポリ（アルキレンオキシジル）基は、例えばポリ（エチレンオキシジル）またはポリ（プロピレンオキシジル）またはポリ（プロピレンオキシジル−コ−エチレンオキシジル）基（poly(propylene oxidyl-co-ethylene oxidyl group)）でありうる。ここで各ポリマーは、２から約１００の繰り返しユニットを含んでいる。このような単位を含有するリン酸エステルも有用であるばかりでなく、上記のような適切な結合基の要素より成るリン酸エステルまたは修飾されたリボースも有用である。ＥはまたＺを包含するか、または上記のＬ_zの要素によってＱ_Iに結合され、環状構造を形成することができる。Ｅはまた、２つの炭素−１つの窒素原子のヌクレオシド間結合を有する化合物を包含しうる。好ましくは、Ｅはポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルを含有する。Ｅに関して、ポリ（アルキレングリコール）部分は、２から約１００の繰り返し単位を有しうる。好ましくは、ポリ（アルキレングリコール）は、ポリ（エチレングリコール）である。現在のところ、ポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルは、テトラ（エチレングリコール）ホスフェートジエステルが好ましく、これ以後しばしば「Ｔｅｇ」または「Ｔｅｇユニット」と呼ぶ。このようなポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルは、お互いにタンデムに結合され、二量体リン酸エステル配列、三量体配列、四量体配列等々を形成しうる。１または２のこのようなユニットが好ましい。このようなユニはまた、上記のＱ_I、Ｌ_z、Ｌ_Q、Ｉ、Ｉ_i若しくはＺの残基に結合しうる。好ましい末端基Ｅは、ＴのようなＬ−エナンチオメリックヌクレオチドに結合したリン酸エステルによって結合されるＴｅｇユニットを包含する。Ｌ−ＤＮＡ配列のための他の好ましい末端キャッピングユニットは、Ｌ−ｄＡ、Ｌ−ｄＧ、Ｌ −Ｔ、Ｌ−ｄＣ、およびＬ−ｄＵの残基、またはこれらを含有するオリゴヌクレオチド配列を包含する。本発明の内容として、「修飾されたヌクレオチド部分」の語は、天然に存在するＤ−エナンチオメリックヌクレオチドまたは天然に存在するＤ−エナンチオメリックヌクレオチドの残基の１以上の部分と類似している１以上の化学基を包含する化学的単位を意味することを意図している。「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」は、その化学的単位であって、１以上の化学結合（別の場合として、前記の天然に存在するＤ−エナンチオメリックヌクレオチドが独立の化学的単位として考慮される場合は、該ヌクレオチドが、この化学結合を含有する。）が、１以上の他の化学的単位に１以上の共有結合を含有するように変化され、修飾され、または置換される場合、もっぱらそのまま残されるものを包含するか、またはある位置において、天然に存在するＤ−エナンチオメリックヌクレオチドの一部（例えば、プリン若しくはピリミジン塩基部分、ヒドロキシル部分、リボース部分等またはこれらの組合せのような部分）を、前記Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチドの他の部分の前記置換と同時に除去または削除した後にもっぱら残ったままであるその化学的部分を包含する。特に有用な修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分の例（これに制限されない）には、アミンおよびスルフヒドリル基のような反応性官能基が含有されるこれらは、商業的に利用でき、Clontech Laboratories Inc.（Palo Alto,California）から入手できる、例えばこれらの修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分およびこれらの前駆体のようなものがある。前記修飾されたヌクレオチド部分およびこれらに対する前駆体には、単結合アミノ修飾剤（Uni-Link AminoModifier）（カタログ＃５１９０）、ビオチン−オンホスホルアミダイト（Biotin-ON Phos-Phoramidite）（カタログ＃５１９１）、Ｎ−ＭＮＴ−Ｃ６−アミノ修飾剤（N-MNT-C6 AminoModifier）（カタログ＃５２０２）、アミノ修飾剤II（AminoModifier）（カタログ＃５２０３）、ＤＭＴ−Ｃ６−３’−アミン−オン（DTM-C6-3'-Amine-ON）（カタログ＃５２２２）、Ｃ６−チオール修飾剤（C6-Thiol-Modifier）（カタログ＃５２１１）等が含まれる。１以上の前記部分は、本発明を包含するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列に含まれうる。一側面では、本発明の結合基は、上記のClonetechの試薬として利用しうるアミン若しくはスルフヒドリル基のような反応性官能基の反応から誘導される。これらの基の１以上は、例えば異種二感応性タンパク反応性基のような１以上の先に説明したタンパク反応性基を有する本発明のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列に含まれ、これらの１以上は、本発明の免疫試薬に含まれる。「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」はＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列のエキソヌクレアーゼ酵素活性の作用を低下または阻害するように修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分を包含しうる。これは、３’−若しくは５’−ホスフェート結合したリボースまたは３’−若しくは５’−ホスフェート結合した２’−デオキシリボース基である。これらは、１から約１０の炭素原子からなるアルキルのような１以上の置換基を、またはアルキルまたはアリールまたはアラルキルまたは置換されたアリール若しくはアラルキルエーテル（但し、アルキル基は１から約１０の炭素原子を含有し得、このようなアルキル若しくはアリール基は、酸素、窒素若しくは硫黄原子を含有するか、またはこれらを含有する置換基によって置換されうる。）を、またはポリ（アルキレンオキシジル）基を、好ましくは５’−若しくは３’−リボース部位でそれぞれ、または他の位置で含有する（これらの置換基は、エキソヌクレアーゼ酵素活性の作用を低下若しくは阻害するであろう。）。前記置換基を含有するホスフェート基を包含する「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」も有用であり、加えて、上記の適切な結合基の要素を含有するリン酸エステルまたは修飾されたリボースも有効である。「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」はまた、Ｚの残基を包含し、これは上記Ｌ_zの要素によってＱ_Iに結合され、環状構造を形成しうる。「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」はまた、２つの炭素原子−１つの窒素原子のヌクレオチド間結合を有する化合物を包含しうる。好ましくは、「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」は、ポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルを含有する。前記「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」に関連して、ポリ（アルキレングリコール）部分は、２から約１００の繰り返し単位を有する。好ましくはポリ（アルキレングリコール）はポリ（エチレングリコール）である。現在のところ、好ましいポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルは、テトラ（エチレングリコール）ホスフェートジエステルであり、これ以後しばしば「Ｔｅｇ」または「Ｔｅｇユニット」と呼ぶ。このようなポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルはお互いにタンデムに結合し、二量体リン酸エステル配列、三量体配列、四量体配列等々を形成する。１または２のこのようなユニットが好ましい。このようなユニットはまた、ここで説明したようなＱ_I、Ｌ_z、Ｌ_Q 、Ｉ、Ｉ_iまたはＺの残基と結合しうる。好ましい「修飾されたＤ−エナンチオメリックヌクレオチド部分」は、Ｌ−ＴのようなＤ−エナンチオメリックヌクレオチドに結合したリン酸エステルによって連結されたＴｅｇユニットを包含する。構造Ｖで説明された放射性ターゲッティング免疫試薬を参照して、構造IVにおけるＩの「配列」を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの組のメンバーに相補的な、好ましいＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドｃＩの組の例は、以下のようなＬ−ＤＮＡＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを含有するがこれに限定されない。構造IVの「配列」に相補的な組を具備しうる好ましい同族のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の他の組は、以下の通りである。特に好ましい相補的配列は、以下の配列を包含する。構造IVの先にリストされた「Ｉ」のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列に関連した構造Ｖの上記ｃＩのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の相補性は、各々の相対的な方向、即ちＩおよびｃＩの配列が、それぞれ５’から３’または３’から５’、またはこの逆で構成されるか否かにかかわらず各々の相対的な方向に依存する。相応するＩおよびｃＩの配列の間で形成されたハイブリダイズしたコンプレックスのＴｍが３７℃以上であることが好ましい。好ましい態様では、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列ｃＩは二本鎖Ｌ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡを包含しうる。即ち、該Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、二重螺旋分を形成する相補的Ｌ−ＤＮＡまたはＬ −ＲＮＡを含有しうる。非放射性ターゲッティング免疫試薬に取り込まれた相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列はＬ−ＤＮＡまたはＬ−ＲＮＡより構成され、次いでｃＩを含有する二本鎖になったＬ−ＤＮＡまたはＬ− ＲＮＡの一方若しくは他方の鎖にハイブリダイズする。この方法では、非放射性ターゲッティング免疫試薬に取り込まれた相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列は、ｃＩの二重のＬ−ＤＮＡ若しくはＬ−ＲＮＡと、三重（三重螺旋）Ｌ−ＤＮＡ、三重Ｌ−ＲＮＡ、または三重Ｌ−ＤＮＡ：Ｌ−ＲＮＡハイブリッドを形成するように相互作用する。構造Ｖにおいて、Ｑ_cIはスペーシング基である。Ｑ_cIは、構造IVで説明したＱ_cI から選択されうる。好ましくは、Ｑ_cIは２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの隣接した配列を含有する。この場合、この配列は、自己会合性でなく、６以上のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列が、構造Ｖ内の何れの位置の６以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの他の何れの隣接した配列ともハイブリダイズしない。Ｑ_cIはまた、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、好ましくは上記（xxvii）から（xxxii）までのような配列であって、構造IV内の「配列」に相補的であるもので構成されうる。好ましくはＱ_cI は、１または２のこのような配列を含有する。構造Ｖにおいて、Ｌ₁、Ｌ₂、およびＬ₃は、独立に化学結合、好ましくはリン酸エステル結合、または上記構造ＶでＬ_zおよびＬ_Qとして定義された結合基である。Ｌ₁、Ｌ₂、およびＬ₃はまた、独立にＱ_cIの成分を含有しうる。構造Ｖにおいて、Ｗ₁、Ｗ₂、およびＷ₃はキレート基の残基である。本発明のキレート基は、これらと結合しうる放射性核種を有しうる１以上の広範囲のキレート剤を包含しうる。よく知られているように、キレート剤は、金属と配位結合することによって結合し、キレーションコンプレックス（chelation complex）またはキレートと呼ばれる環状構造を形成することができる供与原子を含有する化合物である。これに分類される化合物は、Kirk-Othmer Encyclopedia of Chem ical Technology，vol．5，339-368に開示されている。適切なキレート剤の残基は、以下のものから独立に選択される：トリポリリン酸ナトリウムおよびヘキサメタリン酸のようなポリホスフェート；エチレンジアミンテトラ酢酸、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレン−ジアミントリ酢酸、ニトリロトリ酢酸、Ｎ，Ｎ−ジ（２−ヒドロキシエチル）グリシン、エチレンビス（ヒドロキシフェニルグリシン）およびジエチレントリアミンペンタ酢酸のようなアミノカルボン酸；アセチルアセトン、トリフルオロアセチルアセトン、およびチエノイルトリフルオロアセトンのような１，３−ジケトン；酒石酸、クエン酸、グルコン酸および５−スルホサリチル酸のようなヒドロキシカルボン酸；エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、およびトリアミノトリエチルアミンのようなポリアミン；トリエタノールアミンおよびＮ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミンのようなアミノアルコール；２，２’−ジピリジル、２，２’−ジイミダゾール、ジピコリンアミンおよび１，１０−フェナントロリンのような芳香族複素環塩基；サリチルアルデヒド、ジスルホピロカテコール、およびクロモトロープ酸のようなフェノール；８−ヒドロキシキノリンおよびオキシムスルホン酸のようなアミノフェノール；ジメチルグリオキシムおよびサリチルアルドキシムのようなオキシム；ポリシステイン、ポリヒスチジン、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、またはこのようなアミノ酸の組合せのような基部にキレートする機能性を有するペプチド；ジサリチルアルデヒド１，２− プロピレンジイミンのようなシッフ塩基；テトラフェニルポルフィンおよびフタロシアニンのようなテトラピロール；トルエンジチオール、メソ−２，３−ジメルカプト琥珀酸、ジメルカプトプロパノール、チオグリコール酸、カリウムエチルキサンテート、ナトリウムジエチルジチオカルバメート、ジチゾン、ジエチルジチオリン酸、およびチオ尿素のような硫黄化合物；ジベンゾ［１８］クラウン −６、（ＣＨ₃）₆−［１４］−４，１１−ジエンＮ４、および（２．２．２−クリプテート）のような大員環化合物；並びにニトリロトリメチレン−ホスホン酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、およびヒドロキシエチリデンホスホン酸のようなホスホン酸、または上記試薬の２以上の組合せのようなホスホン酸。キレート剤の好ましい残基には、ポリカルボン酸基が含有され、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”− ジエチレン−トリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−四酢酸（ＤＯＴＡ）；１，４，７，１０ −テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−三酢酸（ＤＯ３Ａ）；１−オキサ−４，７−１０−トリアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−三酢酸（ＯＴＴＡ）；トランス（１，２）−シクロヘキサノジエチレントリアミン五酢酸（ＣＤＴＰＡ）が含まれる。キレート剤の好ましい残基は、ポリカルボン酸基を含有し、以下のものが含まれる。一側面では、キレート剤の他の適切な残基は、米国特許第５，０７８，９８５に開示されている（この開示は参照文献として本明細書に含まれる。）テクネチウムおよびレニウムのような金属をキレートするために修飾されたタンパクを含有する。他の側面では、キレート剤の適切な残基は、例えば米国特許第４，４４４，６９０；４，６７０，５４５；４，６７３，５６２；４，８９７，２５５；４，９６５，３９２；４，９８０，１４７；４，９８８，４９６；５，０２１，５５６および５，０７５，０９９に開示されているような化合物を含有するＮ₃ＳおよびＮ₂Ｓ₂から誘導される。キレート剤の他の適切な残基は、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０８２５３に開示されている。この開示は参照文献として本明細書に含まれる。上記構造Ｖにおいて、Ｗ₁ 、Ｗ₂、およびＷ₃が多数のキレート剤の残基を含有する場合、このような試薬は構造IVで先に説明したような結合基によってお互いに結合されうる。構造Ｖのキレート剤Ｗ₁、Ｗ₂、およびＷ₃の残基は、化学結合または結合基、即ち上記構造ＶのＬ₁、Ｌ₂、およびＬ₃を介して相補的Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド部分ｃＩまたはスペーシング基Ｑ_cIに独立に結合される。好ましい結合基には以下のものが含まれる：アミノ、イミド、ニトリロ、およびイミノ基のような、基内の窒素原子；メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンおよびヘキシレンのような、好ましくは１から１８の炭素を含有するアルキレンであって、このようなアルキレンが、酸素、窒素および硫黄のような１以上のヘテロ原子またはヘテロ原子を含有する基を任意に骨格内に有する（interrupt）もの；カルボニル；スルホニル；スルフィニル；エーテル；チオエーテル；エステル、即ちカルボニルオキシおよびオキシカルボニル；チオエステル、即ちカルボニルチオ、チオカルボニル、チオカルボニルオキシ、およびオキシチオカルボニル；アミド、即ちイミノカルボニルおよびカルボニルイミノ；チオアミド、即ちイミノチオカルボニルおよびチオカルボニルイミノ；チオ；ジチオ；ホスフェート；ホスホネート；ウリレン（urelene）；チオウリレン（thiourelene）；ウレタン、即ちイミノカルボニルオキシ、およびオキシカルボニルイミノ；チオウレタン、即ちイミノチオカルボミルオキシおよびオキシチオカルボニルイミノ；アミノ酸結合、即ち以下の基、但し、ｋ＝１であり、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃は独立にＨ、１から１８、好ましくは１から６の炭素原子を含有するアルキル（例えばメチル、エチル、およびプロピル）であって、該アルキルが任意に１以上のヘテロ原子（例えば酸素、窒素および硫黄）を内部に含むもの、６から１８、好ましくは６から１０の炭素原子を有する置換若しくは無置換アリール（例えば、フェニル、ヒドロキシヨードフェニル、ヒドロキシフェニル、フルオロフェニルおよびナフチル）、好ましくは７から１２の炭素原子を含有するアラルキル（例えばベンジル）、好ましくは５から７の核炭素およびＳ，Ｎ、ＰまたはＯのような１以上のヘテロ原子を含有するヘテロ環（heterocyclyl）（好ましい該ヘテロ環基の例はピリジル、キノリル、イミダゾリル、およびチエニル）；ヘテロ環アルキル（hetero-cyclylalkyl）であって、該ヘテロ環およびアルキル部分が好ましくは先に説明されたもの；またはペプチド結合、即ち以下の基、但し、ｋ＞１であり、各Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃は、独立に上記のＸ₁、Ｘ₂、Ｘ₃で説明した基を表す。例えば、アルキレンイミノおよびイミノアルキレンのような２以上の結合基を使用しうる。構造IVのＬ_zまたはＬ_Qに対して先に説明したタンパクの異種二感応性および同種二感応性複合（conjugation）化学および交差結合化学で一般に使用される結合基のような他の結合基が、ここでの使用に適していることが予期できる。特に好ましい結合基には、アミノ基を含有する無置換または置換リン酸エステル基であって、キレート剤上のイソチオシアネート基を介してキレート剤の残基に結合されたときにチオ尿素基を形成するものが含まれる。該結合基は、キレートＷ₁、Ｗ₂、若しくはＷ₃およびＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドｃＩ若しくはスペーシング基との間のカップリング反応を妨害しない種々の置換基を含有しうる。該結合基はまた、他の場合では、このような反応を妨害しうるが、該カップリング反応の間に、当分野で一般に知られた適切な保護基を用いてそのような妨害を防ぎ、且つ該置換基がカップリング反応の後に適切な脱保護によって再生される置換基を含有する。該結合基はまた、カップリング反応の後に導入される置換基を含む。例えば、該結合基は、ハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）のような置換基；エステル基；アミド基；好ましくは１から約１８、より好ましくは１から４の炭素原子を含有するアルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル等）；好ましくは６から約２０より好ましくは６から１０の炭素原子を含有する置換または無置換アリール（例えば、フェニル、ナフチル、ヒドロキシフェニル、ヨードフェニル、ヒドロキシヨードフェニル、フルオロフェニルおよびメトキシフェニル）；好ましくは７から約１２の炭素原子を含有する置換若しくは無置換アラルキル（例えば、ベンジルおよびフェニルエチル）；アルコキシであって、アルキル部分が、上記アルキルで説明したような１から約１８の炭素原子を含有するもの；エトキシベンジルのようなアルコキシアラルキル；好ましくは５から７の核炭素およびＳ、Ｎ、Ｐ若しくはＯのようなヘテロ原子を含有する飽和若しくは不飽和ヘテロ環（heterocyclyl）（好ましいヘテロ環基は、ピリジル、キノリル、イミダゾリルおよびチエニルである）；カルボキシル基；カルボキシアルキル基であって、好ましくは、該基のアルキル部分が１から８の炭素原子を含有するもの；またはキレート基の残基でありうる。構造Ｖにおいて、Ｍ₁、Ｍ₂およびＭ₃は、＋１に等しいかまたはこれより大きい酸化状態を取る元素であって、該元素の少なくとも１つが放射性核種であるものを包含する。好ましくはＭ₁、Ｍ₂およびＭ₃の各々は、金属アイソトープ、好ましくは放射性金属アイソトープ（ここではしばしば金属ラジオアイソトープと呼ぶ）を包含し、該ラジオアイソトープは、治療的なまたは診断用のイメージングへの応用に有効である。好ましい金属ラジオアイソトープは、例えばＳｃ，Ｆｅ，Ｐｂ，Ｇａ，Ｙ，Ｂｉ，Ｍｎ，Ｃｕ，Ｃｒ，Ｚｎ，Ｇｅ，Ｍｏ，Ｔｃ，Ｒｕ，Ｉｎ，Ｓｎ，Ｒｅ，Ｓｒ，Ｓｍ，Ｌｕ，Ｅｕ，Ｒｕ，Ｄｙ，Ｓｂ，Ｗ，Ｒｅ，Ｐｏ，ＴａおよびＴｌから選択される。このようなラジオアイソトープからの有用な放射は、自発的なアルファ放射、ベータ放射、ガンマ放射、Ｘ−線放射、ポジトロン放射、および電子捕獲および内部変換の過程で誘導されるような放射を含有する。前記放射は、純粋なアルファ、純粋なベータ、純粋なガンマ等のような純粋に１種類であるか、またはベータとガンマ放射等のような核放射の組合せである得る。例えば、アルファ放射線またはベータ放射線より成る放射を有するラジオアイソトープは治療への応用、特に癌の治療に有効である。治療への応用に有用なアイソトープには、例えば²⁰⁷Ｐｂ，²¹¹Ｐｂ，²⁰⁸Ｐｂ，²¹²ｐｂ，²¹²Ｂｉ，²⁰⁷Ｔｉ，および²²³Ｒａのような、アルファ放射線を放射するアイソトープ；例えば⁴ ⁷ Ｓｃ，⁶⁶Ｇａ，⁶⁷Ｃｕ，⁷⁷Ａｓ，⁹⁰Ｙ，¹⁰⁵Ｒｈ，¹⁰⁹Ｐｄ，¹¹¹Ａｇ，¹²¹Ｓｎ，¹²⁷Ｔｅ，¹⁴³Ｐｒ，¹⁴⁹Ｐｍ，¹⁵³Ｓｍ，¹⁶¹Ｔｂ，¹⁶⁶Ｈｏ，¹⁶⁹Ｅｒ，¹⁷⁷Ｌｕ，¹⁸⁸Ｒｅ，¹⁸⁶Ｒｅ，¹⁹¹Ｏｓおよび¹⁹⁹Ａｕのようなベータ放射線を放射するアイソトープ；並びに例えば⁹⁷Ｒｕ，^177mＳｎ，¹⁹⁹Ｓｂ，¹²⁸Ｂａおよび¹⁹⁷Ｈｇのような電子捕獲および内部変換の過程の結果として放射線が放出されるアイソトープが含まれる。治療への応用に特に好ましいラジオアイソトープには²¹²Ｐｂ，²¹²Ｂｉ，⁹⁰Ｙ，¹⁷⁷Ｌｕ，¹⁸⁶Ｒｅ，および¹⁸⁸Ｒｅが含まれる。最も好ましくは⁹⁰Ｙである。例えばガンマ放射線またはポジトロン放射線を含有する放射を有するラジオアイソトープは、診断用イメージングへの応用、特に癌の診断用イメージングに有用である。診断用イメージングへの応用に有用なアイソトープには、⁴⁷Ｓｃ，⁵¹ Ｃｒ，⁶⁷Ｃｕ，⁶⁷Ｇａ，⁹⁷Ｒｕ，^99mＴｃ，¹¹¹Ｉｎ，^117mＳｎ，¹⁴¹Ｃｅ，¹⁶⁷Ｔｍ，¹⁹⁹Ａｕ，⁸⁷Ｙおよび²⁰³Ｐｂのようなガンマ放射線を放射するアイソトープ；および⁴⁴ Ｓｃ，⁴⁸Ｖ，⁶⁴Ｃｕ，⁶⁶Ｇａ，⁶⁹Ｇｅ，⁷²Ａｓ，⁸⁶Ｙおよび⁸⁹Ｚｒのようなポジトロン放射線を放出するアイソトープが含まれる。診断用イメージングへの応用に有用なアイソトープには、⁶⁴Ｃｕ，^99mＴｃ，¹¹¹Ｉｎおよび⁸⁷Ｙが含まれる。現在、最も好ましくは^99mＴｃおよび¹¹¹Ｉｎである。他の側面では、他の適切な放射性核種は、例えば共有結合によってＱ_cIに取り込まれ得、これらには、ヨウ素の放射性アイソトープ（例えば¹²³Ｉ，¹²⁴Ｉ、¹² ⁵ Ｉおよび¹³¹Ｉ）並びに²¹¹Ａｔのようなアスタチンの放射性アイソトープが含まれる。例えば哺乳動物の癌の診断用イメージングに有用な画像を生じさせる方法は、本発明の組成物および方法に使用されるラジオアイソトープからイメージ毎の放射を検出することを具備する。前記のイメージを生成する方法は、例えば放射性標識免疫シンチグラフィー（ＲＩＳ）に一般的に使用されるガンマカメラのような照準を合わせたカメラ検出器の使用、および陽電子放射撮影法（ＰＥＴ）およびシングルフォトン放射トポグラフィー（ＳＰＥＴ）に一般に使用されるリンクされたＸ−線検出器（linked X-ray detectors）を具備する。構造Ｖにおいて、ｘ、ｙ、およびｚは、独立にゼロまたは１であるが、ｘ、ｙ、またはｚの少なくとも１つが１であり；ｗおよびｂは、ゼロまたは１から約４までの整数である。好ましい組成物は以下のスキームに概略を示したように調製されうる。スキーム６異種二感応性結合試薬ＳＭＣＣ、２−ＩＴ、またはＳＡＴＡを用いた抗体アミン基の派生（derivatization）スキーム６において、タンパク（ＩＮＧのような抗体、抗体フラグメント、酵素、受容体）は、チオール化されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（Ａｂ−Ｍ）またはマレイミド基を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（Ａｂ−ＳＨ）と共有結合的なカップリングで化学的に修飾される。化学修飾は、二感応性の交差結合剤、好ましくはタンパク官能基（例えばＡｂ−アミン中のアミン）と反応しうる基を両方に有し得、更にチオール基と反応しうる基も更に有しうる異種二感応性交差結合剤を用いて行われる。後者は、ハロアセチル、ハロ−アセトアミジル、マレイミド、および活性ジスルフィド機能性基から選択される。マレイミドおよびチオアルキル基は、異種二感応性リンカー、即ちスルホスクシンイミド−４−（Ｍ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）、２−イミノチオラン（２−ＩＴ）、またはスクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）を用いて抗体に導入される。抗体を含むサンプルと結合基との反応は、サンプル中の抗体分子一つ当たり平均して約０．５〜３の結合剤分子を導入するのに十分な時間行われる。派生された抗体（derivatized antibody）は、ゲル濾過カラム、より好ましくはSehade x-G-25カラムを用いて精製される。調製される好ましいタンパク複合体の例（これに限定されない）を以下に示す。ＩＮＧ−１−ＮＨ−ＣＯ−シクロヘキサン−ＣＨ₂−マレイミド；ＩＮＧ−１−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−（ＣＨ₂）₃−ＳＨＩＮＧ−１−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＳＨＩＮＧ−１は好ましくは、Ａｂ−アミンで表されるリジンアミンのようなアミン基を含有するタンパクである。スキーム７異種二感応性結合試薬ＳＡＴＡおよびＳＭＣＣを用いるアミン基を経るＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド「Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）」の派生（derｉva tization）スキーム８異種二感応性結合試薬を用いるためのアミン基およびスルフヒドリル基を有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド「Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）」の派生（derivatization）スキーム９異種二感応性結合試薬を用いるためのビオチンを用いるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド「５’−ＴｒＳ−Ｉ−Ｑ_I−Ｉ−３’−ＮＨ₂の派生（deriva tization）スキーム１０異種二感応性結合試薬を用いるためのビオチン化されたホスホルアミダイト試薬を用いる「５’−ＨＳ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）３’−ビオチン」の製造Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドおよび修飾されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは、Ｄ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドのための当分野で周知の固相合成のような標準的な方法に従って合成される。Ｌ− エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I− Ｉ）を誘導体に派生すること（derivatizations）は、５’−ＴＥＧ−Ｌ−エナンチオメリックオリゴマー−ＮＨ₂−３’とＳＡＴＡ若しくはＳＭＣＣとの反応を用い、Ｌ−エナンチオメリックオリゴマー−３’−ＳＨまたはＬ−エナンチオメリックオリゴマー−３’−Ｍ（スキーム７参照）を得ることによって達成される。以下のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドが好ましい。これらのＬ−エナンチオメリックオリゴマーはまた、二感応化されたＬ−エナンチオメリックオリゴマー：５’−ＨＳ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−ＮＨ₂−３’ を、スキーム８に示されるように５’−および３’−位で二感応性試薬を導入することによって得られる。３’−位でのビオチンの導入はまた、スキーム９に示されるように５’−ＨＳ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−ＮＨ₂−３’とビオチン−イミドカルボキシレートとの反応によって達成される。末端に保護されたアミン、チオール、またはカルボキシを有し、他方でホスホルアミダイトを有する有効なスペーサーがある（スキーム１０参照）。これらのスペーサーの適用は、以下の反応で示される。スキーム１１Ａｂ−Ｍ＋Ｌ−ｄ（オリゴ）−５’−ＳＨの組立スキーム１２Ａｂ−ＳＨ＋Ｌ−ｄ（オリゴ）−３’−Ｍの組立スキーム１１に示されるように、修飾されたマレイミド抗体（Ａｂ−Ｍ、スキーム６）およびチオール化されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（５’−ＨＳ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）ＮＨ₂−３’）が組み立てられ、修飾された抗体−Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド複合体（Ａｂ−Ｍ−５’−Ｓ −スクシンイミド−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−ＮＨ₂−３’）を得る。同様にＡｂ −Ｓ−Ｍ−３’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−ＴＥＧ−５’は、スキーム１３に示されるようにＡｂ−ＳＨと５’−ＴＥＧ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−マレイミド −３’から調製される。スキーム１３相補的Ｌ−オリゴヌクレオチド「５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−３’ 」このスキームにおいて、Ｌ−ｄ（オリゴ）は、Ｌ−デオキシリボヌクレオチド、Ｌ−ｄ（Ｉ）のようなＬ−エナンチオメリックオリゴデオキシリボヌクレオチドを表し；ｄ（ｃＩ）は、相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴデオキシリボヌクレオチド配列を表し；Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）はＬ−エナンチオメリックオリゴデオキシリボヌクレオチドであり；ＴＭＴは、ターピリジン（terpyridine ）キレートの組のメンバー、好ましくは上記のものを表す。好ましいＴＭＴは、４’−（３−イソチオシアナト−４−メトキシフェニル）−６，６”−ビス［Ｎ，Ｎ−ジ（カルボキシメチル）−アミノメチル］−２，２’：６’，２”−ターピリジン、ＴＭＴ−ＮＣＳである。スキーム１３に示されるように、５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＮＨ₂−３’ と２モルのＴＭＴ−ＮＣＳとの反応で所望の５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−３’を得る。保護されたアミン、チオール、またはカルボキシル基を一方の末端に有し、他方にホスホルアミダイトを有する他の有効な結合剤がある。これらの試薬の適用は例に示されている。好ましい態様では、薬学的に許容しうる媒体中の上記放射性ターゲッティング試薬の効果的な投与量は、放射性金属アイソトープを含有する組成物に、上記のオリゴデオキシリボヌクレオチドのような１以上のキレート基を含有する相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を含有した組成物を、前記放射性核種の金属アイソトープのモル量が前記キレート基のモル量より少なくなるようにさらすことによって調製される。この曝露は、前記キレート剤への前記金属アイソトープの取込が起こるのに効果的な時間持続する。好ましい態様では、薬学的に許容しうる媒体中の上記非放射性ターゲッティング免疫試薬の効果的投与量が患者に投与され、前記非放射性ターゲッティング免疫試薬が前記患者の腫瘍部位のような標的部位に蓄積される。引き続き、薬学的に許容しうる媒体中の前記放射性ターゲッティング試薬の効果的な投与量を前記患者に投与し、前記放射性ターゲッティング試薬が標的部位（この標的部位は、前記患者内の前記主要部位で蓄積された非放射性ターゲッティング免疫試薬が存在している。）で蓄積される。本発明には、非経口的な注入のため、固体若しくは液体形態での経口投与のため、直腸若しくは局所投与等のための１以上の非毒性の生理学的に許容しうる担体、アジュバントまたはビヒクル(vehicles)（ここでは、まとめて担体と呼ぶ。）と共に、組成物中に製剤化された１以上の本発明の免疫試薬が含まれる。該組成物は、ヒトおよび動物に、経口的、直腸的、非経口的（静脈内、筋肉内または皮下的）、槽内的、膣内的、腹腔内的、膀胱内、局所的（粉末、軟膏若しくはドロップの形態）またはバッカル若しくは鼻内噴霧としての何れかで投与されうる。非経口的な注入に適した組成物は、生理学的に許容しうる無菌の水溶液若しくは非水溶液、分散物、懸濁物若しくはエマルジョン、および無菌の注射しうる溶液若しくは分散物に再構成できる無菌の粉末を包含する。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、これらの適切な混合物、植物油（例えばオリーブオイルのようなもの）およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性が、例えばレクチンのようなコーティング剤を使用することによって、分散物の場合には必要な粒子サイズを保持することによって、更には表面活性剤を使用することによって維持されうる。これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤のようなアジュバントも含有しうる。微生物の作用を阻害することは、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の種々の抗細菌剤および抗菌剤によって保証される。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウム等を含有することも望ましい。注射可能な薬学的形態の吸収を延ばすことは、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによって行われうる。経口投与のための固体投与量形態には、カプセル、錠剤、ピル、粉末および顆粒が含まれる。このような固体投与量形態では、該活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ジカルシウムのような少なくとも１種の通常の不活性な賦形剤（または担体）、または（ａ）例えば、澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および珪酸のようなフィラーまたは増量剤、（ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート（alignates）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシア（acacia）のような結合剤、（ｃ）例えば、グリセロールのような湿潤剤（humectants）、（ｄ）例えば、寒天 −寒天（agar-agar）、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカ澱粉、アルギン酸、幾つかのシリケートコンプレックス、および炭酸ナトリウムのような崩壊剤、（ｅ）例えば、パラフィンのような溶液凝固遅延剤、（ｆ）例えば、４級アンモニウム化合物のような吸収促進剤、（ｇ）例えば、セチルアルコール、およびモノステアリン酸グリセロールのような湿潤剤、（ｈ）例えば、カオリンおよびベントナイトのような吸着剤、並びに（ｉ）例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムのような潤滑剤またはこれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤およびピルの場合には、投与量形態には緩衝剤も含有される。同様のタイプの固体組成物も、ラクトース若しくは乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコール等のような賦形剤を用いて、軟質および硬質の充填されたゼラチンカプセル内のフイラーとして使用されうる。錠剤、糖衣錠、カプセル、ピルおよび顆粒のような固体投与量形態は、腸溶性のコーティング剤および他の当分野で周知のもののようなコーティング剤および外皮（shells）を用いて調製されうる。これらは、混濁剤を含有し得、これらが腸管路の幾つかの部分において遅らされた方法で、活性な１以上の化合物を放出するような組成物でもありうる。使用されうる包埋組成物の例は、ポリマー材料およびワックスである。活性化合物はまた、適切であれば、１以上の上記賦形剤を有するマイクロカプセル化された形態でもありうる。経口投与のための液体投与量形態は、薬学的に許容しうるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシールが含まれる。活性化合物に加えて、液体投与量形態には、水若しくは他の溶媒のような当分野で一般に使用される無菌の希釈剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル、特に綿実油、落花生油、コーン胚油（corn germ oil）、オリーブオイル、ひまし油、およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの材料の混合物等のような溶解剤および乳化剤を含有しうる。このような不活性希釈剤に加えて、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、香味剤、並びに香料のようなアジュバントを含有しうる。活性化合物に加えて、懸濁物には、例えば、エトキシル化されたイソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天−寒天およびトラガガント、またはこれらの物質の混合物等のような懸濁剤を含有しうる。直腸投与のための組成物は、好ましくは坐薬である。該坐薬は、本発明の化合物と、ココアバター、ポリエチレングリコール若しくは坐薬用ワックスのような適切な非刺激性の賦形剤若しくは担体であって、通常の温度で固体であるが、体温で液体であるもの、従って直腸または膣口内で溶け、活性成分を放出するものとを混合することによって調製されうる。本発明の化合物の局所投与のための投与量形態には、軟膏、粉末、スプレイおよび吸入剤が含まれる。該活性成分は、無菌条件下で、要求されうる生理学的に許容しうる担体および何れかの防腐剤、バッファー、若しくは噴射剤と混合される。眼用の製剤、眼の軟膏、粉末および溶液はまた、本発明の範囲内であるとして考慮される。本発明の組成物内の活性成分の実際の投与量レベルは、個々の組成物および投与の方法に対して所望の治療の応答を得るのに効果的な量の活性成分を提供するように変化しうる。従って、選択される投与量レベルは、所望の治療効果、投与の経路、所望の治療の継続および他の因子に依存する。一回または分割された投与量で、ホストに投与される本発明の化合物の治療のための１日当たりの総投与量は、例えば１キログラム体重当たり約１００ピコモルから約５マイクロモルの量でありうる。投与量単位の組成物には、１日の投与量となるように使用されうるこのような量を複数回に分けた（submultiples）量が含まれる。しかし、個別の任意の患者に対する特別の投与量レベルは、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与の回数および経路、吸収および排泄の速度、他の薬剤との組合せ、並びに治療される個々の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することが理解されるであろう。他の態様では、本発明は、診断の方法であって、このような診断が必要である哺乳動物に治療用のイメージングをするのに効果的な量の本発明の組成物を投与することを具備した方法に向けられる。本発明に従った医療手順に使用するための治療用のイメージングの方法は、治療用の画像が必要な試験対象の体に、治療用の画像を生成するのに効果的な量の上記組成物を投与することを具備する。この方法では、薬学的に許容しうる媒体内の、治療用画像を生成するのに効果的な量の上記非放射性ターゲッティング免疫試薬が患者に投与され、前記非放射性ターゲッティング免疫試薬が前記患者内の腫瘍部位のような標的部位で蓄積される。引き続き、薬学的に許容しうる媒体内の診断用のイメージングに効果的な投与量の上記放射性ターゲッティング試薬を前記患者に投与し、前記放射性ターゲッティング試薬が該標的部位（この標的部位は、前記患者内の前記腫瘍部位で蓄積された前記非放射性ターゲッティング免疫試薬が存在する。）に蓄積される。次ぎに、画像パターンを視覚化する。一回または分割された投与量で、ホストに投与される本発明の化合物の診断用のイメージングのための総投与量は、例えば１キログラム体重当たり約１ピコモルから約０．５マイクロモルの量でありうる。投与量単位の組成物には、効果的な診断をするためのイメージングの投与量となるように使用されうるこのような量を複数回に分けた（submultiples）量が含まれる。しかし、個別の任意の患者に対する特別の投与量レベルは、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与の回数および経路、吸収および排泄の速度、他の薬剤との組合せ、並びに治療される個々の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することが理解されるであろう。人患者に加えて、試験対象には、ウサギ、イヌ、ネコ、サル、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ科の動物等のような動物種が含まれうる。本発明の組成物の投与の後、対象動物は、投与された組成物が対象全体に分布し、動物の組織に入り込むのに十分な時間維持される。非放射性ターゲッティング免疫試薬のための十分な時間は、一般に約１時間から約２週間以上、好ましくは約２時間から約１週間である。好ましい⁹⁰Ｙのような放射性ターゲッティング試薬のための十分な時間は、一般に、照射性格種の半減期によって測定され、このような時間は、約１から約１０半減期以上、好ましくは約２時間から約６半減期までの範囲である。以下の例は本発明を更に例示するが、何れの方法においても本明細書およびクレームを制限するものと解釈してはならない。本発明の特別な態様を以下の例で示す。例例１Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの設計抗体Ｚ、連結基Ｌ_z及び基Ｌ_Q、並びにＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列Ｉ、スペーシング基Ｑ_I、第２配列Ｉ_i、及び末端キャッピング基Ｅを具備した構造IVに示された本発明のターゲッティング免疫試薬を以下のように設計した。この場合、所望のＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの類似の物理的特性のモデルとして鏡像異性体であるＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの相補的対合間の予想された相補的結合特性を利用した。サンプルの鏡像体、即ち以下の配列（ここでは配列番号３２と称する。）をもつ天然に存在するＤ−エナンチオメリックオリゴデオキシリボヌクレオチドは、構造IVについて以前に示された基準に従って適合性を分析した。その構造IVにおいて、基Ｌ_z，Ｉ，Ｑ_I，Ｉ_i，及びＬ_QとＥは、Ｄ−エナンチオマーとして以下のように表わされる：Ｄ−エナンチオマーに対して設計された”オリゴ”コンピューターソフトウェアー（National Biosciences）を用いたこのＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の分析により、それには自己相補性の領域が５つ含まれていることが明らかにされた。そのような領域は全て、異なった程度のオーバーラップを有するヘアピンループであった。これらの自己相補性領域に対する負の自由エネルギー変化（ΔＧ's）の合計は−２８．３kc al/モルであった。そのことから、このＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドについて、１．０モルの塩中で融解温度は８６℃となることが予測された。最も安定な自己相補性領域（△Ｇ＝−１５Kcal/モル）には８塩基対が含まれており、そのほとんどはＢＡＭ−１制限部位のパリンドロームに相当するものであった。これらの自己相補性領域の存在下で、この配列に相補的なＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの配列はその完全な長さまでのハイブリダイズを成し遂げることができない。推論によって、これと同じ配列の鏡像体Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列およびＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列に相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列も、自己相補的な鏡像体領域の存在下でその完全な長さのハイブリダイズを成し遂げることができない。次いで、過剰の塩基が対をなすことが反復分析で除外されるように、Ｄ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の修飾（更には、鏡像体であるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの相当する修飾）によって自己相補性領域内で選択された塩基を置換することが、構造IVに対して概説した基準に従って行われた。また、らせん状のコンホーメーションにおいては、２つの相当する相補的配列の末端基、Ｄ−ｃＩおよびＬ−ｃＩが、２つのＤ−エナンチオマー配列Ｉと配列ＩＩおよび２つのＬ−エナンチオマー配列にそれぞれハイブリダイズする際、お互いに直角となることを保証するために、ついかのＤ−エナンチオメリックヌクレオチドおよび追加のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドも相当するスペーサー配列に挿入された。このような方法で、以下の配列をもつ新規なＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（配列番号３３）が設計され、次いで合成された。鏡像体であるＬ− エナンチオマー（配列番号３４）を合成し、Ｌ−エナンチオマーは免疫反応性分子（即ち、ＩＮＧ−１のような抗体に対して）と複合体を形成させた：このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（配列番号３４）は、６つのＬ−エナンチオメリックヌクレオチドスペーサー［Ｑ_I＝L-d(ACTCTC)］を介して連結された２つの同じＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列（即ち、Ｉ＝Ｉ_i ＝L-d(TTATGGACGGAGAAGCTAA)；配列番号８）のコピーから構成されている。５ ’及び３’末端のＬ_z基とＬ_QE基はＸ及びＹ基を含有している。ＸおよびＹは各々独立にアミンを含む基（例えばClontech Ind-ustriesから入手可能なもの。これらのアミンを含有する基は、これ以後しばしば簡略化して「ＮＨ₂」もしくは「アミン」と表す。）であるか、またはＸおよびＹの一方がアミンを含有する基から選択され、他方が先に示された１以上のＴＥＧ基から構成され得る。加えて、望ましくは、ＸおよびＹの一方はまた、末端ヒドロキシル基（この場合において、上記配列内の３’−ＹＴは、固相支持体から除去されたときデオキシリボシル−ＯＨとなり、より好ましくは、Ｘは、水酸化アンモニウムでアミン基を脱保護する前に、合成の経路の最後で酸によりＤＭＴ基を除去することによって得られる５’ＯＨ基である。）でありうるか、またはＸおよびＹの一方はまた、末端リン酸エステル基（この場合において、３’−ＴＹまたは５’−Ｘは−ＯＰＯ₃ Ｈ₂基若しくはこれらのナトリウム塩のようなイオン化された塩となる。）であり得る。このようなホスフェート末端基は、合成の最後で、５’−ＯＨ末端基を２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイトと処理することによって得られる。引き続き水酸化アンモニウムと反応し、酸化することによって、Ｘで末端ホスフェート基を得る。３’−ホスフェート基は、オリゴマーを合成し、これを固体支持体から除去した後に、３’−ヒドロキシル基をリン酸無水物で処理し、次いで水で加水分解することによって導入されうる。従って、一態様において、簡略化して５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ） −３’−アミンと表されるこのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは以下のものである： −ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’アミン。他の態様では、５’−アミン−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’Ｔｅｇと簡略化して表されるこのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは以下のものである：他の態様では、５’−アミン−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’ＯＨと簡略化して表されるこのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは以下のものである： −Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＯＨ。他の態様では、５’−アミン−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’ＯＰＯ₃Ｈ₂と簡略化して表されるこのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドは以下のものである：例２（２ａ）Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）；５’−Ｌ−ｄ（Ｔｅｇ−Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’ −ＮＨ₂（配列番号３１）の合成このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを、元来、天然に存在するＤ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの合成に使用されるように製造者によってデザインされたアプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機（Appl ied Biosystems oligonucleotide synthesizer）により調製した。天然に存在するＤ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの合成のためのトリチルあり（tr ityl-on）のプロトコールに適用しうる方法を、装置の製造者によって指示されるように使用したが、Ｄ−エナンチオマー以外、上述のように調製されたＬ−２ −デオキシヌクレオチドホスホルアミダイト試薬の前駆体（５’−ジメトキシトリチルＬ− シチジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、５’−ジメトキシトリチルＬ−アデノシン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、５’−ジメトキシトリチルＬ−グアノシン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、および５’−ジメトキシトリチルＬ −チミジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト）を代わりに用いるように修飾した。３’−アミン基に対する前駆体としてClonetechの単結合アミノ修飾剤（uni-l ink Amino Modifier）を用いた。ＴＥＧ基、即ち５’−ジメトキシトリチルＬ− チミジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイトに結合されたリン酸エステルによって本発明において連結されたテトラ（エチレングリコール）リン酸ジエステルを、鎖の５’末端で用いた［ここで、５’−ジメトキシトリチルＬ−チミジン−３ ’−Ｏ−ホスホルアミダイトは、ＷＯ／９２／０２５３４に開示されたＬ−エナンチオマー（鏡像体）である。また、ＷＯ／９２／０２５３４は、５’−ジメトキシトリチルＤ−チミジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイトに結合されたリン酸エステルに連結された（テトラ（エチレングリコール）リン酸ジエステルに関連する。］。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド全体の合成に続いて、塩基の保護基と固体支持体を水酸化アンモニウムを用いて取り除き、得られた５’ 保護基を３％トリクロロ酢酸を用いて取り除いた。このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを脱塩し、脱イオン水を用いてＯＰＥＣカートリッジ（Clon etech）に通して溶出することによりさらに精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドをさらに精製するために、１２％ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動を用いた。Ｌ−ＤＮＡバンドを紫外線投影により視覚化した。これを切り出し、細かく切り刻み、ｐＨ７．５、４℃ で１０mMトリス塩酸、１mMＥＤＴＡを含有する緩衝液を用いて２４時間抽出した。次いで、ゲルの断片を遠心分離により除き、Ｌ−ＤＮＡをセファデックスＧ− ２５のスパンカラムに通して精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの濃度を２６０nmでの吸光度を用いて評価した。（２ｂ）５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇ（配列番号３５）の合成Ｌ−２−デオキシヌクレオチドホスホルアミダイト試薬の前駆体（即ち、上記のような５’−ジメトキシトリチルＬ−シチジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、５’−ジメトキシトリチルＬ−アデノシン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、５’−ジメトキシトリチルＬ−グアノシン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、および５’−ジメトキシトリチルＬ−チミジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト）を用いて修飾したが、他の点では装置の製造元で指示されたようなＤ− エナンチオマーに対して使用されるトリチルなし（trityl-off）の手法によってアプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機によりＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを調製した。５’−アミン基の前駆体としてClonetech の６炭素のモノメトキシトリチルアミノ修飾剤（N-MMT-C6-AminoModifier）を用いた。３’末端で末端基としてＴＥＧ基を用いた。塩基の保護基と固体支持体を水酸化アンモニウムを用いて取り除き、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドをポリアクリルアミドゲル電気泳動によりさらに精製した。（２ｃ）５’−トリチル−Ｓ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂の合成Ｔｅｇ基がない例２ａのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を、アプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機により、Ｌ−２−デオキシヌクレオチドホスホルアミダイト試薬の前駆体（上述のような５’−ジメトキシトリチルＬ−シチジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、５’−ジメトキシトリチルＬ−アデノシン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、５’−ジメトキシトリチルＬ−グアノシン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト、および５’−ジメトキシトリチルＬ−チミジン−３’−Ｏ−ホスホルアミダイト）を用いて、装置の製造元の指示のとおりトリチルあり（trityl-on）の手法によって調製した。３’−アミン基に対する前駆体としてClonetechの単結合アミノ修飾剤（uni-lin k Amino Modifier）を用いた。例２ａのＴｅｇの代わりに配列に加えられた５’ −チオール基（ここでは簡略化して５−Ｓと表されている。）に対する前駆体として、ClonetechのＣ６−チオ修飾剤（ThioModifier）を用いた。完全なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの合成に引き続き、塩基の保護基と固体支持体を水酸化アンモニウムを用いて取り除いた。このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを脱塩し、脱イオン水を用いてＯＰＥＣカートリッジ（Clonetech）に通して溶出することによりさらに精製した。オリゴヌクレオチドの濃度は２６０nmでの吸光度を使用して評価した。（２ｄ）蛍光性５’Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ−Ｃｙ５．１８の調製例２ａに従って調製された５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂の試料（３０ｎモル）を乾燥するまでエバポレートし、５００mLの０．１Ｍ重炭酸塩緩衝液、ｐＨ９中でボルテックス混合することにより再溶解した。その後、この試料を、乾燥させた色素Ｃｙ５．１８のスクシンイミジルエステル（Bi ological Detection Systems；Pitts^-burg PA）を含むバイアルに添加した。完全に混合した後、反応を室温で１時間、しばしば混合しながら進行させた。生成物、５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ−Ｃｙ５．１８を脱イオン水を用いてセファデックスＧ−２５カラムから溶出させることにより精製した。例３（３ａ）ｃＩジアミン、５’−ＮＨ₂−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂の合成Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＩに相補的なＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列5'X-L-d(TTAGCTT CTCCGTCCATAAYT)-3'（配列番号３８）を含んでいるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＬ−ｄ（ｃＩ）を、例２ａでしたようにしてアプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機により調製した。３’−アミン基の前駆体として単結合アミノ修飾剤（Clonetech）を、５’−アミン基の前駆体としてClonete chの６炭素のモノメトキシトリチルアミノ修飾剤（AminoModifier）（N-MMT-C6- AminoModifier：カタログ＃5202）を用いて、装置の製造元の指示どおりに３’ （Ｙ）と５’（Ｘ）にアミンを含む基を組み込んた。最後の脱ブロック（debloc king）及び固体支持体からの切り出しの後、保護基をアンモア水を用いて取り除き、アミンで機能化されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを脱イオン水を用いてＯＰＥＣカートリッジ（Clonetech）に通して溶出することにより精製した。このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドをポリアクリルアミドゲル電気泳動もしくは逆相−ＨＰＬＣによりさらに精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの濃度は２６０nmでの吸光度を使用して評価した。（３ｂ）Ｉジアミン、５’−ＮＨ₂−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＮＨ₂の合成Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチド配列5'X-L-d(TTATGGACGGAGAAGCTAAYT)-3 '（配列番号３９）を含んでいるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＩを、例３ａで概説したように、アプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機により調製した。３’−アミン基の前駆体として単結合アミノ修飾剤（uni-link Amino Modifie r）（Clonetech）を、５’−アミン基の前駆体としてClonetechの６炭素のモノメトキシトリチルアミノ修飾剤（AminoModifier）（N-MMT-C6-AminoModifier：カタログ＃5202）を用い、装置の製造元の指示どおりに３’（Ｙ）と５’（Ｘ）にアミンを含んでいる基を組み込んた。最後の脱ブロック及び固体支持体からの切り出しの後、保護基をアンモア水を用いて取り除き、アミンで機能化されたＬ −エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを脱イオン水を用いてＯＰＥＣカートリッジ（Clonetech）に通して溶出することにより精製した。このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドをポリアクリルアミドゲル電気泳動もしくは逆相 −ＨＰＬＣによりさらに精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの濃度を２６０nmでの吸光度を使用して評価した。（３ｃ）Ｌ−ｄ（ｃＩ）の合成（Ｉ）に相補的なヌクレオチド配列5'-L-d(TTAGCTTCTCCGTCCATAA)-3'（配列番号２３）を含んでいるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドｃＩを、例２ａに概説したようにしてアプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機により調製した。最後の脱ブロック及び固体支持体からの切り出しの後、保護基をアンモア水を用いて取り除いた。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを脱イオン水を用いてＯＰＥＣカートリッジ（Clonetech）に通して溶出することにより精製した。このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドをポリアクリルアミドゲル電気泳動によりさらに精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの濃度は２６０nmでの吸光度を使用して評価した。（３ｄ）Ｌ−ｄ（Ｉ）の合成Ｌ−エナンチオメリックヌクレオチド配列5'-L-d(TTATGGACGGAGAAGCTAA)-3'（配列番号８）を含んでいるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＩを、例３ｃに概説したようにしてアプライドバイオシステムオリゴヌクレオチド合成機により調製した。最後の脱ブロック及び固体支持体からの切り出しの後、保護基をアンモア水を用いて取り除き、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを脱イオン水を用いてＯＰＥＣカートリッジ（Clonetech）に通して溶出することにより精製した。このＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドをポリアクリルアミドゲル電気泳動によりさらに精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの濃度は２６０nmでの吸光度を使用して評価した。（３ｅ）蛍光性ｃＩジアミン５’−ＮＨ₂−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂、及び蛍光性Ｉジアミン、Ｌ−ｄ（Ｉ）の調製例３ａに従って調製された５’−ＮＨ₂−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂の試料（３０ｎモル）を乾燥するまでエバポレートし、５００mLの０．１Ｍ重炭酸塩緩衝液中に、ｐＨ９でボルテックスすることにより再溶解した。次いで、この試料を乾燥させた色素Ｃｙ５．１８（Biol ogical Detection Systems；pittsburg PA）のスクシンイミジルエステルを含むバイアルに添加した。完全にぼるテックスした後、反応を室温で１時間、しばしば混合しながら進行させた。Ｃｙ５．１８で標識された５’−ＮＨ₂−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂を脱イオン水を用いてセファデックスＧ−２５カラムから溶出することにより精製した。例３ｂのＣｙ５．１８で標識されたＩジアミン、５’−ＮＨ₂−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＮＨ₂の試料を同様の方法で調製した。例４（４ａ）５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３−ＮＨ₂に対するＬ−ｄ（ｃＩ）のアニーリング例２ａに従って調製された５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３−ＮＨ₂ の試料（２mmoles）を、６ＳＳＣ緩衝液中において、例３ｃの方法に従って調製されたＬ−ｄ（ｃＩ）を増加する量で含有するアリコート［１００：５から１００：２００のＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）：Ｌ−ｄ（ｃＩ）］で室温にて混合した。混合物を試料キュベットに導入し、キュベットの温度を３０℃から９０℃まで上げ、次いで３０℃まで下げる間にキャリー１３装置（Cary 13 instrument）内でＵＶ光（２６０nm）にて分析した。５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３ −ＮＨ₂に関して等モル以下のＬ− ｄ（ｃＩ）の濃度では、２成分のコンプレックス（binary complex）（Ｌ−ｄ（ｃＩ）：５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３−ＮＨ₂および／または５’ −Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３−ＮＨ₂：Ｌ−ｄ（ｃＩ））の存在が明らかにされた。より高いＬ−ｄ（ｃＩ）濃度では、３成分のコンプレックス（tern ary complex）（Ｌ−ｄ（ｃＩ）：５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３− ＮＨ₂：Ｌ−ｄ（ｃＩ））が観測されうる。（４ｂ）Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）へのＴＭＴ−ｃＩ−ＴＭＴのハイブリダイゼーションＬ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ（以下の例６ａ参照）を用いた同様の実験により、５ ’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３−ＮＨ₂に対するＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴのアニーリングが示された。３成分のコンプレックスが形成された。例５ ³⁵Ｓで標識されたＴＭＴ−ＮＣＳの調製約４０ミリモルのＴＭＴアミン（PCT US91/08253）の６５０mLメタノール懸濁液を室温にて撹拌し、溶液が透明な薄黄色を呈するまで脱イオン水を滴下した（約７０mL）。この溶液を氷浴で１０℃まで冷やし、約６０ミリモルの³⁵Ｓ−チオホスゲンを約３分間にわたって滴下した。ＴＭＴイソチオシアネートの沈殿が形成され、この溶液を、さらに２．５時間連続的に撹拌した。溶液と沈殿を室温、減圧下（１５ mmHg）にてロートバップ（rotovap）でほとんど乾燥するまで濃縮した。ほとんど乾燥した固形物をさらに約５００−７５０mLのメタノールで希釈し、固形物が見かけ上均質化するまで撹拌した。次いで、固体のＴＭＴイソチオシアネートを濾過によって集め、メタノールで繰り返し軽く洗浄した。この生成物をバッキュームチャンバー（vaccum chamber）内で一晩乾燥した。例６（６ａ）キレート剤ＴＭＴ−ＮＣＳと複合体を形成し、５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＴＭＴを形成する５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂の調製、およびキレート剤ＴＭＴ−ＮＣＳと複合体を形成し、５’−ＴＭＴ−Ｌ− ｄ（Ｉ）−３’−ＴＭＴを形成する５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＮＨ₂の調製１．０Ｍ炭酸塩／重炭酸塩緩衝液５００マイクロＬ、ｐＨ９．０中において、３００ｎモルのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの１つ、即ち例３ａの５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂溶液若しくは例３ｂの５’−Ｈ₂ Ｎ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＮＨ₂溶液に１２mgのＴＭＴイソチオシアネート（ＰＣＴＵＳ９１／０８２５３）を添加した。反応混合物をボルテックス混合し、３７℃で２時間、室温で一晩保持した。生じた反応混合物をエタノールアミン（１５マイクロＭ）を用いて反応を停止し、生成物を、脱イオン水を溶出液としてセファーデックスＧ−２５カラムクロマトグラフィーにより精製した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドジアミン１分子あたりのＴＭＴの数は、ＴＭＴにキレート化されたユーロピウム金属の時間分解蛍光を用いた分析によって定量した。（６ｂ）蛍光性の金属を用いたＩｎｇ−１−ＴＭＴ及び５’−ＴＭＴ−ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＴＭＴ及び５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＴＭＴ複合体の標識のための一般的な手法配位結合領域（co-ordination sphere）に密に保持された芳香族部分を有するキレート剤に、ユーロピウム（３⁺）のようなランタン系列元素を結合させることにより、「増感された（sensitized）」蛍光発光が誘導される。この場合、光は芳香族系を通して吸収され、エネルギーが金属に移動される。その後金属は、非常に大きなストークシフトと数秒までの蛍光の寿命により特徴づけられる放出を起こす。３４０nmでの励起パルスの後、４００マイクロ秒遅れて６１５nmで蛍光発光が測定された。寿命の短いバックグラウンド蛍光は効果的に除去されるので、この遅れは高感度測定に利用され、通常のＥｕ−蛍光発光の１５００倍までの感度の増強が達成される。この方法において、既知量のＩｎｇ−１−ＴＭＴもしくは５’−ＴＭＴ−Ｌ− ｄ（ｃＩ）−３’−ＴＭＴ、または５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＴＭＴ複合体（conju-gate）を、ＥｕＣｌ₃の添加量を増やしながらバッファー水溶性中で滴定した。例えば、１から３０ピコモルの複合体を含む１マイクロリットルの溶液を、前もって算定された量のトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）が入っているコスターＥＩＡ／ＲＩＡの９６穴プレート（Costar EIA/RIA 96-wellplat e）の穴に２連ずつ加えた。緩衝液の容積は、９９からＥｕＣｌ₃水溶液のマイクロリットルにおける容積を差し引くことにより導いた（典型的な例として、トリス塩酸緩衝液中で１０^-4Ｍから１０^-6Ｍ）。これにより各穴の総体積は１００マイクロリットルに固定される。その後、ＥｕＣｌ₃水溶液を、複合体の緩衝された溶液に加えた。その後、プレートにふたをし、１時間低速で振蘯した。時間分解蛍光をデルフィア１２３２時間分解蛍光計（Delfia 1232 time-resolved fluo rimeter）（Wallac Inc.）を用いて測定し、データを分析した。複合体を形成した各ＴＭＴ分子は１つのユーロピウムイオンをキレートし、５’−ＴＭＴ−Ｌ− ｄ（ｃＩ）−３’−ＴＭＴ及び５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−３’−ＴＭＴ複合体は、複合体分子あたり２つのユーロピウムイオンに結合することが見出された。（６ｃ）５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂及び³⁵Ｓで標識されたＴＭＴ−ＮＣＳからの５’−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＴＭＴの調製例６ａの方法において、１２mgのＴＭＴイソチオシアネート（ＰＣＴＵＳ９１／０８２５３）を、³⁵Ｓで標識されたＴＭＴ−ＮＣＳ（例５のようにして調製された）に置き換え、反応を上記のようにして行った。５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’− ＮＨ₂１分子あたりのＴＭＴ数を、³⁵Ｓを検出するために最適化された液体シンチレーション計測装置（liquid scintillation counter）でＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ生成物を計測することにより定量した。派生された（derivatized ）５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂の濃度と³⁵Ｓチオホスゲンの比活性に関する知見から、５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−３’−ＮＨ₂ジアミンあたりのＴＭＴ分子数を計算してもよい。例７（７ａ）イットリウム（⁹⁰Ｙ）で放射性標識されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド、⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙおよび⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙの調製Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＴＭＴ複合体（conjugate）、即ち例６ａで得た（ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ）または例６ａで得たＴＭＴ −Ｌ−ｄ（Ｉ）−ＴＭＴの脱イオン化水溶液を、⁹⁰ＹＣｌ₃の、ｐＨ６．０；０．５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液の溶液（＞５００Ci/mg:アマーシャム社（Amersham Corp.）より）で比活性が０．１Ci/ｐモルになるまで室温で１時間処理した。サンプル１マイクロリットルを取り出し、それをゲルマンＩＴＬＣ−ＳＧ紙片（ Gelman ITLC-SG strip）上にスポットすることにより標識効率を決定した。該紙片を、０．１Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０を含むガラスビーカー内で数分間、溶媒の先端が紙の先端に対して四分の三に至るまで展開した。その後紙片を、⁹⁰Ｙに対して最適化され、コンパック３８６／２０ｅコンピューター（Compaq 386/20e computer）によって制御されたシステム２００イメージスキャナー（Bioscan）に挿入した。この系では、未結合の⁹⁰Ｙは溶媒先端に移動した。Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＴＭＴ複合体のＴＭＴは、添加された放射活性体の９８％以上とキレートを作った。（７ｂ）放射標識された⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙ又は⁹⁰Ｙ −ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙの５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂へのハイブリダイズ例７（ａ）から得た⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙの５ｐモルのサンプルを、例２ａで得られた増加する量（０．３７５から１２ｐモル）の５ ’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−ＮＨ₂のＰＢＳ溶液と３７℃で１時間混合した。これらのハイブリダイズしたものの各々からの５mLアリコートをＳＤＳを含むバッファーと混合し、１２％ＰＡＧＥゲル上で電気泳動にかけた。ゲルのオートラジオグラフは、５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂が２モルのｃＩを結合することができることを示した。例７（ａ）で得られた非相補的な⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙを用いた同様の手順では、５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）−３’−ＮＨ₂へのはいぶりダイスは見られなかった。（７ｃ）ヌードマウスへの⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙの投与２８mCi/２８mgの比活性になるまで⁹⁰Ｙで標識されたＴＭＴ−ｃＩ−ＴＭＴを、右の横腹内に皮下腫瘍をもつ２５ｇのヌードマウスに注射した。注射後所定の時間間隔をもって、血液試料を尾から採取し、液体シンチレーション計測装置で⁹⁰ Ｙ放射活性を計測した。その結果より、注射で投与された量の９５％以上の⁹⁰ Ｙが注射後の最初の３０分以内に血流から除かれることが示された。注射後２時間で、血液中の放射活性は横ばいになり、ほんの一部（注射された投与量の０．０１％未満）はその後２２時間目まで循環し続けた。これらのデータにより、Ｌ −ｄ（ｃＩ）配列を認識するハイブリダイズ部位が存在しない場合、放射性標識されたＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴは循環から速やかに失われることが確かめられた。例８（８ａ）スルホ-ＳＭＣＣ及びＩＮＧ−１を用いる抗体−マレイミド（ＩＮＧ− １−マレイミド）の調製リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のスルホ−ＳＭＣＣ溶液（１０８ｎモル）を、ホスフェートバッファー（ｐＨ７）中のキメラ抗体（ＩＮＧ−１；１８ｎモル）の溶液の試料に加えた。得られた混合物を時折混合しながら室温にて３０分間放置した。反応を６０ｎモルの塩基性トリス緩衝液を用いて停止した。反応混合物を、リン酸緩衝生理食塩水を用いて希釈し、前洗浄したＰＤ−１０カラムに加え、ＰＢＳを用いて溶出し、ＩＮＧ− １−マレイミドを得た。この物質を使用するまで氷上に保存した。（８ｂ）ＩＮＧ−１及び２−イミノチオランからのメルカプトアルキル−抗体（Ａｂ−ＳＨ）の調製；（ＩＮＧ−１−ＳＨ）０．１Ｍ炭酸塩緩衝液（ｐＨ８．８）中のキメラ抗体（ＩＮＧ−１；５ｎモル）溶液の試料を２００ｎモルの２−イミノチオレン水溶液と混合した。得られた混合物を時折混合しながら室温にて３０分間放置した。反応混合物をリン酸緩衝生理食塩水を用いて希釈し、前洗浄されたＰＤ−１０カラム（pharmacia）に加え、ＰＢＳを用いて溶出し、メルカプトアルキル−ＩＮＧ−１を得た。この物質を使用するまで氷上に保存した。例９（９ａ）２−イミノチオレンを用いたメルカプトアルキル−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I− Ｉ）の調製；５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＳＨ５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂ （３０ｎモル）水溶液の試料を１Ｍ炭酸塩緩衝液（ｐＨ９）と混合し、８９０mM の最終緩衝液濃度を得た。１２ｍモルの２−イミノチオラン塩酸塩の水溶液を緩衝されたＬ−ＤＮＡに添加した。これらの反応物をボルテックス混合し、３７℃ に３０分間維持した。反応混合物を、１２ｍモルのエタノールアミンを添加することにより停止し、リン酸緩衝生理食塩水で希釈し、前洗浄したＮＡＰ−２５カラム（pharma-cia）に加え、ＰＢＳを用いて溶出し、５’Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ− Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ−Ｃ（Ｎ＝Ｈ₂ ⁺）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＨ（塩酸塩、Ｃｌ^- として）を得た。マレイミドの導入された抗体（maleimode-derivatized antibo dy）（Ａｂ−Ｍ）との複合体形成に使用するため、生成物をカラムから直接抗体溶液へ溶出させた。一方、メルカプトアルキル−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）を使用するまで氷上に保存した。（９ｂ）２−イミノチオランを用いたメルカプトアルキル−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I− Ｉ）の調製；５’−ＨＳ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇ５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇ（３０ｎモル）を例９ａのように処理し、５’−ＨＳ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＨＮ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−Ｔｅｇ−３’（Ｃｌ^-）を得た。（９ｃ）スルホ−ＳＭＣＣを用いたＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−マレイミドの調製；５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）−３’−マレイミド２０ｎモルの５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂（例２ａのようにして調製された）を含む水溶液を、リン酸緩衝生理食塩水に希釈した。スルホ−ＳＭＣＣ（１００ｎモル）のＰＢＳ溶液を添加し、得られた混合物を時折混合しながら室温にて３０分間そのまま放置した。反応混合物をリン酸緩衝生理食塩水を用いて希釈し、前洗浄されたＰＤ−１０カラムに加え、ＰＢＳを用いて溶出し、５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−マレイミドを得た。この物質を使用するまで氷上に保存した。（９ｄ）Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−マレイミドの調製；５’−マレイミド−Ｌ− ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇ５’−Ｈ₂Ｎ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを９ｃの５’−Ｔｅｇ− −３’−ＮＨ₂と同様の方法でスルホ−ＳＭＣＣと反応し、５’−マレイミド− Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’Ｔｅｇを得た。（９ｅ）ＳＡＴＡを用いる３’−メルカプト−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）の調製５０ｎモルの５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂（例２ａのようにして調製された）を含む水溶液をＰＢＳに希釈し、５００ｎモルのＳＡＴＡ（ＤＭＳＯ中）を添加した。混合し、室温で６０分間放置した後、反応混合物をＰＢＳを用いて希釈し、ＰＢＳを用いてＮＡＰ−１０カラムから溶出し、５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＯ− ＣＨ₃を得た。アセチルチオアセチル化されたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドを１００mMリン酸ナトリウム、２５mM ＥＤＴＡ、５００mM ＮＨ₂ＯＨを含むｐＨ７．５の溶液を３０μｌ添加することにより脱アシル化した。反応を室温で２時間続けた後、該物質を、溶出液としてＰＢＳを用いて溶出することによりＮＡＰ−５カラムに通した。生成物、５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I− Ｉ）−３’ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−ＳＨは、酸化的な二量化を防ぐためにすぐに使用した。（９ｆ）ＳＡＴＡを用いる５’メルカプト−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）の調製Ｈ₂Ｎ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを、例９ｅの５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂と同様の方法でＳＡＴＡと反応し、５ ’−ＨＳ−ＣＨ₂−ＯＣ−ＮＨ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを得た。例１０（１０ａ）Ａｂ−Ｍと５’Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＨの複合体形成；ＩＮＧ−１−マレイミド−３’ −Ｓ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇ５’−Ｔｅｇ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＨ（例９ａに従って調製された）の試料（１０８ｎモル）を、例８ａから得られたＡｂ−Ｍ（マレイミドの導入されたＩＮＧ−１；１８ｎモル）の溶液中にＮＡＰ−２５カラムからＰＢＳを用いて直接溶出した。混合後、反応を４ ℃にて２０時間進行させた。その後、（Amicon）へ導入し、１０００ｇで２５分間遠心分離した。試料を新しいＰＢＳ中に再懸濁し、２６０nmと２８０nmでの光学密度（optical densities）の比率が一定になるまで遠心分離による限外濾過濃縮をさらに３度繰り返した。最終生成物はＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’ −Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇである。（１０ｂ）抗体−マレイミドと５’−ＨＳＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂（ＮＨ₂＝）Ｃ−ＮＨ −Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−Ｔｅｇ−３’の複合体形成；ＩＮＧ−１−マレイミド−５’−Ｓ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−Ｔｅｇ−３’ 例９ｂに従って調製された５’−ＨＳＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂（ＮＨ₂ ⁺＝）Ｃ−ＮＨ −Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−Ｔｅｇの試料（１０８ｎモル）を、例８ａのようにしてマレイミドの導入された１８ｎモルのＩＮＧ−１と複合体を形成させ、ＩＮＧ−１−マレイミド−５’−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）ＮＨ−Ｌ−ｄ（Ｉ −Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを得た。（１０ｃ）ＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）複合体の分析例１０（ａ）及び（１０ｂ）のＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）試料の各光学密度を２６０nmと２８０n mにおいて分光光度計で測定した。これらの２つの波長での光学密度の比を計算し、これらの波長のそれぞれにおける抗体およびＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（分子量約１６５００）に対する既知の消光係数（extinction coe fficients）を用いることにより、Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレチド分子、Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）の数を、抗体あたり１から２の間のＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）であると見積った。複合体溶液内でのＩＮＧ−１の濃度を、標準タンパクとしてウシ免疫グロブリンを用いてバイオラドタンパク質分析（BioRad protein assay）により決定した。複合体を形成させたＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）に起因する吸光度に対して複合体の光学密度を補正すると、これらのデータは、２８０nmでの複合体の光学密度を測定することにより決定された抗体濃度とよく一致した。抗体−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）複合体を酸消化とアミノ酸分析にかけることにより、これらの２組のデータをさらに確認した。抗体−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）複合体を、ヒト腫瘍細胞系（この細胞系に対して抗体を生じさせる。）の表面上の抗原に結合するこれらの能力に対して試験した。複合体の免疫反応性を、フローサイトメトリー（flow cytometry）により、修飾及びＬ−ｄ（Ｉ −Ｑ_I−Ｉ）への複合体形成を受ける前の抗体の標準調製物と比較した。標的のＨＴ２９細胞（ヒト腺癌細胞系:ATTC）を、組織培養フラスコ内で１０％胎児ウシ血清を添加したＭｃＣｏｙの培地を用いて細胞培養フラスコ内で群集的（conf luency）に成長させた。細胞を、細胞スクレイパー（cell scraper）を用いてフラスコ壁からかき落として回収した。多くの別々のフラスコから細胞を集め、ペレットになるまで遠心分離し、０．１％ウシ血清アルブミン（Sigma）と０．０２％アジ化ナトリウムを添加した１５０mM塩化ナトリウム緩衝液ｐＨ７．４（ＰＢＳ）（フロー緩衝液）を有する氷冷５０mMリン酸ナトリウム溶液内で５×１０⁵ /mLで再懸濁した。細胞を、同じ緩衝液中で洗浄し、次いで計数した。抗体の標準曲線を、関連性のない（非結合性の）アイソタイプに適合した対照抗体（ヒトＩｇＧ₁）を用いてＩＮＧ−１の保存溶液を希釈することによって構築し、ＩＮＧ−１の含量が１０％から１００％までの範囲にある多くの試料を得た。標準曲線を、それぞれの試料が１mLあたり１．０mgの抗体タンパク質を含むようにフロー緩衝液中で作製した。その後、標準曲線より得た試料および未知試料を５×１０⁵のＨＴ２９細胞を用いて４℃で１時間インキュベートした。未結合の抗体を除くために入念に洗浄した後、細胞を１００μｌのフロー緩衝液に再懸濁し、蛍光性イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を用いて標識されたヤギ−抗−ヒト抗体と４℃で１時間インキュベートした。フロー緩衝液でさらに洗浄した後、試料をコールターＥＰＩＣＳ７５３フローサイトメーター（ Coulter EPICS 753 flow cytometer）でフローサイトメトリーにより分析した。蛍光性イソシアナイトからの蛍光（ＦＩＴＣ）とヨウ化プロピジウム（ＰＩ）からの蛍光をアルゴンレーザーの４８８nmの発光線（emiss-ion line）を用いて励起した。出力を光調節モードにおいて５００mWにセットした。単一の細胞を９０ °及び前方の角度の光散乱により同定した。集合体や細胞残骸から単一の細胞を分離するために分析ウインドウ（analysis windows）をこれらのパラメーターに適用した。ＦＩＴＣとプロピジウム（propidium）に起因する蛍光を、５５０nm ロングパス二色性フィルター（long pass dichroic filter）を用いて分離し、５３０nmバンドパスフィルター（band pass filter）（ＦＩＴＣに対して）と６３５nmバンドパスフィルター（ＰＩに対して）を通して集めた。光散乱パラメーターは積算されたパルス（integrated pulses）として集められ、蛍光は対数積算されたパルス（log integrated pulses）として集められた。死細胞はＰＩの取り込みに対して陰性の細胞に分析ウインドウを据えることにより分析から除外された。試料あたりの平均蛍光（２５００細胞からの加重平均）を、それぞれのヒストグラムに対して算出した。ＦＩＴＣの目盛り用ビーズ（calibration bead s）をそれぞれの実験において分析し、蛍光標準曲線を確立した。次いで、それぞれの試料に対する平均蛍光強度を細胞あたりの平均ＦＩＴＣ等量として示した。免疫反応性を、未知の試料の平均蛍光強度と標準曲線からの値とを比較することにより算出した。免疫反応性分析から、ＩＮＧ −１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’Ｌ−ｄ（Ｉ− Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇは、ＩＮＧ−１標準と同程度の約２／３の免疫反応性があり、ＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−５ ’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇは約４／５の免疫反応性を示した。別の一連の実験において、ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）（３’複合体）とＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）（５’複合体）の免疫反応性を決定した。これらの複合体の試料はまた、それらの見かけの分子量及び調製物の不均一性を評価するために、ＳＤＳ緩衝液を用いてノベクス（Novex）６％ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動にかけられた。同じゲル上で泳動された既知の分子量をもつ標準を用いて、移動した距離（Ｒ_f）と分子量の対数との間で標準曲線を作製した。この標準曲線から、それぞれの複合体調製物に関連したバンドの相対分子量を決定した。ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）及びＩＮＧ−１抗体のＳＤＳＰＡＧＥゲルにより、ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）複合体の分子量は抗体のみのそれよりも大きいことが示された。（１０ｄ）メルカプトアルキル−抗体とＴｅｇ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ） −３’−マレイミドの複合体形成２０ｎモルのＴｅｇ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−マレイミド（例９ｃからのもの）をＰＢＳｐＨ７中で５ｎモルのメルカプトアルキル−ＩＮＧ−１（例８ｂからのもの）と反応させた。混合後、反応を４℃で１６時間続け、ＩＮＧ−１−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂−Ｓ− マレイミド−３’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇを得た。反応混合物続いて１０００ｇで２５分間遠心分離した。試料を新鮮なＰＢＳに再懸濁し、２６０nmと２８０nmでの光学密度の比が一定になるまでこの一連の遠心分離による濃縮をさらに３回繰り返した。同様の方法でマレイミド−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇをメルカプトアルキル−ＩＮＧ−１と反応させ、ＩＮＧ−１−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂− Ｓ−マレイミド−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを得た。（１０ｅ）抗体−マレイミドとＴｅｇ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’− ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ₂−ＳＨの複合体形成ＰＢＳ中の６ｎモルのＩＮＧ−１−マレイミド（例８ａからのもの）試料を４０ｎモルのＴｅｇ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ₂− ＳＨ（例９ｅからのもの）と４℃で１６時間反応させた。反応物をＰＢＳを用いて希釈し、ＰＤ−１０カラムからＰＢＳ中に溶出させ、ＩＮＧ−１−マレイミド −Ｓ−ＣＨ₂−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−３’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’Ｔｅｇを得た。生成物の遠心分離で濃縮した。試料を新しいＰＢＳに再懸濁し、２６０nmと２８０nmでの光学密度の比が一定になるまでこの手順ををさらに３回繰り返した。同様の方法で、ＨＳ−ＣＨ₂−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＴｅｇをＩＮＧ−１−マレイミドと反応させ、ＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−ＣＨ₂−（Ｏ＝）Ｃ−ＮＨ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを得た。これらの試料の光学密度を２６０nmと２８０nmにて分光光度計で測定した。次に、これらの２つの波長の光学密度の比を算出した。これらの波長のそれぞれで、抗体とＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（分子量約１６５００）についての既知の消光係数を用いることにより、抗体あたりのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド分子の数を評価した。（１０ｆ）抗体−マレイミド、Ａｂ−Ｍと５’−トリチル−（Ｓ）−Ｌ−ｄ（Ｉ −Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂の複合体形成例２ｃから得た５’−トリチル（Ｓ）−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−ＮＨ₂ の試料（１０ｎモル）をＰＢＳに希釈し、硝酸銀水溶液を最終濃度８５mMになるまで加えた。ボルテックスの後、反応を３０分間室温で進行させた。遠心分離により、沈殿をチューブの底に形成させた。５’末端にチオール基をもち、５’トリチル基をもたないＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（ＨＳ−５’− Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）−３’−ＮＨ₂）を含有する透明な上清液を、使用するまで４℃に維持した。ＰＢＳ中の６ｎモルのＩＮＧ−１−マレイミド（例８ａから）の試料を４０ｎモルのＨＳ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇと４℃にて１６時間反応させた。反応物をＰＢＳで希釈し、前洗浄したエコノパック（Econopac）１０６−ＤＧカラム（BioRad）から４mLで溶出し、ＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ− ５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇを得た。生成物を１０００ｇ、２５分間の遠心を新しいＰＢＳに再懸濁し、２６０nmと２８０nmでの光学密度の比が一定になるまで遠心分離による濃縮をさらに３回繰り返した。これらの試料の光学密度を２６０nmと２８０nmで分光光度計で測定した。これらの２つの波長の光学密度の比を算出し、抗体とＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド（分子量約１６５００）に対する既知の消光係数を用いることにより、これらの波長のおのおのにおける抗体あたりのオリゴヌクレオチド分子の数を評価した。例１１（１１ａ）ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）に対するＬ−ｄ（ｃＩ）のアニーリング例１０ａに従って調製されたＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇ（２４ピコモル）の試料と、例１０ｄに従って調製されたＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−５’Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−３’−Ｔｅｇ（２５ピコモル）の試料を、１．０ｍＭＥＤＴＡおよび１００ｍＭＮａＣｌを含む５０ｍＭＰＢＳ、ｐＨ７．２中、室温にて、例３ｃで得た１６倍過剰のＬ−ｄ（ｃＩ）とセパレートキュベット中で混合した。キュベットを２０℃に冷却して、キャリー１３装置に入れ、キュベット温度を２０℃から８０℃まで上昇させ、次いで０．５℃／分の速度で２０℃に戻される間中、ＵＶ光（２６０ｎｍ）によって吸光度を分析した。データの分析は、ｃＩが３’および５’複合体の両方にハイブリダイズでき、各々と３三成分のコンプレックスを形成しうることを示していた。ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ（例６から）を使用した同様の実験により、ＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’− Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇに対するＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴのアニーリングが示された。（１１ｂ）リン酸バッファーおよびヒト血清中での、⁹⁰Ｙ− ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙまたは⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙの何れかへのＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）のハイブリダイゼイションＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’−Ｌ −ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇ（４ｕｌ；１mg抗体／ml）溶液（例１０ａから）および例９ａから得た５０マイクロＬの⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）− ＴＭＴ−⁹⁰Ｙ溶液を、新たに調製されたヒト血清（２００mL）あるいはＰＢＳ（２００mL；ｐＨ７．２）と混合し、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、アリコートを８から１６％ゲル上でＳＤＳＰＡＧＥ電気泳動にかけた。ゲルをオートラジオグラフィーおよびフォスフォイメージシステムの両方を使って検査し、⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙが、ヒト血清、並びにリン酸バッファー溶液（ｐＨ７．２）中でＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）とハイブリダイズできることが示された。試料をＰＢＳ中および血清中で１４日間室温にて放置し、８から１６％ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行うことにより、相互におよび３７℃で２時間インキュベートされたゲルに対して同様のパターンを得た。このことは、複合体が２週間まで血清中で安定であったことを示している。例９で得られた⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（Ｉ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙは予測されたようにいずれの時においてもＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）ハイブリダイゼイションを示すことはなかった。（１１ｃ）ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）に対する⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰ＹのハイブリダイゼイションＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’Ｌ− ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇ（４ｕｌ；１mg／ml；例１０ａから）および５０μｌの⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙ（例９ａから）の溶液をＰＢＳ（２００ｕｌ；ｐＨ７．２）中で混合し、６０分間３７℃でインキュベートした。次いで、これらの混合物のアリコートを８から１６％ゲルでＳＤＳＰＡＧＥ電気泳動にかけた。該ゲルをフォスフォイメージャーシステムでオートラジオグラフィーを行い、⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰ＹをＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）とハイブリダイズできることが示された。（１１ｄ）ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）とハイブリダイズしたＴＭＴ− ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ上のＴＭＴを検出するためのウエスタンブロッティング例２ａで得られたＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）あるいは例１０ａで得られたＩＮＧ −１−マレイミド−３’−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−Ｌ−ｄ（I −Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇのサンプルを、例６で得られたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドＴＭＴ複合体、ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴと混合した。各反応混合物を１０分間氷上に保持した。これらの反応混合物のアリコートをＳＤＳバッファーと混合し、２枚の同一の８から１６％ポリアクリルアミドゲルに導入した。ゲルを２時間定電圧で電気泳動にかけた。１枚のゲルを、製造者のプロトコール（Hoefer セミドライ転写法）に従って２０分間ＣＡＰＳバッファーを用いてニトロセルロース紙上に電気ブロットした。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０のＰＢＳ溶液で３回洗浄した後、ゲルを１時間室温で、３％ＢＳＡのＰＢＳ溶液でブロックした。続いてＴｗｅｅｎ／ＰＢＳでさらに洗浄し、ゲルをネズミ抗−ＴＭＴ抗体溶液（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中に１０mg/ml）でオーバーレイし（overlaid）、室温で一晩放置した。ウエスタンブロットを、西洋わさびペルオキシダーゼに接合されたヤギ抗−マウスＩｇＧ抗体（バイオラドウェスタンブロットキット）およびパーオキシダーゼ基質を使って行った。ブロットにより、ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴがＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）あるいはＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）のいずれかを含むバンドにハイブリダイズされたＴＭＴを介して検出できることが示された。２枚目のゲルを、エチジウムブロマイド（蒸留水中に５mg/ml）で染色した。ＵＶ光の下で、染色されたゲルを試験することにより、再びハイブリゼイションが示された。例１２直接の複合体形成（ＩＮＧ−１／ＴＭＴ）によるＡｂ−ＴＭＴの調製ＴＭＴ−ＮＣＳ（あるいはそれらの適切な誘導体）は、抗体分子と複合体を形成でき、抗体可変領域によって認識される標的抗原に結合する能力を示す抗体− ＴＭＴ複合体分子が生じる。この様な複合体分子は、この様な免疫複合体によって標的とされる病巣に局在化および／またはこれを治療するために、ＴＭＴ部分によってキレートされる金属イオンを運ぶために使うことができる。一つの好ましい態様では、該抗体が、腫瘍細胞上で発現される抗体分子と広い反応性を持つように選択され、これによって治療あるいは診断をするという目的のために、腫瘍に金属を運ぶことができる抗体−ＴＭＴ複合体が提供せれる。キメラ抗体、ＩＮＧ−１は、（国際特許公開ＷＯ９０／０２５６９）ネズミ可変領域およびヒト免疫グロブリン不変領域からなる。抗体は、上記参照文献に開示されているように、キメラ抗体を基本的に発現するネズミミエローマ細胞系を培養することによって生産される。精製後、ＩＮＧ−１は５０ｍＭ酢酸ナトリウムおよび１５０ mM塩化ナトリウムバッファー、ｐＨ５．６中で５．０mg/mLの濃度で使用される。ＴＭＴ−ＮＣＳとＩＮＧ−１との複合体形成は、抗体溶液がｐＨ９．０に達するまで、ＩＮＧ−１に１．０Ｍ炭酸塩、１５０mM塩化ナトリウムバッファーｐＨ９．３を最初に添加することにより達成される。次いで、５mgのタンパクを含んでいるＩＮＧ−１溶液の試料を、酸で洗浄した円錐形（conical）のガラス反応バイアル中にピペットで加えた。ＴＭＴ−ＮＣＳ溶液を、１０mLの１．０Ｍ炭酸塩、１５０mM 塩化ナトリウムバッファー、ｐＨ９．０中に、１００ｍｇ溶解することによって調製した。複合体形成反応は、抗体に９６．５mLのＴＭＴ−ＮＣＳ溶液を添加し、ＩＮＧ−１に対し４倍モル過剰のＴＭＴ−ＮＣＳを供給することによって開始した。この溶液を手短に撹拌して反応物を混合し、次いで室温で暗所に放置した。１６時間後、１５０mM塩化ナトリウムバッファー、ｐＨ５．６中において５０ mM酢酸ナトリウムで予備洗浄され、平衡化されているＰＤ１０クロマトグラフィーカラムを反応混合液に適用することによって、複合体を形成していないＴＭＴからＩＮＧ−１／ＴＭＴ複合体を分離した。純粋な複合体は同様のバッファー２．５mLを用いカラムから溶出される。例１３ＩＮＧ−１／ＴＭＴ複合体の分析試験（１５ａ）抗体に対するキレーター（chelator）比の分析複合体溶液中のＩＮＧ−１のタンパク濃度を、標準タンパクとしてウシ免疫グロブリンを用いたバイオラドタンパク測定法によって決定した。抗体あたりの機能性ＴＭＴ分子の数を計算するために、ＴＭＴの金属を結合する容量が飽和するまで、塩化ユーロピウム溶液を反応させた。０．０５ＭトリスＨＣｌバッファーｐＨ７．５中において２．５mlのＩＮＧ−１／ＴＭＴの０．３７５mgアリコートを、５mlの水晶キュベット中にピペットで取り出した。０．０５ＭトリスＨＣｌバッファーｐＨ７．５中で２０mM塩化ユーロピウム（塩化ユーロピウム６水和物、アルドリッチ）溶液を調製した。この塩化ユーロピウム溶液のアリコート（５０mL）をＩＮＧ−１／ＴＭＴを含んでいるキュベットに添加し、得られた液体を、キュベット中に置かれた小さな磁気撹拌棒を用いて、１０分間室温で磁気撹拌器でゆっくりと撹拌した。金属−ＩＮＧ−１／ＴＭＴコンプレックスの蛍光を、３４０nmの励起波長を用いてパーキンエルマーＬＳ５０蛍光光度計で決定した（１０nmスリット幅）。蛍光発光を、１０nmスリット幅で４３０nm除去フィルターを用いて６１８nmでモニターした。上記の方法を繰り返し、蛍光の読取りを各々の添加の後行った。塩化ユーロピウムのアリコートを、蛍光強度の増加が前の読取り値の５％以下になるまで添加した。試験溶液の容量の変化を補正するために、希釈の補正を各々のモル比で測定された蛍光強度に対して行った。ＩＮＧ−１／ＴＭＴ複合体上の各々のキレート部位は１つのユーロピウムイオンに結合するため、およびユーロピウムイオンは蛍光が発生するキレート部位に存在しなければならないため、この方法により機能的なキレート部位の数を定量化できる。この方法を使用すると、抗体分子あたりのＴＭＴ分子比は０．３：１から２：１の範囲である。（１３ｂ）ＥＬＩＳＡによるＩＮＧ−１／ＴＭＴ免疫反応性測定抗体、ＩＮＧ−１が結合する抗原を、細胞スクレーパーで培養フラスコの壁から、集密した単層の細胞を集めることによってＬＳ１７４ＴあるいはＨＴ２９細胞（アメリカンタイプティッシュコレクション、ＡＴＴＣから入手）から調製した。多数のフラスコの細胞を一緒にし、サンプルを取り出し、計数して、集めた細胞の総数を決定した。このあいだ中、細胞を氷上に保存した。続いて４℃で１０分間１５００rpmで細胞を遠心し、該細胞を氷冷した１５０mM塩化ナトリウムを添加した氷冷の５０mMリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．４（ＰＢＳ）の２５mLで一度洗浄し、同様の条件下でペレット化し、氷冷したガラスモルタルへ１０mLＰＢＳで移した。細胞をモーター駆動ペッスルを使用して４℃でホモジナイズし、次いで５分間３０００×ｇで遠心した。抗原が豊富な上清を、他の細胞破砕物から除去し、４℃で一時間１００，０００×ｇでさらに遠心した。この最終段階からのペレット（抗原分画）を、集められた１００万細胞ごとにＰＢＳ１００mL中に懸濁した。続いてタンパク濃度を評価し（標準タンパクとしてウシ免疫グロブリンを使用するバイオラドＢＣＡタンパク測定法）、抗原を使用するまで−２０℃で保管した。９６ウェルコースターミクロタイタープレートの各々のウェルを、上述したように調整された１００mL／ウェルの細胞溶解物（１０mg/ml）を添加することによって抗原でコートした。ミクロタイタープレートを３７℃のインキュベーターで一晩乾燥した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（シグマ）でプレートを５回洗浄した後、それらをブロッティングして乾燥した。各々のプレートのウェルをＰＢＳ中の１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、シグマＡ−７９０６）溶液の１２５mL／ウェルを添加することによってブロックし、室温で１時間インキュベートした。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で５回洗浄した。ＩＮＧ−１／ＴＭＴ複合体試料（同じものを２つ、５０mL／ウェル）および標準ＩＮＧ−１抗体溶液を１％ＢＳＡのＰＢＳ中で所定の濃度範囲で調製した。ビオチン化したＩＮＧ−１（０．１％ＢＳＡ中で１．０mg/mL）を各々のウェル（５０mL／ウェル）に添加し、次いでプレートを室温で２時間インキュベートした。続いて０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で５回洗浄し、該プレートをブロッティングして乾燥し、希釈された（０．１％ＢＳＡ中で１：２０００）ストレプトアビジン−アルカリ性ホスファターゼ（ターゴ；＃６５６７）を用いて１時間室温でインキュベートした。さらに５回洗浄した後、ホスファターゼ基質試薬（シグマ）を一ウェルあたり１００mL添加することによって各々のウェルで発色させた。室温にて一時間後、色をタイターテックマルチスキャンミクロプレートリーダーで４０５nmフイルターを用いて記録した。この方法によって試験したとき、ＴＭＴとＩＮＧ−１の免疫複合体は本来のＩＮＧ−１と比較して免疫反応性を持つことが見出された。（１３ｃ）フローサイトメトリーによるＩＮＧ−１／ＴＭＴ免疫反応性測定標的ＨＴ２９細胞を１０％胎児ウシ血清を添加されたマッコイの培地を用いて組織培養フラスコ中で集密するまで育成した。該細胞を細胞スクレーパーでフラスコ壁をこすることによって集めた。多数の別々のフラスコから細胞を集め、ペレット化するまで遠心し、０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ）および０．０２％アジ化ナトリウム（フローバッファー）を添加した１５０ｍＭ塩化ナトリウムを有する５０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ７．４（ＰＢＳ）の氷冷溶液に５×１０⁵／mLで再懸濁した。該細胞をこれと同じバッファーで洗浄し、次いで計数した。抗体標準曲線を、無関係な（非結合）、アイソタイプが一致した対照抗体（ヒトＩｇＧ₁）でＩＮＧ−１を希釈することにより作製し、ＩＮＧ−１含有量が１０％から１００％の範囲である沢山の試料を得た。標準曲線は、各々の試料が１mLあたり１．０mgを含むようにフローバッファー中で作成される。次いで、標準曲線および未知の試料を、１時間４℃で５× １０⁵のＨＴ２９細胞とインキュベートした。未結合の抗体を除くため念入りに洗浄した後、該細胞を１００mLフローバッファーに再懸濁し、蛍光性イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）でラベルしたヤギ−抗−ヒト抗体で１時間４℃でインキュベートした。フローバッファーで更に洗浄した後、試料をコールターＥＰＩＣＳ７５３フローサイトメーターを用いフローサイトメトリーによって分析した。蛍光性ＦＩＴＣおよびプロピジウムアイオダイド（ＰＩ）をアルゴンレーザーの４８８nmの発光線を用いて励起した。出力を明調節（light regulation）モードの５００mWにセットした。単一の細胞を９０度および前方の角度の光散乱によって同定した。凝集および細胞破砕物から単一の細胞を分離するために、これらのパラメーターに分析ウインドウを適用した。ＦＩＴＣおよびプロピジウムからの蛍光を５５０nmロングパス２色性フィルターで分離し、５３０nmバンドパスフィルター（ＦＩＴＣ）および６３５nmバンドパスフィルター（ＰＩ）を通して集めた。ライトスキャッターパラメーターを積算された信号として集め、蛍光を対数積算された信号として集めた。死んだ細胞をＰＩ取り込み陰性細胞に対する分析ウインドウをおくことによって測定から除いた。試料あたりの平均蛍光を（２５００細胞からの加重平均）各々のヒストグラムから計算した。ＦＩＴＣの目盛り用ビーズを各々の実験で分析し、標準曲線を確立した。次に、各々の試料に対する平均螢光強度を細胞あたりの平均ＦＩＴＣ等量として表した。免疫反応性は、未知試料の平均蛍光強度と標準曲線からの値を比較することによって計算される。ＩＮＧ−１／ＴＭＴの試料はこの方法によって本来のＩＮＧ−１抗体と比較しうる免疫反応性の値を有する。（１３ｄ）分子ふるいＨＰＬＣによる凝集形成の決定同じ材料のガードカラムを備えた３０cm×７．５mmのＴＳＫ−Ｇ３０００ＳＷ分子ふるい（size-exclusion）ＨＰＬＣカラム（スペルコ）を、４００〜６００ＰＳＩで１分あたり１．０mlの流速で、ウォータース６００ＥＨＰＬＣ系を用い１５０mM塩化ナトリウムを添加した１０mMリン酸ナトリウムバッファーにより１２倍のカラム容量で平衡化した。バイオラドゲル濾過タンパク標準の試料（２５mL）をカラム上に注入した。各々の標準の保持時間を２８０nmにセットされたウォータース４９０ＵＶ検出器によってモニターした。続いてカラムから最後の標準を回収し、カラムを１５０mM 塩化ナトリウムを添加した１０mMリン酸ナトリウムバッファーｐＨ６．０の１０倍容量でさらに洗浄した。２００mg/mLの、本来のＩＮＧ−１抗体あるいはＩＮＧ−１／ＴＭＴの試料（５０mL）をカラムに注入し、保持時間を記録した。保持ピークの面積および保持時間から、ＩＮＧ−１／ＴＭＴ試料中の凝集物質の量が計算された。この方法によると、本来のＩＮＧ−１抗体は９．１分の保持時間である。ＩＮＧ−１／ＴＭＴは、９．１分での主要ピークも持っているが、凝集に起因するマイナーなピークが、７．３分にも時々観察される。ピーク面積の比較によって、該凝集ピークは全体の５％以下である。（１３ｅ）⁹⁰ＹによるＩＮＧ−１／ＴＭＴの放射ラベル化放射性塩化イットリウムの所定容量を（比活性＞５００Ci/mgで０．０４Ｍ塩化水素酸中⁹⁰Ｙ）、２倍容量の０．５Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ６．０を用いて中和した。該中和した⁹⁰Ｙ（１．０mCi）を、１５０mM塩化ナトリウムを含む５０mM 酢酸ナトリウムバッファーｐＨ５．６中のＩＮＧ−１／ＴＭＴ（１mg/mL）１．０mLに添加した。標識化を一時間行ない、次いで反応混物を、１５０mM塩化ナトリウムを有する５０mMリン酸ナトリウムｐＨ７．４（ＰＢＳ）を含むバッファーで予備洗浄され、平衡化されたＰＤ−１０クロマトグラフィーカラムに導入した。該試料を１．５mLのＰＢＳでカラムから溶出した。放射性標識されたＩＮＧ −１／ＴＭＴの分画を（０．５mL）集め、放射活性を測定し、貯蔵した。１．０ mLの試料を取り、ゲルマンＩＴＬＣ−ＳＧ紙片上にそれをスポットすることによって標識化効率を決定した。紙片は０．１Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ６．０を含むガラスビーカー中で、数分間、溶媒の先端が紙の先端に対して四分の三に達するまで展開された。紙片を⁹⁰Ｙに対して最適化され、コンパック３８６／２０ｅコンピューターによってコントロールされているシステム２００イメージスキャナー（バイオスキャン）中に挿入した。この系では遊離の⁹⁰Ｙは溶媒の先頭に移動し、一方ＩＮＧ−１／ＴＭＴ（⁹⁰Ｙ）は原点に残っている。この系の使用によって、全⁹⁰Ｙ放射活性の９８％以上が原点で、ＩＮＧ−１／ＴＭＴと関係していることが通常見出される。（１３ｆ）蛍光性金属によるＩＮＧ−１／ＴＭＴのラベル化配位領域に接近して保持された芳香族部分を含有するキレート剤にユーロピウム（３⁺）のようなランタニドを結合することによって「増感された」蛍光がもたらされる。この場合、光が、芳香族系を介して吸収され、このエネルギーが金属に移動する。次いで該金属は、非常に大きいストークスシフトおよび数秒までの蛍光寿命によって特徴付けられる発光を起こす。０．０５ＭトリスＨＣｌバッファーｐＨ７．５中の２．５mLのＩＮＧ−１／ＴＭＴの０．５mgアリコートを、小さな撹拌棒を含む４mlの円錐型反応バイアル中にピペットで加えた。０．０５ＭトリスＨＣｌバッファーｐＨ７．５中の２５０mM塩化ユーロピウム（塩化ユーロピウム６水和物：アルドリッチ）溶液を調製した。この塩化ユーロピウム溶液のアリコート（５０ mL）を、ＩＮＧ−１／ＴＭＴを含む反応バイアルに添加し、得られた溶液を室温でマグネチックスターラーで非常にゆっくりと攪拌した。標識化を１時間実施し、次いで反応混合物を、１０mMリン酸ナトリウムおよび１５０mM塩化ナトリウムｐＨ６．０（ＰＢＳ）を含むバッファーで予備洗浄され、平衡化されたＰＤ−１０クロマトグラフィーカラムに導入した。試料を３．５mLＰＢＳでカラムから溶出した。金属−ＩＮＧ−１／ＴＭＴコンプレックスの５０mL試料の蛍光を、３４０nmの励起波長（１０nmスリット幅）を用いてパーキンエルマーＬＳ５０蛍光光度計で決定した。蛍光発光を１０nmスリット幅および４３０nm除去フィルターを用いた６１８nmで記録した。ＩＮＧ−１／ＴＭＴ複合体上の各機能性キレート部位が１つのユーロピウムイオンと結合した。この方法を使って、０．１から３の間の蛍光ユーロピウムイオンが抗体１分子あたりに結合された。例１４（１４ａ）ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）で処理された細胞への蛍光Ｌ− ｄ（ｃＩ）の結合のフローサイトメトリーＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’−Ｌ −ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’Ｔｅｇを例１０ａのように調製した。ＩＮＧ−１− マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−５’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）−３’−Ｔｅｇを例１０ｂのように調製した。蛍光標識されたＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）を例２ｄのように調製した。蛍光標識されたＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（ｃＩ）およびはＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（Ｉ）を例３ｅのように調製した。蛍光色素ＣＹ５．１８をＦＩＴＣに置き換えて使用した以外は、フローサイトメトリーを、本質的に１２ｃに記載したように行った。ＨＴ−２９細胞を（０．５×１０⁶）ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）試料の各々１mgと共に３０分間氷上でインキュベートした。細胞をフローバッファーで２回洗浄し、洗浄する間に１４００ｒｐｍ×５分でペレット化した。次に、各々の試料中の細胞を、５mgＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（ｃＩ）あるいはＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（Ｉ）を用いて３時間氷上でインキュベートした。いくつかの細胞をＣＹ５．１８−Ｌ− ｄ（ｃＩ）およびＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（Ｉ）単独でインキュベートした。フローバッファーで丹念に洗浄した後、細胞を蛍光活性化セルソーターで分析にかけた。ＣＹ５−１８の目盛り用ビーズ（calibration beads）を分析し、相対的な蛍光強度に対するＣＹ５−１８の標準曲線を確立した。試料当りの平均蛍光（２５００細胞からの加重平均）を各々のヒストグラムに対して計算した。次に、各々の試料に対する平均蛍光強度を、細胞当りの平均ＣＹ５−１８等量として表わした。フローバッファーの変わりに１００％胎児ウシ血清を成分とする培地を、細胞をインキュベートするために使用して同様な実験を行った。予備実験により、ＨＴ−２９細胞の表面でのＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）−５’−Ｔｅｇに対するＣＹ５−１８Ｌ−ｄ（ｃＩ）のハイブリダイゼイションを最大にするための時間は約３時間である。各々の調製物におけるハイブリダゼイションの程度には、フローバッファーと１００％ＦＣＳの間には差がなく、このことは、末端がキャッピングされたＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド鎖がヌクレアーゼ消化に対して安定であることを示唆している。多量のＣＹ５．１８−Ｌ−ｄ（ｃＩ）は、細胞表面に結合された両方の複合体にハイブリダイズできる。蛍光性Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドそれ自身によるか、または複合体に対するＣＹ５−１８−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）のハイブリダイゼイションによる該細胞への非特異的結合は相対的に小さかった。（１４ｂ）ＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）で処理されたＨＴ−２９細胞への⁹⁰Ｙ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙの結合ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴを例７に開示されたように０．１mCi／ｐモルの比活性に標識化した。ＩＮＧ−１−ＴＭＴ−⁹⁰Ｙを例１３ｅのように調製した。ＩＮＧ−１−マレイミド−Ｓ−（ＣＨ₂）₃−Ｃ（＝ＮＨ₂ ⁺）−ＮＨ−３’−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I− Ｉ）−５’−Ｔｅｇを例１０ａのように調製した。１０％胎児ウシ血清を添加したＤＭＥＭ培地中に、各々１×１０⁵ＨＴ−２９細胞を含む３つのチューブを調製し、全体に渡って４℃で保管した。添加された抗体の量が等しくなることを保証するために、すべてのチューブに一致したタンパク濃度を使用し、チューブを以下の表１に示されるように処理した。試料１および試料３は、細胞ペレットに関係した放射活性が、試料２（直接に標識されたＩＮＧ−１−ＴＭＴ⁹⁰Ｙ）よりも高いことを示し、このことは２つの別々の成分からなる輸送システムが、直接に標識化された抗体よりも、多く放射活性を運ぶことができることを示唆している。（１４ｃ）ＨＴ−２９細胞およびＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ− Ｑ_I−Ｉ）で処理されたＨＴ−２９細胞へのユーロピウムで標識されたＩＮＧ− １／ＴＭＴおよびＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴのそれぞれの結合ＴＭＴ−Ｌ−（ｃＩ）−ＴＭＴ複合体を例６ａで説明したようにユーロピウムイオンで標識し、ＩＮＧ−１／ＴＭＴを例１３ｆで説明したようにユーロピウムイオンで標識した。標準曲線を、１００ピコモル／１００マイクロＬから６フェムトモル／１００マイクロＬの濃度範囲で両方の複合体に対して作成した。ＨＴ −２９細胞を、１０％ＦＣＳおよび５０マイクログラム／mlのゲンタマイシンを含むマッコイ培地中で集密するまで成育した。該細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、５mlトリプシンベルセン（Trypsin Versene）を添加した。次いで、ＨＴ−２９細胞を１５分間５％ＣＯ₂中で３７℃にてインキュベートし、完全培地（５ml）を添加し、細胞を除去し、ＰＢＳで洗浄した。次いで、ＨＴ−２９細胞を、３０分間４℃にて１０⁶細胞当たり１０マイクログラムの切断されたサケ精子（天然のＤ−エナンチオマー）ＤＮＡでブロックし、ＰＢＳで洗浄し、以下のようなハイブリダイゼイション測定に使用した。５×１０⁵のＨＴ−２９細胞を、Ｉｎｇ−１／ＴＭＴあるいはＩｎｇ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）の１００マイクロＬワーキング希釈に添加し、混合物を氷上で３０分間インキュベートした。細胞を５分間１４００ＲＰＭで洗浄バッファー（ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ₃）２mlで２回洗浄した。次いで、ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴのワーキング希釈（１００マイクロＬ）を適切なチューブに加え、反応混物を３時間氷上でインキュベートし、続いて５分間１４００ＲＰＭにおいて２mlの洗浄バッファー（ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ＋０．０１％ＮａＮ₃）で２回洗浄した。各々の結合実験を３回行った。上述の結合およびハイブリダイゼイションの後、細胞懸濁物を使用するまで試験管内で４℃にて保管した（１０分から１時間）。ボルテックスにかけた後、コースターＥＩＡ／ＲＩＡ９６ウェルプレートの別々のウェルの４か所に各チューブから１００マイクロＬアリコートを取ることによって、ユーロピウムの蛍光を、デルフィア１２３２時間解析フルオロメーターで測定した。この結果を例１５ｆに示したように加工した。Ｅｕ−ＴＭＴ−Ｌ− ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−Ｅｕで処理した細胞の１秒当りの計数（ｃｐｓ）をバックグラウンドとして考慮し、ハイブリダイゼイション実験からのｃｐｓデータから差し引いた（Ｅｕ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−Ｅｕ／Ｉｎｇ−１−Ｌ− ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ））。この結果およびＩｎｇ−１／ＴＭＴ−Ｅｕ結合実験からのｃｐｓデータを、独立に作成された個々の標準曲線からの細胞当りのピコモルの結合ＴＭＴ分子として解釈した。結果は１秒当りの蛍光計数（ｃｐｓ）あるいは１０⁵細胞当りのピコモルの数（＃）として示されている。５×１０⁵細胞当り、ＩＮＧ−１／ＴＭＴ−ＥｕおよびＩＮＧ−複合体：０．２５マイクログラムまたは１．６５ピコモル；Ｅｕ− ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−Ｅｕ：１００ｎｇあるいは１５ピコモル。ＩＮＧ−１−ＴＭＴおよびＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I− Ｉ）をそれぞれ形成するためのＴＭＴ、およびＬ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I−Ｉ）によるＩＮＧ−１の同程度の修飾をするために、後者においては、Ｅｕが添加され、ＩＮＧ−１／ＴＭＴからＩＮＧ−１／ＴＭＴ−Ｅｕを形成した場合、これに対して、Ｅｕ−ＴＭＴ−Ｌ−ｄ（ｃＩ）−ＴＭＴ−ＥｕがＩＮＧ−１−Ｌ−ｄ（Ｉ−Ｑ_I −Ｉ）に添加され、ハイブリッドを形成した場合のぞれぞれで、蛍光の増加若しくは増幅がみられた。本発明を、その幾つかの好ましい態様に特に関連させて詳細に説明した。しかし、本発明の意図および展望の範囲内で変更および修飾を行いうることが理解されるであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ブラック、クリストファー・ダグラス・バリアントアメリカ合衆国、メリーランド州 20906、シルバー・スプリング、アクエリアス・アベニュー 2815

Claims

【特許請求の範囲】１．腫瘍抗原を認識する部分、１以上の非自己会合性Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列、および１以上の結合基を具備した非放射性ターゲッティング免疫試薬。２．１以上のキレート剤、１以上の結合基、１以上の放射性核種、および非自己会合性Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列の１以上のフラグメントに、配列において相補的であり、該１以上のフラグメントとハイブリダイズできるＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチド配列を具備した放射性ターゲッティング免疫試薬。３．下記構造IVによって表される部分を具備したターゲッティング免疫試薬。但し、Ｚは、免疫反応性タンパクの残基である；Ｌ_zおよびＬ_Qは、独立に化学結合若しくは結合基である；Ｉは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドであって、前記隣接した配列が、同一の隣接した配列のファミリーの１以上のメンバーを含み、前記ファミリーの個々の同一物が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するものであるが、前記Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの６以上の隣接した配列が、構造IV内の何れの位置の六以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのいずれの他の隣接した配列ともハイブリダイズしないという条件がある；Ｑ_Iは、スペーシング基である；ａは、０または１から約６までの整数である；Ｉ_iは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列であって、該Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの該ユニット内の隣接した配列がＩの隣接した配列と同一であるものである；Ｅは、末端キャッピング基（end capping group）である；ｐは、１から約１０までの整数である。４．下記構造Ｖで表される部分を具備した放射性ターゲッティング試薬。但し、ｃＩは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの隣接した配列であって、前記隣接した配列が、同一の隣接した配列のファミリーの１以上のメンバーを含み、前記ファミリーの個々の同一物が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するものであり、前記同一物のＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列が、共に投与されうるターゲッティング免疫試薬内の一連のＬ− エナンチオメリックオリゴヌクレオチドのメンバーのＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列に相補的であり、前記相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの６以上のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列が、構造Ｖ内の何れの位置の六以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのいずれの他の隣接した配列ともハイブリダイズしないものである；Ｑ_cIは、スペーシング基である；Ｌ₁、Ｌ₂、およびＬ₃は、各々独立に化学結合若しくは結合基である；Ｗ₁、Ｗ₂、およびＷ₃は、各々独立にキレート基の残基である；Ｍ₁、Ｍ₂、およびＭ₃は、各々＋１と等しいか、またはこれより大きい酸化状態を有する元素を包含し、Ｍ₁、Ｍ₂、およびＭ₃の少なくとも１つが放射性核種である；ｘ、ｙ、およびｚは、独立にゼロまたは１であるが、ｘ、ｙ、およびｚの少なくとも１つが１であるという条件が付く；およびｗおよびｂは独立にゼロまたは１から約４の整数である。５．ａが１から約６の整数である請求の範囲第３項に記載の試薬。６．Ｚが抗体の残基または抗体フラグメントの残基である請求の範囲第３項に記載の試薬。７．請求の範囲第６項に記載の試薬であって、該抗体が、ＩＮＧ−１；Ｂ７２．３；９．２．２７；Ｄ６１２；ＵＪ１３Ａ；ＮＲＬＵ−１０；７Ｅ１１Ｃ５；ＣＣ４９；ＴＮＴ；ＰＲ１Ａ３；Ｂ１７４；Ｃ１７４；Ｂ４３；および抗ＨＬＢ抗体から選択される試薬。８．請求の範囲第３項に記載の試薬であって、Ｌ_zまたはＬ_Qが、異種二感応性交差結合試薬の残基である試薬。９．請求の範囲第８項に記載の試薬であって、該異種二感応性交差結合剤が、スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１− カルボキレート、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート、２−イミノチオラン、およびＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテートよりなる群から選択される試薬。１０．請求の範囲第３項に記載の試薬であって、Ｌ_zまたはＬ_Qが反応性官能基を具備する修飾されたヌクレオチド部分の残基である試薬。１１．請求の範囲第１０項に記載の試薬であって、該反応性官能基がアミン基およびスルフヒドリル基よりなる群から選択される試薬。１２．ＩおよびＩ_iがＬ−エナンチオメリックＤＮＡである請求の範囲第３項に記載の試薬。１３．Ｉが配列番号８で示される配列を有する請求の範囲第３項に記載の試薬。１４．Ｑ_IがＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの残基である請求の範囲第３項に記載の試薬。１５．Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドが配列L-d(ACTCTC)を有する請求の範囲第１４項に記載の試薬。１６．Ｅがエキソヌクレアーゼ活性に耐性な修飾されたヌクレオチド基の残基である請求の範囲第３項に記載の試薬。１７．該修飾されたヌクレオチドがポリ（アルキレングリコール）ホスフェートジエステルを具備した請求の範囲第１６項に記載の試薬。１８．請求の範囲第１７項に記載の試薬であって、該ジエステルがテトラ（エチレングリコール）ホスフェートジエステルである試薬。１９．ｃＩが配列番号２３で示される配列を有する請求の範囲第４項に記載の試薬。２０．Ｑ_IがＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの残基である請求の範囲第４項に記載の試薬。２１．該Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドが、配列L-d(ACTCTC)を有する請求の範囲第２０項に記載の試薬。２２．Ｌ₁、Ｌ₂またはＬ₃が、異種二感応性交差結合剤の残基である請求の範囲第４項に記載の試薬。２３．請求の範囲第２２項に記載の試薬であって、該異種二感応性交差結合剤が、スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン− １−カルボキレート、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート、２−イミノチオラン、およびＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテートよりなる群から選択される試薬。２４．Ｌ₁、Ｌ₂またはＬ₃が、反応性官能基を含有する修飾されたヌクレオチド部分の残基である請求の範囲第４項に記載の試薬。２５．請求の範囲第２４項に記載の試薬であって、該反応性官能基がアミン基およびスルフヒドリル基よりなる群から選択される試薬。２６．Ｗ₁、Ｗ₂またはＷ₃が独立にポリカルボン酸基を含有する請求の範囲第４項に記載の試薬。２７．請求の範囲第４項に記載の試薬であって、Ｗ₁、Ｗ₂またはＷ₃が、Ｂ４Ａ、Ｐ４Ａ、ＴＭＴ、ＤＣＤＴＰＡ、ＰｈｅＭＴ、マクロＰｈｅＭＴ、およびマクロＴＭＴよりなる群から独立に選択される試薬。２８．請求の範囲第４項に記載の試薬であって、該放射性核種が、⁴⁴Ｓｃ、⁶⁴ Ｃｕ、⁶⁷Ｃｕ、¹¹¹Ｉｎ、²¹²Ｐｂ、⁶⁸Ｇａ、⁸⁷Ｙ、⁹⁰Ｙ、¹⁵³Ｓｍ、²¹²Ｂｉ、⁹⁹ ^m Ｔｃ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁸⁶Ｒｅおよび¹⁸⁸Ｒｅから選択される試薬。２９．下記構造の化合物を製造する方法であって、但し、Ｚは、免疫反応性タンパクの残基である；Ｌ_zおよびＬ_Qは、独立に化学結合若しくは結合基である；Ｉは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列を含有するＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドであって、前記隣接した配列が、同一の隣接した配列のファミリーの１以上のメンバーを含み、前記ファミリーの個々の同一物が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するものであるが、前記Ｌ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの６以上の隣接した配列が、構造IV内の何れの位置の六以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのいずれの他の隣接した配列ともハイブリダイズしないという条件がある；Ｑ_Iは、スペーシング基である；ａは、１から約６までの整数である；Ｉ_iは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのＬ−エナンチオメリックヌクレオチドの隣接した配列であって、その内の隣接した配列がＩの一部を含有するものである；Ｅは、末端キャッピング基である；ｐは、１から約１０までの整数である。（ｉ）Ｌ_zの残基に対する前駆体を用いて、Ｚ−［Ｌ_z］_Pの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＺを派生する（deriva-tizing）こと；（ii）Ｌ_Qの残基に対する前駆体を用いて、Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＥの残基に対する前駆体を派生すること；（iii）Ｉ_iの残基に対する前駆体を用いて、Ｉ_i−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＬ_Q−Ｅの残基の前駆体を派生すること；（iv）Ｑ_Iの残基に対する前駆体を用いて、Ｑ_I−Ｉ_i−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＩ_i−Ｌ_Q−Ｅの残基の前駆体を派生すること；（ｖ）Ｉ_iの残基に対する前駆体、次いでＱ_Iの残基に対する前駆体を用いて、［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＱ_I−Ｉ_i−Ｌ_Q−Ｅの残基の前駆体を派生すること；（vi）Ｉの残基に対する前駆体を用いて、Ｉ−［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間で［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅの残基の前駆体を派生すること；（vii）Ｌ_zの残基に対する前駆体を用いて、Ｌ_z−Ｉ−［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＩ−［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体を派生すること；および（viii）Ｚ−［Ｌ_z］_pの残基に対する前駆体を用いて、共有結合性コンプレックスＺ−［Ｌ_z−Ｉ−［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅ］_pを形成するのに十分な条件下および時間でＬ_z−Ｉ−［Ｑ_I−Ｉ_i］_a−Ｌ_Q−Ｅの残基に対する前駆体を派生することを具備した方法。３０．下記構造の化合物を製造する方法であって、但し、ｃＩは、１２から約５０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの隣接した配列であって、前記隣接した配列が、同一の隣接した配列のファミリーの１以上のメンバーを含み、前記ファミリーの個々の同一物が１２から約３０のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットを含有するものであり、前記同一物のＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列が、共に投与されうるターゲッティング免疫試薬内の一連のＬ− エナンチオメリックオリゴヌクレオチドのメンバーのＬ−エナンチオメリックヌクレオチド配列に相補的であり、前記相補的なＬ−エナンチオメリックオリゴヌクレオチドの６以上のＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットの隣接した配列が、構造Ｖ内の何れの位置の六以上の隣接したＬ−エナンチオメリックヌクレオチドユニットのいずれの他の隣接した配列ともハイブリダイズしないものである；Ｑ_cIは、スペーシング基である；Ｌ₁、Ｌ₂、およびＬ₃は、各々独立に化学結合若しくは結合基である；Ｗ₁、Ｗ₂、およびＷ₃は、各々独立にキレート基の残基である；Ｍ₁、Ｍ₂、およびＭ₃は、各々＋１と等しいか、またはこれより大きい酸化状態を有する元素を包含し、Ｍ₁、Ｍ₂、およびＭ₃の少なくとも１つが放射性核種である；ｘ、ｙ、およびｚは、独立にゼロまたは１であるが、ｘ、ｙ、およびｚの少なくとも１つが１であるという条件が付く；およびｗおよびｂはにゼロまたは１から約４の整数である；（１）ｃＩの残基に対する前駆体を用いて、Ｌ₁−ｃＩの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＬ₁の残基に対する前駆体を派生（derivatizing）すること；（ii）Ｌ₃の残基に対する前駆体を用いて、Ｑ_cI−［Ｌ₃］_wの残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＱ_cI の残基に対する前駆体を派生すること；（iii）Ｑ_cI−［Ｌ₃］_wの残基に対する前駆体を用いて、Ｌ₁−ｃＩ−｛Ｑ_cI−［Ｌ₃］_w｝の残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＬ₁−ｃＩの残基の前駆体を派生すること；（iv）Ｌ₂の残基に対する前駆体を用いて、Ｌ₁−ｃＩ−｛ＱｃＩ−［Ｌ₃］_w−Ｌ₂ ｝の残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＬ₁−ｃＩ−｛Ｑ_cI−［Ｌ₃］_w｝の残基の前駆体を派生すること；（ｖ）Ｑ_cI−［Ｌ₃］_wの残基に対する前駆体、次いでＬ₂の残基に対する前駆体を用いて、下式の残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間でＬ₁−ｃＩ−｛Ｑ_cI−［Ｌ₃］_w−Ｌ₂｝の残基の前駆体を派生すること；（vi）Ｗ₁、Ｗ₂、およびＷ₃の残基に対する前駆体を用いて、下式の残基に対する前駆体である共有結合性コンプレックス、を形成するのに十分な条件下および時間で下式の残基の前恥体を派生すること：（vii）［Ｍ₁］_x、［Ｍ₂］_z、および［Ｍ_3]yの残基に対する前駆体を用いて、下式のコンプレックスを形成するのに十分な条件下および時間で下式の残基に対する前駆体を派生することを具備した方法。３１．薬学的に許容しうる媒体中に溶解または分散された請求の範囲第３項に記載の化合物を含有する薬学的組成物。３２．薬学的に許容しうる媒体中に溶解または分散された請求の範囲第４項に記載の化合物を含有する薬学的組成物。３３．哺乳動物内の腫瘍を治療する方法であって、薬学的に許容しうる媒体中の請求の範囲第３項に記載の非放射性ターゲッティング免疫試薬の効果的な投与量を前記動物に投与すること、前記非放射性ターゲッティング免疫試薬が前記哺乳動物の腫瘍部位で蓄積されるのに十分な時間待ち、引き続き、前記哺乳動物に薬学的に許容しうる媒体中の請求の範囲第４項に記載の放射性ターゲッティング試薬の効果的な投与量を投与し、前記放射性ターゲッティング試薬が該標的部位（該標的部位には、前記哺乳動物内の前記腫瘍部位で蓄積された前記非放射性ターゲッティング免疫試薬が存在する。）で蓄積するのに十分な時間待つことを具備した方法。３４．哺乳動物における診断用イメージングの方法であって、イメージングに効果的な投与量の、薬学的に許容しうる媒体中の請求の範囲第３項に記載の非放射性ターゲッティング免疫試薬を前記動物に投与すること、前記非放射性ターゲッティング免疫薬が前記哺乳動物内のイメージング部位で蓄積されるのに十分な時間待ち、引き続き前記哺乳動物に、イメージングに効果的な量の、薬学的に許容しうる媒体中の請求の範囲第４項に記載の放射性ターゲッティング試薬を投与し、前記放射性ターゲッティング試薬が該標的部位（前記標的部位には、前記哺乳動物内の前記イメージング部位で蓄積された前記非放射性ターゲッティング免疫試薬が存在する。）で蓄積するのに十分な時間待ち、前記哺乳動物のイメージを生成させることを具備した方法。３５．Ｉが、二重らせんである請求の範囲第３項に記載の試薬。３６．ｃＩが二重らせんである請求の範囲第４項に記載の試薬。