JPH0889292A - キサンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法 - Google Patents
キサンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法Info
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 キサンチンデヒドロゲナーゼを含有する組成
物に尿酸を添加することを特徴とするキサンチンデヒド
ロゲナーゼの安定化方法、及び該安定化方法を用いたキ
サンチンデヒドロゲナーゼ含有測定試薬組成物である。 【効果】 キサンチンデヒドロゲナーゼ含有組成物にお
いて尿酸を添加することにより、キサンチンデヒドロゲ
ナーゼを安定化させることができ、従ってヒポキサンチ
ン、キサンチン、またはこれらを生成する反応系に係わ
る基質もしくは酵素活性の測定のためのより安定で経済
的な試薬を得ることができた。
物に尿酸を添加することを特徴とするキサンチンデヒド
ロゲナーゼの安定化方法、及び該安定化方法を用いたキ
サンチンデヒドロゲナーゼ含有測定試薬組成物である。 【効果】 キサンチンデヒドロゲナーゼ含有組成物にお
いて尿酸を添加することにより、キサンチンデヒドロゲ
ナーゼを安定化させることができ、従ってヒポキサンチ
ン、キサンチン、またはこれらを生成する反応系に係わ
る基質もしくは酵素活性の測定のためのより安定で経済
的な試薬を得ることができた。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、キサンチンデヒドロゲ
ナーゼの安定化方法および無機リン等測定用組成物、な
らびにアデノシンデアミナーゼ等酵素活性測定用組成物
への安定化方法、ならびにキサンチンデヒドロゲナーゼ
安定化組成物に関する。
ナーゼの安定化方法および無機リン等測定用組成物、な
らびにアデノシンデアミナーゼ等酵素活性測定用組成物
への安定化方法、ならびにキサンチンデヒドロゲナーゼ
安定化組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】キサンチンデヒドロゲナーゼは、例えば
酵素番号ＥＣ １．２．１．３７にあるように、補酵
素ＮＡＤの存在下にヒポキサンチンをキサンチンに、キ
サンチンを尿酸に転換する２段階の反応を触媒する酵素
である。
酵素番号ＥＣ １．２．１．３７にあるように、補酵
素ＮＡＤの存在下にヒポキサンチンをキサンチンに、キ
サンチンを尿酸に転換する２段階の反応を触媒する酵素
である。
【０００３】
【化１】 本酵素を用いれば、ヒポキサンチン、キサンチンあるい
はこれらを生成する反応系により生成されたヒポキサン
チン、キサンチンを、ＮＡＤの存在下に還元型ＮＡＤを
測定することにより、試料中に存在、あるいは生成され
たヒポキサンチンまたはキサンチン、あるいはこれらの
基質を生成する反応系に係わる基質もしくは酵素活性を
定量できる（特開昭６２−３２９００号公報）。
はこれらを生成する反応系により生成されたヒポキサン
チン、キサンチンを、ＮＡＤの存在下に還元型ＮＡＤを
測定することにより、試料中に存在、あるいは生成され
たヒポキサンチンまたはキサンチン、あるいはこれらの
基質を生成する反応系に係わる基質もしくは酵素活性を
定量できる（特開昭６２−３２９００号公報）。
【０００４】例えば、ヒポキサンチンおよび／またはキ
サンチンを生成する反応系に係わる基質としては、アデ
ノシン、アデニン、イノシン、キサントシン、グアノシ
ン、グアニン、、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、イノ
シン一リン酸（ＡＭＰ）、イノシンと無機リン等が、酵
素としてはアデノシンデアミナーゼ（ＥＣ ３．５．
４．４）、グアニンデアミナーゼ（ＥＣ ３．５．４．
３）、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ ２．
４．２．１）、５’−ヌクレオチダーゼ（ＥＣ３．１．
３．３１）等が知られており、これら各成分を対象とし
て様々な分野で測定されている。
サンチンを生成する反応系に係わる基質としては、アデ
ノシン、アデニン、イノシン、キサントシン、グアノシ
ン、グアニン、、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、イノ
シン一リン酸（ＡＭＰ）、イノシンと無機リン等が、酵
素としてはアデノシンデアミナーゼ（ＥＣ ３．５．
４．４）、グアニンデアミナーゼ（ＥＣ ３．５．４．
３）、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ ２．
４．２．１）、５’−ヌクレオチダーゼ（ＥＣ３．１．
３．３１）等が知られており、これら各成分を対象とし
て様々な分野で測定されている。
【０００５】これらの項目のあるものは、臨床診断や、
食肉や魚介類の鮮度検査として有用であり、従って、本
酵素のこれらの測定試薬成分としての実用化も望まれて
いる。例えば、食肉や魚介類の鮮度判定にアデノシン三
リン酸（ＡＴＰ）の分解生成物の測定が用いられてお
り、そのための指標として魚類鮮度判定恒数（Ｋ値）が
提案されている。このＫ値は分子をイノシンとヒポキサ
ンチンとし、分母をＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＩＭＰ、
イノシン、ヒポキサンチンの合計量としたときの百分率
で表されるものである。ヒポキサンチンは本酵素の基質
であり、イノシンは下記に示すとおり、無機リンの存在
下にプリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ ２．
４．２．１）の反応によりヒポキサンチンに転換するた
め、いずれも本酵素により定量することができる。
食肉や魚介類の鮮度検査として有用であり、従って、本
酵素のこれらの測定試薬成分としての実用化も望まれて
いる。例えば、食肉や魚介類の鮮度判定にアデノシン三
リン酸（ＡＴＰ）の分解生成物の測定が用いられてお
り、そのための指標として魚類鮮度判定恒数（Ｋ値）が
提案されている。このＫ値は分子をイノシンとヒポキサ
ンチンとし、分母をＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＩＭＰ、
イノシン、ヒポキサンチンの合計量としたときの百分率
で表されるものである。ヒポキサンチンは本酵素の基質
であり、イノシンは下記に示すとおり、無機リンの存在
下にプリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ ２．
４．２．１）の反応によりヒポキサンチンに転換するた
め、いずれも本酵素により定量することができる。
【０００６】
【化２】 また、臨床診断としては、例えば、グアニンデアミナー
ゼやアデノシンデアミナーゼは肝傷害の診断、またアデ
ノシンデアミナーゼは更に、その欠乏症で免疫的な不全
を伴うことが知られている。これらの酵素は、それぞれ
以下の、単独あるいは共役酵素との組み合わせでキサン
チンまたはヒポキサンチンを生成することができ、本酵
素を用い酵素活性を測定することができる。 （グアニンデアミナーゼの場合）
ゼやアデノシンデアミナーゼは肝傷害の診断、またアデ
ノシンデアミナーゼは更に、その欠乏症で免疫的な不全
を伴うことが知られている。これらの酵素は、それぞれ
以下の、単独あるいは共役酵素との組み合わせでキサン
チンまたはヒポキサンチンを生成することができ、本酵
素を用い酵素活性を測定することができる。 （グアニンデアミナーゼの場合）
【０００７】
【化３】 （アデノシンデアミナーゼの場合）
【０００８】
【化４】 これら生成したヒポキサンチンやキサンチンは、一般的
には入手の容易なキサンチンオキシダーゼと組み合わせ
て、生成された過酸化水素として測定されることが多
く、その測定試薬も市販されている。しかしながら、オ
キシダーゼにより生成する過酸化水素の検出系は本質的
に還元物質の影響を受けることから、デヒドロゲナーゼ
を用いた測定系が望まれている。
には入手の容易なキサンチンオキシダーゼと組み合わせ
て、生成された過酸化水素として測定されることが多
く、その測定試薬も市販されている。しかしながら、オ
キシダーゼにより生成する過酸化水素の検出系は本質的
に還元物質の影響を受けることから、デヒドロゲナーゼ
を用いた測定系が望まれている。
【０００９】例えば、キサンチンデヒドロゲナーゼを用
いた無機リン測定法に関して、プリンヌクレオシドホス
ホリラーゼと組み合わせた測定法が報告されている（臨
床化学、第２２巻補冊２号、ｐ６４（１９９３））。上
記のように、キサンチンデヒドロゲナーゼを用いた種々
の物質や酵素活性の測定法が報告されているが、酵素の
供給面や安定性等の面から実用化されたものはない。
いた無機リン測定法に関して、プリンヌクレオシドホス
ホリラーゼと組み合わせた測定法が報告されている（臨
床化学、第２２巻補冊２号、ｐ６４（１９９３））。上
記のように、キサンチンデヒドロゲナーゼを用いた種々
の物質や酵素活性の測定法が報告されているが、酵素の
供給面や安定性等の面から実用化されたものはない。
【００１０】一般に、酵素を用いた分析試薬は、含まれ
る酵素がどれだけ安定であるかによりその使用有効期間
が決まる。しかしながら、安定性の劣る酵素を使用せざ
るを得ない場合も多々あり、その場合は保存中の酵素活
性低下を見込んで多量の酵素を使用する必要があり経済
的であるといえない。そのため酵素の安定化は、試薬開
発の成否に大きくかかわるものである。とりわけ、近
年、検査室の合理化、省力化のために即使用可能な無調
製試薬の需要が増大しており、より安定な酵素が求めら
れている。
る酵素がどれだけ安定であるかによりその使用有効期間
が決まる。しかしながら、安定性の劣る酵素を使用せざ
るを得ない場合も多々あり、その場合は保存中の酵素活
性低下を見込んで多量の酵素を使用する必要があり経済
的であるといえない。そのため酵素の安定化は、試薬開
発の成否に大きくかかわるものである。とりわけ、近
年、検査室の合理化、省力化のために即使用可能な無調
製試薬の需要が増大しており、より安定な酵素が求めら
れている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、キサ
ンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法及びヒポキサンチ
ンまたはキサンチン、もしくはヒポキサンチンまたはキ
サンチンを生成する反応系に係わる酵素の活性あるいは
その基質の測定のための試薬組成物における、安定化方
法に関するものであり、酵素取得時の経済性や測定用試
薬組成物の経済性を高めることができる。更に、本発明
は、安定化されたキサンチンデヒドロゲナーゼ含有組成
物を提供することである。
ンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法及びヒポキサンチ
ンまたはキサンチン、もしくはヒポキサンチンまたはキ
サンチンを生成する反応系に係わる酵素の活性あるいは
その基質の測定のための試薬組成物における、安定化方
法に関するものであり、酵素取得時の経済性や測定用試
薬組成物の経済性を高めることができる。更に、本発明
は、安定化されたキサンチンデヒドロゲナーゼ含有組成
物を提供することである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】キサンチンデヒドロゲナ
ーゼに関して、これまでに種々の酵素活性阻害剤が報告
されている。例えば、シアン化カリウム（Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２−２０
（１９７５）、種々のＳＨ試薬（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２−２０（１９７
５）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５３（８）、２６
０４−２６１４（１９７８））、アデニン（Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２−２０
（１９７５）、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、８６、４５−５
３（１９７９））、キサンチン、ヒポキサンチン、プテ
リン（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５３（８）、２６
０４−２６１４（１９７８））等が挙げられる。従っ
て、上記各種阻害物質に対し、一般的な安定化剤として
ＳＨ基の保護剤、例えばメルカプトエタノール、ジチオ
スレイトール等が挙げられる。
ーゼに関して、これまでに種々の酵素活性阻害剤が報告
されている。例えば、シアン化カリウム（Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２−２０
（１９７５）、種々のＳＨ試薬（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２−２０（１９７
５）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５３（８）、２６
０４−２６１４（１９７８））、アデニン（Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２−２０
（１９７５）、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、８６、４５−５
３（１９７９））、キサンチン、ヒポキサンチン、プテ
リン（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５３（８）、２６
０４−２６１４（１９７８））等が挙げられる。従っ
て、上記各種阻害物質に対し、一般的な安定化剤として
ＳＨ基の保護剤、例えばメルカプトエタノール、ジチオ
スレイトール等が挙げられる。
【００１３】一方、尿酸は本酵素の最終反応生成物であ
るため、ある起源の酵素は尿酸により生成物阻害を受け
ることが報告されている。例えば、ストレプトマイセス
シアノゲナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｙａｎ
ｏｇｅｎｕｓ）由来の酵素は０．５ｍＭの尿酸で酵素活
性が尿酸非存在においての約６３％に低下する（Ｊ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．、８６、４５−５３（１９７９））。ま
た、ニュウロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ
ｃｒａｓｓａ）由来の酵素は、蛍光基質として２−ア
ミノ−４−ヒドロキシプテリジンを用い、３５μＭの尿
酸で活性が半分になるとの報告もある（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．、２５３（８）、２６０４（１９７８））。
るため、ある起源の酵素は尿酸により生成物阻害を受け
ることが報告されている。例えば、ストレプトマイセス
シアノゲナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｙａｎ
ｏｇｅｎｕｓ）由来の酵素は０．５ｍＭの尿酸で酵素活
性が尿酸非存在においての約６３％に低下する（Ｊ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．、８６、４５−５３（１９７９））。ま
た、ニュウロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ
ｃｒａｓｓａ）由来の酵素は、蛍光基質として２−ア
ミノ−４−ヒドロキシプテリジンを用い、３５μＭの尿
酸で活性が半分になるとの報告もある（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．、２５３（８）、２６０４（１９７８））。
【００１４】一方、シュウドモナス・アシドボランス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｃｉｄｖｏｒａｎｓ）由
来酵素については、尿酸による阻害は殆ど受けない（Ｂ
ｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１
２−２０（１９７５））ことが報告されている。更に、
グラム染色＋、ＫＯＨ反応−、運動性＋、オキシダーゼ
生産能＋、カタラーゼ生産能−、キノン系Ｑ−１０の生
理学的特徴を有するＢａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１９７
（１０）株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６６４；特開平１−１
３８３７号公報）由来のキサンチンデヒドロゲナーゼ−
Ｔについては、１ｍＭ尿酸存在下で約１０％の活性阻害
が認められた。
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｃｉｄｖｏｒａｎｓ）由
来酵素については、尿酸による阻害は殆ど受けない（Ｂ
ｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１
２−２０（１９７５））ことが報告されている。更に、
グラム染色＋、ＫＯＨ反応−、運動性＋、オキシダーゼ
生産能＋、カタラーゼ生産能−、キノン系Ｑ−１０の生
理学的特徴を有するＢａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１９７
（１０）株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６６４；特開平１−１
３８３７号公報）由来のキサンチンデヒドロゲナーゼ−
Ｔについては、１ｍＭ尿酸存在下で約１０％の活性阻害
が認められた。
【００１５】このように、尿酸は、キサンチンデヒドロ
ゲナーゼにとって一般的には阻害剤として働く場合が多
々あった。ところが本発明者は、意外にも、この阻害作
用を有するとされていた尿酸がキサンチンデヒドロゲナ
ーゼの安定化剤として著しい作用を示すことを見いだし
たのである。
ゲナーゼにとって一般的には阻害剤として働く場合が多
々あった。ところが本発明者は、意外にも、この阻害作
用を有するとされていた尿酸がキサンチンデヒドロゲナ
ーゼの安定化剤として著しい作用を示すことを見いだし
たのである。
【００１６】すなわち本発明者は、キサンチンデヒドロ
ゲナーゼを用いた測定系について鋭意研究を重ねた結
果、その過程で、尿酸によりその安定性が著しく向上す
ることを見出し、本発明のキサンチンデヒドロゲナーゼ
の安定化方法を完成させるに至った。更に、本方法に、
キレート能を有する化合物を共存させることにより一層
の安定化が計れることも併せて見出した。
ゲナーゼを用いた測定系について鋭意研究を重ねた結
果、その過程で、尿酸によりその安定性が著しく向上す
ることを見出し、本発明のキサンチンデヒドロゲナーゼ
の安定化方法を完成させるに至った。更に、本方法に、
キレート能を有する化合物を共存させることにより一層
の安定化が計れることも併せて見出した。
【００１７】本発明は、上記の知見に基づいて完成され
たもので、少なくともキサンチンデヒドロゲナーゼを含
有する組成物に尿酸を添加することを特徴とするキサン
チンデヒドロゲナーゼの安定化方法であり、さらに０．
２〜１００ｍＭのキレート能を有する化合物を添加して
なる安定化方法であり、少なくともキサンチンデヒドロ
ゲナーゼを含有する組成物において尿酸を安定化剤とし
て含有することを特徴とするキサンチンデヒドロゲナー
ゼの安定化組成物であり、好ましくはさらにキレート能
を有する化合物を添加してなる安定化組成物である。
たもので、少なくともキサンチンデヒドロゲナーゼを含
有する組成物に尿酸を添加することを特徴とするキサン
チンデヒドロゲナーゼの安定化方法であり、さらに０．
２〜１００ｍＭのキレート能を有する化合物を添加して
なる安定化方法であり、少なくともキサンチンデヒドロ
ゲナーゼを含有する組成物において尿酸を安定化剤とし
て含有することを特徴とするキサンチンデヒドロゲナー
ゼの安定化組成物であり、好ましくはさらにキレート能
を有する化合物を添加してなる安定化組成物である。
【００１８】さらに本発明は、ヒポキサンチンまたはキ
サンチン、もしくはヒポキサンチンまたはキサンチンを
生成する反応系に係わる基質もしくは酵素活性の測定の
ための試薬組成物における、安定化方法の応用、好適に
はキサンチンデヒドロゲナーゼ、プリンヌクレオシドホ
スホリラーゼ、反応に関与する基質および補酵素を含有
してなる組成である無機リン測定用試薬組成物を少なく
ともキサンチンデヒドロゲナーゼを含有する組成物とし
てなる安定化方法または安定化組成物である。
サンチン、もしくはヒポキサンチンまたはキサンチンを
生成する反応系に係わる基質もしくは酵素活性の測定の
ための試薬組成物における、安定化方法の応用、好適に
はキサンチンデヒドロゲナーゼ、プリンヌクレオシドホ
スホリラーゼ、反応に関与する基質および補酵素を含有
してなる組成である無機リン測定用試薬組成物を少なく
ともキサンチンデヒドロゲナーゼを含有する組成物とし
てなる安定化方法または安定化組成物である。
【００１９】本発明に用いることのできるキサンチンデ
ヒドロゲナーゼは、補酵素、例えばＮＡＤまたはその誘
導体、例えばニコチンアミドヒポキサンチンジヌクレオ
チド（デアミノＮＡＤ）、アセチルピリジンアデニンジ
ヌクレオチド（アセチルＮＡＤ）、チオニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（チオＮＡＤ）などの共存下
に、ヒポキサンチンまたはキサンチンに作用し、ヒポキ
サンチンの場合はキサンチンを経由し、尿酸を生成する
ものであれば特に限定はされない。また、キサンチンデ
ヒドロゲナーゼ活性を示せば、ＮＡＤの代わりにＮＡＤ
Ｐまたはその誘導体を補酵素として用いることもでき
る。
ヒドロゲナーゼは、補酵素、例えばＮＡＤまたはその誘
導体、例えばニコチンアミドヒポキサンチンジヌクレオ
チド（デアミノＮＡＤ）、アセチルピリジンアデニンジ
ヌクレオチド（アセチルＮＡＤ）、チオニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（チオＮＡＤ）などの共存下
に、ヒポキサンチンまたはキサンチンに作用し、ヒポキ
サンチンの場合はキサンチンを経由し、尿酸を生成する
ものであれば特に限定はされない。また、キサンチンデ
ヒドロゲナーゼ活性を示せば、ＮＡＤの代わりにＮＡＤ
Ｐまたはその誘導体を補酵素として用いることもでき
る。
【００２０】本キサンチンデヒドロゲナーゼの由来とし
ては、ラット肝、ニワトリ肝、種々の細菌等、種々報告
されている。このうち例えば、哺乳類由来の酵素は、Ｓ
Ｈ基の酸化により可逆的に酸素を電子受容体とするオキ
シダーゼ型に変換することが知られており、また鳥類で
はオキシダーゼ型へは変換されないものの微弱なオキシ
ダーゼ活性がはじめから存在する（医学のあゆみ、Ｖｏ
ｌ．１５４，Ｎｏ．１２，ｐ７５４，１９９０）。
ては、ラット肝、ニワトリ肝、種々の細菌等、種々報告
されている。このうち例えば、哺乳類由来の酵素は、Ｓ
Ｈ基の酸化により可逆的に酸素を電子受容体とするオキ
シダーゼ型に変換することが知られており、また鳥類で
はオキシダーゼ型へは変換されないものの微弱なオキシ
ダーゼ活性がはじめから存在する（医学のあゆみ、Ｖｏ
ｌ．１５４，Ｎｏ．１２，ｐ７５４，１９９０）。
【００２１】また、微生物由来の酵素についても種々報
告されており、例えばストレプトミセス属（Ａｇｒ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４１、１１６１（１９７７）；
Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，８６、４５，（１９７９））、
ミクロコッカス属（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４
２、４１０８（１９６７））、ノイロスポラ属（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５３、２６０４（１９７
８））、シュウドモナス属（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２（１９７５））、ノカ
ルディオイデス属あるいはノカルディア属（特開昭６１
−１７０３８６号公報）、Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１
９７（１０）（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６６４）（特開平６
−１１３８３７号公報）等のものが知られている。
告されており、例えばストレプトミセス属（Ａｇｒ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４１、１１６１（１９７７）；
Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，８６、４５，（１９７９））、
ミクロコッカス属（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４
２、４１０８（１９６７））、ノイロスポラ属（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５３、２６０４（１９７
８））、シュウドモナス属（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ａｃｔａ、４１０、１２（１９７５））、ノカ
ルディオイデス属あるいはノカルディア属（特開昭６１
−１７０３８６号公報）、Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１
９７（１０）（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６６４）（特開平６
−１１３８３７号公報）等のものが知られている。
【００２２】これらの中で、より好適な例としては、実
質的にキサンチンオキシダーゼ活性を示さないＢａｃｔ
ｅｒｉａ Ｎｏ．１９７（１０）（ＦＥＲＭ ＢＰ−３
６６４）由来のキサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔが挙げ
られる。このＢａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１９７（１０）
株は平成３年１２月３日に工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託されている。
質的にキサンチンオキシダーゼ活性を示さないＢａｃｔ
ｅｒｉａ Ｎｏ．１９７（１０）（ＦＥＲＭ ＢＰ−３
６６４）由来のキサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔが挙げ
られる。このＢａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１９７（１０）
株は平成３年１２月３日に工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託されている。
【００２３】更に本発明は、尿酸を含むキサンチンデヒ
ドロゲナーゼ含有組成物として、ヒポキサンチン、キサ
ンチン、イノシンおよび無機リンからなる群より選ばれ
た少なくともひとつの物質を測定するための測定用試薬
組成物または、アデノシンデアミナーゼ（ＥＣ ３．
５．４．４）、グアニンデアミナーゼ（ＥＣ ３．５．
４．３）および５'-ヌクレオチダーゼ（ＥＣ ３．１．
３．３１）からなる群より選ばれた少なくともひとつの
酵素活性測定用試薬組成物に本発明の安定化方法を応用
することである。
ドロゲナーゼ含有組成物として、ヒポキサンチン、キサ
ンチン、イノシンおよび無機リンからなる群より選ばれ
た少なくともひとつの物質を測定するための測定用試薬
組成物または、アデノシンデアミナーゼ（ＥＣ ３．
５．４．４）、グアニンデアミナーゼ（ＥＣ ３．５．
４．３）および５'-ヌクレオチダーゼ（ＥＣ ３．１．
３．３１）からなる群より選ばれた少なくともひとつの
酵素活性測定用試薬組成物に本発明の安定化方法を応用
することである。
【００２４】これらは、いずれもヒポキサンチン、キサ
ンチンもしくはこれらを生成する反応系に係わる成分で
あり、その反応系を以下に例示する。 （１）（デオキシ）イノシン、無機リンとプリンヌクレ
オシドホスホリラーゼの酵素反応系によって遊離、生成
するヒポキサンチンを定量するためのもので、イノシン
または無機リンの定量、またはプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼの活性測定のための反応系。 （デオキシ）イノシン＋無機リン→（デオキシ）リボ−
ス−１−リン酸＋ヒポキサンチン
ンチンもしくはこれらを生成する反応系に係わる成分で
あり、その反応系を以下に例示する。 （１）（デオキシ）イノシン、無機リンとプリンヌクレ
オシドホスホリラーゼの酵素反応系によって遊離、生成
するヒポキサンチンを定量するためのもので、イノシン
または無機リンの定量、またはプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼの活性測定のための反応系。 （デオキシ）イノシン＋無機リン→（デオキシ）リボ−
ス−１−リン酸＋ヒポキサンチン
【００２５】（２）グアニンとグアニンデアミナーゼの
酵素反応系によって遊離、生成するキサンチンを定量す
るためのもので、グアニンの定量、またはグアニンデア
ミナーゼの活性測定のための反応系。 グアニン＋Ｈ2 Ｏ→キサンチン＋ＮＨ3
酵素反応系によって遊離、生成するキサンチンを定量す
るためのもので、グアニンの定量、またはグアニンデア
ミナーゼの活性測定のための反応系。 グアニン＋Ｈ2 Ｏ→キサンチン＋ＮＨ3
【００２６】（３）（デオキシ）アデノシンとアデノシ
ンデアミナーゼの酵素反応系によって遊離、生成する
（デオキシ）イノシンを（１）の反応系により更にヒポ
キサンチンに転換しこれを定量するためのもので、アデ
ノシンの定量、またはアデノシンデアミナーゼの活性測
定のための反応系。 アデノシン＋Ｈ2 Ｏ→イノシン＋ＮＨ3
ンデアミナーゼの酵素反応系によって遊離、生成する
（デオキシ）イノシンを（１）の反応系により更にヒポ
キサンチンに転換しこれを定量するためのもので、アデ
ノシンの定量、またはアデノシンデアミナーゼの活性測
定のための反応系。 アデノシン＋Ｈ2 Ｏ→イノシン＋ＮＨ3
【００２７】（４）ＡＭＰ（ＩＭＰ）と５’−ヌクレオ
チダーゼの酵素反応系によって遊離、生成するアデノシ
ン（イノシン）、無機リンを、アデノシンの場合には
（３）の反応系により、イノシン、無機リンの場合には
（１）の反応系により更にヒポキサンチンに転換しこれ
を定量するためのもので、ＡＭＰ（ＩＭＰ）の定量、ま
たはイノシンを定量するためのもので、イノシンまたは
無機リンの定量、または５’−ヌクレオチダーゼの活性
測定のための反応系。 ＡＭＰ（ＩＭＰ）＋Ｈ2 Ｏ→アデノシン（イノシン）＋
無機リン
チダーゼの酵素反応系によって遊離、生成するアデノシ
ン（イノシン）、無機リンを、アデノシンの場合には
（３）の反応系により、イノシン、無機リンの場合には
（１）の反応系により更にヒポキサンチンに転換しこれ
を定量するためのもので、ＡＭＰ（ＩＭＰ）の定量、ま
たはイノシンを定量するためのもので、イノシンまたは
無機リンの定量、または５’−ヌクレオチダーゼの活性
測定のための反応系。 ＡＭＰ（ＩＭＰ）＋Ｈ2 Ｏ→アデノシン（イノシン）＋
無機リン
【００２８】これらの場合、測定される被検体としては
生体成分である場合が多い。その例としては、生体体
液、食品等が挙げられ、例えば、血漿や尿、食肉、魚介
類等が挙げられる。これら被検体は、必要に応じて抽出
操作を行った後、１μｌ〜５００μｌ、好ましくは３μ
ｌ〜１００μｌの適宜な量を用いればよい。
生体成分である場合が多い。その例としては、生体体
液、食品等が挙げられ、例えば、血漿や尿、食肉、魚介
類等が挙げられる。これら被検体は、必要に応じて抽出
操作を行った後、１μｌ〜５００μｌ、好ましくは３μ
ｌ〜１００μｌの適宜な量を用いればよい。
【００２９】本発明に用いられるキサンチンデヒドロゲ
ナーゼ含有組成物において、安定化剤として用いる尿酸
の濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、特に０．２ｍＭ〜４
ｍＭが好ましい。また、キサンチンデヒドロゲナーゼ量
は特に限定はされないが０．０２ｕ／ｍｌ〜１００ｕ／
ｍｌが特に好ましい。
ナーゼ含有組成物において、安定化剤として用いる尿酸
の濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、特に０．２ｍＭ〜４
ｍＭが好ましい。また、キサンチンデヒドロゲナーゼ量
は特に限定はされないが０．０２ｕ／ｍｌ〜１００ｕ／
ｍｌが特に好ましい。
【００３０】また、キレート能を有する化合物として、
少なくとも１以上のカルボン酸基、スルホン酸基、亜硫
酸基を有する有機化合物またはその水溶性塩類が挙げら
れる。さらに少なくとも１以上のカルボン酸基を有する
化合物としては、例えばポリカルボン酸化合物、ヒドロ
キシカルボン酸化合物、アミノカルボン酸化合物、カル
ボニルカルボン酸化合物またはモノカルボン酸化合物が
挙げられる。
少なくとも１以上のカルボン酸基、スルホン酸基、亜硫
酸基を有する有機化合物またはその水溶性塩類が挙げら
れる。さらに少なくとも１以上のカルボン酸基を有する
化合物としては、例えばポリカルボン酸化合物、ヒドロ
キシカルボン酸化合物、アミノカルボン酸化合物、カル
ボニルカルボン酸化合物またはモノカルボン酸化合物が
挙げられる。
【００３１】このような例えばモノカルボン酸、スルホ
ン酸、亜硫酸の各化合物や、ヒドロキシル基やアミノ
基、カルボニル基を有するカルボン酸、スルホン酸、亜
硫酸の各化合物、２以上のカルボン酸基、スルホン酸基
を有するポリアシド化合物やさらにヒドロキシル基、ア
ミノ基、カルボニル基の複数種を有する化合物は、例え
ばカルシウムイオンまたはマグネシウムイオンに対する
キレート能を測定することにより容易に本発明のキレー
ト能を有する化合物として確認し得る。
ン酸、亜硫酸の各化合物や、ヒドロキシル基やアミノ
基、カルボニル基を有するカルボン酸、スルホン酸、亜
硫酸の各化合物、２以上のカルボン酸基、スルホン酸基
を有するポリアシド化合物やさらにヒドロキシル基、ア
ミノ基、カルボニル基の複数種を有する化合物は、例え
ばカルシウムイオンまたはマグネシウムイオンに対する
キレート能を測定することにより容易に本発明のキレー
ト能を有する化合物として確認し得る。
【００３２】さらにこれらのキレート能を有する各種化
合物の群に関して例示すれば、シュウ酸、マロン酸、コ
ハク酸、グルタル酸、マレイン酸、グルタコン酸、アジ
ピン酸、フマル酸、アコニット酸、ピメリン酸、ｏ−、
ｍ−、ｐ−スルホ安息香酸、１，３−ジアミノプロパン
四酢酸（ＤＰＴＡ）、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸
（ＨＩＤＡ）、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、
エチレンジアミン二プロピオン酸（ＥＤＤＰ）、ヒドロ
キシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＥＤＴＡ−Ｏ
Ｈ）、グリコールエーテルジアミン四酢酸（ＧＥＤＴ
Ａ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トランス
ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジアミ
ノプロパン四酢酸（Ｍｅｔｈｙｌ−ＥＤＴＡ）、ジエチ
レントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン
ジオルトヒドロキシフェニル酢酸、トリエチレンテトラ
ミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、
ニトリロ三プロピオン酸（ＮＴＰ）、Ｎ−（２−アセト
アミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）などのポリカルボン酸
化合物、乳酸、クエン酸、イソクエン酸、リンゴ酸、グ
リセリン酸、酒石酸、オキシ酢酸、ホスホエノールピル
ビン酸、２−ホスホグリセリン酸、グルクロン酸、マン
デル酸、サリチル酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、
２，６−ジヒドロキシ安息香酸、等のヒドロキシカルボ
ン酸化合物や、グリオキシル酸、アセト酢酸、オキザロ
酢酸、アセトピルビン酸、ピルビン酸、α−ケトグルタ
ル酸、α−ケト吉草酸、フェニルピルビン酸等のカルボ
ニルカルボン酸化合物、酪酸、イソ吉草酸、カプロン
酸、カプリル酸、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミ
ノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−
ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（Ｂ
ＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスル
ホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロ
キシ−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、
Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（Ｃ
ＨＥＳ）、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチ
ル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（Ｄ
ＩＰＳＯ）、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１
−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２
−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニ
ル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−ヒドロキシ
−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジ
ニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、２−モル
フォリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３−モルフォリ
ノプロパンエタンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−ヒドロ
キシ−３−モルフォリノプロパンエタンスルホン酸（Ｍ
ＯＰＳＯ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンス
ルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス
（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸）（ＰＯＰ
ＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−
アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、２−ヒドロキ
シ−Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミ
ノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸
（ＴＥＳ）、亜硫酸ナトリウム等のモノカルボン酸化合
物、グリシン、アラニン、プロリン、ヒドロキシプロリ
ン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、チロシン、
シスチン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン
酸、ロイシン、イソロイシン、セリン、バリン、スレオ
ニン、メチオニン、アルギニン、トリプトファン、ヒス
チジン、リジン等アミノ酸類であるアミノカルボン酸化
合物が挙げられる。
合物の群に関して例示すれば、シュウ酸、マロン酸、コ
ハク酸、グルタル酸、マレイン酸、グルタコン酸、アジ
ピン酸、フマル酸、アコニット酸、ピメリン酸、ｏ−、
ｍ−、ｐ−スルホ安息香酸、１，３−ジアミノプロパン
四酢酸（ＤＰＴＡ）、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸
（ＨＩＤＡ）、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、
エチレンジアミン二プロピオン酸（ＥＤＤＰ）、ヒドロ
キシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＥＤＴＡ−Ｏ
Ｈ）、グリコールエーテルジアミン四酢酸（ＧＥＤＴ
Ａ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トランス
ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジアミ
ノプロパン四酢酸（Ｍｅｔｈｙｌ−ＥＤＴＡ）、ジエチ
レントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン
ジオルトヒドロキシフェニル酢酸、トリエチレンテトラ
ミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、
ニトリロ三プロピオン酸（ＮＴＰ）、Ｎ−（２−アセト
アミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）などのポリカルボン酸
化合物、乳酸、クエン酸、イソクエン酸、リンゴ酸、グ
リセリン酸、酒石酸、オキシ酢酸、ホスホエノールピル
ビン酸、２−ホスホグリセリン酸、グルクロン酸、マン
デル酸、サリチル酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、
２，６−ジヒドロキシ安息香酸、等のヒドロキシカルボ
ン酸化合物や、グリオキシル酸、アセト酢酸、オキザロ
酢酸、アセトピルビン酸、ピルビン酸、α−ケトグルタ
ル酸、α−ケト吉草酸、フェニルピルビン酸等のカルボ
ニルカルボン酸化合物、酪酸、イソ吉草酸、カプロン
酸、カプリル酸、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミ
ノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−
ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（Ｂ
ＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスル
ホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロ
キシ−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、
Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（Ｃ
ＨＥＳ）、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチ
ル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（Ｄ
ＩＰＳＯ）、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１
−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２
−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニ
ル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−ヒドロキシ
−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジ
ニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、２−モル
フォリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３−モルフォリ
ノプロパンエタンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−ヒドロ
キシ−３−モルフォリノプロパンエタンスルホン酸（Ｍ
ＯＰＳＯ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンス
ルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス
（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸）（ＰＯＰ
ＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−
アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、２−ヒドロキ
シ−Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミ
ノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸
（ＴＥＳ）、亜硫酸ナトリウム等のモノカルボン酸化合
物、グリシン、アラニン、プロリン、ヒドロキシプロリ
ン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、チロシン、
シスチン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン
酸、ロイシン、イソロイシン、セリン、バリン、スレオ
ニン、メチオニン、アルギニン、トリプトファン、ヒス
チジン、リジン等アミノ酸類であるアミノカルボン酸化
合物が挙げられる。
【００３３】これらの中で特に好適な例としてエチレン
ジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、グリコールエーテルジア
ミン四酢酸（ＧＥＤＴＡ）、グルタミン酸が挙げられ
る。これらは、通常、０．２ｍＭ〜１００ｍＭ、特に
０．４ｍＭ〜５０ｍＭ添加するのが好ましく、単独もし
くは組み合わせても用いることができる。更にナトリウ
ム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩やアンモニウム
塩などの水溶性塩類として用いることもできる。
ジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、グリコールエーテルジア
ミン四酢酸（ＧＥＤＴＡ）、グルタミン酸が挙げられ
る。これらは、通常、０．２ｍＭ〜１００ｍＭ、特に
０．４ｍＭ〜５０ｍＭ添加するのが好ましく、単独もし
くは組み合わせても用いることができる。更にナトリウ
ム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩やアンモニウム
塩などの水溶性塩類として用いることもできる。
【００３４】前述したように、このようなキレート能を
有する化合物の併用により尿酸添加の効果が高められ
る。更に、媒体として、例えばトリス緩衝液、ＰＩＰＥ
ＳやＨＥＰＥＳ、ＡＤＡ等のグッドの緩衝液などを１０
ｍＭ〜４００ｍＭ、特に好ましくは２０ｍＭ〜２００ｍ
Ｍの濃度でｐＨ５．５〜１１．５に適宜調整して使用す
ればよい。さらに、防腐剤等も必要に応じ使用すること
ができる。
有する化合物の併用により尿酸添加の効果が高められ
る。更に、媒体として、例えばトリス緩衝液、ＰＩＰＥ
ＳやＨＥＰＥＳ、ＡＤＡ等のグッドの緩衝液などを１０
ｍＭ〜４００ｍＭ、特に好ましくは２０ｍＭ〜２００ｍ
Ｍの濃度でｐＨ５．５〜１１．５に適宜調整して使用す
ればよい。さらに、防腐剤等も必要に応じ使用すること
ができる。
【００３５】また本発明組成物が、無機リン定量用組成
物である場合には、上記濃度範囲のキサンチンデヒドロ
ゲナーゼ、尿酸以外に、更にプリンヌクレオシドホスホ
リラーゼ（ＰＮＰＬ）、例えばバチルス属由来の酵素
を、０．０２ｕ／ｍｌ〜１００ｕ／ｍｌ、特に好ましく
は０．１ｕ／ｍｌ〜２０ｕ／ｍｌ、また基質として例え
ばイノシンを０．２５ｍＭ〜４０ｍＭ、特に好ましくは
１ｍＭ〜１０ｍＭ、補酵素としてＮＡＤまたはその誘導
体を、０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、特に好ましくは０．５ｍ
Ｍ〜１０ｍＭ添加すればよい。
物である場合には、上記濃度範囲のキサンチンデヒドロ
ゲナーゼ、尿酸以外に、更にプリンヌクレオシドホスホ
リラーゼ（ＰＮＰＬ）、例えばバチルス属由来の酵素
を、０．０２ｕ／ｍｌ〜１００ｕ／ｍｌ、特に好ましく
は０．１ｕ／ｍｌ〜２０ｕ／ｍｌ、また基質として例え
ばイノシンを０．２５ｍＭ〜４０ｍＭ、特に好ましくは
１ｍＭ〜１０ｍＭ、補酵素としてＮＡＤまたはその誘導
体を、０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、特に好ましくは０．５ｍ
Ｍ〜１０ｍＭ添加すればよい。
【００３６】この無機リン測定用試薬組成物において
は、その構成形態として、（１）第１群組成がキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼを含有し、第２群組成が反応に関与する基質、補酵素
を含有し、第１群組成に尿酸および必要に応じてキレー
ト能を有する化合物を添加する場合、また（２）第１群
組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、補酵素を含有し、
第２群組成が反応に関与する基質、プリンヌクレオシド
ホスホリラーゼを含有し、第１群組成に尿酸および必要
に応じてキレート能を有する化合物を添加する場合、更
に（３）第１群組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、プ
リンヌクレオシドホスホリラーゼおよび補酵素を含有
し、第２群組成が反応に関与する基質を含有し、第１群
組成に尿酸および必要に応じてキレート能を有する化合
物を添加する場合、のように２つの群に分けた組成物と
することもできる。
は、その構成形態として、（１）第１群組成がキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼを含有し、第２群組成が反応に関与する基質、補酵素
を含有し、第１群組成に尿酸および必要に応じてキレー
ト能を有する化合物を添加する場合、また（２）第１群
組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、補酵素を含有し、
第２群組成が反応に関与する基質、プリンヌクレオシド
ホスホリラーゼを含有し、第１群組成に尿酸および必要
に応じてキレート能を有する化合物を添加する場合、更
に（３）第１群組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、プ
リンヌクレオシドホスホリラーゼおよび補酵素を含有
し、第２群組成が反応に関与する基質を含有し、第１群
組成に尿酸および必要に応じてキレート能を有する化合
物を添加する場合、のように２つの群に分けた組成物と
することもできる。
【００３７】これらの組成物を用いて、例えば無機リン
を測定する場合、無機リン測定用被検体と各組成からな
る測定用試薬組成物とを、例えば３０〜３７℃にて混合
し、必要に応じて予備加温を行った後反応を開始せし
め、反応開始後、一般的には１分間以上、好適には２分
間以上であって、一般的に１０分間以内、好適には５分
間程度反応せしめ、還元型補酵素の増加量を測定するこ
とによりなされる。
を測定する場合、無機リン測定用被検体と各組成からな
る測定用試薬組成物とを、例えば３０〜３７℃にて混合
し、必要に応じて予備加温を行った後反応を開始せし
め、反応開始後、一般的には１分間以上、好適には２分
間以上であって、一般的に１０分間以内、好適には５分
間程度反応せしめ、還元型補酵素の増加量を測定するこ
とによりなされる。
【００３８】例えば、補酵素としてＮＡＤを用いた場合
には還元型ＮＡＤの増加量を吸光波長３４０ｎｍ付近に
よる吸光度の増加として測定できる。またこの還元型Ｎ
ＡＤの測定に当たっては、例えばニトロテトラゾリウム
ブルーや２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニト
ロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウムクロ
ライドなどの水素受容体の存在下ジアホラーゼの酵素作
用によりホルマザン色素として可視部吸光度の測定によ
っても定量でき、さらに蛍光試薬や発光試薬を用いて行
ってよい。さらに、上記のエンド・ポイントでの測定の
代わりに、反応時間中の一定時間での還元型補酵素の増
加速度を求めて測定することもできる。
には還元型ＮＡＤの増加量を吸光波長３４０ｎｍ付近に
よる吸光度の増加として測定できる。またこの還元型Ｎ
ＡＤの測定に当たっては、例えばニトロテトラゾリウム
ブルーや２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニト
ロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウムクロ
ライドなどの水素受容体の存在下ジアホラーゼの酵素作
用によりホルマザン色素として可視部吸光度の測定によ
っても定量でき、さらに蛍光試薬や発光試薬を用いて行
ってよい。さらに、上記のエンド・ポイントでの測定の
代わりに、反応時間中の一定時間での還元型補酵素の増
加速度を求めて測定することもできる。
【００３９】また本発明組成物が、ヒポキサンチンまた
は／およびキサンチンの定量用組成物である場合には、
上記濃度範囲のキサンチンデヒドロゲナーゼ、尿酸以外
に、更に、補酵素としてＮＡＤまたはその誘導体を、
０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、特に好ましくは０．５ｍＭ〜１
０ｍＭ添加すればよい。
は／およびキサンチンの定量用組成物である場合には、
上記濃度範囲のキサンチンデヒドロゲナーゼ、尿酸以外
に、更に、補酵素としてＮＡＤまたはその誘導体を、
０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、特に好ましくは０．５ｍＭ〜１
０ｍＭ添加すればよい。
【００４０】また本発明組成物が、イノシン定量用組成
物である場合には、上記濃度範囲のキサンチンデヒドロ
ゲナーゼ、尿酸以外に、更に無機リンとして例えばリン
酸二カリウムを０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、特に好ましく
は２ｍＭ〜４０ｍＭ、ＰＮＰＬを０．０２ｕ／ｍｌ〜１
００ｕ／ｍｌ、特に好ましくは０．１ｕ／ｍｌ〜２０ｕ
／ｍｌ添加すればよい。
物である場合には、上記濃度範囲のキサンチンデヒドロ
ゲナーゼ、尿酸以外に、更に無機リンとして例えばリン
酸二カリウムを０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、特に好ましく
は２ｍＭ〜４０ｍＭ、ＰＮＰＬを０．０２ｕ／ｍｌ〜１
００ｕ／ｍｌ、特に好ましくは０．１ｕ／ｍｌ〜２０ｕ
／ｍｌ添加すればよい。
【００４１】また本発明組成物が、アデノシンデアミナ
ーゼ活性測定用組成物である場合には、本発明のキサン
チンデヒドロゲナーゼ含有組成物の成分として、上記濃
度範囲のキサンチンデヒドロゲナーゼ、尿酸以外に、更
にアデノシンを０．２ｍＭ〜２０ｍＭ、特に好ましくは
０．５ｍＭ〜８ｍＭ添加し、上記イノシン定量用組成物
と組み合わせて用いれば良い。また、グアニンデアミナ
ーゼ活性測定用組成物の場合は、同様にグアニンを０．
１ｍＭ〜１０ｍＭ、特に好ましくは０．２ｍＭ〜５ｍＭ
添加すればよい。
ーゼ活性測定用組成物である場合には、本発明のキサン
チンデヒドロゲナーゼ含有組成物の成分として、上記濃
度範囲のキサンチンデヒドロゲナーゼ、尿酸以外に、更
にアデノシンを０．２ｍＭ〜２０ｍＭ、特に好ましくは
０．５ｍＭ〜８ｍＭ添加し、上記イノシン定量用組成物
と組み合わせて用いれば良い。また、グアニンデアミナ
ーゼ活性測定用組成物の場合は、同様にグアニンを０．
１ｍＭ〜１０ｍＭ、特に好ましくは０．２ｍＭ〜５ｍＭ
添加すればよい。
【００４２】更に、５’−ヌクレオチダーゼ活性測定用
組成物についても、適宜、基質等を選択し添加すればよ
いが、例えば、基質として、ＡＭＰを用いた場合には、
１ｍＭ〜１００ｍＭ、特に好ましくは２．５ｍＭ〜４０
ｍＭ添加し、上記無機リン測定用組成物と組み合わせて
用いればよい。これらキサンチンデヒドロゲナーゼ組成
物を用いて酵素活性を測定する場合には、反応試薬は一
つまたは二つ以上に分け、二つ以上に分けた場合はそれ
ら各成分を適宜組み合わせることもできる。
組成物についても、適宜、基質等を選択し添加すればよ
いが、例えば、基質として、ＡＭＰを用いた場合には、
１ｍＭ〜１００ｍＭ、特に好ましくは２．５ｍＭ〜４０
ｍＭ添加し、上記無機リン測定用組成物と組み合わせて
用いればよい。これらキサンチンデヒドロゲナーゼ組成
物を用いて酵素活性を測定する場合には、反応試薬は一
つまたは二つ以上に分け、二つ以上に分けた場合はそれ
ら各成分を適宜組み合わせることもできる。
【００４３】このようにして得られた本発明方法のキサ
ンチンデヒドロゲナーゼ含有安定化組成物は、前記に記
載した各々の組成物として それぞれの目的に応じて各
々単独で、叉は適当に組み合わせて配合して使用するこ
とができる。また、これらキサンチンデヒドロゲナーゼ
含有組成物の形態としては、溶液状はもとより凍結して
保存することもできる。更に、凍結乾燥操作により粉末
化して使用時に水または緩衝液を加え溶解することもで
きる。叉、これらの形態を適宜組み合わせて用いること
もできる。
ンチンデヒドロゲナーゼ含有安定化組成物は、前記に記
載した各々の組成物として それぞれの目的に応じて各
々単独で、叉は適当に組み合わせて配合して使用するこ
とができる。また、これらキサンチンデヒドロゲナーゼ
含有組成物の形態としては、溶液状はもとより凍結して
保存することもできる。更に、凍結乾燥操作により粉末
化して使用時に水または緩衝液を加え溶解することもで
きる。叉、これらの形態を適宜組み合わせて用いること
もできる。
【００４４】
【実施例】ついで本発明を実施例にて説明するが、本発
明はなんらこれらによって限定されるものでない。尚、
キサンチンデヒドロゲナーゼの活性測定は、１００ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）、２ｍＭキサンチン、
２ｍＭのＮＡＤからなる組成の反応液を用い、３７度で
のキサンチンの酸化に伴う還元型ＮＡＤの３４０ｎｍに
おける吸光度の変化率を経時的に、一例として反応開始
後１〜３分目の間測定することにより行い、以下に示す
計算式のとおり、１分間当たり、１μｍｏｌキサンチン
の減少量を１単位とした。
明はなんらこれらによって限定されるものでない。尚、
キサンチンデヒドロゲナーゼの活性測定は、１００ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）、２ｍＭキサンチン、
２ｍＭのＮＡＤからなる組成の反応液を用い、３７度で
のキサンチンの酸化に伴う還元型ＮＡＤの３４０ｎｍに
おける吸光度の変化率を経時的に、一例として反応開始
後１〜３分目の間測定することにより行い、以下に示す
計算式のとおり、１分間当たり、１μｍｏｌキサンチン
の減少量を１単位とした。
【００４５】
【数１】 ６．２２：分子吸光係数（ｃｍ2 ／μｍｏｌ） ＴＶ ：反応液全量（ｍｌ） ＳＶ ：添加した酵素量（ｍｌ）
【００４６】実施例１ ４０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）にキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ−Ｔ（Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１
９７（１０）株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６６４）を用いて
特開平６−１１３８３７号公報の実施例１および２の記
載に基づいて製造した）を０．５ｕ／ｍｌになるように
調製した。このものに、（１）何も添加しないもの、
（２）２ｍＭになるように尿酸を添加したもの、（３）
（２）に更に５ｍＭのＧＥＤＴＡ（調製法；（株）同仁
化学研究所製ＧＥＤＴＡの３．８ｇを秤量して水に溶解
し、ｐＨを５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液にて７．５に
調整し、１００ｍｌにメス・アップ（０．１Ｍ）したも
のを使用した）を添加したもの、上記３種類のキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ含有組成物（防腐剤として４ｍＭＮ
ａＮ3 を添加）を、３７℃に保ち、０〜８日間までキサ
ンチンデヒドロゲナーゼの残存活性の経時変化を追跡測
定した。その結果を、調製直後の残存活性を１００％と
した相対値で表１に示した。
ンデヒドロゲナーゼ−Ｔ（Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１
９７（１０）株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６６４）を用いて
特開平６−１１３８３７号公報の実施例１および２の記
載に基づいて製造した）を０．５ｕ／ｍｌになるように
調製した。このものに、（１）何も添加しないもの、
（２）２ｍＭになるように尿酸を添加したもの、（３）
（２）に更に５ｍＭのＧＥＤＴＡ（調製法；（株）同仁
化学研究所製ＧＥＤＴＡの３．８ｇを秤量して水に溶解
し、ｐＨを５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液にて７．５に
調整し、１００ｍｌにメス・アップ（０．１Ｍ）したも
のを使用した）を添加したもの、上記３種類のキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ含有組成物（防腐剤として４ｍＭＮ
ａＮ3 を添加）を、３７℃に保ち、０〜８日間までキサ
ンチンデヒドロゲナーゼの残存活性の経時変化を追跡測
定した。その結果を、調製直後の残存活性を１００％と
した相対値で表１に示した。
【００４７】
【表１】 表１に示す通り、尿酸の添加により、保存安定性の向上
が認められている。また、尿酸の存在下に更にＧＥＤＴ
Ａを添加したものはより安定性に優れ、キレート剤添加
の併用効果が示された。
が認められている。また、尿酸の存在下に更にＧＥＤＴ
Ａを添加したものはより安定性に優れ、キレート剤添加
の併用効果が示された。
【００４８】実施例２ キレート能を有する化合物の併用効果を調べる目的で、
１ｍＭ尿酸を添加した０．５ｕ／ｍｌの各種キサンチン
デヒドロゲナーゼ−Ｔ溶液（防腐剤として４ｍＭＮａＮ
3 を添加）を調製し、３７℃に保ち１週間後の残存活性
を測定し、調製時の活性に対する百分率で表２に示し
た。
１ｍＭ尿酸を添加した０．５ｕ／ｍｌの各種キサンチン
デヒドロゲナーゼ−Ｔ溶液（防腐剤として４ｍＭＮａＮ
3 を添加）を調製し、３７℃に保ち１週間後の残存活性
を測定し、調製時の活性に対する百分率で表２に示し
た。
【００４９】
【表２】 表２に示す通り、キレート能を有する化合物としてジカ
ルボン酸塩やスルホン酸塩の添加により安定性の向上が
認められた。
ルボン酸塩やスルホン酸塩の添加により安定性の向上が
認められた。
【００５０】実施例３ ４０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）にキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ−Ｔを０．５ｕ／ｍｌになるように
調製した。このものに、（１）何も添加しないもの、
（２）５ｍＭになるようにＥＤＴＡ・２Ｎａを添加した
もの、（３）５ｍＭのＥＤＴＡ・２Ｎａと１ｍＭ尿酸を
添加したもの、の上記３種類のキサンチンデヒドロゲナ
ーゼ含有組成物（防腐剤として４ｍＭＮａＮ3 を添加）
を、２５℃に保ち、０〜２７日間までキサンチンデヒド
ロゲナーゼの残存活性の経時変化を追った。その結果
を、調製直後の残存活性を１００％とした相対値で表３
に示した。
ンデヒドロゲナーゼ−Ｔを０．５ｕ／ｍｌになるように
調製した。このものに、（１）何も添加しないもの、
（２）５ｍＭになるようにＥＤＴＡ・２Ｎａを添加した
もの、（３）５ｍＭのＥＤＴＡ・２Ｎａと１ｍＭ尿酸を
添加したもの、の上記３種類のキサンチンデヒドロゲナ
ーゼ含有組成物（防腐剤として４ｍＭＮａＮ3 を添加）
を、２５℃に保ち、０〜２７日間までキサンチンデヒド
ロゲナーゼの残存活性の経時変化を追った。その結果
を、調製直後の残存活性を１００％とした相対値で表３
に示した。
【００５１】
【表３】 表３に示す通り、キレート能を有する化合物の存在下
に、尿酸を添加しないものは２７日目に残存活性が、そ
れぞれ６％、５５％と低下しているのに対し、尿酸を添
加したものについては全く活性の低下が認められなかっ
た。
に、尿酸を添加しないものは２７日目に残存活性が、そ
れぞれ６％、５５％と低下しているのに対し、尿酸を添
加したものについては全く活性の低下が認められなかっ
た。
【００５２】実施例４ ４０ｍＭのＭＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ６．５）又は４０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）にそれぞれ５ｍ
Ｍ、０．４ｕ／ｍｌになるようにＧＥＤＴＡとキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ−Ｔを添加した。緩衝液の異なるキ
サンチンデヒドロゲナーゼ組成物に対し、尿酸を０．０
５ｍＭ〜６ｍＭになるように添加し、５５℃、３０分間
熱処理し、その残存活性を求めた。その結果を、熱処理
をしないものの残存活性を１００％とした相対値にて表
４に示した。
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）にそれぞれ５ｍ
Ｍ、０．４ｕ／ｍｌになるようにＧＥＤＴＡとキサンチ
ンデヒドロゲナーゼ−Ｔを添加した。緩衝液の異なるキ
サンチンデヒドロゲナーゼ組成物に対し、尿酸を０．０
５ｍＭ〜６ｍＭになるように添加し、５５℃、３０分間
熱処理し、その残存活性を求めた。その結果を、熱処理
をしないものの残存活性を１００％とした相対値にて表
４に示した。
【表４】 表４に示す通り、尿酸濃度の増加に従い、残存活性の上
昇が認められた。
昇が認められた。
【００５３】実施例５ （無機リンの定量） （実験に供したプリンヌクレオシドホスホリラーゼは、
バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕ
ｓ）ＩＦＯ１３４９４をＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２
４６（５），１４７５−１４８０（１９７１）に記載さ
れている方法で培養、精製を行い取得したものを使用し
た。）
バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕ
ｓ）ＩＦＯ１３４９４をＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２
４６（５），１４７５−１４８０（１９７１）に記載さ
れている方法で培養、精製を行い取得したものを使用し
た。）
【００５４】＜試薬１＞ １００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．０） ５ｍＭ ＧＥＤＴＡ １ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ ０．３３ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3
【００５５】＜試薬２＞ ４０ｍＭ ＡＤＡ緩衝液（ｐＨ６．０） １２ｍＭ イノシン ２０ｍＭ ＮＡＤ ４ｍＭ ＮａＮ3
【００５６】尿酸を含有した上記試薬１、０．９ｍｌに
対して、サンプルとして、２、４、６、８、１０ｍＭに
調製したリン酸水素二カリウム溶液を各々１２μｌ添加
し３７℃にて５分間加温し、３４０ｎｍにおける吸光度
を読みとった（Ａｂｓ１）。その後、試薬２を０．３ｍ
ｌ加えて３７℃にて更に５分間加温し、３４０ｎｍの吸
光度を読みとった（Ａｂｓ２）。
対して、サンプルとして、２、４、６、８、１０ｍＭに
調製したリン酸水素二カリウム溶液を各々１２μｌ添加
し３７℃にて５分間加温し、３４０ｎｍにおける吸光度
を読みとった（Ａｂｓ１）。その後、試薬２を０．３ｍ
ｌ加えて３７℃にて更に５分間加温し、３４０ｎｍの吸
光度を読みとった（Ａｂｓ２）。
【００５７】各々のサンプルについて、Ａｂｓ２とＡｂ
ｓ１の差を計算し、更にサンプルの代わりに蒸留水を用
いたときの計算値を試薬ブランクとして、各々の計算値
から試薬ブランク値を差し引いた。比較対照として、試
薬１から尿酸を除いたものを使用して同様の操作を行っ
た。試薬１、試薬２ともに３７℃に保存し、３日目と、
７日目についても同じサンプルを用いて測定操作を行
い、その結果を表５に示した。
ｓ１の差を計算し、更にサンプルの代わりに蒸留水を用
いたときの計算値を試薬ブランクとして、各々の計算値
から試薬ブランク値を差し引いた。比較対照として、試
薬１から尿酸を除いたものを使用して同様の操作を行っ
た。試薬１、試薬２ともに３７℃に保存し、３日目と、
７日目についても同じサンプルを用いて測定操作を行
い、その結果を表５に示した。
【００５８】
【表５】 表５から明らかなように、比較対照の試薬がすでに３日
の保存で劣化が認められるのに対し、本発明組成物を用
いた試薬は、７日の保存でも測定値の変動が認められな
い。
の保存で劣化が認められるのに対し、本発明組成物を用
いた試薬は、７日の保存でも測定値の変動が認められな
い。
【００５９】実施例６ 以下に示す組成の無機リン測定用試薬組成物を調製し
た。 ＜試薬１＞ １００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５） ２ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ ６ｍＭ ＮＡＤ １ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ ２ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3 ＜試薬２＞ １００ｍＭ グリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９．０） １６ｍＭ イノシン １ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ ４ｍＭ ＮａＮ3
た。 ＜試薬１＞ １００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５） ２ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ ６ｍＭ ＮＡＤ １ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ ２ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3 ＜試薬２＞ １００ｍＭ グリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９．０） １６ｍＭ イノシン １ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ ４ｍＭ ＮａＮ3
【００６０】実施例７ 以下に示す組成の無機リン測定用試薬組成物を調製し
た。 ＜試薬１＞ ４０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．１） ５ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ ６ｍＭ ＮＡＤ １ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ ０．５ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １．５ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3 〈試薬２〉 １００ｍＭ グリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９．０） １２ｍＭ イノシン ４ｍＭ ＮａＮ3
た。 ＜試薬１＞ ４０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．１） ５ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ ６ｍＭ ＮＡＤ １ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ ０．５ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １．５ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3 〈試薬２〉 １００ｍＭ グリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９．０） １２ｍＭ イノシン ４ｍＭ ＮａＮ3
【００６１】実施例８ 以下に示す組成のアデノシンデアミナーゼ活性測定用試
薬組成物を調製した。 １００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．５） ６ｍＭ アデノシン ２ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ ２．５ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ １．５ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ ４ｍＭ ＮＡＤ １０ｍＭ リン酸水素二カリウム ０．５ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3
薬組成物を調製した。 １００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．５） ６ｍＭ アデノシン ２ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ ２．５ｕ／ｍｌ キサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ １．５ｕ／ｍｌ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ ４ｍＭ ＮＡＤ １０ｍＭ リン酸水素二カリウム ０．５ｍＭ 尿酸 ４ｍＭ ＮａＮ3
【００６２】
【発明の効果】キサンチンデヒドロゲナーゼ含有組成物
において尿酸を添加することにより、キサンチンデヒド
ロゲナーゼを安定化させることができ、従ってヒポキサ
ンチン、キサンチン、またはこれらを生成する反応系に
係わる基質もしくは酵素活性の測定のためのより安定で
経済的な試薬を提供することができる。
において尿酸を添加することにより、キサンチンデヒド
ロゲナーゼを安定化させることができ、従ってヒポキサ
ンチン、キサンチン、またはこれらを生成する反応系に
係わる基質もしくは酵素活性の測定のためのより安定で
経済的な試薬を提供することができる。
Claims (18)
- 【請求項１】 少なくともキサンチンデヒドロゲナーゼ
を含有する組成物に尿酸を添加することを特徴とするキ
サンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法。 - 【請求項２】 尿酸が０．１ｍＭ〜１０ｍＭの濃度範囲
である請求項１記載の安定化方法。 - 【請求項３】 少なくともキサンチンデヒドロゲナーゼ
を含有する組成物において、０．２〜１００ｍＭのキレ
ート能を有する化合物を添加してなる組成物である請求
項１記載の安定化方法。 - 【請求項４】 キレート能を有する化合物が、少なくと
も１以上のカルボン酸基、スルホン酸基、亜硫酸基を有
する有機化合物またはその水溶性塩類である請求項３記
載の安定化方法。 - 【請求項５】 １以上のカルボン酸基を有する化合物
が、ポリカルボン酸化合物、ヒドロキシカルボン酸化合
物、アミノカルボン酸化合物、カルボニルカルボン酸化
合物またはモノカルボン酸化合物である請求項４記載の
安定化方法。 - 【請求項６】 少なくともキサンチンデヒドロゲナーゼ
を含有する組成物が、ヒポキサンチン、キサンチン、イ
ノシン、無機リンからなる群より選ばれた少なくともひ
とつの物質を測定するための測定用試薬組成物である請
求項１記載の安定化方法。 - 【請求項７】 少なくともキサンチンデヒドロゲナーゼ
を含有する組成物が、アデノシンデアミナーゼ、グアニ
ンデアミナーゼ、５' −ヌクレオチダーゼからなる群よ
り選ばれた少なくともひとつの酵素活性測定用試薬組成
物である請求項１記載の安定化方法。 - 【請求項８】 無機リン測定用試薬組成物が、キサンチ
ンデヒドロゲナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼ、反応に関与する基質および補酵素を含有してなる組
成である請求項６記載の安定化方法。 - 【請求項９】 無機リン測定用試薬組成物において、第
１群組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼを含有し、第２群組成が反応に関
与する基質、補酵素を含有し、第１群組成に尿酸および
必要に応じてキレート能を有する化合物を添加してなる
請求項８記載の安定化方法。 - 【請求項１０】 無機リン測定用試薬組成物において、
第１群組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、補酵素を含
有し、第２群組成が反応に関与する基質、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼを含有し、第１群組成に尿酸およ
び必要に応じてキレート能を有する化合物を添加してな
る請求項８記載の安定化方法。 - 【請求項１１】 無機リン測定用試薬組成物において、
第１群組成がキサンチンデヒドロゲナーゼ、プリンヌク
レオシドホスホリラーゼおよび補酵素を含有し、第２群
組成が反応に関与する基質を含有し、第１群組成に尿酸
および必要に応じてキレート能を有する化合物を添加し
てなる請求項８記載の安定化方法。 - 【請求項１２】 反応に関与する基質が、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼの基質であり、かつキサンチンま
たはヒポキサンチンを形成する化合物である請求項８記
載の安定化方法。 - 【請求項１３】 キサンチンまたはヒポキサンチンを形
成する化合物がイノシン、デオキシイノシン、キサント
シンからなる群より選ばれたものである請求項１２記載
の安定化方法。 - 【請求項１４】 補酵素が、ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド（ＮＡＤ）またはその誘導体である請求項
８記載の安定化方法。 - 【請求項１５】 ＮＡＤ誘導体が、ニコチンアミドヒポ
キサンチンジヌクレオチド（デアミノＮＡＤ）、アセチ
ルピリジンアデニンジヌクレオチド（アセチルＮＡ
Ｄ）、チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（チ
オＮＡＤ）からなる群より選ばれたものである請求項１
４記載の安定化方法。 - 【請求項１６】 キサンチンデヒドロゲナーゼが、Ｂａ
ｃｔｅｒｉａ Ｎｏ．１９７（１０）株（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−３６６４）由来のキサンチンデヒドロゲナーゼ−Ｔ
酵素である請求項１記載の安定化方法。 - 【請求項１７】 少なくともキサンチンデヒドロゲナー
ゼを含有する組成物において尿酸を安定化剤として含有
することを特徴とするキサンチンデヒドロゲナーゼの安
定化組成物。 - 【請求項１８】 少なくともキサンチンデヒドロゲナー
ゼを含有する組成物において、キレート能を有する化合
物を添加することを特徴とする請求項１７記載の安定化
組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23109394A JP3674964B2 (ja) | 1994-09-27 | 1994-09-27 | キサンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23109394A JP3674964B2 (ja) | 1994-09-27 | 1994-09-27 | キサンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0889292A true JPH0889292A (ja) | 1996-04-09 |
| JP3674964B2 JP3674964B2 (ja) | 2005-07-27 |
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ID=16918187
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23109394A Expired - Lifetime JP3674964B2 (ja) | 1994-09-27 | 1994-09-27 | キサンチンデヒドロゲナーゼの安定化方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3674964B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001094370A1 (en) * | 2000-06-07 | 2001-12-13 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Coenzyme derivatives and enzymes appropriate therefor |
| WO2010018221A1 (fr) * | 2008-08-14 | 2010-02-18 | Novocib | Nouvelle méthode ultrasensible et rapide pour mesurer par bioluminescence le degré de fraîcheur de la chair animale |
| CN102690800A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-09-26 | 浙江工业大学 | 冬虫夏草中国被毛孢合成代谢黄嘌呤的酶、基因及其应用 |
| US8569004B2 (en) | 2005-11-10 | 2013-10-29 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for improving heat stability of composition containing water-soluble coenzyme-bound glucose dehydrogenase (GDH) |
-
1994
- 1994-09-27 JP JP23109394A patent/JP3674964B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001094370A1 (en) * | 2000-06-07 | 2001-12-13 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Coenzyme derivatives and enzymes appropriate therefor |
| US8569004B2 (en) | 2005-11-10 | 2013-10-29 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for improving heat stability of composition containing water-soluble coenzyme-bound glucose dehydrogenase (GDH) |
| WO2010018221A1 (fr) * | 2008-08-14 | 2010-02-18 | Novocib | Nouvelle méthode ultrasensible et rapide pour mesurer par bioluminescence le degré de fraîcheur de la chair animale |
| FR2935003A1 (fr) * | 2008-08-14 | 2010-02-19 | Novocib | Nouvelle methode ultrasensible et rapide pour mesurer par bioluminescence le degre de fraicheur de la chair animale |
| CN102690800A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-09-26 | 浙江工业大学 | 冬虫夏草中国被毛孢合成代谢黄嘌呤的酶、基因及其应用 |
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