JPH0892085A - 抗レトロウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】新規な抗レトロウイルス剤を提供すること。 【構成】化学式（１）で表される化合物であるブリオス
タチン10を有効成分として含有する抗レトロウイルス
剤。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗レトロウイルス作用
を有する化合物を有効成分として含有する抗レトロウイ
ルス剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】ウイルス病の治療薬の開発は、種々の試
みがなされてきたが、現在のところ有用なものは見いだ
されておらず、ワクチンによる感染予防が唯一のウイル
ス病への有効な対応手段である。ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）に対してもワクチンの開発研究が行われてい
るが、これまでのウイルスワクチン開発の方法を踏襲す
るだけでは克服しがたい多くの難点を抱えている。すな
わち、ＨＩＶは、その主要抗原である外被糖蛋白gp120
の構造を規定する遺伝子に変異が起こりやすく、多くの
ＨＩＶ変異株に有効なワクチンの開発は容易ではない。
さらに感染が細胞外のＨＩＶ粒子だけでなく、ＨＩＶ感
染細胞が非感染細胞に直接融合することにより成立する
ことも多く、中和抗体のみで感染を阻止することができ
ないということも、ワクチン開発を困難なものにしてい
る。このような状況のなかで、ＨＩＶがレトロウイルス
であることから、レトロウイルスに特異的な逆転写酵素
の活性を阻害する薬剤が注目を集め、アジドチミジン
［医学のあゆみ：１４２巻、第９号、６１９−６２２頁
（１９８７年）］などは実際に臨床で使用されている。
しかしながら、このような薬剤は副作用として骨髄抑
制、白血球の減少、貧血などがあり、長期間投与ができ
ないという問題点を抱えている。現在、この副作用を軽
減させる方向で研究が進められているが、問題点を完全
に解決するまでには至っていないのが現況である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、感染細
胞から非感染細胞への細胞間感染が感染拡大に大きな役
割を演じていること、また、これら細胞間感染は細胞膜
融合を介して成立することから、細胞膜融合阻止作用を
有する臨床応用が可能な薬剤を提供しようとするもので
ある。なお、このタイプの薬剤として硫酸化多糖類（特
開昭６３−４５２２３号、同６４−２５７２４号）など
が知られているが、臨床での効果が弱く、治療薬として
成立するには至っていない。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、臨床応用
可能な阻害物質を得るために、ＨＩＶに感染させたリン
パ球細胞と非感染の同細胞を混合培養した際に細胞融合
を介して生じる多核巨細胞の形成阻止作用を指標にスク
リーニングを行った。その結果、化学式（１）で表され
るフサコケムシ由来のブリオスタチン10（bryostatin1
0）に活性を見いだし本発明を完成させた。すなわち、
本発明は有効成分として化学式（１）で表される化合物
および任意に医薬上可能な担体等を含有する抗レトロウ
イルス剤を提供する。

【０００５】

【化２】

【０００６】本発明の抗レトロウイルス剤は、有効成分
としてブリオスタチン10を含有している。ブリオスタチ
ン10は、マクロライドの一種であり、フサコケムシに存
在していることが知られている。本発明者らは、青森県
浅虫(青森湾)で採取したフサコケムシより単離したブリ
オスタチン10を用いた。

【０００７】本発明の抗レトロウイルス剤は、ブリオス
タチン10を有効成分として含有していればよく、使用さ
れるブリオスタチン10は上述したフサコケムシからの抽
出物に限られない。また、本発明の抗レトロウイルス剤
は、経口、非経口製剤のいずれでもよい。非経口製剤で
あれば、静脈、動脈、皮膚、皮下、筋肉、消化管(胃、
腸)を経由して投与される。投与量は、投与形態、剤型
さらには患者の年齢、病態により異なり一律なものでは
ないが、成人に対して一日、10μg/kg(体重)〜100mg/kg
(体重)程度が好適である。

【０００８】本発明の抗レトロウイルス剤を非経口製剤
とする場合には、無菌の水溶性液剤、非水溶性液剤ある
いは乳濁剤などとすることが考えられる。非水溶性液剤
あるいは乳濁剤とする場合の基剤としては、プロピレン
グリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、オ
レイン酸エチルなどが考えられる。また、経口製剤とし
ては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、シロ
ップ剤などが考えられる。なお、本発明の抗レトロウイ
ルス剤の各種製剤化は、常法に従い、医薬製剤技術分野
における通常の方法によって行うことができる。

【０００９】次に、本発明の抗レトロウイルス剤を具体
的に説明する。

【００１０】［ブリオスタチン10の単離］ フサコケム
シ1.5kgをCH₂Cl₂で抽出し、抽出物36.6gを得た。これを
セファデックスLH-20カラムにてn-ヘキサン：CH₂Cl₂：C
H₃OH＝４：５：１で分画し、画分１〜画分７と残渣を得
た。これらをウニ受精卵卵割阻害作用を指標にしてスク
リーニングしたところ、画分２および画分３に活性を認
めた。これらを、さらにフラッシュ クロマトグラフィ
ー（ODS；CH₃CN：H₂O＝50：50で分画し、画分８〜画分
１１を得た。これらをウニ受精卵卵割阻害作用を指標に
してさらにスクリーニングしたところ、画分１０に活性
を認めた。画分１０をＨＰＬＣ（ODS；CH₃OH：H₂O＝8
5：15）で分画し、ブリオスタチン10 15mgを得た。

【００１１】［多核巨細胞形成阻止作用］ 単離された
ＨＩＶが持続感染状態にあるリンパ球であるMolt-4/HIV
細胞と非感染のMolt-4細胞とを混合培養すると、Molt-4
/HIV細胞膜表面上に発現したＨＩＶ外被糖蛋白gp120とM
olt-4細胞膜表面上のＣＤ４レセプターとが結合するこ
とにより両細胞膜どうしが融合を起こして多核巨細胞を
形成する。薬剤添加による多核巨細胞の形成抑制をみる
ことでＨＩＶの吸着侵入段階および細胞間感染に対する
効果を調べることができる。

【００１２】１．方法 平底96穴マイクロプレート（ファルコン製、品番3072）
に、培地（RPMI1640[10％Fetal calf serum含む]）で所
定濃度に希釈した検体溶液を100μl/wellずつ加えた。
次に培地に懸濁した持続感染Molt-4/HIV細胞浮遊液（1
×10⁶cells/ml）を50μl/well加え、さらに非感染Molt-
4細胞浮遊液（1×10⁶cells/ml）を50μl/well加えて撹
拌し、37℃、５％ＣＯ₂存在下で混合培養し、検査区と
した。またコントロールでは持続感染Molt-4/HIV細胞浮
遊液50μl/wellにかえて非感染Molt-4細胞浮遊液（１×
10⁶cells/ml）50μl/wellを加えた。混合培養後数時間
で多核巨細胞の形成は認められ20時間後には顕著とな
る。培養後24時間に、顕微鏡による観察で多核巨細胞の
有無を調べるとともに、トリパンブルー染色法により生
細胞数を測定し、Fusion Index（Virology 164,542-54
6,1988）を求めた。Fusion Indexの算出方法は以下に示
すとおりであり、抑制効果があれば値は０を示す。

【００１３】Fusion Index＝（１ウエルあたりのコント
ロールの細胞数／１ウエルあたりの検査区の細胞数）−
１ ２．結果 結果は、図１に示すとおりである。対照薬剤のデキスト
ラン硫酸が10〜300μg/mlの用量域でFusion Indexが０
前後の値になるのに対して、ブリオスタチン10はこれよ
りもさらに低い0.01〜3μg/mlの用量域で０前後の値を
示した。顕微鏡による観察もこの結果に一致し、デキス
トラン硫酸が10〜100μg/mlの用量で多核巨細胞の形成
を阻止していたのに対し、ブリオスタチン10は0.01〜3
μg/mlの用量で多核巨細胞の形成を阻止していた。

【００１４】

【発明の効果】本発明の抗レトロウイルス剤は、ブリオ
スタチン10を有効成分として含有している。ブリオスタ
チン10の有する優れた細胞膜融合阻止作用により、ＨＩ
Ｖの感染および感染拡大を有効に抑制する。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ブリオスタチン10の細胞膜融合阻止効果を示
すグラフ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】化学式（１）で表される化合物を有効成分
   として含有することを特徴とする抗レトロウイルス剤。 【化１】