JPH0834735A - 新規抗ｈｉｖ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中のいずれかで示さ
れるホスホロチオエステル結合型オリゴリボヌクレオチ
ドから選択される１種又は２種以上を有効成分として含
有する抗ＨＩＶ剤。 ＧｓＧｓＧ （Ｉ） ＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩ） ＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩＩ） ＧｓＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＶ） （各式中、Ｇはグアノシン構造を表わし、ｓは、隣接す
るＧとホスホロチオエステル結合を形成しているホスホ
ロチオリン酸残基を表わし、２個のＧの間に位置してい
る各ｓは、それぞれ式中向かって左側のＧとはその３′
位水酸基と、また右側のＧとはその５′位水酸基とそれ
ぞれエステル結合を形成しているものである）。 【効果】 ＨＩＶ（ＡＩＤＳウィルス）に起因する疾
患、ＡＩＤＳ、ＡＲＣの治療に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ＨＩＶ（Ｈｕｍａｎ
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖｉｒｕｓ）によ
る疾患について、優れた抗ウィルス作用を示すホスホロ
チオエステル結合型オリゴリボヌクレオチドを有効成分
とする抗ＨＩＶ剤に関するものである。

【０００２】

【背景技術】ＤＮＡのホモオリゴマーに関する従来の知
見としては、１５塩基および２０塩基のホスホロチオエ
ート結合体にＨＩＶ増殖阻止作用があることがアグラワ
ル等により報告され、その効果は、１５塩基という長さ
のホモオリゴマーであることに起因し、塩基の種類に依
存しないと報告されている。また、その有効性について
は、鎖長の長いホモオリゴマーであることから、逆転写
酵素の鋳型として有利に働き、ＨＩＶの核酸と競合する
ことに基づくと推定したと報告されている。（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７０
７９，１９８８）。

【０００３】また、マツクラ等により２８塩基のデオキ
シチジンホスホロチオエート結合体にＨＩＶ増殖阻止作
用があることが報告されている（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，７７０６，１９８
７）。さらにオリゴリボヌクレオチドに関する従来の知
見としては、シバハラ等により２０塩基の２′−ｏ−メ
チルイノシンホスホロチオエート結合体にＨＩＶ増殖阻
止作用があることが示され（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
Ｒｅｓ．，１７，２３９，１９８９）、クロフォード
等によりポリアデニン−ポリウリジンにもＨＩＶ増殖阻
止作用があることが報告されている（ＡＩＤＳ Ｒｅ
ｓ．ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．８，２８
５，１９９２）。しかし、いずれも１４〜２８塩基ある
いはそれ以上の長鎖ヌクレオチドのため、これを調製す
る上で問題があり、また、生体内に投与した場合の吸収
性、安定性の点においても問題がある。

【０００４】本発明者は、かかる問題点を解決するた
め、ＨＩＶ増殖抑制作用を有するオリゴヌクレオチド化
合物の低分子化について種々研究を重ね、先に４〜８塩
基の短鎖オリゴデオキシグアニル酸がＨＩＶ増殖阻止作
用を有することを見出した。

【０００５】本発明者は、更に研究を重ねた結果、３〜
６塩基の短鎖グアニル酸リボヌクレオチドが優れたＨＩ
Ｖ増殖阻止作用を有することを見出した。本発明はかか
る知見に基づくものである。

【０００６】本発明は下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中のいず
れかで示されるホスホロチオエステル結合型オリゴリボ
ヌクレオチドから選択される１種又は２種以上を有効成
分として含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤を提供す
るものである。 ＧｓＧｓＧ （Ｉ） ＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩ） ＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩＩ） ＧｓＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＶ） （各式中、Ｇはグアノシン構造を表わし、ｓは、隣接す
るＧとホスホロチオエステル結合を形成しているホスホ
ロチオリン酸残基を表わし、２個のＧの間に位置してい
る各ｓは、それぞれ式中向かって左側のＧとはその３′
位水酸基と、また右側のＧとはその５′位水酸基とそれ
ぞれエステル結合を形成しているものである）。

【０００７】本発明の抗ＨＩＶ剤の有効成分であるオリ
ゴチオリボヌクレオチドとしては市販のものを使用する
ことができるが、一般に、オリゴリボヌクレオチド合成
に用いられる固相ホスホアミダイト法等の慣用の手法を
用いることにより合成し、その合成により得られたもの
を用いることができる。たとえばその例を挙げると次の
如くである。市販の官能基を保護した核酸単量体の結合
した支持体を原料とし、これに、必要に応じてアミノ
基、酸性水酸基を保護した核酸単量体を順次結合させて
粗オリゴリボヌクレオチドを得、保護基を除いて精製す
る方法により調製する。所望のオリゴリボヌクレオチド
の種類に応じて適当な方法が任意に選択される。

【０００８】ホスホアミダイト法で固相合成する場合に
は、目的とするＲＮＡに相当する３′末端ヌクレオシド
を、市販のコントロールポアグラス（ＣＰＧ）等の支持
体に結合したものを用いて、このヌクレオシドの５′水
酸基の保護基である４，４′ジメトキシトリチル基をト
リクロロ酢酸等で除き、テトラゾールを縮合剤として、
３′末端側からのシークエンスに相当する市販の単量体
としての核酸塩基のそのアミノ基をイソブチル基で保護
したアミダイト試薬（５′−ｏ−ジメトキシトリチル−
２′−ｏ−（ｔ−ブチルジメチルシリル）リボヌクレオ
シド ３′−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（シアノエチル）
ホスホアミダイト）を縮合させる。未反応の５′水酸基
は、無水酢酸、Ｎ−メチルイミダゾール等により、アセ
チル化を行ない、副生成物の合成を防止する。この後、
テトラエチルチウラム ジスルヒドを用いてリン酸部分
の硫化を行ない、ホスホロチオトリエステル体に導く。
以上の反応を目的とする鎖長になるまで繰り返した後、
チオフェノール処理により、各インターヌクレオチドを
トリエステル体からジエステル体に変換し、その後、ア
ンモニア処理により、支持体より切り出すと同時に塩基
部の脱保護を行ない、テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウム
フルオライド処理により２′水酸基の脱保護を行ない、
目的とするオリゴリボヌクレオチドを得る。

【０００９】

【実験例】次に実験例を挙げ、本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明の趣旨はこれら実験例により制約され
るものではない。 ＜ＭＴ−４細胞（Ｔ細胞系）を用いた抗エイズウィルス
（ＨＩＶ）活性試験＞あらかじめ段階希釈した各種ホス
ホロチオエステル結合型オリゴリボヌクレオチドが入っ
ている９６穴マイクロプレートにＭＴ−４細胞を６×１
０^４細胞／穴の量で撒き、さらにエイズウィルス〔ＨＩ
Ｖ−１（ＩＩＩＢ；約５０ＴＣＩＤ_５０（５０％培養細
胞感染濃度）／穴〕を感染させ、３７℃、５％二酸化炭
素下で５日間培養した。感染による細胞障害抑制判定
は、５日間培養後の生細胞をＭＴＴ法で測定することに
より求めた。この結果を表１に示す。表中、表示した各
オリゴリボヌクレオチドにおいて、式中、ｓの意味は、
前述の定義と同一の意味を表わし、Ｇはグアノシンを表
す。

【００１０】

【表１】

【００１１】表１に示されているとおり、本発明の抗Ｈ
ＩＶ剤の有効成分であるオリゴリボヌクレオチドは３塩
基から６塩基の極めて短いもので優れた抗ＨＩＶ作用を
示すことが認められた。なお、１００μｇ／ｍｌの濃度
において細胞毒性は示さなかった。

【００１２】本発明の抗ＨＩＶ剤の有効成分であるオリ
ゴリボヌクレオチドの安全性については４塩基結合のも
のを用いて、マウスに２０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与を行
なってこれを確認した。また別の試験において同物質の
１００ｍｇ／ｋｇの経口投与においても死亡例が認めら
れなかった。

【００１３】本発明に係る新規な抗ＨＩＶ剤は、ＡＩＤ
Ｓ等のレトロウィルス感染症治療剤として特に有用なも
のであり、医薬用担体を用いて製剤化して、錠剤、カプ
セル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤などの経口投与剤や、注
射剤、点滴用剤、坐薬などの非経口投与剤とすることが
できる。投与形態については、特定されず、必要に応じ
て適宜の剤形のものが選択して使用され、その例として
は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口
投与剤、注射剤、坐剤等の非経口投与剤が挙げられる。
経口剤としての所要量は、患者の年齢、体重、疾患の程
度により異なるが、通常、成人での投与量は、０．１ｇ
〜６ｇを１日に数回に分けて服用する

【００１４】上記の錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口
投与剤を調製するには、例えば、デンプン、乳糖、白
糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、無機塩
類を用いることができ、常法に従って製造される。この
種の製剤には、前記賦形剤の他に適宜、結合剤、崩壊
剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色
剤、香料等を選択し、使用することができる。それぞれ
の具体例は、以下に示すとおりである。

【００１５】〔結合剤〕デンプン、デキストリン、アラ
ビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロー
ス、エチルセルロース、ポリビニルセルロース、マクロ
ゴール。

【００１６】〔崩壊剤〕デンプン、ヒドロキシプロピル
スターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カ
ルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチ
ルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース。

【００１７】〔界面活性剤〕ラウリル硫酸ナトリウム、
大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート
８０。 〔滑沢剤〕タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂
肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレ
ングリコール。 〔流動性促進剤〕軽質無水ケイ酸、乾燥水素化アルミニ
ウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウ
ム。

【００１８】前記の式Ｉ〜ＩＶで表わされるオリゴリボ
ヌクレオチドは、懸濁液、エマルジョン液、シロップ
剤、エリキシル剤としても投与することができ、これら
の各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有させること
ができる。非経口剤としての所要量は、患者の年齢、体
重、疾患の程度によって異なるが、通常、成人で前記の
オリゴリボヌクレオチド１日１〜１００ｍｇ程度の量で
あり、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射により投与
される。この非経口剤は慣用の方法で製造することがで
きる。その場合、希釈剤としては、一般に、注射用蒸留
水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ
油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピ
レングリコール、ポリエチレングリコール等を用いるこ
とができる。また、必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安
定剤を加えることができる。この非経口剤は、安定性の
観点からは、バイアル等に充填した後、冷凍し、通常の
凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾燥
物として、使用時に、この凍結乾燥物から液剤を再調製
することができる。製剤化に際しては、必要に応じて、
適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加える
こともできる。その他の非経口剤の例としては、外用液
剤、軟膏等の塗布剤、直腸投与のための坐剤等が挙げら
れ、これらは、いずれも慣用の方法で製造することがで
きる。

【００１９】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明を詳細に説明す
るが、下記の実施例により本発明は制限されるものでは
ない。 実施例１ 上記の処方に従ってとおよびの一部を均質になる
まで混合し、圧縮成型した後、粉砕し、これにの残量
ととを加えて混合し、打錠機にて圧縮成型して、一錠
２００ｍｇの錠剤を得た。この一錠には、ＧｓＧｓＧｓ
Ｇ ２０ｍｇが含有されている。この錠剤は、成人１日
４〜８錠を数回に分けて服用される。

【００２０】実施例２ 上記の処方に従ってとととを均質になるまで混合
し、常法により捏和し、押し出し造粒機により、乾燥・
破砕した後、これにととを混合し、打錠機にて圧縮
成型して、一錠２００ｍｇの錠剤を得た。この一錠に
は、ＧｓＧｓＧｓＧ ２０ｍｇが含有されている。この
錠剤は、成人１日４〜８錠を数回に分けて服用される。

【００２１】実施例３ に対し、ととを溶解させた後、５ｍｌのアンプル
に注入し、１２１℃で１５分間加熱滅菌を行って注射剤
を得た。

【００２２】

【発明の効果】本発明に係る新規抗ＨＩＶ剤は、ＨＩＶ
（ＡＩＤＳウィルス）に起因する疾患、ＡＩＤＳ、ＡＲ
Ｃの治療に有効である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中のいずれかで
   示されるホスホロチオエステル結合型オリゴリボヌクレ
   オチドから選択される１種又は２種以上を有効成分とし
   て含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤。 ＧｓＧｓＧ （Ｉ） ＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩ） ＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＩＩ） ＧｓＧｓＧｓＧｓＧｓＧ （ＩＶ） （各式中、Ｇはグアノシン構造を表わし、ｓは、隣接す
   るＧとホスホロチオエステル結合を形成しているホスホ
   ロチオリン酸残基を表わし、２個のＧの間に位置してい
   る各ｓは、それぞれ式中向かって左側のＧとはその３′
   位水酸基と、また右側のＧとはその５′位水酸基とそれ
   ぞれエステル結合を形成しているものである）。