JPH0859480A - 新規抗ｈｉｖ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中のいずれかで示さ
れるホスホロチオエステル結合型オリゴリボヌクレオチ
ドから選択される１種又は２種以上を有効成分として含
有する抗ＨＩＶ剤。 ｐＧｓＧｓＧ （Ｉ） ｐＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩ） ｐＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩＩ） ｐＧｓＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＶ） （各式中、Ｇはグアノシン構造を表わし、ｐは、５′位
末端Ｇの５′位水酸基とモノエステル結合しているリン
酸残基を表わし、２個のＧの間に位置している各ｓは、
隣接するＧとホスホロチオエステル結合を形成している
ホスホロチオリン酸残基を表わし、それぞれ式中向かっ
て左側のＧとはその３′位水酸基と、また右側のＧとは
その５′位水酸基とそれぞれエステル結合を形成してい
るものである）。 【効果】 ＨＩＶ（ＡＩＤＳウィルス）に起因する疾
患、ＡＩＤＳ、ＡＲＣの治療に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ＨＩＶ（Ｈｕｍａｎ
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖｉｒｕｓ）によ
る疾患について、優れた抗ウィルス作用を示すホスホロ
チオエステル結合型オリゴリボヌクレオチドを有効成分
とする抗ＨＩＶ剤に関するものである。

【０００２】

【背景技術】ＤＮＡのホモオリゴマーに関する従来の知
見としては、１５塩基および２０塩基のホスホロチオエ
ート結合体にＨＩＶ増殖阻止作用があることがアグラワ
ル等により報告され、その効果は、１５塩基という長さ
のホモオリゴマーであることに起因し、塩基の種類に依
存しないと報告されている。また、その有効性について
は、鎖長の長いホモオリゴマーであることから、逆転写
酵素の鋳型として有利に働き、ＨＩＶの核酸と競合する
ことに基づくと推定したと報告されている。（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７０
７９，１９８８）。

【０００３】また、マツクラ等により２８塩基のデオキ
シシチジンホスホロチオエート結合体にＨＩＶ増殖阻止
作用があることが報告されている（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，７７０６，１９
８７）。さらにオリゴリボヌクレオチドに関する従来の
知見としては、シバハラ等により２０塩基の２′−ｏ−
メチルイノシンホスホロチオエート結合体にＨＩＶ増殖
阻止作用があることが示され（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉ
ｄ Ｒｅｓ．，１７，２３９，１９８９）、クロフォー
ド等によりポリアデニン−ポリウリジンにもＨＩＶ増殖
阻止作用があることが報告されている（ＡＩＤＳ Ｒｅ
ｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．８，２８
５，１９９２）。しかし、いずれも１４〜２８塩基ある
いはそれ以上の長鎖ヌクレオチドのため、これを調製す
る上で問題があり、また、生体内に投与した場合の吸収
性、安定性の点においても問題がある。

【０００４】本発明者は、かかる問題点を解決するた
め、ＨＩＶ増殖抑制作用を有するオリゴヌクレオチド化
合物の低分子化について種々研究を重ね、先に４〜８塩
基の短鎖オリゴデオキシグアニル酸がＨＩＶ増殖阻止作
用を有することを見出した。本発明者は、更に研究を重
ねた結果、２〜５塩基の短鎖グアニル酸リボヌクレオチ
ドが優れたＨＩＶ増殖阻止作用を有することを見出し
た。本発明はかかる知見に基づくものである。

【０００５】本発明は下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中のいず
れかで示されるホスホロチオエステル結合型オリゴリボ
ヌクレオチドから選択される１種又は２種以上を有効成
分として含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤を提供す
るものである。 ｐＧｓＧｓＧ （Ｉ） ｐＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩ） ｐＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩＩ） ｐＧｓＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＶ） （各式中、Ｇはグアノシン構造を表わし、ｓは、隣接す
るＧとホスホロチオエステル結合を形成しているホスホ
ロチオリン酸残基を表わし、各ｓは、それぞれ式中向か
って左側のＧとはその３′位水酸基と、また右側のＧと
はその５′位水酸基とそれぞれエステル結合を形成して
いるものであり、ｐは、５′位末端Ｇの５′位水酸基と
モノエステル結合しているリン酸残基を表わす）。

【０００６】本発明の抗ＨＩＶ剤の有効成分であるオリ
ゴチオリボヌクレオチドは、一般に、オリゴリボヌクレ
オチド合成に用いられる常用の手法により合成すること
ができる。

【０００７】すなわち、たとえば官能基が保護されたグ
アノシン単量体を結合させた支持体を準備し、これに対
し、官能基が保護されたグアニル酸単量体を結合させ、
次に、リン部分の硫化を行い、順次この操作を行った
後、最後に５′リン酸化試薬により５′末端をリン酸化
し、保護基を除いて精製する。ホスホアミダイト法は好
ましい方法である（Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ，Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ １８ ５４３３；Ｄａｍｈ
ａ ａｎｄ Ｏｇｉｌｖｉｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０ ８１；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎ
ｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５４ ３６７参照）。

【０００８】ホスホアミダイト法で固相合成する場合に
は、官能基が保護されたグアノシンをコントロールドポ
アグラス（ＣＰＧ）等の支持体に結合したものを準備
し、このヌクレオシドの５′水酸基の保護基である４，
４′ジメトキシトリチル基をトリクロロ酢酸等で除き、
グアニル酸塩基のアミノ基がイソブチル基で保護されて
いるアミダイト試薬、（５′−ｏ−ジメトキシトリチル
−２′）−ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）リボヌク
レオシド ３′−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（シアノエチ
ル）ホスホアミダイトをテトラゾールを縮合剤として用
いて縮合させる。副生成物の合成を防止するために、未
反応の５′水酸基を、無水酢酸、Ｎ−メチルイミダゾー
ル等により、アセチル化する。この後、テトラエチルチ
ウラムジスルフィドを用いてリン部分の硫化を行ない、
ホスホロチオトリエステル体に導く。以上の反応を目的
とする鎖長になるまで繰り返した後、最後に５′末端を
脱保護し、リン酸化試薬、（２−シアノエトキシ）−２
−（２′−ｏ−４，４′ジメトキシトリチロキシエチル
スルホニル）エトキシＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノフ
ォスフィンを縮合させ（Ｈｏｒｎ ＆ Ｕｒｄｅａ，Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ ２７ ４７０
５；Ｕｈｌｍａｎｎ ＆ Ｅｎｇｅｌｓ，Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２７ １０２３参照）、
次に末端リン部分をヨードを用いて酸化し燐酸トリエス
テルとした後、アンモニア処理によりトリエステルをジ
エステルに変換し、支持体より切り出すと同時に塩基部
の脱保護を行ない、テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムフ
ルオライド処理により２′水酸基の脱保護を行ない、目
的とする５′末端リン酸化ホスホロチオエートオリゴリ
ボヌクレオチドを得る。

【０００９】

【実験例】次に実験例を挙げ、本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明の趣旨はこれら実験例により制約され
るものではない。 ＜ＭＴ−４細胞（Ｔ細胞系）を用いた抗エイズウィルス
（ＨＩＶ）活性試験＞あらかじめ段階希釈した各種ホス
ホロチオエート結合型オリゴリボヌクレオチドが入って
いる９６穴マイクロプレートにＭＴ−４細胞を６×１０
^４細胞／穴の量で撒き、さらにエイズウィルス〔ＨＩＶ
−１（ＩＩＩＢ；約５０ＴＣＩＤ_５０（５０％培養細胞
感染濃度）／穴〕を感染させ、３７℃、５％二酸化炭素
下で５日間培養した。感染による細胞障害抑制判定は、
５日間培養後の生細胞をＭＴＴ法で測定することにより
求めた。この結果を表１に示す。表中、表示した各オリ
ゴリボヌクレオチドにおいて、式中、ｐおよびｓの意味
は、前述の定義と同一の意味を表わし、Ｇはグアノシン
を表す。

【００１０】

【表１】

【００１１】表１に示されているとおり、本発明の抗Ｈ
ＩＶ剤の有効成分である３塩基から６塩基の５′末端リ
ン酸化ホスホロチオエート結合型オリゴグアニル酸は優
れた抗ＨＩＶ作用を示すことが認められた。なお１００
μｇ／ｍｌの濃度において細胞毒性は示さなかった。

【００１２】本発明の抗ＨＩＶ剤の有効成分であるリボ
ヌクレオチドの安全性については４塩基結合のものを用
いて、マウスに２０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与を行なって
これを確認した。また別の試験において同物質の１００
ｍｇ／ｋｇの経口投与においても死亡例が認められなか
った。

【００１３】本発明に係る新規な抗ＨＩＶ剤は、ＡＩＤ
Ｓ等のレトロウィルス感染症治療剤として特に有用なも
のであり、医薬用担体を用いて製剤化して、錠剤、カプ
セル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤などの経口投与剤や、注
射剤、点滴用剤、坐薬などの非経口投与剤とすることが
できる。投与形態については、特定されず、必要に応じ
て適宜の剤形のものが選択して使用され、その例として
は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口
投与剤、注射剤、坐剤等の非経口投与剤が挙げられる。
経口剤としての所要量は、患者の年齢、体重、疾患の程
度により異なるが、通常、成人での投与量は、０．１ｇ
〜６ｇを１日に数回に分けて服用する。

【００１４】上記の錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口
投与剤を調製するには、例えば、デンプン、乳糖、白
糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、無機塩
類を用いることができ、常法に従って製造される。この
種の製剤には、前記賦形剤の他に適宜、結合剤、崩壊
剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色
剤、香料等を選択し、使用することができる。それぞれ
の具体例は、以下に示すとおりである。

【００１５】〔結合剤〕デンプン、デキストリン、アラ
ビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロー
ス、エチルセルロース、ポリビニルセルロース、マクロ
ゴール。

【００１６】〔崩壊剤〕デンプン、ヒドロキシプロピル
スターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カ
ルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチ
ルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース。

【００１７】〔界面活性剤〕ラウリル硫酸ナトリウム、
大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート
８０。 〔滑沢剤〕タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂
肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレ
ングリコール。 〔流動性促進剤〕軽質無水ケイ酸、乾燥水素化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム。

【００１８】前記の式（Ｉ）〜（ＩＶ）で表わされるオ
リゴリボヌクレオチドは、懸濁液、エマルジョン液、シ
ロップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、
これらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有させ
ることができる。

【００１９】非経口剤としての所要量は、患者の年齢、
体重、疾患の程度によって異なるが、通常、成人で前記
のオリゴリボヌクレオチド１日１〜１００ｍｇ程度の量
であり、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射により投
与される。この非経口剤は慣用の方法で製造することが
できる。その場合、希釈剤としては、一般に、注射用蒸
留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴ
マ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール等を用いる
ことができる。また、必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、
安定剤を加えることができる。この非経口剤は、安定性
の観点からは、バイアル等に充填した後、冷凍し、通常
の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾
燥物として、使用時に、この凍結乾燥物から液剤を再調
製することができる。製剤化に際しては、必要に応じ
て、適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加
えることもできる。その他の非経口剤の例としては、外
用液剤、軟膏等の塗布剤、直腸投与のための坐剤等が挙
げられ、これらは、いずれも慣用の方法で製造すること
ができる。

【００２０】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明を詳細に説明す
るが、下記の実施例により本発明は制限されるものでは
ない。 実施例１ 上記の処方に従ってとおよびの一部を均質になる
まで混合し、圧縮成型した後、粉砕し、これにの残量
ととを加えて混合し、打錠機にて圧縮成型して、一錠
２００ｍｇの錠剤を得た。この一錠には、ｐＧｓＧｓＧ
ｓＧ２０ｍｇが含有されている。この錠剤は、成人１日
４〜８錠を数回に分けて服用される。

【００２１】実施例２ 上記の処方に従ってとととを均質になるまで混合
し、常法により捏和し、押し出し造粒機により、乾燥・
破砕した後、これにととを混合し、打錠機にて圧縮
成型して、一錠２００ｍｇの錠剤を得た。この一錠に
は、ｐＧｓＧｓＧｓＧ２０ｍｇが含有されている。この
錠剤は、成人１日４〜８錠を数回に分けて服用される。

【００２２】実施例３ に対し、ととを溶解させた後、５ｍｌのアンプル
に注入し、１２１℃で１５分間加熱滅菌を行って注射剤
を得た。

【００２３】

【発明の効果】本発明に係る新規抗ＨＩＶ剤は、ＨＩＶ
（ＡＩＤＳウィルス）に起因する疾患、ＡＩＤＳ、ＡＲ
Ｃの治療に有効である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中のいずれかで
   示されるホスホロチオエステル結合型オリゴリボヌクレ
   オチドから選択される１種又は２種以上を有効成分とし
   て含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤。 ｐＧｓＧｓＧ （Ｉ） ｐＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩ） ｐＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩＩ） ｐＧｓＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＶ） （各式中、Ｇはグアノシン構造を表わし、ｐは、５′位
   末端Ｇの５′位水酸基とモノエステル結合しているリン
   酸残基を表わし、２個のＧの間に位置している各ｓは、
   隣接するＧとホスホロチオエステル結合を形成している
   ホスホロチオリン酸残基を表わし、それぞれ式中向かっ
   て左側のＧとはその３′位水酸基と、また右側のＧとは
   その５′位水酸基とそれぞれエステル結合を形成してい
   るものである）。