JPH0873373A - 難治性皮膚欠損創治療剤 - Google Patents
難治性皮膚欠損創治療剤Info
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- JPH0873373A JPH0873373A JP6234487A JP23448794A JPH0873373A JP H0873373 A JPH0873373 A JP H0873373A JP 6234487 A JP6234487 A JP 6234487A JP 23448794 A JP23448794 A JP 23448794A JP H0873373 A JPH0873373 A JP H0873373A
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- Japan
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- polypeptide
- amino acid
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 難治性皮膚欠損創に効力を有する治療剤を提
供する。 【構成】 配列表の配列番号１で表されるアミノ酸配列
を有するポリペプチドを有効成分として含有する難治性
皮膚欠損創治療剤。該ポリペプチドは配列の長さ２７４
アミノ酸残基を有し、フィブロネクチン系のポリペプチ
ドである。投与量は５μｇ〜１ｇ／回でよく、外用剤と
して頻回投与が好ましい。
供する。 【構成】 配列表の配列番号１で表されるアミノ酸配列
を有するポリペプチドを有効成分として含有する難治性
皮膚欠損創治療剤。該ポリペプチドは配列の長さ２７４
アミノ酸残基を有し、フィブロネクチン系のポリペプチ
ドである。投与量は５μｇ〜１ｇ／回でよく、外用剤と
して頻回投与が好ましい。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、フィブロネクチンの機
能性ポリペプチドを配合してなる難治性皮膚欠損創治療
剤に関する。
能性ポリペプチドを配合してなる難治性皮膚欠損創治療
剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】フィブロネクチン（以下、ＦＮと略す）
は、動物の種々の組織や細胞表面、血液中などに存在す
る高分子量の多機能糖タンパク質であり、細胞の接着、
伸展、移動、分化、増殖、貪食作用などの生理作用を示
し、組織修復、癌転移抑制、生体防御などに関与してい
る。ＦＮは、分子量約２５万のポリペプチドを単位とす
る接着性糖タンパクで、Ｃ末端付近でＳ−Ｓ結合により
二量体又は四量体を形成している。分子内は、更に、種
々の機能を有するドメイン構造を有し、コラーゲン、ヘ
パリン及びフィブリン等に対する結合活性をもち、細胞
を接着・伸展させる働きを示す。これらのドメインのう
ち、細胞接着ドメインの基本構造については、その最小
必要単位としてＲ−Ｇ−Ｄ−Ｓ配列が明らかにされてお
り〔ネーチャー（Nature) 、第３０９巻、第３０〜３３
頁（１９８４）〕、この配列を含む配列表の配列番号１
で表されるポリペプチドの製造方法が、特開平２−９７
３９７号公報に記載されている。このポリペプチドの利
用法に関しては、癌転移防止剤（特開平３−１２７７４
２号公報）、脈管形成抑制剤（特開平３−１７３８２８
号公報）、角膜障害治療剤（特開平３−２９１２３８号
公報）、皮膚化粧料（特開平３−１９７４１１号公
報）、抗炎症剤（特開平３−２９１２３５号公報）、制
ガン剤（特開平４−５９７３４号公報）、歯根膜並びに
歯槽骨組織再生修復促進剤（特開平４−７４１３２号公
報）が知られている。しかし、糖尿病性皮膚潰瘍や重度
の褥瘡などの難治性皮膚欠損創を回復する治療剤として
の利用法については知られていない。近年、合成材料や
生体材料、あるいは両者を組合せた種々のタイプの創傷
被覆材が開発され、熱傷、外傷等の治療に適用されてい
る。更に、高機能を付与する目的で、生理活性物質を、
これらの創傷被覆材に含有させる試みが注目されてい
る。創面には、感染のない状態と感染の徴候を示す状
態、あるいは壊死組織の存在しない状態と介在する状態
があり、適用症例に応じて最適な機能を有する創傷被覆
材の選択が重要である。
は、動物の種々の組織や細胞表面、血液中などに存在す
る高分子量の多機能糖タンパク質であり、細胞の接着、
伸展、移動、分化、増殖、貪食作用などの生理作用を示
し、組織修復、癌転移抑制、生体防御などに関与してい
る。ＦＮは、分子量約２５万のポリペプチドを単位とす
る接着性糖タンパクで、Ｃ末端付近でＳ−Ｓ結合により
二量体又は四量体を形成している。分子内は、更に、種
々の機能を有するドメイン構造を有し、コラーゲン、ヘ
パリン及びフィブリン等に対する結合活性をもち、細胞
を接着・伸展させる働きを示す。これらのドメインのう
ち、細胞接着ドメインの基本構造については、その最小
必要単位としてＲ−Ｇ−Ｄ−Ｓ配列が明らかにされてお
り〔ネーチャー（Nature) 、第３０９巻、第３０〜３３
頁（１９８４）〕、この配列を含む配列表の配列番号１
で表されるポリペプチドの製造方法が、特開平２−９７
３９７号公報に記載されている。このポリペプチドの利
用法に関しては、癌転移防止剤（特開平３−１２７７４
２号公報）、脈管形成抑制剤（特開平３−１７３８２８
号公報）、角膜障害治療剤（特開平３−２９１２３８号
公報）、皮膚化粧料（特開平３−１９７４１１号公
報）、抗炎症剤（特開平３−２９１２３５号公報）、制
ガン剤（特開平４−５９７３４号公報）、歯根膜並びに
歯槽骨組織再生修復促進剤（特開平４−７４１３２号公
報）が知られている。しかし、糖尿病性皮膚潰瘍や重度
の褥瘡などの難治性皮膚欠損創を回復する治療剤として
の利用法については知られていない。近年、合成材料や
生体材料、あるいは両者を組合せた種々のタイプの創傷
被覆材が開発され、熱傷、外傷等の治療に適用されてい
る。更に、高機能を付与する目的で、生理活性物質を、
これらの創傷被覆材に含有させる試みが注目されてい
る。創面には、感染のない状態と感染の徴候を示す状
態、あるいは壊死組織の存在しない状態と介在する状態
があり、適用症例に応じて最適な機能を有する創傷被覆
材の選択が重要である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】糖尿病性皮膚潰瘍や重
度の褥瘡などは治癒しにくい創面であり、これらの難治
性皮膚欠損創に適用できる治療剤の開発が望まれてい
る。本発明の目的は難治性皮膚欠損創に効力を有する治
療剤を提供することにある。
度の褥瘡などは治癒しにくい創面であり、これらの難治
性皮膚欠損創に適用できる治療剤の開発が望まれてい
る。本発明の目的は難治性皮膚欠損創に効力を有する治
療剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば本発
明は難治性皮膚欠損創治療剤に関し、配列表の配列番号
１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを有効
成分として含有することを特徴とする。
明は難治性皮膚欠損創治療剤に関し、配列表の配列番号
１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを有効
成分として含有することを特徴とする。
【０００５】難治性皮膚欠損創治療剤の開発を行うに
は、該皮膚欠損創の動物実験モデルの作出が必要である
が、糖尿病性皮膚潰瘍や重度の褥瘡にみられるような慢
性不良肉芽組織創を動物実験において厳密に再現するこ
とは不可能である。しかし、本発明者は臨床的な該組織
創に最も近い不良肉芽組織モデルを新たに作製し、該モ
デルを用いてスクリーニングをした結果、配列表の配列
番号１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドが
顕著な創面の収縮を伴う治癒効果を示すことを見出し、
本発明を完成させるに至った。
は、該皮膚欠損創の動物実験モデルの作出が必要である
が、糖尿病性皮膚潰瘍や重度の褥瘡にみられるような慢
性不良肉芽組織創を動物実験において厳密に再現するこ
とは不可能である。しかし、本発明者は臨床的な該組織
創に最も近い不良肉芽組織モデルを新たに作製し、該モ
デルを用いてスクリーニングをした結果、配列表の配列
番号１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドが
顕著な創面の収縮を伴う治癒効果を示すことを見出し、
本発明を完成させるに至った。
【０００６】本発明の難治性皮膚欠損創治療剤中の、上
記ポリペプチドの含有量は任意とすることができるが、
治療剤中に０．００００１〜３０重量％、好ましくは
０．０００１〜１０重量％含有させるのがよい。
記ポリペプチドの含有量は任意とすることができるが、
治療剤中に０．００００１〜３０重量％、好ましくは
０．０００１〜１０重量％含有させるのがよい。
【０００７】本発明の治療剤は、水や生理食塩水、ＰＢ
Ｓ、軟膏等に溶解、分散した形態で、創面に直接塗布し
て適用しても良いが、含水性創傷被覆材を創面に適用し
た際に、上記ポリペプチドを含有する溶液を該被覆材に
含浸させる使用法が最も効果的である。
Ｓ、軟膏等に溶解、分散した形態で、創面に直接塗布し
て適用しても良いが、含水性創傷被覆材を創面に適用し
た際に、上記ポリペプチドを含有する溶液を該被覆材に
含浸させる使用法が最も効果的である。
【０００８】配列表の配列番号１で表されるアミノ酸配
列を有するポリペプチドとしては、例えば特開平１−８
０９００号、同１−２０６９９８号、同２−９７３９７
号、同２−１５２９９０号、同２−３１１４９８号各公
報に記載の各ポリペプチドがある。
列を有するポリペプチドとしては、例えば特開平１−８
０９００号、同１−２０６９９８号、同２−９７３９７
号、同２−１５２９９０号、同２−３１１４９８号各公
報に記載の各ポリペプチドがある。
【０００９】配列表の配列番号１で表されるポリペプチ
ド（以下、Ｃ−２７４と呼称する）の製造方法は前出特
開平２−９７３９７号公報に示されており、以下具体的
に説明する。なお、本明細書において、アミノ酸に付さ
れた肩数字は、ＥＭＢＬデータバンク（EMBL DATA BAN
K) のＦＮアミノ酸に付与されたＮ末からのアミノ酸残
基数を示す。Ｃ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓｐ1512）
は、既に特許出願している２７９アミノ酸残基ポリペプ
チド（Ｐｒｏ1239−Ｍｅｔ1517）（特開平１−２０６９
９８号）のＣ末端５アミノ酸残基を欠失させたものであ
る。Ｃ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓｐ1512）を遺伝子工
学的に調製する方法としては、上述した２７９アミノ酸
残基ポリペプチド（Ｐｒｏ1239−Ｍｅｔ1517）をコード
するプラスミドｐＴＦＤ７０７を用いるのが好都合であ
る。２７９アミノ酸残基ポリペプチドのＣ末端より５残
基目のＬｙｓ1513のコドンＡＡＡを終止コドンＴＡＡに
変換することによりＣ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓｐ
1512）をコードするプラスミドを調製することができ
る。この塩基の変換は、部位特異的変異の導入により行
うことができる。Ｃ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓ
ｐ1512）を発現するプラスミドを導入した大腸菌は、 E
scherichia coli JM 109/pTF 7221 と命名、表示し、既
に工業技術院微生物工業技術研究所に、微工研条寄第１
９１５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９１５）として寄託され
ている。組換体からのこの細胞接着ポリペプチド・Ｃ−
２７４の精製は、例えば次のようにする。菌体ペレット
をバッファーに懸濁し、超音波処理により可溶性画分と
不溶性画分に分ける。後者は更に７Ｍ尿素を含むバッフ
ァーで可溶化する。可溶性画分を集めて、ＦＮの細胞接
着ドメインに特異的な抗体を結合させたセファロース４
Ｂのカラムにかけ、アフィニティ精製を行う。溶出には
ｐＨ２．３付近のバッファーを用いる。イムノブロッテ
ィングで目的画分を集めることにより、細胞接着活性ポ
リペプチド・Ｃ−２７４を得ることができる。必要とあ
れば、ＦＰＬＣ又はＨＰＬＣで更に精製することができ
る。
ド（以下、Ｃ−２７４と呼称する）の製造方法は前出特
開平２−９７３９７号公報に示されており、以下具体的
に説明する。なお、本明細書において、アミノ酸に付さ
れた肩数字は、ＥＭＢＬデータバンク（EMBL DATA BAN
K) のＦＮアミノ酸に付与されたＮ末からのアミノ酸残
基数を示す。Ｃ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓｐ1512）
は、既に特許出願している２７９アミノ酸残基ポリペプ
チド（Ｐｒｏ1239−Ｍｅｔ1517）（特開平１−２０６９
９８号）のＣ末端５アミノ酸残基を欠失させたものであ
る。Ｃ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓｐ1512）を遺伝子工
学的に調製する方法としては、上述した２７９アミノ酸
残基ポリペプチド（Ｐｒｏ1239−Ｍｅｔ1517）をコード
するプラスミドｐＴＦＤ７０７を用いるのが好都合であ
る。２７９アミノ酸残基ポリペプチドのＣ末端より５残
基目のＬｙｓ1513のコドンＡＡＡを終止コドンＴＡＡに
変換することによりＣ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓｐ
1512）をコードするプラスミドを調製することができ
る。この塩基の変換は、部位特異的変異の導入により行
うことができる。Ｃ−２７４（Ｐｒｏ1239−Ａｓ
ｐ1512）を発現するプラスミドを導入した大腸菌は、 E
scherichia coli JM 109/pTF 7221 と命名、表示し、既
に工業技術院微生物工業技術研究所に、微工研条寄第１
９１５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９１５）として寄託され
ている。組換体からのこの細胞接着ポリペプチド・Ｃ−
２７４の精製は、例えば次のようにする。菌体ペレット
をバッファーに懸濁し、超音波処理により可溶性画分と
不溶性画分に分ける。後者は更に７Ｍ尿素を含むバッフ
ァーで可溶化する。可溶性画分を集めて、ＦＮの細胞接
着ドメインに特異的な抗体を結合させたセファロース４
Ｂのカラムにかけ、アフィニティ精製を行う。溶出には
ｐＨ２．３付近のバッファーを用いる。イムノブロッテ
ィングで目的画分を集めることにより、細胞接着活性ポ
リペプチド・Ｃ−２７４を得ることができる。必要とあ
れば、ＦＰＬＣ又はＨＰＬＣで更に精製することができ
る。
【００１０】上記ポリペプチドは糖鎖を有しても、有さ
なくとも良い。投与量は、投与方法、患者の年令、体
重、症状、治療目的により決定されるが、一般に成人の
場合、一回につき５μｇ〜１ｇが好ましい。本発明の治
療剤は局所投与が望ましく、外用剤として頻回投与が好
ましい。
なくとも良い。投与量は、投与方法、患者の年令、体
重、症状、治療目的により決定されるが、一般に成人の
場合、一回につき５μｇ〜１ｇが好ましい。本発明の治
療剤は局所投与が望ましく、外用剤として頻回投与が好
ましい。
【００１１】本発明に使用するポリペプチドは１００ｍ
ｇ／ｋｇをマウスに静脈内投与しても毒性は全く示さ
ず、局所投与においても安全性の高いポリペプチドであ
る。
ｇ／ｋｇをマウスに静脈内投与しても毒性は全く示さ
ず、局所投与においても安全性の高いポリペプチドであ
る。
【００１２】適用の形態は上記のほかに、例えば懸濁
剤、乳剤、ペースト剤等の形態で用いることができる。
また創傷被覆材に含有させて適用しても良い。創傷被覆
材の材質としては、ヒアルロン酸、コラーゲン、キチン
等公知のものが使用でき、膜状、スポンジ状等に成型
し、使用すれば良い。また、皮膚細胞を含有する培養皮
膚と併用しても良い。なお、適用形態はこれらに限定さ
れるものではない。本発明の難治性皮膚欠損創治療剤中
には、通常この使用目的に用いられる原料、例えば界面
活性剤、アルコール類、保湿剤、増粘剤、賦形剤、防腐
剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素
等をＣ−２７４の機能を損わない範囲で配合可能であ
る。
剤、乳剤、ペースト剤等の形態で用いることができる。
また創傷被覆材に含有させて適用しても良い。創傷被覆
材の材質としては、ヒアルロン酸、コラーゲン、キチン
等公知のものが使用でき、膜状、スポンジ状等に成型
し、使用すれば良い。また、皮膚細胞を含有する培養皮
膚と併用しても良い。なお、適用形態はこれらに限定さ
れるものではない。本発明の難治性皮膚欠損創治療剤中
には、通常この使用目的に用いられる原料、例えば界面
活性剤、アルコール類、保湿剤、増粘剤、賦形剤、防腐
剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素
等をＣ−２７４の機能を損わない範囲で配合可能であ
る。
【００１３】〔薬理試験〕 １）不良肉芽組織創面の作製 治癒が遅延した不良肉芽組織創に対する治療剤の評価を
行うための、不良肉芽組織のモデルの作製を次のように
行った。５週令のＳＤラットの背部に直径３０ｍｍの全
層皮膚欠損創を作製して、外径３０ｍｍ内径２５ｍｍの
ポリスチレンリングを創の周辺に沿って縫合固定し、リ
ング上にエポキシ系接着剤を塗り直径３５ｍｍのナイロ
ン網あるいはゴアテックス膜（ゴア社）を接着固定し
て、この上にガーゼを当てステンレス網で保護して弾性
テープで固定した。このナイロン網あるいはゴアテック
ス膜は、創面に接着しない状態で固定してあり空気の透
過性を維持できる状態であり、半開放創に近い環境を提
供できる。この状態で３、６、９日後に１匹ずつラット
を犠死させ創面の状態を組織学的に観察した。全層皮膚
欠損創にナイロン網を非接触的に被覆した場合には、創
面上に浸出液が一時的に貯留されることなく外側のガー
ゼに吸収された。また、ナイロンの中央部が創面と接触
し、動物の動きに伴う摩擦により創面に機械的な刺激を
与える結果となった。ＨＥ染色による組織学的な観察に
よれば、３日間被覆した場合には、強い炎症反応を示す
組織構造を呈しており、６日間以上被覆した場合には、
強い炎症反応は持続し、密な基質構造を有する肉芽組織
の形成が開始されていた。一方、全層皮膚欠損創にゴア
テックス膜を非接触的に被覆した場合には、外側のガー
ゼに浸出液を吸収した形跡はみられなかった。ゴアテッ
クス膜は、空気は透過するが浸出液は透過しない特性を
もつため創面上に浸出液が一時的に貯留する環境を提供
できた。３日間被覆した場合には、炎症反応の弱い組織
構造を呈しており、６日間被覆した場合に、炎症反応は
弱く、浮腫を伴うルーズな基質構造を有する肉芽組織の
形成が観察された。しかし、９日間以上被覆した場合に
は密な基質構造を有する組織構造に変化した。以上の結
果、ゴアテックス膜を６日間非接触的に適用した場合が
浮腫を伴う不良肉芽組織創のモデルの作製に適してお
り、ゴアテックス膜を６日間適用する条件を選択し、本
発明の治療剤の評価試験を行った。
行うための、不良肉芽組織のモデルの作製を次のように
行った。５週令のＳＤラットの背部に直径３０ｍｍの全
層皮膚欠損創を作製して、外径３０ｍｍ内径２５ｍｍの
ポリスチレンリングを創の周辺に沿って縫合固定し、リ
ング上にエポキシ系接着剤を塗り直径３５ｍｍのナイロ
ン網あるいはゴアテックス膜（ゴア社）を接着固定し
て、この上にガーゼを当てステンレス網で保護して弾性
テープで固定した。このナイロン網あるいはゴアテック
ス膜は、創面に接着しない状態で固定してあり空気の透
過性を維持できる状態であり、半開放創に近い環境を提
供できる。この状態で３、６、９日後に１匹ずつラット
を犠死させ創面の状態を組織学的に観察した。全層皮膚
欠損創にナイロン網を非接触的に被覆した場合には、創
面上に浸出液が一時的に貯留されることなく外側のガー
ゼに吸収された。また、ナイロンの中央部が創面と接触
し、動物の動きに伴う摩擦により創面に機械的な刺激を
与える結果となった。ＨＥ染色による組織学的な観察に
よれば、３日間被覆した場合には、強い炎症反応を示す
組織構造を呈しており、６日間以上被覆した場合には、
強い炎症反応は持続し、密な基質構造を有する肉芽組織
の形成が開始されていた。一方、全層皮膚欠損創にゴア
テックス膜を非接触的に被覆した場合には、外側のガー
ゼに浸出液を吸収した形跡はみられなかった。ゴアテッ
クス膜は、空気は透過するが浸出液は透過しない特性を
もつため創面上に浸出液が一時的に貯留する環境を提供
できた。３日間被覆した場合には、炎症反応の弱い組織
構造を呈しており、６日間被覆した場合に、炎症反応は
弱く、浮腫を伴うルーズな基質構造を有する肉芽組織の
形成が観察された。しかし、９日間以上被覆した場合に
は密な基質構造を有する組織構造に変化した。以上の結
果、ゴアテックス膜を６日間非接触的に適用した場合が
浮腫を伴う不良肉芽組織創のモデルの作製に適してお
り、ゴアテックス膜を６日間適用する条件を選択し、本
発明の治療剤の評価試験を行った。
【００１４】２）肉芽組織創面におけるＣ−２７４の評
価 ラット背部全層皮膚欠損創にゴアテックス膜を６日間非
接触的に適用して作成した肉芽組織創面にヒアルロン酸
スポンジを適用し、該スポンジに１ｍｌのＣ−２７４水
溶液（１２０μｇ／ｍｌ）を含浸させ、その上に被覆材
を適用して周辺を縫合固定し、この上にガーゼを当てて
弾性テープで包帯固定した。ここで、Ｃ−２７４水溶液
を含浸させない場合を対照群とした。５日目に被覆材を
除去して創面を観察した（適用５日目）。新たに、１ｍ
ｌのＣ−２７４を含浸したヒアルロン酸スポンジあるい
はＣ−２７４を含浸しないヒアルロン酸スポンジを適用
し、同様にして包帯固定して５日目に、再度被覆材を除
去して創面を観察した（適用１０日目）。新たに１ｍｌ
のＣ−２７４を含浸したヒアルロン酸スポンジあるいは
Ｃ−２７４を含浸しないヒアルロン酸スポンジを適用
し、同様にして包帯固定し、更に５日目に被覆材を除去
して創面を観察した（適用１５日目）。ヒアルロン酸ス
ポンジは含水保水性に優れており、Ｃ−２７４水溶液の
適用に適していた。５日ごとの被覆材の貼り換え時点で
は、ヒアルロン酸スポンジは、肉眼的には残存は認めら
れなかった。ヒアルロン酸自身、創傷治癒をかなり促進
する傾向があるが、適用１０日目、及び１５日目の時点
で、Ｃ−２７４含有ヒアルロン酸スポンジの方が顕著な
創面の収縮を伴う創の治癒が観察された。結果を表１に
示す。
価 ラット背部全層皮膚欠損創にゴアテックス膜を６日間非
接触的に適用して作成した肉芽組織創面にヒアルロン酸
スポンジを適用し、該スポンジに１ｍｌのＣ−２７４水
溶液（１２０μｇ／ｍｌ）を含浸させ、その上に被覆材
を適用して周辺を縫合固定し、この上にガーゼを当てて
弾性テープで包帯固定した。ここで、Ｃ−２７４水溶液
を含浸させない場合を対照群とした。５日目に被覆材を
除去して創面を観察した（適用５日目）。新たに、１ｍ
ｌのＣ−２７４を含浸したヒアルロン酸スポンジあるい
はＣ−２７４を含浸しないヒアルロン酸スポンジを適用
し、同様にして包帯固定して５日目に、再度被覆材を除
去して創面を観察した（適用１０日目）。新たに１ｍｌ
のＣ−２７４を含浸したヒアルロン酸スポンジあるいは
Ｃ−２７４を含浸しないヒアルロン酸スポンジを適用
し、同様にして包帯固定し、更に５日目に被覆材を除去
して創面を観察した（適用１５日目）。ヒアルロン酸ス
ポンジは含水保水性に優れており、Ｃ−２７４水溶液の
適用に適していた。５日ごとの被覆材の貼り換え時点で
は、ヒアルロン酸スポンジは、肉眼的には残存は認めら
れなかった。ヒアルロン酸自身、創傷治癒をかなり促進
する傾向があるが、適用１０日目、及び１５日目の時点
で、Ｃ−２７４含有ヒアルロン酸スポンジの方が顕著な
創面の収縮を伴う創の治癒が観察された。結果を表１に
示す。
【００１５】
【表１】 表 １ ──────────────────────────────────── 被 覆 材 被 覆 材 適 用 日 数 ０日 ５日 １０日 １５日 ──────────────────────────────────── 創面積（被覆前の創面積との比率） Ｃ-274含有 ヒアルロン酸 9.62cm2 4.95cm2(51.5%) 2.33cm2(24.2%) 1.51cm2(15.7%) スポンジ ヒアルロン酸 9.62cm2 6.73cm2(70.0%) 5.05cm2(52.5%) 2.90cm2(30.1%) スポンジ ────────────────────────────────────
【００１６】
【実施例】次に実施例により本発明を具体的に説明する
が、本発明の範囲は実施例に限定されるものでは無い。
が、本発明の範囲は実施例に限定されるものでは無い。
【００１７】製剤例１ Ｃ−２７４の１２ｍｇをＰＢＳに加え、全量を１００ｍ
ｌとしてこれを溶解後、ミリポアフィルターＧＳタイプ
を用いて除菌ろ過する。このろ液１ｍｌを１０ｍｌのバ
イアル瓶により凍結乾燥し、１バイアル瓶にＣ−２７４
を１２０μｇ含む凍結乾燥物を得た。
ｌとしてこれを溶解後、ミリポアフィルターＧＳタイプ
を用いて除菌ろ過する。このろ液１ｍｌを１０ｍｌのバ
イアル瓶により凍結乾燥し、１バイアル瓶にＣ−２７４
を１２０μｇ含む凍結乾燥物を得た。
【００１８】製剤例２ 分子量１８０万〜２２０万のヒアルロン酸（紀文フード
ケミファ製）の１％水溶液（ｐＨ５．９）に水溶性エポ
キシド化合物デナコールＥＸ８１０（ナガセ化成製）を
ヒアルロン酸の繰返し単位（二糖）の分子量に対して１
／１０モル量添加して充分かくはんした後、ポリスチレ
ン容器（１０ｃｍ×１８ｃｍ）に９０ｍｌ注入し、５０
℃に設定した乾燥機内に５時間静置した後、−８０℃の
冷凍庫内で急冷凍結して真空乾燥によりスポンジ状シー
トを作製した。所定のサイズに裁断した後、エチレンオ
キシドガスにより滅菌してヒアルロン酸スポンジを作製
した。該ヒアルロン酸スポンジにＣ−２７４水溶液を用
時含有させ、Ｃ−２７４含有ヒアルロン酸スポンジを作
製した。
ケミファ製）の１％水溶液（ｐＨ５．９）に水溶性エポ
キシド化合物デナコールＥＸ８１０（ナガセ化成製）を
ヒアルロン酸の繰返し単位（二糖）の分子量に対して１
／１０モル量添加して充分かくはんした後、ポリスチレ
ン容器（１０ｃｍ×１８ｃｍ）に９０ｍｌ注入し、５０
℃に設定した乾燥機内に５時間静置した後、−８０℃の
冷凍庫内で急冷凍結して真空乾燥によりスポンジ状シー
トを作製した。所定のサイズに裁断した後、エチレンオ
キシドガスにより滅菌してヒアルロン酸スポンジを作製
した。該ヒアルロン酸スポンジにＣ−２７４水溶液を用
時含有させ、Ｃ−２７４含有ヒアルロン酸スポンジを作
製した。
【００１９】製剤例３ スポンジシートの作製には、牛皮由来のコラーゲンを酵
素処理して調製したアテロコラーゲン（高研製）を使用
した。１％のアテロコラーゲン水溶液をｐＨ４に調整し
てホモジナイザーで１５０００ｒｐｍで３分間かくはん
してクリーム状にし、この溶液６０ｍｌをポリスチレン
容器（１０ｃｍ×１８ｃｍ）に流し込みアンモニア雰囲
気下に１時間静置させてゲル化させた。流水にて１昼夜
水洗した後、これを−８０℃で急速凍結させ、真空乾燥
させてスポンジ状シートを作製し、更に、紫外線照射に
より分子間架橋を導入した。所定のサイズに裁断した
後、エチレンオキシドガスにより滅菌してコラーゲンス
ポンジを作製した。該コラーゲンスポンジにＣ−２７４
水溶液を用時含有させ、Ｃ−２７４含有コラーゲンスポ
ンジを作製した。
素処理して調製したアテロコラーゲン（高研製）を使用
した。１％のアテロコラーゲン水溶液をｐＨ４に調整し
てホモジナイザーで１５０００ｒｐｍで３分間かくはん
してクリーム状にし、この溶液６０ｍｌをポリスチレン
容器（１０ｃｍ×１８ｃｍ）に流し込みアンモニア雰囲
気下に１時間静置させてゲル化させた。流水にて１昼夜
水洗した後、これを−８０℃で急速凍結させ、真空乾燥
させてスポンジ状シートを作製し、更に、紫外線照射に
より分子間架橋を導入した。所定のサイズに裁断した
後、エチレンオキシドガスにより滅菌してコラーゲンス
ポンジを作製した。該コラーゲンスポンジにＣ−２７４
水溶液を用時含有させ、Ｃ−２７４含有コラーゲンスポ
ンジを作製した。
【００２０】
【発明の効果】本発明により、局所的な血行不良に起因
する難治性皮膚欠損創に対して有効なＣ−２７４を含有
する治療剤が提供できる。Ｃ−２７４は生体由来の生理
活性ポリペプチドで安全性も高く、遺伝子工学的に大量
に供給可能であり、皮膚欠損創の有力な治療剤となりう
る。
する難治性皮膚欠損創に対して有効なＣ−２７４を含有
する治療剤が提供できる。Ｃ−２７４は生体由来の生理
活性ポリペプチドで安全性も高く、遺伝子工学的に大量
に供給可能であり、皮膚欠損創の有力な治療剤となりう
る。
【００２１】
【００２２】配列番号：1 配列の長さ：274 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Pro Thr Asp Leu Arg Phe Thr Asn Ile Gly Pro Asp Thr Met Arg 1 5 10 15 Val Thr Trp Ala Pro Pro Pro Ser Ile Asp Leu Thr Asn Phe Leu 20 25 30 Val Arg Tyr Ser Pro Val Lys Asn Glu Glu Asp Val Ala Glu Leu 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Ser Asp Asn Ala Val Val Leu Thr Asn Leu Leu 50 55 60 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Val Ser Ser Val Tyr Glu Gln 65 70 75 His Glu Ser Thr Pro Leu Arg Gly Arg Gln Lys Thr Gly Leu Asp 80 85 90 Ser Pro Thr Gly Ile Asp Phe Ser Asp Ile Thr Ala Asn Ser Phe 95 100 105 Thr Val His Trp Ile Ala Pro Arg Ala Thr Ile Thr Gly Tyr Arg 110 115 120 Ile Arg His His Pro Glu His Phe Ser Gly Arg Pro Arg Glu Asp 125 130 135 Arg Val Pro His Ser Arg Asn Ser Ile Thr Leu Thr Asn Leu Thr 140 145 150 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Ile Val Ala Leu Asn Gly Arg 155 160 165 Glu Glu Ser Pro Leu Leu Ile Gly Gln Gln Ser Thr Val Ser Asp 170 175 180 Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu 185 190 195 Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg 200 205 210 Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe 215 220 225 Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys 230 235 240 Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg 245 250 255 Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg 260 265 270 Thr Glu Ile Asp
Claims (1)
- 【請求項１】 配列表の配列番号１で表されるアミノ酸
配列を有するポリペプチドを有効成分として含有するこ
とを特徴とする難治性皮膚欠損創治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6234487A JPH0873373A (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 難治性皮膚欠損創治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6234487A JPH0873373A (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 難治性皮膚欠損創治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0873373A true JPH0873373A (ja) | 1996-03-19 |
Family
ID=16971802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6234487A Pending JPH0873373A (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 難治性皮膚欠損創治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0873373A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2024543702A (ja) * | 2021-12-29 | 2024-11-21 | スーチョワン グッドドクター パンシー ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 皮膚損傷疾患を予防又は治療するための製品の製造におけるポリペプチドの応用 |
-
1994
- 1994-09-05 JP JP6234487A patent/JPH0873373A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2024543702A (ja) * | 2021-12-29 | 2024-11-21 | スーチョワン グッドドクター パンシー ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 皮膚損傷疾患を予防又は治療するための製品の製造におけるポリペプチドの応用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040820 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20041213 |