JPH0868794A - 血液凝固性の測定用診断試験のための添加剤 - Google Patents
血液凝固性の測定用診断試験のための添加剤Info
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- JPH0868794A JPH0868794A JP7210309A JP21030995A JPH0868794A JP H0868794 A JPH0868794 A JP H0868794A JP 7210309 A JP7210309 A JP 7210309A JP 21030995 A JP21030995 A JP 21030995A JP H0868794 A JPH0868794 A JP H0868794A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヘパリンによる影響を調節または抑制しうる
血液凝固性の測定診断のための添加剤の提供。 【解決手段】 金属塩、好ましくは銅または亜鉛塩を包
含する血液凝固測定診断試験のための添加剤から成り、
ヘパリンによる試験での影響が避けられるかまたは少な
くともかなり低減される。
血液凝固性の測定診断のための添加剤の提供。 【解決手段】 金属塩、好ましくは銅または亜鉛塩を包
含する血液凝固測定診断試験のための添加剤から成り、
ヘパリンによる試験での影響が避けられるかまたは少な
くともかなり低減される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規な可能性、特に、ヘ
パリンによる影響を調節または抑制し得る診断試験およ
び試薬のための添加剤を開示する。診断試験へのヘパリ
ンに対する感度を調節する新規な方法および剤が開示さ
れている。これらの試験および剤において、ヘパリンと
錯体を形成することができ、それによりヘパリン活性を
減少させる金属塩を試薬の１つにかまたは試験バッチ自
体に添加される。ヘパリンによる試験への影響は、この
ようにして完全に抑制されるかまたは所望のレベルに調
節される。適当な金属は例えば亜鉛または銅である。あ
る場合には、既知のヘパリンの作用を中性化する物質例
えばポリカチオンとの組合わせが相乗効果をもたらすこ
とがあり、それ故有利である。
パリンによる影響を調節または抑制し得る診断試験およ
び試薬のための添加剤を開示する。診断試験へのヘパリ
ンに対する感度を調節する新規な方法および剤が開示さ
れている。これらの試験および剤において、ヘパリンと
錯体を形成することができ、それによりヘパリン活性を
減少させる金属塩を試薬の１つにかまたは試験バッチ自
体に添加される。ヘパリンによる試験への影響は、この
ようにして完全に抑制されるかまたは所望のレベルに調
節される。適当な金属は例えば亜鉛または銅である。あ
る場合には、既知のヘパリンの作用を中性化する物質例
えばポリカチオンとの組合わせが相乗効果をもたらすこ
とがあり、それ故有利である。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】ヘパ
リンは、異なった構造のヘキソサミン基およびヘキスロ
ン酸基を交互に有している多硫酸化ムコ多糖類である。
これらのものは動物の粘膜および肺から単離されてい
る。相対分子量は入手源によって約５,０００と３０,０
００との間で変化する。
リンは、異なった構造のヘキソサミン基およびヘキスロ
ン酸基を交互に有している多硫酸化ムコ多糖類である。
これらのものは動物の粘膜および肺から単離されてい
る。相対分子量は入手源によって約５,０００と３０,０
００との間で変化する。
【０００３】ヘパリンは抗トロンビンIII、トロンビン
および第Ｘａ因子と結合可能であり、これによりプロテ
アーゼとその阻害剤との反応速度を大幅に増加させる。
血漿中、ヘパリンは抗トロンビンIIIと結合し、これに
よりこの「緩徐作用性」−「進行性阻害剤」を、血液凝
固に有効な「即時性阻害剤錯体」に転換される。医薬で
は、ヘパリンは、血液凝固性を減少させる治療物質とし
て繁用されている。これによって、血栓症および塞栓症
の発生が予防される。投与量は、例えば出血の危険を最
小限とするために、診断学的にモニターしなければなら
ない。この目的に最も頻繁に用いられる試験例えばトロ
ンビン時間または活性化部分トロンポスタチン時間（ａ
ＰＴＴ）は、一般には、若干高い目の投与量では余りに
も鋭敏であり、その結果、凝固時間のポイントをもはや
測定することができなくなる。
および第Ｘａ因子と結合可能であり、これによりプロテ
アーゼとその阻害剤との反応速度を大幅に増加させる。
血漿中、ヘパリンは抗トロンビンIIIと結合し、これに
よりこの「緩徐作用性」−「進行性阻害剤」を、血液凝
固に有効な「即時性阻害剤錯体」に転換される。医薬で
は、ヘパリンは、血液凝固性を減少させる治療物質とし
て繁用されている。これによって、血栓症および塞栓症
の発生が予防される。投与量は、例えば出血の危険を最
小限とするために、診断学的にモニターしなければなら
ない。この目的に最も頻繁に用いられる試験例えばトロ
ンビン時間または活性化部分トロンポスタチン時間（ａ
ＰＴＴ）は、一般には、若干高い目の投与量では余りに
も鋭敏であり、その結果、凝固時間のポイントをもはや
測定することができなくなる。
【０００４】トロンビン時間はヘパリン治療でのコント
ロール・パラメーターである。クエン酸塩または酒石酸
塩添加血漿の凝固時間は、トロンビンの標準となる量を
加えた後で測定される。これらの試験でのヘパリン感度
を調整し、それにより一方では低ヘパリン濃度の領域で
反応し、他方高い方のヘパリン濃度の領域での評価がな
お可能となるのが望ましい。その他の試験（例えば、プ
ロトロンビン時間）では、ヘパリン治療中の患者の試料
と望ましくない干渉がみられる。この場合、ヘパリンの
影響を完全に除外することが必要である。プロトロンビ
ン時間の測定は主にビタミンＫ−依存性凝固因子の活性
を測定するのに使用される。ヘパリン投与量が高いと、
長い凝固時間がかかり、これらの凝固因子の血漿含量の
低減が結果として得られる。これにより、結果として該
因子を含む製剤の不必要な投与を招き、患者は不必要
で、かつ危険を有する治療にさらされることになる。
ロール・パラメーターである。クエン酸塩または酒石酸
塩添加血漿の凝固時間は、トロンビンの標準となる量を
加えた後で測定される。これらの試験でのヘパリン感度
を調整し、それにより一方では低ヘパリン濃度の領域で
反応し、他方高い方のヘパリン濃度の領域での評価がな
お可能となるのが望ましい。その他の試験（例えば、プ
ロトロンビン時間）では、ヘパリン治療中の患者の試料
と望ましくない干渉がみられる。この場合、ヘパリンの
影響を完全に除外することが必要である。プロトロンビ
ン時間の測定は主にビタミンＫ−依存性凝固因子の活性
を測定するのに使用される。ヘパリン投与量が高いと、
長い凝固時間がかかり、これらの凝固因子の血漿含量の
低減が結果として得られる。これにより、結果として該
因子を含む製剤の不必要な投与を招き、患者は不必要
で、かつ危険を有する治療にさらされることになる。
【０００５】診断試験に対するヘパリンの望ましくない
影響を排除するのに、試験を行う前に、ヘパリンを試料
から除去することができる。イオン交換体での処理によ
って、試料からヘパリンをなくすることが知られてい
る。米国特許第５,０００,８５４号（Yang）には、担体
に結合されたプロタミンにより、血液からヘパリンを除
去する方法が開示されている。米国特許第４,１９９,５
０２号（BabsonおよびTurner, １９８０年）には、プロ
タミンおよび血清アルブミンの複合体を試料に加え、相
当な時間の後に形成したヘパリン含有沈殿を濾去する方
法が開示されている。
影響を排除するのに、試験を行う前に、ヘパリンを試料
から除去することができる。イオン交換体での処理によ
って、試料からヘパリンをなくすることが知られてい
る。米国特許第５,０００,８５４号（Yang）には、担体
に結合されたプロタミンにより、血液からヘパリンを除
去する方法が開示されている。米国特許第４,１９９,５
０２号（BabsonおよびTurner, １９８０年）には、プロ
タミンおよび血清アルブミンの複合体を試料に加え、相
当な時間の後に形成したヘパリン含有沈殿を濾去する方
法が開示されている。
【０００６】これらの方法は極めて時間がかかり、かつ
また、その凝固特性に関して、試料に不利な影響を及ぼ
す。試料から除去することなく、ヘパリンの作用を中性
化することもできる。これには、例えば、ポリカチオン
（polycation）を正確に秤量した量で試料に加える。２
種の反対に帯電した巨大分子の複合体が形成される。そ
の負電荷を中和することにより、ヘパリンはその作用を
失う。このことは、プロタミンについて、１９３９年ほ
どの早い時期にJorpes等によって開示されていた（Lanc
et２、１９３９年、９７５−９７６頁）。その他の適当
な物質はもっとあとで開示されている。すなわち、例え
ば、ポリブレン（Polybrene）（ヘキサジメトリンブロ
マイド）がGodalにより開示されている（Scand. J. Cli
n. Lab. Invest. １２巻（１９６０年）、４４６−４５
７頁）。
また、その凝固特性に関して、試料に不利な影響を及ぼ
す。試料から除去することなく、ヘパリンの作用を中性
化することもできる。これには、例えば、ポリカチオン
（polycation）を正確に秤量した量で試料に加える。２
種の反対に帯電した巨大分子の複合体が形成される。そ
の負電荷を中和することにより、ヘパリンはその作用を
失う。このことは、プロタミンについて、１９３９年ほ
どの早い時期にJorpes等によって開示されていた（Lanc
et２、１９３９年、９７５−９７６頁）。その他の適当
な物質はもっとあとで開示されている。すなわち、例え
ば、ポリブレン（Polybrene）（ヘキサジメトリンブロ
マイド）がGodalにより開示されている（Scand. J. Cli
n. Lab. Invest. １２巻（１９６０年）、４４６−４５
７頁）。
【０００７】試薬にポリカチオンを添加するかまたは試
験バッチに別個に添加することも考えられる。これらの
物質は血漿、試薬にまたは別個に試験バッチに加えられ
る。しかし、そのポリカチオン性状のために、これらの
ものは往々にして試薬の構成分と反応し、試験で多大の
干渉をもたらす不利な点がある。それで、例えば、これ
らのものは、りん脂質表面に結合し、その凝固促進特性
を無効としてしまう。それ故、これらのものはりん脂質
を含む試験系、例えばプロトロンビン時間またはａＰＴ
Ｔで使用することができない。ヘパリンがその作用を完
全に失ってしまうほどヘパリンを強固に結合するそれら
の特性もまた不利な点である。従って、試験系を、治療
のコントロールおよびモニターのため、ヘパリン感度を
低減するよう調節することは不可能である。
験バッチに別個に添加することも考えられる。これらの
物質は血漿、試薬にまたは別個に試験バッチに加えられ
る。しかし、そのポリカチオン性状のために、これらの
ものは往々にして試薬の構成分と反応し、試験で多大の
干渉をもたらす不利な点がある。それで、例えば、これ
らのものは、りん脂質表面に結合し、その凝固促進特性
を無効としてしまう。それ故、これらのものはりん脂質
を含む試験系、例えばプロトロンビン時間またはａＰＴ
Ｔで使用することができない。ヘパリンがその作用を完
全に失ってしまうほどヘパリンを強固に結合するそれら
の特性もまた不利な点である。従って、試験系を、治療
のコントロールおよびモニターのため、ヘパリン感度を
低減するよう調節することは不可能である。
【０００８】別の可能性は、酵素ヘパリナーゼを試料に
加えてヘパリンを酵素的に破壊することである。かかる
可能性は文献にいくつかの例で開示されている。例え
ば、ＷＯ ８９／１２６９２。しかし、これらの方法は
一般には時間がかかる。その理由は酵素開裂速度が比較
的低いからである。更にまた、ヘパリンを破壊する追加
のプロセス工程が必要である。この場合も、治療のコン
トロールおよびモニターのため試験系を低減ヘパリン感
度に調節することが可能ではない。ヘパリンが種々の金
属イオンとの結合を形成することが既に開示されてい
る。例えばLagesおよびStivala, Biopolymers, １２巻
（１９７３年）、１２７−１４３頁。カルシウム、銅お
よび亜鉛により形成されたヘパリン錯体は、とりわけ純
粋な系で、生物物理学的および生化学的に特徴付けられ
ている。この結合はヘパリン精製に使用可能である。そ
れで、例えば、銅−ヘパリン錯体の形成を利用するアフ
ィニティークロマトグラフィー工程がＷＯ ８７／０９
３４７に開示されている。
加えてヘパリンを酵素的に破壊することである。かかる
可能性は文献にいくつかの例で開示されている。例え
ば、ＷＯ ８９／１２６９２。しかし、これらの方法は
一般には時間がかかる。その理由は酵素開裂速度が比較
的低いからである。更にまた、ヘパリンを破壊する追加
のプロセス工程が必要である。この場合も、治療のコン
トロールおよびモニターのため試験系を低減ヘパリン感
度に調節することが可能ではない。ヘパリンが種々の金
属イオンとの結合を形成することが既に開示されてい
る。例えばLagesおよびStivala, Biopolymers, １２巻
（１９７３年）、１２７−１４３頁。カルシウム、銅お
よび亜鉛により形成されたヘパリン錯体は、とりわけ純
粋な系で、生物物理学的および生化学的に特徴付けられ
ている。この結合はヘパリン精製に使用可能である。そ
れで、例えば、銅−ヘパリン錯体の形成を利用するアフ
ィニティークロマトグラフィー工程がＷＯ ８７／０９
３４７に開示されている。
【０００９】しかし、重金属が多くの酵素プロセスを阻
害することも既に開示されている。亜鉛による第VII因
子の阻害が詳しく検討されている（Pedersen等、Throm
b. Haemostasis, ６５(５)巻；１９９１年；５２８−５
３４頁）。それ故、血液凝固の測定のために用いられ
る、すなわち酵素作用に本質的に基づいてもいる診断試
験または試薬にかかる金属イオンを導入することは専門
家にとって適切なものとは思えない。
害することも既に開示されている。亜鉛による第VII因
子の阻害が詳しく検討されている（Pedersen等、Throm
b. Haemostasis, ６５(５)巻；１９９１年；５２８−５
３４頁）。それ故、血液凝固の測定のために用いられ
る、すなわち酵素作用に本質的に基づいてもいる診断試
験または試薬にかかる金属イオンを導入することは専門
家にとって適切なものとは思えない。
【００１０】
【課題解決のための手段】それで、本発明は、それ自体
知られている凝固試験のヘパリン感度の低減または排除
の可能性を発見した技術上の問題に基づくものであっ
た。この技術上の問題の解決は、本願特許請求の範囲で
特徴付けられる態様の提供により達成される。しかし、
意外にも、本発明によれば、適当な濃度の金属塩は診断
試薬のヘパリン感度を調節するのに使用し得ることが見
い出された。本発明は、血液凝固性を測定するための試
験の添加剤に関する。添加剤とは、診断試験に添加し得
る剤を意味するものと解される。添加剤は、溶媒または
既製緩衝液であってよく、これらは試験バッチに独立し
た成分として添加されるかまたは診断試験の試薬に既に
添加されている。本発明による添加剤は少なくとも１種
の金属塩を包含し、而してその金属イオンはヘパリンと
錯体を形成し、それにより診断試験に対するヘパリンの
干渉影響が阻害されるかまたは少なくとも相当低減され
るものである。
知られている凝固試験のヘパリン感度の低減または排除
の可能性を発見した技術上の問題に基づくものであっ
た。この技術上の問題の解決は、本願特許請求の範囲で
特徴付けられる態様の提供により達成される。しかし、
意外にも、本発明によれば、適当な濃度の金属塩は診断
試薬のヘパリン感度を調節するのに使用し得ることが見
い出された。本発明は、血液凝固性を測定するための試
験の添加剤に関する。添加剤とは、診断試験に添加し得
る剤を意味するものと解される。添加剤は、溶媒または
既製緩衝液であってよく、これらは試験バッチに独立し
た成分として添加されるかまたは診断試験の試薬に既に
添加されている。本発明による添加剤は少なくとも１種
の金属塩を包含し、而してその金属イオンはヘパリンと
錯体を形成し、それにより診断試験に対するヘパリンの
干渉影響が阻害されるかまたは少なくとも相当低減され
るものである。
【００１１】本発明で使用される金属塩の金属は、好ま
しくは元素周期律表のＩ族またはII族から選ばれ、金属
が銅または亜鉛が特に好ましい。
しくは元素周期律表のＩ族またはII族から選ばれ、金属
が銅または亜鉛が特に好ましい。
【００１２】本発明で使用される金属塩は、金属塩の０
mMより大きく、２０mMまでの濃度で使用される。好まし
くは、金属塩の濃度は５０〜５００μMの範囲で変わ
る。本発明の思想により達成され得る意外に有利な効果
は、金属イオンに加えて、ポリカチオンを添加剤に加え
ると、更に改善されることも見い出された。ここで、特
に好適なポリカチオンはポリブレン（Polybrene）であ
る。本発明はまた本発明による添加剤を包含するトロン
ボプラスチン時間測定のための診断試薬に関する。本発
明はまた本発明による添加剤を包含し、トロンビン時間
の測定または活性化部分トロンボプラスチン時間測定の
ために使用される診断試薬に関する。
mMより大きく、２０mMまでの濃度で使用される。好まし
くは、金属塩の濃度は５０〜５００μMの範囲で変わ
る。本発明の思想により達成され得る意外に有利な効果
は、金属イオンに加えて、ポリカチオンを添加剤に加え
ると、更に改善されることも見い出された。ここで、特
に好適なポリカチオンはポリブレン（Polybrene）であ
る。本発明はまた本発明による添加剤を包含するトロン
ボプラスチン時間測定のための診断試薬に関する。本発
明はまた本発明による添加剤を包含し、トロンビン時間
の測定または活性化部分トロンボプラスチン時間測定の
ために使用される診断試薬に関する。
【００１３】本発明に関連して、ヘパリンによる診断試
験の影響を低減させる方法が開示され、この方法では、
本発明による添加剤は試験バッチの少なくとも１種の試
薬に組み入れられるか、または試験バッチに別個に加え
られる。診断試験は好ましくは血液凝固性測定方法であ
る。本発明はまた血液凝固性の測定用診断試験でのヘパ
リンによる影響を低減するための本発明による添加剤の
使用に関する。
験の影響を低減させる方法が開示され、この方法では、
本発明による添加剤は試験バッチの少なくとも１種の試
薬に組み入れられるか、または試験バッチに別個に加え
られる。診断試験は好ましくは血液凝固性測定方法であ
る。本発明はまた血液凝固性の測定用診断試験でのヘパ
リンによる影響を低減するための本発明による添加剤の
使用に関する。
【００１４】
【実施例】次に実施例をあげて本発明を具体的に説明す
る。これらの実施例は、試験に対するヘパリン効果の実
質的な排除（実施例１）、および既知のその他のヘパリ
ン作用の中性化剤による相乗効果（実施例１）、ならび
に試験システムのヘパリン感度の所望の程度への調整可
能性（実施例２および３）を説明するものである。
る。これらの実施例は、試験に対するヘパリン効果の実
質的な排除（実施例１）、および既知のその他のヘパリ
ン作用の中性化剤による相乗効果（実施例１）、ならび
に試験システムのヘパリン感度の所望の程度への調整可
能性（実施例２および３）を説明するものである。
【００１５】実施例１ トロンボプラスチン時間試薬に対する塩化亜鉛および
（または）ポリブレンの添加によるヘパリン作用の中性
化 正常の血漿プールを１IU／ml−４IU／mlの濃度でヘパリ
ン（Liquemin(R), Roche）で満たす。トロンボプラスチ
ン時間試薬（Thramborel R, Behringwerbe AG）を択一
的に次のものに溶解する。
（または）ポリブレンの添加によるヘパリン作用の中性
化 正常の血漿プールを１IU／ml−４IU／mlの濃度でヘパリ
ン（Liquemin(R), Roche）で満たす。トロンボプラスチ
ン時間試薬（Thramborel R, Behringwerbe AG）を択一
的に次のものに溶解する。
【００１６】ａ） 水 ｂ） １００μM 塩化亜鉛 ｃ） １００μM 塩化亜鉛、ポリブレン １０mg／リッ
トル。 トロンボプラスチン時間を製造業者の説明書に従って測
定する。図１は、プロトロンビン時間試薬の３種の溶媒
についてのヘパリン濃度に対するプロトロンビン時間の
依存性を示す。本発明による添加剤ａ）およびｃ）を用
いるときは、ヘパリンの干渉影響を著しく減退させるか
または完全に排除し得ることがわかる。
トル。 トロンボプラスチン時間を製造業者の説明書に従って測
定する。図１は、プロトロンビン時間試薬の３種の溶媒
についてのヘパリン濃度に対するプロトロンビン時間の
依存性を示す。本発明による添加剤ａ）およびｃ）を用
いるときは、ヘパリンの干渉影響を著しく減退させるか
または完全に排除し得ることがわかる。
【００１７】実施例２ 亜鉛によるトロンビン時間試薬のヘパリン感度の調節 新しい血漿を０.１IU／ml−０.６IU／mlの濃度のヘパリ
ン（Liquemin, Roche）で満たした。トロンビン時間試
薬（Test-Thrombin-Reagenz, Behringwerbe AG）を３IU
／mlの濃度で溶解した。この試薬のために企図されてい
る緩衝液を１６０μMおよび２００μMの濃度の塩化亜鉛
で満たした。トロンビン時間測定は次のとおりに行っ
た： 試料 １００μｌ 緩衝液 １００μｌ ３７℃で６０秒培養 トロンビン（３IU／ml） １００μｌ 凝固開始を測定。
ン（Liquemin, Roche）で満たした。トロンビン時間試
薬（Test-Thrombin-Reagenz, Behringwerbe AG）を３IU
／mlの濃度で溶解した。この試薬のために企図されてい
る緩衝液を１６０μMおよび２００μMの濃度の塩化亜鉛
で満たした。トロンビン時間測定は次のとおりに行っ
た： 試料 １００μｌ 緩衝液 １００μｌ ３７℃で６０秒培養 トロンビン（３IU／ml） １００μｌ 凝固開始を測定。
【００１８】図２は、試料のヘパリン含量および緩衝液
の亜鉛含量の関数として測定したトロンビン時間を示
す。特にヘパリン濃度が比較的低いと、それに起因する
干渉を事実上完全に排除することができる。
の亜鉛含量の関数として測定したトロンビン時間を示
す。特にヘパリン濃度が比較的低いと、それに起因する
干渉を事実上完全に排除することができる。
【００１９】実施例３ 亜鉛による活性化部分トロンボプラスチン時間のヘパリ
ン感度の調節 凍結乾燥したヒト正常血漿プールを０.１IU／ml−０.６
IU／mlの濃度のヘパリン（Liquemin, Roche）で満たし
た。ａＰＴＴは製造業者の説明書に従ってPathromtin
（Behringwerbe AG）で行った。塩化亜鉛を５０μMおよ
び１００μMの濃度で賦活試薬かまたは出発試薬（塩化
カルシウム）に加えた。
ン感度の調節 凍結乾燥したヒト正常血漿プールを０.１IU／ml−０.６
IU／mlの濃度のヘパリン（Liquemin, Roche）で満たし
た。ａＰＴＴは製造業者の説明書に従ってPathromtin
（Behringwerbe AG）で行った。塩化亜鉛を５０μMおよ
び１００μMの濃度で賦活試薬かまたは出発試薬（塩化
カルシウム）に加えた。
【００２０】図３は、試料のヘパリン含量および出発試
薬の亜鉛含量の関数として測定したａＰＴＴを示す。塩
化亜鉛の賦活試薬への添加についても、同様な測定値が
得られた。
薬の亜鉛含量の関数として測定したａＰＴＴを示す。塩
化亜鉛の賦活試薬への添加についても、同様な測定値が
得られた。
【００２１】添付図面は次のとおり示すものである。 図１：トロンボプラスチン時間試薬への塩化亜鉛および
（または）ポリブレンの添加によるヘパリンの作用の中
性化 Thrombonel Sを、実施例１に記載の如く、種々の溶媒に
溶解した。正常な血漿プールを１IU／ml−４IU／mlの濃
度でヘパリン（Liquemin(R), Roche）で満たした。図１
は、プロトロンビン試薬の３種の溶媒についてのヘパリ
ン濃度に対するプロトロンビン時間の依存性を示す。
（または）ポリブレンの添加によるヘパリンの作用の中
性化 Thrombonel Sを、実施例１に記載の如く、種々の溶媒に
溶解した。正常な血漿プールを１IU／ml−４IU／mlの濃
度でヘパリン（Liquemin(R), Roche）で満たした。図１
は、プロトロンビン試薬の３種の溶媒についてのヘパリ
ン濃度に対するプロトロンビン時間の依存性を示す。
【００２２】図２：亜鉛によるトロンビン時間試薬のヘ
パリン感度の調節 供試トロンビン試薬を実施例２に記載の如く溶解した。
新たな血漿を０.１IU／ml−０.６IU／mlの濃度でヘパリ
ン（Liquemin, Roche）で満たした。この図は、試料の
ヘパリン含量および緩衝液の亜鉛含量の関数として測定
したトロンビン時間を示す。
パリン感度の調節 供試トロンビン試薬を実施例２に記載の如く溶解した。
新たな血漿を０.１IU／ml−０.６IU／mlの濃度でヘパリ
ン（Liquemin, Roche）で満たした。この図は、試料の
ヘパリン含量および緩衝液の亜鉛含量の関数として測定
したトロンビン時間を示す。
【００２３】図３:亜鉛による活性化部分トロンボプラ
スチン時間の、ヘパリン感度の調節 Pathromtinを実施例３に記載の如く製造した。凍結乾燥
したヒト正常血漿プールを０.１IU／ml−０.６IU／mlの
濃度でヘパリン（Liquemin, Roche）で満たした。図３
は、試料のヘパリン含量および出発試薬の亜鉛含量の関
数として測定したａＰＴＴを示す。塩化亜鉛の賦活試薬
への添加について、同様な測定値が得られた。測定時間
は三つの図面をもとに秒で示している。
スチン時間の、ヘパリン感度の調節 Pathromtinを実施例３に記載の如く製造した。凍結乾燥
したヒト正常血漿プールを０.１IU／ml−０.６IU／mlの
濃度でヘパリン（Liquemin, Roche）で満たした。図３
は、試料のヘパリン含量および出発試薬の亜鉛含量の関
数として測定したａＰＴＴを示す。塩化亜鉛の賦活試薬
への添加について、同様な測定値が得られた。測定時間
は三つの図面をもとに秒で示している。
【図１】トロンボプラスチン時間試薬への塩化亜鉛およ
び（または）ポリブレンの添加によるヘパリンの作用の
中性化を示す。
び（または）ポリブレンの添加によるヘパリンの作用の
中性化を示す。
【図２】亜鉛によるトロンビン時間試薬のヘパリン感度
の修正を示す。
の修正を示す。
【図３】亜鉛による活性化部分トロンボプラスチン時間
のヘパリン感度の修正を示す。
のヘパリン感度の修正を示す。
Claims (12)
- 【請求項１】 金属塩の少なくとも１種を包含し、その
金属イオンがヘパリンと錯体を形成し得るものである血
液凝固性の測定試験のための添加剤。 - 【請求項２】 金属が元素周期律表のＩ族またはII族か
ら選択される請求項１記載の添加剤。 - 【請求項３】 金属が銅または亜鉛である請求項２記載
の添加剤。 - 【請求項４】 金属塩を、０mMより大きく、２０mMまで
の濃度で使用する請求項１〜３記載の添加剤。 - 【請求項５】 金属塩を５０〜５００μMの濃度で使用
する請求項４記載の添加剤。 - 【請求項６】 さらにポリカチオンの少なくとも１種を
包含する請求項１〜５のいずれか１つに記載の添加剤。 - 【請求項７】 請求項１〜６のいずれか１つに記載の添
加剤を包含するトロンポプラスチン時間測定のための診
断試薬。 - 【請求項８】 請求項１〜６のいずれか１つに記載の添
加剤を包含するトロンビン時間測定のための診断試薬。 - 【請求項９】 請求項１〜６のいずれか１つに記載の添
加剤を包含する活性化部分トロンポプラスチン時間測定
のための診断試薬。 - 【請求項１０】 請求項１〜６のいずれか１つに記載の
添加剤を試験バッチの少なくとも１種の試薬に組み入れ
るかまたは試験バッチに別個に加えることを包含するヘ
パリンによる診断試験への影響を低減する方法。 - 【請求項１１】 血液凝固性の測定法である請求項１０
記載の方法。 - 【請求項１２】 血液凝固性の測定診断試験でのヘパリ
ンの影響を低減するための請求項１〜６のいずれか１つ
に記載の添加剤の使用。
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|---|---|---|---|
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| DE4429660A DE4429660B4 (de) | 1994-08-20 | 1994-08-20 | Zusatzmittel für diagnostische Tests zur Bestimmung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes, Verfahren zur Reduzierung der Beeinflussung von diagnostischen Tests durch Heparin und Verwendung von Metallsalzen zu diesen Zwecken |
Publications (2)
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|---|---|
| JPH0868794A true JPH0868794A (ja) | 1996-03-12 |
| JP3939771B2 JP3939771B2 (ja) | 2007-07-04 |
Family
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|---|---|
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| EP (1) | EP0697463B1 (ja) |
| JP (1) | JP3939771B2 (ja) |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006349684A (ja) * | 2005-06-16 | 2006-12-28 | Dade Behring Marburg Gmbh | 血液凝固試験の標準化のための方法 |
| JP2017032344A (ja) * | 2015-07-30 | 2017-02-09 | シスメックス株式会社 | 凝固時間の測定方法およびその装置、凝固時間測定用試薬ならびに試薬キット |
| WO2017073795A1 (ja) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 |
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| US6245573B1 (en) | 1998-02-12 | 2001-06-12 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Rapid assessment of the coagulant activity of blood |
| KR100527545B1 (ko) * | 2000-12-28 | 2005-11-09 | 주식회사 하이닉스반도체 | 반도체 소자의 제조 방법 |
| US7247488B2 (en) * | 2003-05-06 | 2007-07-24 | Medtronic, Inc. | Method and kit for testing a multi-channel blood assay cartridge |
| FR2934052B1 (fr) | 2008-07-17 | 2011-11-25 | Stago Diagnostica | Dosage de l'activite du facteur tissulaire circulant |
| EP2484775A1 (de) | 2011-02-07 | 2012-08-08 | Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH | Heparin-insensitives Verfahren zur Bestimmung von direkten Gerinnungsfaktorinhibitoren |
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| JP6577778B2 (ja) * | 2015-07-30 | 2019-09-18 | シスメックス株式会社 | 凝固時間の測定方法およびその装置、凝固時間測定用試薬ならびに試薬キット |
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|---|---|---|---|---|
| US4199502A (en) | 1978-08-04 | 1980-04-22 | Warner-Lambert Company | Removal of heparin from blood plasma samples using an insoluble protamine reaction product |
| US4226599A (en) * | 1979-06-20 | 1980-10-07 | Warner-Lambert Company | Removal of heparin from heparin-containing blood plasma samples using a triethylaminoethyl cellulose tablet |
| US4250041A (en) * | 1979-06-25 | 1981-02-10 | Warner-Lambert Company | Removal of heparin from blood plasma samples using an insoluble protamine reaction product |
| SE8702254D0 (sv) | 1987-05-29 | 1987-05-29 | Kabivitrum Ab | Novel heparin derivatives |
| WO1989012692A1 (en) | 1988-06-06 | 1989-12-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Large scale method for purification of high purity heparinase |
| US5055412A (en) * | 1989-03-21 | 1991-10-08 | Proksch Gary J | Factor sensitive reagent for testing of blood coagulation containing ellagic acid and divalent metal ions and method of making the same |
| US5000854A (en) | 1989-06-14 | 1991-03-19 | The University Of Michigan | Protamine-based filter device for removal of heparin from blood samples |
| ATE140034T1 (de) * | 1990-04-17 | 1996-07-15 | Analytical Control Syst Inc | Koagulationsassays und reagenzien |
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| US5286388A (en) * | 1991-06-20 | 1994-02-15 | Ingram John M | Method for neutralizing heparin in whole blood taken from an extracorporeal circuit |
-
1994
- 1994-08-20 DE DE4429660A patent/DE4429660B4/de not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-08-04 AT AT95112267T patent/ATE218166T1/de active
- 1995-08-04 ES ES95112267T patent/ES2177596T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-04 DE DE59510217T patent/DE59510217D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-04 EP EP95112267A patent/EP0697463B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-17 US US08/516,198 patent/US5705396A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-18 CA CA002156469A patent/CA2156469C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-18 JP JP21030995A patent/JP3939771B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-18 AU AU30150/95A patent/AU697417B2/en not_active Ceased
- 1995-08-18 KR KR1019950025348A patent/KR960008310A/ko not_active Withdrawn
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| CA2156469C (en) | 2008-01-15 |
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| DE59510217D1 (de) | 2002-07-04 |
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