JPH09122158A - 豚胚のダイレクト凍結法 - Google Patents

豚胚のダイレクト凍結法

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JPH09122158A
JPH09122158A JP7281911A JP28191195A JPH09122158A JP H09122158 A JPH09122158 A JP H09122158A JP 7281911 A JP7281911 A JP 7281911A JP 28191195 A JP28191195 A JP 28191195A JP H09122158 A JPH09122158 A JP H09122158A
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JP
Japan
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embryo
pig
embryos
frozen
dextran
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JP7281911A
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English (en)
Inventor
Kenji Kameyama
賢次 亀山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
KACHIKU JIYUSEIRAN ISHIYOKU GIJUTSU KENKYU KUMIAI
Original Assignee
KACHIKU JIYUSEIRAN ISHIYOKU GIJUTSU KENKYU KUMIAI
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Publication date
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    • A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
    • A61D19/00—Instruments or methods for reproduction or fertilisation
    • A61D19/04—Instruments or methods for reproduction or fertilisation for embryo transplantation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A01N1/12—Chemical aspects of preservation
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    • A01N1/125—Freeze protecting agents, e.g. cryoprotectants or osmolarity regulators

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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 豚胚の凍結保存を確立する。 【解決手段】 基礎媒地の存在下、豚胚にエチレングリ
コール、プロピレングリコール、血清およびテキストラ
ンを添加、凍結する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は豚胚のダイレクト凍
結方法に関する。また本発明はこの凍結された豚胚を用
いて、胚を検卵しないで直接移植できる豚の繁殖方法に
も関する。
【０００２】
【従来の技術】豚の胚移植は増殖率の向上および清浄豚
の作出等新しい生産技術として注目されてはいるが、い
くつかの理由によりほとんど利用されていない。豚胚移
植の実用化を妨げている大きな理由は、生殖器の構造が
複雑なため非手術的な採卵や移植が非常に困難であるこ
とおよび胚が低温に弱く保存ができないためである。牛
の繁殖領域では、胚の半永久的保存法である凍結保存技
術がすでに確立されており、胚の移植は実用技術として
広く普及している。しかし、豚胚は凍結保存はおろか、
低温に暴露されるだけで生存性は低下するので、豚の胚
移植を行う場合、時間的、距離的制約を受けている。
【０００３】平成元年に農水省畜産試験場において世界
で初めて凍結保存した胚の移植による子豚が誕生した
（小栗、第５３回日本養豚学会：４８−５４，１９９
０）。その後、国内の２つの機関において子豚が生まれ
ているが、産子に至る成功率は極めて低く、再現性は無
いに等しい技術水準である。今まで、従来のステップワ
イズ法では、世界で５例しか成功例がなく、産子数も数
頭（融解胚当たり１０数％まで）であった（小栗、同
上、亀山ら、第７８回家畜繁殖学会Ｉ−５４：１９９
０、柏崎ら、第７８回家畜繁殖学会Ｉ−５７、１９９
０、Nagashima ら、Theriogenology, 41: 113-118, 199
4 、Nagashima ら、Nature, 374: 416、1995) 。このた
め、多数の胚を融解して耐凍剤を除去し、胚を選別して
移植を行っていた。ステップワイズ法とは、段階希釈法
とも言い、耐凍剤としてグリセリンなどを加えてストロ
ー中で胚を凍結させ，移植する際には、凍結卵を融解後
ストローから受精卵を取り出し、３〜５段階に分けて耐
凍剤を除去した後、移植する方法を言う。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】豚胚は牛胚と違い、凍
結保存法が確立されていないために、系統造成豚の維持
や豚の輸送に凍結保存胚を利用できなかった。したがっ
て、豚胚の凍結保存法の確立を目指すことを目的とす
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は基礎培地の存在
下、豚胚にデキストラン、血清、エチレングリコールお
よびプロピレングリコールを添加し凍結することによ
り、豚胚を直接受卵豚に移植できることがわかった。
【０００６】
【実施例】つぎの実施例により、本発明をさらに詳細に
説明する。
【０００７】
【実施例１】供試胚として、発情時に人工受精を施した
豚から、発情後６日目に採取した拡張胚盤胞期胚を用い
た。耐凍剤にサプリメント子牛血清（各種成長因子、微
量元素を加えて成分調整した血清。本実施例ではＧｉｂ
ｃｏ社製のCalf SupremeTMを使用）およびデキストラン
を添加した、直接移植可能な凍結溶液の組成はつぎのと
おりである。 ４％（ｖ／ｖ）エチレングリコール ４％（ｖ／ｖ）プロピレングリコール ２０％（ｖ／ｖ）サプリメント子牛血清 １％（ｗ／ｖ）デキストラン 基礎培地：ＴＣＭ１９９ 凍結用容器：０．５ｍｌプラスチックストロー ストロー内への挿入方法：図１に示すように、ストロー
内の綿栓側より下記の順にしたがって充填した。 １．凍結溶液 ２．空気 ３．凍結溶液と胚 ４．空気 ５．凍結溶液 プログラムフリーザー：東京理化社製 植氷：−６°Ｃ 冷却温度：０．５°Ｃ／分 液体窒素投入温度：−３２．５°Ｃ 融解方法：液体窒素よりストローを取り出し、空気（室
温）中にて５〜１０秒保持し、３５°Ｃ温湯中にて融
解。 移植方法：ストロー内の全内容物を培養皿に出し、その
まま胚をカテーテルにセットして移植した。 本発明と従来法との比較を表１に示す。 表１ ──────────────────────────────────── 試験区 凍結溶液 融解法 ──────────────────────────────────── 従来法 １０％グリセロール ５段階（６．７％、３．３ （ステップワイズ法） ＋２０％サプリメント ％、０％グリセロール＋０． 牛血清（ＳＣＳ）又は ３Ｍシュクロース＋２０％ 胎児牛血清（ＦＣＳ）＋ ＳＣＳ又は、０．２Ｍ、０． １％デキストラン １Ｍシュクロース＋２０％ 基礎培地ＰＢＳ又は ＳＣＳ又はＦＣＳ ＴＣＭ１９９ 本発明方法 ４％エチレングリコー 直接移植法 （ダイレクト法） ル＋４％プロピレング リコール＋２０％サプ リメント子牛血清＋ １％デキストラン 基礎培地ＴＣＭ１９９ ──────────────────────────────────── 上記の結果は表２に示す。 表２ 豚凍結保存胚の移植成績 ──────────────────────────────────── 番号 試験区 融解胚数 移植胚数 分娩数 備考 （融解胚％）＜移植胚％＞（融解胚％） ──────────────────────────────────── 1 SW-1 37 20 (54%) 4 頭 < 20%> (11%) 死産１ ミイラ１ 2 SW-2 50 20 (38%) 5 頭 < 25%> ( 5%) 3 SW-3 35 20 (57%) 0頭 < 0%> ( 0%) 不受胎 4 ダイレクト法 20 20 (100%) 10頭 < 50%> (50%) 死産 5 SW-3 49 20 (41%) 2頭 < 10%> ( 4%) 6 ダイレクト法 20 20 (100%) 1頭 < 5%> ( 5%) ──────────────────────────────────── 注:SW-1 基礎培地PBS, FCS, レシチン添加 SW-2 基礎培地PBS, FCS, トコフェロール添加 SW-3 基礎培地TCM199, SCS ダイレクト法 (胚は融解後に溶液はそのままに移植用カテーテルに移し変え て移植する。）本発明方法。
【図面の簡単な説明】
【図１】胚を封入したストローの断面図を示す。
【符号の説明】
イ ストロー本体 ロ 綿栓 ハ 凍結溶液 ニ 空気 ホ 凍結溶液＋胚 ヘ シール

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 基礎培地の存在下、豚胚にエチレングリ
    コール、プロピレングリコール、血清およびデキストラ
    ンを含む凍結溶液を加え、凍結することを特徴とする、
    豚胚のダイレクト凍結方法。
  2. 【請求項２】 デキストランの濃度は１％程度である、
    請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 血清の濃度は２０％程度である、請求項
    １記載の方法。
  4. 【請求項４】 エチレングリコール、プロピレングリコ
    ールおよびデキストランからなる群から選ばれた耐凍剤
    に血清を加えた凍結溶液と豚胚を一緒に凍結し、保存
    し、使用時にこの凍結胚を融解し、そのまま受卵豚に移
    植することを特徴とする、豚の繁殖方法。
JP7281911A 1995-10-30 1995-10-30 豚胚のダイレクト凍結法 Pending JPH09122158A (ja)

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GB9601726A GB2306503B (en) 1995-10-30 1996-01-29 A method of directly freezing porcine embryos
NL1002209A NL1002209C2 (nl) 1995-10-30 1996-01-30 Werkwijze voor het direkt invriezen van varkensembryo's.

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