JPH0859407A

JPH0859407A - 抗菌剤

Info

Publication number: JPH0859407A
Application number: JP21069594A
Authority: JP
Inventors: Norikazu Fujii; 則和藤井; Katsumi Yuasa; 克己湯浅
Original assignee: Kikkoman Corp
Current assignee: Kikkoman Corp
Priority date: 1994-08-12
Filing date: 1994-08-12
Publication date: 1996-03-05

Abstract

(57)【要約】【目的】耐性菌が出現することなく、かつ広い抗菌活
性スペクトルを有する抗菌剤を提供する。【構成】本発明は、ビタミンＤ類を有機溶剤に溶か
し、少なくとも１時間以上、溶液の品温を１０〜１００
℃で保持してなる抗菌剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗菌剤、詳しくは、ビタ
ミンＤ類を有機溶剤に溶かして得られる抗菌剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】抗菌剤は種々知られているが、長期間使
用における耐性菌の出現、抗菌活性スペクトルが狭いな
どの問題点をもっている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、前記
問題を解決するためになされたもので、長期間使用して
も耐性菌が出現しない、かつ広範囲の抗菌活性スペクト
ルを有する抗菌剤を提供することである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するために鋭意研究した結果、ビタミンＤ類は、
それ自身抗菌活性がないのに、それらの所定量を有機溶
剤に溶かし、所定時間以上、溶液の品温を所定の温度に
保持すると、ビタミンＤ類は抗菌活性を有するものに変
化するとの知見に基づいて、本発明を完成した。

【０００５】すなわち、本発明は、ビタミンＤ類を有機
溶剤に添加して得られる抗菌剤に関する。

【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
おいてビタミンＤ類とは、プロビタミンＤ類、ビタミン
Ｄ類、またはそれらＤ類の混合物、並びにプロビタミン
Ｄ類、ビタミンＤ類、またはそれらＤ類の混合物の含有
物と定義される。そしてプロビタミンＤ類としては、エ
ルゴステロール（ｅｒｇｏｓｔｅｒｏｌ）、７−デヒド
ロコレステロール（７−ｄｅｈｙｄｒｏｃｈｏｌｅｓｔ
ｅｒｏｌ）、２２−ジヒドロエルゴステロール（２２−
ｄｉｈｙｄｒｏｅｒｇｏｓｔｅｒｏｌ）、７−デヒドロ
シトステロール（７−ｄｅｈｙｄｒｏｓｉｔｏｓｔｅｒ
ｏｌ）、７−デヒドロスチグマステロール（７−ｄｅｈ
ｙｄｒｏｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌ）、７−デヒドロカ
ンペステロール（７−ｄｅｈｙｄｒｏｃａｍｐｅｓｔｅ
ｒｏｌ）の群から選ばれた一つのもの、または複数のも
のの混合物であり、ビタミンＤ類としては、ビタミンＤ
₂、Ｄ₃、Ｄ₄、Ｄ₅、Ｄ₆、Ｄ₇の群から選ばれた一つのも
の、または複数のものの混合物である。

【０００７】なお、前記ビタミンＤ類含有物としては、
例えば、しいたけ、まいたけ、えのきたけ、しめじたけ
などのきのこ類、あおさ、あおのり、あまのり、あら
め、いわのり、おごのり、昆布、ひじき、わかめ、もず
くなどの藻類、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼー
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）、アスペル
ギルス・ソーヤ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｏｙａ
ｅ）などの糸状菌の液体または固体培養の菌体類または
培養物類、米麹、醤油麹、ふすま麹などの麹類、サッカ
ロミセス・セルビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｖｉｓａｅ）、サッカロミセス・ルキシー（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｒｏｕｘｉｉ）、カンジダ・
ウチリス（Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ）などの酵母
菌体類または培養物類、ならびにそれら菌体類から酵母
エキスを抽出して得られる残渣類、酒粕、醤油粕などの
醸造粕類、または各種魚油類などを好適なものとして挙
げることができる。これらのビタミンＤ類含有物が有機
溶剤に溶けにくい場合は、懸濁状態にすることにより、
本発明が達成できる。すなわち、そのような状態を維持
することにより、それらに含有しているビタミンＤ類が
有機溶剤に溶け出るからである。

【０００８】本発明の抗菌剤は、前記ビタミンＤ類を有
機溶剤に添加することにより製造されるが、具体的には
所定量の前記ビタミンＤ類を有機溶剤に添加し、所定時
間以上、溶液の品温を所定温度に保持して、ビタミンＤ
類を抗菌活性のあるもの（以下、抗菌物と略称する）に
変えることにより製造される。その有機溶剤としてはビ
タミンＤ類を溶かす能力があればよく、特に制限されな
いが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノ
ール、２−プロパノール、ブタノールなどのアルコール
類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、酢
酸エチル、ｎ−プロパノール酢酸などのエステル類、ジ
エチルエーテルなどのエーテル類、クロロホルム、４塩
化炭素などの塩素化有機化合物類、ベンゼン、ヘキサン
など有機溶剤類、各種穀物、各種魚、各種動物から搾取
される油脂類を挙げることできる。これらの中でも、特
にメタノール、エタノール、２−プロパノール、ブタノ
ール、アセトン、酢酸エチルなどを好適なものとして挙
げることができる。これらの有機溶剤の中で水に溶ける
もの、例えば、メタノール、エタノール、アセトンを、
水溶液として、例えば、有機溶剤濃度として１０％（ｖ
／ｖ）以上、好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上の溶液と
して用いてもよい。

【０００９】ビタミンＤ類の前記の溶剤に添加する量
は、０．０１％（ｗ／ｖ）〜５０％（ｗ／ｖ）、好まし
くは０．０５％（ｗ／ｖ）〜２０％（ｗ／ｖ）である。
なお、これらの量が０．０１％未満のときは、得られる
抗菌剤の抗菌活性が弱いのでコスト的に見合わず、５０
％越えるときは、ビタミンＤ類が溶剤に完全に溶けなく
なるので、添加する意味がなくなる。

【００１０】有機溶剤に前記のような濃度でビタミンＤ
類を溶かし、次にその溶液を、１時間以上、好ましくは
５時間以上、より好ましくは２４時間以上、溶液の品温
を１０〜１００℃、好ましくは２０〜９０℃、より好ま
しくは４０〜８０℃に保持すると、ビタミンＤ類は抗菌
物に変化する。なお、前記温度が１０℃未満の場合、ま
た時間が１時間未満の場合は十分な活性のある抗菌物が
生成しない。なお、時間が１２０日を越えると抗菌物の
生成は平衡状態になるので、それ以上の時間は意味のな
いものになる。また温度が１００℃を越えた場合も抗菌
物が生成しない。

【００１１】ビタミンＤ類を添加した有機溶剤を前記品
温温度に保持するとき、有機溶剤が蒸発しないように有
機溶剤を入れた容器は密閉しておくのが好適であるが、
該容器に還流冷却管をつけて蒸発する有機溶剤を該容器
に戻す方法なども好適に採用される。また前記溶剤を加
温する場合は、マントルヒーター、ホットプレートなど
を用いればよい。

【００１２】なお、ビタミンＤ類を溶かした有機溶剤溶
液を前記品温温度に保持するとき、その溶液に初発の溶
存酸素濃度として少なくとも０．１ｐｐｂ、好ましくは
０．５ｐｐｂ以上の酸素を存在させると、抗菌物の生成
が増大する。そして、その溶液に酸素を溶かす方法は、
大気圧下にその溶液をよく攪拌するだけで十分である
が、エアレーションなどを行なってもよい。そして、各
種有機溶剤の飽和溶存酸素濃度（例えば、エタノールの
場合、２０℃で４００ｐｐｍ）まで酸素を溶かしても本
発明は達成できる。また前記溶液に光を直接照射する
と、抗菌物の生成が促進される。光は任意の波長のもの
でよく、また単色光でも複合光でもよい。例えば、自然
光、またハロゲンランプ、タングステンランプ、蛍光
灯、紫外線ランプからの光を挙げることができる。な
お、自然光の場合、照射量には制限がないが、タングス
テンランプ、ハロゲンランプ、白熱灯、蛍光灯の光の照
射の場合、その量は、５０万ルックス、好ましくは３０
万ルックス以下である。また紫外線ランプの光の照射の
場合、その量は、５万ルックス、好ましくは３万ルック
ス以下である。それらの値以上の場合は抗菌物が分解し
て抗菌活性のないものになってしまう。

【００１３】本発明の抗菌剤は前記のようにして製造さ
れる抗菌物を含む有機溶剤溶液そのものであるが、それ
らを有効成分として含有してなるものを本発明の抗菌剤
とすることもできる。また、抗菌物を含有する前記有機
溶剤溶液から抗菌物を採取しても本発明の抗菌剤とする
こともできる。この採取には、通常の抗菌物の採取法が
採用される。例えば、抗菌物を含有している有機溶剤溶
液から有機溶剤を通常の手段で、例えば、減圧濃縮（フ
ラッシュまたはロータリーエバポレターなどで）などで
除去して、濃縮物または乾固したものとして採取され
る。

【００１４】更には抗菌物含有の前記有機溶剤溶液、濃
縮物、乾固物をＨＰＬＣ、または通常のオープンのカラ
ムクロマトグラフィーにかけて抗菌物を分画精製しても
よい。その際、ＯＤＳ系の充填剤を詰めたカラムが好適
に利用される。そして、溶出剤としてメタノール、エタ
ノール系などのものを用いると、抗菌物はビタミンＤ類
の溶出画分より前に分れて溶出する。ＯＤＳ系充填剤と
しては、通常のものが使用できる。例えば、ＯＤＳ−Ａ
Ｍ１２０−Ｓ５０（ＹＭＳＣｏ．製）などを挙げるこ
とができる。このようにして、分画精製された抗菌物
（本発明の抗菌剤）が得られる。そして分画精製画分液
単独を、またはそれを濃縮した濃縮物、または濃縮物の
乾固物、またそれらを有効成分として含有してなるもの
を本発明の抗菌剤としてよい。

【００１５】本発明の抗菌剤は、例えば、ショ糖脂肪酸
エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、キラヤサポ
ニンなどを用いて、乳化物としたり、またアルコール
類、アセトン、酢酸エチルなどに希釈、溶解などして、
製品化される。またこの抗菌剤には、通常の担体または
賦形剤が適当量添加されてもよい。そして、それらは、
溶液、分散液、乳剤、粉末剤、錠剤、カプセル入れなど
の形状になし得る。

【００１６】また本発明の抗菌剤は各種微生物、例えば
糸状菌類、例えば、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ）属、ペニシルウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）
属、酵母類、例えば、カンデダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、
チゴサッカロミセス（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ）属、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ）属、細菌類、例えば、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属、スタヒロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ）属、エスシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）
属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、シュウド
モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ビブリオ（Ｖｉ
ｂｒｉｏ）属、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉ
ｕｍ）属、キャンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃ
ｔｏｒ）属、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ）属、セラチャ（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、プ
ロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属に属す微生物に作用し
て、それらの細胞を殺す（殺菌作用を有する）。すなわ
ち、広範囲の抗菌活性スペクトルを有する。そして、こ
れらの微生物に対して長期間作用させても、合成抗菌剤
において観察されるような耐性菌は出現しない。

【００１７】それで、本発明の抗菌剤は、飼料用または
食品添加用の抗菌剤、保存剤、殺菌剤として、特に好適
にはヒラメ養殖などの飼料用添加剤して使用される。ま
た医薬品・化粧品用抗菌剤、農業用殺菌剤、工業用防菌
・防黴剤などとして使用される。本発明の抗菌剤を使用
する場合、例えば、有機溶剤の除去、または分画精製し
て得られる乾燥物として０．０１〜２０％（ｗ／ｗ）、
好ましくは０．１〜５％（ｗ／ｗ）の割合で目的の適用
物に添加される。０．０１％（ｗ／ｗ）未満では抗菌作
用がえられず、また２０％（ｗ／ｗ）を超える場合は添
加される食品等の味を損ねるので好ましくない。

【００１８】

【発明の効果】本発明の抗菌剤は、糸状菌、酵母、細菌
の広範囲の微生物に作用し、それらの細胞を殺す、すな
わち、広い抗菌活性スペクトルをもつ。また長期間使用
しても耐性菌は出現しない。それで非常に有用価値の高
いものである。また安価なビタミンＤ類から簡単に得ら
れるので安価なものでもある。

【００１９】

【実施例】以下本発明を実施例をもって説明する。本発
明においては、抗菌剤の抗菌活性は次の培地を用いて以
下の２つの方法で行なった。１）使用培地（１ｌ当りの組成）糸状菌：米麹汁寒天（寒天２０％含有）斜面培地。酵母：グルコース、２０．０ｇ；酵母エキス、２．０
ｇ；硫酸マグネシウム、０．５ｇ；ペプトン、５．０
ｇ；リン酸二水素カリウム、１．０ｇ；ｐＨ５．７、
蒸留水。細菌：酵母エキス、２．５ｇ；ペプトン、５．０ｇ；グ
ルコース、１．０ｇ；ｐＨ７．０、蒸留水。

【００２０】２）抗菌活性測定法方法１：上記組成の液体培地を１２１℃、１５分の条件
でオートクレーブ殺菌した後、細菌類および酵母類を培
養し、菌液を得る。糸状菌類については前記斜面培地に
３０℃、７日間培養し胞子を形成させた。細菌類および
酵母類については、前記液体培地と同じ条件で予め殺菌
し、約４０〜５０℃に冷ました寒天固体培地（前記液体
培地に寒天２０ｇ添加したもの）１０ｍｌに前記菌液
０．５ｍｌを添加し、次に無菌的にシャーレ内で混合し
てプレートを作製した。糸状菌については培地１ｍｌあ
たり胞子数１×１０⁸個になるように、前記酵母用培地
に寒天２０ｇ／ｌを添加した培地１０ｍｌに前記胞子を
懸濁したプレートを作製した。直径６ｍｍのペーパーデ
スクに本発明の抗菌剤の所定量を滲み込ませ、前記プレ
ートの上においた。更に、該プレートを、糸状菌および
酵母の場合は２５℃で４８時間、細菌の場合は３７℃で
２４時間、インキュベートした。その結果ペーパーデス
クの周りに生じた各菌の生育阻止円の直径（ｍｍ）から
抗菌活性を測定した。

【００２１】方法２：ａ）酵母、細菌上記組成の培地に本発明の抗菌剤を各種濃度（乾燥物と
して）で添加した液体培地を作成した。その培地５ｍｌ
を試験管にとり、前記同様に殺菌した。それに前記同様
に前培養して得た菌液を細胞数が１×１０⁸個／ｍｌに
なるように添加した。次に前記同様な条件で培養した。
この培養物について、細胞数を平板培地法で計測した。ｂ）糸状菌前記酵母用液体培地に寒点２０ｇ／ｌ添加した培地に本
発明の抗菌剤を各種濃度（乾燥物）で添加した。その培
地のプレート（直径１０ｃｍ）を作成し、１×１０⁸個
／ｍｌの胞子懸濁液１００μｌを塗抹した。前記同様に
培養し、プレート上に糸状菌が生育するかどうかを観察
した。この方法２により、最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）
を求めた。

【００２２】実施例１エタノール１００ｍｌを５００ｍｌ容丸底フラスコにと
り、エルゴステロール１ｇを添加した後、攪拌して大気
中の酸素を吸収させた（溶存酸素濃度、２００ｐｐ
ｍ）。更にフラスコに還流冷却管をとりつけ、エタノー
ルの蒸発を防いだ。次に光を遮断して１４日間、溶液の
品温を７０℃に保持した。この溶液（本発明の抗菌剤）
をＨＰＬＣで分析した。エルゴステロールをエタノール
に添加した直後のクロマトグラム図は図１に、また前記
の温度に保持したものについては図２に示される。図１
に示される主ピークはエルゴステロールのものである。
図２に示されるように前記温度に保持されたものについ
ては、完全にエルゴステロールのピークがなくなり、カ
ラム保持時間（リテンションタイム）が５分以内である
ピークのものに変化した。このことはエルゴステロール
が完全に他の物質に変化したことを意味する。次に前記
温度に保持したものについて、カラム保持時間が５分以
内に出現するピークのものが抗菌活性をもつかどうかに
ついて、抗菌活性測定方法１を使って検討した。１分毎
に溶出液を分画し、その分画液１５μｌについて抗菌活
性を調べ、表１の様な結果を得た。なお、抗菌活性の指
示菌としてＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＩＡＭ
１２５３を用いた。

【００２３】

【００２４】表１から、カラム保持時間１分から４分に
かけて出現するピークを有する物質が抗菌物（本発明の
抗菌剤）であることが分る。このことから本発明の抗菌
剤は単一のものではなく各種物質の混合物であることが
分った。なお、図１に示されるものについても図２と同
様に溶出液を分画して抗菌活性を測定したが、どの分画
液にも抗菌活性は見出せなかった。

【００２５】実施例２３００ｍｌ容丸底フラスコにビタミンＤ₂１ｇをとり、
更に２−プロパノール１００ｍｌを加え、ビタミンＤ₂
に溶解した。次に十分攪拌し、酸素を十分吸収させた後
（溶存酸素濃度、２００ｐｐｍ）、品温が５０℃になる
ようにして１０日おいた。この溶液（本発明抗菌剤）に
ついて、表２に示される各種微生物に対する抗菌活性を
前記方法２の最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）測定法で測定
し、その結果を表２に示した。なお、抗菌剤の濃度は、
抗菌剤から２−プロパノールを完全に蒸発除去させて得
た乾燥物に換算して得たものである。

【００２６】

【表２】

【００２７】表２から本発明の抗菌物は細菌類、糸状菌
類、酵母類の広範囲の微生物について抗菌活性、すなわ
ち広い抗菌活性スペクトルをもっていること、また低濃
度で活性があることが分る。

【００２８】実施例３エルゴステロール、７−デヒドロコレストール、ビタミ
ンＤ₂、ビタミンＤ₃の各々について、それらの１ｇを３
００ｍｌ容丸底フラスコにとり、更に２−プロパノール
１００ｍｌを加え、それらを溶かした。十分攪拌し、酸
素を吸収させた後（溶存酸素濃度、２００〜３００ｐｐ
ｍ）、直径８ｃｍのガラスシャーレに入れ、蓋をしない
で品温５０℃で３０ワットの白色燈（１００ボルト）を
用いて、１０ｃｍの距離から１４日間前記溶液を直接照
射した（１５，０００ルックス）。前記各物質から照射
物（本発明抗菌剤）の各々の１５μｌを方法１の抗菌活
性試験に供した。供試菌株としてはヒラメ養殖において
パラコロ病に感染したヒラメから分離した細菌エドワジ
エラ・タルダ（Ｅｄｗａｒｄｉｅｒａｔａｒｄａ）の
一菌株Ａ１を用いた。その結果を表３に示した。

【００２９】＋、＋＋、＋＋＋については表１と同様に定義される

【００３０】表３から各物質から得られる本発明の抗菌
剤は、細菌エドワジエラ・タルダ菌に対して強い抗菌活
性があることが分る。

【図面の簡単な説明】

【図１】エルゴステロールをエタノールに溶かした直後
に、その溶液をＨＰＬＣにかけたときのクロマトグラム
図

【図２】エルゴステロールをエタノールに溶かし、１４
日間、品温を５０℃に保持した後、その溶液をＨＰＬＣ
にかけたときのクロマトグラム図

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ビタミンＤ類を有機溶剤に添加してなる
抗菌物剤。
【請求項２】ビタミンＤ類を有機溶剤に、０．０１％
（ｗ／ｖ）〜５０％（ｗ／ｖ）添加し、１時間以上、溶
液の品温を１０〜１００℃に保持することを特徴とする
抗菌剤の製造法。
【請求項３】請求項１の抗菌剤から有機溶剤を除去し
てなる抗菌剤。
【請求項４】請求項１、２または３記載の抗菌剤をＯ
ＤＳ系充填剤を有するカラムで、メタノール、またはエ
タノールを溶出液として分画したとき、ビタミンＤ類が
溶出する画分の前に溶出する分画を採取することを特徴
とする抗菌剤の製造法。