JPH0881388A - 動脈硬化防止剤 - Google Patents
動脈硬化防止剤Info
- Publication number
- JPH0881388A JPH0881388A JP6219963A JP21996394A JPH0881388A JP H0881388 A JPH0881388 A JP H0881388A JP 6219963 A JP6219963 A JP 6219963A JP 21996394 A JP21996394 A JP 21996394A JP H0881388 A JPH0881388 A JP H0881388A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- casein
- macrophages
- ldl
- arteriosclerosis
- hydrolyzate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 κ−カゼインおよび／またはκ−カゼインの
加水分解物を有効成分とする動脈硬化防止剤。 【効果】 変性ＬＤＬのマクロファージへの取り込みを
特異的に阻害するので、マクロファージの泡沫化を抑制
することができ、動脈硬化の予防またはその進行防止に
著効を有する。
加水分解物を有効成分とする動脈硬化防止剤。 【効果】 変性ＬＤＬのマクロファージへの取り込みを
特異的に阻害するので、マクロファージの泡沫化を抑制
することができ、動脈硬化の予防またはその進行防止に
著効を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、動脈硬化防止剤に関
するものである。さらに詳しくは、この発明は、変性低
密度リポタンパク質（以下低密度リポタンパク質をＬＤ
Ｌと記載する）のマクロファージへの取り込みを阻害す
ることにより、血管壁へのコレステロール沈着を防止
し、動脈硬化症を予防またはその進行を防止する動脈硬
化防止剤に関するものである。
するものである。さらに詳しくは、この発明は、変性低
密度リポタンパク質（以下低密度リポタンパク質をＬＤ
Ｌと記載する）のマクロファージへの取り込みを阻害す
ることにより、血管壁へのコレステロール沈着を防止
し、動脈硬化症を予防またはその進行を防止する動脈硬
化防止剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】虚血性心疾患および脳梗塞等の動脈硬化
症は、動脈壁にコレステロールエステルが蓄積して脂肪
層(fatty streak)を形成し、この脂肪層がさらにアテロ
ーム性プラークを形成して血管を狭窄、閉塞することが
原因とされている。このコレステロールエステルの蓄積
は、コレステロールエステルを大量に含む泡沫細胞(foa
m cell) の集簇によるが、初期の動脈硬化病巣にはマク
ロファージ由来の泡沫細胞が多く認められることから、
マクロファージが動脈硬化発症に重要な役割を果たすこ
とが明らかになってきた［アメリカン・ジャーナル・オ
ブ・パソロジー(American Journal of Pathology) 、第
１０３巻、第１８１ページ、１９８１年］。
症は、動脈壁にコレステロールエステルが蓄積して脂肪
層(fatty streak)を形成し、この脂肪層がさらにアテロ
ーム性プラークを形成して血管を狭窄、閉塞することが
原因とされている。このコレステロールエステルの蓄積
は、コレステロールエステルを大量に含む泡沫細胞(foa
m cell) の集簇によるが、初期の動脈硬化病巣にはマク
ロファージ由来の泡沫細胞が多く認められることから、
マクロファージが動脈硬化発症に重要な役割を果たすこ
とが明らかになってきた［アメリカン・ジャーナル・オ
ブ・パソロジー(American Journal of Pathology) 、第
１０３巻、第１８１ページ、１９８１年］。
【０００３】マクロファージには、正常ＬＤＬを認識し
て取り込むＬＤＬ受容体はあまり存在せず、生体内で化
学修飾を受けた変性ＬＤＬを特異的に認識して取り込む
スカベンジャー受容体が発達しており、マクロファージ
はスカベンジャー受容体を経由して変性ＬＤＬを過剰に
取り込むことによりコレステロールエステルを蓄積し泡
沫化する［プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンスイズ・オブ・ザ・ユナ
イテッド・ステーツ・オブ・アメリカ(Proceedings of
the National Academy of Sciences of the United Sta
tes of America) 、第７６巻、第３３３ページ、１９７
９年］。スカベンジャー受容体が認識する変性ＬＤＬと
しては、アセチル化ＬＤＬ、マレイル化ＬＤＬ、酸化Ｌ
ＤＬ等、特に陰性電荷が増加した変性ＬＤＬを例示でき
るが、実際の生体内ではフリーラジカルによるＬＤＬの
酸化が変性ＬＤＬ生成の主要経路と考えられている［ニ
ュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン(N
ew England Journal of Medicine) 、第３２０巻、第９
１５ページ、１９８９年］。
て取り込むＬＤＬ受容体はあまり存在せず、生体内で化
学修飾を受けた変性ＬＤＬを特異的に認識して取り込む
スカベンジャー受容体が発達しており、マクロファージ
はスカベンジャー受容体を経由して変性ＬＤＬを過剰に
取り込むことによりコレステロールエステルを蓄積し泡
沫化する［プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンスイズ・オブ・ザ・ユナ
イテッド・ステーツ・オブ・アメリカ(Proceedings of
the National Academy of Sciences of the United Sta
tes of America) 、第７６巻、第３３３ページ、１９７
９年］。スカベンジャー受容体が認識する変性ＬＤＬと
しては、アセチル化ＬＤＬ、マレイル化ＬＤＬ、酸化Ｌ
ＤＬ等、特に陰性電荷が増加した変性ＬＤＬを例示でき
るが、実際の生体内ではフリーラジカルによるＬＤＬの
酸化が変性ＬＤＬ生成の主要経路と考えられている［ニ
ュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン(N
ew England Journal of Medicine) 、第３２０巻、第９
１５ページ、１９８９年］。
【０００４】一方、高密度リポタンパク質（以下ＨＤＬ
と記載する）は、一旦形成された泡沫細胞からのコレス
テロールの汲み出し作用があることが報告されており、
ＨＤＬの動脈硬化抑制作用にはこの機構が関与している
ことが示唆されている［ジャーナル・オブ・リピッド・
リサーチ(Journal of Lipid Research) 、第２１巻、第
３９１ページ、１９８０年］。
と記載する）は、一旦形成された泡沫細胞からのコレス
テロールの汲み出し作用があることが報告されており、
ＨＤＬの動脈硬化抑制作用にはこの機構が関与している
ことが示唆されている［ジャーナル・オブ・リピッド・
リサーチ(Journal of Lipid Research) 、第２１巻、第
３９１ページ、１９８０年］。
【０００５】動脈硬化症がこのような機構によって発症
することから、動脈硬化症の予防またはその進行の防止
には、従来、次のような方策が採用されていた［ザ・リ
ピッド(The Lipid) 、第２巻、第４９４ページ、１９９
１年］。 ａ）ＬＤＬコレステロールを低下させる ｂ）ＬＤＬの変性（特に酸化）を抑制する ｃ）マクロファージの泡沫化を抑制する ｄ）泡沫細胞からのコレステロールを汲み出しを促進す
る 前記ａ）に関しては、食事中のコレステロールの低減、
食物繊維および多価不飽和脂肪酸の摂取等による食事療
法、コンパクチン等のコレステロール合成阻害剤、イオ
ン交換樹脂等のコレステロール排泄促進剤等による薬物
療法が広く実施されている。
することから、動脈硬化症の予防またはその進行の防止
には、従来、次のような方策が採用されていた［ザ・リ
ピッド(The Lipid) 、第２巻、第４９４ページ、１９９
１年］。 ａ）ＬＤＬコレステロールを低下させる ｂ）ＬＤＬの変性（特に酸化）を抑制する ｃ）マクロファージの泡沫化を抑制する ｄ）泡沫細胞からのコレステロールを汲み出しを促進す
る 前記ａ）に関しては、食事中のコレステロールの低減、
食物繊維および多価不飽和脂肪酸の摂取等による食事療
法、コンパクチン等のコレステロール合成阻害剤、イオ
ン交換樹脂等のコレステロール排泄促進剤等による薬物
療法が広く実施されている。
【０００６】また、前記ｂ）に関しては、プロブコール
等の薬剤にＬＤＬの酸化抑制作用があることが明らかに
なってきている。さらに、前記ｄ）に関しては、その作
用を持つＨＤＬを上昇させるために前記ａ）と同類の食
事療法、薬物療法が実施されている。ＨＤＬの他、サイ
ログロブリンやカゼインに泡沫細胞からコレステロール
を汲み出す作用が見い出されているが［ジャーナル・オ
ブ・リピッド・リサーチ(Journal of Lipid Research)
、第２１巻、第３９１ページ、１９８０年］、実用化
には至っていない。なお、この文献に記載のカゼインは
全カゼイン画分であり、κ−カゼインに泡沫細胞のコレ
ステロールを汲み出す作用があるか否かは知られていな
い。
等の薬剤にＬＤＬの酸化抑制作用があることが明らかに
なってきている。さらに、前記ｄ）に関しては、その作
用を持つＨＤＬを上昇させるために前記ａ）と同類の食
事療法、薬物療法が実施されている。ＨＤＬの他、サイ
ログロブリンやカゼインに泡沫細胞からコレステロール
を汲み出す作用が見い出されているが［ジャーナル・オ
ブ・リピッド・リサーチ(Journal of Lipid Research)
、第２１巻、第３９１ページ、１９８０年］、実用化
には至っていない。なお、この文献に記載のカゼインは
全カゼイン画分であり、κ−カゼインに泡沫細胞のコレ
ステロールを汲み出す作用があるか否かは知られていな
い。
【０００７】さらに、前記ｃ）に関しては、アシルCo
Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ等のマク
ロファージ内に存在する泡沫化に関与する酵素の阻害剤
にこの作用があることが知られているが、変性ＬＤＬの
マクロファージへの取り込みを阻害して泡沫化を抑制す
ることによる動脈硬化症の予防、またはその進行の防止
に関してはほとんど検討されておらず、ましてやκ−カ
ゼインおよびその加水分解物に変性ＬＤＬのマクロファ
ージへの取り込みを阻害する作用があることは全く知ら
れていない。
Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ等のマク
ロファージ内に存在する泡沫化に関与する酵素の阻害剤
にこの作用があることが知られているが、変性ＬＤＬの
マクロファージへの取り込みを阻害して泡沫化を抑制す
ることによる動脈硬化症の予防、またはその進行の防止
に関してはほとんど検討されておらず、ましてやκ−カ
ゼインおよびその加水分解物に変性ＬＤＬのマクロファ
ージへの取り込みを阻害する作用があることは全く知ら
れていない。
【０００８】一方、κ−カゼインは、乳汁のカゼイン画
分に含有される分子量約１９０００ダルトンの糖蛋白質
である。牛乳では全カゼイン画分の約１５％を占め、人
乳では全カゼイン画分の約３０％を占める。κ−カゼイ
ンは、カゼインミセルの形成およびカードの形成に物理
化学的に重要な役割を果たすが、特異的な生理作用に関
しては特に顕著な作用は知られていない。κ−カゼイン
が変性ＬＤＬのマクロファージへの取り込みを阻害する
ことは、従来全く知られておらず、文献が皆無である。
分に含有される分子量約１９０００ダルトンの糖蛋白質
である。牛乳では全カゼイン画分の約１５％を占め、人
乳では全カゼイン画分の約３０％を占める。κ−カゼイ
ンは、カゼインミセルの形成およびカードの形成に物理
化学的に重要な役割を果たすが、特異的な生理作用に関
しては特に顕著な作用は知られていない。κ−カゼイン
が変性ＬＤＬのマクロファージへの取り込みを阻害する
ことは、従来全く知られておらず、文献が皆無である。
【０００９】さらに、κ−カゼインの加水分解物につい
ては、κ−カゼインからレンネットの作用により得られ
るグリコマクロペプチドに、ビフィズス菌増殖作用、胃
酸分泌抑制作用、病原菌付着防止作用（特開平３−２２
０１３０号公報）、感染防御作用（特開昭６３−２８４
１３３号公報）、抗歯垢作用および抗齲歯作用（特開昭
６３−２３３９１１号公報）等が、その他の潜在性ペプ
チドにオピオイドアンタゴニスト作用、血小板凝集抑制
作用［ミルク総合事典、第１１３ページ、朝倉書店、１
９９２年］等が知られているが、変性ＬＤＬのマクロフ
ァージへの取り込みを阻害することは、従来全く知られ
ていない。
ては、κ−カゼインからレンネットの作用により得られ
るグリコマクロペプチドに、ビフィズス菌増殖作用、胃
酸分泌抑制作用、病原菌付着防止作用（特開平３−２２
０１３０号公報）、感染防御作用（特開昭６３−２８４
１３３号公報）、抗歯垢作用および抗齲歯作用（特開昭
６３−２３３９１１号公報）等が、その他の潜在性ペプ
チドにオピオイドアンタゴニスト作用、血小板凝集抑制
作用［ミルク総合事典、第１１３ページ、朝倉書店、１
９９２年］等が知られているが、変性ＬＤＬのマクロフ
ァージへの取り込みを阻害することは、従来全く知られ
ていない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】この発明の発明者ら
は、先にラクトフェリンおよび／またはラクトフェリン
の加水分解物に動脈硬化症防止作用があることを見い出
し、既に特許出願を行った（特願平５−２３０５５号。
以下先願と記載する）。この発明の発明者らは、先願出
願後、動脈硬化症防止作用を有する物質についてさらに
検索を行った結果、κ−カゼインおよび／またはκ−カ
ゼインの加水分解物が変性ＬＤＬのマクロファージへの
取り込みを阻害してマクロファージの泡沫化を抑制する
こと、さらには全カゼイン画分に比較し、全カゼイン画
分からκ−カゼインを精製して用いることによりその活
性が顕著に上昇することを見い出した。
は、先にラクトフェリンおよび／またはラクトフェリン
の加水分解物に動脈硬化症防止作用があることを見い出
し、既に特許出願を行った（特願平５−２３０５５号。
以下先願と記載する）。この発明の発明者らは、先願出
願後、動脈硬化症防止作用を有する物質についてさらに
検索を行った結果、κ−カゼインおよび／またはκ−カ
ゼインの加水分解物が変性ＬＤＬのマクロファージへの
取り込みを阻害してマクロファージの泡沫化を抑制する
こと、さらには全カゼイン画分に比較し、全カゼイン画
分からκ−カゼインを精製して用いることによりその活
性が顕著に上昇することを見い出した。
【００１１】この発明は、以上のとおりの新たな知見に
基づき、従来の動脈硬化症予防方法、またはその進行防
止方法とは異なった新しい動脈硬化症予防、またはその
進行防止に有用な薬剤を提供することを目的としてい
る。
基づき、従来の動脈硬化症予防方法、またはその進行防
止方法とは異なった新しい動脈硬化症予防、またはその
進行防止に有用な薬剤を提供することを目的としてい
る。
【００１２】
【課題を解決するための手段】この発明は、前記の課題
を解決するものとして、κ−カゼインを有効成分とする
動脈硬化防止剤を提供する。また、この発明は、κ−カ
ゼインの加水分解物を有効成分とする動脈硬化防止剤を
提供する。
を解決するものとして、κ−カゼインを有効成分とする
動脈硬化防止剤を提供する。また、この発明は、κ−カ
ゼインの加水分解物を有効成分とする動脈硬化防止剤を
提供する。
【００１３】さらにこの発明は、κ−カゼインおよびκ
−カゼインの加水分解物を有効成分とする動脈硬化防止
剤をも提供する。以下、この発明について詳しく説明す
る。この発明の動脈硬化防止剤に用いるκ−カゼイン
は、市販のκ−カゼイン、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ等
の乳等から常法（例えば、尿素硫酸法）により単離した
もの、または遺伝子組換え技術等によって生産されたも
のであってもよい。
−カゼインの加水分解物を有効成分とする動脈硬化防止
剤をも提供する。以下、この発明について詳しく説明す
る。この発明の動脈硬化防止剤に用いるκ−カゼイン
は、市販のκ−カゼイン、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ等
の乳等から常法（例えば、尿素硫酸法）により単離した
もの、または遺伝子組換え技術等によって生産されたも
のであってもよい。
【００１４】この発明の動脈硬化防止剤に用いるκ−カ
ゼインの加水分解物は、例えば、前記κ−カゼインを酸
またはプロテアーゼにより公知の方法で加水分解するこ
とにより製造することができる。しかし、低分子化する
ことによりその効果が低下するので、特に制限はない
が、分子量１０００ダルトン以上の画分が全体の３０％
（重量。以下特に断りのない限り同じ）以上の割合で加
水分解を停止するのが望ましい。
ゼインの加水分解物は、例えば、前記κ−カゼインを酸
またはプロテアーゼにより公知の方法で加水分解するこ
とにより製造することができる。しかし、低分子化する
ことによりその効果が低下するので、特に制限はない
が、分子量１０００ダルトン以上の画分が全体の３０％
（重量。以下特に断りのない限り同じ）以上の割合で加
水分解を停止するのが望ましい。
【００１５】この発明においては、κ−カゼインまたは
κ−カゼインの加水分解物を単独で用いることも、両者
を併用することもできる。ただし、後述するようにカゼ
イン画分に含有される他のカゼイン、例えばαs −カゼ
インまたはβ−カゼインとの併用は、その作用を抑制す
るので、望ましくない。この発明の動脈硬化防止剤は、
経口的に通常の食品、薬品の形態で生体に投与すること
ができる。また、非経口的に静脈内、動脈内、筋肉内、
皮下、腹腔内等に投与することができ、例えば、無菌的
に生理食塩水等の溶液に溶解して注射剤として投与する
ことができる。非経口的に投与する場合、投与対象とな
る動物と異種の由来のκ−カゼインを用いるとその抗原
性が問題となるので、同種動物由来のκ−カゼインまた
はその加水分解物を用いるのが望ましい。
κ−カゼインの加水分解物を単独で用いることも、両者
を併用することもできる。ただし、後述するようにカゼ
イン画分に含有される他のカゼイン、例えばαs −カゼ
インまたはβ−カゼインとの併用は、その作用を抑制す
るので、望ましくない。この発明の動脈硬化防止剤は、
経口的に通常の食品、薬品の形態で生体に投与すること
ができる。また、非経口的に静脈内、動脈内、筋肉内、
皮下、腹腔内等に投与することができ、例えば、無菌的
に生理食塩水等の溶液に溶解して注射剤として投与する
ことができる。非経口的に投与する場合、投与対象とな
る動物と異種の由来のκ−カゼインを用いるとその抗原
性が問題となるので、同種動物由来のκ−カゼインまた
はその加水分解物を用いるのが望ましい。
【００１６】κ−カゼインまたはκ−カゼインの加水分
解物の投与量は、動物の種類、年齢および症状によって
変動するが、経口投与の場合、通常５ｍｇ〜１０００ｍ
ｇ／ｋｇ体重／日、望ましくは１０ｍｇ〜２００ｍｇ／
ｋｇ体重／日であり、非経口投与の場合、通常０．５ｍ
ｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、望ましくは１ｍｇ〜２
０ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
解物の投与量は、動物の種類、年齢および症状によって
変動するが、経口投与の場合、通常５ｍｇ〜１０００ｍ
ｇ／ｋｇ体重／日、望ましくは１０ｍｇ〜２００ｍｇ／
ｋｇ体重／日であり、非経口投与の場合、通常０．５ｍ
ｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、望ましくは１ｍｇ〜２
０ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
【００１７】κ−カゼインまたはκ−カゼインの加水分
解物の急性毒性は、後記する試験例３から明らかなよう
に、いずれもＬＤ50は４０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であ
り、毒性は極めて低い。次に試験例を示してこの発明を
さらに詳しく説明する。 （試験例１）この試験は、マクロファージのスカベンジ
ャー受容体に対する変性ＬＤＬの特異的結合に及ぼすκ
−カゼインの影響を調べるために行った。 １）試料の調製 正常ヒト血清から常法（社団法人日本生化学会編、「続
生化学実験講座３」、第５９９ページ、東京化学同人、
１９８６年）によりＬＤＬを調製し、そのＬＤＬから常
法（社団法人日本生化学会編、「続生化学実験講座
３」、第６７２ページ、東京化学同人、１９８６年）に
よりアセチル化ＬＤＬを調製した。
解物の急性毒性は、後記する試験例３から明らかなよう
に、いずれもＬＤ50は４０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であ
り、毒性は極めて低い。次に試験例を示してこの発明を
さらに詳しく説明する。 （試験例１）この試験は、マクロファージのスカベンジ
ャー受容体に対する変性ＬＤＬの特異的結合に及ぼすκ
−カゼインの影響を調べるために行った。 １）試料の調製 正常ヒト血清から常法（社団法人日本生化学会編、「続
生化学実験講座３」、第５９９ページ、東京化学同人、
１９８６年）によりＬＤＬを調製し、そのＬＤＬから常
法（社団法人日本生化学会編、「続生化学実験講座
３」、第６７２ページ、東京化学同人、１９８６年）に
よりアセチル化ＬＤＬを調製した。
【００１８】得られたアセチル化ＬＤＬを放射性ヨウ化
ナトリウム（Ｎａ125 Ｉ）を用いて常法（社団法人日本
生化学会編、「続生化学実験講座３」、第６６７ペー
ジ、東京化学同人、１９８６年）により標識し、放射活
性４００ｃｐｍ／ｎｇ蛋白質の 125 Ｉ−アセチル化ＬＤ
Ｌを調製した。 ２）試験方法 ウィスター系雄ラット（日本ＳＬＣ社から購入。体重２
００ｇ前後）から常法により腹腔マクロファージを採集
し、１×１０6 個のマクロファージを１００μl のダル
ベッコ改変イーグル培地（３％のウシ血清アルブミン、
１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのスト
レプトマイシンを含有する。以下この培地を培地Ａと記
載する）に懸濁し、１μｇの125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬ
と種々の濃度のアセチル化ＬＤＬまたは常法［ジャーナ
ル・オブ・デイリー・サイエンス(Journal of Dairy Sc
ience)、第４６巻、第１１８３ページ、１９６３年］に
より精製したウシκ−カゼインを添加して、４℃で１時
間インキュベートした。遠心分離と１％のウシ血清アル
ブミンを含有するリン酸緩衝液（以下リン酸緩衝液をＰ
ＢＳと記載する）による洗浄を３回反復し、マクロファ
ージに結合している放射活性をγ−カウンター（アロカ
社製）によって測定した。 ３）試験結果 この試験の結果は、図１に示すとおりである。図１は、
125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファージへの結合と
試料濃度との関係を示し、縦軸および横軸は、それぞれ
対照に対する125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファー
ジへの結合の百分率、および試料濃度を示す。図中○お
よび●は、それぞれアセチル化ＬＤＬおよびウシκ−カ
ゼインを示す。
ナトリウム（Ｎａ125 Ｉ）を用いて常法（社団法人日本
生化学会編、「続生化学実験講座３」、第６６７ペー
ジ、東京化学同人、１９８６年）により標識し、放射活
性４００ｃｐｍ／ｎｇ蛋白質の 125 Ｉ−アセチル化ＬＤ
Ｌを調製した。 ２）試験方法 ウィスター系雄ラット（日本ＳＬＣ社から購入。体重２
００ｇ前後）から常法により腹腔マクロファージを採集
し、１×１０6 個のマクロファージを１００μl のダル
ベッコ改変イーグル培地（３％のウシ血清アルブミン、
１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのスト
レプトマイシンを含有する。以下この培地を培地Ａと記
載する）に懸濁し、１μｇの125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬ
と種々の濃度のアセチル化ＬＤＬまたは常法［ジャーナ
ル・オブ・デイリー・サイエンス(Journal of Dairy Sc
ience)、第４６巻、第１１８３ページ、１９６３年］に
より精製したウシκ−カゼインを添加して、４℃で１時
間インキュベートした。遠心分離と１％のウシ血清アル
ブミンを含有するリン酸緩衝液（以下リン酸緩衝液をＰ
ＢＳと記載する）による洗浄を３回反復し、マクロファ
ージに結合している放射活性をγ−カウンター（アロカ
社製）によって測定した。 ３）試験結果 この試験の結果は、図１に示すとおりである。図１は、
125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファージへの結合と
試料濃度との関係を示し、縦軸および横軸は、それぞれ
対照に対する125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファー
ジへの結合の百分率、および試料濃度を示す。図中○お
よび●は、それぞれアセチル化ＬＤＬおよびウシκ−カ
ゼインを示す。
【００１９】図１から明らかなように、アセチル化ＬＤ
Ｌの添加により125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファ
ージへの結合は阻害されるが、この阻害される部分がマ
クロファージのスカベンジャー受容体に対するアセチル
化ＬＤＬの特異的結合である。κ−カゼインは濃度に依
存してこの特異的結合を阻害し、高濃度においてはほぼ
完全に阻害した。すなわち、κ−カゼインは、変性ＬＤ
Ｌがマクロファージのスカベンジャー受容体に特異的に
結合するのを阻害することが明らかに認められた。
Ｌの添加により125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファ
ージへの結合は阻害されるが、この阻害される部分がマ
クロファージのスカベンジャー受容体に対するアセチル
化ＬＤＬの特異的結合である。κ−カゼインは濃度に依
存してこの特異的結合を阻害し、高濃度においてはほぼ
完全に阻害した。すなわち、κ−カゼインは、変性ＬＤ
Ｌがマクロファージのスカベンジャー受容体に特異的に
結合するのを阻害することが明らかに認められた。
【００２０】なお、他の動物由来のκ−カゼインおよび
κ−カゼインの加水分解物についてもほぼ同様の結果が
得られた。 （試験例２）この試験は、各種カゼインがマクロファー
ジの泡沫化に与える影響を調べるために行った。 １）試料 ウシα−カゼイン（シグマ社製。αs −カゼイン含量
約８５％） ウシβ−カゼイン（シグマ社製） ウシκ−カゼイン（シグマ社製） 前記のウシκ−カゼインをビオプラーゼ（ナガセ生
化学工業社製）で１０分間加水分解したウシκ−カゼイ
ン加水分解物 前記と同一のα−カゼイン、β−カゼインおよ
びκ−カゼインを、５０：３５：１５の比率（牛乳のカ
ゼイン中の比率）で混合した混合物 ウシ全カゼイン画分［牛乳から常法（津郷友吉著、
「牛乳の化学」、第７ページ、地球社、１９７５年）に
より調製］ ２）試験方法 培地Ａに懸濁した３×１０6 個／ｍｌのラット腹腔マク
ロファージ（試験例１と同一の方法により調製）を、市
販の１２穴プレートに１ｍｌずつ播種し、３７℃で２時
間培養し、プレートの底面に接着させた。このマクロフ
ァージをＰＢＳで３回洗浄した後、１００μｇ／ｍｌの
アセチル化ＬＤＬおよび種々の濃度の試料を含む培地Ａ
１mlに入れ替え、３７℃で１６時間培養した。０．２％
のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳおよび含まないＰＢ
Ｓを用いて十分洗浄し、細胞内の脂質を抽出し、総コレ
ステロールと遊離コレステロールを酵素法［ジャーナル
・オブ・リピッド・リサーチ(Journal of Lipid Resear
ch) 、第１９巻、第５１４ページ、１９７８年］により
測定し、その差からコレステロールエステルの量を算出
した。 ３）試験結果 この試験の結果は、図２に示すとおりである。図２は、
マクロファージ内に蓄積したコレステロールエステルと
試料濃度との関係を示し、縦軸および横軸は、それぞれ
対照に対するマクロファージ内に蓄積したコレステロー
ルエステルの百分率、および試料濃度を示す。
κ−カゼインの加水分解物についてもほぼ同様の結果が
得られた。 （試験例２）この試験は、各種カゼインがマクロファー
ジの泡沫化に与える影響を調べるために行った。 １）試料 ウシα−カゼイン（シグマ社製。αs −カゼイン含量
約８５％） ウシβ−カゼイン（シグマ社製） ウシκ−カゼイン（シグマ社製） 前記のウシκ−カゼインをビオプラーゼ（ナガセ生
化学工業社製）で１０分間加水分解したウシκ−カゼイ
ン加水分解物 前記と同一のα−カゼイン、β−カゼインおよ
びκ−カゼインを、５０：３５：１５の比率（牛乳のカ
ゼイン中の比率）で混合した混合物 ウシ全カゼイン画分［牛乳から常法（津郷友吉著、
「牛乳の化学」、第７ページ、地球社、１９７５年）に
より調製］ ２）試験方法 培地Ａに懸濁した３×１０6 個／ｍｌのラット腹腔マク
ロファージ（試験例１と同一の方法により調製）を、市
販の１２穴プレートに１ｍｌずつ播種し、３７℃で２時
間培養し、プレートの底面に接着させた。このマクロフ
ァージをＰＢＳで３回洗浄した後、１００μｇ／ｍｌの
アセチル化ＬＤＬおよび種々の濃度の試料を含む培地Ａ
１mlに入れ替え、３７℃で１６時間培養した。０．２％
のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳおよび含まないＰＢ
Ｓを用いて十分洗浄し、細胞内の脂質を抽出し、総コレ
ステロールと遊離コレステロールを酵素法［ジャーナル
・オブ・リピッド・リサーチ(Journal of Lipid Resear
ch) 、第１９巻、第５１４ページ、１９７８年］により
測定し、その差からコレステロールエステルの量を算出
した。 ３）試験結果 この試験の結果は、図２に示すとおりである。図２は、
マクロファージ内に蓄積したコレステロールエステルと
試料濃度との関係を示し、縦軸および横軸は、それぞれ
対照に対するマクロファージ内に蓄積したコレステロー
ルエステルの百分率、および試料濃度を示す。
【００２１】図２から明らかなように、α−カゼイン、
β−カゼインの作用に比較して、κ−カゼインはマクロ
ファージへのコレステロールエステルの蓄積を顕著に抑
制した。また、κ−カゼインの加水分解物にもこの作用
が認められた。すなわち、κ−カゼインおよびその加水
分解物は、変性ＬＤＬによるマクロファージの泡沫化を
特異的に抑制することが明らかになった。
β−カゼインの作用に比較して、κ−カゼインはマクロ
ファージへのコレステロールエステルの蓄積を顕著に抑
制した。また、κ−カゼインの加水分解物にもこの作用
が認められた。すなわち、κ−カゼインおよびその加水
分解物は、変性ＬＤＬによるマクロファージの泡沫化を
特異的に抑制することが明らかになった。
【００２２】一方、全カゼイン画分ならびにα−カゼイ
ン、β−カゼインおよびκ−カゼインの混合物にもマク
ロファージへのコレステロールエステルの蓄積を抑制す
る作用が認められたが、これらの作用はκ−カゼインま
たはその加水分解物を単独で用いた場合と比較して極め
て弱いものであった。すなわち、変性ＬＤＬによるマク
ロファージの泡沫化を抑制する作用は、これらに含有さ
れるκ−カゼインの割合（約１５％）から予測される作
用よりも弱く、全カゼイン画分からκ−カゼインを精製
して用いることによりその活性が顕著に上昇することが
明らかになった。κ−カゼインはαs −カゼインおよび
β−カゼインと会合してカゼインミセルを形成している
ことが知られており（津郷友吉著、「牛乳の化学」、第
２０ページ、地球社、１９７５年）、この会合によって
κ−カゼインの作用が抑制されているものと推測され
る。
ン、β−カゼインおよびκ−カゼインの混合物にもマク
ロファージへのコレステロールエステルの蓄積を抑制す
る作用が認められたが、これらの作用はκ−カゼインま
たはその加水分解物を単独で用いた場合と比較して極め
て弱いものであった。すなわち、変性ＬＤＬによるマク
ロファージの泡沫化を抑制する作用は、これらに含有さ
れるκ−カゼインの割合（約１５％）から予測される作
用よりも弱く、全カゼイン画分からκ−カゼインを精製
して用いることによりその活性が顕著に上昇することが
明らかになった。κ−カゼインはαs −カゼインおよび
β−カゼインと会合してカゼインミセルを形成している
ことが知られており（津郷友吉著、「牛乳の化学」、第
２０ページ、地球社、１９７５年）、この会合によって
κ−カゼインの作用が抑制されているものと推測され
る。
【００２３】なお、マクロファージを泡沫化させる変性
ＬＤＬとして、アセチル化ＬＤＬの代わりに常法［ジャ
ーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション(J
ournal of Clinical Investigation) 、第８１巻、第７
２０ページ、１９８８年］により調製した酸化ＬＤＬを
用いて同様の試験を行ったが、ほぼ同様の結果が得られ
た。 （試験例３）この試験は、κ−カゼインおよびκ−カゼ
インの加水分解物の急性毒性を調べるために行った。 １）試験動物 ６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラットの両性（日本チャール
ス・リバー社から購入）を、無作為にそれぞれ８群（１
群５匹）に分けた。 ２）試験方法 ウシκ−カゼイン（試験例１と同一のもの）およびウシ
κ−カゼイン（試験例１と同一のもの）をビオプラーゼ
（ナガセ生化学工業社製）で１０分間加水分解して調製
した加水分解物を注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、
体重１ｋｇ当り１０００、２０００および４０００ｍｇ
の割合で、金属製玉付き針を用いて単回強制経口投与
し、急性毒性を試験した。 ３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなようにウシκ−カゼインおよびウシκ−カゼイ
ン加水分解物を投与した全例ともに死亡例は認められな
かった。従って、ウシκ−カゼインおよびウシκ−カゼ
イン加水分解物のＬＤ50はともに４０００ｍｇ／ｋｇ以
上であった。なお、κ−カゼインおよびκ−カゼイン加
水分解物の種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果
が得られた。
ＬＤＬとして、アセチル化ＬＤＬの代わりに常法［ジャ
ーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション(J
ournal of Clinical Investigation) 、第８１巻、第７
２０ページ、１９８８年］により調製した酸化ＬＤＬを
用いて同様の試験を行ったが、ほぼ同様の結果が得られ
た。 （試験例３）この試験は、κ−カゼインおよびκ−カゼ
インの加水分解物の急性毒性を調べるために行った。 １）試験動物 ６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラットの両性（日本チャール
ス・リバー社から購入）を、無作為にそれぞれ８群（１
群５匹）に分けた。 ２）試験方法 ウシκ−カゼイン（試験例１と同一のもの）およびウシ
κ−カゼイン（試験例１と同一のもの）をビオプラーゼ
（ナガセ生化学工業社製）で１０分間加水分解して調製
した加水分解物を注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、
体重１ｋｇ当り１０００、２０００および４０００ｍｇ
の割合で、金属製玉付き針を用いて単回強制経口投与
し、急性毒性を試験した。 ３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなようにウシκ−カゼインおよびウシκ−カゼイ
ン加水分解物を投与した全例ともに死亡例は認められな
かった。従って、ウシκ−カゼインおよびウシκ−カゼ
イン加水分解物のＬＤ50はともに４０００ｍｇ／ｋｇ以
上であった。なお、κ−カゼインおよびκ−カゼイン加
水分解物の種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果
が得られた。
【００２４】
【表１】
【００２５】次に実施例を示してこの発明をさらに詳細
かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定さ
れるものではない。
かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定さ
れるものではない。
【００２６】
実施例１ １錠当り次の組成からなる錠剤の動脈硬化防止剤を調製
した。 ウシκ−カゼイン加水分解物 ２０．０（ｍｇ） ［ウシκ−カゼイン（試験例１と同一のもの）をビオプラーゼ（ナガセ生化学 工業社製）で１０分間加水分解して調製］ 乳糖一水和物（和光純薬工業社製） ３０．０ トウモロコシデンプン（和光純薬工業社製） １９．８ 結晶セルロース（旭化成工業社製） ２８．０ 珪酸マグネシウム五水和物（和光純薬工業社製） ２．０ ステアリン酸マグネシウム（和光純薬工業社製） ０．２ ウシκ−カゼイン加水分解物、乳糖一水和物、トウモロ
コシデンプンおよび結晶セルロースの混合物に滅菌精製
水を適宜添加しながら均一に混練し、５０℃で３時間乾
燥させ、得られた乾燥物に珪酸マグネシウム五水和物お
よびステアリン酸マグネシウムを添加して混合し、常法
により打錠機で打錠した。 実施例２ 注射用水（大塚製薬社製）１ｍｌに、公知の方法［ジャ
ーナル・オブ・バイオケミストリー(Journal of Bioche
mistry) 、第９０巻、第１００５ページ、１９８１年）
で精製したヒトκ−カゼイン１０ｍｇおよびＤ−マンニ
ット（和光純薬工業社製）４９．５ｍｇの割合で溶解
し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社製）の水溶液で
ｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１０ｍｌ
ずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注射用の凍結乾
燥動脈硬化防止剤を調製した。 実施例３ 精製したウシκ−カゼイン（試験例１と同一のもの）５
０部（重量。以下同じ）、このウシκ−カゼインをレン
ニン（シグマ社製）で３０分間加水分解して得られた加
水分解物３０部に、コーンスターチ（松谷化学工業社
製）５０部、しょ糖（東洋精糖社製）５０部およびＬ−
アスコルビン酸ナトリウム（日本ロッシュ社製）２０部
の割合の原料を充分に混合し、混合物を２ｇずつ袋に詰
め、経口摂取用の粉末状動脈硬化防止剤を調製した。
した。 ウシκ−カゼイン加水分解物 ２０．０（ｍｇ） ［ウシκ−カゼイン（試験例１と同一のもの）をビオプラーゼ（ナガセ生化学 工業社製）で１０分間加水分解して調製］ 乳糖一水和物（和光純薬工業社製） ３０．０ トウモロコシデンプン（和光純薬工業社製） １９．８ 結晶セルロース（旭化成工業社製） ２８．０ 珪酸マグネシウム五水和物（和光純薬工業社製） ２．０ ステアリン酸マグネシウム（和光純薬工業社製） ０．２ ウシκ−カゼイン加水分解物、乳糖一水和物、トウモロ
コシデンプンおよび結晶セルロースの混合物に滅菌精製
水を適宜添加しながら均一に混練し、５０℃で３時間乾
燥させ、得られた乾燥物に珪酸マグネシウム五水和物お
よびステアリン酸マグネシウムを添加して混合し、常法
により打錠機で打錠した。 実施例２ 注射用水（大塚製薬社製）１ｍｌに、公知の方法［ジャ
ーナル・オブ・バイオケミストリー(Journal of Bioche
mistry) 、第９０巻、第１００５ページ、１９８１年）
で精製したヒトκ−カゼイン１０ｍｇおよびＤ−マンニ
ット（和光純薬工業社製）４９．５ｍｇの割合で溶解
し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社製）の水溶液で
ｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１０ｍｌ
ずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注射用の凍結乾
燥動脈硬化防止剤を調製した。 実施例３ 精製したウシκ−カゼイン（試験例１と同一のもの）５
０部（重量。以下同じ）、このウシκ−カゼインをレン
ニン（シグマ社製）で３０分間加水分解して得られた加
水分解物３０部に、コーンスターチ（松谷化学工業社
製）５０部、しょ糖（東洋精糖社製）５０部およびＬ−
アスコルビン酸ナトリウム（日本ロッシュ社製）２０部
の割合の原料を充分に混合し、混合物を２ｇずつ袋に詰
め、経口摂取用の粉末状動脈硬化防止剤を調製した。
【００２７】
【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この発明に
よって、変性ＬＤＬのマクロファージへの取り込みを特
異的に阻害することによりマクロファージの泡沫化を抑
制する動脈硬化防止剤が提供される。これによって、動
脈硬化症の効果的な予防またはその進行防止が可能とな
る。
よって、変性ＬＤＬのマクロファージへの取り込みを特
異的に阻害することによりマクロファージの泡沫化を抑
制する動脈硬化防止剤が提供される。これによって、動
脈硬化症の効果的な予防またはその進行防止が可能とな
る。
【図１】125 Ｉ−アセチル化ＬＤＬのマクロファージへ
の結合と試料濃度との関係を示す。
の結合と試料濃度との関係を示す。
【図２】マクロファージ内に蓄積したコレステロールエ
ステルと試料濃度との関係を示す。
ステルと試料濃度との関係を示す。
Claims (3)
- 【請求項１】 κ−カゼインを有効成分とする動脈硬化
防止剤。 - 【請求項２】 κ−カゼインの加水分解物を有効成分と
する動脈硬化防止剤。 - 【請求項３】 κ−カゼインおよびκ−カゼインの加水
分解物を有効成分とする動脈硬化防止剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21996394A JP3805804B2 (ja) | 1994-09-14 | 1994-09-14 | 動脈硬化防止剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21996394A JP3805804B2 (ja) | 1994-09-14 | 1994-09-14 | 動脈硬化防止剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0881388A true JPH0881388A (ja) | 1996-03-26 |
| JP3805804B2 JP3805804B2 (ja) | 2006-08-09 |
Family
ID=16743785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21996394A Expired - Fee Related JP3805804B2 (ja) | 1994-09-14 | 1994-09-14 | 動脈硬化防止剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3805804B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004050118A1 (ja) * | 2002-11-29 | 2004-06-17 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | システインプロテアーゼ阻害剤 |
| JPWO2007094340A1 (ja) * | 2006-02-14 | 2009-07-09 | カルピス株式会社 | 血管拡張剤 |
| JPWO2007094342A1 (ja) * | 2006-02-14 | 2009-07-09 | カルピス株式会社 | 動脈硬化予防剤、血管内膜の肥厚抑制剤及び血管内皮機能改善剤 |
| CN106535916A (zh) * | 2014-06-03 | 2017-03-22 | 朝日可尔必思健康株式会社 | 片剂型速释性制剂、片剂用组合物及片剂型速释性制剂的制造方法 |
| US20230040594A1 (en) * | 2021-07-13 | 2023-02-09 | Nanjing Maternity And Child Health Care Hospital | Milk-derived polypeptide derivative, composition and method for preventing and treating obesity |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2749717A1 (es) * | 2018-09-21 | 2020-03-23 | Biopeptide S L | Composición y sus usos |
-
1994
- 1994-09-14 JP JP21996394A patent/JP3805804B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004050118A1 (ja) * | 2002-11-29 | 2004-06-17 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | システインプロテアーゼ阻害剤 |
| JPWO2007094340A1 (ja) * | 2006-02-14 | 2009-07-09 | カルピス株式会社 | 血管拡張剤 |
| JPWO2007094342A1 (ja) * | 2006-02-14 | 2009-07-09 | カルピス株式会社 | 動脈硬化予防剤、血管内膜の肥厚抑制剤及び血管内皮機能改善剤 |
| JP5642346B2 (ja) * | 2006-02-14 | 2014-12-17 | カルピス株式会社 | 動脈硬化予防剤、血管内膜の肥厚抑制剤及び血管内皮の収縮・拡張機能改善剤 |
| CN106535916A (zh) * | 2014-06-03 | 2017-03-22 | 朝日可尔必思健康株式会社 | 片剂型速释性制剂、片剂用组合物及片剂型速释性制剂的制造方法 |
| US20230040594A1 (en) * | 2021-07-13 | 2023-02-09 | Nanjing Maternity And Child Health Care Hospital | Milk-derived polypeptide derivative, composition and method for preventing and treating obesity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3805804B2 (ja) | 2006-08-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bucki et al. | Plasma gelsolin: function, prognostic value, and potential therapeutic use | |
| JP2960947B2 (ja) | 脂質分解酵素阻害剤 | |
| IL140089A (en) | Baby formula with added insulin | |
| CN106535915B (zh) | 生长素释放肽分泌促进剂 | |
| Milligan et al. | Prolidase deficiency: a case report and literature review | |
| Lazarow et al. | Presence of the peroxisomal 22-kDa integral membrane protein in the liver of a person lacking recognizable peroxisomes (Zellweger syndrome). | |
| US9283269B2 (en) | Method for reducing the allergenicity of animal dander | |
| Andersen et al. | Biotinidase deficiency: two cases of very early presentation | |
| JPH0881388A (ja) | 動脈硬化防止剤 | |
| JP2004099563A (ja) | 栄養組成物 | |
| NZ590349A (en) | Use of a glycomacropeptide composition for the treatment or prevention of gout | |
| JP3497195B2 (ja) | 変性低密度リポタンパク質結合剤 | |
| US5272166A (en) | Method for selective reduction of Lp(a) | |
| Farrell et al. | Primary hyperoxaluria in an adult with renal failure, livedo reticularis, retinopathy, and peripheral neuropathy | |
| EA002435B1 (ru) | Способ снижения уровня липопротеина (а) в сыворотке или в плазме крови млекопитающих | |
| JPH06165655A (ja) | コレステロール低減用組成物 | |
| KR20250127133A (ko) | 면역 기능 유지 또는 개선용 조성물 | |
| Paluzzi et al. | A prospective randomized study of the optimal source of nonprotein calories in total parenteral nutrition | |
| Collins et al. | Hemoptysis and hematuria in sprue | |
| EP1156795A1 (en) | Use of succinic acid or salts thereof and method of treating insulin resistance | |
| JP3029902B2 (ja) | 血清脂質増加剤 | |
| JPH11209303A (ja) | 腎不全治療薬及び腎不全患者用食品 | |
| US7235590B2 (en) | Use of treosulfan and derivatives thereof for treating multiple sclerosis | |
| JPWO2007001006A1 (ja) | 重金属障害改善剤およびそれを含有する医薬組成物、食品、化粧料 | |
| JP5060136B2 (ja) | 血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051018 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051216 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060117 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060320 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20060418 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20060511 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090519 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100519 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110519 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110519 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120519 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130519 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140519 Year of fee payment: 8 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |