JPH0873499A - 新規ペプチドおよび免疫賦活剤 - Google Patents
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Landscapes
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 次のアミノ酸配列で表されるアミノ酸配列を
含むペプチド。Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-
Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thrヒトまたはウシ
テクトフェリンをプロテアーゼで分解して、上記ペフチ
ドを採取するか、あるいはペプチド合成により製造する
方法。 【効果】 免疫賦活性あるいはサイトメガロウィルス感
染防御活性を示し、医薬等として用いられる。
含むペプチド。Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-
Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thrヒトまたはウシ
テクトフェリンをプロテアーゼで分解して、上記ペフチ
ドを採取するか、あるいはペプチド合成により製造する
方法。 【効果】 免疫賦活性あるいはサイトメガロウィルス感
染防御活性を示し、医薬等として用いられる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規ペプチドおよびこの
ペプチドを有効成分とする免疫賦活剤に関する。
ペプチドを有効成分とする免疫賦活剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】ラクトフェリン（ＬＦ）は、乳中に存在
する鉄結合性の蛋白質として知られている。乳以外の種
々の分泌液中にも存在し、関節腔内や血清などにも存在
し、鉄と結合して溶液中の鉄イオンを奪うことで抗菌作
用を示す。またラクトフェリンは抗菌活性の他に、ウイ
ルスに対する結合性や老化防止効果を有するなどの活性
が知られている。またラクトフェリンのアミノ酸配列の
一部分に、鉄結合性と異なる抗菌活性があることが確認
されている（特開平５−７８３９２、特開平５−１４８
２９６）。このようにラクトフェリンには種々の活性が
存在している。ラクトフェリンは、通常牛乳から大量に
調製する方法が開発されている。たとえば特開昭６３−
２５５３００号公報にはラクトフェリンに対して親和性
を有する架橋型ポリサッカライドの硫酸エステルを用い
て乳からラクトフェリンを回収する方法が開示されてい
る。このようにして得たラクトフェリンを用いることに
よって幾つかの新しい生理作用や詳細な構造が判明して
いる。このようなラクトフェリンの構造と生理活性につ
いては島崎らが総説で説明している（島崎敬一他、バイ
オサイエンスとインダストリー，Vol.51,25-27,1993)。
また特開平５−１７８７５９号公報にはラクトフェリン
が末梢血特に好中球の貪食能を活性化し、免疫を向上さ
せることが記載されている。しかしラクトフェリン由来
のペプチドがリンパ球のマイトージェン活性を誘導し免
疫機能を賦活化することは知られていない。
する鉄結合性の蛋白質として知られている。乳以外の種
々の分泌液中にも存在し、関節腔内や血清などにも存在
し、鉄と結合して溶液中の鉄イオンを奪うことで抗菌作
用を示す。またラクトフェリンは抗菌活性の他に、ウイ
ルスに対する結合性や老化防止効果を有するなどの活性
が知られている。またラクトフェリンのアミノ酸配列の
一部分に、鉄結合性と異なる抗菌活性があることが確認
されている（特開平５−７８３９２、特開平５−１４８
２９６）。このようにラクトフェリンには種々の活性が
存在している。ラクトフェリンは、通常牛乳から大量に
調製する方法が開発されている。たとえば特開昭６３−
２５５３００号公報にはラクトフェリンに対して親和性
を有する架橋型ポリサッカライドの硫酸エステルを用い
て乳からラクトフェリンを回収する方法が開示されてい
る。このようにして得たラクトフェリンを用いることに
よって幾つかの新しい生理作用や詳細な構造が判明して
いる。このようなラクトフェリンの構造と生理活性につ
いては島崎らが総説で説明している（島崎敬一他、バイ
オサイエンスとインダストリー，Vol.51,25-27,1993)。
また特開平５−１７８７５９号公報にはラクトフェリン
が末梢血特に好中球の貪食能を活性化し、免疫を向上さ
せることが記載されている。しかしラクトフェリン由来
のペプチドがリンパ球のマイトージェン活性を誘導し免
疫機能を賦活化することは知られていない。
【０００３】本発明者らはラクトフェリンを酵素分解処
理に付すことにより、ラクトフェリンの構造中に存在す
るペプチドの生理活性を検討してきた。ラクトフェリン
の構造中に存在する特定のペプチドが、抗ＨＩＶ活性
や、抗ＨＴＬＶに対して作用し感染を抑制することを確
認し、特願平５−２４０２８４号、特願平６−１５８５
１号として特許出願を行った。さらにラクトフェリンの
酵素分解物について詳細に検討を行った結果、ラクトフ
ェリンのアミノ酸配列中に存在する特定のペプチド構造
を含むペプチドが強いリンパ球のマイトージェン活性を
有していることを見出しその作用について検討を行った
結果、本発明を完成するに至った。
理に付すことにより、ラクトフェリンの構造中に存在す
るペプチドの生理活性を検討してきた。ラクトフェリン
の構造中に存在する特定のペプチドが、抗ＨＩＶ活性
や、抗ＨＴＬＶに対して作用し感染を抑制することを確
認し、特願平５−２４０２８４号、特願平６−１５８５
１号として特許出願を行った。さらにラクトフェリンの
酵素分解物について詳細に検討を行った結果、ラクトフ
ェリンのアミノ酸配列中に存在する特定のペプチド構造
を含むペプチドが強いリンパ球のマイトージェン活性を
有していることを見出しその作用について検討を行った
結果、本発明を完成するに至った。
【０００４】
【本発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ラク
トフェリンの生理活性について検討を行った結果、ラク
トフェリンの酵素分解物中に強いマイトージェン活性
と、強い抗腫瘍活性を有することを見いだした。ラクト
フェリンをペプシン、トリプシン、キモトリプシン、パ
パイン（いずれもシグマ社製）を用いてラクトフェリン
／酵素＝１００／１で３７℃で１時間インキュベートし
た。インキュベート後ペプシン分解物は反応液を中性に
戻し、その他は８０℃で５分間加熱することで反応を停
止させた。生じた沈殿を遠心分離により除去し、上清を
凍結乾燥することでＬＦの酵素分解物の粉末を得た。こ
の酵素分解物を試料として以下の実施例に記載した方法
でリンパ球の幼若化および抗腫瘍活性を測定したとこ
ろ、これまで報告のない強い活性を有することを見いだ
した。この活性測定結果を下記の表１及び表２に示し
た。
トフェリンの生理活性について検討を行った結果、ラク
トフェリンの酵素分解物中に強いマイトージェン活性
と、強い抗腫瘍活性を有することを見いだした。ラクト
フェリンをペプシン、トリプシン、キモトリプシン、パ
パイン（いずれもシグマ社製）を用いてラクトフェリン
／酵素＝１００／１で３７℃で１時間インキュベートし
た。インキュベート後ペプシン分解物は反応液を中性に
戻し、その他は８０℃で５分間加熱することで反応を停
止させた。生じた沈殿を遠心分離により除去し、上清を
凍結乾燥することでＬＦの酵素分解物の粉末を得た。こ
の酵素分解物を試料として以下の実施例に記載した方法
でリンパ球の幼若化および抗腫瘍活性を測定したとこ
ろ、これまで報告のない強い活性を有することを見いだ
した。この活性測定結果を下記の表１及び表２に示し
た。
【０００５】
【表１】
【０００６】
【表２】
【０００７】このようにラクトフェリンの酵素分解物に
は強い免疫賦活作用とこれによると推測される強い抗腫
瘍効果が存在することが確認できた。本発明者らは、さ
らにラクトフェリンのアミノ酸配列中に存在するペプチ
ド構造に関して検討を行った結果、マイトージェン活性
を発揮するに必須の構造を初めて解明した。本発明はこ
のようなラクトフェリンのアミノ酸配列中に存在し、マ
イトージェン活性を有する新規ペプチドを提供すること
を課題とする。またこのようなペプチドを有効成分とす
る、免疫活性剤を提供することを課題とする。さらには
このペプチドを有効成分とするサイトメガロウイルス感
染の防御剤を提供することを課題とする。
は強い免疫賦活作用とこれによると推測される強い抗腫
瘍効果が存在することが確認できた。本発明者らは、さ
らにラクトフェリンのアミノ酸配列中に存在するペプチ
ド構造に関して検討を行った結果、マイトージェン活性
を発揮するに必須の構造を初めて解明した。本発明はこ
のようなラクトフェリンのアミノ酸配列中に存在し、マ
イトージェン活性を有する新規ペプチドを提供すること
を課題とする。またこのようなペプチドを有効成分とす
る、免疫活性剤を提供することを課題とする。さらには
このペプチドを有効成分とするサイトメガロウイルス感
染の防御剤を提供することを課題とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明のマイトージェン
活性を有するペプチドはペプチド配列中に、次のアミノ
酸配列を有することが必要である。即ちヒトラクトフェ
リン由来のペプチドの場合、次の配列〔Ｉ〕を含むペプ
チドである。
活性を有するペプチドはペプチド配列中に、次のアミノ
酸配列を有することが必要である。即ちヒトラクトフェ
リン由来のペプチドの場合、次の配列〔Ｉ〕を含むペプ
チドである。
【０００９】 Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr -Lys 〔Ｉ〕
【００１０】ヒトラクトフェリンの全アミノ酸配列はす
でに決定されている（M.W. Rey,etal.,Nucleic Acid Re
s.,Vol.18,5288,1990) 。このペプチドはヒトラクトフ
ェリンのアミノ酸配列の１−１９番目のアミノ酸配列に
相当しており、この配列を含むペプチドは、本発明に包
含されるものである。以下、ラクトフェリン由来のペプ
チドのアミノ酸配列はこの文献に従い、Gly を１番目と
して、アミノ酸配列の番号で記載する。このペプチドは
Ｎ末端から１〜３残基欠失したものであっても良い。こ
のアミノ酸配列を含むペプチドの例として次の配列〔I
I〕のペプチドが例示出来る。
でに決定されている（M.W. Rey,etal.,Nucleic Acid Re
s.,Vol.18,5288,1990) 。このペプチドはヒトラクトフ
ェリンのアミノ酸配列の１−１９番目のアミノ酸配列に
相当しており、この配列を含むペプチドは、本発明に包
含されるものである。以下、ラクトフェリン由来のペプ
チドのアミノ酸配列はこの文献に従い、Gly を１番目と
して、アミノ酸配列の番号で記載する。このペプチドは
Ｎ末端から１〜３残基欠失したものであっても良い。こ
のアミノ酸配列を含むペプチドの例として次の配列〔I
I〕のペプチドが例示出来る。
【００１１】
【化３】
【００１２】このペプチドはヒトラクトフェリンの１−
５２番目に相当している。またこのペプチドのＳＳ結合
は還元状態のＳＨ基となっていてもよい。配列〔Ｉ〕お
よび配列〔ＩＩ〕は、Ｎ末端アミノ酸１〜３残基が欠失
していてもよい。即ちヒトラクトフェリン２−１９番
目、３−１９番目、４−１９番目、またはヒトラクトフ
ェリン２−５２番目、３−５２番目、４−５２番目のア
ミノ酸配列に相当するものであってもよい。
５２番目に相当している。またこのペプチドのＳＳ結合
は還元状態のＳＨ基となっていてもよい。配列〔Ｉ〕お
よび配列〔ＩＩ〕は、Ｎ末端アミノ酸１〜３残基が欠失
していてもよい。即ちヒトラクトフェリン２−１９番
目、３−１９番目、４−１９番目、またはヒトラクトフ
ェリン２−５２番目、３−５２番目、４−５２番目のア
ミノ酸配列に相当するものであってもよい。
【００１３】ウシラクトフェリン由来のペプチドの場
合、次の配列〔 III〕を含むペプチドである。
合、次の配列〔 III〕を含むペプチドである。
【００１４】 Ala-Pro-Arg-Lys-Asn-Val-Arg-Trp-Cys-Thr-Ile-Ser-Gln-Pro-Asp-Ser-Phe-Lys 〔 III〕
【００１５】ウシラクトフェリンの全アミノ酸配列はヒ
トラクトフェリンと同様にすでに決定されている（P.E.
Mead,et al.,Nucleic Acid Res.,Vol.18,7167,1990)。
このペプチドはウシラクトフェリンのアミノ酸配列の１
−１８番目のアミノ酸配列に相当しており、この配列を
含むペプチドは、本発明に包含されるものである。以下
ウシラクトフェリン由来のペプチドのアミノ酸配列はこ
の文献に従い、Ala を１番目として、アミノ酸配列の番
号で記載する。このアミノ酸配列を含むペプチドの例と
して次の配列〔IV〕のペプチドが例示出来る。
トラクトフェリンと同様にすでに決定されている（P.E.
Mead,et al.,Nucleic Acid Res.,Vol.18,7167,1990)。
このペプチドはウシラクトフェリンのアミノ酸配列の１
−１８番目のアミノ酸配列に相当しており、この配列を
含むペプチドは、本発明に包含されるものである。以下
ウシラクトフェリン由来のペプチドのアミノ酸配列はこ
の文献に従い、Ala を１番目として、アミノ酸配列の番
号で記載する。このアミノ酸配列を含むペプチドの例と
して次の配列〔IV〕のペプチドが例示出来る。
【００１６】
【化４】
【００１７】このペプチドはウシラクトフェリンの１−
５１番目に相当している。またこのペプチドのＳＳ結合
は還元状態のＳＨ基となっていてもよい。配列〔ＩＩ
Ｉ〕および配列〔ＩＶ〕は、Ｎ末端アミノ酸１〜３残基
が欠失していてもよい。即ちウシラクトフェリン２−１
８番目、３−１８番目、４−１８番目またはウシラクト
フェリン２−５１番目、３−５１番目、４−５１番目の
アミノ酸配列に相当するものであっても良い。これらの
ペプチドはもとの蛋白質と比べて、低分子であり投与に
あたって抗原性は低くなっている。
５１番目に相当している。またこのペプチドのＳＳ結合
は還元状態のＳＨ基となっていてもよい。配列〔ＩＩ
Ｉ〕および配列〔ＩＶ〕は、Ｎ末端アミノ酸１〜３残基
が欠失していてもよい。即ちウシラクトフェリン２−１
８番目、３−１８番目、４−１８番目またはウシラクト
フェリン２−５１番目、３−５１番目、４−５１番目の
アミノ酸配列に相当するものであっても良い。これらの
ペプチドはもとの蛋白質と比べて、低分子であり投与に
あたって抗原性は低くなっている。
【００１８】本発明のペプチドを調製するには、通常の
ペプチド合成法が採用できる。ペプチド合成方法として
は固相合成方法が一般的であるが、この固相合成方法は
「泉谷他著、ペプチド合成の基礎と実験（１９８５年丸
善刊）１９４〜２３３頁」などに開示された方法を挙げ
ることができる。またこれ以外の方法であっても良い。
また、ヒトラクトフェリンまたはウシラクトフェリンを
プロテアーゼによって酵素分解し、クロマトグラフィー
により分取することもできる。また酵素分解に付するた
めのラクトフェリンは、ヒトやウシの乳から容易に回収
することができる。例えば上述した特開昭６３−２５５
３００号公報に開示されたラクトフェリンに対して親和
性を有する架橋型ポリサッカライドの硫酸エステルを用
いて、乳から回収することができる。ラクトフェリンの
酵素分解に用いる酵素としては、通常蛋白質の酵素分解
に用いる酵素であれば、いずれも使用可能である。この
ような酵素としてはペプシン、トリプシン、キモトリプ
シン、パパインなどを例示することができる。またこれ
以外の酵素であっても使用することができる。このよう
にして得られた酵素分解物から常法によりクロマト処理
することによってこれらのペプチドを採取することがで
きる。また、通常のペプチド製造法に従って製造しても
よい。
ペプチド合成法が採用できる。ペプチド合成方法として
は固相合成方法が一般的であるが、この固相合成方法は
「泉谷他著、ペプチド合成の基礎と実験（１９８５年丸
善刊）１９４〜２３３頁」などに開示された方法を挙げ
ることができる。またこれ以外の方法であっても良い。
また、ヒトラクトフェリンまたはウシラクトフェリンを
プロテアーゼによって酵素分解し、クロマトグラフィー
により分取することもできる。また酵素分解に付するた
めのラクトフェリンは、ヒトやウシの乳から容易に回収
することができる。例えば上述した特開昭６３−２５５
３００号公報に開示されたラクトフェリンに対して親和
性を有する架橋型ポリサッカライドの硫酸エステルを用
いて、乳から回収することができる。ラクトフェリンの
酵素分解に用いる酵素としては、通常蛋白質の酵素分解
に用いる酵素であれば、いずれも使用可能である。この
ような酵素としてはペプシン、トリプシン、キモトリプ
シン、パパインなどを例示することができる。またこれ
以外の酵素であっても使用することができる。このよう
にして得られた酵素分解物から常法によりクロマト処理
することによってこれらのペプチドを採取することがで
きる。また、通常のペプチド製造法に従って製造しても
よい。
【００１９】本発明のペプチドはリンパ球の幼若化を誘
導し、抗ウイルス作用特にサイトメガロウイルスに対し
て感染防御効果を示す。本発明のペプチドは単独で投与
することができるし、または、安定剤、賦形剤などの製
剤化に用いる添加剤を使用して製剤化することもでき
る。本発明のペプチドは、食品や家畜飼料に添加して投
与することができるし、医薬品、化粧品などの用途に使
用することもできる。医薬品として用いる場合には経
口、注射、座剤などの投与形態で用いることができ、通
常成人１日当たり０．１〜５ｇ程度を投与することで、
免疫賦活作用や、ウイルス感染防御効果を期待できるも
のである。また本発明ペプチドは、経口投与においては
毒性を示さないし、また経静脈投与においても、物理的
に投与可能最大投与において死亡動物が出現しない安全
な物質である。
導し、抗ウイルス作用特にサイトメガロウイルスに対し
て感染防御効果を示す。本発明のペプチドは単独で投与
することができるし、または、安定剤、賦形剤などの製
剤化に用いる添加剤を使用して製剤化することもでき
る。本発明のペプチドは、食品や家畜飼料に添加して投
与することができるし、医薬品、化粧品などの用途に使
用することもできる。医薬品として用いる場合には経
口、注射、座剤などの投与形態で用いることができ、通
常成人１日当たり０．１〜５ｇ程度を投与することで、
免疫賦活作用や、ウイルス感染防御効果を期待できるも
のである。また本発明ペプチドは、経口投与においては
毒性を示さないし、また経静脈投与においても、物理的
に投与可能最大投与において死亡動物が出現しない安全
な物質である。
【００２０】以下に実施例を示しさらに本発明を詳細に
説明する。
説明する。
【実施例１】ラクトフェリン（以下ＬＦと記す）の酵素分解物の調製
とマイトージェン活性ペプチドの単離 特開昭６３−２５５３００号公報に記載の方法で牛乳か
ら調製したＬＦを原料としてペプシン（シグマ社製）酵
素分解処理を行った。ＬＦ／酵素＝１００／１の比率
で、３７℃１時間インキュベートした。インキュベート
後ペプシン分解物は反応液を中性に戻し、その他は８０
℃で５分間加熱することで反応を停止させた。生じた沈
殿を遠心分離により除去し、上清を凍結乾燥してＬＦの
酵素分解物の粉末を得た。この分解組成物をＴＳＫゲル
Ｇ３００ＳＷカラム（２１．５ｍｍ×３００ｍｍ：東ソ
ー製）２本を直列につないだカラムを装着したＨＰＬＣ
に付し、分離を行った。溶出は０．０１５Ｍ ＮａＣｌ
を含む１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を溶出液と
し、２１４ｎｍの吸収を測定した。このゲル濾過パター
ンを図１に示した。
とマイトージェン活性ペプチドの単離 特開昭６３−２５５３００号公報に記載の方法で牛乳か
ら調製したＬＦを原料としてペプシン（シグマ社製）酵
素分解処理を行った。ＬＦ／酵素＝１００／１の比率
で、３７℃１時間インキュベートした。インキュベート
後ペプシン分解物は反応液を中性に戻し、その他は８０
℃で５分間加熱することで反応を停止させた。生じた沈
殿を遠心分離により除去し、上清を凍結乾燥してＬＦの
酵素分解物の粉末を得た。この分解組成物をＴＳＫゲル
Ｇ３００ＳＷカラム（２１．５ｍｍ×３００ｍｍ：東ソ
ー製）２本を直列につないだカラムを装着したＨＰＬＣ
に付し、分離を行った。溶出は０．０１５Ｍ ＮａＣｌ
を含む１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を溶出液と
し、２１４ｎｍの吸収を測定した。このゲル濾過パター
ンを図１に示した。
【００２１】分離した各フラクションのリンパ球幼若化
活性を以下の方法により測定した。Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウ
ス脾臓細胞を採取し洗浄した後、牛胎児血清１０％を含
むＲＰＭＩ１６４０培地に浮遊させた。脾臓細胞を５×
１０5 ／ウエルになるよう９６穴マイクロプレートに分
注し、これに試料を最終濃度がそれぞれ１μｇ／ｍｌ、
１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌとなるよう添加し
た。対照ウエルにはコンカナバリンＡ（最終濃度１μｇ
／ｍｌ）、リポポリサッカライド（最終濃度１００μｇ
／ｍｌ）を加え３７℃４８時間５％ＣＯ2 条件下で培養
した。培養後３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリ
ル）２，５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウムブロマイ
ド（以下ＭＴＴと略記）液１０μl を添加し、更に３時
間培養後、生じたＭＴＴフォルマザンをＥＬＩＳＡリー
ダーを用い５６２−５９５ｎｍで吸光度を測定した（以
上の方法はMed. Immunol, 12, 411 (1986)に開示された
方法に準じた）。結果は１０ウエルの平均値としマイト
ジェン活性比（Ｓ．Ｉ．）は、次の式に基づいて計算し
た。
活性を以下の方法により測定した。Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウ
ス脾臓細胞を採取し洗浄した後、牛胎児血清１０％を含
むＲＰＭＩ１６４０培地に浮遊させた。脾臓細胞を５×
１０5 ／ウエルになるよう９６穴マイクロプレートに分
注し、これに試料を最終濃度がそれぞれ１μｇ／ｍｌ、
１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌとなるよう添加し
た。対照ウエルにはコンカナバリンＡ（最終濃度１μｇ
／ｍｌ）、リポポリサッカライド（最終濃度１００μｇ
／ｍｌ）を加え３７℃４８時間５％ＣＯ2 条件下で培養
した。培養後３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリ
ル）２，５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウムブロマイ
ド（以下ＭＴＴと略記）液１０μl を添加し、更に３時
間培養後、生じたＭＴＴフォルマザンをＥＬＩＳＡリー
ダーを用い５６２−５９５ｎｍで吸光度を測定した（以
上の方法はMed. Immunol, 12, 411 (1986)に開示された
方法に準じた）。結果は１０ウエルの平均値としマイト
ジェン活性比（Ｓ．Ｉ．）は、次の式に基づいて計算し
た。
【００２２】Ｓ．Ｉ．＝（試料ウエルの平均吸光度）／
（対照ウエルの平均吸光度）×１００
（対照ウエルの平均吸光度）×１００
【００２３】各フラクションのＳ．Ｉ．値を表３に示し
た。
た。
【表３】
【００２４】各フラクションの内、特に活性の高かった
フラクション７について再度ＨＰＬＣによりその溶出位
置を測定し、以下に示した合成ペプチドと比較した結
果、このフラクションの溶出時間はウシＬＦ１−１８と
一致した。またこのフラクションのアミノ酸配列を分析
したところウシＬＦ１−１８の配列を有することが確認
できた。
フラクション７について再度ＨＰＬＣによりその溶出位
置を測定し、以下に示した合成ペプチドと比較した結
果、このフラクションの溶出時間はウシＬＦ１−１８と
一致した。またこのフラクションのアミノ酸配列を分析
したところウシＬＦ１−１８の配列を有することが確認
できた。
【００２５】
【実施例２】ヒトＬＦ酵素分解物の調製とマイトージェン活性ペプチ
ドの単離 実施例１と同様に操作を行い、ヒトＬＦの酵素分解物を
調製し、この酵素分解物中のＳ．Ｉ．活性を示すペプチ
ドを、ＨＰＬＣによる保持時間およびアミノ酸配列によ
り同定した。その結果、Ｓ．Ｉ．活性を示すペプチドは
ヒトＬＦ１−１９であることを確認した。
ドの単離 実施例１と同様に操作を行い、ヒトＬＦの酵素分解物を
調製し、この酵素分解物中のＳ．Ｉ．活性を示すペプチ
ドを、ＨＰＬＣによる保持時間およびアミノ酸配列によ
り同定した。その結果、Ｓ．Ｉ．活性を示すペプチドは
ヒトＬＦ１−１９であることを確認した。
【００２６】
【実施例３】活性ペプチドの化学合成 実施例１、２で確認したペプチドおよびそのアミノ酸配
列を含むペプチドの合成を行った。本実施例ではヒトＬ
Ｆ１−１９、ヒトＬＦ１−５２、ウシＬＦ１−１８、ウ
シＬＦ１−５１の合成例を示した。本明細書に記載した
これ以外のペプチドの合成も、本実施例に準じて合成し
た。（１） ヒトＬＦ１−１９の合成 ペプチドシンセサイザー４３１Ａ（ＡＢＩ社）により、
パラヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン
（ＨＭＰ）樹脂を用い、９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル（Ｆｍｏｃ）基をアミノ末端の保護基として
０．２５ｍｍｏｌスケールで直鎖保護ペプチドを合成し
た。得られたＨＭＰ樹脂結合保護ペプチド１４５５ｍｇ
をフェノール、１，２−エタンジチオール、チオアニソ
ール存在下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によりペプチ
ドのＨＭＰ樹脂からの切り離しと保護基の除去を同時に
行った。減圧濃縮によりＴＦＡを除去した後、エチルエ
ーテルで粗ペプチドを結晶化させ、これを５％酢酸に溶
解し凍結乾燥を行った。得られた直鎖粗ペプチド５００
ｍｇは、ＨＰＬＣ〔カラム：オクタデシル４ＰＷ（２
１．５×１５０ｍｍ，（東ソー社），溶出：０．１％Ｔ
ＦＡを含む水−アセトニトリルにてグラジエント溶出〕
により精製し直鎖精製ペプチド４１０ｍｇを得た。得ら
れた精製ペプチドの純度は、ＨＰＬＣによる分析の結果
９３％であった。
列を含むペプチドの合成を行った。本実施例ではヒトＬ
Ｆ１−１９、ヒトＬＦ１−５２、ウシＬＦ１−１８、ウ
シＬＦ１−５１の合成例を示した。本明細書に記載した
これ以外のペプチドの合成も、本実施例に準じて合成し
た。（１） ヒトＬＦ１−１９の合成 ペプチドシンセサイザー４３１Ａ（ＡＢＩ社）により、
パラヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン
（ＨＭＰ）樹脂を用い、９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル（Ｆｍｏｃ）基をアミノ末端の保護基として
０．２５ｍｍｏｌスケールで直鎖保護ペプチドを合成し
た。得られたＨＭＰ樹脂結合保護ペプチド１４５５ｍｇ
をフェノール、１，２−エタンジチオール、チオアニソ
ール存在下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によりペプチ
ドのＨＭＰ樹脂からの切り離しと保護基の除去を同時に
行った。減圧濃縮によりＴＦＡを除去した後、エチルエ
ーテルで粗ペプチドを結晶化させ、これを５％酢酸に溶
解し凍結乾燥を行った。得られた直鎖粗ペプチド５００
ｍｇは、ＨＰＬＣ〔カラム：オクタデシル４ＰＷ（２
１．５×１５０ｍｍ，（東ソー社），溶出：０．１％Ｔ
ＦＡを含む水−アセトニトリルにてグラジエント溶出〕
により精製し直鎖精製ペプチド４１０ｍｇを得た。得ら
れた精製ペプチドの純度は、ＨＰＬＣによる分析の結果
９３％であった。
【００２７】（２）ヒトＬＦ１−５２〔20Cys(Acm),37C
ys(Acm) 〕、ヒトＬＦ１−５２および〔10CysSH,20Cys
(Acm),37Cys(Acm),46CysSH 〕ヒトＬＦ１−５２の合成 ペプチドシンセサイザー４３１Ａ（ＡＢＩ社）により、
パラヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン
（ＨＭＰ）樹脂を用い、９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル（Ｆｍｏｃ）基をアミノ末端の保護基とし、
20Cys および37Cys のＳＨ基をアセトアミドメチル（Ａ
ｃｍ）基で保護して０．２５ｍｍｏｌスケールで直鎖保
護ペプチドを合成した。得られたＨＭＰ樹脂結合保護ペ
プチド２３３７ｍｇをフェノール、１，２−エタンジチ
オール、チオアニソール存在下、トリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡ）によりペプチドのＨＭＰ樹脂からの切り離しと保
護基の除去を同時に行った。減圧濃縮によりＴＦＡを除
去した後、エチルエーテルで粗ペプチドを結晶化させ、
これを５％酢酸に溶解し凍結乾燥を行った。得られた直
鎖粗ペプチド９７０ｍｇは、ＨＰＬＣ（カラム：オクタ
デシル４ＰＷ（２１．５×１５０ｍｍ，東ソー社），溶
出：０．１％ＴＦＡを含む水−アセトニトリルにてグラ
ジエント溶出）により精製し直鎖精製ペプチド〔10CysS
H,20Cys(Acm),37Cys(Acm),46CysSH 〕ヒトＬＦ（１−５
２）６０７ｍｇを得た。得られた精製ペプチドの純度
は、ＨＰＬＣによる分析の結果９６％であった。このペ
プチドをフェリシアン化カリウム存在下空気酸化により
10Cys,46Cys にＳ−Ｓ結合を形成させさらにＨＰＬＣに
て精製することで、純度９０％の〔20Cys(Acm),37Cys(A
cm)〕ヒトＬＦ（１−５２）４５０ｍｇを得た。さらに
このペプチドをヨウ素処理しＡｃｍ基の除去とＳ−Ｓ結
合の形成を同時に行い、ＨＰＬＣで精製することでヒト
ＬＦ（１−５２）１２０ｍｇを得た。ＨＰＬＣによる分
析の結果このペプチドの純度は８９％であった。
ys(Acm) 〕、ヒトＬＦ１−５２および〔10CysSH,20Cys
(Acm),37Cys(Acm),46CysSH 〕ヒトＬＦ１−５２の合成 ペプチドシンセサイザー４３１Ａ（ＡＢＩ社）により、
パラヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン
（ＨＭＰ）樹脂を用い、９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル（Ｆｍｏｃ）基をアミノ末端の保護基とし、
20Cys および37Cys のＳＨ基をアセトアミドメチル（Ａ
ｃｍ）基で保護して０．２５ｍｍｏｌスケールで直鎖保
護ペプチドを合成した。得られたＨＭＰ樹脂結合保護ペ
プチド２３３７ｍｇをフェノール、１，２−エタンジチ
オール、チオアニソール存在下、トリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡ）によりペプチドのＨＭＰ樹脂からの切り離しと保
護基の除去を同時に行った。減圧濃縮によりＴＦＡを除
去した後、エチルエーテルで粗ペプチドを結晶化させ、
これを５％酢酸に溶解し凍結乾燥を行った。得られた直
鎖粗ペプチド９７０ｍｇは、ＨＰＬＣ（カラム：オクタ
デシル４ＰＷ（２１．５×１５０ｍｍ，東ソー社），溶
出：０．１％ＴＦＡを含む水−アセトニトリルにてグラ
ジエント溶出）により精製し直鎖精製ペプチド〔10CysS
H,20Cys(Acm),37Cys(Acm),46CysSH 〕ヒトＬＦ（１−５
２）６０７ｍｇを得た。得られた精製ペプチドの純度
は、ＨＰＬＣによる分析の結果９６％であった。このペ
プチドをフェリシアン化カリウム存在下空気酸化により
10Cys,46Cys にＳ−Ｓ結合を形成させさらにＨＰＬＣに
て精製することで、純度９０％の〔20Cys(Acm),37Cys(A
cm)〕ヒトＬＦ（１−５２）４５０ｍｇを得た。さらに
このペプチドをヨウ素処理しＡｃｍ基の除去とＳ−Ｓ結
合の形成を同時に行い、ＨＰＬＣで精製することでヒト
ＬＦ（１−５２）１２０ｍｇを得た。ＨＰＬＣによる分
析の結果このペプチドの純度は８９％であった。
【００２８】（３）ウシＬＦ１−１８の合成 実施例２と同様の方法でウシＬＦ１−１８のアミノ酸配
列を持ったペプチドを合成し、純度９８％の鎖状ペプチ
ド３６５ｍｇを得た
列を持ったペプチドを合成し、純度９８％の鎖状ペプチ
ド３６５ｍｇを得た
【００２９】（４）ウシＬＦ（１−５１）、〔19Cys(Ac
m),36Cys(Acm) 〕ウシＬＦ（１−５１）および〔 9CysS
H,19Cys(Acm),36Cys(Acm),45CysSH 〕ウシＬＦ（１−５
１）の合成 実施例３と同様の方法で合成を行い、純度８８％のウシ
ＬＦ（１−５１）を５７６ｍｇ、純度９０％の〔19Cys
(Acm),36Cys(Acm) 〕ウシＬＦ（１−５１）を３９０ｍ
ｇ、純度８２％の〔 9CysSH,19Cys(Acm),36Cys(Acm),45
CysSH 〕ウシＬＦ（１−５１）を得た。
m),36Cys(Acm) 〕ウシＬＦ（１−５１）および〔 9CysS
H,19Cys(Acm),36Cys(Acm),45CysSH 〕ウシＬＦ（１−５
１）の合成 実施例３と同様の方法で合成を行い、純度８８％のウシ
ＬＦ（１−５１）を５７６ｍｇ、純度９０％の〔19Cys
(Acm),36Cys(Acm) 〕ウシＬＦ（１−５１）を３９０ｍ
ｇ、純度８２％の〔 9CysSH,19Cys(Acm),36Cys(Acm),45
CysSH 〕ウシＬＦ（１−５１）を得た。
【００３０】
【実施例４】合成ペプチドのリンパ球幼若化活性の測定 実施例３で得られた合成ペプチドのリンパ球幼若化作用
を測定した。測定は実施例１に示した方法に従った。測
定結果を下記の表４に示した。各合成ペプチドはいずれ
も強いＳ．Ｉ．活性を有していた。
を測定した。測定は実施例１に示した方法に従った。測
定結果を下記の表４に示した。各合成ペプチドはいずれ
も強いＳ．Ｉ．活性を有していた。
【００３１】
【表４】
【００３２】
【実施例５】合成ペプチドの抗腫瘍効果の測定 実施例３で得られた合成ペプチドの免疫賦活効果を確認
するため、腹水型腫瘍の増殖抑制効果を指標として実験
を行い、免疫マーカーの変化を観察した。ＢＡＬＢ／ｃ
雄マウス（１群１０匹）に１０5 〜１０6 個の腹水型腫
瘍細胞（Meth A 細胞）を腹腔内に移植した。腫瘍移植
当日より、隔日に５回にわたり合成ペプチドを腹腔内に
投与した。またポジティブコントロールとしてムラミル
ジペプチド（ＭＤＰ）を３ｍｇ／ｋｇ同様に投与し、さ
らにネガティブコントロールにはカラギーナンを同様に
投与した。腫瘍移植から２０日後のマウスの生存率を表
５に示した。サンプルについても０．００５ｇ／体重ｋ
ｇ以上の投与量で腫瘍増殖抑制効果が認められ、特に合
成ペプチド投与群では０．０５ｇ／体重ｋｇの投与では
マウスの死亡は全く認められなかった。またペプチド投
与動物のＮＫ細胞が活性化されていることが確認され
た。ＮＫ細胞活性化の測定は、マウスの脾臓細胞をエフ
ェクター細胞として、標的細胞に51Ｃｒをラベルした腫
瘍細胞（ＹＡＣ−１）を用い、１００：１の割合で混合
し、遊離した 51Ｃｒの量からＮＫ活性値を測定した。
本発明物質投与動物のＮＫ活性値は、コントロールと比
べて有意に高値を示していた。
するため、腹水型腫瘍の増殖抑制効果を指標として実験
を行い、免疫マーカーの変化を観察した。ＢＡＬＢ／ｃ
雄マウス（１群１０匹）に１０5 〜１０6 個の腹水型腫
瘍細胞（Meth A 細胞）を腹腔内に移植した。腫瘍移植
当日より、隔日に５回にわたり合成ペプチドを腹腔内に
投与した。またポジティブコントロールとしてムラミル
ジペプチド（ＭＤＰ）を３ｍｇ／ｋｇ同様に投与し、さ
らにネガティブコントロールにはカラギーナンを同様に
投与した。腫瘍移植から２０日後のマウスの生存率を表
５に示した。サンプルについても０．００５ｇ／体重ｋ
ｇ以上の投与量で腫瘍増殖抑制効果が認められ、特に合
成ペプチド投与群では０．０５ｇ／体重ｋｇの投与では
マウスの死亡は全く認められなかった。またペプチド投
与動物のＮＫ細胞が活性化されていることが確認され
た。ＮＫ細胞活性化の測定は、マウスの脾臓細胞をエフ
ェクター細胞として、標的細胞に51Ｃｒをラベルした腫
瘍細胞（ＹＡＣ−１）を用い、１００：１の割合で混合
し、遊離した 51Ｃｒの量からＮＫ活性値を測定した。
本発明物質投与動物のＮＫ活性値は、コントロールと比
べて有意に高値を示していた。
【００３３】
【表５】
【００３４】
【実施例６】合成ペプチドによるサイトメガロウイルス感染防御効果 ヒト及びウシＬＦの各種合成ペプチドを調製し、このこ
のペプチドのサイトメガロウイルス感染防御効果を確認
した。実験動物として、ＳＰＦ−ＢＡＬＢ／ｃＡ雄、４
週齢を１群５匹として用いた。このマウスに、マウスサ
イトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）Ｓｍｉｔｈ株のマウス
唾液腺を１０回以上通過したものを感染させて、その延
命率を求めて判定を行った。ウイルスの感染は１×１０
6 ＰＦＵ／マウスの濃度で腹腔内に接種して行い、、感
染と同時に各ペプチドのＰＢＳ溶液を腹腔内に０．２
５、０．１２５、０．０２５、０．００５ｇ／k ｇ（体
重）で投与した。また生存動物は解剖を行い、脾臓を摘
出し、脾臓細胞のＮＫ細胞活性を測定した。結果を表６
に示した。
のペプチドのサイトメガロウイルス感染防御効果を確認
した。実験動物として、ＳＰＦ−ＢＡＬＢ／ｃＡ雄、４
週齢を１群５匹として用いた。このマウスに、マウスサ
イトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）Ｓｍｉｔｈ株のマウス
唾液腺を１０回以上通過したものを感染させて、その延
命率を求めて判定を行った。ウイルスの感染は１×１０
6 ＰＦＵ／マウスの濃度で腹腔内に接種して行い、、感
染と同時に各ペプチドのＰＢＳ溶液を腹腔内に０．２
５、０．１２５、０．０２５、０．００５ｇ／k ｇ（体
重）で投与した。また生存動物は解剖を行い、脾臓を摘
出し、脾臓細胞のＮＫ細胞活性を測定した。結果を表６
に示した。
【００３５】
【表６】
【００３６】本発明のペプチドはヒトまたはウシＬＦの
Ｎ末端側に活性が存在することが確認できた。またこの
活性はＮ末端から３残基まで削除しても、影響がないこ
とが確認できた。さらに本発明ペプチドを投与した動物
はいずれもＮＫ細胞活性が上昇していた。この活性もサ
イトメガロウイルスの感染防御活性と一致していた。
Ｎ末端側に活性が存在することが確認できた。またこの
活性はＮ末端から３残基まで削除しても、影響がないこ
とが確認できた。さらに本発明ペプチドを投与した動物
はいずれもＮＫ細胞活性が上昇していた。この活性もサ
イトメガロウイルスの感染防御活性と一致していた。
【００３７】
【実施例７】 本実施例は、本発明ペプチドを製剤化した例を示す。 （１）錠剤 乳糖１７０ｇ、馬鈴薯澱粉５ｇ、実施例３で合成したウ
シＬＦ１−１８ ２０ｇ、ステアリン酸タルク５ｇを混
合し、常法により打錠し、ペプチド１００ｍｇを含有す
る１ｇの錠剤を２００個製造した。 （２）注射剤 １００ｍｌ中にマンニトール５ｇ、実施例３で合成した
ヒトＬＦ１−１９ １００ｍｇ、ヒト血清アルブミン１
００ｍｇ、カプリル酸ナトリウム２ｍｇを含む水溶液を
無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注し、凍結乾
燥し密封した。
シＬＦ１−１８ ２０ｇ、ステアリン酸タルク５ｇを混
合し、常法により打錠し、ペプチド１００ｍｇを含有す
る１ｇの錠剤を２００個製造した。 （２）注射剤 １００ｍｌ中にマンニトール５ｇ、実施例３で合成した
ヒトＬＦ１−１９ １００ｍｇ、ヒト血清アルブミン１
００ｍｇ、カプリル酸ナトリウム２ｍｇを含む水溶液を
無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注し、凍結乾
燥し密封した。
【００３８】
【発明の効果】本発明の実施により、新規ペプチド、そ
の製造法及びこのペプチドを有効成分とする免疫賦活
剤、サイトメガロウイルス感染防御剤が提供される。
の製造法及びこのペプチドを有効成分とする免疫賦活
剤、サイトメガロウイルス感染防御剤が提供される。
【００３９】
配列番号:1 配列の長さ：１９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端部フラグメント 起源：ヒトラクトフェリン 配列の特徴 配列： Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala Val Ser Gln Pro Glu 1 5 10 Ala Thr Lys
【００４０】配列番号: ２ 配列の長さ：52 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端部フラグメント 起源：ヒトラクトフェリン 配列の特徴 配列： Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala Val Ser Gln Pro Glu 1 5 10 15 Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly 20 25 30 Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp Ser Pro Ile Gln Cys Ile Gln 35 40 45 Ala Ile Ala Glu 50
【００４１】配列番号:3 配列の長さ：18 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端部フラグメント 起源：ウシラクトフェリン 配列の特徴 配列: Ala Pro Arg Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Asp Ser 1 5 10 15 Phe Lys
【００４２】配列番号:4 配列の長さ：51 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端部フラグメント 起源：ウシラクトフェリン 配列の特徴 配列: Ala Pro Arg Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Asp Ser 1 5 10 15 Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 20 25 30 Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe Ala Leu Glu Cys Ile Arg Ala 35 40 45 Ile Ala Glu 50
【図１】ウシラクトフェリンのペプシンによる酵素分解
物のＨＰＬＣパターンを示す。図中の↓印のピークに本
発明のペプチドが存在する。
物のＨＰＬＣパターンを示す。図中の↓印のピークに本
発明のペプチドが存在する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 7/08 ＺＮＡ 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｐ 21/06 9282−4Ｂ
Claims (9)
- 【請求項１】 次のアミノ酸配列〔Ｉ〕で表されるアミ
ノ酸配列を含むペプチド。 Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr -Lys 〔Ｉ〕 - 【請求項２】 アミノ酸配列〔Ｉ〕のＮ末端のアミノ酸
残基が１〜３残基欠失したものである請求項１記載のペ
プチド。 - 【請求項３】 次のアミノ酸配列〔II〕で表されるアミ
ノ酸配列を含むペプチド。 【化１】 但しＳ−Ｓ結合は還元状態のＳＨ基となっていてもよ
い。 - 【請求項４】 次のアミノ酸配列〔III 〕で表されるア
ミノ酸配列を含むペプチド。 Ala-Pro-Arg-Lys-Asn-Val-Arg-Trp-Cys-Thr-Ile-Ser-Gln-Pro-Asp-Ser-Phe-Lys 〔 III〕 - 【請求項５】 次のアミノ酸配列〔IV〕で表されるアミ
ノ酸配列を含むペプチド。 【化２】 但しＳ−Ｓ結合は還元状態のＳＨ基となっていてもよ
い。 - 【請求項６】 請求項１〜５記載のペプチドまたはその
薬理学的に許容される塩を有効成分とする免疫賦活剤 - 【請求項７】 請求項１〜５記載のペプチドまたはその
薬理学的に許容される塩を有効成分とするサイトメガロ
ウイルス感染防御剤。 - 【請求項８】 ヒトラクトフェリンを、プロテアーゼに
より酵素分解し、酵素分解物から請求項１〜３記載のい
ずれのペプチドを採取することを特徴とするペプチドの
製造法。 - 【請求項９】 ウシラクトフェリンを、プロテアーゼに
より酵素分解し、酵素分解物から請求項４〜５記載のペ
プチドを採取することを特徴とするペプチドの製造法。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP23202694A JP3506274B2 (ja) | 1994-09-01 | 1994-09-01 | 新規ペプチドおよび免疫賦活剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23202694A JP3506274B2 (ja) | 1994-09-01 | 1994-09-01 | 新規ペプチドおよび免疫賦活剤 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003295576A Division JP3561519B2 (ja) | 2003-08-19 | 2003-08-19 | 新規ペプチドおよび免疫賦活剤 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0873499A true JPH0873499A (ja) | 1996-03-19 |
| JP3506274B2 JP3506274B2 (ja) | 2004-03-15 |
Family
ID=16932806
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23202694A Expired - Fee Related JP3506274B2 (ja) | 1994-09-01 | 1994-09-01 | 新規ペプチドおよび免疫賦活剤 |
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Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998006424A1 (fr) * | 1996-08-15 | 1998-02-19 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Inhibiteurs des metastases cancereuses administres par voie orale |
| WO2000015655A1 (en) * | 1998-09-15 | 2000-03-23 | Nizo Food Research | Process for producing peptides from biological fluids and peptides obtainable by said process |
| WO2000049040A3 (en) * | 1999-02-05 | 2000-12-14 | Endogen Res Ph Ab | Antimicrobial/endotoxin neutralizing polypeptide |
| WO2001034641A3 (en) * | 1999-11-11 | 2002-02-14 | Am Pharma Bv | Antimicrobial activity of the first cationic cluster of human lactoferrin |
| WO2001072322A3 (en) * | 2000-03-27 | 2002-03-21 | Pharming Intellectual Pty Bv | High dosage parenteral administration of lactoferrin |
| WO2005089788A1 (ja) * | 2004-03-19 | 2005-09-29 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | 癌治療のための薬剤 |
| US7060677B1 (en) | 1999-11-11 | 2006-06-13 | Am-Pharma B.V. | Antimicrobial activity of the first cationic cluster of human lactoferrin |
| US7253143B1 (en) | 1998-07-06 | 2007-08-07 | Pharmasurgics In Sweden Ab | Peptides based on the sequence of human lactoferrin and their use |
| JP4795021B2 (ja) * | 2002-12-06 | 2011-10-19 | エイジェニックス インコーポレイテッド | 敗血症治療における経口用ラクトフェリン |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0629213T3 (da) | 1992-03-07 | 1996-11-18 | Morinaga Milk Industry Co Ltd | Anvendelse af et immunstimulerende middel |
-
1994
- 1994-09-01 JP JP23202694A patent/JP3506274B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998006424A1 (fr) * | 1996-08-15 | 1998-02-19 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Inhibiteurs des metastases cancereuses administres par voie orale |
| US7803757B2 (en) | 1998-07-06 | 2010-09-28 | Pharmasurgics In Sweden Ab | Peptides based on the sequence of human lactoferrin and their use |
| JP2010090162A (ja) * | 1998-07-06 | 2010-04-22 | Pharmasurgics In Sweden Ab | 人ラクトフェリンの配列に基づくペプチドおよびその使用 |
| US7253143B1 (en) | 1998-07-06 | 2007-08-07 | Pharmasurgics In Sweden Ab | Peptides based on the sequence of human lactoferrin and their use |
| AU768673B2 (en) * | 1998-09-15 | 2003-12-18 | Nizo Food Research | Process for producing peptides from biological fluids and peptides obtainable by said process |
| WO2000015655A1 (en) * | 1998-09-15 | 2000-03-23 | Nizo Food Research | Process for producing peptides from biological fluids and peptides obtainable by said process |
| US7244706B2 (en) | 1999-02-05 | 2007-07-17 | Agennix, Inc. | Antimicrobial/endotoxin neutralizing polypeptide |
| JP2002541066A (ja) * | 1999-02-05 | 2002-12-03 | エンドゲン・リサーチ・ペーハー・アクチボラゲット | 抗微生物薬／エンドトキシンを中和するポリペプチド |
| US6399570B1 (en) | 1999-02-05 | 2002-06-04 | Agennix, Inc. | Antimicrobial/endotoxin neutralizing polypeptide |
| WO2000049040A3 (en) * | 1999-02-05 | 2000-12-14 | Endogen Res Ph Ab | Antimicrobial/endotoxin neutralizing polypeptide |
| JP2003521483A (ja) * | 1999-11-11 | 2003-07-15 | エイエム ファーマ ビーブイ | ヒトラクトフェリンの第１カチオンクラスターの抗菌活性 |
| AU776044B2 (en) * | 1999-11-11 | 2004-08-26 | Am-Pharma B.V. | Antimcrobial activity of the first cationic cluster of human lactoferrin |
| US7060677B1 (en) | 1999-11-11 | 2006-06-13 | Am-Pharma B.V. | Antimicrobial activity of the first cationic cluster of human lactoferrin |
| WO2001034641A3 (en) * | 1999-11-11 | 2002-02-14 | Am Pharma Bv | Antimicrobial activity of the first cationic cluster of human lactoferrin |
| WO2001072322A3 (en) * | 2000-03-27 | 2002-03-21 | Pharming Intellectual Pty Bv | High dosage parenteral administration of lactoferrin |
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| WO2005089788A1 (ja) * | 2004-03-19 | 2005-09-29 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | 癌治療のための薬剤 |
| US7419667B2 (en) | 2004-03-19 | 2008-09-02 | Morinaga Milk Industry Co. Ltd. | Drug for cancer therapy |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3506274B2 (ja) | 2004-03-15 |
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