JPH089968A - ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細胞培養用培地及び培養方法 - Google Patents
ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細胞培養用培地及び培養方法Info
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- JPH089968A JPH089968A JP6146059A JP14605994A JPH089968A JP H089968 A JPH089968 A JP H089968A JP 6146059 A JP6146059 A JP 6146059A JP 14605994 A JP14605994 A JP 14605994A JP H089968 A JPH089968 A JP H089968A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 マウス−ヒトキメラ抗体等の抗体遺伝子を発
現し得る組換え動物細胞等を効率良く培養でき、しかも
製造された抗体等の蛋白質の分離、精製を容易に実施し
得る動物細胞用培地を提供する。 【構成】 ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細
胞培養用培地、当該培地中で動物細胞を培養する動物細
胞の培養方法及び当該培地中で動物細胞を培養すること
を特徴とする当該動物細胞が生産する蛋白質の製造方
法。
現し得る組換え動物細胞等を効率良く培養でき、しかも
製造された抗体等の蛋白質の分離、精製を容易に実施し
得る動物細胞用培地を提供する。 【構成】 ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細
胞培養用培地、当該培地中で動物細胞を培養する動物細
胞の培養方法及び当該培地中で動物細胞を培養すること
を特徴とする当該動物細胞が生産する蛋白質の製造方
法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、動物細胞培養用の培地
及び該培地を使用する動物細胞の培養方法、更には遺伝
子組換え産物等を生産する方法に関するものである。
及び該培地を使用する動物細胞の培養方法、更には遺伝
子組換え産物等を生産する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】１９７５年にケーラーとミルシュタイン
によりモノクローナル抗体の作製法が開発されて以来、
診断や治療などの医療分野から抗原の分離精製などの工
業分野にいたる広い範囲で、モノクローナル抗体の利用
が活発になっている。モノクローナル抗体は、体外診断
薬の分野で既に幅広く実用化されており、免疫画像診断
などの体内診断薬や免疫抑制剤など治療の分野でも一部
実用化されている。また、蛋白質などの抗原を精製する
ための試薬をはじめとした工業用途についても活発な研
究開発が行われている。
によりモノクローナル抗体の作製法が開発されて以来、
診断や治療などの医療分野から抗原の分離精製などの工
業分野にいたる広い範囲で、モノクローナル抗体の利用
が活発になっている。モノクローナル抗体は、体外診断
薬の分野で既に幅広く実用化されており、免疫画像診断
などの体内診断薬や免疫抑制剤など治療の分野でも一部
実用化されている。また、蛋白質などの抗原を精製する
ための試薬をはじめとした工業用途についても活発な研
究開発が行われている。
【０００３】モノクローナル抗体の製造方法としては、
従来はマウス細胞同志の融合細胞（例えばハイブリドー
マ）などをマウスの腹水中で培養し、該腹水からモノク
ローナル抗体を得るという方法が中心であったが、細胞
大量培養技術の発展に伴い培養法による製造が活発にな
っている。
従来はマウス細胞同志の融合細胞（例えばハイブリドー
マ）などをマウスの腹水中で培養し、該腹水からモノク
ローナル抗体を得るという方法が中心であったが、細胞
大量培養技術の発展に伴い培養法による製造が活発にな
っている。
【０００４】更には、抗体の体内診断薬や治療薬への応
用に関して、遺伝子工学的技術の応用によりマウスモノ
クローナル抗体の一部をヒト抗体に置換したキメラ抗体
の作製なども活発になっている。これらは主に抗体遺伝
子を導入した組み換え動物細胞により生産される。
用に関して、遺伝子工学的技術の応用によりマウスモノ
クローナル抗体の一部をヒト抗体に置換したキメラ抗体
の作製なども活発になっている。これらは主に抗体遺伝
子を導入した組み換え動物細胞により生産される。
【０００５】このようなキメラ抗体は、二以上の動物種
に由来する部分から構成されているため、特定動物の体
内で製造するよりも細胞培養法による製造が適している
が、遺伝子組み換え動物細胞による抗体生産について
は、従来のマウスハイブリドーマによるモノクローナル
抗体の生産に比べ、抗体の生産性が著しく低いのが一般
的である。一方、モノクローナル抗体を体内診断や治療
に適用するには、高純度に精製された抗体を大量かつ安
定的に供給していくことが肝要であり、そのための効率
の良い培養生産法が望まれている。
に由来する部分から構成されているため、特定動物の体
内で製造するよりも細胞培養法による製造が適している
が、遺伝子組み換え動物細胞による抗体生産について
は、従来のマウスハイブリドーマによるモノクローナル
抗体の生産に比べ、抗体の生産性が著しく低いのが一般
的である。一方、モノクローナル抗体を体内診断や治療
に適用するには、高純度に精製された抗体を大量かつ安
定的に供給していくことが肝要であり、そのための効率
の良い培養生産法が望まれている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】細胞培養法による融合
細胞や組換え動物細胞等の動物細胞の培養は、アミノ
酸、ビタミン類、糖質、塩類等からなる基礎培地に動物
の血清（多くの場合は牛胎児血清）を添加したものや、
インスリン、トランスフェリン、２−エタノ−ルアミ
ン、亜セレン酸ナトリウム、アルブミン、細胞増殖因子
等を添加することで前記血清を使用しないもの（無血清
培地）などが使用されているが、血清やインスリン、細
胞増殖因子等は非常に高価であるため、培地自体のコス
トが高く、結果的に製造される抗体は高価となってしま
う。
細胞や組換え動物細胞等の動物細胞の培養は、アミノ
酸、ビタミン類、糖質、塩類等からなる基礎培地に動物
の血清（多くの場合は牛胎児血清）を添加したものや、
インスリン、トランスフェリン、２−エタノ−ルアミ
ン、亜セレン酸ナトリウム、アルブミン、細胞増殖因子
等を添加することで前記血清を使用しないもの（無血清
培地）などが使用されているが、血清やインスリン、細
胞増殖因子等は非常に高価であるため、培地自体のコス
トが高く、結果的に製造される抗体は高価となってしま
う。
【０００７】更に、血清中に含まれる既知又は未知の蛋
白成分、インスリン、細胞増殖因子等は、最終的に、製
造した抗体活性を有する蛋白質やモノクロ−ナル抗体等
から分離しなければならないという課題もある。即ち、
製造したキメラ抗体等を体内診断薬や体内治療薬に用い
る場合は、夾雑物質、特に蛋白質成分を完全に除去する
必要があるからである。このため、血清などを含む培地
で抗体遺伝子を発現し得る組換え細胞や融合細胞等を培
養してキメラ抗体等を製造した場合には、通常使用され
る種々の精製方法を組み合わせた、複雑な精製操作や、
精製度をチェックするための操作などが必要となる。
白成分、インスリン、細胞増殖因子等は、最終的に、製
造した抗体活性を有する蛋白質やモノクロ−ナル抗体等
から分離しなければならないという課題もある。即ち、
製造したキメラ抗体等を体内診断薬や体内治療薬に用い
る場合は、夾雑物質、特に蛋白質成分を完全に除去する
必要があるからである。このため、血清などを含む培地
で抗体遺伝子を発現し得る組換え細胞や融合細胞等を培
養してキメラ抗体等を製造した場合には、通常使用され
る種々の精製方法を組み合わせた、複雑な精製操作や、
精製度をチェックするための操作などが必要となる。
【０００８】近年、前記のような課題を解決すべく、蛋
白質成分を含まない無血清培地が研究されている（特開
平４−９１７８６号公報、特願平６−２５１２５号な
ど）。しかし、これらの無血清培地においては、細胞当
りの抗体生産性が低いという課題が生じている。特に抗
体遺伝子を発現し得る組換え細胞やヒト−ヒトハイブリ
ド−マ等を培養して抗体等を製造しようとした場合、通
常これらは抗体などの生産性が非常に低いため、当該課
題は是非とも解決すべきものである。
白質成分を含まない無血清培地が研究されている（特開
平４−９１７８６号公報、特願平６−２５１２５号な
ど）。しかし、これらの無血清培地においては、細胞当
りの抗体生産性が低いという課題が生じている。特に抗
体遺伝子を発現し得る組換え細胞やヒト−ヒトハイブリ
ド−マ等を培養して抗体等を製造しようとした場合、通
常これらは抗体などの生産性が非常に低いため、当該課
題は是非とも解決すべきものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、キメラ抗
体を生産する遺伝子組換え細胞を培養し、キメラ抗体を
製造するため、従来の無血清培地などに添加するだけで
生産性を向上できるような物質を検索した結果、本発明
を完成するに至った。
体を生産する遺伝子組換え細胞を培養し、キメラ抗体を
製造するため、従来の無血清培地などに添加するだけで
生産性を向上できるような物質を検索した結果、本発明
を完成するに至った。
【００１０】即ち本発明は、ｎ−酪酸を含有することを
特徴とする動物細胞培養用培地である。また本発明は、
ｎ−酪酸を含有する培地中で動物細胞を培養することを
特徴とする動物細胞の培養方法である。更に本発明は、
ｎ−酪酸を含有する培地中で動物細胞を培養することを
特徴とする当該動物細胞が生産する蛋白質の製造方法で
ある。以下本発明を詳細に説明する。
特徴とする動物細胞培養用培地である。また本発明は、
ｎ−酪酸を含有する培地中で動物細胞を培養することを
特徴とする動物細胞の培養方法である。更に本発明は、
ｎ−酪酸を含有する培地中で動物細胞を培養することを
特徴とする当該動物細胞が生産する蛋白質の製造方法で
ある。以下本発明を詳細に説明する。
【００１１】本発明の培地は、ｎ−酪酸より成る低分子
物質を含有することを特徴とし、前記低分子以外の成分
は通常の動物細胞培養に用いられる市販の基礎培地等で
あれば良い。長期培養する場合又は高密度で培養する場
合、アミノ酸類及びビタミン類を高濃度に含有した培
地、例えば市販のＥ−ＲＤＦ培地（極東製薬製）、ＲＰ
ＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ製）、ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ
製）及びＦ−１２（ＧＩＢＣＯ製）を２：１：１の比率
で混合した培地やＤＭＥＭとＦ−１２を１：１の比率で
混合した培地が例示できる。これら無血清培地には、少
なくともクエン酸鉄や硫酸鉄等の鉄成分、２−エタノ−
ルアミン、亜セレン酸ナトリウム、タウリン、リノ−ル
酸又はオレイン酸などを添加したものが好適である。
物質を含有することを特徴とし、前記低分子以外の成分
は通常の動物細胞培養に用いられる市販の基礎培地等で
あれば良い。長期培養する場合又は高密度で培養する場
合、アミノ酸類及びビタミン類を高濃度に含有した培
地、例えば市販のＥ−ＲＤＦ培地（極東製薬製）、ＲＰ
ＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ製）、ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ
製）及びＦ−１２（ＧＩＢＣＯ製）を２：１：１の比率
で混合した培地やＤＭＥＭとＦ−１２を１：１の比率で
混合した培地が例示できる。これら無血清培地には、少
なくともクエン酸鉄や硫酸鉄等の鉄成分、２−エタノ−
ルアミン、亜セレン酸ナトリウム、タウリン、リノ−ル
酸又はオレイン酸などを添加したものが好適である。
【００１２】本発明は、通常の培地（血清を含む培地）
や前述のような無血清培地のいずれにも適用できるが、
製造された抗体などの精製を考慮した場合、蛋白質成分
を含まない、無血清培地が特に好ましい。
や前述のような無血清培地のいずれにも適用できるが、
製造された抗体などの精製を考慮した場合、蛋白質成分
を含まない、無血清培地が特に好ましい。
【００１３】培地中のｎ−酪酸の濃度は、細胞にも依存
するが、０．１〜５ｍＭが好適であり、特に０．２５〜
０．５ｍＭが望ましい。
するが、０．１〜５ｍＭが好適であり、特に０．２５〜
０．５ｍＭが望ましい。
【００１４】本発明のｎ−酪酸を添加成分とする動物細
胞培養用培地を用いれば、目的とした蛋白質を効率良く
生産できる。例えば、抗体遺伝子を発現し得る組換え動
物細胞や抗体を産生し得る動物融合細胞に対して特に好
適に使用される。動物細胞としては、例えば、特殊な蛋
白質を産生するヒトをはじめとする動物細胞、マウス−
ヒトキメラ抗体などを暗号化する遺伝子を含むベクタ−
で形質転換したミエロ−マ細胞、ＣＯＳ細胞又はＣＨＯ
細胞、また例えばモノクロ−ナル抗体を産生し得るマウ
ス−ヒト、マウス−マウス又はマウス−ラット等のハイ
ブリド−マに代表される融合細胞を例示する事ができ
る。
胞培養用培地を用いれば、目的とした蛋白質を効率良く
生産できる。例えば、抗体遺伝子を発現し得る組換え動
物細胞や抗体を産生し得る動物融合細胞に対して特に好
適に使用される。動物細胞としては、例えば、特殊な蛋
白質を産生するヒトをはじめとする動物細胞、マウス−
ヒトキメラ抗体などを暗号化する遺伝子を含むベクタ−
で形質転換したミエロ−マ細胞、ＣＯＳ細胞又はＣＨＯ
細胞、また例えばモノクロ−ナル抗体を産生し得るマウ
ス−ヒト、マウス−マウス又はマウス−ラット等のハイ
ブリド−マに代表される融合細胞を例示する事ができ
る。
【００１５】以上のような細胞を、本発明の培地中で培
養することにより、抗体などの、所望の蛋白質を製造す
ることができる。
養することにより、抗体などの、所望の蛋白質を製造す
ることができる。
【００１６】
【発明の効果】本発明の動物細胞培養用培地を用いれ
ば、本来生産物の発現量が非常に低いために大量生産が
困難であったマウス−ヒトキメラ抗体等の抗体遺伝子を
発現し得る組換え動物細胞等を効率良く培養することが
可能である。また、ｎ−酪酸は血清培地のみならず無血
清培地または無蛋白質培地にも適用でき、安価で入手が
非常に容易であり、かつ分子量が小さく無血清培地また
は無蛋白質培地を構成する成分として望ましい。
ば、本来生産物の発現量が非常に低いために大量生産が
困難であったマウス−ヒトキメラ抗体等の抗体遺伝子を
発現し得る組換え動物細胞等を効率良く培養することが
可能である。また、ｎ−酪酸は血清培地のみならず無血
清培地または無蛋白質培地にも適用でき、安価で入手が
非常に容易であり、かつ分子量が小さく無血清培地また
は無蛋白質培地を構成する成分として望ましい。
【００１７】このように、本発明の培地を用いれば、細
胞当たりの目的物質生産性を大幅に高めることができ、
マウス−ヒトキメラ抗体等の抗体遺伝子を発現し得る組
換え動物細胞等を大量培養して物質生産を行う場合には
培地等の原材料費の大幅なコストダウンが可能になり、
かつ高収率が期待できる。
胞当たりの目的物質生産性を大幅に高めることができ、
マウス−ヒトキメラ抗体等の抗体遺伝子を発現し得る組
換え動物細胞等を大量培養して物質生産を行う場合には
培地等の原材料費の大幅なコストダウンが可能になり、
かつ高収率が期待できる。
【００１８】更に本発明を無血清培地や無蛋白培地に適
用した場合には、製造された抗体などの蛋白質の分離、
精製を簡便に実施することができる。従って、製造され
る抗体等の蛋白質の製造コストを低減できるとともに、
精製の際に生じ得る目的蛋白質の収量低下を防止するこ
とも可能である。
用した場合には、製造された抗体などの蛋白質の分離、
精製を簡便に実施することができる。従って、製造され
る抗体等の蛋白質の製造コストを低減できるとともに、
精製の際に生じ得る目的蛋白質の収量低下を防止するこ
とも可能である。
【００１９】
【実施例】以下本発明を更に詳細に説明するために実施
例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
【００２０】実施例１ １０％(w/v) 牛胎児血清を含むＥ−ＲＤＦ培地（極東製
薬製）で継代培養したマウス−ヒトキメラＮｄ２抗体を
発現するマウスミエロ−マＨＣＮｄ８Ａ（特願平６−２
１３１号参照）を、10μM タウリン、50μM クエン酸第
２鉄、25nM亜セレン酸ナトリウム、100 μM ２−エタノ
−ルアミン、15μM パントテン酸ナトリウム、0.5 μg/
mlリノ−ル酸、0.5 μg/mlトコフェロ−ルアセテ−ト、
0.5 μg/ml卵黄レシチン及び0.05μg/mlレチノ−ルアセ
テ−トを含むＥ−ＲＤＦ培地（以下、培地Ａとする）に
ｎ−酪酸を図１に示した最終濃度になるように添加し、
細胞濃度５×105 cells/mlとした前記培養物を播種し、
３７℃、５％ＣＯ2 のインキュベ−タ−の条件で培養を
開始し、３日間培養して細胞数、細胞生存率、グルコ−
ス消費速度及びキメラ抗体濃度を測定した。結果を図１
に示す。
薬製）で継代培養したマウス−ヒトキメラＮｄ２抗体を
発現するマウスミエロ−マＨＣＮｄ８Ａ（特願平６−２
１３１号参照）を、10μM タウリン、50μM クエン酸第
２鉄、25nM亜セレン酸ナトリウム、100 μM ２−エタノ
−ルアミン、15μM パントテン酸ナトリウム、0.5 μg/
mlリノ−ル酸、0.5 μg/mlトコフェロ−ルアセテ−ト、
0.5 μg/ml卵黄レシチン及び0.05μg/mlレチノ−ルアセ
テ−トを含むＥ−ＲＤＦ培地（以下、培地Ａとする）に
ｎ−酪酸を図１に示した最終濃度になるように添加し、
細胞濃度５×105 cells/mlとした前記培養物を播種し、
３７℃、５％ＣＯ2 のインキュベ−タ−の条件で培養を
開始し、３日間培養して細胞数、細胞生存率、グルコ−
ス消費速度及びキメラ抗体濃度を測定した。結果を図１
に示す。
【００２１】その結果、ｎ−酪酸を0.5mM 添加した時、
基質（グルコ−ス）の消費速度は抑えられるにもかかわ
らず、抗体の生産量が３倍程度向上した。
基質（グルコ−ス）の消費速度は抑えられるにもかかわ
らず、抗体の生産量が３倍程度向上した。
【００２２】実施例２ ｎ−酪酸の細胞増殖、基質（グルコ−ス）消費速度、抗
体生産性に与える影響を詳細に解析するため、ｎ−酪酸
存在下又は非存在下で以下の実験を進めた。培地Ａを使
用し、添加するｎ−酪酸の濃度は0.5mM とした。２×10
5 cells/mlの細胞を播種し、６日間培養を行い、細胞
数、細胞生存率、グルコ−ス濃度、グルコ−ス消費速
度、キメラ抗体生産性及び総抗体生産量を測定した。結
果を図２〜８に示す。
体生産性に与える影響を詳細に解析するため、ｎ−酪酸
存在下又は非存在下で以下の実験を進めた。培地Ａを使
用し、添加するｎ−酪酸の濃度は0.5mM とした。２×10
5 cells/mlの細胞を播種し、６日間培養を行い、細胞
数、細胞生存率、グルコ−ス濃度、グルコ−ス消費速
度、キメラ抗体生産性及び総抗体生産量を測定した。結
果を図２〜８に示す。
【００２３】図２、３の通り、ｎ−酪酸を添加すること
により細胞の増殖は抑制されたが、生存率に顕著は差は
認められなかった。
により細胞の増殖は抑制されたが、生存率に顕著は差は
認められなかった。
【００２４】６日間培養した結果は、図４、５の通り、
製造された抗体の量はｎ−酪酸の添加により非添加時に
比較して約２．３倍に増大した。
製造された抗体の量はｎ−酪酸の添加により非添加時に
比較して約２．３倍に増大した。
【００２５】図６、７の通り、ｎ−酪酸の添加により、
グルコ−ス消費速度が低下する等、ｎ−酪酸により細胞
の分裂が抑制されていることが示唆された。また、ｎ−
酪酸の添加により、抗体生産性は２倍以上に向上した。
グルコ−ス消費速度が低下する等、ｎ−酪酸により細胞
の分裂が抑制されていることが示唆された。また、ｎ−
酪酸の添加により、抗体生産性は２倍以上に向上した。
【００２６】細胞当たりの比抗体生産性（ＣＳＰ）を図
８に示す。ｎ−酪酸の添加によりＣＳＰは２〜４倍程度
向上しており、ｎ−酪酸が細胞当たりの抗体生産性を向
上させる非常に有効な薬剤であることが示された。。
８に示す。ｎ−酪酸の添加によりＣＳＰは２〜４倍程度
向上しており、ｎ−酪酸が細胞当たりの抗体生産性を向
上させる非常に有効な薬剤であることが示された。。
【００２７】本実施例の結果から、0.5mM ｎ−酪酸を添
加することにより、細胞増殖・基質消費速度は抑制され
るが、比抗体生産性は逆に向上することが確認され、ｎ
−酪酸による生産効率向上の効果が明らかとなった。
加することにより、細胞増殖・基質消費速度は抑制され
るが、比抗体生産性は逆に向上することが確認され、ｎ
−酪酸による生産効率向上の効果が明らかとなった。
【００２８】実施例３ 抗体の大量生産を行うため、培養装置を用いたキメラ抗
体の連続製造をホロファイバ−型培養装置を用いて検討
した。
体の連続製造をホロファイバ−型培養装置を用いて検討
した。
【００２９】培養装置（カルチャ−フロ−Ｔ／Ｃ−５
０，旭メディカル製）により、実施例１に示した培地Ａ
を用いて、キメラＮｄ２抗体発現組換え細胞ＨＣＮｄ８
Ａをｎ−酪酸の存在下又は非存在下で培養を行い、生産
されたキメラ抗体の生産量を比較した。
０，旭メディカル製）により、実施例１に示した培地Ａ
を用いて、キメラＮｄ２抗体発現組換え細胞ＨＣＮｄ８
Ａをｎ−酪酸の存在下又は非存在下で培養を行い、生産
されたキメラ抗体の生産量を比較した。
【００３０】それぞれ２×107 個の細胞をホロファイバ
−バイオリアクタ−に接種し、１週間程度３％牛胎児血
清を含む培地Ａで培養した後に、牛胎児血清濃度を１
％、0.1 ％と順次減少させた。３７℃、５％ＣＯ2 条件
下で培養を行い、培地循環流量を徐々に増やし、１１日
目からは培地循環流量を１０ｍｌ／分とした。約２か月
間培養を継続し、キメラ抗体生産量を比較した。添加し
たｎ−酪酸の濃度は細胞増殖の抑制を考慮し、0.25mMと
した。結果を図９、１０示す。
−バイオリアクタ−に接種し、１週間程度３％牛胎児血
清を含む培地Ａで培養した後に、牛胎児血清濃度を１
％、0.1 ％と順次減少させた。３７℃、５％ＣＯ2 条件
下で培養を行い、培地循環流量を徐々に増やし、１１日
目からは培地循環流量を１０ｍｌ／分とした。約２か月
間培養を継続し、キメラ抗体生産量を比較した。添加し
たｎ−酪酸の濃度は細胞増殖の抑制を考慮し、0.25mMと
した。結果を図９、１０示す。
【００３１】図９、１０の通り、ｎ−酪酸非存在下では
２か月間の培養で総抗体生産量は約７．４ｍｇであった
が、0.25mMのｎ−酪酸存在下では約１８ｍｇの総抗体生
産量が達成され、約２．４倍、抗体生産性が向上した。
また、１日当りの抗体生産性もｎ−酪酸非存在下では最
大０．３１ｍｇ／日であったにもかかわらず、存在下で
は最大０．７３ｍｇ／日を示すなど、ｎ−酪酸添加の効
果が認められた。
２か月間の培養で総抗体生産量は約７．４ｍｇであった
が、0.25mMのｎ−酪酸存在下では約１８ｍｇの総抗体生
産量が達成され、約２．４倍、抗体生産性が向上した。
また、１日当りの抗体生産性もｎ−酪酸非存在下では最
大０．３１ｍｇ／日であったにもかかわらず、存在下で
は最大０．７３ｍｇ／日を示すなど、ｎ−酪酸添加の効
果が認められた。
【図１】実施例１における、ＨＣＮｄ８Ａを培養した時
の結果を示す。ＧＣＲは３日間のグルコ−ス消費量を示
し（黒丸）、ＭｏＡｂは３日後の培養上清の抗体濃度を
示す（白丸）。横軸のｎ−酪酸濃度は対数軸で示されて
いる。
の結果を示す。ＧＣＲは３日間のグルコ−ス消費量を示
し（黒丸）、ＭｏＡｂは３日後の培養上清の抗体濃度を
示す（白丸）。横軸のｎ−酪酸濃度は対数軸で示されて
いる。
【図２】実施例２における、酪酸非存在下でＨＣＮｄ８
Ａを培養した時の結果を示す。Ｃｅｌｌは生細胞数を示
し（黒丸）、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙは細胞生存率を示す
（白丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの
培養日数を示す。
Ａを培養した時の結果を示す。Ｃｅｌｌは生細胞数を示
し（黒丸）、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙは細胞生存率を示す
（白丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの
培養日数を示す。
【図３】実施例２における、酪酸存在下でＨＣＮｄ８Ａ
を培養した時の結果を示す。Ｃｅｌｌは生細胞数を示し
（黒丸）、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙは細胞生存率を示す（白
丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの培養
日数を示す。
を培養した時の結果を示す。Ｃｅｌｌは生細胞数を示し
（黒丸）、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙは細胞生存率を示す（白
丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの培養
日数を示す。
【図４】実施例２における、酪酸非存在下でＨＣＮｄ８
Ａを培養した時の結果を示す。Ｇｌｕｃｏｓｅはグルコ
−ス濃度を示し（黒三角）、Ｔｏｔａｌ ｐｒｏｄｕｃ
ｔは総キメラ抗体生産量を示す（白三角）。横軸は培地
Ａを用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
Ａを培養した時の結果を示す。Ｇｌｕｃｏｓｅはグルコ
−ス濃度を示し（黒三角）、Ｔｏｔａｌ ｐｒｏｄｕｃ
ｔは総キメラ抗体生産量を示す（白三角）。横軸は培地
Ａを用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
【図５】実施例２における、酪酸存在下でＨＣＮｄ８Ａ
を培養した時の結果を示す。Ｇｌｕｃｏｓｅはグルコ−
ス濃度を示し（黒三角）、Ｔｏｔａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ
は総キメラ抗体生産量を示す（白三角）。横軸は培地Ａ
を用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
を培養した時の結果を示す。Ｇｌｕｃｏｓｅはグルコ−
ス濃度を示し（黒三角）、Ｔｏｔａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ
は総キメラ抗体生産量を示す（白三角）。横軸は培地Ａ
を用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
【図６】実施例２における、酪酸非存在下でＨＣＮｄ８
Ａを培養した時の結果を示す。ＧＣＲは３日間のグルコ
−ス消費量を示し（黒四角）、ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔ
ｙは総キメラ抗体生産量を示す（白四角）。横軸は培地
Ａを用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
Ａを培養した時の結果を示す。ＧＣＲは３日間のグルコ
−ス消費量を示し（黒四角）、ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔ
ｙは総キメラ抗体生産量を示す（白四角）。横軸は培地
Ａを用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
【図７】実施例２における、酪酸存在下でＨＣＮｄ８Ａ
を培養した時の結果を示す。ＧＣＲは３日間のグルコ−
ス消費量を示し（黒四角）、ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ
は総キメラ抗体生産量を示す（白四角）。横軸は培地Ａ
を用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
を培養した時の結果を示す。ＧＣＲは３日間のグルコ−
ス消費量を示し（黒四角）、ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ
は総キメラ抗体生産量を示す（白四角）。横軸は培地Ａ
を用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
【図８】実施例２における、酪酸非存在下でＨＣＮｄ８
Ａを培養した時の結果を示す。ＣＳＰは生細胞１個の１
時間当りの抗体生産量を示す。黒丸は酪酸非存在下の結
果、黒四角は酪酸存在下の結果を示す。横軸は培地Ａを
用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
Ａを培養した時の結果を示す。ＣＳＰは生細胞１個の１
時間当りの抗体生産量を示す。黒丸は酪酸非存在下の結
果、黒四角は酪酸存在下の結果を示す。横軸は培地Ａを
用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
【図９】実施例３における、旭メディカル製カルチャ−
フロ−Ｔ／Ｃ−５０で酪酸非存在下、ＨＣＮｄ８Ａを約
２か月間培養した時の結果を示す。ｐｒｏｄｕｃｔｉｖ
ｉｔｙは１日当りの抗体生産性を示し（黒三角）、Ｔｏ
ｔａｌ ｐｒｏｄｕｃｔは総キメラ抗体生産量を示す
（黒丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの
培養日数を示す。
フロ−Ｔ／Ｃ−５０で酪酸非存在下、ＨＣＮｄ８Ａを約
２か月間培養した時の結果を示す。ｐｒｏｄｕｃｔｉｖ
ｉｔｙは１日当りの抗体生産性を示し（黒三角）、Ｔｏ
ｔａｌ ｐｒｏｄｕｃｔは総キメラ抗体生産量を示す
（黒丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの
培養日数を示す。
【図１０】実施例３における、旭メディカル製カルチャ
−フロ−Ｔ／Ｃ−５０で酪酸存在下、ＨＣＮｄ８Ａを約
２か月間培養した時の結果を示す。ｐｒｏｄｕｃｔｉｖ
ｉｔｙは１日当りの抗体生産性を示し（黒三角）、Ｔｏ
ｔａｌ ｐｒｏｄｕｃｔは総キメラ抗体生産量を示す
（黒丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの
培養日数を示す。
−フロ−Ｔ／Ｃ−５０で酪酸存在下、ＨＣＮｄ８Ａを約
２か月間培養した時の結果を示す。ｐｒｏｄｕｃｔｉｖ
ｉｔｙは１日当りの抗体生産性を示し（黒三角）、Ｔｏ
ｔａｌ ｐｒｏｄｕｃｔは総キメラ抗体生産量を示す
（黒丸）。横軸は培地Ａを用いて培養を開始してからの
培養日数を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (16)
- 【請求項１】 ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動
物細胞培養用培地。 - 【請求項２】 動物細胞が抗体遺伝子を発現し得る組換
え動物細胞又は抗体を産生し得る動物融合細胞である、
請求項１の動物細胞用培地。 - 【請求項３】 ｎ−酪酸濃度が０．１〜５ｍＭである、
請求項１の動物細胞用培地。 - 【請求項４】 ｎ−酪酸以外に、少なくともクエン酸鉄
又は硫酸鉄から選ばれる鉄成分と、２−エタノ−ルアミ
ン、亜セレン酸ナトリウム、タウリン、リノ−ル酸及び
オレイン酸から選ばれる１種以上の成分を含む、請求項
１の動物細胞用培地。 - 【請求項５】 蛋白質成分を含有しないことを特徴とす
る、請求項１の動物細胞用培地。 - 【請求項６】 ｎ−酪酸を含有する培地中で動物細胞を
培養することを特徴とする動物細胞の培養方法。 - 【請求項７】 動物細胞が抗体遺伝子を発現し得る組換
え動物細胞又は抗体を産生し得る動物融合細胞である請
求項６の培養方法。 - 【請求項８】 ０．１〜５ｍＭのｎ−酪酸を含む培地を
使用する、請求項６の培養方法。 - 【請求項９】 ｎ−酪酸以外に、少なくともクエン酸鉄
又は硫酸鉄から選ばれる鉄成分と、２−エタノ−ルアミ
ン、亜セレン酸ナトリウム、タウリン、リノ−ル酸及び
オレイン酸から選ばれる１種以上の成分を含む培地を使
用する、請求項６の培養方法。 - 【請求項１０】 蛋白質成分を含有しない培地を使用す
ることを特徴とする、請求項６の培養法 - 【請求項１１】 ｎ−酪酸を含有する培地中で動物細胞
を培養することを特徴とする当該動物細胞が生産する蛋
白質の製造方法。 - 【請求項１２】 動物細胞が抗体遺伝子を発現し得る組
換え動物細胞であり、製造される蛋白質が抗体活性を有
する蛋白質であることを特徴とする請求項１１の製造方
法。 - 【請求項１３】 動物細胞が抗体遺伝子を発現し得る組
換え動物細胞であり、製造される蛋白質キメラ抗体であ
ることを特徴とする請求項１１の製造方法。 - 【請求項１４】 ０．１〜５ｍＭのｎ−酪酸を含む培地
を使用する、請求項１１の製造方法。 - 【請求項１５】 ｎ−酪酸以外に、少なくともクエン酸
鉄又は硫酸鉄から選ばれる鉄成分と、２−エタノ−ルア
ミン、亜セレン酸ナトリウム、タウリン、リノ−ル酸及
びオレイン酸から選ばれる１種以上の成分を含む培地を
使用する、請求項１１の製造方法。 - 【請求項１６】 蛋白質成分を含有しない培地を使用す
ることを特徴とする、請求項１１の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6146059A JPH089968A (ja) | 1994-06-28 | 1994-06-28 | ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細胞培養用培地及び培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6146059A JPH089968A (ja) | 1994-06-28 | 1994-06-28 | ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細胞培養用培地及び培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH089968A true JPH089968A (ja) | 1996-01-16 |
Family
ID=15399158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6146059A Pending JPH089968A (ja) | 1994-06-28 | 1994-06-28 | ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細胞培養用培地及び培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH089968A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100447422B1 (ko) * | 1996-11-28 | 2004-10-28 | 씨제이 주식회사 | 포유동물세포유래성당단백질의당쇄화및생산성향상성을위한새로운세포배양배지 |
| WO2007049567A1 (ja) * | 2005-10-24 | 2007-05-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 物質の製造方法 |
-
1994
- 1994-06-28 JP JP6146059A patent/JPH089968A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100447422B1 (ko) * | 1996-11-28 | 2004-10-28 | 씨제이 주식회사 | 포유동물세포유래성당단백질의당쇄화및생산성향상성을위한새로운세포배양배지 |
| WO2007049567A1 (ja) * | 2005-10-24 | 2007-05-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 物質の製造方法 |
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